治疗脑梗塞的药物及其制备方法
专利名称：治疗脑梗塞的药物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗脑梗塞的药物，特别是涉及一种以中草药为原料制备的治疗脑梗塞的药物。本发明还涉及该药物的制备方法。
背景技术：
脑梗塞是脑血管疾病中的常见多发病，约占脑血管病的75％，有一定的病死率，80％的存活者留有程度不同的功能障碍，约40％重度致残。估计每年因本病造成的损失和医疗费用高达100亿元以上，已造成严重的社会问题和经济负担。随着我国人口的逐步老龄化，其发病率还会不断上升，病死率和病残率已跃居诸病之首，严重危害人类的健康。
虽然随着现代中西医的发展，其诊断与抢救水平有了较明显的提高，但其治愈率，仍不满意，因此要特别重视超早期及急救期的治疗，尽早恢复缺血期的血液供应，改善微循环，阻断脑梗死的病理过程。据此有必要开发有效中药新制剂，进一步提高疗效，降低致残率，提高患者的生存质量。
对脑梗塞的病机探讨，各医家也多有论及。一般认为，脑梗塞疾病可因素体阴血亏虚，阳盛火旺；年老体弱，肝肾阴亏，肝阳偏亢；情志失调，气郁化火；内伤积损，有形之邪积滞，郁久化热，导致热郁血瘀，血气上逆，瘀阻脑络。临床表现为“络热血瘀”的证候，治疗应以凉血化瘀、息风通络为基本治法，通过凉血清热、散血祛瘀、活血通络、平肝息风达到治疗目的。
现代文献报道，用中药复方治疗本病较多，且组方多以活血化瘀为主，如用滋阴潜阳活血方治疗脑梗塞，药用白芍、白菊、山茱萸、生地、天麻、钩藤、怀牛膝、石决明、丹参、水蛭粉(冲)、桃仁、红花，总有效率达86.27％。近几年来，一些活血化瘀的中成药治疗本病，也取得了较好的疗效，如用大剂量的川芎嗪治疗急性期脑梗塞94例，总有效率90.6％，证明川芎嗪有增加脑血流量等功能；用川芎注射液治疗32例急性期脑梗塞患者有效率为90.6％。
目前国内外对脑梗塞疾病的药物治疗的情况及遇到的问题和存在的不足(1).现有西医治疗脑梗塞疾病的治愈率低，同时有较高的致残率。
(2).现有中成药类有较好的疗效，但治愈率仍较低，治疗效果缓慢。
发明内容
本发明提供了一种新型的治疗脑梗塞疾病的药物，其目的为了克服现有药物治疗脑梗塞疾病存在的较高的致残率和较低的治愈率的缺陷。
本发明的目的及解决其主要技术问题是基于现代中医对脑梗塞疾病的认识，参考现代药理学研究结果的原则来实现的。现代药理实验研究结果显示赤芍具有抗血栓形成和抗血小板聚集的作用。赤芍煎剂能使血栓形成时间明显延长，长度缩短，重量减轻；凝血酶原时间和白陶土部分凝血酶时间延长，优球蛋白溶解时间缩短，表明对血凝具有抑制作用。赤芍提取物在体外对肾上腺素、ADP、烙铁头蛇毒(TMVA)和花生四烯酸(AA)诱导的血小板聚集均有显著的抑制作用，并使血小板粘附因子与血小板第三因子活性降低，血小板内CAMP含量升高。栀子醇提物具有镇静作用，且与环己巴比妥有协同作用，能延长睡眠时间近12倍；栀子有效成分熊果酸能提高戊四氮所致小鼠半数惊厥剂量，有明显的抗惊厥作用；栀子煎剂和醇提物对麻醉或不麻醉猫、兔、大鼠，不论口服、腹腔或静脉给药均有降压作用。地龙具有溶栓、抗凝、降压、抗惊厥和镇静作用。地龙冻干粗粉除了具有尿激酶样纤溶作用外，尚有直接催化纤维蛋白水解的作用；粗提液经进一步萃取，有良好的溶解血栓作用，可使兔血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)活力增加，血小板聚集性显著降低，全血粘度和血浆粘度降低，红细胞刚性指数降低，提示其通过促进纤溶、抑制血小板聚集、增加红细胞膜稳定性等发挥作用；地龙煎剂能扩张血管，降低血压，对易卒中自发性高血压大鼠可能有一定的预防卒中发生的作用；地龙提取液可明显对抗戊四氮和咖啡因引起的惊厥，有抗惊厥和镇静作用。
基于以上对脑梗塞疾病机理和赤芍、栀子、地龙的药理特性的认识，本发明研制了用于治疗脑梗塞疾病的药物。
本发明药物是由下述重量百分比的原料制成的赤芍 20-50 栀子 25-50 地龙 15-40本发明药物的最佳原料重量百分比为赤芍 37.5 栀子 37.5 地龙 25本发明提供的药物是通过下述生产方法制备而成的1.分别取一定重量的赤芍、栀子、地龙，进行破壳、粉碎。
2.醇提。加入一定质量浓度、数倍药材重量的醇，进行回流提取一定时间后，滤过，得到醇提取液和药渣。
3.醇沉。在步骤2中得到的药渣中加入一定质量浓度、数倍药材重量的醇，进行回流提取一定时间后，滤过。合并步骤2和步骤3中得到的醇提取液，回收醇，浓缩，得到至含生药5g/ml(相对密度1.24g/cm3，50℃)的药液。
4.碱沉。在步骤3中得到的药液中加入一定质量浓度、数倍药材重量的醇，进行充分搅拌后，静置一定时间，滤过。得到的醇液用一定浓度的NaOH溶液进行配制成一定pH值的溶液，再静置一定时间，滤过，得滤液。
5.上层析柱。步骤4中得到的滤液，经过装填Al2O3的层析柱进行分离，收集流出液。层析柱用适量的、一定浓度的醇进行洗脱，得洗脱液。将洗脱液与流出液合并，回收醇，得清膏。
6.成品。将步骤5中得到的清膏加入注射用水溶解，并稀释至含生药1g/ml，加入为药液重量1％的活性炭，加热煮沸后，保温10分钟，滤过(或高速离心)，药液超滤，分装，冻干，即得注射用粉针剂。
上述制备方法的醇提、醇沉过程中所用的醇、可以是任一种有机醇、优选为乙醇。
上述制备方法的醇提过程所用醇的质量浓度为50-70％。
上述制备方法的醇提过程的回流时间为1-2小时。
上述制备方法的醇提过程中所用醇的量为所用药材总重量的4-8倍。
上述制备方法的醇沉过程中所用醇的质量浓度为70-80％。
上述制备方法的碱沉过程中溶液的PH值为7.5-9.0。
本发明药剂可以是任何一种药剂学上所说的剂型。优选为粉针剂型。
本发明药物临床使用和动物试验的果表明，本发明具有以下一些特点(1)本发明以天然的植物药为原料，各组分符合药政法规定，对人体无毒无害。
(2)本发明具有很好的质量稳定性，便于携带和使用，符合国家食品卫生法的规定。
(3)本发明与其他中药制剂比较，具有用量小、治愈率高、致残率低等特点。
(4)本发明提供的药物对动物体没有毒副作用。
(5)本发明提供的药物具有很好的稳定性。
(7)本发明提供的药物对中动脉阻断所致损伤具有保护作用。
(8)本发明可以对动物体的动静脉短路血栓的湿重、干重具有明显的降低作用，能提高血栓湿重、干重抑制率。
(9)本发明可以增加动物体红细胞变形能力，降低红细胞的聚集能力、血液粘度，抑制血小板聚集，减少血小板总数。
具体实施例方式
以下各实施例仅作为实施本发明的示例，用以进一步阐明本发明，并非用于限定本发明的保护范围。
实施例1本实施例是为了说明本发明在制备过程中的可实施性。
1.药物的配比按下述配比称取原料(克)赤芍1875g栀子1875g地龙1250g药物的制备生产方法如下以上3味药材，加6倍量70％乙醇，回流提取1.5小时，滤过，药渣再加4倍量70％乙醇，回流提取1.5小时，滤过，合并乙醇提取液，回收乙醇，浓缩至含生药5g/ml(1000ml，相对密度1.24，50℃)，加6倍量95％乙醇使药液含醇量80％，充分搅拌，静置12小时，滤过，醇液用10％NaOH液调至pH7.5～8.0，静置12小时，滤过，滤液经过装药材1/3量(1333g)的Al2O3层析柱，收集流出液，适量80％乙醇洗脱，洗脱液与流出液合并，回收乙醇至无醇味，得清膏。清膏加注射用水溶解并稀释至5000ml(含生药1g/ml)，加药液1％活性炭(50g)，加热煮沸后，保温10分钟，滤过(或高速离心)，药液超滤(膜分子量1万)，分装1000瓶(每瓶5ml)，冻干，即得粉针剂。
实施例2本实施例是为了说明本发明不同药剂的治疗效果。
取ICR小鼠77只，雌雄兼备，随机分为7组，即模型组1、粉针剂I(240mg/kg)、II(480mg/kg)、III(960mg/kg)3个剂量组、片剂I(0.4g/kg)、II(0.8g/kg)、III(1.6g/kg)3个剂量组共7组；粉针剂各组均通过尾静脉给药，片剂各组均通过口服给药，给药容积为20ml/kg。静脉给药15min后，口服给药30min后，仰卧位固定，用0号手术缝线两端结扎双侧颈总动脉(合并迷走神经)后中间剪断。记录小鼠的呼吸维持时间。试验结果如表1。
表1粉针剂(冻干)与片剂的全脑缺血作用的比较(X±SD)剂量动物数 呼吸维持时间组别(mg/kg) (只) (分钟)模型组 - 11 1.89±0.70粉针剂I240 11 3.88±1.41*△△粉针剂II 480 11 4.66±1.94*粉针剂III 960 11 5.63±3.74*片剂I 400 11 2.18±0.45片剂II 800 11 2.98±1.87片剂III160011 3.07±1.75实施例3本实施例是为了说明本发明对动物体没有毒副作用。
1.试验材料1.1受试药物H3-I注射液，浓度为1.33g(生药)/ml，由南京中医药大学植物药研究与新药开发中心提供。临床成人一次用量5g/60kg，批号010111。用于小鼠尾静脉给药。
1.2受试动物ICR小鼠，体重19-21g，雌雄各半，由南京中医药大学实验动物中心供给。合格证苏动(质)97003。
2.试验条件给药前后，实验小鼠雌雄分笼，全价颗粒饲料喂养，自由饮水，室温20±2℃、湿度60％。
3.试验方法和结果3.1最大给药量试验3.1.1试验方法取ICR小鼠20只，体重19-21g，雌雄各半。随机均分为两组，每组10只。即(1)H3-I组H3-I注射液；(2)对照组0.9％氯化钠注射液。用1.33g(生药)/ml的H3-I注射液一次给小鼠尾静脉注射30ml/kg；对照组给予等量的0.9％氯化钠注射液。连续观察两周，记录受试小鼠行为、活动、摄食量、体重、粪便、死亡等情况，未死亡小鼠于两周后处死进行尸检。
3.1.2观察指标及试验结果按H3-I注射液40g/kg[1.33g/ml×30ml/kg]剂量静脉一次给药的10只小鼠，当天见小鼠毛色光滑、活动、摄食、粪便色泽与质地正常，与对照组比较无明显差异；且两周内无死亡及其它异常现象发生，两组同时处死后进行尸检，各主要脏器(心、肝、脾、肺、肾)经肉眼观察未见异常改变，与对照组比较无明显差异，结果见表2。
表2 H3-I注射液经静脉给药的小鼠最大给药量试验结果
上述试验结果表明10只小鼠给药后均无明显的毒性反应，并且两周内亦无死亡。而一次给药的小鼠最大给药量为40g/kg，按临床成人每日用量5g/60kg计算，则该药相当于临床成人用量的482倍。因此，本发明对人体基本没有毒副作用。
实施例4本实施例是为了说明本发明提供的药物的稳定性。
表3制剂初步稳定性试验报告
实施例5本实施例是为了说明本发明提供的药物对动物体急性脑缺血的保护作用。
1.实验条件及方法取ICR小鼠100只，雌雄兼备，随机分为5组，即模型组(给予等容积的生理盐水)、阳性药物组(尼膜同溶液2mg/kg)、舒络粉针剂(冻干)I(240mg/kg)、II(480mg/kg)、III(960mg/kg)3个剂量组共5组；各组均通过尾静脉给药，给药容积为20ml/kg。静脉给药10min后，仰卧位固定，用0号手术缝线两端结扎双侧颈总动脉(合并迷走神经)后中间剪断。记录小鼠的呼吸维持时间。
2.试验结果试验结果见表4。
表4舒络粉针剂(冻干)对小鼠急性脑缺血的保护作用(X±SD)剂量 动物数 呼吸维持时间组别(mg/kg) (只) (分钟)模型组 - 20 2.94±0.91尼膜同组2 20 7.08±3.72**舒络粉针剂(冻干)I 24020 4.63±3.22*舒络粉针剂(冻干)II 48020 6.84±3.89**舒络粉针剂(冻干)III96020 8.71±5.55**实施例6本实施例是为了说明本发明提供的药物对动物体的动静脉短路血栓的湿重、干重具有明显的降低作用，能提高血栓湿重、干重抑制率。同时，本实施例还说明了本发明提供的药物可以增加动物体红细胞变形能力，降低红细胞的聚集能力、血液粘度，抑制血小板聚集，减少血小板总数。
1.试验方法取SD雄性大鼠60只，体重350～450g，随机分为6组，即生理盐水组、模型组(以上两组给予等容积的生理盐水)、阳性药物组(8g/kg复方丹参注射液)、舒络粉针剂(冻干)I(120mg/kg)、II(240mg/kg)、III(480mg/kg)3个剂量组，给药容积为10ml/kg，iv连续给药6天，于第5次给药后，除生理盐水组外，各组动物皮下注射盐酸肾上腺素注射液0.8ml/kg共2次，间隔4h，在第二次注射Adr之间，将大鼠置于冰水中浸泡5min。造成血瘀症模型。禁食24小时后，与手术前15min给药1次，以10％水合氯醛麻醉(300mg/kg，ip)，仰位固定，颈动脉插管放血，用3.8％的枸椽酸钠或肝素纳生理盐水溶液(500u/1ml)按1∶9抗凝，检测血液流变学的各项指标。
2.实验检测指标(1)对大鼠血小板聚集性的影响将3.8％的枸椽酸钠抗凝的血液以800r/min离心10min，取富血小板血浆(PRP)，剩余部分以3000r/min离心，取贫血小板血浆(PPP)，利用LG-PABER型血小板聚集及凝血因子分析仪记录最大聚集率并按下列公式计算抑制率。结果见表5。
(2)血液粘度检测①全血粘度将肝素抗凝的血液采用LG-R-80系列血液粘度仪测定。
②血浆粘度全血测试完毕后，剩余血样以3000r/min离心，进行血浆粘度的测试。
③红细胞变形能力、红细胞聚集能力检测将肝素抗凝的血液采用LG-R-190型红细胞变形/聚集能力测定仪。
结果见表6、表8。
(3)凝血系统的检测将3.8％的枸椽酸钠抗凝的血液以3000r/min离心10min，分离贫血小板血浆，采用LG-PABER型血小板聚集及凝血因子分析仪测定活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、血浆纤维蛋白原(FIB)。结果见表7。
(4)血小板及血沉的检测大鼠眼眶取血，测定各组动物血小板总数及血沉，结果见表5。
表5舒络粉针剂(冻干)对血瘀症模型大鼠血小板总数、聚集率及血沉的影响(n＝10，X±s)剂量 血小板总数 血小板 聚集抑制率 血沉组别(mg/kg) (108个/ml)聚集率(％) (％) (mm/h)对照组 - 5.53±1.35 34.19±4.91 - 6.30±5.68模型组 - 7.71±2.27△ 38.98±4.80△ - 13.00±9.50复方丹参组 8g/kg 5.70±0.84*30.34±7.86* 22.17 8.40±6.10舒络粉针剂(冻干)I 1206.82±1.67 37.97±5.16 2.59 15.80±12.72舒络粉针剂(冻干)II 2406.22±1.66 36.45±7.37 6.49 12.70±11.63舒络粉针剂(冻干)III 4805.71±1.71*32.02±7.35* 17.86 10.20±6.96
表6舒络粉针剂(冻干)对血瘀症模型大鼠红细胞变形及聚集能力的影响(X±S)动物数 剂量 红细胞聚集能力红细胞变形能力组别(只) (mg/kg) MAXDI SSSMAXD SSS对照组 10 1.74±1.06359.02±242.1351.59±6.07251.31±21.41模型组 9 -- 3.80±2.46△817.50±587.0046.76±4.08240.18±34.37复方丹参组 98g/kg 1.87±0.32* 360.48±63.65*51.44±3.50* 263.98±32.37舒络粉针剂(冻干)I 10 1202.26±0.43444.79±75.56 49.30±4.96241.48±26.77舒络粉针剂(冻干)II 92402.22±0.61408.15±121.4248.05±4.16242.07±19.64舒络粉针剂(冻干)III 84801.92±0.46377.76±94.22*50.89±1.19* 263.98±32.37表7舒络粉针剂(冻干)对血瘀症模型大鼠APTT、PT、FIB的影响(X±s)动物数剂量APTT组别 PT(s) FIB(g/l)(只)(mg/kg) (s)对照组10-14.31±4.15 16.53±2.652.36±0.50模型组9 -8.69±3.58△△12.63±5.10△2.92±0.62△复方丹参组9 8g/kg 15.13±3.74* 17.44±6.092.38±0.41*舒络粉针剂(冻干)I 9 12010.61±5.29 14.97±6.412.68±0.48舒络粉针剂(冻干)II10 24014.46±6.15* 16.08±5.342.61±0.33舒络粉针剂(冻干)III 10 48014.55±5.12* 18.37±5.75* 2.49±0.54表8舒络粉针剂(冻干)对血瘀症模型大鼠血液粘度的影响(n＝8，X±s)全血粘度(CP)剂量 血采粘度组别(mg/kg) (100s-1)高切(200s-1) 中切(30s-1) 中切(5s-1)低切(1s-1)对照组 - 5.04±0.40 6.38±0.4912.52±2.4623.36±3.481.17±0.07模型组 - 5.47±0.53 6.92±0.8414.89±2.2527.72±3.13△1.24±0.12复方丹参组 8g/kg4.86±0.75 5.44±1.63* 10.08±4.33* 21.14±5.31** 1.15±0.22舒络粉针剂(冻干)I120 5.17±1.08 6.89±0.6115.04±2.8226.64±2.881.24±0.10舒络粉针剂(冻干)II 240 5.11±0.36 6.22±0.4913.55±1.9324.21±2.81* 1.16±0.15舒络粉针剂(冻干)III 480 5.08±0.76 6.22±0.8411.93±2.89* 21.62±3.99** 1.19±0.1权利要求
1.一种治疗脑梗塞疾病的药物，其特征在于它是由下述重量百分比的原料制成的药剂赤芍 20-50 栀子 25-50 地龙 15-40
2.根据权利要求1所述的治疗脑梗塞疾病的药物，其特征在于该药剂的原料组成重量百分比为赤芍 37.5 栀子 37.5 地龙 25
3.根据权利要求1或2所述的治疗脑梗塞疾病的药物，其特征在于所述的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。
4.根据权利要求3所述的治疗脑梗塞疾病的药物的剂型，其特征在于所述的药剂的剂型优选为是注射用粉针剂或口服制剂。
5.根据权利要求4所述的治疗脑梗塞疾病的药物的剂型，其特征在于所述的药剂的剂型优选为是注射用粉针剂。
6.根据权利要求1所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，其特征在于首先将赤芍、栀子、地龙等进行破壳、粉碎的预处理后，将上述药材经醇提、醇沉、碱沉、浓缩，得清膏，将清膏与吸收剂混合制成口服制剂。
7.根据权利要求1所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，其特征在于首先将赤芍、栀子、地龙等进行破壳、粉碎的预处理后，将上述药材经醇提、醇沉、碱沉、上层析柱，收集滤出液，浓缩，得清膏，将清膏用注射用水稀释超滤制成注射用制剂。
8.根据权利要求6或7所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，所用的醇可以是任一种有机醇。
9.根据权利要求6或7所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，所用的有机醇是乙醇。
10.根据权利要求6或7所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，醇提过程中所用醇的质量浓度为50-70％。
11.根据权利要求6或7所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，醇提过程所用的时间为1-2小时。
12.根据权利要求6或7所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，醇提过程中所用醇的量为所用药材总重量的4-8倍。
13.根据权利要求6或7所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，醇沉过程中所用醇的质量浓度为70-80％。
14.根据权利要求6或7所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，碱沉过程中溶液的PH值为7.5-9.0。
全文摘要
本发明公开了一种新的治疗脑梗塞的药物及其制备方法。该药物是以赤芍、栀子、地龙为原料，根据每味中药的不同特性，首先将药材进行破壳、粉碎的预处理后，再进行醇提、醇沉、碱沉、浓缩，得清膏，将清膏与吸收剂混合制成口服制剂，或将上述药材经醇提、醇沉、碱沉、上层析柱，收集滤出液，浓缩，得清膏，将清膏用注射用水稀释超滤制成注射用粉针剂。本发明的原料配方独特，治疗效果显著。
文档编号A61P9/00GK1579466SQ03153210
公开日2005年2月16日 申请日期2003年8月7日 优先权日2003年8月7日
发明者方泰惠 申请人:南京中医药大学, 苏州医药集团有限公司
技术领域：
本发明涉及一种治疗脑梗塞的药物，特别是涉及一种以中草药为原料制备的治疗脑梗塞的药物。本发明还涉及该药物的制备方法。
背景技术：
脑梗塞是脑血管疾病中的常见多发病，约占脑血管病的75％，有一定的病死率，80％的存活者留有程度不同的功能障碍，约40％重度致残。估计每年因本病造成的损失和医疗费用高达100亿元以上，已造成严重的社会问题和经济负担。随着我国人口的逐步老龄化，其发病率还会不断上升，病死率和病残率已跃居诸病之首，严重危害人类的健康。
虽然随着现代中西医的发展，其诊断与抢救水平有了较明显的提高，但其治愈率，仍不满意，因此要特别重视超早期及急救期的治疗，尽早恢复缺血期的血液供应，改善微循环，阻断脑梗死的病理过程。据此有必要开发有效中药新制剂，进一步提高疗效，降低致残率，提高患者的生存质量。
对脑梗塞的病机探讨，各医家也多有论及。一般认为，脑梗塞疾病可因素体阴血亏虚，阳盛火旺；年老体弱，肝肾阴亏，肝阳偏亢；情志失调，气郁化火；内伤积损，有形之邪积滞，郁久化热，导致热郁血瘀，血气上逆，瘀阻脑络。临床表现为“络热血瘀”的证候，治疗应以凉血化瘀、息风通络为基本治法，通过凉血清热、散血祛瘀、活血通络、平肝息风达到治疗目的。
现代文献报道，用中药复方治疗本病较多，且组方多以活血化瘀为主，如用滋阴潜阳活血方治疗脑梗塞，药用白芍、白菊、山茱萸、生地、天麻、钩藤、怀牛膝、石决明、丹参、水蛭粉(冲)、桃仁、红花，总有效率达86.27％。近几年来，一些活血化瘀的中成药治疗本病，也取得了较好的疗效，如用大剂量的川芎嗪治疗急性期脑梗塞94例，总有效率90.6％，证明川芎嗪有增加脑血流量等功能；用川芎注射液治疗32例急性期脑梗塞患者有效率为90.6％。
目前国内外对脑梗塞疾病的药物治疗的情况及遇到的问题和存在的不足(1).现有西医治疗脑梗塞疾病的治愈率低，同时有较高的致残率。
(2).现有中成药类有较好的疗效，但治愈率仍较低，治疗效果缓慢。
发明内容
本发明提供了一种新型的治疗脑梗塞疾病的药物，其目的为了克服现有药物治疗脑梗塞疾病存在的较高的致残率和较低的治愈率的缺陷。
本发明的目的及解决其主要技术问题是基于现代中医对脑梗塞疾病的认识，参考现代药理学研究结果的原则来实现的。现代药理实验研究结果显示赤芍具有抗血栓形成和抗血小板聚集的作用。赤芍煎剂能使血栓形成时间明显延长，长度缩短，重量减轻；凝血酶原时间和白陶土部分凝血酶时间延长，优球蛋白溶解时间缩短，表明对血凝具有抑制作用。赤芍提取物在体外对肾上腺素、ADP、烙铁头蛇毒(TMVA)和花生四烯酸(AA)诱导的血小板聚集均有显著的抑制作用，并使血小板粘附因子与血小板第三因子活性降低，血小板内CAMP含量升高。栀子醇提物具有镇静作用，且与环己巴比妥有协同作用，能延长睡眠时间近12倍；栀子有效成分熊果酸能提高戊四氮所致小鼠半数惊厥剂量，有明显的抗惊厥作用；栀子煎剂和醇提物对麻醉或不麻醉猫、兔、大鼠，不论口服、腹腔或静脉给药均有降压作用。地龙具有溶栓、抗凝、降压、抗惊厥和镇静作用。地龙冻干粗粉除了具有尿激酶样纤溶作用外，尚有直接催化纤维蛋白水解的作用；粗提液经进一步萃取，有良好的溶解血栓作用，可使兔血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)活力增加，血小板聚集性显著降低，全血粘度和血浆粘度降低，红细胞刚性指数降低，提示其通过促进纤溶、抑制血小板聚集、增加红细胞膜稳定性等发挥作用；地龙煎剂能扩张血管，降低血压，对易卒中自发性高血压大鼠可能有一定的预防卒中发生的作用；地龙提取液可明显对抗戊四氮和咖啡因引起的惊厥，有抗惊厥和镇静作用。
基于以上对脑梗塞疾病机理和赤芍、栀子、地龙的药理特性的认识，本发明研制了用于治疗脑梗塞疾病的药物。
本发明药物是由下述重量百分比的原料制成的赤芍 20-50 栀子 25-50 地龙 15-40本发明药物的最佳原料重量百分比为赤芍 37.5 栀子 37.5 地龙 25本发明提供的药物是通过下述生产方法制备而成的1.分别取一定重量的赤芍、栀子、地龙，进行破壳、粉碎。
2.醇提。加入一定质量浓度、数倍药材重量的醇，进行回流提取一定时间后，滤过，得到醇提取液和药渣。
3.醇沉。在步骤2中得到的药渣中加入一定质量浓度、数倍药材重量的醇，进行回流提取一定时间后，滤过。合并步骤2和步骤3中得到的醇提取液，回收醇，浓缩，得到至含生药5g/ml(相对密度1.24g/cm3，50℃)的药液。
4.碱沉。在步骤3中得到的药液中加入一定质量浓度、数倍药材重量的醇，进行充分搅拌后，静置一定时间，滤过。得到的醇液用一定浓度的NaOH溶液进行配制成一定pH值的溶液，再静置一定时间，滤过，得滤液。
5.上层析柱。步骤4中得到的滤液，经过装填Al2O3的层析柱进行分离，收集流出液。层析柱用适量的、一定浓度的醇进行洗脱，得洗脱液。将洗脱液与流出液合并，回收醇，得清膏。
6.成品。将步骤5中得到的清膏加入注射用水溶解，并稀释至含生药1g/ml，加入为药液重量1％的活性炭，加热煮沸后，保温10分钟，滤过(或高速离心)，药液超滤，分装，冻干，即得注射用粉针剂。
上述制备方法的醇提、醇沉过程中所用的醇、可以是任一种有机醇、优选为乙醇。
上述制备方法的醇提过程所用醇的质量浓度为50-70％。
上述制备方法的醇提过程的回流时间为1-2小时。
上述制备方法的醇提过程中所用醇的量为所用药材总重量的4-8倍。
上述制备方法的醇沉过程中所用醇的质量浓度为70-80％。
上述制备方法的碱沉过程中溶液的PH值为7.5-9.0。
本发明药剂可以是任何一种药剂学上所说的剂型。优选为粉针剂型。
本发明药物临床使用和动物试验的果表明，本发明具有以下一些特点(1)本发明以天然的植物药为原料，各组分符合药政法规定，对人体无毒无害。
(2)本发明具有很好的质量稳定性，便于携带和使用，符合国家食品卫生法的规定。
(3)本发明与其他中药制剂比较，具有用量小、治愈率高、致残率低等特点。
(4)本发明提供的药物对动物体没有毒副作用。
(5)本发明提供的药物具有很好的稳定性。
(7)本发明提供的药物对中动脉阻断所致损伤具有保护作用。
(8)本发明可以对动物体的动静脉短路血栓的湿重、干重具有明显的降低作用，能提高血栓湿重、干重抑制率。
(9)本发明可以增加动物体红细胞变形能力，降低红细胞的聚集能力、血液粘度，抑制血小板聚集，减少血小板总数。
具体实施例方式
以下各实施例仅作为实施本发明的示例，用以进一步阐明本发明，并非用于限定本发明的保护范围。
实施例1本实施例是为了说明本发明在制备过程中的可实施性。
1.药物的配比按下述配比称取原料(克)赤芍1875g栀子1875g地龙1250g药物的制备生产方法如下以上3味药材，加6倍量70％乙醇，回流提取1.5小时，滤过，药渣再加4倍量70％乙醇，回流提取1.5小时，滤过，合并乙醇提取液，回收乙醇，浓缩至含生药5g/ml(1000ml，相对密度1.24，50℃)，加6倍量95％乙醇使药液含醇量80％，充分搅拌，静置12小时，滤过，醇液用10％NaOH液调至pH7.5～8.0，静置12小时，滤过，滤液经过装药材1/3量(1333g)的Al2O3层析柱，收集流出液，适量80％乙醇洗脱，洗脱液与流出液合并，回收乙醇至无醇味，得清膏。清膏加注射用水溶解并稀释至5000ml(含生药1g/ml)，加药液1％活性炭(50g)，加热煮沸后，保温10分钟，滤过(或高速离心)，药液超滤(膜分子量1万)，分装1000瓶(每瓶5ml)，冻干，即得粉针剂。
实施例2本实施例是为了说明本发明不同药剂的治疗效果。
取ICR小鼠77只，雌雄兼备，随机分为7组，即模型组1、粉针剂I(240mg/kg)、II(480mg/kg)、III(960mg/kg)3个剂量组、片剂I(0.4g/kg)、II(0.8g/kg)、III(1.6g/kg)3个剂量组共7组；粉针剂各组均通过尾静脉给药，片剂各组均通过口服给药，给药容积为20ml/kg。静脉给药15min后，口服给药30min后，仰卧位固定，用0号手术缝线两端结扎双侧颈总动脉(合并迷走神经)后中间剪断。记录小鼠的呼吸维持时间。试验结果如表1。
表1粉针剂(冻干)与片剂的全脑缺血作用的比较(X±SD)剂量动物数 呼吸维持时间组别(mg/kg) (只) (分钟)模型组 - 11 1.89±0.70粉针剂I240 11 3.88±1.41*△△粉针剂II 480 11 4.66±1.94*粉针剂III 960 11 5.63±3.74*片剂I 400 11 2.18±0.45片剂II 800 11 2.98±1.87片剂III160011 3.07±1.75实施例3本实施例是为了说明本发明对动物体没有毒副作用。
1.试验材料1.1受试药物H3-I注射液，浓度为1.33g(生药)/ml，由南京中医药大学植物药研究与新药开发中心提供。临床成人一次用量5g/60kg，批号010111。用于小鼠尾静脉给药。
1.2受试动物ICR小鼠，体重19-21g，雌雄各半，由南京中医药大学实验动物中心供给。合格证苏动(质)97003。
2.试验条件给药前后，实验小鼠雌雄分笼，全价颗粒饲料喂养，自由饮水，室温20±2℃、湿度60％。
3.试验方法和结果3.1最大给药量试验3.1.1试验方法取ICR小鼠20只，体重19-21g，雌雄各半。随机均分为两组，每组10只。即(1)H3-I组H3-I注射液；(2)对照组0.9％氯化钠注射液。用1.33g(生药)/ml的H3-I注射液一次给小鼠尾静脉注射30ml/kg；对照组给予等量的0.9％氯化钠注射液。连续观察两周，记录受试小鼠行为、活动、摄食量、体重、粪便、死亡等情况，未死亡小鼠于两周后处死进行尸检。
3.1.2观察指标及试验结果按H3-I注射液40g/kg[1.33g/ml×30ml/kg]剂量静脉一次给药的10只小鼠，当天见小鼠毛色光滑、活动、摄食、粪便色泽与质地正常，与对照组比较无明显差异；且两周内无死亡及其它异常现象发生，两组同时处死后进行尸检，各主要脏器(心、肝、脾、肺、肾)经肉眼观察未见异常改变，与对照组比较无明显差异，结果见表2。
表2 H3-I注射液经静脉给药的小鼠最大给药量试验结果
上述试验结果表明10只小鼠给药后均无明显的毒性反应，并且两周内亦无死亡。而一次给药的小鼠最大给药量为40g/kg，按临床成人每日用量5g/60kg计算，则该药相当于临床成人用量的482倍。因此，本发明对人体基本没有毒副作用。
实施例4本实施例是为了说明本发明提供的药物的稳定性。
表3制剂初步稳定性试验报告
实施例5本实施例是为了说明本发明提供的药物对动物体急性脑缺血的保护作用。
1.实验条件及方法取ICR小鼠100只，雌雄兼备，随机分为5组，即模型组(给予等容积的生理盐水)、阳性药物组(尼膜同溶液2mg/kg)、舒络粉针剂(冻干)I(240mg/kg)、II(480mg/kg)、III(960mg/kg)3个剂量组共5组；各组均通过尾静脉给药，给药容积为20ml/kg。静脉给药10min后，仰卧位固定，用0号手术缝线两端结扎双侧颈总动脉(合并迷走神经)后中间剪断。记录小鼠的呼吸维持时间。
2.试验结果试验结果见表4。
表4舒络粉针剂(冻干)对小鼠急性脑缺血的保护作用(X±SD)剂量 动物数 呼吸维持时间组别(mg/kg) (只) (分钟)模型组 - 20 2.94±0.91尼膜同组2 20 7.08±3.72**舒络粉针剂(冻干)I 24020 4.63±3.22*舒络粉针剂(冻干)II 48020 6.84±3.89**舒络粉针剂(冻干)III96020 8.71±5.55**实施例6本实施例是为了说明本发明提供的药物对动物体的动静脉短路血栓的湿重、干重具有明显的降低作用，能提高血栓湿重、干重抑制率。同时，本实施例还说明了本发明提供的药物可以增加动物体红细胞变形能力，降低红细胞的聚集能力、血液粘度，抑制血小板聚集，减少血小板总数。
1.试验方法取SD雄性大鼠60只，体重350～450g，随机分为6组，即生理盐水组、模型组(以上两组给予等容积的生理盐水)、阳性药物组(8g/kg复方丹参注射液)、舒络粉针剂(冻干)I(120mg/kg)、II(240mg/kg)、III(480mg/kg)3个剂量组，给药容积为10ml/kg，iv连续给药6天，于第5次给药后，除生理盐水组外，各组动物皮下注射盐酸肾上腺素注射液0.8ml/kg共2次，间隔4h，在第二次注射Adr之间，将大鼠置于冰水中浸泡5min。造成血瘀症模型。禁食24小时后，与手术前15min给药1次，以10％水合氯醛麻醉(300mg/kg，ip)，仰位固定，颈动脉插管放血，用3.8％的枸椽酸钠或肝素纳生理盐水溶液(500u/1ml)按1∶9抗凝，检测血液流变学的各项指标。
2.实验检测指标(1)对大鼠血小板聚集性的影响将3.8％的枸椽酸钠抗凝的血液以800r/min离心10min，取富血小板血浆(PRP)，剩余部分以3000r/min离心，取贫血小板血浆(PPP)，利用LG-PABER型血小板聚集及凝血因子分析仪记录最大聚集率并按下列公式计算抑制率。结果见表5。
(2)血液粘度检测①全血粘度将肝素抗凝的血液采用LG-R-80系列血液粘度仪测定。
②血浆粘度全血测试完毕后，剩余血样以3000r/min离心，进行血浆粘度的测试。
③红细胞变形能力、红细胞聚集能力检测将肝素抗凝的血液采用LG-R-190型红细胞变形/聚集能力测定仪。
结果见表6、表8。
(3)凝血系统的检测将3.8％的枸椽酸钠抗凝的血液以3000r/min离心10min，分离贫血小板血浆，采用LG-PABER型血小板聚集及凝血因子分析仪测定活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、血浆纤维蛋白原(FIB)。结果见表7。
(4)血小板及血沉的检测大鼠眼眶取血，测定各组动物血小板总数及血沉，结果见表5。
表5舒络粉针剂(冻干)对血瘀症模型大鼠血小板总数、聚集率及血沉的影响(n＝10，X±s)剂量 血小板总数 血小板 聚集抑制率 血沉组别(mg/kg) (108个/ml)聚集率(％) (％) (mm/h)对照组 - 5.53±1.35 34.19±4.91 - 6.30±5.68模型组 - 7.71±2.27△ 38.98±4.80△ - 13.00±9.50复方丹参组 8g/kg 5.70±0.84*30.34±7.86* 22.17 8.40±6.10舒络粉针剂(冻干)I 1206.82±1.67 37.97±5.16 2.59 15.80±12.72舒络粉针剂(冻干)II 2406.22±1.66 36.45±7.37 6.49 12.70±11.63舒络粉针剂(冻干)III 4805.71±1.71*32.02±7.35* 17.86 10.20±6.96
表6舒络粉针剂(冻干)对血瘀症模型大鼠红细胞变形及聚集能力的影响(X±S)动物数 剂量 红细胞聚集能力红细胞变形能力组别(只) (mg/kg) MAXDI SSSMAXD SSS对照组 10 1.74±1.06359.02±242.1351.59±6.07251.31±21.41模型组 9 -- 3.80±2.46△817.50±587.0046.76±4.08240.18±34.37复方丹参组 98g/kg 1.87±0.32* 360.48±63.65*51.44±3.50* 263.98±32.37舒络粉针剂(冻干)I 10 1202.26±0.43444.79±75.56 49.30±4.96241.48±26.77舒络粉针剂(冻干)II 92402.22±0.61408.15±121.4248.05±4.16242.07±19.64舒络粉针剂(冻干)III 84801.92±0.46377.76±94.22*50.89±1.19* 263.98±32.37表7舒络粉针剂(冻干)对血瘀症模型大鼠APTT、PT、FIB的影响(X±s)动物数剂量APTT组别 PT(s) FIB(g/l)(只)(mg/kg) (s)对照组10-14.31±4.15 16.53±2.652.36±0.50模型组9 -8.69±3.58△△12.63±5.10△2.92±0.62△复方丹参组9 8g/kg 15.13±3.74* 17.44±6.092.38±0.41*舒络粉针剂(冻干)I 9 12010.61±5.29 14.97±6.412.68±0.48舒络粉针剂(冻干)II10 24014.46±6.15* 16.08±5.342.61±0.33舒络粉针剂(冻干)III 10 48014.55±5.12* 18.37±5.75* 2.49±0.54表8舒络粉针剂(冻干)对血瘀症模型大鼠血液粘度的影响(n＝8，X±s)全血粘度(CP)剂量 血采粘度组别(mg/kg) (100s-1)高切(200s-1) 中切(30s-1) 中切(5s-1)低切(1s-1)对照组 - 5.04±0.40 6.38±0.4912.52±2.4623.36±3.481.17±0.07模型组 - 5.47±0.53 6.92±0.8414.89±2.2527.72±3.13△1.24±0.12复方丹参组 8g/kg4.86±0.75 5.44±1.63* 10.08±4.33* 21.14±5.31** 1.15±0.22舒络粉针剂(冻干)I120 5.17±1.08 6.89±0.6115.04±2.8226.64±2.881.24±0.10舒络粉针剂(冻干)II 240 5.11±0.36 6.22±0.4913.55±1.9324.21±2.81* 1.16±0.15舒络粉针剂(冻干)III 480 5.08±0.76 6.22±0.8411.93±2.89* 21.62±3.99** 1.19±0.1权利要求
1.一种治疗脑梗塞疾病的药物，其特征在于它是由下述重量百分比的原料制成的药剂赤芍 20-50 栀子 25-50 地龙 15-40
2.根据权利要求1所述的治疗脑梗塞疾病的药物，其特征在于该药剂的原料组成重量百分比为赤芍 37.5 栀子 37.5 地龙 25
3.根据权利要求1或2所述的治疗脑梗塞疾病的药物，其特征在于所述的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。
4.根据权利要求3所述的治疗脑梗塞疾病的药物的剂型，其特征在于所述的药剂的剂型优选为是注射用粉针剂或口服制剂。
5.根据权利要求4所述的治疗脑梗塞疾病的药物的剂型，其特征在于所述的药剂的剂型优选为是注射用粉针剂。
6.根据权利要求1所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，其特征在于首先将赤芍、栀子、地龙等进行破壳、粉碎的预处理后，将上述药材经醇提、醇沉、碱沉、浓缩，得清膏，将清膏与吸收剂混合制成口服制剂。
7.根据权利要求1所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，其特征在于首先将赤芍、栀子、地龙等进行破壳、粉碎的预处理后，将上述药材经醇提、醇沉、碱沉、上层析柱，收集滤出液，浓缩，得清膏，将清膏用注射用水稀释超滤制成注射用制剂。
8.根据权利要求6或7所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，所用的醇可以是任一种有机醇。
9.根据权利要求6或7所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，所用的有机醇是乙醇。
10.根据权利要求6或7所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，醇提过程中所用醇的质量浓度为50-70％。
11.根据权利要求6或7所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，醇提过程所用的时间为1-2小时。
12.根据权利要求6或7所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，醇提过程中所用醇的量为所用药材总重量的4-8倍。
13.根据权利要求6或7所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，醇沉过程中所用醇的质量浓度为70-80％。
14.根据权利要求6或7所述的治疗脑梗塞疾病的药物的制备方法，碱沉过程中溶液的PH值为7.5-9.0。
全文摘要
本发明公开了一种新的治疗脑梗塞的药物及其制备方法。该药物是以赤芍、栀子、地龙为原料，根据每味中药的不同特性，首先将药材进行破壳、粉碎的预处理后，再进行醇提、醇沉、碱沉、浓缩，得清膏，将清膏与吸收剂混合制成口服制剂，或将上述药材经醇提、醇沉、碱沉、上层析柱，收集滤出液，浓缩，得清膏，将清膏用注射用水稀释超滤制成注射用粉针剂。本发明的原料配方独特，治疗效果显著。
文档编号A61P9/00GK1579466SQ03153210
公开日2005年2月16日 申请日期2003年8月7日 优先权日2003年8月7日
发明者方泰惠 申请人:南京中医药大学, 苏州医药集团有限公司
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