抗性病特异性IgY的制备方法及其组合制剂的制作方法
专利名称：抗性病特异性IgY的制备方法及其组合制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗性病特异性IgY(卵黄免疫球蛋白)及其制备方法，特别是涉及用于预防梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹性病的特异性复合IgY及其制备方法和组合制剂。
背景技术：
当前国内外治疗梅毒主要用大剂量的长效青霉素制剂，即普鲁卡因青霉素或苄星青霉素。如剂量不足，疗程不规则，可增加发生三期梅毒的危险性。治疗淋病主要应用抗生素，但由于淋病双球菌对很多抗生素出现耐药性，特别是耐青霉素和耐四环素及其他耐药菌株的出现，且日趋严重，青霉素和四环素已不再作为治疗淋病的第一线药物，改用使用第三代头孢类、大观霉素、喹喏酮类、阿齐霉素等治疗，但仍有高达6％-14％的耐药菌出现。对尖锐湿疣治疗目前无确切疗效药物，主要用外科切除、电凝、冷冻疗法、CO2激光疗法等，但都无法根除尖锐湿疣病毒，即人乳头瘤病毒(HPV)。GH经一般治疗或抗病毒治疗可使病情缓解，但大多数患者不能根除单纯疱疹病毒(HSV)。
更重要的是应用上述治疗常见性病过程中，会破坏阴道或尿道局部微生态平衡，不仅杀死了有害菌，也杀灭了正常菌群，如乳酸杆菌、棒状杆菌、肠球菌、非溶血链球菌等有益菌。乳酸杆菌使阴道或尿道局部形成弱酸性或低pH值，从而抑制了其他微生物和病毒的过度生长和粘附，其他杆菌繁殖又促进了有益厌氧菌生长，因而从正反两方面维持了阴道或尿道正常菌群平衡，对增强免疫力十分有益。使用抗生素治疗性病，不仅产生耐药菌株，还将杀灭乳酸杆菌等有益菌，破坏正常菌群平衡，使阴道或尿道失去原有的天然防御疾病的屏障，反而加重病情。
因此，目前国内外对上述多发性性病尚没有理想的、环保的、无毒副作用的预防和治疗药物或手段。
抗四种性病特异性复合IgY属IgG类免疫球蛋白，主要用导致梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹的四种病原体免疫良种产蛋母鸡，使之卵内产生大量相应的IgY，经提取、分离、纯化而制得特异性的复合卵黄抗体。这种复合抗体对引起梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹的病原体有特异性结合和抑灭作用。在浓度极低的情况下(50ng/ml)就能起到有效作用。它的特点是只对病灶病原体起抑灭作用，而对共生有益菌则秋毫无犯，这与化学药品和抗生素的作用是截然不同的。用该复合抗体(IgY)治疗，既可保护病灶部位的微生态平衡，又可抑灭病原体，起到预防和保健的作用。这在国内外预防性病方面，是一项开创性的先例。
技术内容本发明的目的是提供一种直接抑灭梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹病原体的特异性复合IgY的制备方法；本发明的目的还在于提供一种由可直接抑灭苍白密螺旋体(treponema pallidum，TP)、淋病双球菌(gonococci，GC)、人类乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)和II型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus-2，HSV-2)的特异性复合IgY制成的高效、特效生物制剂，并由不同的剂型组成。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的1、根据流行病学调查，选取TP、GC、HPV和HSV-2作为具代表性的性病病原体；2、抗原制备采用TP、GC、HPV和HSV-2标准株，按常规方法分别进行培养。收集培养物，然后提纯、稀释分装。将此四种病原体液按1∶1∶1∶1比例混合，再加入等量福氏佐剂，置高速匀浆机中，10,000-20,000rpm匀化，使形成油包水乳状液，即为TP、GC、HPV和HSV-2四种复合抗原；3、制备免疫蛋选取高免疫应答性、健康、无特殊病原体携带的(SPF)的产蛋母禽(包括产鸡、鸭、鹅、火鸡和鸵鸟等)进行强化免疫，在胸肌或皮下注射，每2周注射一次，计3次。第一次注射后第20天开始拣取免疫蛋；4、抗四种性病特异性复合IgY粗提物的制备用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入4-8倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0N HCL溶度调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩10-20倍，继而冷冻干燥，即得抗四种性病特异性复合IgY粗提物；5、抗四种性病特异性复合IgY纯品的制备将以上四种性病特异性复合IgY粗提物先后过离子交换树脂柱和凝胶层系析柱进行纯化，即制得该特异性复合IgY纯品；6、经用SDS-PAGE测定抗四种性病复合IgY纯品，达到PAGE纯。用酶联免疫吸附法(ELISA法)测得该复合IgY的四种抗体(抗-TP，抗-GC，抗-HPV，抗-HSV-2)效价分别达1∶512-1∶1024。
本发明另又采用上述方法制备得到的四种单一的抗性病特异性IgY，加以混合，制成另
实施例5
本发明的实施例与现有技术的性能的对比
从以上结果看，抗HPV特异性IgY，抗HPV活性十分理想。
实验例4将HSV-2按上述技术内容第2条的方法制作抗原，再用这种抗原免疫产蛋母鸡，并采用本发明技术内容第4条的方法制备抗HSV-2特异性IgY。分别以HSV-1和HSV-2作为检测抗原，用ELISA法检测所制得的抗HSV-2特异性IgY抗体效价。
结果如下表
从以上结果看出，不但对直接作为抗原免疫的HSV-2有高的抗体效价，而且对没有直接作为抗原免疫的同种不同型的HSV-1也有一定的抗HSV-1活性。这提示HSV-1和HSV-2具有共同抗原决定簇。
实验例5将抗TP特异性IgY，抗GC特异性IgY、抗HPV特异性IgY和抗HSV-2特异性IgY等量混合，加无菌蒸馏水稀释至0.4％浓度。分别以TP、GC、HPV、HSV-2作为检测抗原，用ELISA法检测此抗四种性病特异性复合IgY的抗体效价，结果如下表
从以上结果看出，以上述四种特异性IgY混合所制备的抗四种性病特异性复合IgY，达到抗四种性病病原体的理想活性效果。
实验例6将上述技术内容第2条的方法制作的四种复合抗原，分别免疫产蛋母鸭、产蛋母鹅、产蛋火鸡以及产蛋鸵鸟，再分别采用本发明的方法制备得到(1)抗四种性病特异性复合鸭IgY、(2)抗四种性病特异性复合鹅IgY、(3)抗四种性病特异性复合火鸡IgY、(5)抗四种性病特异性复合鸵鸟IgY。然后用ELISA方法，分别以TP、GC、HPV、HSV-2作为检测抗原，检测所制得的抗四种性病特异性复合IgY的抗体效价。
从以上试验结果可以看出，采用本发明的方法制作抗原，分别免疫产蛋母鸭、产蛋母鹅、产蛋火鸡和产蛋鸵鸟，再采用本发明的方法分别制得抗四种性病特异性复合鸭IgY、抗四种性病特异性复合鹅IgY、抗四种性病特异性复合火鸡IgY、抗四种性病特异性复合鸵鸟IgY四种不同的IgY，虽然免疫的禽类不同，但均获得了较高的效价。虽然免疫产蛋鸵鸟和产蛋火鸡所制得的IgY抗体效价稍微低了一些，但是，由于鸵鸟和火鸡蛋个体重量重，每个免疫蛋所能提取得到的IgY比鸡免疫蛋、鸭免疫蛋和鹅免疫蛋皆量大，这点对于工业化大规模生产，也是十分可取的。
实施例1制备抗四种性病特异性复合IgY抗原制备选取TP、GC、HPV和HSV-2标准株，分别按他们的培养特性和最适培养条件，选择适宜的培养基以常规方法进行大量培养与繁殖，收集培养物，然后提纯、稀释分装；将TP、GC、HPV和HSV-2四种病原体液，按1∶1∶1∶1比例混合，再加福氏佐剂，置高速匀浆机中，以10000-30000rpm匀化，形成油包水乳液，即制得TP、GC、人HPV和HSV-2四种复合抗原；制备免疫蛋选择具有高免疫应答能力、健康、无特殊病原体携带(SPF)的产蛋母鸡进行免疫。在胸肌或皮下注射上述复合抗原1ml，每二周注射一次，计3次。第一次注射后从第20天开始拣取免疫蛋。
抗四种性病特异性复合IgY粗提物的制备用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入6倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0NHCl溶度调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，以10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩15倍，继而冷冻干燥，即得抗四种性病的特异性复合IgY粗提物；抗四种性病特异性复合IgY纯品的制备将以上IgY粗提物先后过离子交换树脂柱和凝胶层析柱进行纯化，即制得IgY纯品；实施例2制备抗四种性病特异性复合鸭IgY用TP制作抗原，分别免疫高免疫应答的500只母鸭。每次注射1ml抗原，每隔二周再注射一次，共三次。于第一次注射后第七个月，把这些鸭所产的蛋标记后按常规方法分别提取其IgY，以ELISA法检测其效价，选出其中达到效价≥1∶256的鸭200只，再用这批鸭所产的蛋孵出优良鸭种，待其长大至2-3个月，作为优选的特种母鸭；用实施例1中的四种复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合免疫，每只母鸭每次注射1ml抗原，每隔二周注射一次，共免疫三次；第一次免疫20天后，逐日检取母鸭所产免疫蛋；用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入6倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0N HCl溶度调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩15倍，冷冻干燥，即得抗四种性病的特异性鸭复合IgY粗提物；特异性鸭IgY粗提物的纯化将以上所制取的IgY粗提物，先后过离子交换树脂柱和凝胶层析柱进行纯化，即制得抗四种性病特异性复合鸭IgY纯品；
实施例3制备抗四种性病特异性复合火鸡IgY用TP制作抗原，分别免疫高免疫应答500只产蛋火鸡。每次注射1ml抗原，在第一次注射后，每隔二周注射一次，共三次。于第一次注射后第七个月，把这些火鸡所产的蛋标记后，按常规方法分别提取其IgY；以ELISA法检测其效价。选出其中达到效价≥1∶256的火鸡200只，再用这批火鸡所产的蛋孵出优良火鸡种。待长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答的特种产蛋火鸡；用实施例1中的四种复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的免疫法，分别对优选的特种产蛋火鸡进行免疫。每只火鸡每次注射3ml抗原，每隔二周注射一次，共免疫三次。第一次免疫20天后，逐日检取产蛋火鸡所产免疫蛋；用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入6倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0N HCl溶度调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩15倍，冷冻干燥，即得抗四种性病的特异性复合火鸡IgY粗提物；特异性火鸡IgY粗提物的纯化将以上所制取的火鸡IgY粗提物先后过离子交换树脂柱和凝胶层析柱进行纯化，即制得抗四种性病特异性复合火鸡IgY纯品；实施例4抗四种性病特异性复合IgY洗液的制备取抗四种性病特异性复合IgY粗提物150g，按以下配方调配100升抗四种性病特异性复合IgY洗液抗四种性病特异性复合IgY粗提物 150g甘油 1500ml桉叶油 100mi薄荷香精 100ml香橙香精 100ml冰片 100g乙醇 750ml蒸馏水 加至100升先取蒸馏水80升，然后分别加入甘油、复合IgY搅拌溶解；再取配方量的桉叶油、薄荷香精、香橙香精、冰片加入配方量的乙醇溶解，并在搅拌下缓缓加入前述溶液中；充分搅拌均匀，调整溶液pH值至6.5-7.0，最后补加蒸馏水至100升，无菌过滤即得。
实施例5抗四种性病特异性复合IgY喷雾剂的制备取抗四种性病特异性复合IgY粗提物100g，按以下配方调配100升抗四种性病特异性复合IgY喷雾剂抗四种性病特异性复合IgY粗提物100g薄荷香精 100ml香橙香精 100ml甘油 100ml蒸馏水 加至100升先取蒸馏水80升，然后加入甘油、复合IgY搅拌溶解；将薄荷香精、香橙香精溶于适量乙醇中，在搅拌下缓缓加入前述溶液中；充分搅拌均匀，调整溶液pH值至6.5-7.0；最后补加蒸馏水至100升，无菌操作过滤和喷瓶灌装即得。
实施例6抗四种性病特异性复合IgY乳膏剂的制备抗四种性病特异性复合IgY粗提物2％十八烷酸 6.0％液体石蜡 9.0％白凡士林 6.0％span-80 0.85％甘 油 11％山梨酸钾 0.1％吐温-80 4.5％薄荷醇 0.2％蒸馏水 加至100％油相和水相分别加热至80℃，将水相在搅拌下缓缓加入油相中，搅拌冷凝至40℃左右，加入复合IgY溶液，充分研磨搅拌均匀制成水色油乳膏，即得。
实施例7抗四种性病特异性复合IgY泡腾片(胶囊)的制备抗四种性病特异性复合IgY粗提物0.1％碳酸氢钠 17％无水柠檬酸 15％硼酸 5％乳糖 31％微晶纤维素 30％稳泡剂 0.4％10％PVP无水乙醇液适量硬脂酸镁 1％除IgY、硼酸、硬脂酸镁外，按常规将泡腾剂及其他辅料混匀，用PVP无水乙醇液制粒、干燥、整粒，然后加入复合IgY和硬脂酸镁、硼酸混匀，压片或填充胶囊。
权利要求
1.一种抗性病特异性IgY，其特征在于该抗性病特异性IgY的制备方法包括下列步骤优选引致性病的主要致病病原体，分别制备引致性病的各种病原体的单一或复合抗原；制备免疫蛋；制备抗性病各种病原体特异性IgY粗提物；抗性病各种病原体特异性IgY粗提物的纯化。
2.如权利要求1所述的抗性病特异性IgY，其特征在于该抗性病特异性IgY的制备方法包括下列步骤筛选引致性病的病原体，按照这些病原体的培养特性和最适培养条件，分别选择适宜的培养基，进行培养繁殖，收集培养物、提纯、稀释分装，分别将各种病原体一定数量加入福氏佐剂，置高速匀浆机中以10000-30000r/min匀化，使成油包水乳状液，即制得各种性病病原体抗原；制备免疫蛋选择具有高免疫应答的SPF、健康产蛋禽类，每只在胸肌或皮下分别注射所制备的病原体抗原。在第一次注射后间隔2周，再以同样剂量、方法注射第二次；第二次注射后再间隔2周以相同剂量注射第三次。第一次注射后从第20天开始拣取免疫蛋，并对应不同抗原对免疫蛋编号标记；抗性病病原体特异性IgY粗提物的制备将不同抗原分别免疫的禽类所产免疫蛋分别用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤]除蛋清留下蛋黄，加入4-8倍蒸馏水稀释搅拌均匀，1.0N HCL调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩10-20倍，冷冻干燥，即得抗四种性病的特异性IgY粗提物；抗性病病原体特异性IgY纯品的制备将以上所制取的抗性病病原体特异性IgY粗提物过离子交换树脂柱和凝胶层析柱进行纯化，即得纯特异性IgY；
3.如权利要求1或2所述的抗性病特异性IgY，其特征在于该抗性病特异性IgY的制备方法中引致性病的病原体包括苍白密螺旋体(TP)、淋病双球菌(GC)、人类乳头瘤病毒(HPV)和II型单纯疱疹病毒(HSV-2)。
4.一种抗四种性病特异性复合IgY，其特征在于该抗四种性病特异性复合IgY的制备方法是将上述不同抗原制得的IgY粗提物或纯化物，按照1-10∶1-10∶1-10∶1-10的比例混合均匀，即得。
5.如权利要求4所述的抗四种性病特异性复合IgY，其特征在于该抗四种性病特异性复合IgY粗提物或纯化物0.02-80％，配以99.98-20％的辅料，可以制成临床可接受的剂型，剂型包括洗液、喷雾剂、凝胶剂、乳膏剂、泡腾片(胶囊)。
6.一种抗四种性病特异性复合IgY，其特征在于该抗四种性病特异性复合IgY的制备方法包括下列步骤抗原制备选取TP、GC、HPV和HSV-2标准株，分别按他们的培养特性和最适培养条件，选择适宜的培养基，以常规方法进行大量培养与繁殖，收集培养物，然后提纯、稀释分装；将TP、GC、HPV和HSV-2四种病原体液，按1∶1∶1∶1比例混合，再加入等量福氏佐剂置高速匀浆机中，以10000-30000rpm匀化，使形成油包水乳状，即制得TP、GC、HPV和HSV-2四种复合抗原；制备免疫蛋选择具有高免疫应答能力的SPF、健康产蛋母鸡进行免疫。在胸肌或皮下注射一种上述抗原1ml，每隔2周注射一次，共计3次，第一次注射后从第20天开始拣取免疫蛋；抗四种性病特异性复合IgY粗提物的制备用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入6倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0N HCl溶度调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩15倍，冷冻干燥，即得抗四种性病的特异性复合IgY粗提物；抗四种性病特异性复合IgY纯品的制备将以上所制取的抗四种性病特异性复合IgY粗提物先后过离子交换树脂柱和凝胶层析柱进行纯化，即制得特异性复合IgY纯品；
7.一种抗四种性病特异性复合鸭IgY，其特征在于该抗四种性病特异性复合鸭IgY的制备方法包括下列步骤用TP制作抗原，分别免疫高免疫应答的500只母鸭，每次注射1ml抗原，在第一次注射后，每隔二周注射一次，共三次，于第一次注射后第七个月，把这些鸭所产的蛋标记后按常规方法分别提取其IgY，以ELISA法检测其IgY效价。选出其中达到效价≥1∶256的鸭200只，再用这批鸭所产的蛋孵出优良鸭种，待其长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答能力的特种母鸭；用制备的TP、GC、HPV和HSV-2复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的免疫法，分别对优选的特种母鸭进行免疫，每只母鸭每次注射1ml抗原，每隔二周注射一次，共免疫三次，第一次免疫20天后，逐日检取母鸭所产免疫蛋；用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入6倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0N HCl调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩15倍，冷冻干燥，即得抗四种性病特异性复合鸭IgY粗提物；特异性复合鸭IgY粗提物的纯化将以上所制取的抗四种性病特异性复合鸭IgY粗提物先后过离子交换树脂柱和凝胶层析柱进行纯化，即制得特异性复合鸭IgY纯品；
8.一种抗四种性病特异性复合火鸡IgY，其特征在于该抗四种性病特异性复合火鸡IgY的制备方法包括下列步骤用TP制作抗原，分别免疫高免疫应答的500只产蛋火鸡，每次注射1ml抗原；在第一次注射后，每隔二周再注射一次，共三次，于第一次注射后第七个月，把这些火鸡所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的IgY，以ELISA法检测其IgY的效价，选出其中达到效价≥1∶256的火鸡200只，再用这批火鸡所产的蛋孵出优良火鸡种，待其长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答能力的特种产蛋火鸡；用制备的TP、GC、HPV和HSV-2种复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的免疫法，分别对优选的特种火鸡进行免疫，每只产蛋火鸡每次注射3ml抗原，每隔二周注射一次，共免疫三次，第一次免疫20天后，逐日检取火鸡所产免疫蛋；用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入6倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0N HCl溶度调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩15倍，冷冻干燥，即得抗四种性病特异性复合火鸡IgY粗提物；特异性复合火鸡IgY粗提物的纯化将以上所制取的抗四种性病特异性复合火鸡IgY粗提物先后过离子交换树脂柱和凝胶层析柱进行纯化，即制得特异性复合火鸡IgY纯品；
9.一种抗性病特异性复合IgY洗液的制备方法，其特征在于该方法为取抗四种性病特异性复合IgY粗提物150g，按以下配方调配100升抗四种性病特异性复合IgY洗液抗性病特异性复合IgY粗提物150g甘油1500ml桉叶油 100ml薄荷香精100ml香橙香精100ml冰片100g乙醇750ml蒸馏水 加至100升先取蒸馏水80升，然后分别加入甘油、复合IgY搅拌溶解；再取配方量的桉叶油、薄荷香精、香橙香精、冰片加入配方量的乙醇溶解，并在搅拌下缓缓加入前述溶液中；充分搅拌均匀，调整溶液pH值至6.5-7.0，最后补加蒸馏水至100升，无菌过滤即得。
10.一种抗四种性病特异性复合IgY喷雾剂的制备方法，其特征在于该方法为取抗四种性病特异性复合IgY粗提物100g，按以下配方调配100升抗四种性病特异性复合IgY喷雾剂抗四种性病特异性复合IgY 100g薄荷香精100ml香橙香精100ml甘油100ml蒸馏水 加至100升先取蒸馏水80升，然后加入甘油、复合IgY搅拌溶解；将薄荷香精、香橙香精溶于适量乙醇中，在搅拌下缓缓加入前述溶液中；充分搅拌均匀，调整溶液pH值至6.5-7.0；最后补加蒸馏水至100升，无菌操作过滤和喷瓶灌装即得。
11.一种抗四种性病特异性复合IgY乳膏剂的制备方法，其特征在于该方法为配方抗四种性病特异性复合IgY粗提物 2％十八烷酸 6.0％液体石蜡 9.0％白凡士林 6.0％span-800.85％甘油 11％山梨酸钾 0.1％吐温-804.5％薄荷醇 0.2％蒸馏水 加至100％油相和水相分别加热至80℃，将水相在搅拌下缓缓加入油相中，搅拌冷凝至40℃左右，加入复合IgY溶液，充分研磨搅拌均匀制成水色油乳膏，即得。
12.一种抗四种性病特异性复合IgY泡腾片(胶囊)的制备方法，其特征在于该方法为配方；抗四种性病特异性复合IgY粗提物 0.1％碳酸氢钠 17％无水柠檬酸 15％硼 酸 5％乳 糖 31％微晶纤维素 30％稳泡剂 0.4％10％PVP无水乙醇液 适量硬脂酸镁 1％除IgY、硼酸、硬脂酸镁外，按常规将泡腾剂及其他辅料混匀，用PVP无水乙醇液制粒、干燥、整粒，然后加入复合IgY和硬脂酸镁、硼酸混匀，压片或填充胶囊。
全文摘要
本发明了一种抗性病特异性IgY及其制备方法和制剂。本发明制备方法包括下列步骤分离和培养出引致性病的致病病原体，在分类和组合各种病原体的基础上，分别制备单一或复合的病原体抗原，制备免疫蛋，制备抗性病各种病原体特异性IgY粗提物，抗性病各种病原体特异性IgY粗提物的纯化，以及制备有关多种制剂。本发明抗性病特异性IgY多种制剂用于各种性病的预防和治疗，具有特效、安全、使用方便的特点。
文档编号A61P31/12GK1485343SQ0315363
公开日2004年3月31日 申请日期2003年8月18日 优先权日2003年8月18日
发明者包晟, 杨荣鑑, 林元藻, 包 晟 申请人:雅臣药业集团(远东)有限公司
技术领域：
本发明涉及一种抗性病特异性IgY(卵黄免疫球蛋白)及其制备方法，特别是涉及用于预防梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹性病的特异性复合IgY及其制备方法和组合制剂。
背景技术：
当前国内外治疗梅毒主要用大剂量的长效青霉素制剂，即普鲁卡因青霉素或苄星青霉素。如剂量不足，疗程不规则，可增加发生三期梅毒的危险性。治疗淋病主要应用抗生素，但由于淋病双球菌对很多抗生素出现耐药性，特别是耐青霉素和耐四环素及其他耐药菌株的出现，且日趋严重，青霉素和四环素已不再作为治疗淋病的第一线药物，改用使用第三代头孢类、大观霉素、喹喏酮类、阿齐霉素等治疗，但仍有高达6％-14％的耐药菌出现。对尖锐湿疣治疗目前无确切疗效药物，主要用外科切除、电凝、冷冻疗法、CO2激光疗法等，但都无法根除尖锐湿疣病毒，即人乳头瘤病毒(HPV)。GH经一般治疗或抗病毒治疗可使病情缓解，但大多数患者不能根除单纯疱疹病毒(HSV)。
更重要的是应用上述治疗常见性病过程中，会破坏阴道或尿道局部微生态平衡，不仅杀死了有害菌，也杀灭了正常菌群，如乳酸杆菌、棒状杆菌、肠球菌、非溶血链球菌等有益菌。乳酸杆菌使阴道或尿道局部形成弱酸性或低pH值，从而抑制了其他微生物和病毒的过度生长和粘附，其他杆菌繁殖又促进了有益厌氧菌生长，因而从正反两方面维持了阴道或尿道正常菌群平衡，对增强免疫力十分有益。使用抗生素治疗性病，不仅产生耐药菌株，还将杀灭乳酸杆菌等有益菌，破坏正常菌群平衡，使阴道或尿道失去原有的天然防御疾病的屏障，反而加重病情。
因此，目前国内外对上述多发性性病尚没有理想的、环保的、无毒副作用的预防和治疗药物或手段。
抗四种性病特异性复合IgY属IgG类免疫球蛋白，主要用导致梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹的四种病原体免疫良种产蛋母鸡，使之卵内产生大量相应的IgY，经提取、分离、纯化而制得特异性的复合卵黄抗体。这种复合抗体对引起梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹的病原体有特异性结合和抑灭作用。在浓度极低的情况下(50ng/ml)就能起到有效作用。它的特点是只对病灶病原体起抑灭作用，而对共生有益菌则秋毫无犯，这与化学药品和抗生素的作用是截然不同的。用该复合抗体(IgY)治疗，既可保护病灶部位的微生态平衡，又可抑灭病原体，起到预防和保健的作用。这在国内外预防性病方面，是一项开创性的先例。
技术内容本发明的目的是提供一种直接抑灭梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹病原体的特异性复合IgY的制备方法；本发明的目的还在于提供一种由可直接抑灭苍白密螺旋体(treponema pallidum，TP)、淋病双球菌(gonococci，GC)、人类乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)和II型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus-2，HSV-2)的特异性复合IgY制成的高效、特效生物制剂，并由不同的剂型组成。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的1、根据流行病学调查，选取TP、GC、HPV和HSV-2作为具代表性的性病病原体；2、抗原制备采用TP、GC、HPV和HSV-2标准株，按常规方法分别进行培养。收集培养物，然后提纯、稀释分装。将此四种病原体液按1∶1∶1∶1比例混合，再加入等量福氏佐剂，置高速匀浆机中，10,000-20,000rpm匀化，使形成油包水乳状液，即为TP、GC、HPV和HSV-2四种复合抗原；3、制备免疫蛋选取高免疫应答性、健康、无特殊病原体携带的(SPF)的产蛋母禽(包括产鸡、鸭、鹅、火鸡和鸵鸟等)进行强化免疫，在胸肌或皮下注射，每2周注射一次，计3次。第一次注射后第20天开始拣取免疫蛋；4、抗四种性病特异性复合IgY粗提物的制备用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入4-8倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0N HCL溶度调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩10-20倍，继而冷冻干燥，即得抗四种性病特异性复合IgY粗提物；5、抗四种性病特异性复合IgY纯品的制备将以上四种性病特异性复合IgY粗提物先后过离子交换树脂柱和凝胶层系析柱进行纯化，即制得该特异性复合IgY纯品；6、经用SDS-PAGE测定抗四种性病复合IgY纯品，达到PAGE纯。用酶联免疫吸附法(ELISA法)测得该复合IgY的四种抗体(抗-TP，抗-GC，抗-HPV，抗-HSV-2)效价分别达1∶512-1∶1024。
本发明另又采用上述方法制备得到的四种单一的抗性病特异性IgY，加以混合，制成另
实施例5
本发明的实施例与现有技术的性能的对比
从以上结果看，抗HPV特异性IgY，抗HPV活性十分理想。
实验例4将HSV-2按上述技术内容第2条的方法制作抗原，再用这种抗原免疫产蛋母鸡，并采用本发明技术内容第4条的方法制备抗HSV-2特异性IgY。分别以HSV-1和HSV-2作为检测抗原，用ELISA法检测所制得的抗HSV-2特异性IgY抗体效价。
结果如下表
从以上结果看出，不但对直接作为抗原免疫的HSV-2有高的抗体效价，而且对没有直接作为抗原免疫的同种不同型的HSV-1也有一定的抗HSV-1活性。这提示HSV-1和HSV-2具有共同抗原决定簇。
实验例5将抗TP特异性IgY，抗GC特异性IgY、抗HPV特异性IgY和抗HSV-2特异性IgY等量混合，加无菌蒸馏水稀释至0.4％浓度。分别以TP、GC、HPV、HSV-2作为检测抗原，用ELISA法检测此抗四种性病特异性复合IgY的抗体效价，结果如下表
从以上结果看出，以上述四种特异性IgY混合所制备的抗四种性病特异性复合IgY，达到抗四种性病病原体的理想活性效果。
实验例6将上述技术内容第2条的方法制作的四种复合抗原，分别免疫产蛋母鸭、产蛋母鹅、产蛋火鸡以及产蛋鸵鸟，再分别采用本发明的方法制备得到(1)抗四种性病特异性复合鸭IgY、(2)抗四种性病特异性复合鹅IgY、(3)抗四种性病特异性复合火鸡IgY、(5)抗四种性病特异性复合鸵鸟IgY。然后用ELISA方法，分别以TP、GC、HPV、HSV-2作为检测抗原，检测所制得的抗四种性病特异性复合IgY的抗体效价。
从以上试验结果可以看出，采用本发明的方法制作抗原，分别免疫产蛋母鸭、产蛋母鹅、产蛋火鸡和产蛋鸵鸟，再采用本发明的方法分别制得抗四种性病特异性复合鸭IgY、抗四种性病特异性复合鹅IgY、抗四种性病特异性复合火鸡IgY、抗四种性病特异性复合鸵鸟IgY四种不同的IgY，虽然免疫的禽类不同，但均获得了较高的效价。虽然免疫产蛋鸵鸟和产蛋火鸡所制得的IgY抗体效价稍微低了一些，但是，由于鸵鸟和火鸡蛋个体重量重，每个免疫蛋所能提取得到的IgY比鸡免疫蛋、鸭免疫蛋和鹅免疫蛋皆量大，这点对于工业化大规模生产，也是十分可取的。
实施例1制备抗四种性病特异性复合IgY抗原制备选取TP、GC、HPV和HSV-2标准株，分别按他们的培养特性和最适培养条件，选择适宜的培养基以常规方法进行大量培养与繁殖，收集培养物，然后提纯、稀释分装；将TP、GC、HPV和HSV-2四种病原体液，按1∶1∶1∶1比例混合，再加福氏佐剂，置高速匀浆机中，以10000-30000rpm匀化，形成油包水乳液，即制得TP、GC、人HPV和HSV-2四种复合抗原；制备免疫蛋选择具有高免疫应答能力、健康、无特殊病原体携带(SPF)的产蛋母鸡进行免疫。在胸肌或皮下注射上述复合抗原1ml，每二周注射一次，计3次。第一次注射后从第20天开始拣取免疫蛋。
抗四种性病特异性复合IgY粗提物的制备用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入6倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0NHCl溶度调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，以10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩15倍，继而冷冻干燥，即得抗四种性病的特异性复合IgY粗提物；抗四种性病特异性复合IgY纯品的制备将以上IgY粗提物先后过离子交换树脂柱和凝胶层析柱进行纯化，即制得IgY纯品；实施例2制备抗四种性病特异性复合鸭IgY用TP制作抗原，分别免疫高免疫应答的500只母鸭。每次注射1ml抗原，每隔二周再注射一次，共三次。于第一次注射后第七个月，把这些鸭所产的蛋标记后按常规方法分别提取其IgY，以ELISA法检测其效价，选出其中达到效价≥1∶256的鸭200只，再用这批鸭所产的蛋孵出优良鸭种，待其长大至2-3个月，作为优选的特种母鸭；用实施例1中的四种复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合免疫，每只母鸭每次注射1ml抗原，每隔二周注射一次，共免疫三次；第一次免疫20天后，逐日检取母鸭所产免疫蛋；用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入6倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0N HCl溶度调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩15倍，冷冻干燥，即得抗四种性病的特异性鸭复合IgY粗提物；特异性鸭IgY粗提物的纯化将以上所制取的IgY粗提物，先后过离子交换树脂柱和凝胶层析柱进行纯化，即制得抗四种性病特异性复合鸭IgY纯品；
实施例3制备抗四种性病特异性复合火鸡IgY用TP制作抗原，分别免疫高免疫应答500只产蛋火鸡。每次注射1ml抗原，在第一次注射后，每隔二周注射一次，共三次。于第一次注射后第七个月，把这些火鸡所产的蛋标记后，按常规方法分别提取其IgY；以ELISA法检测其效价。选出其中达到效价≥1∶256的火鸡200只，再用这批火鸡所产的蛋孵出优良火鸡种。待长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答的特种产蛋火鸡；用实施例1中的四种复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的免疫法，分别对优选的特种产蛋火鸡进行免疫。每只火鸡每次注射3ml抗原，每隔二周注射一次，共免疫三次。第一次免疫20天后，逐日检取产蛋火鸡所产免疫蛋；用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入6倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0N HCl溶度调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩15倍，冷冻干燥，即得抗四种性病的特异性复合火鸡IgY粗提物；特异性火鸡IgY粗提物的纯化将以上所制取的火鸡IgY粗提物先后过离子交换树脂柱和凝胶层析柱进行纯化，即制得抗四种性病特异性复合火鸡IgY纯品；实施例4抗四种性病特异性复合IgY洗液的制备取抗四种性病特异性复合IgY粗提物150g，按以下配方调配100升抗四种性病特异性复合IgY洗液抗四种性病特异性复合IgY粗提物 150g甘油 1500ml桉叶油 100mi薄荷香精 100ml香橙香精 100ml冰片 100g乙醇 750ml蒸馏水 加至100升先取蒸馏水80升，然后分别加入甘油、复合IgY搅拌溶解；再取配方量的桉叶油、薄荷香精、香橙香精、冰片加入配方量的乙醇溶解，并在搅拌下缓缓加入前述溶液中；充分搅拌均匀，调整溶液pH值至6.5-7.0，最后补加蒸馏水至100升，无菌过滤即得。
实施例5抗四种性病特异性复合IgY喷雾剂的制备取抗四种性病特异性复合IgY粗提物100g，按以下配方调配100升抗四种性病特异性复合IgY喷雾剂抗四种性病特异性复合IgY粗提物100g薄荷香精 100ml香橙香精 100ml甘油 100ml蒸馏水 加至100升先取蒸馏水80升，然后加入甘油、复合IgY搅拌溶解；将薄荷香精、香橙香精溶于适量乙醇中，在搅拌下缓缓加入前述溶液中；充分搅拌均匀，调整溶液pH值至6.5-7.0；最后补加蒸馏水至100升，无菌操作过滤和喷瓶灌装即得。
实施例6抗四种性病特异性复合IgY乳膏剂的制备抗四种性病特异性复合IgY粗提物2％十八烷酸 6.0％液体石蜡 9.0％白凡士林 6.0％span-80 0.85％甘 油 11％山梨酸钾 0.1％吐温-80 4.5％薄荷醇 0.2％蒸馏水 加至100％油相和水相分别加热至80℃，将水相在搅拌下缓缓加入油相中，搅拌冷凝至40℃左右，加入复合IgY溶液，充分研磨搅拌均匀制成水色油乳膏，即得。
实施例7抗四种性病特异性复合IgY泡腾片(胶囊)的制备抗四种性病特异性复合IgY粗提物0.1％碳酸氢钠 17％无水柠檬酸 15％硼酸 5％乳糖 31％微晶纤维素 30％稳泡剂 0.4％10％PVP无水乙醇液适量硬脂酸镁 1％除IgY、硼酸、硬脂酸镁外，按常规将泡腾剂及其他辅料混匀，用PVP无水乙醇液制粒、干燥、整粒，然后加入复合IgY和硬脂酸镁、硼酸混匀，压片或填充胶囊。
权利要求
1.一种抗性病特异性IgY，其特征在于该抗性病特异性IgY的制备方法包括下列步骤优选引致性病的主要致病病原体，分别制备引致性病的各种病原体的单一或复合抗原；制备免疫蛋；制备抗性病各种病原体特异性IgY粗提物；抗性病各种病原体特异性IgY粗提物的纯化。
2.如权利要求1所述的抗性病特异性IgY，其特征在于该抗性病特异性IgY的制备方法包括下列步骤筛选引致性病的病原体，按照这些病原体的培养特性和最适培养条件，分别选择适宜的培养基，进行培养繁殖，收集培养物、提纯、稀释分装，分别将各种病原体一定数量加入福氏佐剂，置高速匀浆机中以10000-30000r/min匀化，使成油包水乳状液，即制得各种性病病原体抗原；制备免疫蛋选择具有高免疫应答的SPF、健康产蛋禽类，每只在胸肌或皮下分别注射所制备的病原体抗原。在第一次注射后间隔2周，再以同样剂量、方法注射第二次；第二次注射后再间隔2周以相同剂量注射第三次。第一次注射后从第20天开始拣取免疫蛋，并对应不同抗原对免疫蛋编号标记；抗性病病原体特异性IgY粗提物的制备将不同抗原分别免疫的禽类所产免疫蛋分别用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤]除蛋清留下蛋黄，加入4-8倍蒸馏水稀释搅拌均匀，1.0N HCL调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩10-20倍，冷冻干燥，即得抗四种性病的特异性IgY粗提物；抗性病病原体特异性IgY纯品的制备将以上所制取的抗性病病原体特异性IgY粗提物过离子交换树脂柱和凝胶层析柱进行纯化，即得纯特异性IgY；
3.如权利要求1或2所述的抗性病特异性IgY，其特征在于该抗性病特异性IgY的制备方法中引致性病的病原体包括苍白密螺旋体(TP)、淋病双球菌(GC)、人类乳头瘤病毒(HPV)和II型单纯疱疹病毒(HSV-2)。
4.一种抗四种性病特异性复合IgY，其特征在于该抗四种性病特异性复合IgY的制备方法是将上述不同抗原制得的IgY粗提物或纯化物，按照1-10∶1-10∶1-10∶1-10的比例混合均匀，即得。
5.如权利要求4所述的抗四种性病特异性复合IgY，其特征在于该抗四种性病特异性复合IgY粗提物或纯化物0.02-80％，配以99.98-20％的辅料，可以制成临床可接受的剂型，剂型包括洗液、喷雾剂、凝胶剂、乳膏剂、泡腾片(胶囊)。
6.一种抗四种性病特异性复合IgY，其特征在于该抗四种性病特异性复合IgY的制备方法包括下列步骤抗原制备选取TP、GC、HPV和HSV-2标准株，分别按他们的培养特性和最适培养条件，选择适宜的培养基，以常规方法进行大量培养与繁殖，收集培养物，然后提纯、稀释分装；将TP、GC、HPV和HSV-2四种病原体液，按1∶1∶1∶1比例混合，再加入等量福氏佐剂置高速匀浆机中，以10000-30000rpm匀化，使形成油包水乳状，即制得TP、GC、HPV和HSV-2四种复合抗原；制备免疫蛋选择具有高免疫应答能力的SPF、健康产蛋母鸡进行免疫。在胸肌或皮下注射一种上述抗原1ml，每隔2周注射一次，共计3次，第一次注射后从第20天开始拣取免疫蛋；抗四种性病特异性复合IgY粗提物的制备用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入6倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0N HCl溶度调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩15倍，冷冻干燥，即得抗四种性病的特异性复合IgY粗提物；抗四种性病特异性复合IgY纯品的制备将以上所制取的抗四种性病特异性复合IgY粗提物先后过离子交换树脂柱和凝胶层析柱进行纯化，即制得特异性复合IgY纯品；
7.一种抗四种性病特异性复合鸭IgY，其特征在于该抗四种性病特异性复合鸭IgY的制备方法包括下列步骤用TP制作抗原，分别免疫高免疫应答的500只母鸭，每次注射1ml抗原，在第一次注射后，每隔二周注射一次，共三次，于第一次注射后第七个月，把这些鸭所产的蛋标记后按常规方法分别提取其IgY，以ELISA法检测其IgY效价。选出其中达到效价≥1∶256的鸭200只，再用这批鸭所产的蛋孵出优良鸭种，待其长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答能力的特种母鸭；用制备的TP、GC、HPV和HSV-2复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的免疫法，分别对优选的特种母鸭进行免疫，每只母鸭每次注射1ml抗原，每隔二周注射一次，共免疫三次，第一次免疫20天后，逐日检取母鸭所产免疫蛋；用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入6倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0N HCl调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩15倍，冷冻干燥，即得抗四种性病特异性复合鸭IgY粗提物；特异性复合鸭IgY粗提物的纯化将以上所制取的抗四种性病特异性复合鸭IgY粗提物先后过离子交换树脂柱和凝胶层析柱进行纯化，即制得特异性复合鸭IgY纯品；
8.一种抗四种性病特异性复合火鸡IgY，其特征在于该抗四种性病特异性复合火鸡IgY的制备方法包括下列步骤用TP制作抗原，分别免疫高免疫应答的500只产蛋火鸡，每次注射1ml抗原；在第一次注射后，每隔二周再注射一次，共三次，于第一次注射后第七个月，把这些火鸡所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的IgY，以ELISA法检测其IgY的效价，选出其中达到效价≥1∶256的火鸡200只，再用这批火鸡所产的蛋孵出优良火鸡种，待其长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答能力的特种产蛋火鸡；用制备的TP、GC、HPV和HSV-2种复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的免疫法，分别对优选的特种火鸡进行免疫，每只产蛋火鸡每次注射3ml抗原，每隔二周注射一次，共免疫三次，第一次免疫20天后，逐日检取火鸡所产免疫蛋；用流动水洗净免疫蛋，75％酒精擦洗消毒，晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入6倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0N HCl溶度调pH至5.5-6.0，4℃静置过夜，10000-30000rpm离心30分钟，取上清液超滤，超滤浓缩15倍，冷冻干燥，即得抗四种性病特异性复合火鸡IgY粗提物；特异性复合火鸡IgY粗提物的纯化将以上所制取的抗四种性病特异性复合火鸡IgY粗提物先后过离子交换树脂柱和凝胶层析柱进行纯化，即制得特异性复合火鸡IgY纯品；
9.一种抗性病特异性复合IgY洗液的制备方法，其特征在于该方法为取抗四种性病特异性复合IgY粗提物150g，按以下配方调配100升抗四种性病特异性复合IgY洗液抗性病特异性复合IgY粗提物150g甘油1500ml桉叶油 100ml薄荷香精100ml香橙香精100ml冰片100g乙醇750ml蒸馏水 加至100升先取蒸馏水80升，然后分别加入甘油、复合IgY搅拌溶解；再取配方量的桉叶油、薄荷香精、香橙香精、冰片加入配方量的乙醇溶解，并在搅拌下缓缓加入前述溶液中；充分搅拌均匀，调整溶液pH值至6.5-7.0，最后补加蒸馏水至100升，无菌过滤即得。
10.一种抗四种性病特异性复合IgY喷雾剂的制备方法，其特征在于该方法为取抗四种性病特异性复合IgY粗提物100g，按以下配方调配100升抗四种性病特异性复合IgY喷雾剂抗四种性病特异性复合IgY 100g薄荷香精100ml香橙香精100ml甘油100ml蒸馏水 加至100升先取蒸馏水80升，然后加入甘油、复合IgY搅拌溶解；将薄荷香精、香橙香精溶于适量乙醇中，在搅拌下缓缓加入前述溶液中；充分搅拌均匀，调整溶液pH值至6.5-7.0；最后补加蒸馏水至100升，无菌操作过滤和喷瓶灌装即得。
11.一种抗四种性病特异性复合IgY乳膏剂的制备方法，其特征在于该方法为配方抗四种性病特异性复合IgY粗提物 2％十八烷酸 6.0％液体石蜡 9.0％白凡士林 6.0％span-800.85％甘油 11％山梨酸钾 0.1％吐温-804.5％薄荷醇 0.2％蒸馏水 加至100％油相和水相分别加热至80℃，将水相在搅拌下缓缓加入油相中，搅拌冷凝至40℃左右，加入复合IgY溶液，充分研磨搅拌均匀制成水色油乳膏，即得。
12.一种抗四种性病特异性复合IgY泡腾片(胶囊)的制备方法，其特征在于该方法为配方；抗四种性病特异性复合IgY粗提物 0.1％碳酸氢钠 17％无水柠檬酸 15％硼 酸 5％乳 糖 31％微晶纤维素 30％稳泡剂 0.4％10％PVP无水乙醇液 适量硬脂酸镁 1％除IgY、硼酸、硬脂酸镁外，按常规将泡腾剂及其他辅料混匀，用PVP无水乙醇液制粒、干燥、整粒，然后加入复合IgY和硬脂酸镁、硼酸混匀，压片或填充胶囊。
全文摘要
本发明了一种抗性病特异性IgY及其制备方法和制剂。本发明制备方法包括下列步骤分离和培养出引致性病的致病病原体，在分类和组合各种病原体的基础上，分别制备单一或复合的病原体抗原，制备免疫蛋，制备抗性病各种病原体特异性IgY粗提物，抗性病各种病原体特异性IgY粗提物的纯化，以及制备有关多种制剂。本发明抗性病特异性IgY多种制剂用于各种性病的预防和治疗，具有特效、安全、使用方便的特点。
文档编号A61P31/12GK1485343SQ0315363
公开日2004年3月31日 申请日期2003年8月18日 优先权日2003年8月18日
发明者包晟, 杨荣鑑, 林元藻, 包 晟 申请人:雅臣药业集团(远东)有限公司
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