一种治疗肝炎和黄疸的药物组合物的制作方法
专利名称：一种治疗肝炎和黄疸的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗肝炎和黄疸的药物组合物，该药物组合物的有效组分为中药茵陈、栀子和苦参的提取物。
背景技术：
乙型肝炎(Hepatitis B)是由乙肝病毒(Hepatitis B Virus)引起的一种临床常见病，发病率高，危害性大，它能引起肝硬化、肝癌的发生，甚至导致患者死亡。据报道，我国乙肝病毒携带者高达10％。
近年来，西医临床治疗乙型肝炎的主要方法是使用干扰素、拉米呋啶等抗病毒药，但这些药或价格昂贵，或副作用明显。
大量研究表明，中医药在乙肝的临床治疗中显示出极大优势，但目前应用的多为医生自拟的处方汤药或粗提物中成药，缺乏有效成份和药效作用明确、疗效肯定、剂型先进、服用携带方便的中药制剂。
本发明在长期有效成份和药理作用研究的基础上，采用一系列新技术，将茵陈、栀子和苦参三味常用中药分别提取有效成份后进行配伍。药理试验证明具有显著的抗病毒和退黄疸作用。该药物组合物有效成份和药理作用清楚，剂型先进，质量可控，稳定性好，有效期长，可用于制备治疗肝炎和黄疸的药物。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗肝炎和黄疸的药物组合物。
本发明的药物组合物的特征是，其有效组分为中药茵陈、栀子和苦参的提取物，再辅以制药中允许使用的辅助添加性成份组成。各有效药用成份提取物以相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶0.5～1.5份∶0.5～1.5份。其中茵陈提取物中包括黄酮类和香豆素类成份(两类成份总和含量大于50％(wt％))，栀子提取物中包括环烯醚萜类成份(含量大于50％(wt％))，苦参提取物中包括生物碱类成份(含量大于50％(wt％))。
在本发明的药物组合物中，茵陈的提取物可采用乙醇提取，大孔吸附树脂纯化得到。栀子提取物可采用乙醇提取，大孔吸附树脂纯化得到，苦参提取物可采用乙醇提取，大孔吸附树脂纯化得到。
郁建平，何照范，熊绿芸等，大孔吸附树脂提取荞麦芦丁工艺研究，贵州农业科学，1997，25(2)，3-8；[2]秦学功，元英进，用大孔树脂吸附分离苦豆子生物碱，中国中药杂志，2002，27(6)，428-429，470；[3]郑小江，“恩七叶甜”绞股蓝总皂甙提取工艺研究，湖北民族学院学报(自然科学版)，2001，19(3)，17-19；[4]《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第14册98-99页。
本发明的药物组合物可通过临床上常用的各种给药途径给药，如口服给药，注射给药。
本发明的药物组合物可选用药学上可接受的各种附加剂，包括填充剂如淀粉、糊精、粉状纤维素等；湿润剂如乙基纤维素、糊精、微晶纤维素等；黏合剂如乙基纤维素、玉米朊、阿拉伯胶等；崩解剂如甲基纤维素、预凝胶淀粉、淀粉、微晶纤维素等；表面活性剂如吐温-80、PEG4000、PVP等；稀释剂如淀粉、葡萄糖、微晶纤维素等；润滑剂如硬脂酸镁、滑石粉、硅酸钙等。
采用本领域常规制剂技术，按照《中华人民共和国药典》2000年版一部、二部和董方言主编的《现代中药新剂型新技术》2001版，即可把本发明药物组合物制成药学上的各种制剂，包括普通制剂和缓(控)释制剂，如片剂，胶囊剂，滴丸剂，溶液剂，缓释剂，控释剂及液体注射剂和固体注射剂。
总黄酮成份含量测定对照品溶液的制备精密称取芦丁10.768mg，置50ml量瓶中，加甲醇5ml，水浴微热溶解，放冷，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml含无水芦丁0.2154mg)。
标准曲线的绘制精密量取对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，于500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
供试品溶液的制备取茵陈提取物、制剂加水溶解，过滤，滤液作为供试品溶液。
测定法取供试品溶液1ml按标准曲线绘制项下操作，测定吸收度，以标准曲线计算，即得。
6，7-二甲氧基香豆素含量测定色谱条件与系统适用性试验高效液相色谱仪，紫外检测器，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，水-甲醇(70∶30)为流动相，柱温30℃，流量1.0ml/分钟，检测波长为343nm。
对照品溶液的制备精密称取6，7-二甲氧基香豆素对照品，加甲醇制成每1ml含0.058mg的溶液。
供试品溶液的制备取茵陈提取物、抗肝炎制剂加甲醇溶解，过滤，滤液作为供试品溶液。
测定法精密吸取取供试品溶液和对照品溶液各10ul注入液相色谱仪中，测定，计算，即得。
总生物碱成份含量测定对照品溶液的制备精密称取苦参碱5.200mg，以无水乙醇溶解并稀释至50ml量瓶中。
标准曲线的绘制精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置50ml磨口具塞三角瓶中，加2×10-4M(即0.0125％)溴麝香草酚蓝pH7.6的缓冲液(用0.1M磷酸二氢钠溶液50ml加0.1M氢氧化钠溶液42.2ml，再加水7.6ml配成，再用pH计校正pH值为7.6)6.00ml，氯仿6.00ml，密塞剧烈振摇2分钟，倒入60ml分液漏斗中，静置约40分钟，使水层与氯仿层完全分开清后，分出氯仿层于磨口试管中，于413nm波长处测定吸收度，测定时用溴麝香草酚蓝pH7.6的缓冲液12.00ml，加氯仿12.00ml，如上振摇，分出氯仿层作为比色空白。用测得的吸收度为纵坐标，生物碱的μg数为横坐标作图，绘制标准曲线。
供试品溶液的制备取苦参提取物、制剂加水溶解，过滤，滤液作为供试品溶液。
测定法取供试品溶液1.0ml按标准曲线绘制项下操作，测定吸收度，以标准曲线计算，即得。
环烯醚萜苷类成份含量测定对照品溶液的制备精密称取栀子苷10.061mg，以乙醇溶解并稀释至25ml量瓶中。
标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml，于具塞试管中，水浴蒸干，加入0.2ml的5％香草醛冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，60℃水浴加热15分钟，置冰水浴中3分钟，加入冰醋酸5ml，随行空白，于530nm处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。
供试品溶液的制备取栀子提取物、制剂加水溶解，过滤，取滤液以乙酸乙酯提取三次(10、10、10ml)，酯层弃去，水层置水浴上蒸干，以乙醇溶解定容于25ml，作为供试品溶液。
测定法取供试品溶液1ml，于具塞试管中，水浴蒸干，按标准曲线绘制项下操作，测定吸收度，以标准曲线计算，即得。
本发明药物组合物对2.2.15细胞HBeAg，HBsAg的影响试验HBeAg是位于细胞核表面的抗原，可用来衡量乙肝病毒复制的强弱，若它的表达水平高，则说明病毒正在大量复制。而HBsAg是表面抗原，它的高水平表达说明病毒已感染了肝细胞。若药物有效，则HBeAg和HBsAg的表达水平可明显降低。
1.对2.2.15细胞培养中HBeAg和HBsAg表达的作用(体外)2.2.15细胞是乙型肝炎病毒DNA克隆转染人尬癌细胞(HepG2)的细胞系。2.2.15细胞每毫升20万个接种于24孔细胞培养板，每孔1ml，37℃培养24小时。分为HBsAg、HBeAg阳性对照组，加入拉米呋啶(经培养液浸泡、溶解，离心去沉淀)；阴性对照组，HepG2细胞加入培养液；细胞对照组，2.2.15细胞加入培养液；药物组，药液无毒浓度以下2倍稀释，共5个稀释度1/80，1/160，1/320，1/640，1/1280，每浓度4个孔。37℃培养，每4天换原浓度药液培养。
第8天时收获培养液。分别测定HBsAg、HBeAg。用γ-记数仪测定每孔cpm值。计算抗原抑制百分率抗原抑制百分率＝(细胞对照cpm-给药组cpm)/细胞对照cpm计算药物抑制抗原半数有效浓度(IC50)IC50＝Antilog[B+(50-B)/(A-B)×C]A＝log＞50％药物浓度 B＝log＜50％药物浓度 C＝log稀释倍数表1本品在2.2.15细胞培养内对HBsAg和HBeAg的抑制作用(％)药物 HBsAg(CPM)HBeAg(CPM)稀释度抑制％ IC50(稀释度) SI抑制％ IC50(稀释度) SI1/80 84.13±4.16 1/379.1453.59±9.341/166 62.39 3.72±1.391/160 63.73±12.8239.51±4.311/320 54.49±10.8828.74±12.041/640 42.04±5.82 22.80±18.951/128027.25±2.67 11.45±9.62结果表明本品对2.2.15细胞的乙肝病毒颗粒分泌具有显著的抑制作用，对HBsAg抑制率达84.13％，对HBeAg抑制率达53.59％。
2.对2.2.15细胞培养上清液HBV-DNA的抑制作用(体外)第8天收获细胞上清液后，经聚乙二醇沉淀，蛋白酶K裂解，苯酚∶氯仿∶异戊醇抽提，无水乙醇沉淀核酸等步骤，真空抽干，重溶于TE缓冲液中作样品。
进行斑点杂交实验点样取20ul(DNA含量25ug)，经变性、中和，并以20×SSC缓冲液对倍稀释至1∶8倍稀释于硝酸纤维素膜上，并经干烤、预杂交、杂交、洗膜、放射自显影等步骤。以常规方法冲洗X光片。扫描仪扫描光片，用gel-pro软件测定密度，计算抑制率及IC50。
表2抗肝炎复方提取物对2.2.15细胞HBV-DNA的作用药物浓度细胞上清液HBV-DNA稀释倍数/抑制率％(稀释度)稀释1/2(CPM) 抑制率％ IC50SI1/80669.34866.39 1/611.7910.631/160 583.03870.721/320 597.29570.011/640 950.48952.271/1280 1191.3840.17细胞对照1991.42结果表明本品对2.2.15细胞HBV-DNA的复制有显著的抑制作用。
3.对2.2.15细胞HBV-DNA Southern Blot的抑制作用(体外)Southernblot第8天吸除培养液收取细胞，细胞经裂解液裂解，等体积苯酚∶氯仿∶异戊醇抽提2次，加无水乙醇沉淀核酸，真空抽干，重溶于20ulTE缓冲液中，加入DNA样品缓冲液，将样品加于琼脂糖胶上电泳。电泳后依次经变性、中和、转膜后。同斑点杂交膜一起烤膜、杂交、暴光。扫描仪扫描光片，用gel-pro软件测定密度，计算抑制率及IC50。
表3本品对2.2.15细胞HBV-DNA Southern Blot的抑制数据1/1280抑制1/640抑制1/320抑制1/160抑制1/80抑制RowsIC50SI(％) (％) (％) (％)(％)r1 46.4947.04 63.37 61.89 88.121/482.9410.82r2 48.7947.98 56.29 71.01 83.301/479.5310.76r3 16.8625.47 54.86 73.32 68.181/306.626.87r4 4.93 20.42 50.51 57.33 86.401/262.015.89Sum 11.4724.95 52.17 62.33 81.651/288.956.4结果表明通过用Southern blot检测，证明本品对2.2.15细胞内总HBV-DNA的表达有显著的抑制作用。
本发明药物组合物对鸭乙型肝炎病毒感染鸭的血清鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)的影响试验(体内)1日龄北京鸭经胫静脉注射上海麻鸭DHBV-DNA阳性血清，每只0.2ml，感染7天后随机分组如下病毒对照组腹腔注射生理盐水2.0ml，1天2次，连续给药10天；
阳性对照组口服给拉米呋啶50mg/kg，1天2次，连续给药10天给药组腹腔注射本发明药物组合物溶液(原液1∶2稀释)2.0ml，1天2次，连续给药10天。
在用药前、用药第5天、用药第10天和停药后第3天，自鸭胫静脉取血，分离血清，采用ElISA法测定其中鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)的OD值。并由此计算抑制率抑制率＝(给药前OD值-给药后OD值)/给药前OD值×100％OD值越高，则DHBV-DNA的含量越高，说明病毒复制水平高。若药物有效，则DHV-DNA的水平在给药后会下降。
1.抗肝炎有效部位腹腔注射对鸭血清DHBV-DNA OD的影响(体内)取鸭血清，同时点膜，测定鸭血清中DHBV-DNA水平的动态，按缺口翻译试剂盒说明书方法，用32P标记DHBV-DNA探针，并作鸭血清斑点杂交，放射自显影膜片斑点，在酶标检测仪测定OD值(滤光片为490nm)，计算血清DHBV-DNA密度，以杂交斑点OD值作为标本DHBV-DNA水平值。
计算每组鸭不同时间血清DNA OD值的平均值(X±SD)，并将每组鸭用药后不同时间(T5，T10)和停药后3天(P3)血清DHBV-DNA水平与同组给药前(T0)OD值比较，采用配对t检验，做统计学处理。
计算不同时间抑制百分率，比较各组鸭血清DHBV-DNA抑制率的动态。
DNA抑制％＝[给药前(T0)OD值-给药后(T5，T10，P3)OD值]/给药前(T0)OD值×100％表4抗肝炎有效部位腹腔注射对鸭血清DHBV-DNA OD值比较组别剂量 鸭数 鸭血清DHBV-DNA OD490值(X±SD)(ml/只) (只) T0 T5 T10 P3生理盐水6 0.676±0.050.695 ± 0.652 ± 0.711 ±0.08 0.07 0.07原液1/20稀释 0.5 6 0.580±0.020.552 ± 0.567 ± 0.609 ±0.03** 0.08 0.08原液1/20稀释 1.0 6 0.705±0.100.573 ± 0.531 ± 0.538 ±0.12** 0.05**0.04***原液1/20稀释 2.0 6 1.118±0.150.779 ± 0.895 ± 1.002 ±0.36*0.32* 0.22拉米呋啶 50mg/kg 6 1.478±0.410.905 ± 0.830 ± 1.534 ±0.29* 0.23*0.31统计处理t1，p1给药组不同时间(T5、T10，P3)鸭血清DHBV-DNAOD值与感染前(T0)OD值比较(配对t检验)。*p1＜0.05，**p1＜0.01。
结果表明抗肝炎有效部位腹腔注射第5，10天和停药后第3天(P3)，能显著降低鸭血清DHBV-DNA含量(P＜0.05-0.01)。说明本品具有显著的抑制病毒复制作用。
2.抗肝炎有效部位腹腔注射对鸭血清DHBV-DNA水平抑制率的影响(体内)表5抗肝炎有效部位腹腔注射对鸭血清DHBV-DNA水平抑制率的比较药物剂量 鸭数抑制率(％)(ml/只)(只)T5T10 P3病毒对照 6 -3.59 2.75 -5.61原液1/20稀释0.56 4.84 2.60 -4.96原液1/20稀释1.06 18.82*23.58*22.54**原液1/20稀释2.06 32.30*21.18 9.83拉米呋啶50mg/kg 6 36.66** 40.82** -13.46统计处理t2，p2给药组不同时间(T5、T10，P3)鸭血清DHBV-DNA水平与感染前(T0)比较的抑制％与病毒对照组抑制％比较(成组t检验)。*p2＜0.05，**p2＜0.01。
结果表明本品腹腔注射对感染鸭血清DHBV-DNA水平的抑制效果显著(P＜0.05-0.01)，无毒性反应。表明抗肝炎有效部位腹腔注射治疗乙型肝炎病毒感染鸭有效。3.抗肝炎有效部位口服对鸭血清DHBV-DNA OD的影响(体内)实验分组同前，只将给药方式由腹腔注射改为口服，实验、检测及结果处理方法亦同前。
表6抗肝炎有效部位口服对鸭血清DHBV-DNA OD值比较组别剂量 鸭数鸭血清DHBV-DNA OD490值(X±SD)(ml/只) (只)T0 T5 T10 P3生理盐水 6 0.708 ± 0.742 ± 0.659 ± 0.567 ±0.11 0.13 0.08 0.09原液1/20稀释 2.0 6 0.735 ± 0.711 ± 0.645 ± 0.606 ±0.10 0.11 0.04 0.07原液1/10稀释 2.0 6 0.760 ± 0.687 ± 0.559 ± 0.520 ±0.18 0.19 0.09*0.08*原液1/5稀释2.0 6 0.652 ± 0.646 ± 0.553 ± 0.703 ±0.03 0.09 0.07** 0.07拉米呋啶 50mg6 1.146 ± 0.754 ± 0.366 ± 0.924 ±0.15 0.16*0.07**0.13*统计处理t1，p1给药组不同时间(T5、T10，P3)鸭血清DHBV-DNAOD值与感染前(T0)OD值比较(配对t检验)。*p1＜0.05，**p1＜0.0l，***p1＜0.001。
结果表明本品口服给药后第10天和停药后第3天(P3)，能显著降低鸭血清DHBV-DNA含量(P＜0.05-0.01)。说明抗肝炎有效部位口服对乙肝病毒复制有抑制作用。
4.抗肝炎有效部位口服对鸭血清DHBV-DNA水平抑制率的影响(体内)表7抗肝炎有效部位口服对鸭血清DHBV-DNA水平抑制率的比较药物 剂量 鸭数 抑制率(％)(ml/只) (只) T5 T10 P3病毒对照 6 -9.14 3.20 11.89原液1/20稀释 2.06 4.57 15.9922.30原液1/10稀释 2.06 6.08 15.97-22.73原液1/5稀释2.06 22.65**28.51* 2.14拉米呋啶 50mg 6 32.37**67.92** 18.29统计处理t2，p2给药组不同时间(T5、T10，P3)鸭血清DHBV-DNA水平与感染前(T0)比较的抑制％与病毒对照组抑制％比较(成组t检验)。p2＜0.05，**p2＜0.01。
结果表明本品口服对感染鸭血清DHBV-DNA水平的抑制效果显著(P＜0.05-0.01)。表明抗肝炎有效部位口服治疗乙型肝炎病毒感染鸭有效。
本发明药物组合物对大鼠胆汁分泌的影响试验大鼠静脉注射药物组合物(4g生药/kg)约一小时后，胆汁分泌量及胆汁中胆红素含量明显增加，与对照组(生理盐水)相比，具有极显著意义(p＜0.01)。提示本品具有明显的退黄作用。
具体实施例方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步的阐述，但不对其有任何限制。
实施例1 茵陈提取物的制备方法取茵陈成熟全草切成约1cm小段，以70％乙醇回流提取2次，第一次加8倍量，提取2.5小时，第二次加6倍量，提取1.5小时，滤过，滤液合并，60℃减压回收乙醇至浓缩液无醇味，滤液减压浓缩至4g生药/ml，以D101大孔吸附树脂吸附12小时后，先以水洗至洗出液几乎无色，水液弃取，以50％乙醇洗脱至洗脱液几乎无色，减压浓缩洗脱液至无醇味，再加水约至2g生药/ml于0℃冷藏24小时，过滤后将滤液减压浓缩至干，低温干燥，粉碎，即得。
用分光光度法测定提取物中黄酮类成份含量，应不低于50％。
实施例2 栀子提取物的制备方法取栀子药材粉碎成10目粗粉，以80％乙醇回流提取2次，每次加入4倍量，各回流1小时，滤过，合并滤液，60℃减压浓缩至2g生药/ml，加入8.5倍乙醇充分搅拌，静置12小时，将上清液于60℃减压浓缩至无醇味，再加水至0.25g生药/ml，将药液于120℃加热1小时，放入0℃冰箱冷藏24小时，滤过，低温减压浓缩至2g生药/ml，以D101大孔吸附树脂吸附12小时后，先以水至洗出液为浅黄色，弃取，继续以乙醇洗脱至洗脱液几乎无色，减压浓缩洗脱液至无醇味，再加水约至2g/ml于0℃冷藏24小时，过滤后将滤液减压浓缩至干，低温干燥，粉碎，即得。
用分光光度法测定提取物中环烯醚萜苷类成份含量，应不低于50％(wt％)。
实施例3 苦参提取物的制备方法取苦参10目粗粉，30％乙醇提取4次，第一次加8倍量提取2小时，第二次加6倍量提取1小时，后两次各加4倍量各提取1小时，滤过，滤液于60℃减压浓缩至1g生药/ml加入乙醇使含醇量至50％，静置12小时，低温减压回收上清液，浓缩至4g生药/ml，以D101大孔吸附树脂吸附12小时后，先以水洗至洗出液几乎无色，弃去水液，继续以80％乙醇洗脱至洗脱液几无色，减压浓缩至洗脱液至无醇味，再加水至2g/ml于0℃冷藏24小时后过滤，将滤液低温浓缩至干，低温干燥，粉碎，即得。
用分光光度法测定提取物中苦参总碱含量，应不低于50％(wt％)。
实施例4分别称取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶0.5份∶0.5份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于22.5％(重量百分比)，环烯醚萜苷类成份含量应不低于15.5％(重量百分比)，苦参总碱含量应不低于(重量百分比)12％。
实施例5分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶0.5份∶1份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于18％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于12％，苦参总碱含量应不低于20％。
实施例6分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶0.5份∶1.5份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；
取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于15％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于11％，苦参总碱含量应不低于24％。
实施例7分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶1份∶0.5份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于17％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于24％，苦参总碱含量应不低于9％。
实施例8分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶1份∶1份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；
取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于15％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于20％，苦参总碱含量应不低于15％。
实施例9分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶1份∶1.5份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于13％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于18％，苦参总碱含量应不低于19％。
实施例10分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶1.5份∶0.5份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；
取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于14％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于29％，苦参总碱含量应不低于7％。
实施例11分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶1.5份∶1份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于12％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于25％，苦参总碱含量应不低于13％。
实施例12分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶1.5份∶1.5份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于11％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于22％，苦参总碱含量应不低于17％。
本发明所提及的“份”均为重量份。
本发明所提及的“％”均为重量百分比。
权利要求
1.一种用于治疗肝炎和黄疸的药物组合物，其特征在于以中药茵陈、栀子和苦参的提取物为有效药用成份，和制药中允许使用的辅助添加成份组成。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于有效药用成份提取物的比例为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶0.5～1.5份∶0.5～1.5份，加入适量药用附加剂配制制成。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所说的提取物有效药用成份为，茵陈提取物中包括黄酮类和香豆素类成份(两类成份总和大于50％(wt％))，栀子提取物中包括环烯醚萜类成份(大于50％(wt％))，苦参提取物中包括生物碱类成份(大于50％(wt％))。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于药学上可接受的附加剂包括填充剂如淀粉、糊精、粉状纤维素；湿润剂如乙基纤维素、糊精、微晶纤维素；黏合剂如乙基纤维素、玉米朊、阿拉伯胶；崩解剂如甲基纤维素、预凝胶淀粉、淀粉、微晶纤维素；表面活性剂如吐温-80、PEG4000、PVP；稀释剂如淀粉、葡萄糖、微晶纤维素；润滑剂如硬脂酸镁、滑石粉、硅酸钙。
5.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于其剂型包括片剂，胶囊剂，滴丸剂，溶液剂，缓释剂，控释剂及液体注射剂和固体注射剂。
6.如权利要求1所述的药物组合物的医学用途，该药物组合物可作治疗肝炎和黄疸的药物。
全文摘要
本发明公开了一种治疗肝炎和黄胆的药物组合物，以中药茵陈、栀子和苦参的提取物为有效药用成分，和制药中允许使用的辅助添加成分组成。各有效药用组分提取物以相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶0.5～1.5份∶0.5～1.5份，经药理试验证明可抗肝炎和降黄疸，可作治疗肝炎和黄疸的药物。
文档编号A61P31/12GK1589792SQ0315053
公开日2005年3月9日 申请日期2003年8月25日 优先权日2003年8月25日
发明者黄成钢, 张振秋, 朱海燕, 王冰, 叶冠 申请人:中国科学院上海药物研究所
技术领域：
本发明涉及一种治疗肝炎和黄疸的药物组合物，该药物组合物的有效组分为中药茵陈、栀子和苦参的提取物。
背景技术：
乙型肝炎(Hepatitis B)是由乙肝病毒(Hepatitis B Virus)引起的一种临床常见病，发病率高，危害性大，它能引起肝硬化、肝癌的发生，甚至导致患者死亡。据报道，我国乙肝病毒携带者高达10％。
近年来，西医临床治疗乙型肝炎的主要方法是使用干扰素、拉米呋啶等抗病毒药，但这些药或价格昂贵，或副作用明显。
大量研究表明，中医药在乙肝的临床治疗中显示出极大优势，但目前应用的多为医生自拟的处方汤药或粗提物中成药，缺乏有效成份和药效作用明确、疗效肯定、剂型先进、服用携带方便的中药制剂。
本发明在长期有效成份和药理作用研究的基础上，采用一系列新技术，将茵陈、栀子和苦参三味常用中药分别提取有效成份后进行配伍。药理试验证明具有显著的抗病毒和退黄疸作用。该药物组合物有效成份和药理作用清楚，剂型先进，质量可控，稳定性好，有效期长，可用于制备治疗肝炎和黄疸的药物。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗肝炎和黄疸的药物组合物。
本发明的药物组合物的特征是，其有效组分为中药茵陈、栀子和苦参的提取物，再辅以制药中允许使用的辅助添加性成份组成。各有效药用成份提取物以相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶0.5～1.5份∶0.5～1.5份。其中茵陈提取物中包括黄酮类和香豆素类成份(两类成份总和含量大于50％(wt％))，栀子提取物中包括环烯醚萜类成份(含量大于50％(wt％))，苦参提取物中包括生物碱类成份(含量大于50％(wt％))。
在本发明的药物组合物中，茵陈的提取物可采用乙醇提取，大孔吸附树脂纯化得到。栀子提取物可采用乙醇提取，大孔吸附树脂纯化得到，苦参提取物可采用乙醇提取，大孔吸附树脂纯化得到。
郁建平，何照范，熊绿芸等，大孔吸附树脂提取荞麦芦丁工艺研究，贵州农业科学，1997，25(2)，3-8；[2]秦学功，元英进，用大孔树脂吸附分离苦豆子生物碱，中国中药杂志，2002，27(6)，428-429，470；[3]郑小江，“恩七叶甜”绞股蓝总皂甙提取工艺研究，湖北民族学院学报(自然科学版)，2001，19(3)，17-19；[4]《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第14册98-99页。
本发明的药物组合物可通过临床上常用的各种给药途径给药，如口服给药，注射给药。
本发明的药物组合物可选用药学上可接受的各种附加剂，包括填充剂如淀粉、糊精、粉状纤维素等；湿润剂如乙基纤维素、糊精、微晶纤维素等；黏合剂如乙基纤维素、玉米朊、阿拉伯胶等；崩解剂如甲基纤维素、预凝胶淀粉、淀粉、微晶纤维素等；表面活性剂如吐温-80、PEG4000、PVP等；稀释剂如淀粉、葡萄糖、微晶纤维素等；润滑剂如硬脂酸镁、滑石粉、硅酸钙等。
采用本领域常规制剂技术，按照《中华人民共和国药典》2000年版一部、二部和董方言主编的《现代中药新剂型新技术》2001版，即可把本发明药物组合物制成药学上的各种制剂，包括普通制剂和缓(控)释制剂，如片剂，胶囊剂，滴丸剂，溶液剂，缓释剂，控释剂及液体注射剂和固体注射剂。
总黄酮成份含量测定对照品溶液的制备精密称取芦丁10.768mg，置50ml量瓶中，加甲醇5ml，水浴微热溶解，放冷，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml含无水芦丁0.2154mg)。
标准曲线的绘制精密量取对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，于500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
供试品溶液的制备取茵陈提取物、制剂加水溶解，过滤，滤液作为供试品溶液。
测定法取供试品溶液1ml按标准曲线绘制项下操作，测定吸收度，以标准曲线计算，即得。
6，7-二甲氧基香豆素含量测定色谱条件与系统适用性试验高效液相色谱仪，紫外检测器，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，水-甲醇(70∶30)为流动相，柱温30℃，流量1.0ml/分钟，检测波长为343nm。
对照品溶液的制备精密称取6，7-二甲氧基香豆素对照品，加甲醇制成每1ml含0.058mg的溶液。
供试品溶液的制备取茵陈提取物、抗肝炎制剂加甲醇溶解，过滤，滤液作为供试品溶液。
测定法精密吸取取供试品溶液和对照品溶液各10ul注入液相色谱仪中，测定，计算，即得。
总生物碱成份含量测定对照品溶液的制备精密称取苦参碱5.200mg，以无水乙醇溶解并稀释至50ml量瓶中。
标准曲线的绘制精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置50ml磨口具塞三角瓶中，加2×10-4M(即0.0125％)溴麝香草酚蓝pH7.6的缓冲液(用0.1M磷酸二氢钠溶液50ml加0.1M氢氧化钠溶液42.2ml，再加水7.6ml配成，再用pH计校正pH值为7.6)6.00ml，氯仿6.00ml，密塞剧烈振摇2分钟，倒入60ml分液漏斗中，静置约40分钟，使水层与氯仿层完全分开清后，分出氯仿层于磨口试管中，于413nm波长处测定吸收度，测定时用溴麝香草酚蓝pH7.6的缓冲液12.00ml，加氯仿12.00ml，如上振摇，分出氯仿层作为比色空白。用测得的吸收度为纵坐标，生物碱的μg数为横坐标作图，绘制标准曲线。
供试品溶液的制备取苦参提取物、制剂加水溶解，过滤，滤液作为供试品溶液。
测定法取供试品溶液1.0ml按标准曲线绘制项下操作，测定吸收度，以标准曲线计算，即得。
环烯醚萜苷类成份含量测定对照品溶液的制备精密称取栀子苷10.061mg，以乙醇溶解并稀释至25ml量瓶中。
标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml，于具塞试管中，水浴蒸干，加入0.2ml的5％香草醛冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，60℃水浴加热15分钟，置冰水浴中3分钟，加入冰醋酸5ml，随行空白，于530nm处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。
供试品溶液的制备取栀子提取物、制剂加水溶解，过滤，取滤液以乙酸乙酯提取三次(10、10、10ml)，酯层弃去，水层置水浴上蒸干，以乙醇溶解定容于25ml，作为供试品溶液。
测定法取供试品溶液1ml，于具塞试管中，水浴蒸干，按标准曲线绘制项下操作，测定吸收度，以标准曲线计算，即得。
本发明药物组合物对2.2.15细胞HBeAg，HBsAg的影响试验HBeAg是位于细胞核表面的抗原，可用来衡量乙肝病毒复制的强弱，若它的表达水平高，则说明病毒正在大量复制。而HBsAg是表面抗原，它的高水平表达说明病毒已感染了肝细胞。若药物有效，则HBeAg和HBsAg的表达水平可明显降低。
1.对2.2.15细胞培养中HBeAg和HBsAg表达的作用(体外)2.2.15细胞是乙型肝炎病毒DNA克隆转染人尬癌细胞(HepG2)的细胞系。2.2.15细胞每毫升20万个接种于24孔细胞培养板，每孔1ml，37℃培养24小时。分为HBsAg、HBeAg阳性对照组，加入拉米呋啶(经培养液浸泡、溶解，离心去沉淀)；阴性对照组，HepG2细胞加入培养液；细胞对照组，2.2.15细胞加入培养液；药物组，药液无毒浓度以下2倍稀释，共5个稀释度1/80，1/160，1/320，1/640，1/1280，每浓度4个孔。37℃培养，每4天换原浓度药液培养。
第8天时收获培养液。分别测定HBsAg、HBeAg。用γ-记数仪测定每孔cpm值。计算抗原抑制百分率抗原抑制百分率＝(细胞对照cpm-给药组cpm)/细胞对照cpm计算药物抑制抗原半数有效浓度(IC50)IC50＝Antilog[B+(50-B)/(A-B)×C]A＝log＞50％药物浓度 B＝log＜50％药物浓度 C＝log稀释倍数表1本品在2.2.15细胞培养内对HBsAg和HBeAg的抑制作用(％)药物 HBsAg(CPM)HBeAg(CPM)稀释度抑制％ IC50(稀释度) SI抑制％ IC50(稀释度) SI1/80 84.13±4.16 1/379.1453.59±9.341/166 62.39 3.72±1.391/160 63.73±12.8239.51±4.311/320 54.49±10.8828.74±12.041/640 42.04±5.82 22.80±18.951/128027.25±2.67 11.45±9.62结果表明本品对2.2.15细胞的乙肝病毒颗粒分泌具有显著的抑制作用，对HBsAg抑制率达84.13％，对HBeAg抑制率达53.59％。
2.对2.2.15细胞培养上清液HBV-DNA的抑制作用(体外)第8天收获细胞上清液后，经聚乙二醇沉淀，蛋白酶K裂解，苯酚∶氯仿∶异戊醇抽提，无水乙醇沉淀核酸等步骤，真空抽干，重溶于TE缓冲液中作样品。
进行斑点杂交实验点样取20ul(DNA含量25ug)，经变性、中和，并以20×SSC缓冲液对倍稀释至1∶8倍稀释于硝酸纤维素膜上，并经干烤、预杂交、杂交、洗膜、放射自显影等步骤。以常规方法冲洗X光片。扫描仪扫描光片，用gel-pro软件测定密度，计算抑制率及IC50。
表2抗肝炎复方提取物对2.2.15细胞HBV-DNA的作用药物浓度细胞上清液HBV-DNA稀释倍数/抑制率％(稀释度)稀释1/2(CPM) 抑制率％ IC50SI1/80669.34866.39 1/611.7910.631/160 583.03870.721/320 597.29570.011/640 950.48952.271/1280 1191.3840.17细胞对照1991.42结果表明本品对2.2.15细胞HBV-DNA的复制有显著的抑制作用。
3.对2.2.15细胞HBV-DNA Southern Blot的抑制作用(体外)Southernblot第8天吸除培养液收取细胞，细胞经裂解液裂解，等体积苯酚∶氯仿∶异戊醇抽提2次，加无水乙醇沉淀核酸，真空抽干，重溶于20ulTE缓冲液中，加入DNA样品缓冲液，将样品加于琼脂糖胶上电泳。电泳后依次经变性、中和、转膜后。同斑点杂交膜一起烤膜、杂交、暴光。扫描仪扫描光片，用gel-pro软件测定密度，计算抑制率及IC50。
表3本品对2.2.15细胞HBV-DNA Southern Blot的抑制数据1/1280抑制1/640抑制1/320抑制1/160抑制1/80抑制RowsIC50SI(％) (％) (％) (％)(％)r1 46.4947.04 63.37 61.89 88.121/482.9410.82r2 48.7947.98 56.29 71.01 83.301/479.5310.76r3 16.8625.47 54.86 73.32 68.181/306.626.87r4 4.93 20.42 50.51 57.33 86.401/262.015.89Sum 11.4724.95 52.17 62.33 81.651/288.956.4结果表明通过用Southern blot检测，证明本品对2.2.15细胞内总HBV-DNA的表达有显著的抑制作用。
本发明药物组合物对鸭乙型肝炎病毒感染鸭的血清鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)的影响试验(体内)1日龄北京鸭经胫静脉注射上海麻鸭DHBV-DNA阳性血清，每只0.2ml，感染7天后随机分组如下病毒对照组腹腔注射生理盐水2.0ml，1天2次，连续给药10天；
阳性对照组口服给拉米呋啶50mg/kg，1天2次，连续给药10天给药组腹腔注射本发明药物组合物溶液(原液1∶2稀释)2.0ml，1天2次，连续给药10天。
在用药前、用药第5天、用药第10天和停药后第3天，自鸭胫静脉取血，分离血清，采用ElISA法测定其中鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)的OD值。并由此计算抑制率抑制率＝(给药前OD值-给药后OD值)/给药前OD值×100％OD值越高，则DHBV-DNA的含量越高，说明病毒复制水平高。若药物有效，则DHV-DNA的水平在给药后会下降。
1.抗肝炎有效部位腹腔注射对鸭血清DHBV-DNA OD的影响(体内)取鸭血清，同时点膜，测定鸭血清中DHBV-DNA水平的动态，按缺口翻译试剂盒说明书方法，用32P标记DHBV-DNA探针，并作鸭血清斑点杂交，放射自显影膜片斑点，在酶标检测仪测定OD值(滤光片为490nm)，计算血清DHBV-DNA密度，以杂交斑点OD值作为标本DHBV-DNA水平值。
计算每组鸭不同时间血清DNA OD值的平均值(X±SD)，并将每组鸭用药后不同时间(T5，T10)和停药后3天(P3)血清DHBV-DNA水平与同组给药前(T0)OD值比较，采用配对t检验，做统计学处理。
计算不同时间抑制百分率，比较各组鸭血清DHBV-DNA抑制率的动态。
DNA抑制％＝[给药前(T0)OD值-给药后(T5，T10，P3)OD值]/给药前(T0)OD值×100％表4抗肝炎有效部位腹腔注射对鸭血清DHBV-DNA OD值比较组别剂量 鸭数 鸭血清DHBV-DNA OD490值(X±SD)(ml/只) (只) T0 T5 T10 P3生理盐水6 0.676±0.050.695 ± 0.652 ± 0.711 ±0.08 0.07 0.07原液1/20稀释 0.5 6 0.580±0.020.552 ± 0.567 ± 0.609 ±0.03** 0.08 0.08原液1/20稀释 1.0 6 0.705±0.100.573 ± 0.531 ± 0.538 ±0.12** 0.05**0.04***原液1/20稀释 2.0 6 1.118±0.150.779 ± 0.895 ± 1.002 ±0.36*0.32* 0.22拉米呋啶 50mg/kg 6 1.478±0.410.905 ± 0.830 ± 1.534 ±0.29* 0.23*0.31统计处理t1，p1给药组不同时间(T5、T10，P3)鸭血清DHBV-DNAOD值与感染前(T0)OD值比较(配对t检验)。*p1＜0.05，**p1＜0.01。
结果表明抗肝炎有效部位腹腔注射第5，10天和停药后第3天(P3)，能显著降低鸭血清DHBV-DNA含量(P＜0.05-0.01)。说明本品具有显著的抑制病毒复制作用。
2.抗肝炎有效部位腹腔注射对鸭血清DHBV-DNA水平抑制率的影响(体内)表5抗肝炎有效部位腹腔注射对鸭血清DHBV-DNA水平抑制率的比较药物剂量 鸭数抑制率(％)(ml/只)(只)T5T10 P3病毒对照 6 -3.59 2.75 -5.61原液1/20稀释0.56 4.84 2.60 -4.96原液1/20稀释1.06 18.82*23.58*22.54**原液1/20稀释2.06 32.30*21.18 9.83拉米呋啶50mg/kg 6 36.66** 40.82** -13.46统计处理t2，p2给药组不同时间(T5、T10，P3)鸭血清DHBV-DNA水平与感染前(T0)比较的抑制％与病毒对照组抑制％比较(成组t检验)。*p2＜0.05，**p2＜0.01。
结果表明本品腹腔注射对感染鸭血清DHBV-DNA水平的抑制效果显著(P＜0.05-0.01)，无毒性反应。表明抗肝炎有效部位腹腔注射治疗乙型肝炎病毒感染鸭有效。3.抗肝炎有效部位口服对鸭血清DHBV-DNA OD的影响(体内)实验分组同前，只将给药方式由腹腔注射改为口服，实验、检测及结果处理方法亦同前。
表6抗肝炎有效部位口服对鸭血清DHBV-DNA OD值比较组别剂量 鸭数鸭血清DHBV-DNA OD490值(X±SD)(ml/只) (只)T0 T5 T10 P3生理盐水 6 0.708 ± 0.742 ± 0.659 ± 0.567 ±0.11 0.13 0.08 0.09原液1/20稀释 2.0 6 0.735 ± 0.711 ± 0.645 ± 0.606 ±0.10 0.11 0.04 0.07原液1/10稀释 2.0 6 0.760 ± 0.687 ± 0.559 ± 0.520 ±0.18 0.19 0.09*0.08*原液1/5稀释2.0 6 0.652 ± 0.646 ± 0.553 ± 0.703 ±0.03 0.09 0.07** 0.07拉米呋啶 50mg6 1.146 ± 0.754 ± 0.366 ± 0.924 ±0.15 0.16*0.07**0.13*统计处理t1，p1给药组不同时间(T5、T10，P3)鸭血清DHBV-DNAOD值与感染前(T0)OD值比较(配对t检验)。*p1＜0.05，**p1＜0.0l，***p1＜0.001。
结果表明本品口服给药后第10天和停药后第3天(P3)，能显著降低鸭血清DHBV-DNA含量(P＜0.05-0.01)。说明抗肝炎有效部位口服对乙肝病毒复制有抑制作用。
4.抗肝炎有效部位口服对鸭血清DHBV-DNA水平抑制率的影响(体内)表7抗肝炎有效部位口服对鸭血清DHBV-DNA水平抑制率的比较药物 剂量 鸭数 抑制率(％)(ml/只) (只) T5 T10 P3病毒对照 6 -9.14 3.20 11.89原液1/20稀释 2.06 4.57 15.9922.30原液1/10稀释 2.06 6.08 15.97-22.73原液1/5稀释2.06 22.65**28.51* 2.14拉米呋啶 50mg 6 32.37**67.92** 18.29统计处理t2，p2给药组不同时间(T5、T10，P3)鸭血清DHBV-DNA水平与感染前(T0)比较的抑制％与病毒对照组抑制％比较(成组t检验)。p2＜0.05，**p2＜0.01。
结果表明本品口服对感染鸭血清DHBV-DNA水平的抑制效果显著(P＜0.05-0.01)。表明抗肝炎有效部位口服治疗乙型肝炎病毒感染鸭有效。
本发明药物组合物对大鼠胆汁分泌的影响试验大鼠静脉注射药物组合物(4g生药/kg)约一小时后，胆汁分泌量及胆汁中胆红素含量明显增加，与对照组(生理盐水)相比，具有极显著意义(p＜0.01)。提示本品具有明显的退黄作用。
具体实施例方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步的阐述，但不对其有任何限制。
实施例1 茵陈提取物的制备方法取茵陈成熟全草切成约1cm小段，以70％乙醇回流提取2次，第一次加8倍量，提取2.5小时，第二次加6倍量，提取1.5小时，滤过，滤液合并，60℃减压回收乙醇至浓缩液无醇味，滤液减压浓缩至4g生药/ml，以D101大孔吸附树脂吸附12小时后，先以水洗至洗出液几乎无色，水液弃取，以50％乙醇洗脱至洗脱液几乎无色，减压浓缩洗脱液至无醇味，再加水约至2g生药/ml于0℃冷藏24小时，过滤后将滤液减压浓缩至干，低温干燥，粉碎，即得。
用分光光度法测定提取物中黄酮类成份含量，应不低于50％。
实施例2 栀子提取物的制备方法取栀子药材粉碎成10目粗粉，以80％乙醇回流提取2次，每次加入4倍量，各回流1小时，滤过，合并滤液，60℃减压浓缩至2g生药/ml，加入8.5倍乙醇充分搅拌，静置12小时，将上清液于60℃减压浓缩至无醇味，再加水至0.25g生药/ml，将药液于120℃加热1小时，放入0℃冰箱冷藏24小时，滤过，低温减压浓缩至2g生药/ml，以D101大孔吸附树脂吸附12小时后，先以水至洗出液为浅黄色，弃取，继续以乙醇洗脱至洗脱液几乎无色，减压浓缩洗脱液至无醇味，再加水约至2g/ml于0℃冷藏24小时，过滤后将滤液减压浓缩至干，低温干燥，粉碎，即得。
用分光光度法测定提取物中环烯醚萜苷类成份含量，应不低于50％(wt％)。
实施例3 苦参提取物的制备方法取苦参10目粗粉，30％乙醇提取4次，第一次加8倍量提取2小时，第二次加6倍量提取1小时，后两次各加4倍量各提取1小时，滤过，滤液于60℃减压浓缩至1g生药/ml加入乙醇使含醇量至50％，静置12小时，低温减压回收上清液，浓缩至4g生药/ml，以D101大孔吸附树脂吸附12小时后，先以水洗至洗出液几乎无色，弃去水液，继续以80％乙醇洗脱至洗脱液几无色，减压浓缩至洗脱液至无醇味，再加水至2g/ml于0℃冷藏24小时后过滤，将滤液低温浓缩至干，低温干燥，粉碎，即得。
用分光光度法测定提取物中苦参总碱含量，应不低于50％(wt％)。
实施例4分别称取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶0.5份∶0.5份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于22.5％(重量百分比)，环烯醚萜苷类成份含量应不低于15.5％(重量百分比)，苦参总碱含量应不低于(重量百分比)12％。
实施例5分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶0.5份∶1份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于18％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于12％，苦参总碱含量应不低于20％。
实施例6分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶0.5份∶1.5份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；
取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于15％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于11％，苦参总碱含量应不低于24％。
实施例7分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶1份∶0.5份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于17％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于24％，苦参总碱含量应不低于9％。
实施例8分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶1份∶1份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；
取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于15％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于20％，苦参总碱含量应不低于15％。
实施例9分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶1份∶1.5份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于13％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于18％，苦参总碱含量应不低于19％。
实施例10分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶1.5份∶0.5份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；
取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于14％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于29％，苦参总碱含量应不低于7％。
实施例11分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶1.5份∶1份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于12％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于25％，苦参总碱含量应不低于13％。
实施例12分别取茵陈提取物、栀子提取物、苦参提取物，相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶1.5份∶1.5份，混合均匀，即得本发明药物组合物。
取药粉加淀粉，糊精，糖粉适量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成片剂；取药粉加2份，加淀粉1份，适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成胶囊剂；取药粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加热熔融，滴入甲基硅油、液体石蜡或植物油中，收集滴丸，制成滴丸剂；取药粉3份，加蔗糖1份，加适量苯甲酸类或尼泊金类防腐剂，加水稀释，制成溶液剂；取药粉加羟丙甲基纤维素、乳糖，混合均匀，以适量乙醇制粒，干燥，整粒，装入胶囊，制成缓(控)释胶囊剂；加适量硬脂酸镁压片，包衣，制成缓(控)释片剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理盐水溶液稀释，微孔滤膜过滤至澄明，灌封，115℃热压灭菌，制成液体注射剂；取药粉加注射用水溶解，超滤，滤液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均匀，冷冻干燥，制成冻干粉针注射剂。
制剂中黄酮及香豆素类成份含量总和应不低于11％，环烯醚萜苷类成份含量应不低于22％，苦参总碱含量应不低于17％。
本发明所提及的“份”均为重量份。
本发明所提及的“％”均为重量百分比。
权利要求
1.一种用于治疗肝炎和黄疸的药物组合物，其特征在于以中药茵陈、栀子和苦参的提取物为有效药用成份，和制药中允许使用的辅助添加成份组成。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于有效药用成份提取物的比例为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶0.5～1.5份∶0.5～1.5份，加入适量药用附加剂配制制成。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所说的提取物有效药用成份为，茵陈提取物中包括黄酮类和香豆素类成份(两类成份总和大于50％(wt％))，栀子提取物中包括环烯醚萜类成份(大于50％(wt％))，苦参提取物中包括生物碱类成份(大于50％(wt％))。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于药学上可接受的附加剂包括填充剂如淀粉、糊精、粉状纤维素；湿润剂如乙基纤维素、糊精、微晶纤维素；黏合剂如乙基纤维素、玉米朊、阿拉伯胶；崩解剂如甲基纤维素、预凝胶淀粉、淀粉、微晶纤维素；表面活性剂如吐温-80、PEG4000、PVP；稀释剂如淀粉、葡萄糖、微晶纤维素；润滑剂如硬脂酸镁、滑石粉、硅酸钙。
5.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于其剂型包括片剂，胶囊剂，滴丸剂，溶液剂，缓释剂，控释剂及液体注射剂和固体注射剂。
6.如权利要求1所述的药物组合物的医学用途，该药物组合物可作治疗肝炎和黄疸的药物。
全文摘要
本发明公开了一种治疗肝炎和黄胆的药物组合物，以中药茵陈、栀子和苦参的提取物为有效药用成分，和制药中允许使用的辅助添加成分组成。各有效药用组分提取物以相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为茵陈∶栀子∶苦参＝2份∶0.5～1.5份∶0.5～1.5份，经药理试验证明可抗肝炎和降黄疸，可作治疗肝炎和黄疸的药物。
文档编号A61P31/12GK1589792SQ0315053
公开日2005年3月9日 申请日期2003年8月25日 优先权日2003年8月25日
发明者黄成钢, 张振秋, 朱海燕, 王冰, 叶冠 申请人:中国科学院上海药物研究所
最新回复(0)