一种治疗抑郁症的中药复方制剂及其制备方法
专利名称：一种治疗抑郁症的中药复方制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗抑郁症的复方中药制剂及其制备工艺，具体的说是以太子参、葛根、淫羊藿为原料按照特定的工艺制备的中成药，属于中药技术领域。
背景技术：
抑郁症是一种以持久的情绪低落状态，伴焦虑、躯体不适，睡眠障碍为主要表现的神经症。随着社会的老龄化及不断增加的社会压力，抑郁症的发病率逐年升高，美国的一份流行病学研究表明社区中有15％的人出现抑郁症状(Blazer，D.，Burcherr，B.，Service，C.，George，L.K.The association of age and depression aming the elderlyan epidemiologic exploration.J.Gerontol，1991，46，210-215)。欧洲的一份研究得出了相同的结论(Dufouil，C.，Dartigues，J.F.，Fuhrer，R.Smptomes depressifs chez les personnes ageesconparison entre despopulations rurales et urbaines.Rev.Epidemiol.Sante Publique，1995，43，308-315)。近年来越来越多的研究资料表明，我国抑郁症的发病率和就诊率呈上升趋势。近十几年以来，抗抑郁药的研究发展很快，许多新型抗抑郁药层出不穷。首先发现的抗抑郁药是50年代开发的单胺氧化酶抑制剂，稍后是三环类抗抑郁药，后者迄今仍是主要的临床用药。继上述二类药物之后，又开发了四环类抗抑郁药。80年代后第二代三环类药物，尤其是5-羟色胺摄取抑制剂发展迅速。根据化学结构的不同，抗抑郁药大致分为三类三环类抗抑郁剂，杂环类抗抑郁剂，单胺氧化酶抑制剂等。抑郁症属于慢性病，西药多数具有副作用，长期服用上述抗抑郁药，不仅需要昂贵的费用，也给患者带来了极大的毒副反应。
目前尚有较少的专门抗抑郁中药问世，而祖国医学千百年来的临床积累，有许多对抑郁症行之有效的方药，将其研究并开发出来，已是必然。
发明内容
本发明的目的是提供一种可以治疗抑郁症或抑郁状态的复方中药制剂。
本发明的另一目的是提供治疗抑郁症或抑郁状态的复方中药制剂的制备方法。
本发明的解决方案是基于现代医学和祖国医学对抑郁证发病机理的认识及治疗原则，参考现代药理、药学研究成就，以药理试验为基础，筛选并确定以太子参多糖为主，以葛根黄酮和淫羊藿黄酮为辅的组方。最终可以保护神经原，调节内分泌系统，改善脑部供血，使脑内神经原功能保持正常，维持其神经递质的正常分泌和代谢，最终改善抑郁状态，治疗抑郁症。
本发明提供的一种治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的水或乙醇提取物作为活性成分的原料制成
太子参1000～2000重量份葛 根500～1500重量份淫羊藿100～900重量份本发明原料的重量优选配比为太子参1200～1800重量份葛 根700～1300重量份淫羊藿300～700重量份本发明原料的重量最佳配比为太子参1500重量份葛 根1000重量份淫羊藿500重量份本发明提供的治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于该复方中药制剂含总多糖以葡萄糖计含量在8.0％～30.0％，总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在15.0％～60.0％。葛根素含量在6％～32％，淫羊藿苷含量在0.13％～3.04％。
本发明中所说的太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla(Mig.)Paxex Pax et Hoffm.的干燥块根。葛根系豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根。淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.的干燥地上部分。上述全部组分在《中华人民共和国药典2000年版(一部)》中均有记载。
上述所用原料，可以按照常规的药剂学方法制备成各种常规制剂。例如，胶囊剂，片剂，颗粒剂，丸剂，口服液，散剂，丹剂，膏剂等。
本发明提供了一种上述治疗抑郁症的复方中药制剂的制备方法，该方法包括如下步骤(1)首先选取下列中药为原料太子参1000～2000重量份葛 根500～1500重量份淫羊藿100～900重量份(2)取太子参，加入8～12倍量的水，提取，提取液滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度约为1.18～1.19；加入乙醇至终浓度为80％，静置过夜，去上清；沉淀加水溶解至密度为1.060～1.065，再加入乙醇至终浓度为70％，静置至不再析出沉淀，去上清；沉淀冷冻干燥，得总多糖；(3)取葛根和淫羊藿，加入生药重量的8～16倍的50～80％乙醇回流提取，提取液滤过，合并滤液，减压回收乙醇浓缩至相对密度约为1.02～1.03；将溶液离心后，取上清通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水液弃去；再用70～80％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，浓缩至浸膏状，真空干燥，粉碎，得总黄酮；
(4)将步骤(2)中提取的总多糖与步骤(3)中提取的总黄酮粉碎，过筛，混合均匀后，作为复方制剂的原料药；(5)将原料药装胶囊、压片、制颗粒或制成其他药物剂型。
本发明具有益气养阴、健脾益肾养心的功能。主治气阴不足、心脾两虚所致抑郁症。症见情绪低落，多思善虑，言语动作减少，郁郁寡欢。心悸胆怯，少寐多梦健忘，面色不华，头晕神疲，食少倦怠乏力，目光迟滞，或心烦，舌质淡，苔白，脉细弱。
方中以太子参为君药，以益气补阴，气血足，心脾肾得养，精神愉快，情绪健康。现代药理研究，太子参主要活性成分是其多糖部分。它对小鼠抗疲劳，耐缺氧，耐低温具有明显的增强作用。还能增强小鼠免疫器官的重量，能够激活小鼠网状内皮系统吞噬功能，提高小鼠免疫后血清溶血素含量。太子参临床具有改善心气虚患者心脏功能的作用，它能够降低心肌耗氧指数，提高心肌血液供耗率。
方中以葛根、淫羊藿为臣；助太子参益气，补脾益肾，同时以其葛根辛凉清散，促进脑血流，改善微循环。葛根甘辛凉，归脾胃经，具有解肌退热，生津透疹的作用。近代用于高血压，痉项强痛[《中华人民共和国药典2000年版(一部)》，第273页]。李时珍的《本草纲目》记载葛根能“散郁火”。现代药理研究，葛根黄酮为葛根的主要有效部分。葛根黄酮具有扩张血管，改善微循环，抗心肌缺血，抗脑缺血，改善脑功能，促进学习记忆的作用。淫羊藿辛甘温，归肝肾经。具有补肾壮阳，祛风除湿的作用。《本草备要》谓淫羊藿“补命门，益精气，坚筋骨，利小便”。《神农本草经》谓淫羊藿“益气力，强志”。《日华子本草》谓淫羊藿主“丈夫绝阳无子，女人绝阴无子，老人昏耄，中所健忘，一切冷风劳气，筋骨挛急，四肢不仁，补腰膝，强心力”。现代药理研究表明，淫羊藿具有明显增强小鼠耐缺氧的能力，能够明显提高肾上腺皮质功能的作用。增强下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴，性腺轴和胸腺轴的内分泌系统功能作用。
上述三药合用，气阴并补，心神得养，脾气健运。则抑郁症得以消除。对该方提取的有效部位群药理研究表明，该药对多种抑郁模型均有特异性地抑制作用，并能显著升高抑郁动物脑内的5-羟色胺水平，对抗利血平所致单胺类递质耗竭。
具体实施例方式
实施例1处方组成太子参2000重量份葛 根500重量份淫羊藿100重量份制备工艺取太子参，加入12倍量的水(相当于生药重量)，于95℃温浸提取1次，每次2小时，提取液用纱布滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度约为1.19。加入乙醇至终浓度为80％，静置过夜，去上清。沉淀加水溶解至密度为1.060，再加入乙醇至终浓度为70％，静置至不再析出沉淀，去上清。沉淀冷冻干燥，即得总多糖；取葛根和淫羊藿，加入8倍量(相当于生药重量)的70％乙醇回流提取3次，每次1小时，提取液滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.03(相当于每1ml溶液含0.5g生药)。将溶液离心后，取上清通过大孔吸附树脂柱，先用4倍干树脂重量(W/W)的水洗脱，水液弃去。再用4倍干树脂重量的80％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，浓缩至浸膏状，真空干燥，粉碎，即得总黄酮；将以上提取的总多糖与总黄酮粉碎，过60目筛，混合均匀后，作为复方制剂的原料药。装入胶囊即得本发明胶囊剂。
原料药中，含总多糖以葡萄糖(C6H12O6)计含量在45.0％，总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在14.0％。葛根素(C21H20O9)含量在3.68％，淫羊藿苷含量在0.26％。
实施例2处方组成太子参1500重量份葛 根1000重量份淫羊藿500重量份制备工艺取太子参，加入10倍量的水(相当于生药重量)，于90℃温浸提取3次，每次3小时，提取液用纱布滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度约为1.18。加入乙醇至终浓度为80％，静置过夜，去上清。沉淀加水溶解至密度为1.065，再加入乙醇至终浓度为70％，静置至不再析出沉淀，去上清。沉淀冷冻干燥，即得总多糖；取葛根和淫羊藿叶，加入10倍量(相当于生药重量)的80％乙醇回流提取3次，每次1小时，提取液趁热滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度约为1.03(相当于每1ml溶液含0.5g生药)。将溶液离心后，取上清通过大孔吸附树脂柱，先用6倍干树脂重量(W/W)的水洗脱，水液弃去。再用6倍干树脂重量的80％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，浓缩至浸膏状，真空干燥，粉碎，即得总黄酮；将以上提取的总多糖与总黄酮粉碎，过60目筛，混合均匀后，作为复方制剂的原料药。装入胶囊即得本发明胶囊剂。
原料药中，含总多糖以葡萄糖(C6H12O6)计含量在34.56％，总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在17.54％。葛根素(C21H20O9)含量在6.59％，淫羊藿苷含量在0.65％。
实施例3处方组成
太子参1000重量份葛 根1500重量份淫羊藿900重量份制备工艺取太子参，加入8倍量的水(相当于生药重量)，于90℃温浸提取3次，每次2小时，提取液用纱布滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度约为1.19。加入乙醇至终浓度为80％，静置过夜，去上清。沉淀加水溶解至密度为1.065，再加入乙醇至终浓度为70％，静置至不再析出沉淀，去上清。沉淀冷冻干燥，即得总多糖；取葛根和淫羊藿，加入14倍量(相当于生药重量)的80％乙醇回流提取3次，每次1小时，提取液趁热滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度约为1.02(相当于每1ml溶液含0.5g生药)。将溶液离心后，取上清通过大孔吸附树脂柱，先用8倍干树脂重量(W/W)的水洗脱，水液弃去。再用10倍干树脂重量的80％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，浓缩至浸膏状，真空干燥，粉碎，即得总黄酮；将以上提取的总多糖与总黄酮粉碎，过60目筛，混合均匀后，作为复方制剂的原料药。装入胶囊即得本发明胶囊剂。每粒胶囊装0.37g。
原料药中，含总多糖以葡萄糖(C6H12O6)计含量在12.0％，总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在27.0％。葛根素(C21H20O9)含量在12.0％，淫羊藿苷含量在1.24％。
含量测定方法(1)总多糖测定方法苯酚试液的配制称取苯酚99.8g，铝片0.1g，碳酸氢钠0.05g，进行蒸馏，收集82oC度馏分10g，加入蒸馏水190ml，即得。
标准溶液的配制称105oC干燥的葡萄糖98.4mg，用蒸馏水配置成100ml溶液。取出10ml，用蒸馏水稀释到100ml待用。
标准曲线的制备用移液管精密吸取标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置10ml具塞试管中，依次加入蒸馏水使最终体积为2.0ml，另取2.0ml蒸馏水作空白对照。各管加入1.0ml苯酚试液，摇匀，迅速滴加浓硫酸各5ml，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min(要求准确记时)，取出至冷水中冷却10min。于UV-1800PC紫外分光光度计490nm处测定各管吸收度，并吸收度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线，得到回归方程。
样品的测定取原料药粉末，精密称定20mg，置100ml容量瓶中，各加入蒸馏水溶解并定容至至刻度，摇匀。再精密吸取0.5ml，置10ml具塞试管中。照标准曲线制备项下的方法，测定吸收度，根据回归方程计算供试品溶液中多糖的含量，即得。
(2)总黄酮的测定方法对照品溶液的制备精称葛根素对照品适量，置25ml容量瓶中，用无水乙醇溶解，稀释至刻度，摇匀，即得1ml中含葛根素0.1mg的溶液。
标准曲线的制备精密吸取葛根素对照溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于10ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度，摇匀。以无水乙醇作为空白，在TV-1800PC紫外分光光度计250nm处测定吸收度，绘制标准曲线，得到回归方程。
样品的测定取原料药粉末，精密称定10mg，置50ml容量瓶中，各加入80％乙醇溶解并定容至至刻度，摇匀。再精密吸取1ml，置25ml容量瓶中，加80％乙醇稀释至刻度，摇匀。照标准曲线制备项下的方法，测定吸收度，根据回归方程计算供试品溶液中总黄酮的含量，即得。
(3)淫羊藿苷的测定方法照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。乙腈-水(27∶73)为流动相；紫外检测器检测波长为270nm；柱温30℃。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，置10ml量瓶中加甲醇至刻度，摇匀配制成浓度为每1ml含0.77mg的溶液，精密吸取1ml，置5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀配制成浓度为0.154mg/ml的淫羊藿苷溶液。
供试品溶液的制备取原料药粉末，精密称定64mg，置10ml量瓶中，加入80％乙醇超声处理5-10分钟，摇匀并定容至刻度，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液备用。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
(4)葛根素测定方法照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。乙腈-0.5％磷酸(10∶90)为流动相；紫外检测器检测波长为270nm；柱温30℃。理论板数按葛根素峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品适量，置25ml量瓶中，加甲醇溶解，摇匀并定容至刻度，制成浓度为每1ml含400ug的溶液，精密吸取2ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀制成每ml含80ug的葛根素溶液。
供试品溶液的制备取原料药粉末，精密称定32mg，置100ml量瓶中，加80％乙醇，超声处理2-5分钟，摇匀并定容至刻度。用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。
动物实验例1
对小鼠抑郁模型的治疗作用观察本发明胶囊剂对小鼠抑郁模型的治疗作用。本发明胶囊0.37g/粒，批号020813，用时以蒸馏水配至所需浓度。其它试剂药品有利血平注射液，1mg/mL，批号20000401，上海医科大学制药有限公司生产。
试验动物雄性KM小鼠，非近交系封闭群，体重(19.04±0.98)g，共60只。由中国医学科学院实验动物研究所提供，合格证号SCXK11-00-0006。实验室室温23-25℃，相对湿度50％～65％，换气扇通气，自然光源12小时/日，笼养，每笼10只，每三日清扫笼舍一次。
取小鼠随机分成5组，每组12只，实验第1天每鼠预先进行悬尾试验与强迫性游泳试验，以诱导抑郁模型。于诱导的第2天开始灌胃给药，在第1次药后1h测定小鼠自主活动，然后重复悬尾和游泳试验，连续7天。实验结束后，每鼠皮下注射利血平注射液(3mg/kg)，同时给予相应药物，1.5小时后分别测定上眼睑下垂、运动不能的动物个数及7d内小鼠死亡数。
1.小鼠自主活动观测5min内跨线数(米字线为准)、直立探究数(以小鼠两前肢抬起为准)及二者间比值。
2.小鼠悬尾试验将小鼠尾端2cm的部位用木夹子固定，倒悬于12×27×27(cm)箱内，其头部离底面约5cm，悬挂6min，记录其后4min内累积不动时间。
3.小鼠强迫性游泳试验将小鼠放入高20cm，直径12cm的圆柱型玻璃缸中，水深12cm，水温25℃，观察6min，记录其后4min内累积不动时间。不动时间是指小鼠在水中停止挣扎，或呈漂浮状态，仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面的持续时间。
4.利血平拮抗试验4.1上睑下垂观察30sec内眼睑至少闭合一半的动物个数。
4.2运动不能将小鼠放入直径7.5cm的圆形白纸中央，观察15sec内仍呆在圈内的动物个数。
经预试确定下列给药方案，本发明胶囊800、400、200mg/kg。阿米替林，70mg/kg。分别给小鼠口服灌胃，0.2mL/10g。
本试验的空白对照为蒸馏水，阳性药对照为阿米替林片，25mg/片，它是一种抗抑郁药，可以治疗各种类型的抑郁症。湖南洞庭药业股份有限公司产品，批号020214，批准文号湘卫药准字(1996)第021160号。
本试验数据均以EXCEL软件处理。
表1本发明胶囊对小鼠自主活动的影响(x±s)组别剂量 探究次数 跨线次数 探究/跨线mg/kg 次/5分钟 次/5分钟对照组 20.25±16.71 48.75±18.91 0.37±0.22
阿米替林70 21.33±18.02 54±19.99 0.36±0.23本发明 80023.33±17.70 50.83±28.21 0.44±0.27本发明 40020.67±14.30 47.5±23.110.42±0.42本发明 20017.5±15.89 39±20.09 0.35±0.24与对照组相比，P＞0.05。n＝12表2本发明胶囊对小鼠悬尾不动时间的影响(x±s)组别 剂量 累积不动时间(s)mg/kg给药前第3天 第4天 第5天 第6天 第7天对照组 99.05 79.95 ± 128.82 ±135.95 139.42150.49±42.41 37.09 31.81 ±27.38 ±40.19 ±42.32阿米替70 106.4845.09 ± 48.45 ±30.19 ± 34.83±32.16 ±林 ±38.16 36.81* 29.6** 23.03** 27.21** 30.58**本发明800 88.67 110.88 91.52 ±89.52 ± 87.59± 98.15 ±±40.99 ±36.8838.98* 53.01* 35.55** 33.54**本发明400 108.66115.52 97.06 117.4 ± 105.6± 98.09 ±±41.58 ±25.53±45.32 49.999 35.84*30.33**本发明200 103.16113.19 97.88 107.29 127.04131.37±42.53 ±52.39±58.87 ±59.31 ±39.46 ±46.69与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01。n＝12表3本发明胶囊对小鼠强迫性游泳的影响(x±s)组别 剂量累积不动时间(s)mg/kg给药前 第3天 第4天 第5天 第6天 第7天对照组 73.5± 83.28 ± 84.04 ± 121.03 ± 134.29 122.5520.12 40.69 46.97 41.54 ±40.05 ±38.75阿米替70 71.19 ±44.64 ± 34.11 ± 46.33 ± 44.15 ± 41.34±林 21.45 26.65* 18.46**38.13** 38.3** 31.92**本发明800 77.16 ±92.25 ± 59.33 85.34 ± 95.14 ± 91.2 ±19.03 43.9 ±42.3340.16* 42.27* 27.59*本发明400 88.26 ±111.18 81.59 104.02 ± 111.69 84.6436.39 ±41.93±48.9735.34 ±33.69 ±40.02*本发明200 82.52 87.89 ± 72.97 105.69 106.24 82.97
±37.99 36.34 ±46.92±32.89 ±40.06 ±45.65*与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01。n＝12表4本发明胶囊对利血平所致眼睑下垂、运动不能作用的影响(x±s)组别剂量 眼睑下垂对抗百分率运动不能对抗百分率mg/kg(只)(％) (只)(％)对照组 12/12 0 11/12 0阿米替林70 5/1258.33*2/1283.33**本发明 800 3/1275.0* 3/1275.0*本发明 400 5/1258.33*5/1258.33*本发明 200 7/1241.67*6/1250*x2检验，与对照组相比，**P＜0.01，*P＜0.05。n＝12注对抗百分率＝(对照组-给药组)/对照组×100％实验结果显示，本发明胶囊在所测的剂量范围内对小鼠自主活动无明显影响。在“行为失望”造模后，本发明胶囊200-800mg/kg可使小鼠悬尾不动时间与强迫性游泳的不动时间明显减少，与对照组比较有显著性差异(p＜0.05或p＜0.01)。在拮抗利血平实验中，随着本发明胶囊剂量增大，出现眼睑下垂、运动不能的动物个数也随之减少，对抗率分别达到75％、58.33％，41.67％、经X2检验有显著性差异，由此说明，本发明胶囊能对抗利血平引起小鼠眼睑下垂，且有良好的量效关系。提示本发明胶囊具有一定抗抑郁作用。
动物实验例2对5-羟色胺酸诱导小鼠甩头行为及脑内单胺递质的影响观察本发明胶囊剂对5-羟色胺酸(5-HTP)诱发小鼠甩头行为及脑内单胺递质的影响。本发明胶囊0.370g/粒，批号020813，用时以蒸馏水配至所需浓度。其它试剂药品有5-羟色胺(5-HT)，Sigma公司，批号67H0791；5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)，Sigma公司，批号26H0362；5-羟色胺酸(5-HTP)，Sigma公司，批号89H0698；邻苯二甲醛(OPT)，北京科华特种试剂联合开发中心生产，批号981012；高碘酸钠(A.R)，北京化工厂生产，批号840823；L-半胱氨酸，上海康达氨基酸厂产品，批号940904；克郁(吗氯贝胺片)，0.1g/片，湖南制药有限责任公司产品，批号000611-1，该药为选择性MAO-A抑制剂。其余试剂均为国产分析纯。试验仪器为850型荧光分光光度计(HITACHI，Japan)。
试验动物雄性ICR小鼠，非近交系封闭群，体重(19.42±0.68)g。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK(京)2002-0003。实验室室温22-25℃，相对湿度45％～60％，换气扇通气，自然光源12h/日，笼养，每笼10只，每三日清扫笼舍一次。
取小鼠随机分成5组，每组12只，每天1次给予相应剂量药物，连续7d，第7天于测试前1h灌胃克郁胶囊(100mg/kg)，然后灌胃受试药物，给药剂量同前。阳性药帕罗西汀给临床等效量(4.67mg/kg)。1h后再ip 5-HTP 20mg/kg，注射后即开始观察小鼠甩头潜伏期及注射5-HTP后第25-35分钟内的甩头次数。实验结束后立即处死小鼠，迅速取出大脑，-30℃冰箱保存，用OPT缩合反应荧光分光光度法测定脑组织中5-HT、5-HIAA含量。
经预试确定下列给药方案，本发明胶囊800、400、200mg/kg。阿米替林70mg/kg，分别给小鼠口服灌胃，0.2mL/10g。
本试验测试指标为小鼠10min内的甩头次数、脑组织中5-HT、5-HIAA测定。
本试验的空白对照为蒸馏水，阳性药对照为阿米替林片，25mg/片，它是一种抗抑郁药，可以治疗各种类型的抑郁症。湖南洞庭药业股份有限公司产品，批号020214，批准文号湘卫药准字(1996)第021160号。
本试验数据均以EXCEL软件处理。
表5本发明胶囊对对5-羟色胺酸诱发小鼠甩头行为的影响(x±s)组别 剂量甩头潜伏期 甩头次数mg/kg (s) (10min)对照组1303.7±354.87 9.92±8.52阿米替林 70 784.92±331.14**26.75±18.06**本发明胶囊800 658.67±388.79**37.58±26.61**本发明胶囊400 733.25±526.58**17.67±10.23*本发明胶囊200 1129.0±552.7 12.0±9.67与对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。n＝1权利要求
1. 一种治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的水或/和乙醇提取物作为活性成分的原料制成太子参1000～2000重量份葛 根500～1500重量份淫羊藿100～900重量份。
2.按照权利要求1所述的复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的水或/和乙醇提取物作为活性成分的原料制成太子参1200～1800重量份葛 根700～1300重量份淫羊藿300～700重量份。
3.按照权利要求1的所述复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的下列组份的水或/和乙醇提取物作为活性成分的原料制成太子参1500重量份葛 根1000重量份淫羊藿500重量份。
4.按照权利要求1、2或3所述的治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于该复方中药制剂含总多糖以葡萄糖计含量在8.0％～50.0％，总黄酮以淫羊藿苷计，含量在10.0％～30.0％，葛根素含量在3％～15％，淫羊藿苷含量在0.13％～1.4％。
5.按照权利要求4所述的复方中药制剂，其特征在于所述中药制剂是任何一种药物学上所说的剂型。
6.按照权利要求5所述的复方中药制剂，其特征在于所述剂型为胶囊剂，片剂，颗粒剂，丸剂，口服液，散剂，丹剂，膏剂中的任一种药物剂型。
7. 一种治疗抑郁症的复方中药制剂的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤(1)首先选取下列中药为原料太子参1000～2000重量份葛 根500～1500重量份淫羊藿100～900重量份；(2)取太子参，加入8～12倍量的水，提取，提取液滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度约为1.18～1.19；加入乙醇至终浓度为80％，静置过夜，去上清；沉淀加水溶解至密度为1.060～1.065，再加入乙醇至终浓度为70％，静置至不再析出沉淀，去上清；沉淀冷冻干燥，得总多糖；(3)取葛根和淫羊藿，加入生药重量的8～16倍的50～80％乙醇回流提取，提取液滤过，合并滤液，减压回收乙醇浓缩至相对密度约为1.02～1.03；将溶液离心后，取上清通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水液弃去；再用50～80％7醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，浓缩至浸膏状，真空干燥，粉碎，得总黄酮；(4)将步骤(2)中提取的总多糖与步骤(3)中提取的总黄酮粉碎，过筛，混合均匀后，作为复方制剂的原料药；(5)将原料药装胶囊、压片、制颗粒或制成其他药物剂型。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中使用相当于生药重量8～12倍量的水，于80～95℃温浸提取1～3次，每次2～3小时；步骤(3)中所使用的乙醇浓度80％，乙醇量为生药重量的12倍，回流提取1～3次，每次1～3小时。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中滤液通过大孔吸附树脂柱，先用2～8倍干树脂重量的水洗脱，水液弃去；再用4～12倍干树脂重量的80％乙醇洗脱。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于所述水洗脱的量为干树脂重量4倍，用乙醇洗脱的量为干树脂重量8倍。
全文摘要
一种治疗抑郁症的中药复方制剂及其制备方法，它是以太子参、葛根和淫羊藿为原料，经过水或/和乙醇提取分离，筛选出以太子参多糖为主，以葛根黄酮和淫羊藿黄酮为辅的复方制剂，制成一定的剂型，本发明具有益气养阴、健脾益肾养心的功能；主治气阴不足、心脾两虚所致抑郁症。对该方提取的有效部位群药理研究表明，该药对多种抑郁模型均有特异性地抑制作用，并能显著升高抑郁动物脑内的5－羟色胺水平，对抗利血平所致单胺类递质耗竭。
文档编号A61P25/00GK1589865SQ0315636
公开日2005年3月9日 申请日期2003年9月5日 优先权日2003年9月5日
发明者邢东明, 杜力军, 王伟, 张陆军, 王进玲 申请人:清华大学, 北京清大英华生物技术有限公司
技术领域：
本发明涉及一种治疗抑郁症的复方中药制剂及其制备工艺，具体的说是以太子参、葛根、淫羊藿为原料按照特定的工艺制备的中成药，属于中药技术领域。
背景技术：
抑郁症是一种以持久的情绪低落状态，伴焦虑、躯体不适，睡眠障碍为主要表现的神经症。随着社会的老龄化及不断增加的社会压力，抑郁症的发病率逐年升高，美国的一份流行病学研究表明社区中有15％的人出现抑郁症状(Blazer，D.，Burcherr，B.，Service，C.，George，L.K.The association of age and depression aming the elderlyan epidemiologic exploration.J.Gerontol，1991，46，210-215)。欧洲的一份研究得出了相同的结论(Dufouil，C.，Dartigues，J.F.，Fuhrer，R.Smptomes depressifs chez les personnes ageesconparison entre despopulations rurales et urbaines.Rev.Epidemiol.Sante Publique，1995，43，308-315)。近年来越来越多的研究资料表明，我国抑郁症的发病率和就诊率呈上升趋势。近十几年以来，抗抑郁药的研究发展很快，许多新型抗抑郁药层出不穷。首先发现的抗抑郁药是50年代开发的单胺氧化酶抑制剂，稍后是三环类抗抑郁药，后者迄今仍是主要的临床用药。继上述二类药物之后，又开发了四环类抗抑郁药。80年代后第二代三环类药物，尤其是5-羟色胺摄取抑制剂发展迅速。根据化学结构的不同，抗抑郁药大致分为三类三环类抗抑郁剂，杂环类抗抑郁剂，单胺氧化酶抑制剂等。抑郁症属于慢性病，西药多数具有副作用，长期服用上述抗抑郁药，不仅需要昂贵的费用，也给患者带来了极大的毒副反应。
目前尚有较少的专门抗抑郁中药问世，而祖国医学千百年来的临床积累，有许多对抑郁症行之有效的方药，将其研究并开发出来，已是必然。
发明内容
本发明的目的是提供一种可以治疗抑郁症或抑郁状态的复方中药制剂。
本发明的另一目的是提供治疗抑郁症或抑郁状态的复方中药制剂的制备方法。
本发明的解决方案是基于现代医学和祖国医学对抑郁证发病机理的认识及治疗原则，参考现代药理、药学研究成就，以药理试验为基础，筛选并确定以太子参多糖为主，以葛根黄酮和淫羊藿黄酮为辅的组方。最终可以保护神经原，调节内分泌系统，改善脑部供血，使脑内神经原功能保持正常，维持其神经递质的正常分泌和代谢，最终改善抑郁状态，治疗抑郁症。
本发明提供的一种治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的水或乙醇提取物作为活性成分的原料制成
太子参1000～2000重量份葛 根500～1500重量份淫羊藿100～900重量份本发明原料的重量优选配比为太子参1200～1800重量份葛 根700～1300重量份淫羊藿300～700重量份本发明原料的重量最佳配比为太子参1500重量份葛 根1000重量份淫羊藿500重量份本发明提供的治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于该复方中药制剂含总多糖以葡萄糖计含量在8.0％～30.0％，总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在15.0％～60.0％。葛根素含量在6％～32％，淫羊藿苷含量在0.13％～3.04％。
本发明中所说的太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla(Mig.)Paxex Pax et Hoffm.的干燥块根。葛根系豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根。淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.的干燥地上部分。上述全部组分在《中华人民共和国药典2000年版(一部)》中均有记载。
上述所用原料，可以按照常规的药剂学方法制备成各种常规制剂。例如，胶囊剂，片剂，颗粒剂，丸剂，口服液，散剂，丹剂，膏剂等。
本发明提供了一种上述治疗抑郁症的复方中药制剂的制备方法，该方法包括如下步骤(1)首先选取下列中药为原料太子参1000～2000重量份葛 根500～1500重量份淫羊藿100～900重量份(2)取太子参，加入8～12倍量的水，提取，提取液滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度约为1.18～1.19；加入乙醇至终浓度为80％，静置过夜，去上清；沉淀加水溶解至密度为1.060～1.065，再加入乙醇至终浓度为70％，静置至不再析出沉淀，去上清；沉淀冷冻干燥，得总多糖；(3)取葛根和淫羊藿，加入生药重量的8～16倍的50～80％乙醇回流提取，提取液滤过，合并滤液，减压回收乙醇浓缩至相对密度约为1.02～1.03；将溶液离心后，取上清通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水液弃去；再用70～80％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，浓缩至浸膏状，真空干燥，粉碎，得总黄酮；
(4)将步骤(2)中提取的总多糖与步骤(3)中提取的总黄酮粉碎，过筛，混合均匀后，作为复方制剂的原料药；(5)将原料药装胶囊、压片、制颗粒或制成其他药物剂型。
本发明具有益气养阴、健脾益肾养心的功能。主治气阴不足、心脾两虚所致抑郁症。症见情绪低落，多思善虑，言语动作减少，郁郁寡欢。心悸胆怯，少寐多梦健忘，面色不华，头晕神疲，食少倦怠乏力，目光迟滞，或心烦，舌质淡，苔白，脉细弱。
方中以太子参为君药，以益气补阴，气血足，心脾肾得养，精神愉快，情绪健康。现代药理研究，太子参主要活性成分是其多糖部分。它对小鼠抗疲劳，耐缺氧，耐低温具有明显的增强作用。还能增强小鼠免疫器官的重量，能够激活小鼠网状内皮系统吞噬功能，提高小鼠免疫后血清溶血素含量。太子参临床具有改善心气虚患者心脏功能的作用，它能够降低心肌耗氧指数，提高心肌血液供耗率。
方中以葛根、淫羊藿为臣；助太子参益气，补脾益肾，同时以其葛根辛凉清散，促进脑血流，改善微循环。葛根甘辛凉，归脾胃经，具有解肌退热，生津透疹的作用。近代用于高血压，痉项强痛[《中华人民共和国药典2000年版(一部)》，第273页]。李时珍的《本草纲目》记载葛根能“散郁火”。现代药理研究，葛根黄酮为葛根的主要有效部分。葛根黄酮具有扩张血管，改善微循环，抗心肌缺血，抗脑缺血，改善脑功能，促进学习记忆的作用。淫羊藿辛甘温，归肝肾经。具有补肾壮阳，祛风除湿的作用。《本草备要》谓淫羊藿“补命门，益精气，坚筋骨，利小便”。《神农本草经》谓淫羊藿“益气力，强志”。《日华子本草》谓淫羊藿主“丈夫绝阳无子，女人绝阴无子，老人昏耄，中所健忘，一切冷风劳气，筋骨挛急，四肢不仁，补腰膝，强心力”。现代药理研究表明，淫羊藿具有明显增强小鼠耐缺氧的能力，能够明显提高肾上腺皮质功能的作用。增强下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴，性腺轴和胸腺轴的内分泌系统功能作用。
上述三药合用，气阴并补，心神得养，脾气健运。则抑郁症得以消除。对该方提取的有效部位群药理研究表明，该药对多种抑郁模型均有特异性地抑制作用，并能显著升高抑郁动物脑内的5-羟色胺水平，对抗利血平所致单胺类递质耗竭。
具体实施例方式
实施例1处方组成太子参2000重量份葛 根500重量份淫羊藿100重量份制备工艺取太子参，加入12倍量的水(相当于生药重量)，于95℃温浸提取1次，每次2小时，提取液用纱布滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度约为1.19。加入乙醇至终浓度为80％，静置过夜，去上清。沉淀加水溶解至密度为1.060，再加入乙醇至终浓度为70％，静置至不再析出沉淀，去上清。沉淀冷冻干燥，即得总多糖；取葛根和淫羊藿，加入8倍量(相当于生药重量)的70％乙醇回流提取3次，每次1小时，提取液滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.03(相当于每1ml溶液含0.5g生药)。将溶液离心后，取上清通过大孔吸附树脂柱，先用4倍干树脂重量(W/W)的水洗脱，水液弃去。再用4倍干树脂重量的80％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，浓缩至浸膏状，真空干燥，粉碎，即得总黄酮；将以上提取的总多糖与总黄酮粉碎，过60目筛，混合均匀后，作为复方制剂的原料药。装入胶囊即得本发明胶囊剂。
原料药中，含总多糖以葡萄糖(C6H12O6)计含量在45.0％，总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在14.0％。葛根素(C21H20O9)含量在3.68％，淫羊藿苷含量在0.26％。
实施例2处方组成太子参1500重量份葛 根1000重量份淫羊藿500重量份制备工艺取太子参，加入10倍量的水(相当于生药重量)，于90℃温浸提取3次，每次3小时，提取液用纱布滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度约为1.18。加入乙醇至终浓度为80％，静置过夜，去上清。沉淀加水溶解至密度为1.065，再加入乙醇至终浓度为70％，静置至不再析出沉淀，去上清。沉淀冷冻干燥，即得总多糖；取葛根和淫羊藿叶，加入10倍量(相当于生药重量)的80％乙醇回流提取3次，每次1小时，提取液趁热滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度约为1.03(相当于每1ml溶液含0.5g生药)。将溶液离心后，取上清通过大孔吸附树脂柱，先用6倍干树脂重量(W/W)的水洗脱，水液弃去。再用6倍干树脂重量的80％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，浓缩至浸膏状，真空干燥，粉碎，即得总黄酮；将以上提取的总多糖与总黄酮粉碎，过60目筛，混合均匀后，作为复方制剂的原料药。装入胶囊即得本发明胶囊剂。
原料药中，含总多糖以葡萄糖(C6H12O6)计含量在34.56％，总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在17.54％。葛根素(C21H20O9)含量在6.59％，淫羊藿苷含量在0.65％。
实施例3处方组成
太子参1000重量份葛 根1500重量份淫羊藿900重量份制备工艺取太子参，加入8倍量的水(相当于生药重量)，于90℃温浸提取3次，每次2小时，提取液用纱布滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度约为1.19。加入乙醇至终浓度为80％，静置过夜，去上清。沉淀加水溶解至密度为1.065，再加入乙醇至终浓度为70％，静置至不再析出沉淀，去上清。沉淀冷冻干燥，即得总多糖；取葛根和淫羊藿，加入14倍量(相当于生药重量)的80％乙醇回流提取3次，每次1小时，提取液趁热滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度约为1.02(相当于每1ml溶液含0.5g生药)。将溶液离心后，取上清通过大孔吸附树脂柱，先用8倍干树脂重量(W/W)的水洗脱，水液弃去。再用10倍干树脂重量的80％乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，浓缩至浸膏状，真空干燥，粉碎，即得总黄酮；将以上提取的总多糖与总黄酮粉碎，过60目筛，混合均匀后，作为复方制剂的原料药。装入胶囊即得本发明胶囊剂。每粒胶囊装0.37g。
原料药中，含总多糖以葡萄糖(C6H12O6)计含量在12.0％，总黄酮以淫羊藿苷(C33H40O15)计，含量在27.0％。葛根素(C21H20O9)含量在12.0％，淫羊藿苷含量在1.24％。
含量测定方法(1)总多糖测定方法苯酚试液的配制称取苯酚99.8g，铝片0.1g，碳酸氢钠0.05g，进行蒸馏，收集82oC度馏分10g，加入蒸馏水190ml，即得。
标准溶液的配制称105oC干燥的葡萄糖98.4mg，用蒸馏水配置成100ml溶液。取出10ml，用蒸馏水稀释到100ml待用。
标准曲线的制备用移液管精密吸取标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置10ml具塞试管中，依次加入蒸馏水使最终体积为2.0ml，另取2.0ml蒸馏水作空白对照。各管加入1.0ml苯酚试液，摇匀，迅速滴加浓硫酸各5ml，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min(要求准确记时)，取出至冷水中冷却10min。于UV-1800PC紫外分光光度计490nm处测定各管吸收度，并吸收度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线，得到回归方程。
样品的测定取原料药粉末，精密称定20mg，置100ml容量瓶中，各加入蒸馏水溶解并定容至至刻度，摇匀。再精密吸取0.5ml，置10ml具塞试管中。照标准曲线制备项下的方法，测定吸收度，根据回归方程计算供试品溶液中多糖的含量，即得。
(2)总黄酮的测定方法对照品溶液的制备精称葛根素对照品适量，置25ml容量瓶中，用无水乙醇溶解，稀释至刻度，摇匀，即得1ml中含葛根素0.1mg的溶液。
标准曲线的制备精密吸取葛根素对照溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于10ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度，摇匀。以无水乙醇作为空白，在TV-1800PC紫外分光光度计250nm处测定吸收度，绘制标准曲线，得到回归方程。
样品的测定取原料药粉末，精密称定10mg，置50ml容量瓶中，各加入80％乙醇溶解并定容至至刻度，摇匀。再精密吸取1ml，置25ml容量瓶中，加80％乙醇稀释至刻度，摇匀。照标准曲线制备项下的方法，测定吸收度，根据回归方程计算供试品溶液中总黄酮的含量，即得。
(3)淫羊藿苷的测定方法照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。乙腈-水(27∶73)为流动相；紫外检测器检测波长为270nm；柱温30℃。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品适量，置10ml量瓶中加甲醇至刻度，摇匀配制成浓度为每1ml含0.77mg的溶液，精密吸取1ml，置5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀配制成浓度为0.154mg/ml的淫羊藿苷溶液。
供试品溶液的制备取原料药粉末，精密称定64mg，置10ml量瓶中，加入80％乙醇超声处理5-10分钟，摇匀并定容至刻度，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液备用。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
(4)葛根素测定方法照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。乙腈-0.5％磷酸(10∶90)为流动相；紫外检测器检测波长为270nm；柱温30℃。理论板数按葛根素峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品适量，置25ml量瓶中，加甲醇溶解，摇匀并定容至刻度，制成浓度为每1ml含400ug的溶液，精密吸取2ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀制成每ml含80ug的葛根素溶液。
供试品溶液的制备取原料药粉末，精密称定32mg，置100ml量瓶中，加80％乙醇，超声处理2-5分钟，摇匀并定容至刻度。用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。
动物实验例1
对小鼠抑郁模型的治疗作用观察本发明胶囊剂对小鼠抑郁模型的治疗作用。本发明胶囊0.37g/粒，批号020813，用时以蒸馏水配至所需浓度。其它试剂药品有利血平注射液，1mg/mL，批号20000401，上海医科大学制药有限公司生产。
试验动物雄性KM小鼠，非近交系封闭群，体重(19.04±0.98)g，共60只。由中国医学科学院实验动物研究所提供，合格证号SCXK11-00-0006。实验室室温23-25℃，相对湿度50％～65％，换气扇通气，自然光源12小时/日，笼养，每笼10只，每三日清扫笼舍一次。
取小鼠随机分成5组，每组12只，实验第1天每鼠预先进行悬尾试验与强迫性游泳试验，以诱导抑郁模型。于诱导的第2天开始灌胃给药，在第1次药后1h测定小鼠自主活动，然后重复悬尾和游泳试验，连续7天。实验结束后，每鼠皮下注射利血平注射液(3mg/kg)，同时给予相应药物，1.5小时后分别测定上眼睑下垂、运动不能的动物个数及7d内小鼠死亡数。
1.小鼠自主活动观测5min内跨线数(米字线为准)、直立探究数(以小鼠两前肢抬起为准)及二者间比值。
2.小鼠悬尾试验将小鼠尾端2cm的部位用木夹子固定，倒悬于12×27×27(cm)箱内，其头部离底面约5cm，悬挂6min，记录其后4min内累积不动时间。
3.小鼠强迫性游泳试验将小鼠放入高20cm，直径12cm的圆柱型玻璃缸中，水深12cm，水温25℃，观察6min，记录其后4min内累积不动时间。不动时间是指小鼠在水中停止挣扎，或呈漂浮状态，仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面的持续时间。
4.利血平拮抗试验4.1上睑下垂观察30sec内眼睑至少闭合一半的动物个数。
4.2运动不能将小鼠放入直径7.5cm的圆形白纸中央，观察15sec内仍呆在圈内的动物个数。
经预试确定下列给药方案，本发明胶囊800、400、200mg/kg。阿米替林，70mg/kg。分别给小鼠口服灌胃，0.2mL/10g。
本试验的空白对照为蒸馏水，阳性药对照为阿米替林片，25mg/片，它是一种抗抑郁药，可以治疗各种类型的抑郁症。湖南洞庭药业股份有限公司产品，批号020214，批准文号湘卫药准字(1996)第021160号。
本试验数据均以EXCEL软件处理。
表1本发明胶囊对小鼠自主活动的影响(x±s)组别剂量 探究次数 跨线次数 探究/跨线mg/kg 次/5分钟 次/5分钟对照组 20.25±16.71 48.75±18.91 0.37±0.22
阿米替林70 21.33±18.02 54±19.99 0.36±0.23本发明 80023.33±17.70 50.83±28.21 0.44±0.27本发明 40020.67±14.30 47.5±23.110.42±0.42本发明 20017.5±15.89 39±20.09 0.35±0.24与对照组相比，P＞0.05。n＝12表2本发明胶囊对小鼠悬尾不动时间的影响(x±s)组别 剂量 累积不动时间(s)mg/kg给药前第3天 第4天 第5天 第6天 第7天对照组 99.05 79.95 ± 128.82 ±135.95 139.42150.49±42.41 37.09 31.81 ±27.38 ±40.19 ±42.32阿米替70 106.4845.09 ± 48.45 ±30.19 ± 34.83±32.16 ±林 ±38.16 36.81* 29.6** 23.03** 27.21** 30.58**本发明800 88.67 110.88 91.52 ±89.52 ± 87.59± 98.15 ±±40.99 ±36.8838.98* 53.01* 35.55** 33.54**本发明400 108.66115.52 97.06 117.4 ± 105.6± 98.09 ±±41.58 ±25.53±45.32 49.999 35.84*30.33**本发明200 103.16113.19 97.88 107.29 127.04131.37±42.53 ±52.39±58.87 ±59.31 ±39.46 ±46.69与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01。n＝12表3本发明胶囊对小鼠强迫性游泳的影响(x±s)组别 剂量累积不动时间(s)mg/kg给药前 第3天 第4天 第5天 第6天 第7天对照组 73.5± 83.28 ± 84.04 ± 121.03 ± 134.29 122.5520.12 40.69 46.97 41.54 ±40.05 ±38.75阿米替70 71.19 ±44.64 ± 34.11 ± 46.33 ± 44.15 ± 41.34±林 21.45 26.65* 18.46**38.13** 38.3** 31.92**本发明800 77.16 ±92.25 ± 59.33 85.34 ± 95.14 ± 91.2 ±19.03 43.9 ±42.3340.16* 42.27* 27.59*本发明400 88.26 ±111.18 81.59 104.02 ± 111.69 84.6436.39 ±41.93±48.9735.34 ±33.69 ±40.02*本发明200 82.52 87.89 ± 72.97 105.69 106.24 82.97
±37.99 36.34 ±46.92±32.89 ±40.06 ±45.65*与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01。n＝12表4本发明胶囊对利血平所致眼睑下垂、运动不能作用的影响(x±s)组别剂量 眼睑下垂对抗百分率运动不能对抗百分率mg/kg(只)(％) (只)(％)对照组 12/12 0 11/12 0阿米替林70 5/1258.33*2/1283.33**本发明 800 3/1275.0* 3/1275.0*本发明 400 5/1258.33*5/1258.33*本发明 200 7/1241.67*6/1250*x2检验，与对照组相比，**P＜0.01，*P＜0.05。n＝12注对抗百分率＝(对照组-给药组)/对照组×100％实验结果显示，本发明胶囊在所测的剂量范围内对小鼠自主活动无明显影响。在“行为失望”造模后，本发明胶囊200-800mg/kg可使小鼠悬尾不动时间与强迫性游泳的不动时间明显减少，与对照组比较有显著性差异(p＜0.05或p＜0.01)。在拮抗利血平实验中，随着本发明胶囊剂量增大，出现眼睑下垂、运动不能的动物个数也随之减少，对抗率分别达到75％、58.33％，41.67％、经X2检验有显著性差异，由此说明，本发明胶囊能对抗利血平引起小鼠眼睑下垂，且有良好的量效关系。提示本发明胶囊具有一定抗抑郁作用。
动物实验例2对5-羟色胺酸诱导小鼠甩头行为及脑内单胺递质的影响观察本发明胶囊剂对5-羟色胺酸(5-HTP)诱发小鼠甩头行为及脑内单胺递质的影响。本发明胶囊0.370g/粒，批号020813，用时以蒸馏水配至所需浓度。其它试剂药品有5-羟色胺(5-HT)，Sigma公司，批号67H0791；5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)，Sigma公司，批号26H0362；5-羟色胺酸(5-HTP)，Sigma公司，批号89H0698；邻苯二甲醛(OPT)，北京科华特种试剂联合开发中心生产，批号981012；高碘酸钠(A.R)，北京化工厂生产，批号840823；L-半胱氨酸，上海康达氨基酸厂产品，批号940904；克郁(吗氯贝胺片)，0.1g/片，湖南制药有限责任公司产品，批号000611-1，该药为选择性MAO-A抑制剂。其余试剂均为国产分析纯。试验仪器为850型荧光分光光度计(HITACHI，Japan)。
试验动物雄性ICR小鼠，非近交系封闭群，体重(19.42±0.68)g。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK(京)2002-0003。实验室室温22-25℃，相对湿度45％～60％，换气扇通气，自然光源12h/日，笼养，每笼10只，每三日清扫笼舍一次。
取小鼠随机分成5组，每组12只，每天1次给予相应剂量药物，连续7d，第7天于测试前1h灌胃克郁胶囊(100mg/kg)，然后灌胃受试药物，给药剂量同前。阳性药帕罗西汀给临床等效量(4.67mg/kg)。1h后再ip 5-HTP 20mg/kg，注射后即开始观察小鼠甩头潜伏期及注射5-HTP后第25-35分钟内的甩头次数。实验结束后立即处死小鼠，迅速取出大脑，-30℃冰箱保存，用OPT缩合反应荧光分光光度法测定脑组织中5-HT、5-HIAA含量。
经预试确定下列给药方案，本发明胶囊800、400、200mg/kg。阿米替林70mg/kg，分别给小鼠口服灌胃，0.2mL/10g。
本试验测试指标为小鼠10min内的甩头次数、脑组织中5-HT、5-HIAA测定。
本试验的空白对照为蒸馏水，阳性药对照为阿米替林片，25mg/片，它是一种抗抑郁药，可以治疗各种类型的抑郁症。湖南洞庭药业股份有限公司产品，批号020214，批准文号湘卫药准字(1996)第021160号。
本试验数据均以EXCEL软件处理。
表5本发明胶囊对对5-羟色胺酸诱发小鼠甩头行为的影响(x±s)组别 剂量甩头潜伏期 甩头次数mg/kg (s) (10min)对照组1303.7±354.87 9.92±8.52阿米替林 70 784.92±331.14**26.75±18.06**本发明胶囊800 658.67±388.79**37.58±26.61**本发明胶囊400 733.25±526.58**17.67±10.23*本发明胶囊200 1129.0±552.7 12.0±9.67与对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。n＝1权利要求
1. 一种治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的水或/和乙醇提取物作为活性成分的原料制成太子参1000～2000重量份葛 根500～1500重量份淫羊藿100～900重量份。
2.按照权利要求1所述的复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的水或/和乙醇提取物作为活性成分的原料制成太子参1200～1800重量份葛 根700～1300重量份淫羊藿300～700重量份。
3.按照权利要求1的所述复方中药制剂，其特征在于它由下列组份或下列组份的下列组份的水或/和乙醇提取物作为活性成分的原料制成太子参1500重量份葛 根1000重量份淫羊藿500重量份。
4.按照权利要求1、2或3所述的治疗抑郁症的复方中药制剂，其特征在于该复方中药制剂含总多糖以葡萄糖计含量在8.0％～50.0％，总黄酮以淫羊藿苷计，含量在10.0％～30.0％，葛根素含量在3％～15％，淫羊藿苷含量在0.13％～1.4％。
5.按照权利要求4所述的复方中药制剂，其特征在于所述中药制剂是任何一种药物学上所说的剂型。
6.按照权利要求5所述的复方中药制剂，其特征在于所述剂型为胶囊剂，片剂，颗粒剂，丸剂，口服液，散剂，丹剂，膏剂中的任一种药物剂型。
7. 一种治疗抑郁症的复方中药制剂的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤(1)首先选取下列中药为原料太子参1000～2000重量份葛 根500～1500重量份淫羊藿100～900重量份；(2)取太子参，加入8～12倍量的水，提取，提取液滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度约为1.18～1.19；加入乙醇至终浓度为80％，静置过夜，去上清；沉淀加水溶解至密度为1.060～1.065，再加入乙醇至终浓度为70％，静置至不再析出沉淀，去上清；沉淀冷冻干燥，得总多糖；(3)取葛根和淫羊藿，加入生药重量的8～16倍的50～80％乙醇回流提取，提取液滤过，合并滤液，减压回收乙醇浓缩至相对密度约为1.02～1.03；将溶液离心后，取上清通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水液弃去；再用50～80％7醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇，浓缩至浸膏状，真空干燥，粉碎，得总黄酮；(4)将步骤(2)中提取的总多糖与步骤(3)中提取的总黄酮粉碎，过筛，混合均匀后，作为复方制剂的原料药；(5)将原料药装胶囊、压片、制颗粒或制成其他药物剂型。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中使用相当于生药重量8～12倍量的水，于80～95℃温浸提取1～3次，每次2～3小时；步骤(3)中所使用的乙醇浓度80％，乙醇量为生药重量的12倍，回流提取1～3次，每次1～3小时。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中滤液通过大孔吸附树脂柱，先用2～8倍干树脂重量的水洗脱，水液弃去；再用4～12倍干树脂重量的80％乙醇洗脱。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于所述水洗脱的量为干树脂重量4倍，用乙醇洗脱的量为干树脂重量8倍。
全文摘要
一种治疗抑郁症的中药复方制剂及其制备方法，它是以太子参、葛根和淫羊藿为原料，经过水或/和乙醇提取分离，筛选出以太子参多糖为主，以葛根黄酮和淫羊藿黄酮为辅的复方制剂，制成一定的剂型，本发明具有益气养阴、健脾益肾养心的功能；主治气阴不足、心脾两虚所致抑郁症。对该方提取的有效部位群药理研究表明，该药对多种抑郁模型均有特异性地抑制作用，并能显著升高抑郁动物脑内的5－羟色胺水平，对抗利血平所致单胺类递质耗竭。
文档编号A61P25/00GK1589865SQ0315636
公开日2005年3月9日 申请日期2003年9月5日 优先权日2003年9月5日
发明者邢东明, 杜力军, 王伟, 张陆军, 王进玲 申请人:清华大学, 北京清大英华生物技术有限公司
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