来氟米特在制备抗sars病毒药物上的应用的制作方法
专利名称：来氟米特在制备抗sars病毒药物上的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及抗SARS病毒药物，具体涉及来氟米特在制备抗SARS病毒药物上的应用。
背景技术：
尽管抗病毒治疗药物的研究在近年取得了很大的进展，并且这些抗病毒药物在临床上已经广泛应用，但是，由病毒引起的各种疾病的发生率和死亡率仍然居高不下。2003年春天在我国内地和香港、台湾等地发生的非典型肺炎即是一个典型的例子，这种非典型肺炎是由冠状病毒的变种引起的，对几乎所有的抗病毒药物无效，在临床上尚无有效的特异性治疗用药。目前，市场上通常使用的抗病毒药物均是通过抑制病毒DNA、RNA的合成或者转录发挥作用，因此在这些抗病毒药物大量使用的同时，耐药性病毒菌株的产生也就不足为奇了。
来氟米特是一种合成的异噁唑类化合物，具有免疫抑制及抗增殖作用。20世纪90年代以来，在对来氟米特进行各种基础和临床研究的过程中，意外发现来氟米特兼有抗巨细胞病毒(ID50＝40～60μM)和单纯疱疹病毒(IC50≈15μM)及其他多种病毒的特性，并且这种作用机制与其他抗病毒药物有明显的不同(W.J.Waldman et al.，实验免疫抑制剂来氟米特抑制巨细胞病毒的新机制，Transplantation，68(6)814-825，1999；D.A.Knight et al.，实验免疫抑制剂来氟米特对单纯疱疹病毒的抑制作用，Transplantation，71170-174，2001)。来氟米特并不能抑制病毒DNA、RNA的复制、转录，但是来氟米特能够抑制酪酸激酶的活性，对部分病毒的包膜合成过程产生抑制作用，从而发挥抗病毒作用。目前尚未见临床方面的相关研究报道，但是Hardinger等在药物抗器官排异的研究过程中，观察到巨细胞病毒感染的病人在应用来氟米特抗排异治疗后病毒感染也消失的现象(K.L.Hardinger et al.，来氟米特替代治疗能减缓移植肾功能障碍的发生，美国移植会议，2002)。来氟米特能否通过相似的机制对SARS病毒产生抑制作用值得研究。
发明内容
本发明的目的是提供来氟米特在制备抗SARS病毒药物上的应用。
申请人于2003年7月委托国家药物筛选中心进行了抗SARS病毒筛选试验，采用来氟米特的活性代谢物氟塞米(A771726)，样品溶于培养液或DMSO，配成适宜的初始浓度，并稀释。将Vero-E6细胞接种于96孔培养板，置37℃、5％CO2培养，SARS病毒感染细胞后，分别加入不同稀释浓度的样品，设病毒对照、细胞对照和样品对照。每日镜下观察结果，记录CPE，并用中性红染色测定OD值，参照对照进行样品抗SARS病毒活性作用的计算和评价。实验结果表明来氟米特的活性代谢物氟塞米有抗SARS病毒、保护被感染细胞的作用。
具体实施例方式
实施例1来氟米特活性代谢物氟塞米的抗SARS病毒作用测试日期2003-7-17测试项目；药物抗SARS病毒活性筛选(病毒—细胞水平模型)测试原理以Vero-E6细胞作为病毒宿主细胞(易感细胞)，测试样品抵抗病毒感染细胞的作用，检测指标为细胞变性反应(CPE)以及感染细胞保护率。
测试材料和方法1.测试样品氟塞米(A771726)2.国家新药筛选中心样品号S011603.病毒株BJ-01(来源于北京军事科学院微生物流行病研究所)4.实验场所上海疾病预防和控制中心P3实验室5.测试样品提供单位欣凯医药化工中间体(上海)有限公司6.样品处理样品溶于培养液或DMSO，配成适宜的初始浓度，5倍稀释，3个稀释度。
7.测试方法把Vero-E6细胞接种于96孔培养板，置37℃、5％CO2培养，SARS病毒感染细胞后，分别加入不同稀释浓度的样品，设病毒对照、细胞对照和样品对照、每日镜下观察结果，记录CPE，并用中性红染色测定OD值，参照对照进行样品抗SARS病毒活性作用和计算和评价。
测试结果样品S01160
细胞病变法(CPE)以“-”表示细胞附着形态完整，未见明显的脱离，但不比较细胞数量的多少；以“+“表示细胞病变程度，＜25％+，25％～50％++，50％～75％ +++，＞75％ ++++。
被感染细胞保护率；通过比较病毒对照、细胞对照和样品对照的OD值，计算样品对病毒感染细胞的保护活性，保护率＞EC20初步被认为样品对被病毒感染的细胞具有一定的保护作用，有抗病毒活性。
*样品细胞毒性如果样品的细胞毒性与细胞对照比大于50(＞CC50)时，不给CPE评价和保护率计算。
实验初步结论所检样品S01160在体外筛选模型中，在100μg/ml浓度时见有弱的抗SARS病毒、保护被感染细胞的活性作用。
权利要求
1.来氟米特在制备抗SARS病毒药物上的应用。
全文摘要
本发明提供来氟米特在制备抗SARS病毒药物上的应用。经国家药物筛选中心抗SARS病毒筛选试验证明，来氟米特的活性代谢物氟塞米有抗SARS病毒、保护被感染细胞的作用，因此，来氟米特及其活性代谢物氟塞米可用于制备抗SARS病毒的药物。
文档编号A61P31/14GK1602862SQ0315148
公开日2005年4月6日 申请日期2003年9月29日 优先权日2003年9月29日
发明者肖飞 申请人:欣凯医药化工中间体(上海)有限公司
技术领域：
本发明涉及抗SARS病毒药物，具体涉及来氟米特在制备抗SARS病毒药物上的应用。
背景技术：
尽管抗病毒治疗药物的研究在近年取得了很大的进展，并且这些抗病毒药物在临床上已经广泛应用，但是，由病毒引起的各种疾病的发生率和死亡率仍然居高不下。2003年春天在我国内地和香港、台湾等地发生的非典型肺炎即是一个典型的例子，这种非典型肺炎是由冠状病毒的变种引起的，对几乎所有的抗病毒药物无效，在临床上尚无有效的特异性治疗用药。目前，市场上通常使用的抗病毒药物均是通过抑制病毒DNA、RNA的合成或者转录发挥作用，因此在这些抗病毒药物大量使用的同时，耐药性病毒菌株的产生也就不足为奇了。
来氟米特是一种合成的异噁唑类化合物，具有免疫抑制及抗增殖作用。20世纪90年代以来，在对来氟米特进行各种基础和临床研究的过程中，意外发现来氟米特兼有抗巨细胞病毒(ID50＝40～60μM)和单纯疱疹病毒(IC50≈15μM)及其他多种病毒的特性，并且这种作用机制与其他抗病毒药物有明显的不同(W.J.Waldman et al.，实验免疫抑制剂来氟米特抑制巨细胞病毒的新机制，Transplantation，68(6)814-825，1999；D.A.Knight et al.，实验免疫抑制剂来氟米特对单纯疱疹病毒的抑制作用，Transplantation，71170-174，2001)。来氟米特并不能抑制病毒DNA、RNA的复制、转录，但是来氟米特能够抑制酪酸激酶的活性，对部分病毒的包膜合成过程产生抑制作用，从而发挥抗病毒作用。目前尚未见临床方面的相关研究报道，但是Hardinger等在药物抗器官排异的研究过程中，观察到巨细胞病毒感染的病人在应用来氟米特抗排异治疗后病毒感染也消失的现象(K.L.Hardinger et al.，来氟米特替代治疗能减缓移植肾功能障碍的发生，美国移植会议，2002)。来氟米特能否通过相似的机制对SARS病毒产生抑制作用值得研究。
发明内容
本发明的目的是提供来氟米特在制备抗SARS病毒药物上的应用。
申请人于2003年7月委托国家药物筛选中心进行了抗SARS病毒筛选试验，采用来氟米特的活性代谢物氟塞米(A771726)，样品溶于培养液或DMSO，配成适宜的初始浓度，并稀释。将Vero-E6细胞接种于96孔培养板，置37℃、5％CO2培养，SARS病毒感染细胞后，分别加入不同稀释浓度的样品，设病毒对照、细胞对照和样品对照。每日镜下观察结果，记录CPE，并用中性红染色测定OD值，参照对照进行样品抗SARS病毒活性作用的计算和评价。实验结果表明来氟米特的活性代谢物氟塞米有抗SARS病毒、保护被感染细胞的作用。
具体实施例方式
实施例1来氟米特活性代谢物氟塞米的抗SARS病毒作用测试日期2003-7-17测试项目；药物抗SARS病毒活性筛选(病毒—细胞水平模型)测试原理以Vero-E6细胞作为病毒宿主细胞(易感细胞)，测试样品抵抗病毒感染细胞的作用，检测指标为细胞变性反应(CPE)以及感染细胞保护率。
测试材料和方法1.测试样品氟塞米(A771726)2.国家新药筛选中心样品号S011603.病毒株BJ-01(来源于北京军事科学院微生物流行病研究所)4.实验场所上海疾病预防和控制中心P3实验室5.测试样品提供单位欣凯医药化工中间体(上海)有限公司6.样品处理样品溶于培养液或DMSO，配成适宜的初始浓度，5倍稀释，3个稀释度。
7.测试方法把Vero-E6细胞接种于96孔培养板，置37℃、5％CO2培养，SARS病毒感染细胞后，分别加入不同稀释浓度的样品，设病毒对照、细胞对照和样品对照、每日镜下观察结果，记录CPE，并用中性红染色测定OD值，参照对照进行样品抗SARS病毒活性作用和计算和评价。
测试结果样品S01160
细胞病变法(CPE)以“-”表示细胞附着形态完整，未见明显的脱离，但不比较细胞数量的多少；以“+“表示细胞病变程度，＜25％+，25％～50％++，50％～75％ +++，＞75％ ++++。
被感染细胞保护率；通过比较病毒对照、细胞对照和样品对照的OD值，计算样品对病毒感染细胞的保护活性，保护率＞EC20初步被认为样品对被病毒感染的细胞具有一定的保护作用，有抗病毒活性。
*样品细胞毒性如果样品的细胞毒性与细胞对照比大于50(＞CC50)时，不给CPE评价和保护率计算。
实验初步结论所检样品S01160在体外筛选模型中，在100μg/ml浓度时见有弱的抗SARS病毒、保护被感染细胞的活性作用。
权利要求
1.来氟米特在制备抗SARS病毒药物上的应用。
全文摘要
本发明提供来氟米特在制备抗SARS病毒药物上的应用。经国家药物筛选中心抗SARS病毒筛选试验证明，来氟米特的活性代谢物氟塞米有抗SARS病毒、保护被感染细胞的作用，因此，来氟米特及其活性代谢物氟塞米可用于制备抗SARS病毒的药物。
文档编号A61P31/14GK1602862SQ0315148
公开日2005年4月6日 申请日期2003年9月29日 优先权日2003年9月29日
发明者肖飞 申请人:欣凯医药化工中间体(上海)有限公司
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