一种治疗抑郁症的中药复方制剂的制作方法
专利名称：一种治疗抑郁症的中药复方制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗抑郁症的复方中药制剂及其制备工艺，具体的说是以知母、淫羊藿和人参为原料按照特定的工艺制备的中成药，属于中药领域。
背景技术：
抑郁症是一种以持久的情绪低落状态，伴焦虑、躯体不适，睡眠障碍为主要表现的神经症。随着社会的老龄化及不断增加的社会压力，抑郁症的发病率逐年升高，美国的一份流行病学研究表明社区中有15％的人出现抑郁症状(Blazer，D.，Burcherr，B.，Service，C.，George，L.K.The association of age and depression aming the elderlyan epidemiologic exploration.J.Gerontol，1991，46，210-215)。欧洲的一份研究得出了相同的结论(Dufouil，C.，Dartigues，J.F.，Fuhrer，R.Smptomes depressifs chez les personnes ageesconparisonentre des populations rurales et urbaines.Rev.Epidemiol.Sante Publique，1995，43，308-315)。近年来越来越多的研究资料表明，我国抑郁症的发病率和就诊率呈上升趋势(黄明生，陆林，孙学礼等。综合医疗机构情绪障碍研究。华西医学，1998，13(1)11-13)。近十几年以来，抗抑郁药的研究发展很快，许多新型抗抑郁药层出不穷。首先发现的抗抑郁药是50年代开发的单胺氧化酶抑制剂，稍后是三环类抗抑郁药，后者迄今仍是主要的临床用药。继上述二类药物之后，又开发了四环类抗抑郁药。80年代后第二代三环类药物，尤其是5-羟色胺摄取抑制剂发展迅速。根据化学结构的不同，抗抑郁药大致分为三类三环类抗抑郁剂，杂环类抗抑郁剂，单胺氧化酶抑制剂等。抑郁症属于慢性病，西药多数具有副作用或成瘾性，长期服用上述抗抑郁药，不仅需要昂贵的费用，也给患者带来了极大的毒副反应。
目前尚无专门抗抑郁中药问世，而祖国医学千百年来的临床积累，有许多对抑郁症行之有效的方药，将其研究并开发出来，已是必然。
抑郁症为郁久伤脾，饮食减少，生化乏源，则气血不和，心血不足，脾肾两虚；郁久化火易伤阴血，累及于肾，而致种种损伤。抑郁伤及心脾则情绪低落，多思善虑，言语动作减少，郁郁寡欢。心失所养则见心悸胆怯，少寐多梦健忘。气血不足，不能润养于面，面色不华，头晕神疲。脾虚气血不足，食少倦怠乏力，目光迟滞。郁久损及阴或见心烦，脾肾阳虚则见畏寒肢冷，腹胀便溏。舌质淡，苔白，脉细弱，均为气血不足的表现。故治以益气养阴，健脾益肾养心。
发明内容
本发明的目的是提供一种可以治疗抑郁症的复方中药制剂及其制备方法。
本发明是一种治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的水或乙醇提取物作为活性成分的原料制成知母1400～2400重量份淫羊藿500～1200重量份人参100～500重量份本发明原料的重量优选配比为知母1600～2000重量份淫羊藿700～1000重量份人参200～400重量份本发明原料的重量最佳配比为知母1800重量份淫羊藿900重量份人参300重量份本发明提供的治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于该复方中药制剂含总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在15.0％～60.0％，淫羊藿苷含量在0.13％～3.04％；含总皂苷以人参皂苷Re(C48H82018)计，含量在8.0％～30.0％，菝葜皂苷元含量在0.30％～7.41％。
本发明中所说的知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根茎。淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.的干燥地上部分。人参为五加科植物人参Panax ginseng C.的干燥根。上述全部组分在中华人民共和国药典2000年版一部中均有记载。
上述的原料，可以按照常规的药剂学方法制备成各种常规制剂，例如，胶囊剂，片剂，颗粒剂，丸剂，口服液，散剂，丹剂，膏剂等。
本发明还提供了一种上述治疗抑郁症的复方中药制剂的制备方法，该方法包括如下步骤(1)首先选取下列中药为原料知母1400～2400重量份淫羊藿500～1200重量份人参100～500重量份(2)将上述三味原料，加入水或乙醇，优选溶剂为70％乙醇；加热回流提取3～6次，优选5次；6～10倍溶剂量，优选8倍量；每次1.5～2.5小时，优选2小时；提取液滤过，回收乙醇并浓缩至每1ml含生药量0.5g的浓度，[相对密度约为1.00～1.20(20℃)]，抽滤；(3)滤液通过经处理的大孔吸附树脂，先用树脂体积的6～10倍量的水洗脱，优选8倍量，水液弃去；再用树脂柱体积3～5倍量的95％乙醇洗脱，优选4倍量；减压回收乙醇洗脱液，真空干燥，粉碎，作为复方制剂的原料药；
(4)将原料药装胶囊、压片、制颗粒或制成其他药物剂型，例如胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、口服液、散剂、丹剂或膏剂等。
本发明具有益气养阴、健脾益肾养心的功能。主治气阴不足、心脾两虚所致抑郁症。症见情绪低落，多思善虑，言语动作减少，郁郁寡欢。心悸胆怯，少寐多梦健忘，面色不华，头晕神疲，食少倦怠乏力，目光迟滞，或心烦，或畏寒肢冷，或腹胀便溏，舌质淡，苔白，脉细弱。
方中以淫羊藿、知母为君药，以益气补阴，气血足，心脾肾得养，精神愉快，情绪健康。淫羊藿辛甘温，归肝肾经。具有补肾壮阳，祛风除湿的作用(凌一揆。高等医药院校教材。中药学。第1版。上海科学技术出版社。1986221，34209)。《本草备要》谓淫羊藿“补命门，益精气，坚筋骨，利小便”。《神农本草经》谓淫羊藿“益气力，强志”。《日华子本草》谓淫羊藿主“丈夫绝阳无子，女人绝阴无子，老人昏耄，中所健忘，一切冷风劳气，筋骨挛急，四肢不仁，补腰膝，强心力”。现代药理研究表明，淫羊藿具有明显增强小鼠耐缺氧的能力(郭均。中国防病杂志，1964，5(3)481)，能够明显提高肾上腺皮质功能的作用(刘宝庆。中草药，1980，11(5)201)。增强下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴，性腺轴和胸腺轴的内分泌系统功能作用(李炳如。中医杂志，1984，(7)，543)。
知母苦甘寒，归肺胃肾经。具有清热泻火，滋阴润燥的功效。《本草纲目》谓知母“下则润肾燥而滋阴，上则清肺金而泻火”。《日华子本草》谓知母“润心肺，补虚乏，安心止惊悸”。药理研究表明，知母能使增多的B-肾上腺素受体最大结合位点数减少，使M-胆碱能受体最大结合位点增多，从而调整它们的相互关系，使细胞功能异常得到纠正(易宁育。中药药理与临床，1991，6(3)12)。能使受地塞米松抑制的血浆皮质醇浓度升高，并有防止肾上腺萎缩的作用(陈锐群。上海第一医学院学报，1979，(6)393)。体外实验表明，知母可减弱皮质酮C4＝5双健的打开还原与C17，20-羟基和C20酮基的变化。由于保护了皮质醇A环C4＝5双键和C3酮基不被还原及侧连上C17和C20羟基、酮基免受降解，因此能延缓肝细胞对皮质醇的分解代谢(张丽丽。上海第一医学院学报。1980，(1)，37)。知母皂苷能剂量依赖性的增加衰老大鼠脑内N受体，促进学习记忆能力(王顺官。知母皂苷对衰老大鼠促智作用机制的研究。现代中西医结合杂志，2000，9(18)1755-6)。养阴的同时，又具有一定的清热作用，以制约因郁久伤阴所出现的虚热。
方中人参为臣，一则助淫羊藿以补气，一则行健脾之功，脾健运则气血充足，心神得养，诸症得以治疗。此外人参又具有安神增智作用，多用于气血不足，心神不安，失忆多梦，心悸健忘等。人参甘苦微温，归脾肺经。具有大补无气，补脾益肺，生津止渴，安神增智的作用。《神农本草经》人参补五脏，安精神，定魂魄，止惊悸，除邪气，明目，开心益智。《用药法象》人参甘温，能补肺中元气，肺气旺则四脏之气皆旺，精自生而形自盛。药理研究表明人参具有广泛的药理活性，除了能调整中枢神经活动，促进学习记忆外，尚能增强脑内胆碱能系统功能，抑制抑制脑内5-HT被摄入大脑突触体内，从而增加突触间隙内5-HT含量(SangD et al.Planta Med.1986，(4)226王本祥。药学学报。1980，15(5)312)。人参皂苷有增加肾上腺皮质激素分泌活性的作用。其作用部位在垂体水平以上(宗瑞义等。白求恩医科大学学报。1985，11(3)254)。此外人参还有抗疲劳，抗应激，抗衰老和增强免疫的作用。
上述三药合用，气阴得补，心神得养，脾气健运。则抑郁症得以消除。对该方提取的有效部位群药理研究表明，该药对多种抑郁模型均有特异性地抑制作用，并能显著升高抑郁动物脑内的5-羟色胺和多巴水平，对抗利血平所致单胺类递质耗竭。
具体实施例方式
实施例1处方组成知母1400g淫羊藿500g人参100g制备工艺上述处方中的原料，加6倍量95％乙醇，加热回流提取3次，每次1.5小时。将3次提取液合并，减压回收乙醇并浓缩至药液浓度为0.5g生药/mL，抽滤后，滤液的相对密度约为1.10(20℃)。上述滤液经体积为10L的大孔吸附树脂柱，先用6倍树脂柱体积的去离子水或蒸馏水洗脱，再用3倍树脂柱体积的95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，去除溶剂，得到原料药。装入胶囊即得本发明胶囊剂。每粒胶囊装0.2g。
原料药中，含总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在25.7％，淫羊藿苷含量在1.21％；含总皂苷以人参皂苷Re(C48H82O18)计，含量在10.3％，菝葜皂苷元含量在2.53％。
实施例2处方组成知母2400g淫羊藿1200g人参500g制备工艺上述处方中的原料，加10倍量水，加热回流提取6次，每次2.5小时。将6次提取液合并，减压回收乙醇并浓缩至药液浓度为0.5g生药/mL，抽滤后，滤液的相对密度约为1.10(20℃)。上述滤液经体积为10L的大孔吸附树脂柱，先用10倍树脂柱体积的去离子水或蒸馏水洗脱，再用5倍树脂柱体积的95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，去除溶剂，得到原料药。装入胶囊即得本发明胶囊剂。每粒胶囊装0.2g。
原料药中，含总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在14.8％，淫羊藿苷含量在0.69％；含总皂苷以人参皂苷Re(C48H82O18)计，含量在17.1％，菝葜皂苷元含量在4.16％。
实施例3处方组成知母1800g淫羊藿900g人参300g制备工艺上述处方中的原料，加8倍量70％乙醇，加热回流提取5次，每次2小时。将5次提取液合并，减压回收乙醇并浓缩至药液浓度为0.5g生药/mL，抽滤后，滤液的相对密度约为1.10(20℃)。上述滤液经体积为10L的大孔吸附树脂柱，先用8倍树脂柱体积的去离子水或蒸馏水洗脱，再用4倍树脂柱体积的95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，去除溶剂，得到原料药。装入胶囊即得本发明胶囊剂。每粒胶囊装0.2g。
原料药中，含总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在34.0％，淫羊藿苷含量在1.60％；含总皂苷以人参皂苷Re(C48H82O18)计，含量在16.0％，菝葜皂苷元含量在3.90％。
含量测定方法(1)总黄酮的测定方法对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml约含1.0mg溶液，作为对照品溶液。
标准曲线的制备精密吸取淫羊藿苷对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。以甲醇为空白，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，在318nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取本发明原料药50mg，精密称定后，置25ml量瓶中，加无水甲醇20ml，超声处理30分钟，取出，加甲醇定容至刻度，再稀释25倍(精密吸取1ml置于25ml量瓶中，加甲醇定容至刻度)，照标准曲线制备项下的方法，测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中淫羊藿苷的含量，计算，即得。
(2)总皂苷的测定方法对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg溶液，作为对照品溶液。
标准曲线的制备精密吸取人参皂苷Re对照品溶液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分别置于试管中，水浴蒸干，加入5％香草醛冰醋酸溶液(取香草醛0.5g，加入冰醋酸少许使溶解，再加入冰醋酸至100ml)0.5ml，加入70％硫酸溶液(量取水30ml，缓慢加入浓硫酸70ml，冷却后使用)5ml，置于60℃水浴中加热15分钟，取出，于冰水浴冷却10分钟，室温下放置10分钟，以同法制成空白溶液为空白，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，在544nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，人参皂苷Re的量为横坐标，绘制标准曲线。测定法取本发明原料药50mg，精密称定，置于50ml量瓶中，加无水乙醇适量，超声提取30分钟，取出加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液35ml，加聚酰胺粉0.4g，拌匀，置水浴上挥干溶剂后，加入装有聚酰胺粉0.7g的层析柱中，用水洗脱，收集洗脱液约300ml，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，精密吸取0.3ml，置于试管中，水浴蒸干，照标准曲线制备项下的方法，自“加入5％香草醛冰醋酸溶液0.5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的含量，计算，即得。
(3)淫羊藿苷的测定方法照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。乙腈-水(30∶70)为流动相；检测波长为270nm；柱温30℃。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品约200mg，精密称定，置25ml量瓶中，加入甲醇约20ml，超声提取40分钟，取出，加入甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
(4)菝葜皂苷元的测定方法照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。甲醇为流动相；用示差检测器(2410型，Waters公司生产)检测；柱温30℃。理论板数按菝葜皂苷元峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备精密称取菝葜皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本发明原料药约250mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇约20ml，超声提取40分钟，取出，加甲醇至刻度。滤过，精密量取续滤液20ml，加盐酸1ml，置水浴上缓慢回流1.0小时，加水15ml，回收甲醇至无醇味，加入氯仿20ml，萃取，共4次，合并萃取液，回收氯仿，残渣用甲醇溶解，转移至10ml的量瓶中，加甲醇至刻度，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取滤液，即得。
测定法取对照品溶液和供试品溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。
动物实验例1对小鼠抑郁模型的治疗作用观察本发明胶囊剂对小鼠抑郁模型的治疗作用。本发明胶囊0.243g/粒，批号010802，用时以蒸馏水配至所需浓度。其它试剂药品有利血平注射液，1mg/mL，批号20000401，上海医科大学制药有限公司生产。
试验动物雄性KM小鼠，非近交系封闭群，体重(21.50±1.0)g，共60只。由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所提供，合格症号京动管许字第038号。实验室室温18-22℃，相对湿度40％～60％，换气扇通气，自然光源12h/日，笼养，每笼10只，每三日清扫笼舍一次。
取小鼠随机分成5组，每组12只，实验第1天每鼠预先进行悬尾试验与强迫性游泳试验，以诱导抑郁模型。于诱导的第2天开始灌胃给药，在第1次药后1h测定小鼠自主活动，然后重复悬尾和游泳试验，连续7d。实验结束后，每鼠皮下注射利血平注射液(3mg/kg)，同时给予相应药物，1.5h后分别测定上眼睑下垂、运动不能的动物个数及7d内小鼠死亡数。
1.小鼠自主活动观测5min内跨线数(米字线为准)、直立探究数(以小鼠两前肢抬起为准)及二者间比值。
2.小鼠悬尾试验将小鼠尾端2cm的部位用木夹子固定，倒悬于12×27×27(cm)箱内，其头部离底面约5cm，悬挂6min，记录其后4min内累积不动时间。
3.小鼠强迫性游泳试验将小鼠放入高20cm，直径12cm的圆柱型玻璃缸中，水深12cm，水温25℃，观察6min，记录其后4min内累积不动时间。不动时间是指小鼠在水中停止挣扎，或呈漂浮状态，仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面的持续时间。
4.血平拮抗试验4.1上睑下垂观察30sec内眼睑至少闭合一半的动物个数。
4.2运动不能将小鼠放入直径7.5cm的圆形白纸中央，观察15sec内仍呆在圈内的动物个数。
经预试确定下列给药方案，本发明胶囊600、300、150mg/kg，分别相当于人用量(19.44mg/kg)的30.8，15.4，7.7倍。盐酸帕罗西汀4.67mg/kg，为临床等效量。分别给小鼠口服灌胃，0.2mL/10g。
本试验的空白对照为蒸馏水，阳性药对照为盐酸帕罗西汀片(paroxetine)，20mg/片，它是一种抗抑郁药，可以治疗各种类型的抑郁症。中美天津史克制药有限公司产品，批号01020455，批准文号(95)卫药准字J-50号。
本试验数据均以EXCEL软件处理。
表1本发明胶囊对小鼠自主活动的影响(x±s)组别剂量 探究次数 跨线次数 探究/跨线mg/kg 次/5分钟 次/5分钟对照组20.25±16.7148.75±18.910.37±0.22帕罗西汀 4.6721.33±18.0254±19.99 0.36±0.23本发明150 23.33±17.7050.83±28.210.44±0.27本发明300 20.67±14.3047.5±23.11 0.42±0.42本发明600 17.5±15.89 39±20.09 0.35±0.24与对照组相比，P＞0.05。n＝12表2本发明胶囊对小鼠悬尾不动时间的影响(x±s)组别 剂量累积不动时间(s)mg/kg 给药前第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天对照组 113.07 126.84 122.12 117.30129.14 151.29 166.02±52.18 ±34.38±34.02±52.35 ±21.71±29.81±32.88帕罗西汀 4.67 88.4670.31 69.07 79.99 57.77 41.33 66.81±39.03 ±45.63**±26.81**±31.30*±33.15**±25.58**±25.81**本发明 15089.3198.98 99.06 85.64 106.66 101.58 107.10±34 14 ±44.35±31.99±41.16 ±43.11±27.04**±31.08**本发明 30097.7397.26 105.19 106.60103.56 115.52 101.96±32.82 ±36.98±45.77±37.49 ±47.05±39.53*±50.55**本发明 600101.66 105.96 101.82 109.1296.2398.21 91.61±37.89 ±36.28±30.62±41.37 ±37.26*±42.32**±38.85**与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01。n＝12表3本发明胶囊对小鼠强迫性游泳的影响(x±s)组别 剂量 累积不动时间(s)mg/k 给药前 第1天第2天第3天第4天 第5天第6天g对照组 100.52 92.80128.34 95.51115.37 154.74142.67±42.93 ±55.65 ±63.54 ±58.20 ±64.12 ±46.31 ±57.51帕罗西汀 4.67 119.17 94.83115.80 94.5198.6795.56 71.19±50.47 ±52.00 ±48.60 ±79.19 ±71.62 ±73.86*±53.54**本发明150 111.27 81.2389.8459.7773.6790.32 67.99±39.77 ±49.44 ±41.19 ±51.16 ±54.06 ±68.57*±57.40**本发明300 119.85 104.53 93.9172.3491.3576.58 69.76±47.92 ±45.75 ±42.33 ±55.34 ±58.37 ±63.71**±52.12**本发明600 108.76 95.5479.3863.6095.8867.55 81.94±49.73 ±41.03 ±68.55 ±46.23 ±6233 ±50 29**±47.19**与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01。n＝12表4本发明胶囊对利血平所致眼睑下垂、运动不能作用的影响(x±s)组别 剂量 眼睑下垂 对抗百分率 运动不能对抗 百分率 死亡数mg/kg (只) (％) (只) (％)(只)对照组 12/12 0 12/120 1帕罗西汀 4.67 6/12 50**9/12 25 0本发明1509/12 25 11/128.332本发明3007/12 41.67*11/128.330本发明6005/12 58.33**7/12 41.67*1
x2检验，与对照组相比，**P＜0.01，*P＜0.05。n＝12实验结果显示，本发明胶囊在所测的剂量范围内对小鼠自主活动无明显影响。在“行为失望”造模后，本发明胶囊150-600mg/kg可使小鼠悬尾不动时间与强迫性游泳的不动时间明显减少，与对照组比较有显著性差异(p＜0.05或p＜0.01)。在拮抗利血平实验中，随着本发明胶囊剂量增大，出现眼睑下垂、运动不能的动物个数也随之减少，对抗率分别达到25％、41.67％、58.33％，经X2检验有显著性差异，由此说明，本发明胶囊能对抗利血平引起小鼠眼睑下垂，且有良好的量效关系。因此认为本发明胶囊具有一定抗抑郁作用。7天内各给药组动物死亡数与对照组相比无明显影响。
动物实验例2对5-羟色胺酸诱导小鼠甩头行为及脑内单胺递质的影响观察本发明胶囊剂对5-羟色胺酸(5-HTP)诱发小鼠甩头行为及脑内单胺递质的影响。本发明胶囊0.243g/粒，批号010802，用时以蒸馏水配至所需浓度。其它试剂药品有5-羟色胺(5-HT)，Sigma公司，批号67H0791；5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)，Sigma公司，批号26H0362；5-羟色胺酸(5-HTP)，Sigma公司，批号89H0698；邻苯二甲醛(OPT)，北京科华特种试剂联合开发中心生产，批号981012；高碘酸钠(A.R)，北京化工厂生产，批号840823；L-半胱氨酸，上海康达氨基酸厂产品，批号940904；克郁(吗氯贝胺片)，0.1g/片，湖南制药有限责任公司产品，批号000611-1，该药为选择性MAO-A抑制剂。其余试剂均为国产分析纯。试验仪器为850型荧光分光光度计(HITACHI，Japan)。
试验动物雄性KM小鼠，非近交系封闭群，体重(22.38±0.75)g，共60只。由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所提供，合格症号京动管许字第038号。实验室室温18-20℃，相对湿度50％～60％，换气扇通气，自然光源12h/日，笼养，每笼10只，每三日清扫笼舍一次。
取小鼠随机分成5组，每组12只，每天1次给予相应剂量药物，连续3d，第4天于测试前1h灌胃克郁胶囊(100mg/kg)，然后灌胃受试药物，给药剂量同前。阳性药帕罗西汀给临床等效量(4.67mg/kg)。1h后再ip 5-HTP 20mg/kg，注射后即开始观察小鼠甩头潜伏期及注射5-HTP后第25-35分钟内的甩头次数。实验结束后立即处死小鼠，迅速取出大脑，-30℃冰箱保存，用OPT缩合反应荧光分光光度法测定脑组织中5-HT、5-HIAA含量。
经预试确定下列给药方案，本发明胶囊600、300、150mg/kg，分别相当于人用量(19.44mg/kg)的30.8，15.4，7.7倍，盐酸帕罗西汀4.67mg/kg，为临床等效量，分别给小鼠口服灌胃，0.2mL/10g。
本试验测试指标为小鼠10min内的甩头次数、脑组织中5-HT、5-HIAA测定。
本试验的空白对照为蒸馏水，阳性药对照为盐酸帕罗西汀片(paroxetine)，20mg/片，它是一种抗抑郁药，可以治疗各种类型的抑郁症。中美天津史克制药有限公司产品，批号01020455，批准文号(95)卫药准字J-50号。
本试验数据均以EXCEL软件处理。
表5本发明胶囊对5-羟色胺酸诱发小鼠甩头行为的影响(x±s)组别 剂量 甩头潜伏期 甩头次数mg/kg (min) (10min)对照组 10.19±5.05 34±21.54帕罗西汀 4.67 2.42±0.88**53.17±9.76*本发明150 8.42±3.62 62.08±39.16*本发明300 7.41 ±2.08 62.42±26.18**本发明600 6.86±2.12*64.83±26.18**与对照组相比，*P＜0.05，料P＜0.01。n＝12表6本发明胶囊对小鼠脑内5-羟色胺及其代射产物的影响 (x±s)组别 剂量S-HT 5-HIAA5-HT/5-HIAAmg/kg(ng/g) (ng/g)对照组5474.80±1903.58453.12±271.25 16.01±11.08帕罗西汀 4.678752.08±3691.50*351.55±142.55 30.14±19.95*本发明150 5368.64±1346.30340.75±141.39 19.05±11.41本发明300 8039.20±3722.64*465.55±308.72 26.52±28.37本发明600 9788.05±3403.23**451.46±90.7722.43±8.80与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01。n＝125-羟色胺酸为5-羟色胺的前体物，在脑内单胺氧化酶被抑制、5-羟色胺含量升高的前提下，再给予5-羟色胺酸，可以增加脑内5-羟色胺含量，从而出现甩头的症状。因此在药物研究中，常以此来观察受试药物对5-羟色胺酸的协同作用。实验结果表明，在5-羟色胺酸的诱导下，本发明胶囊给药组甩头潜伏期随着剂量增大而缩短，甩头次数明显增加，脑内5-羟色胺含量明显升高，呈一定的量效关系，与对照组相比，差异非常显著(p＜0.05，p＜0.01)。由此可见，本发明胶囊能加强5-羟色胺酸诱导的甩头次数，并通过兴奋5-羟色胺能神经系统来起到抗抑郁作用。
权利要求
1.一种治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的水或乙醇提取物作为活性成分的原料制成知母1400～2400重量份淫羊藿500～1200重量份人参100～500重量份
2.根据权利要求1所述的复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的水或乙醇提取物作为活性成分的原料制成知母1600～2000重量份淫羊藿700～1000重量份人参200～400重量份
3.根据权利要求1所述的复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的水或乙醇提取物作为活性成分的原料制成知母1800重量份淫羊藿900重量份人参300重量份
4.根据权利要求1、2或3所述复方中药制剂，其特征在于该复方中药制剂含总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在15.0％～60.0％，淫羊藿苷含量在0.13％～3.04％；含总皂苷以人参皂苷Re(C48H82018)计，含量在8.0％～30.0％，菝葜皂苷元含量在0.30％～7.41％。
5.根据权利要求4所述的治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于所述的药物剂型是任何一种药物学上所说的剂型。
6.根据权利要求5所述的复方中药制剂，其特征在于该制剂的剂型为胶囊剂，片剂，颗粒剂，丸剂，口服液，散剂，丹剂，膏剂中的任一种药物剂型。
7.一种治疗抑郁症的复方中药制剂的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤(1)首先选取下列中药为原料知母1400～2400重量份淫羊藿500～1200重量份人参100～500重量份(2)将上述三味原料，加入水或乙醇，加热回流提取3～6次，6～10倍溶剂量，每次1.5～2.5小时，提取液滤过，回收乙醇并浓缩至每1ml含生药量0.5g的浓度，抽滤；(3)滤液通过经处理的大孔吸附树脂，先用树脂体积的6～10倍量的水洗脱，水液弃去，再用树脂柱体积3～5倍量的95％乙醇洗脱，减压回收乙醇洗脱液，真空干燥，粉碎，作为复方制剂的原料药；(4)原料药装胶囊、压片、制颗粒或制成其他药物剂型。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于原料的重量配比为知母1600～2000重量份淫羊藿700～1000重量份人参200～400重量份
9.根据权利要求7的制备方法，其特征在于原料重量配比为知母1800重量份淫羊藿900重量份人参300重量份
10.根据权利要求7、8或9所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中使用70％的乙醇加热回流提取5次，8倍溶剂量，每次2小时，提取液浓缩至每1ml含生药量0.5g的浓度；滤液通过经体积为10L的大孔吸附树脂时，先用树脂体积的8倍量的水洗脱，水液弃去，再用树脂柱体积4倍量的95％乙醇洗脱。
全文摘要
一种治疗抑郁症的中药复方制剂，涉及一种以知母、淫羊藿和人参为原料制得的抗抑郁的中成药。该药物以淫羊藿、知母为君药，人参为臣，以水或乙醇提取物作为活性成分，制得胶囊剂、片剂、颗粒剂等剂型。上述三药合用，气阴得补，心神得养，脾气健运，则抑郁症得以消除；对该方提取的有效部位群药理研究表明，该药对多种抑郁模型均有特异性地抑制作用，并能显著升高抑郁动物脑内的5－羟色胺和多巴水平，对抗利血平所致单胺类递质耗竭。
文档编号A61P25/24GK1491713SQ0315399
公开日2004年4月28日 申请日期2003年8月22日 优先权日2003年4月4日
发明者杜力军, 邢东明, 丁怡, 王锦刚, 刘祥成 申请人:清华大学, 牡丹江灵泰药业股份有限公司
技术领域：
本发明涉及一种治疗抑郁症的复方中药制剂及其制备工艺，具体的说是以知母、淫羊藿和人参为原料按照特定的工艺制备的中成药，属于中药领域。
背景技术：
抑郁症是一种以持久的情绪低落状态，伴焦虑、躯体不适，睡眠障碍为主要表现的神经症。随着社会的老龄化及不断增加的社会压力，抑郁症的发病率逐年升高，美国的一份流行病学研究表明社区中有15％的人出现抑郁症状(Blazer，D.，Burcherr，B.，Service，C.，George，L.K.The association of age and depression aming the elderlyan epidemiologic exploration.J.Gerontol，1991，46，210-215)。欧洲的一份研究得出了相同的结论(Dufouil，C.，Dartigues，J.F.，Fuhrer，R.Smptomes depressifs chez les personnes ageesconparisonentre des populations rurales et urbaines.Rev.Epidemiol.Sante Publique，1995，43，308-315)。近年来越来越多的研究资料表明，我国抑郁症的发病率和就诊率呈上升趋势(黄明生，陆林，孙学礼等。综合医疗机构情绪障碍研究。华西医学，1998，13(1)11-13)。近十几年以来，抗抑郁药的研究发展很快，许多新型抗抑郁药层出不穷。首先发现的抗抑郁药是50年代开发的单胺氧化酶抑制剂，稍后是三环类抗抑郁药，后者迄今仍是主要的临床用药。继上述二类药物之后，又开发了四环类抗抑郁药。80年代后第二代三环类药物，尤其是5-羟色胺摄取抑制剂发展迅速。根据化学结构的不同，抗抑郁药大致分为三类三环类抗抑郁剂，杂环类抗抑郁剂，单胺氧化酶抑制剂等。抑郁症属于慢性病，西药多数具有副作用或成瘾性，长期服用上述抗抑郁药，不仅需要昂贵的费用，也给患者带来了极大的毒副反应。
目前尚无专门抗抑郁中药问世，而祖国医学千百年来的临床积累，有许多对抑郁症行之有效的方药，将其研究并开发出来，已是必然。
抑郁症为郁久伤脾，饮食减少，生化乏源，则气血不和，心血不足，脾肾两虚；郁久化火易伤阴血，累及于肾，而致种种损伤。抑郁伤及心脾则情绪低落，多思善虑，言语动作减少，郁郁寡欢。心失所养则见心悸胆怯，少寐多梦健忘。气血不足，不能润养于面，面色不华，头晕神疲。脾虚气血不足，食少倦怠乏力，目光迟滞。郁久损及阴或见心烦，脾肾阳虚则见畏寒肢冷，腹胀便溏。舌质淡，苔白，脉细弱，均为气血不足的表现。故治以益气养阴，健脾益肾养心。
发明内容
本发明的目的是提供一种可以治疗抑郁症的复方中药制剂及其制备方法。
本发明是一种治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的水或乙醇提取物作为活性成分的原料制成知母1400～2400重量份淫羊藿500～1200重量份人参100～500重量份本发明原料的重量优选配比为知母1600～2000重量份淫羊藿700～1000重量份人参200～400重量份本发明原料的重量最佳配比为知母1800重量份淫羊藿900重量份人参300重量份本发明提供的治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于该复方中药制剂含总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在15.0％～60.0％，淫羊藿苷含量在0.13％～3.04％；含总皂苷以人参皂苷Re(C48H82018)计，含量在8.0％～30.0％，菝葜皂苷元含量在0.30％～7.41％。
本发明中所说的知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根茎。淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.的干燥地上部分。人参为五加科植物人参Panax ginseng C.的干燥根。上述全部组分在中华人民共和国药典2000年版一部中均有记载。
上述的原料，可以按照常规的药剂学方法制备成各种常规制剂，例如，胶囊剂，片剂，颗粒剂，丸剂，口服液，散剂，丹剂，膏剂等。
本发明还提供了一种上述治疗抑郁症的复方中药制剂的制备方法，该方法包括如下步骤(1)首先选取下列中药为原料知母1400～2400重量份淫羊藿500～1200重量份人参100～500重量份(2)将上述三味原料，加入水或乙醇，优选溶剂为70％乙醇；加热回流提取3～6次，优选5次；6～10倍溶剂量，优选8倍量；每次1.5～2.5小时，优选2小时；提取液滤过，回收乙醇并浓缩至每1ml含生药量0.5g的浓度，[相对密度约为1.00～1.20(20℃)]，抽滤；(3)滤液通过经处理的大孔吸附树脂，先用树脂体积的6～10倍量的水洗脱，优选8倍量，水液弃去；再用树脂柱体积3～5倍量的95％乙醇洗脱，优选4倍量；减压回收乙醇洗脱液，真空干燥，粉碎，作为复方制剂的原料药；
(4)将原料药装胶囊、压片、制颗粒或制成其他药物剂型，例如胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、口服液、散剂、丹剂或膏剂等。
本发明具有益气养阴、健脾益肾养心的功能。主治气阴不足、心脾两虚所致抑郁症。症见情绪低落，多思善虑，言语动作减少，郁郁寡欢。心悸胆怯，少寐多梦健忘，面色不华，头晕神疲，食少倦怠乏力，目光迟滞，或心烦，或畏寒肢冷，或腹胀便溏，舌质淡，苔白，脉细弱。
方中以淫羊藿、知母为君药，以益气补阴，气血足，心脾肾得养，精神愉快，情绪健康。淫羊藿辛甘温，归肝肾经。具有补肾壮阳，祛风除湿的作用(凌一揆。高等医药院校教材。中药学。第1版。上海科学技术出版社。1986221，34209)。《本草备要》谓淫羊藿“补命门，益精气，坚筋骨，利小便”。《神农本草经》谓淫羊藿“益气力，强志”。《日华子本草》谓淫羊藿主“丈夫绝阳无子，女人绝阴无子，老人昏耄，中所健忘，一切冷风劳气，筋骨挛急，四肢不仁，补腰膝，强心力”。现代药理研究表明，淫羊藿具有明显增强小鼠耐缺氧的能力(郭均。中国防病杂志，1964，5(3)481)，能够明显提高肾上腺皮质功能的作用(刘宝庆。中草药，1980，11(5)201)。增强下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴，性腺轴和胸腺轴的内分泌系统功能作用(李炳如。中医杂志，1984，(7)，543)。
知母苦甘寒，归肺胃肾经。具有清热泻火，滋阴润燥的功效。《本草纲目》谓知母“下则润肾燥而滋阴，上则清肺金而泻火”。《日华子本草》谓知母“润心肺，补虚乏，安心止惊悸”。药理研究表明，知母能使增多的B-肾上腺素受体最大结合位点数减少，使M-胆碱能受体最大结合位点增多，从而调整它们的相互关系，使细胞功能异常得到纠正(易宁育。中药药理与临床，1991，6(3)12)。能使受地塞米松抑制的血浆皮质醇浓度升高，并有防止肾上腺萎缩的作用(陈锐群。上海第一医学院学报，1979，(6)393)。体外实验表明，知母可减弱皮质酮C4＝5双健的打开还原与C17，20-羟基和C20酮基的变化。由于保护了皮质醇A环C4＝5双键和C3酮基不被还原及侧连上C17和C20羟基、酮基免受降解，因此能延缓肝细胞对皮质醇的分解代谢(张丽丽。上海第一医学院学报。1980，(1)，37)。知母皂苷能剂量依赖性的增加衰老大鼠脑内N受体，促进学习记忆能力(王顺官。知母皂苷对衰老大鼠促智作用机制的研究。现代中西医结合杂志，2000，9(18)1755-6)。养阴的同时，又具有一定的清热作用，以制约因郁久伤阴所出现的虚热。
方中人参为臣，一则助淫羊藿以补气，一则行健脾之功，脾健运则气血充足，心神得养，诸症得以治疗。此外人参又具有安神增智作用，多用于气血不足，心神不安，失忆多梦，心悸健忘等。人参甘苦微温，归脾肺经。具有大补无气，补脾益肺，生津止渴，安神增智的作用。《神农本草经》人参补五脏，安精神，定魂魄，止惊悸，除邪气，明目，开心益智。《用药法象》人参甘温，能补肺中元气，肺气旺则四脏之气皆旺，精自生而形自盛。药理研究表明人参具有广泛的药理活性，除了能调整中枢神经活动，促进学习记忆外，尚能增强脑内胆碱能系统功能，抑制抑制脑内5-HT被摄入大脑突触体内，从而增加突触间隙内5-HT含量(SangD et al.Planta Med.1986，(4)226王本祥。药学学报。1980，15(5)312)。人参皂苷有增加肾上腺皮质激素分泌活性的作用。其作用部位在垂体水平以上(宗瑞义等。白求恩医科大学学报。1985，11(3)254)。此外人参还有抗疲劳，抗应激，抗衰老和增强免疫的作用。
上述三药合用，气阴得补，心神得养，脾气健运。则抑郁症得以消除。对该方提取的有效部位群药理研究表明，该药对多种抑郁模型均有特异性地抑制作用，并能显著升高抑郁动物脑内的5-羟色胺和多巴水平，对抗利血平所致单胺类递质耗竭。
具体实施例方式
实施例1处方组成知母1400g淫羊藿500g人参100g制备工艺上述处方中的原料，加6倍量95％乙醇，加热回流提取3次，每次1.5小时。将3次提取液合并，减压回收乙醇并浓缩至药液浓度为0.5g生药/mL，抽滤后，滤液的相对密度约为1.10(20℃)。上述滤液经体积为10L的大孔吸附树脂柱，先用6倍树脂柱体积的去离子水或蒸馏水洗脱，再用3倍树脂柱体积的95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，去除溶剂，得到原料药。装入胶囊即得本发明胶囊剂。每粒胶囊装0.2g。
原料药中，含总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在25.7％，淫羊藿苷含量在1.21％；含总皂苷以人参皂苷Re(C48H82O18)计，含量在10.3％，菝葜皂苷元含量在2.53％。
实施例2处方组成知母2400g淫羊藿1200g人参500g制备工艺上述处方中的原料，加10倍量水，加热回流提取6次，每次2.5小时。将6次提取液合并，减压回收乙醇并浓缩至药液浓度为0.5g生药/mL，抽滤后，滤液的相对密度约为1.10(20℃)。上述滤液经体积为10L的大孔吸附树脂柱，先用10倍树脂柱体积的去离子水或蒸馏水洗脱，再用5倍树脂柱体积的95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，去除溶剂，得到原料药。装入胶囊即得本发明胶囊剂。每粒胶囊装0.2g。
原料药中，含总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在14.8％，淫羊藿苷含量在0.69％；含总皂苷以人参皂苷Re(C48H82O18)计，含量在17.1％，菝葜皂苷元含量在4.16％。
实施例3处方组成知母1800g淫羊藿900g人参300g制备工艺上述处方中的原料，加8倍量70％乙醇，加热回流提取5次，每次2小时。将5次提取液合并，减压回收乙醇并浓缩至药液浓度为0.5g生药/mL，抽滤后，滤液的相对密度约为1.10(20℃)。上述滤液经体积为10L的大孔吸附树脂柱，先用8倍树脂柱体积的去离子水或蒸馏水洗脱，再用4倍树脂柱体积的95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，去除溶剂，得到原料药。装入胶囊即得本发明胶囊剂。每粒胶囊装0.2g。
原料药中，含总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在34.0％，淫羊藿苷含量在1.60％；含总皂苷以人参皂苷Re(C48H82O18)计，含量在16.0％，菝葜皂苷元含量在3.90％。
含量测定方法(1)总黄酮的测定方法对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml约含1.0mg溶液，作为对照品溶液。
标准曲线的制备精密吸取淫羊藿苷对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。以甲醇为空白，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，在318nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取本发明原料药50mg，精密称定后，置25ml量瓶中，加无水甲醇20ml，超声处理30分钟，取出，加甲醇定容至刻度，再稀释25倍(精密吸取1ml置于25ml量瓶中，加甲醇定容至刻度)，照标准曲线制备项下的方法，测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中淫羊藿苷的含量，计算，即得。
(2)总皂苷的测定方法对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg溶液，作为对照品溶液。
标准曲线的制备精密吸取人参皂苷Re对照品溶液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分别置于试管中，水浴蒸干，加入5％香草醛冰醋酸溶液(取香草醛0.5g，加入冰醋酸少许使溶解，再加入冰醋酸至100ml)0.5ml，加入70％硫酸溶液(量取水30ml，缓慢加入浓硫酸70ml，冷却后使用)5ml，置于60℃水浴中加热15分钟，取出，于冰水浴冷却10分钟，室温下放置10分钟，以同法制成空白溶液为空白，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，在544nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，人参皂苷Re的量为横坐标，绘制标准曲线。测定法取本发明原料药50mg，精密称定，置于50ml量瓶中，加无水乙醇适量，超声提取30分钟，取出加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液35ml，加聚酰胺粉0.4g，拌匀，置水浴上挥干溶剂后，加入装有聚酰胺粉0.7g的层析柱中，用水洗脱，收集洗脱液约300ml，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，精密吸取0.3ml，置于试管中，水浴蒸干，照标准曲线制备项下的方法，自“加入5％香草醛冰醋酸溶液0.5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的含量，计算，即得。
(3)淫羊藿苷的测定方法照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。乙腈-水(30∶70)为流动相；检测波长为270nm；柱温30℃。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品约200mg，精密称定，置25ml量瓶中，加入甲醇约20ml，超声提取40分钟，取出，加入甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
(4)菝葜皂苷元的测定方法照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。甲醇为流动相；用示差检测器(2410型，Waters公司生产)检测；柱温30℃。理论板数按菝葜皂苷元峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备精密称取菝葜皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本发明原料药约250mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇约20ml，超声提取40分钟，取出，加甲醇至刻度。滤过，精密量取续滤液20ml，加盐酸1ml，置水浴上缓慢回流1.0小时，加水15ml，回收甲醇至无醇味，加入氯仿20ml，萃取，共4次，合并萃取液，回收氯仿，残渣用甲醇溶解，转移至10ml的量瓶中，加甲醇至刻度，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取滤液，即得。
测定法取对照品溶液和供试品溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。
动物实验例1对小鼠抑郁模型的治疗作用观察本发明胶囊剂对小鼠抑郁模型的治疗作用。本发明胶囊0.243g/粒，批号010802，用时以蒸馏水配至所需浓度。其它试剂药品有利血平注射液，1mg/mL，批号20000401，上海医科大学制药有限公司生产。
试验动物雄性KM小鼠，非近交系封闭群，体重(21.50±1.0)g，共60只。由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所提供，合格症号京动管许字第038号。实验室室温18-22℃，相对湿度40％～60％，换气扇通气，自然光源12h/日，笼养，每笼10只，每三日清扫笼舍一次。
取小鼠随机分成5组，每组12只，实验第1天每鼠预先进行悬尾试验与强迫性游泳试验，以诱导抑郁模型。于诱导的第2天开始灌胃给药，在第1次药后1h测定小鼠自主活动，然后重复悬尾和游泳试验，连续7d。实验结束后，每鼠皮下注射利血平注射液(3mg/kg)，同时给予相应药物，1.5h后分别测定上眼睑下垂、运动不能的动物个数及7d内小鼠死亡数。
1.小鼠自主活动观测5min内跨线数(米字线为准)、直立探究数(以小鼠两前肢抬起为准)及二者间比值。
2.小鼠悬尾试验将小鼠尾端2cm的部位用木夹子固定，倒悬于12×27×27(cm)箱内，其头部离底面约5cm，悬挂6min，记录其后4min内累积不动时间。
3.小鼠强迫性游泳试验将小鼠放入高20cm，直径12cm的圆柱型玻璃缸中，水深12cm，水温25℃，观察6min，记录其后4min内累积不动时间。不动时间是指小鼠在水中停止挣扎，或呈漂浮状态，仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面的持续时间。
4.血平拮抗试验4.1上睑下垂观察30sec内眼睑至少闭合一半的动物个数。
4.2运动不能将小鼠放入直径7.5cm的圆形白纸中央，观察15sec内仍呆在圈内的动物个数。
经预试确定下列给药方案，本发明胶囊600、300、150mg/kg，分别相当于人用量(19.44mg/kg)的30.8，15.4，7.7倍。盐酸帕罗西汀4.67mg/kg，为临床等效量。分别给小鼠口服灌胃，0.2mL/10g。
本试验的空白对照为蒸馏水，阳性药对照为盐酸帕罗西汀片(paroxetine)，20mg/片，它是一种抗抑郁药，可以治疗各种类型的抑郁症。中美天津史克制药有限公司产品，批号01020455，批准文号(95)卫药准字J-50号。
本试验数据均以EXCEL软件处理。
表1本发明胶囊对小鼠自主活动的影响(x±s)组别剂量 探究次数 跨线次数 探究/跨线mg/kg 次/5分钟 次/5分钟对照组20.25±16.7148.75±18.910.37±0.22帕罗西汀 4.6721.33±18.0254±19.99 0.36±0.23本发明150 23.33±17.7050.83±28.210.44±0.27本发明300 20.67±14.3047.5±23.11 0.42±0.42本发明600 17.5±15.89 39±20.09 0.35±0.24与对照组相比，P＞0.05。n＝12表2本发明胶囊对小鼠悬尾不动时间的影响(x±s)组别 剂量累积不动时间(s)mg/kg 给药前第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天对照组 113.07 126.84 122.12 117.30129.14 151.29 166.02±52.18 ±34.38±34.02±52.35 ±21.71±29.81±32.88帕罗西汀 4.67 88.4670.31 69.07 79.99 57.77 41.33 66.81±39.03 ±45.63**±26.81**±31.30*±33.15**±25.58**±25.81**本发明 15089.3198.98 99.06 85.64 106.66 101.58 107.10±34 14 ±44.35±31.99±41.16 ±43.11±27.04**±31.08**本发明 30097.7397.26 105.19 106.60103.56 115.52 101.96±32.82 ±36.98±45.77±37.49 ±47.05±39.53*±50.55**本发明 600101.66 105.96 101.82 109.1296.2398.21 91.61±37.89 ±36.28±30.62±41.37 ±37.26*±42.32**±38.85**与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01。n＝12表3本发明胶囊对小鼠强迫性游泳的影响(x±s)组别 剂量 累积不动时间(s)mg/k 给药前 第1天第2天第3天第4天 第5天第6天g对照组 100.52 92.80128.34 95.51115.37 154.74142.67±42.93 ±55.65 ±63.54 ±58.20 ±64.12 ±46.31 ±57.51帕罗西汀 4.67 119.17 94.83115.80 94.5198.6795.56 71.19±50.47 ±52.00 ±48.60 ±79.19 ±71.62 ±73.86*±53.54**本发明150 111.27 81.2389.8459.7773.6790.32 67.99±39.77 ±49.44 ±41.19 ±51.16 ±54.06 ±68.57*±57.40**本发明300 119.85 104.53 93.9172.3491.3576.58 69.76±47.92 ±45.75 ±42.33 ±55.34 ±58.37 ±63.71**±52.12**本发明600 108.76 95.5479.3863.6095.8867.55 81.94±49.73 ±41.03 ±68.55 ±46.23 ±6233 ±50 29**±47.19**与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01。n＝12表4本发明胶囊对利血平所致眼睑下垂、运动不能作用的影响(x±s)组别 剂量 眼睑下垂 对抗百分率 运动不能对抗 百分率 死亡数mg/kg (只) (％) (只) (％)(只)对照组 12/12 0 12/120 1帕罗西汀 4.67 6/12 50**9/12 25 0本发明1509/12 25 11/128.332本发明3007/12 41.67*11/128.330本发明6005/12 58.33**7/12 41.67*1
x2检验，与对照组相比，**P＜0.01，*P＜0.05。n＝12实验结果显示，本发明胶囊在所测的剂量范围内对小鼠自主活动无明显影响。在“行为失望”造模后，本发明胶囊150-600mg/kg可使小鼠悬尾不动时间与强迫性游泳的不动时间明显减少，与对照组比较有显著性差异(p＜0.05或p＜0.01)。在拮抗利血平实验中，随着本发明胶囊剂量增大，出现眼睑下垂、运动不能的动物个数也随之减少，对抗率分别达到25％、41.67％、58.33％，经X2检验有显著性差异，由此说明，本发明胶囊能对抗利血平引起小鼠眼睑下垂，且有良好的量效关系。因此认为本发明胶囊具有一定抗抑郁作用。7天内各给药组动物死亡数与对照组相比无明显影响。
动物实验例2对5-羟色胺酸诱导小鼠甩头行为及脑内单胺递质的影响观察本发明胶囊剂对5-羟色胺酸(5-HTP)诱发小鼠甩头行为及脑内单胺递质的影响。本发明胶囊0.243g/粒，批号010802，用时以蒸馏水配至所需浓度。其它试剂药品有5-羟色胺(5-HT)，Sigma公司，批号67H0791；5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)，Sigma公司，批号26H0362；5-羟色胺酸(5-HTP)，Sigma公司，批号89H0698；邻苯二甲醛(OPT)，北京科华特种试剂联合开发中心生产，批号981012；高碘酸钠(A.R)，北京化工厂生产，批号840823；L-半胱氨酸，上海康达氨基酸厂产品，批号940904；克郁(吗氯贝胺片)，0.1g/片，湖南制药有限责任公司产品，批号000611-1，该药为选择性MAO-A抑制剂。其余试剂均为国产分析纯。试验仪器为850型荧光分光光度计(HITACHI，Japan)。
试验动物雄性KM小鼠，非近交系封闭群，体重(22.38±0.75)g，共60只。由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所提供，合格症号京动管许字第038号。实验室室温18-20℃，相对湿度50％～60％，换气扇通气，自然光源12h/日，笼养，每笼10只，每三日清扫笼舍一次。
取小鼠随机分成5组，每组12只，每天1次给予相应剂量药物，连续3d，第4天于测试前1h灌胃克郁胶囊(100mg/kg)，然后灌胃受试药物，给药剂量同前。阳性药帕罗西汀给临床等效量(4.67mg/kg)。1h后再ip 5-HTP 20mg/kg，注射后即开始观察小鼠甩头潜伏期及注射5-HTP后第25-35分钟内的甩头次数。实验结束后立即处死小鼠，迅速取出大脑，-30℃冰箱保存，用OPT缩合反应荧光分光光度法测定脑组织中5-HT、5-HIAA含量。
经预试确定下列给药方案，本发明胶囊600、300、150mg/kg，分别相当于人用量(19.44mg/kg)的30.8，15.4，7.7倍，盐酸帕罗西汀4.67mg/kg，为临床等效量，分别给小鼠口服灌胃，0.2mL/10g。
本试验测试指标为小鼠10min内的甩头次数、脑组织中5-HT、5-HIAA测定。
本试验的空白对照为蒸馏水，阳性药对照为盐酸帕罗西汀片(paroxetine)，20mg/片，它是一种抗抑郁药，可以治疗各种类型的抑郁症。中美天津史克制药有限公司产品，批号01020455，批准文号(95)卫药准字J-50号。
本试验数据均以EXCEL软件处理。
表5本发明胶囊对5-羟色胺酸诱发小鼠甩头行为的影响(x±s)组别 剂量 甩头潜伏期 甩头次数mg/kg (min) (10min)对照组 10.19±5.05 34±21.54帕罗西汀 4.67 2.42±0.88**53.17±9.76*本发明150 8.42±3.62 62.08±39.16*本发明300 7.41 ±2.08 62.42±26.18**本发明600 6.86±2.12*64.83±26.18**与对照组相比，*P＜0.05，料P＜0.01。n＝12表6本发明胶囊对小鼠脑内5-羟色胺及其代射产物的影响 (x±s)组别 剂量S-HT 5-HIAA5-HT/5-HIAAmg/kg(ng/g) (ng/g)对照组5474.80±1903.58453.12±271.25 16.01±11.08帕罗西汀 4.678752.08±3691.50*351.55±142.55 30.14±19.95*本发明150 5368.64±1346.30340.75±141.39 19.05±11.41本发明300 8039.20±3722.64*465.55±308.72 26.52±28.37本发明600 9788.05±3403.23**451.46±90.7722.43±8.80与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01。n＝125-羟色胺酸为5-羟色胺的前体物，在脑内单胺氧化酶被抑制、5-羟色胺含量升高的前提下，再给予5-羟色胺酸，可以增加脑内5-羟色胺含量，从而出现甩头的症状。因此在药物研究中，常以此来观察受试药物对5-羟色胺酸的协同作用。实验结果表明，在5-羟色胺酸的诱导下，本发明胶囊给药组甩头潜伏期随着剂量增大而缩短，甩头次数明显增加，脑内5-羟色胺含量明显升高，呈一定的量效关系，与对照组相比，差异非常显著(p＜0.05，p＜0.01)。由此可见，本发明胶囊能加强5-羟色胺酸诱导的甩头次数，并通过兴奋5-羟色胺能神经系统来起到抗抑郁作用。
权利要求
1.一种治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的水或乙醇提取物作为活性成分的原料制成知母1400～2400重量份淫羊藿500～1200重量份人参100～500重量份
2.根据权利要求1所述的复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的水或乙醇提取物作为活性成分的原料制成知母1600～2000重量份淫羊藿700～1000重量份人参200～400重量份
3.根据权利要求1所述的复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的水或乙醇提取物作为活性成分的原料制成知母1800重量份淫羊藿900重量份人参300重量份
4.根据权利要求1、2或3所述复方中药制剂，其特征在于该复方中药制剂含总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在15.0％～60.0％，淫羊藿苷含量在0.13％～3.04％；含总皂苷以人参皂苷Re(C48H82018)计，含量在8.0％～30.0％，菝葜皂苷元含量在0.30％～7.41％。
5.根据权利要求4所述的治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于所述的药物剂型是任何一种药物学上所说的剂型。
6.根据权利要求5所述的复方中药制剂，其特征在于该制剂的剂型为胶囊剂，片剂，颗粒剂，丸剂，口服液，散剂，丹剂，膏剂中的任一种药物剂型。
7.一种治疗抑郁症的复方中药制剂的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤(1)首先选取下列中药为原料知母1400～2400重量份淫羊藿500～1200重量份人参100～500重量份(2)将上述三味原料，加入水或乙醇，加热回流提取3～6次，6～10倍溶剂量，每次1.5～2.5小时，提取液滤过，回收乙醇并浓缩至每1ml含生药量0.5g的浓度，抽滤；(3)滤液通过经处理的大孔吸附树脂，先用树脂体积的6～10倍量的水洗脱，水液弃去，再用树脂柱体积3～5倍量的95％乙醇洗脱，减压回收乙醇洗脱液，真空干燥，粉碎，作为复方制剂的原料药；(4)原料药装胶囊、压片、制颗粒或制成其他药物剂型。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于原料的重量配比为知母1600～2000重量份淫羊藿700～1000重量份人参200～400重量份
9.根据权利要求7的制备方法，其特征在于原料重量配比为知母1800重量份淫羊藿900重量份人参300重量份
10.根据权利要求7、8或9所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中使用70％的乙醇加热回流提取5次，8倍溶剂量，每次2小时，提取液浓缩至每1ml含生药量0.5g的浓度；滤液通过经体积为10L的大孔吸附树脂时，先用树脂体积的8倍量的水洗脱，水液弃去，再用树脂柱体积4倍量的95％乙醇洗脱。
全文摘要
一种治疗抑郁症的中药复方制剂，涉及一种以知母、淫羊藿和人参为原料制得的抗抑郁的中成药。该药物以淫羊藿、知母为君药，人参为臣，以水或乙醇提取物作为活性成分，制得胶囊剂、片剂、颗粒剂等剂型。上述三药合用，气阴得补，心神得养，脾气健运，则抑郁症得以消除；对该方提取的有效部位群药理研究表明，该药对多种抑郁模型均有特异性地抑制作用，并能显著升高抑郁动物脑内的5－羟色胺和多巴水平，对抗利血平所致单胺类递质耗竭。
文档编号A61P25/24GK1491713SQ0315399
公开日2004年4月28日 申请日期2003年8月22日 优先权日2003年4月4日
发明者杜力军, 邢东明, 丁怡, 王锦刚, 刘祥成 申请人:清华大学, 牡丹江灵泰药业股份有限公司
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