一种用于治疗心脑血管疾病的注射用药物及其制备方法

专利名称：：一种用于治疗心脑血管疾病的注射用药物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种具有治疗心脑血管疾病作用的中药有效部位注射用药物及其制备方法，该药物是由灯盏花素和降香的挥发性成分提取物配伍制成，属中药领域。2.
背景技术：
心脑血管疾病是危害人类生命和健康的第一杀手，据最新统计资料，2000年全世界有1700万人死于心血管疾病，占全球各种原因总死亡人数的1/3，预计到2020年这个数字将增至2500万，而其中80％都在发展中国家。根据1997年我国人口死因分析，城市人口死亡原因中肿瘤占第一位，脑血管病占第二位，两者的数值近于相等；农村人口死亡原因中呼吸系统疾病占第一位，脑血管病占第二位。缺血性脑血管病在全部脑血管病中约占70％，且有着相当高的发病率及致残率，不容忽视。灯盏花素系中药灯盏细辛中提取的有效成分，为灯盏甲素和乙素的混合物，主要含灯盏乙素。药理实验证明灯盏花素具有扩张脑血管的作用，降低脑血管阻力，增加脑血流量，改善微循环，提高脑记忆能力；能有效地降低脑梗塞患者的血浆粘度、红细胞积压、血小板聚集率和纤维蛋白原；还能减慢心率、降低心肌收缩力、扩张血管、降低外周阻力、减少心肌耗氧量、抗心肌缺血等作用[王桂霞灯盏花素药理及临床应用[J].时珍国医国药，1999，10(8)639]。临床上单味灯盏花素制剂临床应用很多，包括灯盏花素注射液在内，用于治疗心脑血管等疾病方面，取得了较好的疗效。方铎悟用灯盏花注射液治疗脑梗塞106例，结果治疗组基本痊愈23例，显效48例，有效30例，无效5例，总有效率为95.27％。[方铎悟.云南灯盏花注射液治疗急性脑梗塞106例疗效观察.浙江中医杂志，1996，31(8)38]。闫农等用灯盏花注射液治疗缺血性心脏病120例，结果总有效率为75％(P＜0.05)[闫农，刘卓，张树新等.云南灯盏花注射液治疗缺血性心脏病120例临床研究.中国急救医学，1997，17(6)26]。谢淑英用灯盏花素注射液治疗冠心病心绞痛45例。心绞痛缓解有效率88.9％，心电图改善率为66.7％[谢淑英，牛风珍，张锐等.灯盏花注射液治疗心绞痛45例.辽宁中医杂志，1997，24(1)21]。中药降香具有行气止痛，活血止血的功效，可用于心胸闷痛，脘胁刺痛；外治跌打出血。现代化学、药理研究表明，降香挥发油200mg/kg灌胃可明显抑制大鼠实验性血栓形成，明显提高孵育兔血小板cAMP的水平，对兔血浆纤溶酶活性有显著促进作用，提示有抗血栓作用。中药降香的心血管活性的有效成分主要为其挥发性成分，由于生产设备差异，在实际生产中降香水蒸汽蒸馏提取时，一种是以油/水分离器来收集降香挥发油，另一种是直接收集降香的蒸馏液，虽然其挥发性成分的提取物分别为降香挥发油和者降香蒸馏液，但两者在成分上并无质的差别。目前，国内对灯盏花素和降香的研究和使用较为活跃，但是，利用灯盏花素与降香挥发性成分的相互作用，配伍组方制成治疗心脑血管疾病的药物，还未见报道。3.
发明内容本发明的目的在于提供一种具有安全、有效可治疗心脑血管疾病的注射用药物，该药物是灯盏花素和降香的挥发性成分组成。药理活性筛选和拆方研究表明，灯盏花素和降香挥发性成分提取物二药配伍使用，与单用其中任何一种相比，药效明显增强；药效学和安全性实验表明，本制剂用于心脑血管病，疗效显著，且安全性高。本发明另一目的在于提供上述注射用药物的制备方法。本发明提出的中药注射用药物，是由灯盏花素和降香的挥发性成分提取物按一定配比组合制成。水蒸汽蒸馏提取的降香挥发性成分提取物，可以是用油/水分离器收集的降香挥发油，也可以是直接收集的降香蒸馏液，经检测两者在有效成分组成上并无质的差别，其中降香挥发油1份与降香蒸馏液100份的有效成分组成与含量基本一致。本中药为有效部位注射用药物，原料重量配比为灯盏花素1-20份降香挥发油1-5份，或降香蒸馏液100-500份；本中药为有效部位注射用药物，最优的原料重量配比为灯盏花素10份降香挥发油2.5份，或降香蒸馏液250份。本发明提出了上述注射用药物的制备方法，可以按如下步骤a.取降香挥发油1-5份加入100倍的注射用水中，加助溶剂进行助溶；或降香蒸馏液100-500份，直接加助溶剂进行助溶；b.取灯盏花素1-20份，加注射用水溶解，碱调PH至7.0-8.0，搅拌溶解，超滤得药液，将上述降香挥发性成分的溶液缓慢加入灯盏花素的水溶液中，搅拌均匀；c.加入抗氧化剂5-45份，注射用水稀释至2500-10000份，加酸调节pH至5.5-7.5，药液微滤，灌封即得注射液；加入成型剂50-500份，注射用水稀释至1000-5000份，加酸调节pH至5.5-7.5，药液微滤，分装，冻干，压盖，即得注射用粉针；加入抗氧化剂10-60份，注射用水稀释至25000-100000份，加酸调节pH至5.5-7.5，再用渗透压调节剂调至等渗，药液微滤，灌封即得输液。上述制备方法中降香挥发性成分用助溶剂助溶，其特征是含挥发性成分的水溶液与8-200份聚山梨酯-80搅拌、混匀，或用10-500份羟丙基倍他环糊精溶液搅拌，包合溶解。本发明提出了上述注射用药物的制备方法，也可以按如下步骤a.取降香挥发油2.5份加入100倍的注射用水中，加助溶剂进行助溶；或降香蒸馏液250份，加助溶剂进行助溶；b.取灯盏花素10份，加注射用水溶解，碱调PH至7.0-8.0，搅拌溶解，超滤得药液，再将上述降香挥发性成分的溶液缓慢加入灯盏花素的水溶液中，搅拌均匀；c.加入抗氧化剂15份，注射用水稀释至5000份，加酸调节pH至5.5-7.5，药液微滤，灌封即得注射液；加入成型剂175份，注射用水稀释至2500份，加酸调节pH至5.5-7.5，药液微滤，分装，冻干，压盖，即得粉针；加入抗氧化剂30份，注射用水稀释至50000份，用酸调节pH至5.5-7.5，再用渗透压调节剂调至等渗，药液微滤，灌封即得输液。上述制备方法中降香挥发性成分用助溶剂助溶，其特征是含挥发性成分的水溶液与20-30份聚山梨酯-80搅拌、混匀，或挥发性成分提取物用20-30份羟丙基倍他环糊精溶液搅拌，包合溶解。在制备方法中所使用的抗氧化剂可以为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠中的至少一种；渗透压调节剂可以为甘露醇、氯化钠和葡萄糖中的至少一种；成型剂可以为甘露醇、乳糖、葡萄糖和右旋糖酐中的至少一种。在制备方法中药液超滤所使用的超滤膜通量可以为10000～100000的分子量。本发明的注射用药物主要用以治疗心肌缺血、心绞痛、脑缺血、脑梗塞等各种心脑血管疾病，经过药理学研究和药效动物试验研究结果证明，由灯盏花素与降香的挥发性成分组成的注射用制剂，在所选择的剂量范围内，可显著提高对大鼠急性脑缺血时的保护作用，改善大鼠心肌缺血再灌注损伤的各项指标，增强抗血栓的作用。本发明的注射用药物，主要优点为(1)本发明药物中灯盏花素与降香的挥发性成分提取物(降香挥发油或降香蒸馏液)有配伍增效作用，使本制剂起效快，疗效高。(2)本发明药物按以上制备方法制备的注射剂，其稳定性高，安全性好，够很好地保证其临床疗效。为说明本发明药物对心脑血管疾病的治疗效果，进行了药效学及安全性动物试验研究，结果如下(1)注射用药物对AICI大鼠脑指数及脑含水量的影响试验取Wistar大鼠96只，随机分为假手术组、脑缺血模型组、尼莫地平组和注射用复方组(灯盏花素/降香挥发油10∶1、4∶1、1∶1)、灯盏花素组、降香挥发油组，每组12只动物。假手术组和脑缺血模型组生理盐水腹腔注射，其余各组相应腹腔注射给予药物。给药后1h，除假手术组外，其余各组均按文献方法结扎大鼠双侧颈总动脉，形成急性不完全性脑缺血模型。取上述模型动物，每组动物10只，于双侧颈总动脉结扎3h后断头，开颅取脑，迅速称重，计算脑指数(脑指数＝脑重×100/体重)，然后将脑在110℃烤箱中烤至恒重，计算脑含水量脑含水量＝(脑湿重-脑干重)/脑湿重×100％。结果见表1。表1注射用药物对AICI大鼠脑指数及脑含水量的影响试验与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与灯盏花素和降香挥发油组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；实验结果显示，复方注射剂各剂量组和单味灯盏花素组动物的脑含水量明显低于模型组，经统计学处理，呈显著性差异(*P＜0.05，**P＜0.01)，单味降香挥发油组动物的脑含水量与模型组相比，统计学处理无显著性；复方注射剂组(灯盏花素/降香挥发油为10∶1，4∶1)动物的脑含水量与灯盏花素和降香挥发油组相比，呈显著性差异(#P＜0.05，##P＜0.01)。结论灯盏花素注射液本身具有一定的抗急性脑缺血作用，降香挥发油虽无明显的作用，但与灯盏花素配伍后，能显著促进其抗急性脑缺血的效果，两药配伍后治疗急性脑缺血的效果比单味药物的治疗效果更为优越，表明本中药组合物即灯盏花素与降香挥发油(比例在10∶1～1∶1)用于治疗急性脑缺血时具有较强的协同作用，其中以灯盏花素与降香挥发油的配伍比例在4∶1时最佳。(2)注射用药物对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的影响方法Wistar大鼠96只，体重220～270g，随机分为8组即假手术组、模型组、金钠多组、注射用复方组(灯盏花素/降香挥发油10∶1、4∶1、1∶1)、灯盏花素组和降香挥发油组，各组动物术前经股静脉注射生理盐水与各组药物。从大鼠左侧打开胸腔，剪开心包，轻压胸廓，挤出心脏，结扎左冠状动脉前降支10min，再灌注30min，期间监测心电图变化，冠脉断流及再通成功与否，依心电图肢体导联的ST抬高及恢复为标准。其中，假手术组在前降支处穿一丝线不结扎，药物处理组于结扎前5min按规定剂量经股静脉给药。再灌注结束即刻从颈动脉取血2ml，分离血清检测肌酸磷酸肌酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)。实验完毕后，摘取心脏，沿冠状沟切除心房，留下心室，用冷生理盐水洗净，吸干水份，称心室湿重。称重后立即进行活体染色，将心室横切5～6片，放入05％的NBT溶液中，在37℃孵箱中10～15min染色，用水冲洗浮色。剪去各心肌片被染成蓝色的非梗死区心肌，把未染色的梗死心肌称重，除以心室重即得到梗死范围心室重的百分比。表2注射用药物对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的影响注与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与灯盏花素组比较，#P＜0.05，##P＜0.01与降香挥发油组比较，△P＜0.05；结果由表可见，模型组与假手术组相比较，CPK、LDH活性显著高于假手术组，SOD活性显著低于假手术组，统计学意义显著(P＜0.01)。给药各组对各项指标都有不同程度的影响，其中注射液各组能显著提高血清中SOD活力，使血清中PCK、LDK活性降低，降低梗塞面积，与模型组比较，均呈显著性差异(*P＜0.05，**P＜0.01)，表明该药对心肌缺血再灌注损伤有保护作用，其作用机制可能与它抑制氧自由基的产生、抑制脂质过氧化的作用有关。此外，注射液各组与单味灯盏花素组及单味降香挥发油组相比，在各项指标亦有显著性差异(#P＜0.05，△P＜0.05)，提示两药配伍后对心肌缺血再灌注损伤的保护作用比单味药物更为好，表明该组合物即灯盏花素与降香挥发油(比例在10∶1～1∶1)用于保护心肌缺血再灌注损伤时具有较强的协同作用，其中又以灯盏花素与降香挥发油的配伍比例在4∶1时效果最为明显。(3)注射用药物对大鼠动-静脉旁路血栓形成的影响方法Wistar大鼠70只，体重220±20g，随机分为7组模型组、复方丹参注射液组、注射用复方组(灯盏花素/降香挥发油10∶1、4∶1、1∶1)、灯盏花素组和降香挥发油组，各组动物术前经尾静脉注射生理盐水与各组药物，给药30min后，参照文献方法制成动-静脉旁路血栓形成模型，即麻醉大鼠，取三段聚乙烯管组成套管，中间套管内置一预先称重的6cm长丝线。管的一端插入大鼠的左颈外静脉后，向管腔内注入肝素(50u·kg-1)，然后再将管的另一端插入右侧颈总动脉。开放血流，15min后中断血流，迅速取出丝线并称重。血栓湿重由总重量减去丝线干重表示，然后将血栓放入70℃烘箱，2h后称干重。血栓干重由总重量减去丝线干重表示，并按下式计算血栓形成抑制率血栓形成抑制率(％)＝(模型组血栓重量-给药前血栓重量)/模型组血栓重量×100％表3注射用药物对大鼠动-静脉旁路血栓形成的影响<tablesid="table3"num="003"><tablewidth="848">组别剂量mg/kg血栓湿重(mg)抑制率(％)血栓干重(mg)抑制率(％)模型组灯盏花素组降香挥发油组灯盏花素+降香挥发油组灯盏花素+降香挥发油组灯盏花素+降香挥发油组复方丹参注射液组-6.63.39+0.97.92+1.984.95+4.9562.552±1245±1038±9*34±7**#32±8**#39±11*40±7*-13.532.734.638.525.023.117±415±411±5*10±6*#7±3**##12±78±2**-11.835.341.258.829.452.9</table></tables>与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与灯盏花素组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；实验结果显示，复方注射剂各剂量组和单味降香挥发油组动物在给药后的血栓湿重和干重与模型组相比均明显降低，表明注射剂及降香挥发油对大鼠体内血栓形成有明显的抑制作用；同时，复方注射剂组(灯盏花素/降香挥发油为10∶1，4∶1)动物的血栓湿重和干重与灯盏花素组相比，呈显著性差异(#P＜0.05，##P＜0.01)。提示注射剂中的两药配伍使用，能增强抗血栓的作用，比单味药物使用效果更好。(4)注射用药物对小鼠断头后喘息持续时间的影响试验取Bal/BC小鼠50只，随机分为生理盐水组、尼莫地平组和注射用复方组、灯盏花素组、降香挥发油组，每组10只动物。空白对照组生理盐水给药，其余各组相应药物静脉给药，给药15min后，自小鼠耳根下快速断头，记录从断头开始至其最后一次喘息停止的时间作为断头喘息持续时间。结果见表4。表4注射用药物对小鼠断头后喘息持续时间的影响与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01实验结果表明，iv复方、单味灯盏花素均能明显延长小鼠断头后喘息持续时间，与空白组比较，呈显著性差异(*P＜0.05，**P＜0.01)，iv单味降香挥发油延长小鼠断头后喘息持续时间不明显，与空白组比较，无显著性差异。但注射用复方组比灯盏花素组延长小鼠断头后喘息持续时间的作用更为显著，提示降香挥发油虽然没有直接作用，但可协助灯盏花素延长小鼠断头后喘息持续时间。(5)注射用药物热原检查试验选取健康家兔按中国药典附录XIIIA法检验，用MC-3B电脑数字式体温计测量各兔肛门体温，结果如表5。表5热原检查的试验结果由表5可见，家兔注射经超滤的粉针，体温升高不明显；而注射未经超滤的粉针，体温升高；结果提示，溶液经过超滤可以除去热原，保证制剂的安全性。4.具体实施方式实施例一降香挥发性成分提取物的制备[一]取降香药材1000g，加水浸润24小时，水蒸汽蒸馏5小时，挥发油提取器收集降香挥发油，约10ml，即得。实施例二降香挥发性成分提取物的制备[二]取降香药材1000g，加水浸润24小时，水蒸汽蒸馏(或再重蒸馏一次)，收集蒸馏液约1000ml，即得。实施例三注射液的制备取降香挥发油2.5g，加注射用水250ml，加入25g聚山梨酯-80搅拌混匀，再加250g丙二醇使溶解，备用；另取灯盏花素10g，加1L注射用水，葡甲胺调PH至7.5，搅拌溶解，药液经孔径为30000分子量的超滤膜超滤得超滤液；将上述降香挥发油的溶液缓慢加入灯盏花素的水溶液中，边加边搅拌至澄清，加入亚硫酸氢钠0.75g、亚硫酸钠0.75g，用注射用水稀释至5L，柠檬酸调节PH至7.0，药液经孔径为0.22μm膜过滤，灌封，10ml/支，即得。实施例四冻干粉针剂的制备[一]取降香挥发油2.5g，加注射用水250ml，加入25g聚山梨酯-80搅拌混匀，备用；另取灯盏花素10g，加1L注射用水，碳酸钠调PH至7.5，搅拌溶解，药液经孔径为30000分子量的超滤膜超滤得超滤液；将降香挥发油溶液缓慢加入灯盏花素的水溶液中，边加边搅拌至澄清，再加入175g甘露醇，并用注射用水稀释至2.5L，稀盐酸调节PH至7.0，混匀，药液经孔径为0.22μm膜过滤，分装，每瓶5ml，冻干，压盖，标签，即得粉针，共500瓶。实施例五冻干粉针剂的制备[二]取降香蒸馏液250ml，加入25g羟丙基倍他环糊精，40-60℃保温超声使溶液澄清，备用；另取灯盏花素10g，加1L注射用水，葡甲胺调PH至7.5，搅拌溶解；将上述降香蒸馏液缓慢加入灯盏花素的水溶液中，边加边搅拌至澄清，再加入175g葡萄糖，并用注射用水稀释至2.5L，柠檬酸调节PH至7.0，混匀，药液经通量为100000分子量的超滤膜超滤，分装，每瓶5ml，冻干，压盖，标签，即得粉针，共500瓶。实施例六输液的制备取降香蒸馏液250ml，加入25g聚山梨酯-80，搅拌混匀，再加1000g甘油使溶解，备用；另取灯盏花素10g，加1L注射用水，葡甲胺调PH至7.5，搅拌溶解；将上述降香蒸馏液缓慢加入灯盏花素的水溶液中，边加边搅拌至澄清，加亚硫酸氢钠3g和适量氯化钠(使注射液等渗)，并用注射用水稀释至50L，稀盐酸调节PH至7.0，搅拌均匀，药液经孔径为0.22μm膜过滤，分装成100ml/瓶，灌盖，即得输液。权利要求1.一种用于治疗心脑血管类疾病的注射用药物，其特征在于它是由以下重量配比的原料制成的注射剂灯盏花素1-20份降香挥发油1-5份或降香蒸馏液100-500份2.根据权利要求1.所述的治疗心脑血管类疾病的注射用药物，其中各原料的重量配比是灯盏花素10份降香挥发油2.5份或降香蒸馏液250份3.根据权利要求1.或2.的所述的治疗心脑血管类疾病的注射用药物，其特征在于所说的注射剂可以为注射液、注射用粉针或输液。4.根据权利要求3.所述的治疗心脑血管类疾病的注射剂，可按以下步骤制备a.取降香挥发油1-5份加入100倍的注射用水中，加助溶剂进行助溶；或降香蒸馏液100-500份，直接加助溶剂进行助溶；b.取灯盏花素1-20份，加注射用水溶解，碱调PH至7.0-8.0，搅拌溶解，超滤得药液，将上述降香挥发性成分的溶液缓慢加入灯盏花素的水溶液中，搅拌均匀；c.加入抗氧化剂5-45份，注射用水稀释至2500-10000份，加酸调节pH至5.5-7.5，药液微滤，灌封即得注射液；加入成型剂50-500份，注射用水稀释至1000-5000份，加酸调节pH至5.5-7.5，药液微滤，分装，冻干，压盖，即得注射用粉针；加入抗氧化剂10-60份，注射用水稀释至25000-100000份，加酸调节pH至5.5-7.5，再用渗透压调节剂调至等渗，药液微滤，灌封即得输液。5.根据权利要求4.所述的治疗心脑血管类疾病的注射剂，可按以下步骤制备a.取降香挥发油2.5份加入100倍的注射用水中，加助溶剂进行助溶；或降香蒸馏液250份，加助溶剂进行助溶；b.取灯盏花素10份，加注射用水溶解，碱调PH至7.0-8.0，搅拌溶解，超滤得药液，再将上述降香挥发性成分的溶液缓慢加入灯盏花素的水溶液中，搅拌均匀；c.加入抗氧化剂15份，注射用水稀释至5000份，加酸调节pH至5.5-7.5，药液微滤，灌封即得注射液；加入成型剂175份，注射用水稀释至2500份，加酸调节pH至5.5-7.5，药液微滤，分装，冻干，压盖，即得粉针；加入抗氧化剂30份，注射用水稀释至50000份，用酸调节pH至5.5-7.5，再用渗透压调节剂调至等渗，药液微滤，灌封即得输液。6.根据权利要求4.所述的降香挥发性成分用助溶剂助溶，其特征在于含挥发性成分的水溶液与8-200份聚山梨酯-80搅拌、混匀，或含挥发性成分的水溶液用10-500份羟丙基倍他环糊精溶液搅拌，包合溶解。7.根据权利要求5.所述的降香挥发性成分用助溶剂助溶，其特征在于含挥发性成分的水溶液与20-30份聚山梨酯-80搅拌、混匀，或含挥发性成分的水溶液用20-30份羟丙基倍他环糊精溶液搅拌，包合溶解。8.根据权利要求4.或5.所述制法中的抗氧化剂可以为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠中的至少一种；渗透压调节剂可以为甘露醇、氯化钠和葡萄糖中的至少一种；成型剂可以为甘露醇、乳糖、葡萄糖和右旋糖酐中的至少一种。9.根据权利要求1.至5.所制成的注射剂，可用于治疗心肌缺血、心绞痛、脑缺血、脑梗塞等心脑血管疾病。全文摘要本发明公开了一种具有治疗心脑血管疾病作用的注射用药物及其制备方法，该药物由灯盏花素和降香的挥发性成分提取物配伍制成，该挥发性成分提取物可以为降香挥发油或降香蒸馏液中的一种，其比例为灯盏花素1－20份，降香挥发油1－5份或降香蒸馏液100－500份；最优的比例为灯盏花素10份，降香挥发油2.5份或降香蒸馏液250份。该注射用药物组合物的配伍使用，可产生协同作用，用于治疗心肌缺血、心绞痛、脑缺血、脑梗塞等心脑血管疾病，疗效显著提高，且起效快，比单用灯盏花素或单用降香挥发性成分提取物的效果均大大提高。文档编号A61K31/7042GK1977881SQ20051012288公开日2007年6月13日申请日期2005年12月6日优先权日2005年12月6日发明者李晓华,叶澜杰,薛建欣申请人:李晓华,叶澜杰,薛建欣