提高女性卵巢功能的中成药及其制作方法以及在制药中的应用的制作方法
专利名称：提高女性卵巢功能的中成药及其制作方法以及在制药中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中成药及其制作方法，特别是一种提高女性卵巢功能的中成药及其制作方法以及在制备治疗或预防女性卵巢功能低下的药中的应用。
背景技术：
女性的一生与卵巢的功能健康与否紧密相关，由于基因的作用，每位女性的卵巢在胚胎期就已形成固定数量的卵泡总数，当人体进中年后，卵泡总数随着多年的释放排卵，已逐渐减少至不能保证每月释放一个成熟卵子，所分泌的雌激素(E2)也随之下降到不能维持身体各部位的需要，因而出现各种更年期不适症状，由于人体的个体差异，各人的症状会有轻重程度的表现形式，时间先后，持续长短等诸多不同，但对于早期更年期症状明显者临床检验各项机体指标均在正常范围内，并不表现出病态，仅呈现为亚健康状态，这种状态如能及时调理，可向健康方向发展，而任其发展下去，若干年后即可对身体器官形成实质性的损伤，形成更年期的心血管疾病、骨质疏松症、老年痴呆症等无可挽回的后果。
西方国家对更年期卵巢功能衰退至今未有很好的解决方法，从上世纪30年代始倡导的外源性雌激素补充法，尽管可以减少老年疾病的发病率，但却给中年女性带来诸如子宫内膜癌、乳腺癌的高发生率，因此即使西方在使用外源性雌激素时也强调使用对象应为子宫切除后的老年妇女。
由于受到古代对解剖学研究的限制，中国传统医学对更年期综合症的产生原因缺乏全面完整的认识，仅只从“肾衰”角度去考虑，未能把各种形式的症状归结为一个病因。甚至在几千年的中医药史上对更年期诸症未能形成一个专有的病名，而是把诸多症状分散以各种治则去治疗，因此只注重改善症状而无法针对病因，且处方药味众多(以满足解决各种症状的需要)有些药味不宜长期大量服用，使用中存在诸多不便。
发明内容
本发明的目的就是为了解决上述问题，提供一种能有效营养卵巢，促使卵巢分泌内源性激素的提高女性卵巢功能的中成药。
本发明的另一目的是提出一种提高女性卵巢功能的中成药的制作方法。
本发明的再一目的是提出一种提高女性卵巢功能的中成药在制备治疗或预防女性卵巢功能低下的药中的应用。
本发明的技术解决方案一种提高女性卵巢功能的中成药，其特征在于它以枸杞子、红花、地黄为原料，其各成分的重量百分比为
枸杞子 50-70％红花20-40％地黄5-15％。
一种提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于a.先将枸杞子、红花、地黄三种原料分别干燥粉碎，目数不少于20目；b.将粉碎后的粉状原料按所规定的重量百分比称量后，加入适量的大极性提取液，再一同搅拌混合均匀，使原料中的活性成分溶解到提取液中，滤去残渣后得到本发明中成药的粗品；c.将得到的粗品进行干燥、粉碎、制剂即得本发明的中成药。
一种提高女性卵巢功能的中成药在制备治疗或预防女性卵巢功能低下的药中的应用。
本发明的中成药以天然植物为原料，经高科技方法提取植物活性成分，有效地营养卵巢，促使卵巢分泌内源性激素，经临床检验证明，服用前后的雌激素水平有统计学意义的显著提高，各种更年期症状均得以全面改善，服用者最短的在7天内即见效果。连续服用2个月后可基本消除各种症状，部分停经时间不长的患者在连续服用3个月后，先后恢复正常月经，充分表现出本发明中成药的良性作用。
具体实施例方式
本发明的中成药以枸杞子、红花、地黄为原料，其各成分的重量百分比为枸杞子 50-70％红花20-40％地黄5-15％。
本发明将枸杞的成分与红花巧妙配合，极大发挥了各自的生物活性，取得极好的疗效。
本发明中成药的制作方法如下1、先将枸杞子、红花、地黄三种原料分别干燥粉碎，目数不少于20目。
2、将粉碎后的粉状原料按所规定的重量百分比称量后，加入适量的大极性提取液，再一同搅拌混合均匀，使原料中的活性成分溶解到提取液中，滤去残渣后得到本发明中成药的粗品。
3、将得到的粗品进行干燥、粉碎、制剂即得本发明的中成药。
本发明方法中，枸杞子、红花、地黄原料粉碎的目数最好为10-30目，以便进行超声提取。本发明的大极性提取液可以是水、甲醇、乙醇或它们的任意混合液，最好选用浓度为70-80％，PH值为5.6-6.3的乙醇溶液。
本发明枸杞子、红花、地黄原料按量混合并与大极性提取液搅拌均匀后的混合物，可在静止状态下用超声振荡法、加热回流提取法或逆流萃取法，使混合物中的原料的活性成分更多的溶解到大极性提取液中。其最佳方式是将上述混合物从管中缓慢通过，管周壁设置的超声波发生器对其进行超声振荡处理，处理时间10-30分钟，使混合物中各原料的活性成分充分溶解到大极性提取液中。本发明方法的粗品干燥工序可采用高温干燥、喷雾干燥或冷冻干燥，最好为-20℃下的低温真空干燥，以保持生物活性。
本发明的机理如下，枸杞子具有滋阴补肾、调节机体整体活力的良好功效，红花具有活血通经、活化女性附件功能的作用，地黄具有滋阴强体的功效，它们三者以合适的比例配伍后，经加工提取后的活性成分产生协调互补作用，使女性卵巢、子宫及下腹部血流量增加，卵巢重量增大，内源性雌激素分泌量增多，使女性各项功能得以恢复提高。
本发明的提高女性卵巢功能的中成药对老年雌性大鼠内分泌的影响本发明的提高女性卵巢功能的中成药经动物实验表明(以中成药胶囊为例)连续应用本发明中成药胶囊，对受试大鼠垂体—肾上腺—卵巢轴具有抗衰老影响，表现为对多靶器官内分泌活动的激活，能显著提高受试大鼠血清E2、P水平，降低血清LH，对雌性大鼠的卵巢功能呈现中度雌激素影响，能明显提高老年雌性大鼠子宫系数，其中胶囊大剂量组作用表现尤为明显，并且长期使用本发明中成药胶囊未见对老年雌性大鼠垂体系数产生明显影响。此外，实验表明，本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠垂体—肾上腺—卵巢轴的影响也不同于大豆异黄酮组，长期应用大豆异黄酮虽对受试大鼠垂体、卵巢滤泡数及内膜腺体萎缩表现出具有部分抗衰老作用，但对黄体发育的反馈抑制较为显著。
实验目的通过主要药效学试验验证与临床功能主治有关的作用。
1.实验材料1.1药品与试剂大豆异黄酮(上海百嘉营养保健品有限公司批号20010601)乙烯雌酚片(上海信谊药厂，批号010401甲)本发明中成药胶囊(0.2g提取物/1.1g生药/每粒，每日4-6粒)雌二醇放射免疫分析药盒(天津九鼎医学生物工程有限公司)促黄体生成素放射免疫分析药盒(天津九鼎医学生物工程有限公司)孕酮放射免疫分析药盒(天津九鼎医学生物工程有限公司)促卵泡雌激素放射免疫分析药盒(天津九鼎医学生物工程有限公司)1.2试验仪器JA-1203上皿电子天平。上海天平仪器厂产品。称量范围0～120g，读数精度1mg。
1.3试验动物
SD大鼠，由南京中医药大学实验动物中心提供，合格证苏(动)质97003。
1.4试验条件及统计处理大鼠自由饮水，室温22±5℃。
实验数据采用t-检验法。
2.实验方法和结果取健康老年雌性大鼠(12月龄)48只，均分6组，每组8只，即(1)模型组；(2)大豆异黄酮组；(3)本发明中成药胶囊小剂量组；(4)本发明中成药胶囊中剂量组；(5)本发明中成药胶囊大剂量组。另取8只6月龄健康雌性大鼠作为(6)正常对照组。除模型组和正常对照组每天灌服蒸馏水外，其余各组每天灌胃给药，连续灌服给药10周后，取静脉血，分离血清，测定各组大鼠血清E2、P、FSH和LH水平；同时作大鼠阴道图片检查，观察大鼠性周期变化；在称取大鼠体重后，取其卵巢、子宫和垂体称重，计算各组脏器系数后，中性福尔马林固定24小时，进行病理组织学观察。各组子宫均纵剖，梯度脱水浸蜡后，立切面石蜡包埋，4μm切片，经脱蜡脱水，HF染色后用leica测微器镜检和显微摄影。实验结果如下一、本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠血清E2、P、FSH和LH水平的影响本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠血清E2、P、FSH和LH水平的影响实验组 E2P FSH LH正常组 6.5±3.2 22.9±15.1 2.3±5.2 1.4±1.6模型组 4.3±3.1 8.4±3.8 2.0±2.2 6.6±1.7大豆异黄酮组11.4±5.8*39.1±34.1*0.14±0.224.3±1.4*乙烯雌酚组 8.8±3.6* 41.3±34.5*1.5±2.8 3.8±1.7*宁心红杞胶囊11.8±5.5*41.6±27.8*0.38±0.765.5±1.4大剂量组宁心红杞胶囊6.6±5.8 47.1±43.6*1.8±2.8 3.0±1.2**中剂量组宁心红杞胶囊8.1±2.1* 50.2±52.6 1.3±1.8 3.5±2.2*小剂量组与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01实验结果表明本发明中成药胶囊能显著提高受试大鼠血清E2、P水平，降低血清LH，与模型组比较有显著性差异。
二、本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠性器官脏器系数的影响本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠性器官脏器系数的影响实验组 卵巢脏器系数子宫脏器系数垂体脏器系数正常组 0.051 0.271 0.006±0.008 ±0.141 ±0.002模型组 0.036 0.131 0.004±0.003▲▲ ±0.037▲ ±0.001大豆异黄酮组0.038 0.222 0.005±0.015 ±0.048** ±0.001乙烯雌酚组 0.031 0.287 0.013±0.005 ±0.091** ±0.007*宁心红杞胶囊大剂量组0.038 0.196 0.005±0.004 ±0.056*±0.001宁心红杞胶囊中剂量组0.033 0.169 0.004±0.006 ±0.063 ±0.001宁心红杞胶囊小剂量组0.039 0.163 0.003±0.006 ±0.059 ±0.002与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01与正常组比较▲*P＜0.05；▲▲P＜0.01实验结果表明模型组大鼠的卵巢系数和子宫系数均明显低于正常组，乙烯雌酚长期使用，可使老年大鼠垂体系数明显降低，而本发明中成药胶囊长期使用老年大鼠垂体系数未见明显影响；本发明中成药胶囊大剂量组和乙烯雌酚组均可使老年大鼠子宫系数明显提高，与模型组比较有显著差异。
三、本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠性周期的影响大鼠阴道涂片检查结果1.正常组低层细胞数正常，中层细胞偏低，中表层细胞过多，对卵巢功能呈现高度雌激素影响。
2.模型组低层细胞消失，呈现雌激素水平低下。
3.大豆异黄酮组基本同模型组。
4.乙烯雌酚组全部表层细胞，对卵巢功能呈现高度雌激素影响。
5.本发明中成药胶囊小剂量组低、中、表层细胞基本同正常组，中层细胞相对较多。对卵巢功能呈现有中度雌激素影响。
6.本发明中成药胶囊中剂量组低、中、表层细胞基本同正常组，中层细胞相对较多。对卵巢功能呈现有中度雌激素影响。
7.本发明中成药胶囊大剂量组低、中、表层细胞基本同正常组，中层细胞相对较多。对卵巢功能呈现有中度雌激素影响。
实验表明本发明中成药胶囊对雌性大鼠的卵巢功能具有中度影响，其中本发明中成药胶囊大剂组表现尤为明显。
四、本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠性器官组织学的影响1.观察指标(1)子宫子宫内膜的发育厚度，内膜腺体丰度、腺体形态结构、腺上皮雌激素反应和孕酮反应分泌状态、宫内膜间质细胞及血管发育状态、子宫平滑肌壁厚度。
(2)卵巢卵巢皮髓质发育衰老厚度、各类卵泡(原始卵泡、生长卵泡、成熟卵泡)的数量大小、滤泡腔扩张状态、卵泡内含否卵母细胞及其形态、卵丘结构、粒层细胞和卵泡膜细胞的发育状态、间质脂褐素沉积及吞噬泡沬细胞、黄体及白体的分布。
(3)垂体垂体前叶嗜酸性、嗜碱性和嫌色细胞的数量形态分布、前叶毛细血管门脉系统、后叶垂体细胞神经丝及胶质细胞形态及垂体中部结构(pars intermedia，parsdistalis)、拉各司囊。
2.结果(1)子宫及内膜①与正常组宫体前后径2.2mm±0.4对照，模型组子宫体积明显缩小，宫体前后径Leica测微器为1.8mm±0.5，子宫内膜明显变薄，腺体十分稀少、分散，不成簇状，宫腔缩小甚至闭锁，内膜腺体未见雌激素反应性透明细胞及孕酮反应性顶浆分泌现象。
②大豆异黄酮组则有轻度的子宫体积缩小2.0mm±0.6，子宫内膜中度萎缩，腺体数量明显减少或分散，腺腔小成圆筒状，无雌孕激素反应细胞。
③乙烯雌酚组宫体前后径与正常组相差不明显2.2mm±0.5，子宫内膜萎缩程度轻，个别大鼠呈轻度增生，但宫颈鳞化及炎症较明显。
④药物(本发明中成药胶囊)组子宫萎缩不明显，小、中和大剂量组宫体前后径分别为2.1～2.3mm±0.4～0.7，子宫内膜腺体多为轻度萎缩，个别呈中度萎缩，但中大剂量组也有宫内膜增生程度正常组者。腺体数量增多，腺体变长，管腔扩张、迂曲，内膜衬复层呈乳头状增生，可见透亮细胞及项浆分泌现象，偶见内膜间质有性激素样细胞伴黄素化。
(2)卵巢①正常组卵巢平均有3～5个滤泡结构，其中可见卵细胞(5/8枚)，有黄体组织及其周围的粒层卵泡膜细胞。
②模型组卵巢多数平均少于3个滤泡结构，甚至全卵巢未见各类滤泡，滤泡中卵细胞很少(2/8枚)。卵细胞呈退行性变，胞浆液化溶解，核仁呈嗜酸性变，黄体较正常组增加，粒层卵泡膜细胞明显减少。
③大豆异黄酮组卵巢滤泡数平均少于3～5个，滤泡腔扩张，充满浆液，滤泡上皮增生，也可见少数卵细胞(2～3/8枚)，黄体数量明显减少。
④乙烯雌酚组卵巢滤泡数量明显减少，少于3个滤泡，但偶见卵细胞，滤泡周围有脂褐素细胞沉积，黄体很少，体积变小。
⑤本发明中成药胶囊组小剂量组滤泡数增加至3～5个，滤泡腔扩张，滤泡细胞层次增多，滤泡内卵细胞数平均4/8枚，卵丘及卵细胞形态结构良好。而中大剂量组滤泡数量平均减少至3枚，但卵细胞数及形态均正常。各剂量组的黄体数量均明显增多且体积变大，间质中粒层卵泡膜细胞增生。
(3)垂体①正常组垂体嗜酸性细胞胞浆红染明显，以Leica显微测微器24×36框内平均计数百分率为30％～10％，嗜碱性细胞则约为30％～20％，多沿垂体毛细血管旁门脉边缘排列。垂体后叶的垂体细胞短梭状，拉各司囊裂隙状。
②模型组垂体的嗜酸及嗜碱细胞均有减少，测微器框计数百分率均小于20％以下，嫌色细胞数量增加，各类细胞的胞浆呈轻度退行性变，形态较模糊，门脉小血管边缘不整呈贫血状。垂体后叶萎缩。
③大豆异黄酮组垂体前叶嗜酸及嗜碱细胞数量以上述计量法约30％～10％之间，也有轻度的胞浆行性变，少数垂体门脉呈充血。
④乙烯雌酚组垂体前叶嗜酸和嗜碱细胞减少，计量显示小于20％，嫌色细胞增加且有退行性变。垂体后叶垂体细胞大部消失，神经丝间质水肿呈空泡状。
⑤本发明中成药胶囊组各剂量组垂体前叶嗜酸和嗜碱细胞数量均接近正常，约30％～10％之间，且细胞形态正常，沿门脉血管边缘分布。小血管血窦充血明显，扩张丰富。垂体后叶的垂体细胞体积较肥胖，毛细血管丛状增加，拉各司囊正常扩张。
3.小结(1)衰老模型组SD大鼠成功显示了垂体—肾上腺—卵巢内分泌轴的相应器官形态、生理、代谢等系列衰老改变。
(2)大豆异黄酮具有类孕酮作用，对垂体、卵巢滤泡数及内膜腺体萎缩的抗衰老表现出部分作用，但对黄体发育的反馈抑制显著。
(3)乙烯雌酚有较明显的垂体—肾上腺—卵巢轴中下游阶段(子宫等)的形态和内分泌代谢的激活影响。即对子宫的抗衰老影响更明显，但有促内膜腺体的活跃增生副作用。
(4)本发明中成药胶囊小中大剂量组的剂量相关比例效应关系不甚明显，但对垂体—肾上腺—卵巢轴的上游和下游全程阶段及雌激素，甚至垂体后叶的抗利尿加素及催产素动情活动均有抗衰老影响，表现为多靶器官的内分泌活动激活影响。
此外，实验表明，本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠垂体—肾上腺—卵巢轴的影响也不同于大豆异黄酮组，长期应用大豆异黄酮虽对受试大鼠垂体、卵巢滤泡数及内膜腺体萎缩表现出具有部分抗衰老作用，但对黄体发育的反馈抑制较为显著。
本发明中成药胶囊连续应用10周，能显著提高受试大鼠血清E2、P水平，降低血清LH，与模型组比较有显著性差异；阴道涂片检查可见，模型组大鼠低层细胞消失，呈现雌激素水平低下。乙烯雌酚组大鼠可见全部表层细胞，对卵巢功能呈现高度雌激素影响。本发明中成药胶囊对雌性大鼠的卵巢功能呈现中度雌激素影响，低、中、表层细胞基本同正常组，中层细胞相对较多。其中本发明中成药胶囊大剂组表现尤为明显。乙烯雌酚长期使用，可使老年大鼠垂体系数明显降低，表明对脑垂体有抑制作用，而本发明中成药胶囊长期使用未见对老年雌性大鼠垂体系数产生明显影响；本发明中成药胶囊大剂量组和乙烯雌酚组均可使老年大鼠子宫系数明显提高，与模型组比较有显著差异。受试老年雌生大鼠器官组织学检查结果表明衰老模型组SD大鼠成功显示了垂体—肾上腺—卵巢内分泌轴的相应器官形态、生理、代谢等系列衰老改变；大豆异黄酮具有类孕酮作用，对垂体、卵巢滤泡数及内膜腺体萎缩的抗衰老表现出部分作用，但对黄体发育的反馈抑制显著；乙烯雌酚有较明显的垂体—肾上腺—卵巢轴中下游阶段(子宫等)的形态和内分泌代谢的激活影响。即对子宫的抗衰老影响更明显，但有促内膜腺体的活跃增生副作用；本发明中成药胶囊小、中、大剂量组的剂量相关比例效应关系不甚明显，但对垂体—肾上腺—卵巢轴的上游和下游全程阶段及雌激素，甚至垂体后叶的抗利尿加素及催产素动情活动均有抗衰老影响，表现为多靶器官的内分泌活动激活影响。
本发明的提高女性卵巢功能的中成药对围绝经期及绝经期综合征的临床疗效本发明的提高女性卵巢功能的中成药(以中成药胶囊为例)的临床实验目的观察长期服用本发明纯中药制剂胶囊，对围绝经期、绝经后妇女症状、子宫内膜、性激素水平的影响。方法绝经后妇女26名，未绝经妇女14名，服用宁心红杞胶囊每日2次，每次2片，持续3个月以上。观察其症状、阴道流血、子宫内膜厚度、阴道脱落细胞及女性性激素水平的变化。结果1、服药期间无阴道流血。2、症状好转。3、子宫内膜厚度无明显变化。4、阴道脱落细胞伊红指数上升。5、女性激素稳定在一定水平。6、生活质量有了改变。结论纯中药制剂的本发明中成药胶囊可替代目前有争议的激素替代治疗(HRT)。
本发明中成药胶囊系纯中药制剂，主要成分红花，枸杞子。治疗围绝经期及绝经后妇女综合征，可明显改善症状。绝经后长期服用，不增加子宫内膜厚度，不引起阴道流血，稳定性激素水平，改善女性生殖道功能。经观察，长期服用本发明中成药胶囊是安全的。
1对象及分组服用本发明中成药胶囊且符合下列条件者自愿参加，参加者共计40名。绝经组(26名)①身体健康已绝经妇女，年龄不超过60岁，②绝经时间不超过5年，③半年内未曾接受其他相关雌激素替代疗法(包括中药、西药)。未绝经组(14名)①年龄不低于40岁，②无合并其他内分泌疾病，第③项同前。参加本研究实验者为不间断服药达3个月以上者。
2方法2.1口服本发明中成药胶囊，每日2次，每次2片，早晚间隔12小时，空腹温开水送下。
2.2阴道流血观察询问病史，服药期间有无阴道流血，流血量多少。
2.3症状变化参照Kupperman评分法，结合中国人体加以改良，各种症状评分，按其轻重程度分别用0、1、2、3乘以基本分，然后合计总分，满分为63分。10分以下为轻度，11～20分为轻中度，21～30分为中度，31分以上为重度。
2.4子宫内膜厚度测量服药后经阴道超声观察子宫内膜厚度。取子宫体纵切面，测量子宫内膜最宽部分厚度(日本阿洛卡1000型黑白超声诊断仪，阴道探头频率5.5MHz)。
2.5女性激素测定空腹查血清性激素E2、P、FSH、LH值，各激素放射免疫分析试剂盒由天津九鼎医学生物工程有限公司提供。
2.6阴道脱落细胞检查用竹制刮片，取阴道侧穹窿脱落细胞，95％乙醇固定，巴氏染色后进行细胞分类，查底层细胞/中层细胞/表层细胞比值及角化指数。
2.7药物副作用询问病史，有无胃部不适、头昏等症状。3结果3.1症状变化服药最短3个月，最长48个月。服药后无胃部不适等症状(注有1名服药者称饭后服药胃部感不适，建议改为饭前服用后症状消失)。40名服药者中，2名服药后症状无明显变化，余38例症状均有不同程度改善，总有效率95％。根据Kupperman评分法，服药前人均评分18.6，服药后人均评分7.3。两组间有显著性差异(x2检验P＜0.001)。见表1表1 服药前后症状评分服药评分轻度 轻中度中度 重度人均评分服药前人数 1015105 18.6服药后人数 28120 0 7.33.2绝经组子宫内膜变化 见表2表2 阴道超声子宫内膜厚度测量服药时间(月)3～6 7～9 10～1212以上服药人数17 11 8 4子宫内膜厚度＜5mm＜5mm＜5mm ＜5mm3.3绝经组服药后阴道脱落细胞检查服药期间，绝经组均感阴道分泌物增加，通过阴道脱落细胞检查，显示绝经5年者表层细胞仍占一定比例。见表3表3 绝经组阴道脱落细胞伊红指数伊红指数 ＜10％11％～20％21％～50％＞50％绝经组人数2 2 1753.4绝经组女性激素的测定
3.4.1性激素E2(雌二醇)的测定及分布E2的测定及分布(单位pg/ml)分组 ＜10 11～30 31～50 ＞50 最低值 最高值 绝经期实验室参考值人数 2 13 3 8 ＜5 400 10～403.4.2性激素P(黄体素)的测定及分布P的测定及分布(单位ng/ml)分组 0～1 1.1～10 ＞10 最低值 最高值 绝经期实验室参考值人数 9 12 5 0.3 25 0～0.83.4.3性激素FSH(促卵泡生成激素)的测定及分布FSH的测定及分布(单位miu/ml)分组 ＜20 21～25 26～40 最低值 最高值 绝经期实验室参考值人数 9 10 72 9.5 25.8～1343.4.4性激素LH(促黄体生成激素)的测定及分布LH的测定及分布(单位miu/ml)分组 ＜10 11～20 21～30 最低值 最高值 绝经期实验室参考值人数 3 6 17 ＜5 30 7.7～58.54结论4.1所有参加实验者无论年龄大小(40-60岁)和用药时间长短(3-48个月)，未有一例出现阴道流血，子宫内膜也均为正常范围内，这说明本发明中成药胶囊的安全性是非常可靠的。
4.2参加实验者的围绝经期症状，按照改良Kupperman法评分统计后显示，用药前后症状改善具有统计学意义。
4.3所有被检测者的FSH值最高者未超过40miu/ml，其中近一半人仅在25以下，远低于临床围绝经期常见的高水平FSH现象。表明本发明中成药胶囊对卵巢的作用不是通过一味提高垂体分泌FSH来刺激卵巢产生作用。
4.4参加实验者的各项激素水平在长期用药后能够始终保持合适水平，且与脱落细胞检察结果相吻合。
本发明中成药胶囊的长期应用结果表明，该产品所具有的疗效高、安全性好等特点，在改善围绝经期症状方面具有明显的临床应用价值，可以用于替代目前有争议的激素替代治疗(HRT)。
实施例1取600千克枸杞子、300千克红花和100千克地黄，分别经粉碎机粉碎得到它们的粉状物，目数控制在80目。将上述粉状枸杞子、红花和地黄与20000千克的浓度为70％、PH值为6的乙醇溶液混合，并在搅拌器内搅拌均匀，然后经管道缓慢流入容器，在该管道的的管壁上设有超声波发生器，它对管道内缓慢流动的混合物进行超声振荡破碎处理，处理时间为10分钟，使原料细胞中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。将超声处理后的混合物溶液进行过滤，去除残渣，得到约20000千克的本发明中成药的粗品溶液。将上述粗品溶液置于乙醇回收器和真空干燥箱中浓缩后取出，得到约200千克的本发明中成药的干浸膏，最后将该干浸膏经制剂加工处理即得到片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或散剂的中成药。
实施例2取500千克枸杞子、350千克红花和150千克地黄，分别经粉碎机粉碎得到它们的粉状物，目数控制在20目。将上述粉状枸杞子、红花和地黄与10000千克的浓度为75％、PH值为6.3的乙醇溶液混合，并在搅拌器内搅拌均匀，然后经加热回流12小时，使原料细胞中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。滤除残渣，得到约5000千克的本发明中成药的粗品溶液。将上述粗品溶液置于真空干燥器中，在-20℃条件下进行低温真空干燥，干燥48小时后取出，得到约200千克的本发明中成药的干浸膏，最后将该干浸膏经制剂加工处理即得到片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或散剂的中成药。
实施例3取700千克枸杞子、250千克红花和50千克地黄，分别经粉碎机粉碎得到它们的粉状物，目数控制在20目。将上述粉状枸杞子、红花和地黄与15000千克的浓度为70％、PH值为5.6的乙醇溶液混合，并在搅拌器内搅拌均匀，然后经逆流萃取48小时，使原料中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。滤除残渣，得到约5000千克的本发明中成药的粗品溶液。将上述粗品溶液置于真空干燥器中，在-20℃条件下进行低温真空干燥，干燥48小时后取出，得到约200千克的本发明中成药的干浸膏，最后将该干浸膏经制剂加工处理即得到片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或散剂的中成药。
实施例4取700千克枸杞子、200千克红花和100千克地黄，分别经粉碎机粉碎得到它们的粉状物，目数控制在20目。将上述粉状枸杞子、红花和地黄与12000千克的浓度为80％的乙醇溶液混合，并在搅拌器内搅拌均匀，然后经萃取器萃取48小时，使原料中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。滤除残渣，得到约8000千克的本发明中成药的粗品溶液。将上述粗品溶液置于真空干燥器中，在-20℃条件下进行低温真空干燥，干燥48小时后取出，得到约200千克的本发明中成药的干浸膏，最后将该干浸膏经制剂加工处理即得到片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或散剂的中成药。
实施例5取650千克枸杞子、250千克红花和100千克地黄，分别经粉碎机粉碎得到它们的粉状物，目数控制在20目。将上述粉状枸杞子、红花和地黄与8000千克的浓度为75％的乙醇溶液混合，并在搅拌器内搅拌均匀，然后经逆流萃取48小时，使原料中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。滤除残渣，得到约4000千克的本发明中成药的粗品溶液。将上述粗品溶液置于真空干燥器中，在-20℃条件下进行低温真空干燥，干燥48小时后取出，得到约200千克的本发明中成药的干浸膏，最后将该干浸膏经制剂加工处理即得到片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或散剂的中成药。
实施例6取550千克枸杞子、400千克红花和50千克地黄，分别经粉碎机粉碎得到它们的粉状物，目数控制在20目。将上述粉状枸杞子、红花和地黄与10000千克的浓度为70％、PH值为6.2的乙醇溶液混合，并在搅拌器内搅拌均匀，然后经加热回流12小时，使原料细胞中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。滤除残渣，得到约5000千克的本发明中成药的粗品溶液。将上述粗品溶液置于真空干燥器中，在-20℃条件下进行低温真空干燥，干燥48小时后取出，得到约200千克的本发明中成药的干浸膏，最后将该干浸膏经制剂加工处理即得到片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或散剂的中成药。
权利要求
1.一种提高女性卵巢功能的中成药，其特征在于它以枸杞子、红花、地黄为原料，其各成分的重量百分比为枸杞子50-70％红花 20-40％地黄 5-15％。
2.一种提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于a.先将枸杞子、红花、地黄三种原料分别干燥粉碎，目数不少于20目；b.将粉碎后的粉状原料按所规定的重量百分比称量后，加入适量的大极性提取液，再一同搅拌混合均匀，使原料中的活性成分溶解到提取液中，滤去残渣后得到本发明中成药的粗品；c.将得到的粗品进行干燥、粉碎、制剂即得本发明的中成药。
3.按权利要求2所述的提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于所述枸杞子、红花、地黄原料粉碎的目数为10-30目。
4.按权利要求2所述的提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于所述大极性提取液或是水，或是甲醇，或是乙醇，或是它们的任意混合液；所述大极性提取液选用浓度为70-80％，PH值为5.6-6.3的乙醇溶液。
5.按权利要求2所述的提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于所述枸杞子、红花、地黄原料按量混合并与大极性提取液搅拌均匀后的混合物，在静止状态下用超声振荡法、加热回流提取法或逆流萃取法，使混合物中的原料的活性成分更多的溶解到大极性提取液中。
6.按权利要求2所述的提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于所述枸杞子、红花、地黄原料按量混合并与大极性提取液搅拌均匀后的混合物从管中缓慢通过，管周壁设置的超声波发生器对其进行超声振荡处理，处理时间10-30分钟，使混合物中各原料的活性成分充分溶解到大极性提取液中。
7.按权利要求2所述的提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于所述粗品的干燥工序采用高温干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。
8.按权利要求7所述的提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于所述粗品干燥工序采用-20℃下的低温真空干燥，以保持生物活性。
9.按权利要求2所述的提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于在得到的粗品进行干燥前，先进行精制处理，以进一步去除杂质。
10.一种提高女性卵巢功能的中成药在制备治疗或预防女性卵巢功能低下的药中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种提高女性卵巢功能的中成药及其制作方法以及在制备治疗或预防女性卵巢功能低下的药中的应用，它以枸杞子、红花、地黄为原料，先将枸杞子、红花、地黄三种原料分别干燥粉碎，目数不少于20目。再将粉碎后的粉状原料按所规定的重量百分比称量后，加入适量的大极性提取液，再一同搅拌混合均匀，使原料中的活性成分溶解到提取液中，滤去残渣后得到本发明中成药的粗品。将得到的粗品进行干燥、粉碎、制剂即得本发明的中成药。本发明的中成药以天然植物为原料，经高科技方法提取植物活性成分，有效地营养卵巢，促使卵巢分泌内源性激素，经临床检验证明，各种更年期症状均得以全面改善，充分表现出本发明中成药的良性作用。
文档编号A61P15/00GK1519016SQ03152889
公开日2004年8月11日 申请日期2003年9月1日 优先权日2003年9月1日
发明者吕晔, 马红, 吕 晔 申请人:江苏省中国科学院植物研究所, 南京美福天然药物科技有限公司, 吕晔, 马红, 肖鹏飞, 万学锋
技术领域：
本发明涉及一种中成药及其制作方法，特别是一种提高女性卵巢功能的中成药及其制作方法以及在制备治疗或预防女性卵巢功能低下的药中的应用。
背景技术：
女性的一生与卵巢的功能健康与否紧密相关，由于基因的作用，每位女性的卵巢在胚胎期就已形成固定数量的卵泡总数，当人体进中年后，卵泡总数随着多年的释放排卵，已逐渐减少至不能保证每月释放一个成熟卵子，所分泌的雌激素(E2)也随之下降到不能维持身体各部位的需要，因而出现各种更年期不适症状，由于人体的个体差异，各人的症状会有轻重程度的表现形式，时间先后，持续长短等诸多不同，但对于早期更年期症状明显者临床检验各项机体指标均在正常范围内，并不表现出病态，仅呈现为亚健康状态，这种状态如能及时调理，可向健康方向发展，而任其发展下去，若干年后即可对身体器官形成实质性的损伤，形成更年期的心血管疾病、骨质疏松症、老年痴呆症等无可挽回的后果。
西方国家对更年期卵巢功能衰退至今未有很好的解决方法，从上世纪30年代始倡导的外源性雌激素补充法，尽管可以减少老年疾病的发病率，但却给中年女性带来诸如子宫内膜癌、乳腺癌的高发生率，因此即使西方在使用外源性雌激素时也强调使用对象应为子宫切除后的老年妇女。
由于受到古代对解剖学研究的限制，中国传统医学对更年期综合症的产生原因缺乏全面完整的认识，仅只从“肾衰”角度去考虑，未能把各种形式的症状归结为一个病因。甚至在几千年的中医药史上对更年期诸症未能形成一个专有的病名，而是把诸多症状分散以各种治则去治疗，因此只注重改善症状而无法针对病因，且处方药味众多(以满足解决各种症状的需要)有些药味不宜长期大量服用，使用中存在诸多不便。
发明内容
本发明的目的就是为了解决上述问题，提供一种能有效营养卵巢，促使卵巢分泌内源性激素的提高女性卵巢功能的中成药。
本发明的另一目的是提出一种提高女性卵巢功能的中成药的制作方法。
本发明的再一目的是提出一种提高女性卵巢功能的中成药在制备治疗或预防女性卵巢功能低下的药中的应用。
本发明的技术解决方案一种提高女性卵巢功能的中成药，其特征在于它以枸杞子、红花、地黄为原料，其各成分的重量百分比为
枸杞子 50-70％红花20-40％地黄5-15％。
一种提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于a.先将枸杞子、红花、地黄三种原料分别干燥粉碎，目数不少于20目；b.将粉碎后的粉状原料按所规定的重量百分比称量后，加入适量的大极性提取液，再一同搅拌混合均匀，使原料中的活性成分溶解到提取液中，滤去残渣后得到本发明中成药的粗品；c.将得到的粗品进行干燥、粉碎、制剂即得本发明的中成药。
一种提高女性卵巢功能的中成药在制备治疗或预防女性卵巢功能低下的药中的应用。
本发明的中成药以天然植物为原料，经高科技方法提取植物活性成分，有效地营养卵巢，促使卵巢分泌内源性激素，经临床检验证明，服用前后的雌激素水平有统计学意义的显著提高，各种更年期症状均得以全面改善，服用者最短的在7天内即见效果。连续服用2个月后可基本消除各种症状，部分停经时间不长的患者在连续服用3个月后，先后恢复正常月经，充分表现出本发明中成药的良性作用。
具体实施例方式
本发明的中成药以枸杞子、红花、地黄为原料，其各成分的重量百分比为枸杞子 50-70％红花20-40％地黄5-15％。
本发明将枸杞的成分与红花巧妙配合，极大发挥了各自的生物活性，取得极好的疗效。
本发明中成药的制作方法如下1、先将枸杞子、红花、地黄三种原料分别干燥粉碎，目数不少于20目。
2、将粉碎后的粉状原料按所规定的重量百分比称量后，加入适量的大极性提取液，再一同搅拌混合均匀，使原料中的活性成分溶解到提取液中，滤去残渣后得到本发明中成药的粗品。
3、将得到的粗品进行干燥、粉碎、制剂即得本发明的中成药。
本发明方法中，枸杞子、红花、地黄原料粉碎的目数最好为10-30目，以便进行超声提取。本发明的大极性提取液可以是水、甲醇、乙醇或它们的任意混合液，最好选用浓度为70-80％，PH值为5.6-6.3的乙醇溶液。
本发明枸杞子、红花、地黄原料按量混合并与大极性提取液搅拌均匀后的混合物，可在静止状态下用超声振荡法、加热回流提取法或逆流萃取法，使混合物中的原料的活性成分更多的溶解到大极性提取液中。其最佳方式是将上述混合物从管中缓慢通过，管周壁设置的超声波发生器对其进行超声振荡处理，处理时间10-30分钟，使混合物中各原料的活性成分充分溶解到大极性提取液中。本发明方法的粗品干燥工序可采用高温干燥、喷雾干燥或冷冻干燥，最好为-20℃下的低温真空干燥，以保持生物活性。
本发明的机理如下，枸杞子具有滋阴补肾、调节机体整体活力的良好功效，红花具有活血通经、活化女性附件功能的作用，地黄具有滋阴强体的功效，它们三者以合适的比例配伍后，经加工提取后的活性成分产生协调互补作用，使女性卵巢、子宫及下腹部血流量增加，卵巢重量增大，内源性雌激素分泌量增多，使女性各项功能得以恢复提高。
本发明的提高女性卵巢功能的中成药对老年雌性大鼠内分泌的影响本发明的提高女性卵巢功能的中成药经动物实验表明(以中成药胶囊为例)连续应用本发明中成药胶囊，对受试大鼠垂体—肾上腺—卵巢轴具有抗衰老影响，表现为对多靶器官内分泌活动的激活，能显著提高受试大鼠血清E2、P水平，降低血清LH，对雌性大鼠的卵巢功能呈现中度雌激素影响，能明显提高老年雌性大鼠子宫系数，其中胶囊大剂量组作用表现尤为明显，并且长期使用本发明中成药胶囊未见对老年雌性大鼠垂体系数产生明显影响。此外，实验表明，本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠垂体—肾上腺—卵巢轴的影响也不同于大豆异黄酮组，长期应用大豆异黄酮虽对受试大鼠垂体、卵巢滤泡数及内膜腺体萎缩表现出具有部分抗衰老作用，但对黄体发育的反馈抑制较为显著。
实验目的通过主要药效学试验验证与临床功能主治有关的作用。
1.实验材料1.1药品与试剂大豆异黄酮(上海百嘉营养保健品有限公司批号20010601)乙烯雌酚片(上海信谊药厂，批号010401甲)本发明中成药胶囊(0.2g提取物/1.1g生药/每粒，每日4-6粒)雌二醇放射免疫分析药盒(天津九鼎医学生物工程有限公司)促黄体生成素放射免疫分析药盒(天津九鼎医学生物工程有限公司)孕酮放射免疫分析药盒(天津九鼎医学生物工程有限公司)促卵泡雌激素放射免疫分析药盒(天津九鼎医学生物工程有限公司)1.2试验仪器JA-1203上皿电子天平。上海天平仪器厂产品。称量范围0～120g，读数精度1mg。
1.3试验动物
SD大鼠，由南京中医药大学实验动物中心提供，合格证苏(动)质97003。
1.4试验条件及统计处理大鼠自由饮水，室温22±5℃。
实验数据采用t-检验法。
2.实验方法和结果取健康老年雌性大鼠(12月龄)48只，均分6组，每组8只，即(1)模型组；(2)大豆异黄酮组；(3)本发明中成药胶囊小剂量组；(4)本发明中成药胶囊中剂量组；(5)本发明中成药胶囊大剂量组。另取8只6月龄健康雌性大鼠作为(6)正常对照组。除模型组和正常对照组每天灌服蒸馏水外，其余各组每天灌胃给药，连续灌服给药10周后，取静脉血，分离血清，测定各组大鼠血清E2、P、FSH和LH水平；同时作大鼠阴道图片检查，观察大鼠性周期变化；在称取大鼠体重后，取其卵巢、子宫和垂体称重，计算各组脏器系数后，中性福尔马林固定24小时，进行病理组织学观察。各组子宫均纵剖，梯度脱水浸蜡后，立切面石蜡包埋，4μm切片，经脱蜡脱水，HF染色后用leica测微器镜检和显微摄影。实验结果如下一、本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠血清E2、P、FSH和LH水平的影响本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠血清E2、P、FSH和LH水平的影响实验组 E2P FSH LH正常组 6.5±3.2 22.9±15.1 2.3±5.2 1.4±1.6模型组 4.3±3.1 8.4±3.8 2.0±2.2 6.6±1.7大豆异黄酮组11.4±5.8*39.1±34.1*0.14±0.224.3±1.4*乙烯雌酚组 8.8±3.6* 41.3±34.5*1.5±2.8 3.8±1.7*宁心红杞胶囊11.8±5.5*41.6±27.8*0.38±0.765.5±1.4大剂量组宁心红杞胶囊6.6±5.8 47.1±43.6*1.8±2.8 3.0±1.2**中剂量组宁心红杞胶囊8.1±2.1* 50.2±52.6 1.3±1.8 3.5±2.2*小剂量组与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01实验结果表明本发明中成药胶囊能显著提高受试大鼠血清E2、P水平，降低血清LH，与模型组比较有显著性差异。
二、本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠性器官脏器系数的影响本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠性器官脏器系数的影响实验组 卵巢脏器系数子宫脏器系数垂体脏器系数正常组 0.051 0.271 0.006±0.008 ±0.141 ±0.002模型组 0.036 0.131 0.004±0.003▲▲ ±0.037▲ ±0.001大豆异黄酮组0.038 0.222 0.005±0.015 ±0.048** ±0.001乙烯雌酚组 0.031 0.287 0.013±0.005 ±0.091** ±0.007*宁心红杞胶囊大剂量组0.038 0.196 0.005±0.004 ±0.056*±0.001宁心红杞胶囊中剂量组0.033 0.169 0.004±0.006 ±0.063 ±0.001宁心红杞胶囊小剂量组0.039 0.163 0.003±0.006 ±0.059 ±0.002与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01与正常组比较▲*P＜0.05；▲▲P＜0.01实验结果表明模型组大鼠的卵巢系数和子宫系数均明显低于正常组，乙烯雌酚长期使用，可使老年大鼠垂体系数明显降低，而本发明中成药胶囊长期使用老年大鼠垂体系数未见明显影响；本发明中成药胶囊大剂量组和乙烯雌酚组均可使老年大鼠子宫系数明显提高，与模型组比较有显著差异。
三、本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠性周期的影响大鼠阴道涂片检查结果1.正常组低层细胞数正常，中层细胞偏低，中表层细胞过多，对卵巢功能呈现高度雌激素影响。
2.模型组低层细胞消失，呈现雌激素水平低下。
3.大豆异黄酮组基本同模型组。
4.乙烯雌酚组全部表层细胞，对卵巢功能呈现高度雌激素影响。
5.本发明中成药胶囊小剂量组低、中、表层细胞基本同正常组，中层细胞相对较多。对卵巢功能呈现有中度雌激素影响。
6.本发明中成药胶囊中剂量组低、中、表层细胞基本同正常组，中层细胞相对较多。对卵巢功能呈现有中度雌激素影响。
7.本发明中成药胶囊大剂量组低、中、表层细胞基本同正常组，中层细胞相对较多。对卵巢功能呈现有中度雌激素影响。
实验表明本发明中成药胶囊对雌性大鼠的卵巢功能具有中度影响，其中本发明中成药胶囊大剂组表现尤为明显。
四、本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠性器官组织学的影响1.观察指标(1)子宫子宫内膜的发育厚度，内膜腺体丰度、腺体形态结构、腺上皮雌激素反应和孕酮反应分泌状态、宫内膜间质细胞及血管发育状态、子宫平滑肌壁厚度。
(2)卵巢卵巢皮髓质发育衰老厚度、各类卵泡(原始卵泡、生长卵泡、成熟卵泡)的数量大小、滤泡腔扩张状态、卵泡内含否卵母细胞及其形态、卵丘结构、粒层细胞和卵泡膜细胞的发育状态、间质脂褐素沉积及吞噬泡沬细胞、黄体及白体的分布。
(3)垂体垂体前叶嗜酸性、嗜碱性和嫌色细胞的数量形态分布、前叶毛细血管门脉系统、后叶垂体细胞神经丝及胶质细胞形态及垂体中部结构(pars intermedia，parsdistalis)、拉各司囊。
2.结果(1)子宫及内膜①与正常组宫体前后径2.2mm±0.4对照，模型组子宫体积明显缩小，宫体前后径Leica测微器为1.8mm±0.5，子宫内膜明显变薄，腺体十分稀少、分散，不成簇状，宫腔缩小甚至闭锁，内膜腺体未见雌激素反应性透明细胞及孕酮反应性顶浆分泌现象。
②大豆异黄酮组则有轻度的子宫体积缩小2.0mm±0.6，子宫内膜中度萎缩，腺体数量明显减少或分散，腺腔小成圆筒状，无雌孕激素反应细胞。
③乙烯雌酚组宫体前后径与正常组相差不明显2.2mm±0.5，子宫内膜萎缩程度轻，个别大鼠呈轻度增生，但宫颈鳞化及炎症较明显。
④药物(本发明中成药胶囊)组子宫萎缩不明显，小、中和大剂量组宫体前后径分别为2.1～2.3mm±0.4～0.7，子宫内膜腺体多为轻度萎缩，个别呈中度萎缩，但中大剂量组也有宫内膜增生程度正常组者。腺体数量增多，腺体变长，管腔扩张、迂曲，内膜衬复层呈乳头状增生，可见透亮细胞及项浆分泌现象，偶见内膜间质有性激素样细胞伴黄素化。
(2)卵巢①正常组卵巢平均有3～5个滤泡结构，其中可见卵细胞(5/8枚)，有黄体组织及其周围的粒层卵泡膜细胞。
②模型组卵巢多数平均少于3个滤泡结构，甚至全卵巢未见各类滤泡，滤泡中卵细胞很少(2/8枚)。卵细胞呈退行性变，胞浆液化溶解，核仁呈嗜酸性变，黄体较正常组增加，粒层卵泡膜细胞明显减少。
③大豆异黄酮组卵巢滤泡数平均少于3～5个，滤泡腔扩张，充满浆液，滤泡上皮增生，也可见少数卵细胞(2～3/8枚)，黄体数量明显减少。
④乙烯雌酚组卵巢滤泡数量明显减少，少于3个滤泡，但偶见卵细胞，滤泡周围有脂褐素细胞沉积，黄体很少，体积变小。
⑤本发明中成药胶囊组小剂量组滤泡数增加至3～5个，滤泡腔扩张，滤泡细胞层次增多，滤泡内卵细胞数平均4/8枚，卵丘及卵细胞形态结构良好。而中大剂量组滤泡数量平均减少至3枚，但卵细胞数及形态均正常。各剂量组的黄体数量均明显增多且体积变大，间质中粒层卵泡膜细胞增生。
(3)垂体①正常组垂体嗜酸性细胞胞浆红染明显，以Leica显微测微器24×36框内平均计数百分率为30％～10％，嗜碱性细胞则约为30％～20％，多沿垂体毛细血管旁门脉边缘排列。垂体后叶的垂体细胞短梭状，拉各司囊裂隙状。
②模型组垂体的嗜酸及嗜碱细胞均有减少，测微器框计数百分率均小于20％以下，嫌色细胞数量增加，各类细胞的胞浆呈轻度退行性变，形态较模糊，门脉小血管边缘不整呈贫血状。垂体后叶萎缩。
③大豆异黄酮组垂体前叶嗜酸及嗜碱细胞数量以上述计量法约30％～10％之间，也有轻度的胞浆行性变，少数垂体门脉呈充血。
④乙烯雌酚组垂体前叶嗜酸和嗜碱细胞减少，计量显示小于20％，嫌色细胞增加且有退行性变。垂体后叶垂体细胞大部消失，神经丝间质水肿呈空泡状。
⑤本发明中成药胶囊组各剂量组垂体前叶嗜酸和嗜碱细胞数量均接近正常，约30％～10％之间，且细胞形态正常，沿门脉血管边缘分布。小血管血窦充血明显，扩张丰富。垂体后叶的垂体细胞体积较肥胖，毛细血管丛状增加，拉各司囊正常扩张。
3.小结(1)衰老模型组SD大鼠成功显示了垂体—肾上腺—卵巢内分泌轴的相应器官形态、生理、代谢等系列衰老改变。
(2)大豆异黄酮具有类孕酮作用，对垂体、卵巢滤泡数及内膜腺体萎缩的抗衰老表现出部分作用，但对黄体发育的反馈抑制显著。
(3)乙烯雌酚有较明显的垂体—肾上腺—卵巢轴中下游阶段(子宫等)的形态和内分泌代谢的激活影响。即对子宫的抗衰老影响更明显，但有促内膜腺体的活跃增生副作用。
(4)本发明中成药胶囊小中大剂量组的剂量相关比例效应关系不甚明显，但对垂体—肾上腺—卵巢轴的上游和下游全程阶段及雌激素，甚至垂体后叶的抗利尿加素及催产素动情活动均有抗衰老影响，表现为多靶器官的内分泌活动激活影响。
此外，实验表明，本发明中成药胶囊对老年雌性大鼠垂体—肾上腺—卵巢轴的影响也不同于大豆异黄酮组，长期应用大豆异黄酮虽对受试大鼠垂体、卵巢滤泡数及内膜腺体萎缩表现出具有部分抗衰老作用，但对黄体发育的反馈抑制较为显著。
本发明中成药胶囊连续应用10周，能显著提高受试大鼠血清E2、P水平，降低血清LH，与模型组比较有显著性差异；阴道涂片检查可见，模型组大鼠低层细胞消失，呈现雌激素水平低下。乙烯雌酚组大鼠可见全部表层细胞，对卵巢功能呈现高度雌激素影响。本发明中成药胶囊对雌性大鼠的卵巢功能呈现中度雌激素影响，低、中、表层细胞基本同正常组，中层细胞相对较多。其中本发明中成药胶囊大剂组表现尤为明显。乙烯雌酚长期使用，可使老年大鼠垂体系数明显降低，表明对脑垂体有抑制作用，而本发明中成药胶囊长期使用未见对老年雌性大鼠垂体系数产生明显影响；本发明中成药胶囊大剂量组和乙烯雌酚组均可使老年大鼠子宫系数明显提高，与模型组比较有显著差异。受试老年雌生大鼠器官组织学检查结果表明衰老模型组SD大鼠成功显示了垂体—肾上腺—卵巢内分泌轴的相应器官形态、生理、代谢等系列衰老改变；大豆异黄酮具有类孕酮作用，对垂体、卵巢滤泡数及内膜腺体萎缩的抗衰老表现出部分作用，但对黄体发育的反馈抑制显著；乙烯雌酚有较明显的垂体—肾上腺—卵巢轴中下游阶段(子宫等)的形态和内分泌代谢的激活影响。即对子宫的抗衰老影响更明显，但有促内膜腺体的活跃增生副作用；本发明中成药胶囊小、中、大剂量组的剂量相关比例效应关系不甚明显，但对垂体—肾上腺—卵巢轴的上游和下游全程阶段及雌激素，甚至垂体后叶的抗利尿加素及催产素动情活动均有抗衰老影响，表现为多靶器官的内分泌活动激活影响。
本发明的提高女性卵巢功能的中成药对围绝经期及绝经期综合征的临床疗效本发明的提高女性卵巢功能的中成药(以中成药胶囊为例)的临床实验目的观察长期服用本发明纯中药制剂胶囊，对围绝经期、绝经后妇女症状、子宫内膜、性激素水平的影响。方法绝经后妇女26名，未绝经妇女14名，服用宁心红杞胶囊每日2次，每次2片，持续3个月以上。观察其症状、阴道流血、子宫内膜厚度、阴道脱落细胞及女性性激素水平的变化。结果1、服药期间无阴道流血。2、症状好转。3、子宫内膜厚度无明显变化。4、阴道脱落细胞伊红指数上升。5、女性激素稳定在一定水平。6、生活质量有了改变。结论纯中药制剂的本发明中成药胶囊可替代目前有争议的激素替代治疗(HRT)。
本发明中成药胶囊系纯中药制剂，主要成分红花，枸杞子。治疗围绝经期及绝经后妇女综合征，可明显改善症状。绝经后长期服用，不增加子宫内膜厚度，不引起阴道流血，稳定性激素水平，改善女性生殖道功能。经观察，长期服用本发明中成药胶囊是安全的。
1对象及分组服用本发明中成药胶囊且符合下列条件者自愿参加，参加者共计40名。绝经组(26名)①身体健康已绝经妇女，年龄不超过60岁，②绝经时间不超过5年，③半年内未曾接受其他相关雌激素替代疗法(包括中药、西药)。未绝经组(14名)①年龄不低于40岁，②无合并其他内分泌疾病，第③项同前。参加本研究实验者为不间断服药达3个月以上者。
2方法2.1口服本发明中成药胶囊，每日2次，每次2片，早晚间隔12小时，空腹温开水送下。
2.2阴道流血观察询问病史，服药期间有无阴道流血，流血量多少。
2.3症状变化参照Kupperman评分法，结合中国人体加以改良，各种症状评分，按其轻重程度分别用0、1、2、3乘以基本分，然后合计总分，满分为63分。10分以下为轻度，11～20分为轻中度，21～30分为中度，31分以上为重度。
2.4子宫内膜厚度测量服药后经阴道超声观察子宫内膜厚度。取子宫体纵切面，测量子宫内膜最宽部分厚度(日本阿洛卡1000型黑白超声诊断仪，阴道探头频率5.5MHz)。
2.5女性激素测定空腹查血清性激素E2、P、FSH、LH值，各激素放射免疫分析试剂盒由天津九鼎医学生物工程有限公司提供。
2.6阴道脱落细胞检查用竹制刮片，取阴道侧穹窿脱落细胞，95％乙醇固定，巴氏染色后进行细胞分类，查底层细胞/中层细胞/表层细胞比值及角化指数。
2.7药物副作用询问病史，有无胃部不适、头昏等症状。3结果3.1症状变化服药最短3个月，最长48个月。服药后无胃部不适等症状(注有1名服药者称饭后服药胃部感不适，建议改为饭前服用后症状消失)。40名服药者中，2名服药后症状无明显变化，余38例症状均有不同程度改善，总有效率95％。根据Kupperman评分法，服药前人均评分18.6，服药后人均评分7.3。两组间有显著性差异(x2检验P＜0.001)。见表1表1 服药前后症状评分服药评分轻度 轻中度中度 重度人均评分服药前人数 1015105 18.6服药后人数 28120 0 7.33.2绝经组子宫内膜变化 见表2表2 阴道超声子宫内膜厚度测量服药时间(月)3～6 7～9 10～1212以上服药人数17 11 8 4子宫内膜厚度＜5mm＜5mm＜5mm ＜5mm3.3绝经组服药后阴道脱落细胞检查服药期间，绝经组均感阴道分泌物增加，通过阴道脱落细胞检查，显示绝经5年者表层细胞仍占一定比例。见表3表3 绝经组阴道脱落细胞伊红指数伊红指数 ＜10％11％～20％21％～50％＞50％绝经组人数2 2 1753.4绝经组女性激素的测定
3.4.1性激素E2(雌二醇)的测定及分布E2的测定及分布(单位pg/ml)分组 ＜10 11～30 31～50 ＞50 最低值 最高值 绝经期实验室参考值人数 2 13 3 8 ＜5 400 10～403.4.2性激素P(黄体素)的测定及分布P的测定及分布(单位ng/ml)分组 0～1 1.1～10 ＞10 最低值 最高值 绝经期实验室参考值人数 9 12 5 0.3 25 0～0.83.4.3性激素FSH(促卵泡生成激素)的测定及分布FSH的测定及分布(单位miu/ml)分组 ＜20 21～25 26～40 最低值 最高值 绝经期实验室参考值人数 9 10 72 9.5 25.8～1343.4.4性激素LH(促黄体生成激素)的测定及分布LH的测定及分布(单位miu/ml)分组 ＜10 11～20 21～30 最低值 最高值 绝经期实验室参考值人数 3 6 17 ＜5 30 7.7～58.54结论4.1所有参加实验者无论年龄大小(40-60岁)和用药时间长短(3-48个月)，未有一例出现阴道流血，子宫内膜也均为正常范围内，这说明本发明中成药胶囊的安全性是非常可靠的。
4.2参加实验者的围绝经期症状，按照改良Kupperman法评分统计后显示，用药前后症状改善具有统计学意义。
4.3所有被检测者的FSH值最高者未超过40miu/ml，其中近一半人仅在25以下，远低于临床围绝经期常见的高水平FSH现象。表明本发明中成药胶囊对卵巢的作用不是通过一味提高垂体分泌FSH来刺激卵巢产生作用。
4.4参加实验者的各项激素水平在长期用药后能够始终保持合适水平，且与脱落细胞检察结果相吻合。
本发明中成药胶囊的长期应用结果表明，该产品所具有的疗效高、安全性好等特点，在改善围绝经期症状方面具有明显的临床应用价值，可以用于替代目前有争议的激素替代治疗(HRT)。
实施例1取600千克枸杞子、300千克红花和100千克地黄，分别经粉碎机粉碎得到它们的粉状物，目数控制在80目。将上述粉状枸杞子、红花和地黄与20000千克的浓度为70％、PH值为6的乙醇溶液混合，并在搅拌器内搅拌均匀，然后经管道缓慢流入容器，在该管道的的管壁上设有超声波发生器，它对管道内缓慢流动的混合物进行超声振荡破碎处理，处理时间为10分钟，使原料细胞中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。将超声处理后的混合物溶液进行过滤，去除残渣，得到约20000千克的本发明中成药的粗品溶液。将上述粗品溶液置于乙醇回收器和真空干燥箱中浓缩后取出，得到约200千克的本发明中成药的干浸膏，最后将该干浸膏经制剂加工处理即得到片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或散剂的中成药。
实施例2取500千克枸杞子、350千克红花和150千克地黄，分别经粉碎机粉碎得到它们的粉状物，目数控制在20目。将上述粉状枸杞子、红花和地黄与10000千克的浓度为75％、PH值为6.3的乙醇溶液混合，并在搅拌器内搅拌均匀，然后经加热回流12小时，使原料细胞中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。滤除残渣，得到约5000千克的本发明中成药的粗品溶液。将上述粗品溶液置于真空干燥器中，在-20℃条件下进行低温真空干燥，干燥48小时后取出，得到约200千克的本发明中成药的干浸膏，最后将该干浸膏经制剂加工处理即得到片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或散剂的中成药。
实施例3取700千克枸杞子、250千克红花和50千克地黄，分别经粉碎机粉碎得到它们的粉状物，目数控制在20目。将上述粉状枸杞子、红花和地黄与15000千克的浓度为70％、PH值为5.6的乙醇溶液混合，并在搅拌器内搅拌均匀，然后经逆流萃取48小时，使原料中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。滤除残渣，得到约5000千克的本发明中成药的粗品溶液。将上述粗品溶液置于真空干燥器中，在-20℃条件下进行低温真空干燥，干燥48小时后取出，得到约200千克的本发明中成药的干浸膏，最后将该干浸膏经制剂加工处理即得到片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或散剂的中成药。
实施例4取700千克枸杞子、200千克红花和100千克地黄，分别经粉碎机粉碎得到它们的粉状物，目数控制在20目。将上述粉状枸杞子、红花和地黄与12000千克的浓度为80％的乙醇溶液混合，并在搅拌器内搅拌均匀，然后经萃取器萃取48小时，使原料中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。滤除残渣，得到约8000千克的本发明中成药的粗品溶液。将上述粗品溶液置于真空干燥器中，在-20℃条件下进行低温真空干燥，干燥48小时后取出，得到约200千克的本发明中成药的干浸膏，最后将该干浸膏经制剂加工处理即得到片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或散剂的中成药。
实施例5取650千克枸杞子、250千克红花和100千克地黄，分别经粉碎机粉碎得到它们的粉状物，目数控制在20目。将上述粉状枸杞子、红花和地黄与8000千克的浓度为75％的乙醇溶液混合，并在搅拌器内搅拌均匀，然后经逆流萃取48小时，使原料中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。滤除残渣，得到约4000千克的本发明中成药的粗品溶液。将上述粗品溶液置于真空干燥器中，在-20℃条件下进行低温真空干燥，干燥48小时后取出，得到约200千克的本发明中成药的干浸膏，最后将该干浸膏经制剂加工处理即得到片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或散剂的中成药。
实施例6取550千克枸杞子、400千克红花和50千克地黄，分别经粉碎机粉碎得到它们的粉状物，目数控制在20目。将上述粉状枸杞子、红花和地黄与10000千克的浓度为70％、PH值为6.2的乙醇溶液混合，并在搅拌器内搅拌均匀，然后经加热回流12小时，使原料细胞中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。滤除残渣，得到约5000千克的本发明中成药的粗品溶液。将上述粗品溶液置于真空干燥器中，在-20℃条件下进行低温真空干燥，干燥48小时后取出，得到约200千克的本发明中成药的干浸膏，最后将该干浸膏经制剂加工处理即得到片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂或散剂的中成药。
权利要求
1.一种提高女性卵巢功能的中成药，其特征在于它以枸杞子、红花、地黄为原料，其各成分的重量百分比为枸杞子50-70％红花 20-40％地黄 5-15％。
2.一种提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于a.先将枸杞子、红花、地黄三种原料分别干燥粉碎，目数不少于20目；b.将粉碎后的粉状原料按所规定的重量百分比称量后，加入适量的大极性提取液，再一同搅拌混合均匀，使原料中的活性成分溶解到提取液中，滤去残渣后得到本发明中成药的粗品；c.将得到的粗品进行干燥、粉碎、制剂即得本发明的中成药。
3.按权利要求2所述的提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于所述枸杞子、红花、地黄原料粉碎的目数为10-30目。
4.按权利要求2所述的提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于所述大极性提取液或是水，或是甲醇，或是乙醇，或是它们的任意混合液；所述大极性提取液选用浓度为70-80％，PH值为5.6-6.3的乙醇溶液。
5.按权利要求2所述的提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于所述枸杞子、红花、地黄原料按量混合并与大极性提取液搅拌均匀后的混合物，在静止状态下用超声振荡法、加热回流提取法或逆流萃取法，使混合物中的原料的活性成分更多的溶解到大极性提取液中。
6.按权利要求2所述的提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于所述枸杞子、红花、地黄原料按量混合并与大极性提取液搅拌均匀后的混合物从管中缓慢通过，管周壁设置的超声波发生器对其进行超声振荡处理，处理时间10-30分钟，使混合物中各原料的活性成分充分溶解到大极性提取液中。
7.按权利要求2所述的提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于所述粗品的干燥工序采用高温干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。
8.按权利要求7所述的提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于所述粗品干燥工序采用-20℃下的低温真空干燥，以保持生物活性。
9.按权利要求2所述的提高女性卵巢功能的中成药的制作方法，其特征在于在得到的粗品进行干燥前，先进行精制处理，以进一步去除杂质。
10.一种提高女性卵巢功能的中成药在制备治疗或预防女性卵巢功能低下的药中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种提高女性卵巢功能的中成药及其制作方法以及在制备治疗或预防女性卵巢功能低下的药中的应用，它以枸杞子、红花、地黄为原料，先将枸杞子、红花、地黄三种原料分别干燥粉碎，目数不少于20目。再将粉碎后的粉状原料按所规定的重量百分比称量后，加入适量的大极性提取液，再一同搅拌混合均匀，使原料中的活性成分溶解到提取液中，滤去残渣后得到本发明中成药的粗品。将得到的粗品进行干燥、粉碎、制剂即得本发明的中成药。本发明的中成药以天然植物为原料，经高科技方法提取植物活性成分，有效地营养卵巢，促使卵巢分泌内源性激素，经临床检验证明，各种更年期症状均得以全面改善，充分表现出本发明中成药的良性作用。
文档编号A61P15/00GK1519016SQ03152889
公开日2004年8月11日 申请日期2003年9月1日 优先权日2003年9月1日
发明者吕晔, 马红, 吕 晔 申请人:江苏省中国科学院植物研究所, 南京美福天然药物科技有限公司, 吕晔, 马红, 肖鹏飞, 万学锋
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