迷迭香提取物及其制备方法和应用的制作方法
专利名称：迷迭香提取物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种迷迭香提取物及其制备方法，以及其在抑制白色念珠菌活性方面，特别是在制备治疗白色念珠菌感染疾病的药物方面的应用。
背景技术：
迷迭香(Rosmarinus officinalis L.)为唇形科迷迭香属药用植物，为常绿灌木，以全草入药。迷迭香又称“海洋之露”，“圣马丽亚的玫瑰”，英文名为Rosemary。迷迭香地中海沿岸丛生，目前在我国已有种植。
传统中医药认为，迷迭香性温味辛，具有芳香健胃、镇静安神等功效，常用于治疗各种头痛、神经衰弱等。近些年来，国内外的研究证明，迷迭香挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、霍乱弧菌等具有抑制杀灭作用；已被广泛用作抗氧化剂、香料及调味品等。
故而迷迭香的开发应用，引起了科学界的极大兴趣，也受到国际医药界的广泛重视，成为当今开发研究的热门话题。但目前还没有迷迭香有抑制和杀灭白色念珠菌的相关报道。
另一方面，近年来，由酵母样真菌引起的感染发病率在逐渐升高，其主要原因与免疫力低下的肿瘤患者增加放、化疗和器官移植术的广泛开展以及临床上大量广泛使用广谱抗生素有关。念珠菌一般直径3-5微米，菌丝呈球形或长球形，归类为酵母型。白色念珠菌(Monilia albican或canidiaAlbicans)是一种由出芽生殖的酵母状真菌通常存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病，当机体免疫能力或正常菌群相互制约作用失调，则本菌大量繁殖并改变生长形式侵入细胞引起疾病。白色念珠菌能侵入肺、肠、心、脑膜、口鼻粘膜、阴道、皮肤、指甲等部位，可引起皮肤念珠菌病、粘膜念珠菌病、内脏及中枢神经念珠菌病等相应部位的念珠菌感染疾病。
发明内容
本发明的目的是为了解决上述课题，提供一种可抑制白色念珠菌活性的迷迭香提取物。
本发明的另一目的是提供上述迷迭香提取物的制备方法。
本发明的又一目的是提供上述迷迭香提取物在抑制白色念珠菌活性方面，特别是在制备治疗白色念珠菌感染疾病的药物方面的应用。
本发明的迷迭香提取物的制备方法为将迷迭香草粉碎，加入3-10倍重量的20％-100％乙醇或甲醇，进行提取制得。
之后可在该提取液浓缩后，加入石油醚萃取多次。
可再取下层萃取液，加入乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷萃取多次，将所得萃取液浓缩干燥。
其中，上述石油醚与浓缩后的提取液的体积比为1∶1～2∶1；该乙酸乙酯、氯仿或二氯乙烷与下层萃取液的体积比为1∶1～1∶2。
该方法中所述的提取为冷提或加热提取；所述的浓缩为减压浓缩。
该方法中最好加入8倍重量的95％的乙醇或甲醇。
一种由上述的方法制备的迷迭香提取物。
该提取物中的活性物质为由分子量小于1000道尔顿的分子组成的组合物，该组合物溶于乙醇。
本发明的迷迭香提取物可应用于抑制白色念珠菌活性方面，如可制作化妆品、消毒品、口腔护理用品等。
特别可用于制备治疗白色念珠菌感染疾病的药物。
具体实施例方式
本发明通过以下实施例作进一步阐述，但并不限制本发明的内容。
实施例1将迷迭香草500克粉碎，加入3倍重量的20％的乙醇，热提取(50℃)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为1∶1)萃取2次；取下层溶液再加入乙酸乙酯(乙酸乙酯与溶液的体积比为1∶1)萃取3次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
实施例2将迷迭香全草750克粉碎，加入10倍重量的100％的甲醇，冷提取(室温)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为2∶1)萃取3次；取下层溶液再加入氯仿(氯仿与溶液的体积比为1∶2)萃取4次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
实施例3将迷迭香全草1000克粉碎，加入8倍重量的95％的乙醇，冷提取(室温)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为1.5∶1)萃取3次；取下层溶液再加入乙酸乙酯(乙酸乙酯与溶液的体积比为1∶1.5)萃取5次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
实施例4将迷迭香草500克粉碎，加入3倍重量的20％的甲醇，热提取(70℃)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为2∶1)萃取2次；取下层溶液再加入二氯甲烷(二氯甲烷与溶液的体积比为1∶1)萃取3次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
实施例5将迷迭香草750克粉碎，加入10倍重量的75％的乙醇，热提取(60℃)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为1∶1)萃取3次；取下层溶液再加入氯仿(氯仿与溶液的体积比为1∶2)萃取5次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
实施例6将迷迭香全草1000克粉碎，加入8倍重量的95％的甲醇，冷提取(室温)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为1.5∶1)萃取3次；取下层溶液再加入二氯甲烷(二氯甲烷与溶液的体积比为1∶1.5)萃取4次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
实施例7将迷迭香草750克粉碎，加入6倍重量的50％的乙醇，热提取(70℃)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为1∶1)萃取4次；取下层溶液再加入氯仿(氯仿与溶液的体积比为1∶2)萃取4次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
实施例8将迷迭香全草1000克粉碎，加入4倍重量的60％的甲醇，热提取(70℃)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为1.5∶1)萃取4次；取下层溶液再加入乙酸乙酯(乙酸乙酯与溶液的体积比为1∶1.5)萃取5次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
上述实施例中的迷迭香原料来自从地中海国家引进，种于我国西部(如云南、贵州等)的迷迭香。
本发明的迷迭香提取物可抑制白色念珠菌的活性，故可用于制备治疗白色念珠菌感染的疾病，通过下面的实验说明本发明组合物的活性。
实验实施例1.实验菌株选用国际标准菌株；白色念珠菌(Candida albicans ATCC 76615)。
2.体外敏感试验操作程序(微量液体稀释法)检测MIC(最低抑制浓度)和MBC(最低杀菌浓度)采用血平板培养基接种上述实验菌株后，37℃培养18小时。保存之菌株复苏，经生化鉴定后接种于相应琼脂平板。挑取琼脂表面的单个菌落混悬于相应液体培养基中(1个1mm菌落/ml)培养，培养相应时间后使菌液浓度呈105-6CFU/ml备用。
实验样品制备将上述实施例所得本发明迷迭香提取物以二甲基亚砜配制成20mg/ml为原液。然后对该种样品再次做浓度精确稀释，做药品浓度筛选实验。
药品筛选和有效浓度筛选采用微量液体稀释法检测MIC和MBC。
MIC测定用无菌微量加样器吸取呈梯度稀释的各种样品50μl于无菌96孔微孔板中，再加入等量菌液，混合；放置适宜培养条件下孵育，48h后观察结果；肉眼观察无真菌生长的最低药物浓度为MIC。
MBC测定用无菌接种环挑取肉眼观察无真菌生长的微孔板中培养物，划线接种于相应平板；适当条件下培养后观察，无真菌生长的最低药物浓度为MBC。
阳性对照不加各种药品，只加菌液和等量液体培养基。
阴性对照不加菌液，只加各种药品和等量液体培养基。
3.结果详见下表
权利要求
1.一种迷迭香提取物的制备方法，其特征在于该方法为将迷迭香草粉碎，加入3-10倍重量的20％-100％乙醇或甲醇，进行提取制得。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于该提取液浓缩后，加入石油醚萃取。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于取下层萃取液，再加入乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷萃取，将所得萃取液浓缩干燥。
4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于该石油醚与浓缩后的提取液的体积比为1∶1～2∶1，萃取多次；该乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷与下层萃取液的体积比为1∶1～1∶2，萃取多次。
5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于该方法中所述的提取为冷提或加热提取；所述的浓缩为减压浓缩。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于在该方法中加入8倍重量的95％的乙醇或甲醇。
7.一种由权利要求1所述的方法制备的迷迭香提取物。
8.如权利要求7所述的迷迭香提取物，其特征在于该提取物中的活性物质为由分子量小于1000道尔顿的分子组成的组合物，该组合物溶于乙醇。
9.如权利要求7或8所述的迷迭香提取物在抑制白色念珠菌活性方面的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于该应用是指制备治疗白色念珠菌感染疾病的药物。
全文摘要
一种迷迭香提取物的制备方法，其特征在于该方法为将迷迭香草粉碎，加入3－10倍重量的20％－100％乙醇或甲醇，进行提取制得。该提取物可抑制白色念珠菌活性，故可用于制备治疗白色念珠菌感染疾病的药物。
文档编号A61P31/10GK1600353SQ03151250
公开日2005年3月30日 申请日期2003年9月26日 优先权日2003年9月26日
发明者刘桂云 申请人:上海市新文达生物科技有限公司
技术领域：
本发明涉及一种迷迭香提取物及其制备方法，以及其在抑制白色念珠菌活性方面，特别是在制备治疗白色念珠菌感染疾病的药物方面的应用。
背景技术：
迷迭香(Rosmarinus officinalis L.)为唇形科迷迭香属药用植物，为常绿灌木，以全草入药。迷迭香又称“海洋之露”，“圣马丽亚的玫瑰”，英文名为Rosemary。迷迭香地中海沿岸丛生，目前在我国已有种植。
传统中医药认为，迷迭香性温味辛，具有芳香健胃、镇静安神等功效，常用于治疗各种头痛、神经衰弱等。近些年来，国内外的研究证明，迷迭香挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、霍乱弧菌等具有抑制杀灭作用；已被广泛用作抗氧化剂、香料及调味品等。
故而迷迭香的开发应用，引起了科学界的极大兴趣，也受到国际医药界的广泛重视，成为当今开发研究的热门话题。但目前还没有迷迭香有抑制和杀灭白色念珠菌的相关报道。
另一方面，近年来，由酵母样真菌引起的感染发病率在逐渐升高，其主要原因与免疫力低下的肿瘤患者增加放、化疗和器官移植术的广泛开展以及临床上大量广泛使用广谱抗生素有关。念珠菌一般直径3-5微米，菌丝呈球形或长球形，归类为酵母型。白色念珠菌(Monilia albican或canidiaAlbicans)是一种由出芽生殖的酵母状真菌通常存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病，当机体免疫能力或正常菌群相互制约作用失调，则本菌大量繁殖并改变生长形式侵入细胞引起疾病。白色念珠菌能侵入肺、肠、心、脑膜、口鼻粘膜、阴道、皮肤、指甲等部位，可引起皮肤念珠菌病、粘膜念珠菌病、内脏及中枢神经念珠菌病等相应部位的念珠菌感染疾病。
发明内容
本发明的目的是为了解决上述课题，提供一种可抑制白色念珠菌活性的迷迭香提取物。
本发明的另一目的是提供上述迷迭香提取物的制备方法。
本发明的又一目的是提供上述迷迭香提取物在抑制白色念珠菌活性方面，特别是在制备治疗白色念珠菌感染疾病的药物方面的应用。
本发明的迷迭香提取物的制备方法为将迷迭香草粉碎，加入3-10倍重量的20％-100％乙醇或甲醇，进行提取制得。
之后可在该提取液浓缩后，加入石油醚萃取多次。
可再取下层萃取液，加入乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷萃取多次，将所得萃取液浓缩干燥。
其中，上述石油醚与浓缩后的提取液的体积比为1∶1～2∶1；该乙酸乙酯、氯仿或二氯乙烷与下层萃取液的体积比为1∶1～1∶2。
该方法中所述的提取为冷提或加热提取；所述的浓缩为减压浓缩。
该方法中最好加入8倍重量的95％的乙醇或甲醇。
一种由上述的方法制备的迷迭香提取物。
该提取物中的活性物质为由分子量小于1000道尔顿的分子组成的组合物，该组合物溶于乙醇。
本发明的迷迭香提取物可应用于抑制白色念珠菌活性方面，如可制作化妆品、消毒品、口腔护理用品等。
特别可用于制备治疗白色念珠菌感染疾病的药物。
具体实施例方式
本发明通过以下实施例作进一步阐述，但并不限制本发明的内容。
实施例1将迷迭香草500克粉碎，加入3倍重量的20％的乙醇，热提取(50℃)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为1∶1)萃取2次；取下层溶液再加入乙酸乙酯(乙酸乙酯与溶液的体积比为1∶1)萃取3次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
实施例2将迷迭香全草750克粉碎，加入10倍重量的100％的甲醇，冷提取(室温)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为2∶1)萃取3次；取下层溶液再加入氯仿(氯仿与溶液的体积比为1∶2)萃取4次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
实施例3将迷迭香全草1000克粉碎，加入8倍重量的95％的乙醇，冷提取(室温)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为1.5∶1)萃取3次；取下层溶液再加入乙酸乙酯(乙酸乙酯与溶液的体积比为1∶1.5)萃取5次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
实施例4将迷迭香草500克粉碎，加入3倍重量的20％的甲醇，热提取(70℃)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为2∶1)萃取2次；取下层溶液再加入二氯甲烷(二氯甲烷与溶液的体积比为1∶1)萃取3次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
实施例5将迷迭香草750克粉碎，加入10倍重量的75％的乙醇，热提取(60℃)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为1∶1)萃取3次；取下层溶液再加入氯仿(氯仿与溶液的体积比为1∶2)萃取5次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
实施例6将迷迭香全草1000克粉碎，加入8倍重量的95％的甲醇，冷提取(室温)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为1.5∶1)萃取3次；取下层溶液再加入二氯甲烷(二氯甲烷与溶液的体积比为1∶1.5)萃取4次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
实施例7将迷迭香草750克粉碎，加入6倍重量的50％的乙醇，热提取(70℃)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为1∶1)萃取4次；取下层溶液再加入氯仿(氯仿与溶液的体积比为1∶2)萃取4次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
实施例8将迷迭香全草1000克粉碎，加入4倍重量的60％的甲醇，热提取(70℃)；将提取液减压浓缩后，先加入石油醚(石油醚与浓缩液的体积比为1.5∶1)萃取4次；取下层溶液再加入乙酸乙酯(乙酸乙酯与溶液的体积比为1∶1.5)萃取5次，将此萃取液浓缩至干，经干燥便得到本发明的迷迭香提取物。
上述实施例中的迷迭香原料来自从地中海国家引进，种于我国西部(如云南、贵州等)的迷迭香。
本发明的迷迭香提取物可抑制白色念珠菌的活性，故可用于制备治疗白色念珠菌感染的疾病，通过下面的实验说明本发明组合物的活性。
实验实施例1.实验菌株选用国际标准菌株；白色念珠菌(Candida albicans ATCC 76615)。
2.体外敏感试验操作程序(微量液体稀释法)检测MIC(最低抑制浓度)和MBC(最低杀菌浓度)采用血平板培养基接种上述实验菌株后，37℃培养18小时。保存之菌株复苏，经生化鉴定后接种于相应琼脂平板。挑取琼脂表面的单个菌落混悬于相应液体培养基中(1个1mm菌落/ml)培养，培养相应时间后使菌液浓度呈105-6CFU/ml备用。
实验样品制备将上述实施例所得本发明迷迭香提取物以二甲基亚砜配制成20mg/ml为原液。然后对该种样品再次做浓度精确稀释，做药品浓度筛选实验。
药品筛选和有效浓度筛选采用微量液体稀释法检测MIC和MBC。
MIC测定用无菌微量加样器吸取呈梯度稀释的各种样品50μl于无菌96孔微孔板中，再加入等量菌液，混合；放置适宜培养条件下孵育，48h后观察结果；肉眼观察无真菌生长的最低药物浓度为MIC。
MBC测定用无菌接种环挑取肉眼观察无真菌生长的微孔板中培养物，划线接种于相应平板；适当条件下培养后观察，无真菌生长的最低药物浓度为MBC。
阳性对照不加各种药品，只加菌液和等量液体培养基。
阴性对照不加菌液，只加各种药品和等量液体培养基。
3.结果详见下表
权利要求
1.一种迷迭香提取物的制备方法，其特征在于该方法为将迷迭香草粉碎，加入3-10倍重量的20％-100％乙醇或甲醇，进行提取制得。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于该提取液浓缩后，加入石油醚萃取。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于取下层萃取液，再加入乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷萃取，将所得萃取液浓缩干燥。
4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于该石油醚与浓缩后的提取液的体积比为1∶1～2∶1，萃取多次；该乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷与下层萃取液的体积比为1∶1～1∶2，萃取多次。
5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于该方法中所述的提取为冷提或加热提取；所述的浓缩为减压浓缩。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于在该方法中加入8倍重量的95％的乙醇或甲醇。
7.一种由权利要求1所述的方法制备的迷迭香提取物。
8.如权利要求7所述的迷迭香提取物，其特征在于该提取物中的活性物质为由分子量小于1000道尔顿的分子组成的组合物，该组合物溶于乙醇。
9.如权利要求7或8所述的迷迭香提取物在抑制白色念珠菌活性方面的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于该应用是指制备治疗白色念珠菌感染疾病的药物。
全文摘要
一种迷迭香提取物的制备方法，其特征在于该方法为将迷迭香草粉碎，加入3－10倍重量的20％－100％乙醇或甲醇，进行提取制得。该提取物可抑制白色念珠菌活性，故可用于制备治疗白色念珠菌感染疾病的药物。
文档编号A61P31/10GK1600353SQ03151250
公开日2005年3月30日 申请日期2003年9月26日 优先权日2003年9月26日
发明者刘桂云 申请人:上海市新文达生物科技有限公司
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