一种除皱祛疤的注射剂及其制备方法
专利名称：一种除皱祛疤的注射剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种除皱祛疤的注射剂及其制备方法，属于组织工程领域。
背景技术：
二十年前人们采用注射牛的胶原蛋白来治疗皱纹和疤痕，但其会出现过敏反应，同时会被组织较快的吸收，只能维持几个月的时间。为了克服这种过敏反应的缺点，有些医院采用自体皮制成胶原蛋白来注射，结果是制备过程需要大量的皮肤，而注射后仍会被组织很快的吸收。近年来许多人采用肉毒素注射来治疗皱纹和疤痕，其结果也只能维持比较短的时间，并且治疗后治疗者的表情极不自然。
发明内容
为了克服这些产品的不足之处，本发明的目的是提供一种高效、长久、愈后自然的除皱祛疤的注射剂。
本注射剂采用了人的自体皮肤经过消化分离出真皮成纤维细胞，进行体外扩增，然后注射到治疗者的皱纹或疤痕部位，这些细胞在其注射部位产生胶原组织，消除皱纹和填平疤痕。
本发明的另一个目的是提供这种注射剂的制备方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种除皱祛疤的注射剂，由1000万-4000万个真皮成纤维细胞和2-4ml浓度5％的葡萄糖注射液组成。
所述的真皮成纤维细胞是将来源于患者自体的真皮成纤维细胞经体外扩增、培养得到的。
一种除皱祛疤的注射剂的制备方法，是将来源于患者自体的真皮成纤维细胞在体外扩增培养，再按照每1000万-4000万个真皮成纤维细胞加入2-4ml浓度5％的葡萄糖注射液，制成悬浊液。
本发明是一种用患者自体皮肤细胞在体外经过增殖、培养后再次注射到皱纹、疤痕部位进行修复的除皱祛疤产品，该产品在这些部位产生胶原蛋白从而使沟纹和疤痕长平，在消除皱纹和疤痕同时又能改善局部皮肤的环境，起到年轻美颜的作用。
本发明的优点本发明使用的生物材料取自患者自体，无排斥反应，无副作用，治疗者用过后美容疗效显著，表情自然，且效果作用持久，可维持数年。
下面
具体实施例方式
对本发明作进一步说明。
具体实施例方式
实施例1、除皱祛疤的注射剂的制备一.自体健康细胞的提取用70％的酒精消毒耳后或胳膊内侧，然后用10％的利多卡因和十万分之一的肾上腺素进行局部表面麻醉。用取皮器将4平方毫米的表皮和真皮组织取下，放入组织保存液(DMEM和10％胎牛血清，美国Hyclone公司)中，将创伤部位做一针缝合，创可贴覆盖。
二.细胞悬液的制备1.组织消化(Sanya CO2培养箱)将皮肤组织块放置于35mm培养皿中加入2ml浓度为0.05％的胰酶/EDTA液，37℃，10分钟；DMEM+10％FBS培养液终止。
2.细胞分离将消化后的组织块剪碎并用吸管打散。
3.离心吹散后的细胞收集至离心管中，Backman公司控温离心机，25℃，1000转/min，离心5分钟，弃去上清液。
4.原代细胞培养在离心管中加入加1ml低血清真皮细胞培养液(Sigma公司，美国)吹悬，接种入1×35mm培养皿；Sanya CO2培养箱，37℃，5％ CO2，进行培养。
5.传代细胞培养每隔2-3天换液1次，当细胞达到50-70％汇集细胞后传代。
6.配制注射剂在体外传代至第4-6周后的真皮成纤维细胞，按每1000万-4000万个成纤维细胞加入2-4ml浓度为5％的葡萄糖注射液，配制成悬浊液。
三.产品检测1.病毒检测将皮肤组织进行培养四周后，取1ml含有细胞的培养液送北京传染病医院进行HIV和肝炎病毒的检验，确定此为无病毒细胞。
2.免疫反应测试第四周将0.1ml细胞悬浮液对受术者进行皮试(同青霉素皮试方法)，以确保无免疫反应。
3.成品检测1)外观本品为淡白色混悬液。
2)无菌试验按《中国生物制品规程》(2000版)通则《生物制品无菌试验规程》A/B项进行，结果符合无菌要求。
产品的储存和运输应在2℃-10℃、阴凉、干燥、清洁、避免阳光直射、无腐蚀性气体、无重压的环境中进行。
实施例2、临床报告一.病例标准(病例数28例)1.纳入标准年龄在55岁以下(包括55岁)；皱纹者为额头、眼周、口周皱纹；疤痕者为粉刺、创伤疤痕(大小范围无要求)。
2.排除标准年龄在55岁以上患者；有自身免疫性疾病；有慢性皮肤病者；有传染病者。
二.制备注射剂依照实施例1的方法进行。
三.治疗1.患者术前检查血尿便常规、心电图、肝肾功能、HIV、HbsAg。
2.将注射部位用70％的酒精消毒，局部注射1％的利多卡因，或者表皮用2.5％利多卡因和2.5％丙氨卡因软膏麻醉。
3.将1.5ml细胞悬液吸入3ml的注射器中备用。
4.取2.2cm长的4.5号针头，采用多点斜面(针头与皮肤的角度20°-45°)将细胞悬液注入到真皮层的上层与中层，每个注射部位选取15-20点，每点注射细胞悬液0.05-0.1ml。注射时应将注射部位表皮拉紧，使其发白，注射时应使注射部位留有弥散空间。对皱纹或疤痕部全部注射，注射完后用冰袋外敷2小时。
术后24小时内注射局部可能有轻度肿胀、麻木等感觉，一般无其它的局部和全身反应。
疗程一般皱纹注射2次，大的皱纹或瘢痕注射三次，每次注射间隔2-4周。
四、术后观察、调护1.手术后，用冰袋敷注射处2小时。
2.观察局部及全身的情况。
3.每天二次口服维生素C(每次200mg，每天共400mg)，或者局部搽含有维生素C的面霜，约6个月。
4.术后3天内防曝晒及慎用刺激性化妆品。
五.疗效分析经过对28例的病例分析，其中一次注射的病例有20例，两次注射的有8例，观察时间6个月，结果为病人我感觉满意的有24例(其满意率为85.7％)，其皱纹、疤痕明显消失，皮肤基质状况明显得到改善。
其中有个别治疗者至今已观察二年，其皱纹、疤痕已完全消失，皮肤光滑而富有弹性。
权利要求
1.一种祛皱除疤的注射剂，其特征在于该注射剂由1000万-4000万个真皮成纤维细胞和2-4ml浓度5％的葡萄糖注射液组成。
2.根据权利要求1所述的除皱祛疤的注射剂，其特征在于所述的真皮成纤维细胞是由来源于患者自体的真皮成纤维细胞经体外扩增、培养得到的。
3.一种祛皱除疤的注射剂的制备方法，其特征在于该方法是将来源于患者自体的真皮成纤维细胞在体外扩增和培养，再按照每1000万-4000万个真皮成纤维细胞加入2-4ml浓度5％的葡萄糖注射液，制成悬浊液。
全文摘要
本发明涉及了一种祛皱除疤的注射液及其制备方法，属于组织工程领域。该注射剂由1000万－4000万个真皮成纤维细胞和2－4ml浓度5％的葡萄糖注射液组成。其制备方法是将来源于患者自体的真皮成纤维细胞经体外扩增培养，再按照每1000万－4000万个真皮成纤维细胞，加入2－4ml浓度5％的葡萄糖注射液，制成悬浊液。本发明的优点是使用的生物材料取自患者自体，无排斥反应，无副作用，治疗者用过后美容疗效显著，表情自然，且效果作用持久，可维持数年。
文档编号A61K45/00GK1486702SQ0315583
公开日2004年4月7日 申请日期2003年8月25日 优先权日2003年8月25日
发明者韩斌, 韩 斌 申请人:北京以岭生物工程有限公司
技术领域：
本发明涉及一种除皱祛疤的注射剂及其制备方法，属于组织工程领域。
背景技术：
二十年前人们采用注射牛的胶原蛋白来治疗皱纹和疤痕，但其会出现过敏反应，同时会被组织较快的吸收，只能维持几个月的时间。为了克服这种过敏反应的缺点，有些医院采用自体皮制成胶原蛋白来注射，结果是制备过程需要大量的皮肤，而注射后仍会被组织很快的吸收。近年来许多人采用肉毒素注射来治疗皱纹和疤痕，其结果也只能维持比较短的时间，并且治疗后治疗者的表情极不自然。
发明内容
为了克服这些产品的不足之处，本发明的目的是提供一种高效、长久、愈后自然的除皱祛疤的注射剂。
本注射剂采用了人的自体皮肤经过消化分离出真皮成纤维细胞，进行体外扩增，然后注射到治疗者的皱纹或疤痕部位，这些细胞在其注射部位产生胶原组织，消除皱纹和填平疤痕。
本发明的另一个目的是提供这种注射剂的制备方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种除皱祛疤的注射剂，由1000万-4000万个真皮成纤维细胞和2-4ml浓度5％的葡萄糖注射液组成。
所述的真皮成纤维细胞是将来源于患者自体的真皮成纤维细胞经体外扩增、培养得到的。
一种除皱祛疤的注射剂的制备方法，是将来源于患者自体的真皮成纤维细胞在体外扩增培养，再按照每1000万-4000万个真皮成纤维细胞加入2-4ml浓度5％的葡萄糖注射液，制成悬浊液。
本发明是一种用患者自体皮肤细胞在体外经过增殖、培养后再次注射到皱纹、疤痕部位进行修复的除皱祛疤产品，该产品在这些部位产生胶原蛋白从而使沟纹和疤痕长平，在消除皱纹和疤痕同时又能改善局部皮肤的环境，起到年轻美颜的作用。
本发明的优点本发明使用的生物材料取自患者自体，无排斥反应，无副作用，治疗者用过后美容疗效显著，表情自然，且效果作用持久，可维持数年。
下面
具体实施例方式
对本发明作进一步说明。
具体实施例方式
实施例1、除皱祛疤的注射剂的制备一.自体健康细胞的提取用70％的酒精消毒耳后或胳膊内侧，然后用10％的利多卡因和十万分之一的肾上腺素进行局部表面麻醉。用取皮器将4平方毫米的表皮和真皮组织取下，放入组织保存液(DMEM和10％胎牛血清，美国Hyclone公司)中，将创伤部位做一针缝合，创可贴覆盖。
二.细胞悬液的制备1.组织消化(Sanya CO2培养箱)将皮肤组织块放置于35mm培养皿中加入2ml浓度为0.05％的胰酶/EDTA液，37℃，10分钟；DMEM+10％FBS培养液终止。
2.细胞分离将消化后的组织块剪碎并用吸管打散。
3.离心吹散后的细胞收集至离心管中，Backman公司控温离心机，25℃，1000转/min，离心5分钟，弃去上清液。
4.原代细胞培养在离心管中加入加1ml低血清真皮细胞培养液(Sigma公司，美国)吹悬，接种入1×35mm培养皿；Sanya CO2培养箱，37℃，5％ CO2，进行培养。
5.传代细胞培养每隔2-3天换液1次，当细胞达到50-70％汇集细胞后传代。
6.配制注射剂在体外传代至第4-6周后的真皮成纤维细胞，按每1000万-4000万个成纤维细胞加入2-4ml浓度为5％的葡萄糖注射液，配制成悬浊液。
三.产品检测1.病毒检测将皮肤组织进行培养四周后，取1ml含有细胞的培养液送北京传染病医院进行HIV和肝炎病毒的检验，确定此为无病毒细胞。
2.免疫反应测试第四周将0.1ml细胞悬浮液对受术者进行皮试(同青霉素皮试方法)，以确保无免疫反应。
3.成品检测1)外观本品为淡白色混悬液。
2)无菌试验按《中国生物制品规程》(2000版)通则《生物制品无菌试验规程》A/B项进行，结果符合无菌要求。
产品的储存和运输应在2℃-10℃、阴凉、干燥、清洁、避免阳光直射、无腐蚀性气体、无重压的环境中进行。
实施例2、临床报告一.病例标准(病例数28例)1.纳入标准年龄在55岁以下(包括55岁)；皱纹者为额头、眼周、口周皱纹；疤痕者为粉刺、创伤疤痕(大小范围无要求)。
2.排除标准年龄在55岁以上患者；有自身免疫性疾病；有慢性皮肤病者；有传染病者。
二.制备注射剂依照实施例1的方法进行。
三.治疗1.患者术前检查血尿便常规、心电图、肝肾功能、HIV、HbsAg。
2.将注射部位用70％的酒精消毒，局部注射1％的利多卡因，或者表皮用2.5％利多卡因和2.5％丙氨卡因软膏麻醉。
3.将1.5ml细胞悬液吸入3ml的注射器中备用。
4.取2.2cm长的4.5号针头，采用多点斜面(针头与皮肤的角度20°-45°)将细胞悬液注入到真皮层的上层与中层，每个注射部位选取15-20点，每点注射细胞悬液0.05-0.1ml。注射时应将注射部位表皮拉紧，使其发白，注射时应使注射部位留有弥散空间。对皱纹或疤痕部全部注射，注射完后用冰袋外敷2小时。
术后24小时内注射局部可能有轻度肿胀、麻木等感觉，一般无其它的局部和全身反应。
疗程一般皱纹注射2次，大的皱纹或瘢痕注射三次，每次注射间隔2-4周。
四、术后观察、调护1.手术后，用冰袋敷注射处2小时。
2.观察局部及全身的情况。
3.每天二次口服维生素C(每次200mg，每天共400mg)，或者局部搽含有维生素C的面霜，约6个月。
4.术后3天内防曝晒及慎用刺激性化妆品。
五.疗效分析经过对28例的病例分析，其中一次注射的病例有20例，两次注射的有8例，观察时间6个月，结果为病人我感觉满意的有24例(其满意率为85.7％)，其皱纹、疤痕明显消失，皮肤基质状况明显得到改善。
其中有个别治疗者至今已观察二年，其皱纹、疤痕已完全消失，皮肤光滑而富有弹性。
权利要求
1.一种祛皱除疤的注射剂，其特征在于该注射剂由1000万-4000万个真皮成纤维细胞和2-4ml浓度5％的葡萄糖注射液组成。
2.根据权利要求1所述的除皱祛疤的注射剂，其特征在于所述的真皮成纤维细胞是由来源于患者自体的真皮成纤维细胞经体外扩增、培养得到的。
3.一种祛皱除疤的注射剂的制备方法，其特征在于该方法是将来源于患者自体的真皮成纤维细胞在体外扩增和培养，再按照每1000万-4000万个真皮成纤维细胞加入2-4ml浓度5％的葡萄糖注射液，制成悬浊液。
全文摘要
本发明涉及了一种祛皱除疤的注射液及其制备方法，属于组织工程领域。该注射剂由1000万－4000万个真皮成纤维细胞和2－4ml浓度5％的葡萄糖注射液组成。其制备方法是将来源于患者自体的真皮成纤维细胞经体外扩增培养，再按照每1000万－4000万个真皮成纤维细胞，加入2－4ml浓度5％的葡萄糖注射液，制成悬浊液。本发明的优点是使用的生物材料取自患者自体，无排斥反应，无副作用，治疗者用过后美容疗效显著，表情自然，且效果作用持久，可维持数年。
文档编号A61K45/00GK1486702SQ0315583
公开日2004年4月7日 申请日期2003年8月25日 优先权日2003年8月25日
发明者韩斌, 韩 斌 申请人:北京以岭生物工程有限公司
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