新的2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐及其制法和用途的制作方法
专利名称：新的2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐及其制法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐及其制法，和以该化合物为活性成分的药物组合物，还涉及该化合物在治疗心脑缺血、心脏动脉阻塞等方面的应用。
背景技术：
急性缺血性脑卒中和冠心病以及心肌梗塞，都是由于动脉粥状硬化直至形成血栓导致缺血性损伤的疾病，该类疾病给病人带来极大的痛苦甚至生命危险。目前，该类药物的研究一直是药物研究开发的热点和前沿。
中国专利CN1382682A，申请号01109795.7，首次公开了2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐及其制法和用途，涉及一价金属离子、二价金属离子和有机碱基的盐，具体公开了钾、钠、钙、镁、锌、苯胺、苄胺、吗啉、二乙胺的盐。其说明书中公开了钾盐、钠盐、锂盐、钙盐、苄胺盐的制备，但没有公开锌盐、苯胺、吗啉、二乙胺盐的具体制备方法。其说明书中还公开了钾盐对局部脑缺血大鼠脑梗塞面积的影响，对大鼠血小板聚集的影响，以及大鼠离体心脏缺血-再灌注心率失常的保护作用，证明钾盐在上述实验中发挥了有益作用。其他盐类化合物则未进行药效实验证明其效果。
发明内容
本发明的发明人在研制新的心脑血管类药物时，研究了包括上述已公开的大量2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐，发现按照现有技术及中国专利CN1382682A已公开的制备方法，在制备这些盐类的过程中，存在下列现象1、有些碱根本不能反应，如苯胺及同类化合物，原因是苯胺类化合物的碱性太弱；2、有些虽然能够反应，但是得不到固体，包括简单的有机胺或无机氨，如氨气、甲胺、二甲胺、二乙胺、乙二胺、三乙胺等，以及简单的含氮杂环化合物，如吗啉和哌啶，只能得到粘稠的油状物；3、有些碱按照现有已公开的制备方法，得到的固体是无定形物，没有固定的熔点和良好的外观及物理形态，如钠盐、镁盐、锂盐、锌盐，在减压抽干溶剂后为泡沫状固体或胶状物，无晶型，粘性很大，难以粉碎，谈不上流动性，不适合制药工业进行加工。
4、有些碱反应后虽然可得到良好的固体，但是毒性大，如苄胺盐、叔丁胺盐。
5、部分无机碱，如钾盐有良好的晶体形态，但存在引湿性很强，对湿不稳定，在普通环境下放置时易分解的缺点，另外钾盐在静脉给药时，表现出较大的毒性。
本发明的目的，就是提供一种能够克服现有技术缺点的新的2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐，具有明显的抗血小板聚集及改善脑循环，并对心、脑缺血，心、脑动脉阻塞具有药物活性的新的化合物，该化合物具有良好的外观及物理形态，无引湿性，湿稳定性优异。
本发明的另一目的，是提供一种制备2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐的合成方法。
本发明的进一步的目的是提供一种预防和治疗心、脑缺血及心、脑动脉阻塞的药物组合物。
本发明的另一目的是提供上述化合物和组合物在制备预防和治疗心、脑缺血和心、脑动脉阻塞及改善脑微循环的药物中的应用。
为了完成本发明的目的，本发明的发明人制备并研究了一大批2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐，包括中国专利CN1382682A已公开的盐，经过理化性质、药效、毒性研究，意外地发现具有下式结构的化合物，具有各方面优异的性能，现有技术中未见对该化合物的报导。
2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐N，N’-二苄基乙二胺盐本发明化合物可按如下方法制备由2-(α-羟基戊基)苯甲酸钠(按现有公知技术，包括CN1382682A所述方法制备)酸化得到2-(α-羟基戊基)苯甲酸，溶于溶剂后在低温下与N，N’-二苄基乙二胺的溶液反应，反应温度为-10℃至10℃，优选-5℃至0℃。搅拌数小时，抽滤，用有机溶剂淋洗，抽干，干燥，即得到白色固体状的本发明化合物。上述所用溶剂包括乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯，优选乙醚。
本发明人发现本发明的化合物具有如下优异的性能1、良好的结晶形态，固定的熔点，只需简单的后处理即可达到药用纯度。
2、无引湿性，对湿稳定，有优良的外观物理形态，适合制药工业的储藏和加工。
3、动物急性毒性试验表明，与已公开的2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐相比，本发明的化合物毒性更小。
4、在动物药效模型试验中，与已公开的2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐相比，在相同剂量下对脑动脉阻塞引起的脑组织损伤显示出更加优异的保护作用和抗血小板聚集作用。说明本发明化合物对心、脑缺血具有更好的预防和治疗作用，并具有抗血小板聚集，治疗心、脑动脉阻塞，改善心、脑微循环等药理作用。
5、在动物药效模型试验中，与已公开的2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐相比，具有更小的显著性疗效剂量，即在较低剂量下，本发明的化合物即可表现出显著性的效果。进一步考虑到本化合物的分子量(656.86，钾盐246.35，钙盐454.57)较大，因此在较小的以摩尔数计的剂量下，本品即可表现出显著性的效果。
本发明的药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物为活性成分，以及含有一种或多种药学上可以接受的载体。
上文所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯醇吡咯烷酮；湿润剂如乙醇、水；崩解剂如淀粉及其衍生物，低取代羟丙基纤维素、泡腾崩解剂；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂黏土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、聚乙二醇；另外还可在组合物中加入其它辅助剂如香味剂、甜味剂等。
本发明的化合物和药物组合物可用于制备预防和治疗心、脑缺血性疾病，心、脑动脉阻塞，改善心、脑微循环障碍等疾病的药物。
本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型，包括片剂、胶囊和颗粒剂。
具体实施例方式
下面的实施例可帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例12-(α-羟基戊基)苯甲酸N，N’-二苄基乙二胺盐的制备。
1、α-羟基正戊基苯甲酸制备 操作将α-羟基正戊基苯甲酸钠(按CN1382682A制备)80g(0.348mol)和水500ml加入到2.5L的烧杯中，搅拌溶解后冷至-10℃，分批加入冷的5％的盐酸，控制内温在0至-10℃，调PH＝2～3，用乙醚500ml×3萃取，用水300ml×3洗乙醚层，洗至中性，乙醚层干燥，滤除干燥剂，减压将乙醚除尽，得白色固体64g。
2、2-(α-羟基正戊基)苯甲酸N，N’-二苄基乙二胺盐制备 操作(1)在反应瓶中加入N，N’-二苄基乙二胺37.2g(0.155mol)和乙醚1.0L，搅拌下全溶后，分批加入2-(α-羟基正戊基)苯甲酸的乙醚溶液1.0L(64g，0.31mol)，逐渐变浑浊，加完后析出大量白色固体。
(2)搅拌3～4小时后抽滤，滤饼用乙醚1500ml洗涤，抽干后将固体转移到2.5L的烧杯中，用乙醚2.0L洗涤两次，过滤，滤饼放入真空干燥器干燥，得92g白色固体，mp105～106℃，收率90.2％红外吸收光谱，KBr，3419cm-1’(γNH)，3040、3070cm-1’(γAr-H).1763cm-1’(γC＝O)核磁共振氢谱(300MHz，CD3Cl)δ(ppm)7.13-7.60(m，14H)，4.93(t，2H，两个Ar-CH)，3.92(S，4H，两个Ar-CH2)，2.99(s，4H，N-CH2CH2-N)，1.63-1.70(m，4H，两个CH2)，1.14-1.36(m，8H，两个CH2CH2)0.76-0.83(m，6H，两个CH3)ESI-MSNegative M/Z 207 Positive M/Z 241
元素分析C40H52N2O6FW656.86
实施例2各种2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐的外观性状和熔点对比表一 各种2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐的外观性状和熔点对比。
*按CN1382682A制备。**按CN1382682A中的钙盐方法制备***按照实施例1的方法制备结果表明锂盐、钠盐、镁盐、锌盐均为泡沫状或胶状固体，无明显的熔点。吗啉和二乙胺盐为粘稠液体。它们都不符合制药工业的要求。钾盐、钙盐、苄胺盐、N，N’-二苄基乙二胺盐、叔丁胺盐有良好的外观物理形态和固定的熔点。苯胺则根本不反应。
实施例3湿稳定性比较按照中国药典2000版二部附录XIX C“药物稳定性指导原则”项下“高湿度试验方法”所述方法试验，时间为10天。结果如表二。
表二 钾盐、钙盐、苄胺盐、N，N’-二苄基乙二胺盐、叔丁胺盐湿稳定性比较
*分解产物的测定采用HPLC方法，按照中国药典2000版二部附录VD试验，C18柱，流动相乙腈∶0.02M磷酸二氢钠＝40∶60，检测波长230nm，流速1ml/min。
实验结果表明，钾盐、苄胺盐的吸湿是较严重的，而且吸湿后分解严重，N，N’-二苄基乙二胺盐和钙盐吸湿较小而且稳定。叔丁胺盐吸湿不大，但稳定性稍差。
实施例4急性毒性试验本实施例选用1、动物ICR小鼠，雌雄各半，体重18-20g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。合格证号为SCXK(京)2002-0003。
2、受试药口服N，N’-二苄基乙二胺盐、钾盐、钙盐、苄胺盐、叔丁胺盐，均为北京天衡药物研究院提供，用0.5％CMC混悬，配制成不同浓度；静注钾盐，用注射用生理盐水配制。
3、试验方法ICR小鼠60只，按体重和性别随机分成6组，每组10只，雌雄各半，根据预试验结果，按组间距1∶0.8设计各组剂量。经口灌胃时给药容量为0.2ml/10g体重(钾盐静脉注射时给药容量为0.1ml/10g体重)，试验前禁食不禁水12小时，给药后常规饲养，连续观察14天，记录动物毒性反应和死亡情况，死亡组进行尸检，肉眼观察病理变化，用Bliss法计算LD50值及95％可信限。
4、试验结果表三 急性毒性试验结果化合物名称 LD50值 95％可信限N，N’-二苄基乙二胺盐 3.1910g/kg2.7851～3.656g/kg钙盐 1.5498g/kg1.3015～1.8546g/kg苄胺盐 1.4537g/kg1.316～1.6057g/kg叔丁胺盐 1.2635g/kg1.1188～1.427g/kg钾盐(口服) 1.1735g/kg1.0559～1.3041g/kg钾盐(静注) 0.382g/kg 0.3513～0.4154g/kg结果表明，各化合物对小鼠的急性毒性(口服)依次为N，N’-二苄基乙二胺盐＜钙盐＜苄胺盐＜叔丁胺盐＜钾盐，其中N，N’-二苄基乙二胺盐的毒性最小。
实施例5对大脑中动脉血栓模型(Middle Cerebral Artery Thrombosis，MCAT)大鼠神经症状及脑梗塞范围的影响本实施例选用一、动物SD大鼠，雌雄兼用，体重190～210g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK 11-00-0008。
二、药物与试剂受试药N，N’-二苄基乙二胺盐、钾盐、钙盐，均为北京天衡药物研究院提供，用0.5％CMC混悬，配制成不同浓度。
试剂FeCl3·6H2O(A.R.)，北京化工厂生产，用1mol/L盐酸配制；红四氮唑(TTC)，北京化工厂生产。
三、仪器XTT实体显微镜北京电光科学仪器厂生产；恒温水浴振荡器SHZ-22型江苏大仓医疗器械厂生产；电子分析天平AEG-220型，日本岛津产。
四、试验方法及结果(一)对MCAT大鼠神经症状的影响1、分组及给药将动物随机分为14组，即假手术组，MCAT模型组，N，N’-二苄基乙二胺盐340mg/kg、200mg/kg、170mg/kg、100mg/kg、85mg/kg、50mg/kg组，钾盐200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg组，钙盐200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg组。造模前预防给药，每天灌胃给药1次，连续给药3天，第4天造模，造模后即刻灌胃给予一次设定剂量，造模后12小时再灌胃给予一次设定剂量。对照组给予等量溶剂。
2、实施造模手术大鼠腹腔注射12％水合氯醛溶液(350mg/kg)麻醉。参照Tamura等的方法(Tamura A，Graham DI，McCulluoch J et al.Focal cerebral ischemia in therat.1.Description of technique and early neuropathological consequences following middleCerebral artery occlusion.J Cereb Blood Flow Metab，1981，153)并加以改进，将大鼠右侧卧位固定，在眼外眦和外耳道连线中点作一弧形切口，长约1.5cm，夹断颞肌并切去，暴露颞骨，用牙科钻在颧骨与颞鳞骨接合处向口侧1mm处作一直径2.5mm骨窗，清理残渣，暴露大脑中动脉(位于嗅束及大脑下静脉之间)。将吸有50％氯化铁溶液10μl的小片定量滤纸敷在此段大脑中动脉上，约30min待血管颜色变黑后取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回笼饲养。
3、行为检测参照Bederson等的方法(Bederson JB，Pitts LH，Tsuji M et al.Rat middlecerebral artery occlusionevaluation of the mode and development of a neurologicexamination.Stroke，1986，17472)并加以改进，在术后不同时间点(6h，24h)对动物进行行为评分。(1)提鼠尾离开地面约一尺，观察前肢屈曲情况。如双前肢对称伸向地面，记为0分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、肘屈曲、肩内旋或既有腕肘的屈曲又有内旋者，记为1分。(2)将动物置于平滑地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力记为0分；如向手术对侧推动时阻力下降者，记为1分。(3)将动物两前肢置一金属网上，观察两前肢的肌张力。双侧肌张力对等且有力者为0分；手术对侧前肢肌张力下降记为1分。(4)提鼠尾离开地面约一尺，动物有不停地向手术对侧旋转者，记为1分。根据以上标准评分，满分为4分，分数越高，动物的行为障碍越严重。
4、结果分析采用t检验对行为检测分值进行组间比较，结果见表四。
表四 对MCAT大鼠神经症状的影响
注与模型组比较，***P＜0.001，**P＜0.01，*P＜0.05结果表明，假手术组行为未见异常改变，模型组大鼠在术后6h、24h均出现偏瘫样症状，主要表现为手术对侧前肢内收，肩内旋，前肢肌张力降低，肩阻力下降。与模型组相比，术后6h，N，N’-二苄基乙二胺盐100～340mg/kg组大鼠的神经症状均显著改善，钾盐和钙盐各剂量组大鼠的神经症状均无显著改善(P＞0.05)；术后24h，N，N’-二苄基乙二胺盐50～340mg/kg组、钾盐和钙盐100mg/kg、200mg/kg组大鼠的神经症状均显著改善，并有明显的量效关系，钾盐和钙盐50mg/kg组均无显著改善(P＞0.05)。N，N’-二苄基乙二胺盐改善MCAT大鼠神经症状的显著性疗效剂量为50mg/kg，低于钾盐和钙盐(100mg/kg)。相同剂量下，N，N’-二苄基乙二胺盐对MCAT大鼠神经症状的改善作用强于钾盐和钙盐。
(二)对MCAT大鼠脑梗塞范围的影响动物经末次行为评分后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩余部份在4℃以下冠状切成5片。迅速将脑片置于TTC染液中(每5ml染液中含4％TTC 1.5ml，1M K2HPO40.1ml)，37℃避光温孵30分钟，再取出，置于10％甲醛液中避光保存。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占总脑重量的百分比作为脑梗塞范围。采用t检验对组间结果进行比较，结果见表五。
表五 对MCAT大鼠脑梗塞范围的影响
注与模型组比较，***P＜0.001，**P＜0.01，*P＜0.05结果表明，大鼠大脑中动脉梗塞24h后模型组大鼠出现了明显的梗塞灶，假手术组无任何改变。与模型组相比，N，N’-二苄基乙二胺盐50～340mg/kg组、钾盐、钙盐100mg/kg、200mg/kg组大鼠的脑梗塞范围均显著减轻，并有明显的量效关系；钾盐和钙盐50mg/kg组均无显著抑制作用(P＞0.05)。N，N’-二苄基乙二胺盐抑制MCAT大鼠脑梗塞范围的显著性疗效剂量为50mg/kg，低于钾盐和钙盐(100mg/kg)。相同剂量下，N，N’-二苄基乙二胺盐对MCAT大鼠脑梗塞范围的抑制作用强于钾盐和钙盐。
实施例6对大鼠血小板聚集的影响本实施例选用一、动物SD大鼠，雄性，体重220～250g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK11-00-0008。
二、药物与试剂N，N’-二苄基乙二胺盐、钾盐、钙盐，均为北京天衡药物研究院提供。阳性对照药阿司匹林(ASA)由牡丹江子宸化工制药有限公司生产，批号010622015。上述药物均用0.5％CMC混悬，配制成不同浓度。二磷酸腺苷(ADP)购自Sigma公司。
三、仪器TYXN-91智能血小板聚集仪(上海通用机电技术研究所生产)四、试验方法将大鼠随机分为11组，即溶剂对照组，ASA 100mg/kg，N，N’-二苄基乙二胺盐200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg组，钾盐200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg组、钙盐200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg组。每天灌胃给药一次，连续三天，溶剂对照组给予等量溶剂。末次给药后1小时自颈总动脉取血，用枸橼酸钠(3.8％)与全血按1∶9混合抗凝，按常规方法制备富血小板血浆(PRP)和贫血小板血浆(PPP)，用PPP调PRP至血小板数为6～7×1011·L-1。参照Born氏比浊法(G.V.R.Born and M.J.CROSSThe Aggregation of Blood Platelets，J.Physiology，1963，168178)，取200μl经调节的PRP加入比浊管内，37℃温育5分钟后加入诱导剂ADP至终浓度5μmol·L-1，测定加入ADP后5分钟内血小板的最大聚集率及聚集抑制率。
聚集抑制率＝(溶剂对照组聚集率-给药组聚集率)/溶剂对照组聚集率×100％五、试验结果结果表明，N，N’-二苄基乙二胺盐50～200mg/kg组、钾盐和钙盐100mg/kg、200mg/kg组大鼠的血小板聚集率与溶剂对照组相比均有显著差异，钾盐和钙盐50mg/kg组大鼠的血小板聚集率与溶剂对照组相比均无显著差异。相同剂量下，N，N’-二苄基乙二胺盐对大鼠血小板聚集的抑制作用强于钾盐和钙盐。结果见表六。
表六 对ADP诱导的大鼠血小板聚集的影响
注与溶剂对照组比较，***P＜0.001，**P＜0.01，*P＜0.05实施例7片剂
制备方法按配比将N，N’-二苄基乙二胺盐、淀粉、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠混匀，用水均匀润湿，制颗粒，干燥，整粒，加入硬脂酸镁、滑石粉，然后将混合物压片即得本品片剂。
实施例8胶囊
制备方法按配比将N，N’-二苄基乙二胺盐和辅料混匀，湿法制颗粒，干燥，整粒，然后将混合物按定量装入胃溶性硬胶囊中，即得本品胶囊。
实施例9颗粒剂
制备方法按配比将N，N’-二苄基乙二胺盐和辅料混匀后湿法制粒，干燥，整粒分级，分剂量包装，即得本品颗粒剂。
权利要求
1.2-(α-羟基戊基)苯甲酸N，N’-二苄基乙二胺盐，结构式如下
2.按照权利要求1中化合物的制备方法，其特征是将2-(α-羟基戊基)苯甲酸溶于有机溶剂中，然后在低温下与N，N’-二苄基乙二胺的有机溶剂的溶液反应。
3.按照权利要求1中化合物的制备方法，其特征是有机溶剂包括乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯。
4.按照权利要求1中化合物的制备方法，其特征是有机溶剂是乙醚。
5.按照权利要求1中化合物的制备方法，其特征是反应温度为-10℃至10℃。
6.按照权利要求1中化合物的制备方法，其特征是反应温度为-5℃至0℃。
7.权利要求1中化合物在制备治疗和预防心、脑缺血性疾病及心、脑动脉阻塞药物中的应用。
8.用于治疗和预防心、脑缺血性疾病、心、脑动脉阻塞，改善脑微循环的药物组合物，其特征是含有治疗有效量的权利要求1的化合物和药学上可接受的载体。
9.按照权利要求8中的药物组合物，其特征是可以制成片剂、胶囊、颗粒剂。
全文摘要
本发明涉及新的2－(α－羟基戊基)苯甲酸盐及其制法，和以该化合物为活性成分的药物组合物，还涉及该化合物在治疗心、脑缺血及心、脑动脉阻塞等方面的应用。
文档编号A61K31/185GK1523003SQ0315649
公开日2004年8月25日 申请日期2003年9月1日 优先权日2003年9月1日
发明者杨文斌, 秦华, 赵兴凯, 马喜生 申请人:北京天衡药物研究院
技术领域：
本发明涉及新的2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐及其制法，和以该化合物为活性成分的药物组合物，还涉及该化合物在治疗心脑缺血、心脏动脉阻塞等方面的应用。
背景技术：
急性缺血性脑卒中和冠心病以及心肌梗塞，都是由于动脉粥状硬化直至形成血栓导致缺血性损伤的疾病，该类疾病给病人带来极大的痛苦甚至生命危险。目前，该类药物的研究一直是药物研究开发的热点和前沿。
中国专利CN1382682A，申请号01109795.7，首次公开了2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐及其制法和用途，涉及一价金属离子、二价金属离子和有机碱基的盐，具体公开了钾、钠、钙、镁、锌、苯胺、苄胺、吗啉、二乙胺的盐。其说明书中公开了钾盐、钠盐、锂盐、钙盐、苄胺盐的制备，但没有公开锌盐、苯胺、吗啉、二乙胺盐的具体制备方法。其说明书中还公开了钾盐对局部脑缺血大鼠脑梗塞面积的影响，对大鼠血小板聚集的影响，以及大鼠离体心脏缺血-再灌注心率失常的保护作用，证明钾盐在上述实验中发挥了有益作用。其他盐类化合物则未进行药效实验证明其效果。
发明内容
本发明的发明人在研制新的心脑血管类药物时，研究了包括上述已公开的大量2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐，发现按照现有技术及中国专利CN1382682A已公开的制备方法，在制备这些盐类的过程中，存在下列现象1、有些碱根本不能反应，如苯胺及同类化合物，原因是苯胺类化合物的碱性太弱；2、有些虽然能够反应，但是得不到固体，包括简单的有机胺或无机氨，如氨气、甲胺、二甲胺、二乙胺、乙二胺、三乙胺等，以及简单的含氮杂环化合物，如吗啉和哌啶，只能得到粘稠的油状物；3、有些碱按照现有已公开的制备方法，得到的固体是无定形物，没有固定的熔点和良好的外观及物理形态，如钠盐、镁盐、锂盐、锌盐，在减压抽干溶剂后为泡沫状固体或胶状物，无晶型，粘性很大，难以粉碎，谈不上流动性，不适合制药工业进行加工。
4、有些碱反应后虽然可得到良好的固体，但是毒性大，如苄胺盐、叔丁胺盐。
5、部分无机碱，如钾盐有良好的晶体形态，但存在引湿性很强，对湿不稳定，在普通环境下放置时易分解的缺点，另外钾盐在静脉给药时，表现出较大的毒性。
本发明的目的，就是提供一种能够克服现有技术缺点的新的2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐，具有明显的抗血小板聚集及改善脑循环，并对心、脑缺血，心、脑动脉阻塞具有药物活性的新的化合物，该化合物具有良好的外观及物理形态，无引湿性，湿稳定性优异。
本发明的另一目的，是提供一种制备2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐的合成方法。
本发明的进一步的目的是提供一种预防和治疗心、脑缺血及心、脑动脉阻塞的药物组合物。
本发明的另一目的是提供上述化合物和组合物在制备预防和治疗心、脑缺血和心、脑动脉阻塞及改善脑微循环的药物中的应用。
为了完成本发明的目的，本发明的发明人制备并研究了一大批2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐，包括中国专利CN1382682A已公开的盐，经过理化性质、药效、毒性研究，意外地发现具有下式结构的化合物，具有各方面优异的性能，现有技术中未见对该化合物的报导。
2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐N，N’-二苄基乙二胺盐本发明化合物可按如下方法制备由2-(α-羟基戊基)苯甲酸钠(按现有公知技术，包括CN1382682A所述方法制备)酸化得到2-(α-羟基戊基)苯甲酸，溶于溶剂后在低温下与N，N’-二苄基乙二胺的溶液反应，反应温度为-10℃至10℃，优选-5℃至0℃。搅拌数小时，抽滤，用有机溶剂淋洗，抽干，干燥，即得到白色固体状的本发明化合物。上述所用溶剂包括乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯，优选乙醚。
本发明人发现本发明的化合物具有如下优异的性能1、良好的结晶形态，固定的熔点，只需简单的后处理即可达到药用纯度。
2、无引湿性，对湿稳定，有优良的外观物理形态，适合制药工业的储藏和加工。
3、动物急性毒性试验表明，与已公开的2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐相比，本发明的化合物毒性更小。
4、在动物药效模型试验中，与已公开的2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐相比，在相同剂量下对脑动脉阻塞引起的脑组织损伤显示出更加优异的保护作用和抗血小板聚集作用。说明本发明化合物对心、脑缺血具有更好的预防和治疗作用，并具有抗血小板聚集，治疗心、脑动脉阻塞，改善心、脑微循环等药理作用。
5、在动物药效模型试验中，与已公开的2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐相比，具有更小的显著性疗效剂量，即在较低剂量下，本发明的化合物即可表现出显著性的效果。进一步考虑到本化合物的分子量(656.86，钾盐246.35，钙盐454.57)较大，因此在较小的以摩尔数计的剂量下，本品即可表现出显著性的效果。
本发明的药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物为活性成分，以及含有一种或多种药学上可以接受的载体。
上文所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯醇吡咯烷酮；湿润剂如乙醇、水；崩解剂如淀粉及其衍生物，低取代羟丙基纤维素、泡腾崩解剂；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂黏土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、聚乙二醇；另外还可在组合物中加入其它辅助剂如香味剂、甜味剂等。
本发明的化合物和药物组合物可用于制备预防和治疗心、脑缺血性疾病，心、脑动脉阻塞，改善心、脑微循环障碍等疾病的药物。
本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型，包括片剂、胶囊和颗粒剂。
具体实施例方式
下面的实施例可帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例12-(α-羟基戊基)苯甲酸N，N’-二苄基乙二胺盐的制备。
1、α-羟基正戊基苯甲酸制备 操作将α-羟基正戊基苯甲酸钠(按CN1382682A制备)80g(0.348mol)和水500ml加入到2.5L的烧杯中，搅拌溶解后冷至-10℃，分批加入冷的5％的盐酸，控制内温在0至-10℃，调PH＝2～3，用乙醚500ml×3萃取，用水300ml×3洗乙醚层，洗至中性，乙醚层干燥，滤除干燥剂，减压将乙醚除尽，得白色固体64g。
2、2-(α-羟基正戊基)苯甲酸N，N’-二苄基乙二胺盐制备 操作(1)在反应瓶中加入N，N’-二苄基乙二胺37.2g(0.155mol)和乙醚1.0L，搅拌下全溶后，分批加入2-(α-羟基正戊基)苯甲酸的乙醚溶液1.0L(64g，0.31mol)，逐渐变浑浊，加完后析出大量白色固体。
(2)搅拌3～4小时后抽滤，滤饼用乙醚1500ml洗涤，抽干后将固体转移到2.5L的烧杯中，用乙醚2.0L洗涤两次，过滤，滤饼放入真空干燥器干燥，得92g白色固体，mp105～106℃，收率90.2％红外吸收光谱，KBr，3419cm-1’(γNH)，3040、3070cm-1’(γAr-H).1763cm-1’(γC＝O)核磁共振氢谱(300MHz，CD3Cl)δ(ppm)7.13-7.60(m，14H)，4.93(t，2H，两个Ar-CH)，3.92(S，4H，两个Ar-CH2)，2.99(s，4H，N-CH2CH2-N)，1.63-1.70(m，4H，两个CH2)，1.14-1.36(m，8H，两个CH2CH2)0.76-0.83(m，6H，两个CH3)ESI-MSNegative M/Z 207 Positive M/Z 241
元素分析C40H52N2O6FW656.86
实施例2各种2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐的外观性状和熔点对比表一 各种2-(α-羟基戊基)苯甲酸盐的外观性状和熔点对比。
*按CN1382682A制备。**按CN1382682A中的钙盐方法制备***按照实施例1的方法制备结果表明锂盐、钠盐、镁盐、锌盐均为泡沫状或胶状固体，无明显的熔点。吗啉和二乙胺盐为粘稠液体。它们都不符合制药工业的要求。钾盐、钙盐、苄胺盐、N，N’-二苄基乙二胺盐、叔丁胺盐有良好的外观物理形态和固定的熔点。苯胺则根本不反应。
实施例3湿稳定性比较按照中国药典2000版二部附录XIX C“药物稳定性指导原则”项下“高湿度试验方法”所述方法试验，时间为10天。结果如表二。
表二 钾盐、钙盐、苄胺盐、N，N’-二苄基乙二胺盐、叔丁胺盐湿稳定性比较
*分解产物的测定采用HPLC方法，按照中国药典2000版二部附录VD试验，C18柱，流动相乙腈∶0.02M磷酸二氢钠＝40∶60，检测波长230nm，流速1ml/min。
实验结果表明，钾盐、苄胺盐的吸湿是较严重的，而且吸湿后分解严重，N，N’-二苄基乙二胺盐和钙盐吸湿较小而且稳定。叔丁胺盐吸湿不大，但稳定性稍差。
实施例4急性毒性试验本实施例选用1、动物ICR小鼠，雌雄各半，体重18-20g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。合格证号为SCXK(京)2002-0003。
2、受试药口服N，N’-二苄基乙二胺盐、钾盐、钙盐、苄胺盐、叔丁胺盐，均为北京天衡药物研究院提供，用0.5％CMC混悬，配制成不同浓度；静注钾盐，用注射用生理盐水配制。
3、试验方法ICR小鼠60只，按体重和性别随机分成6组，每组10只，雌雄各半，根据预试验结果，按组间距1∶0.8设计各组剂量。经口灌胃时给药容量为0.2ml/10g体重(钾盐静脉注射时给药容量为0.1ml/10g体重)，试验前禁食不禁水12小时，给药后常规饲养，连续观察14天，记录动物毒性反应和死亡情况，死亡组进行尸检，肉眼观察病理变化，用Bliss法计算LD50值及95％可信限。
4、试验结果表三 急性毒性试验结果化合物名称 LD50值 95％可信限N，N’-二苄基乙二胺盐 3.1910g/kg2.7851～3.656g/kg钙盐 1.5498g/kg1.3015～1.8546g/kg苄胺盐 1.4537g/kg1.316～1.6057g/kg叔丁胺盐 1.2635g/kg1.1188～1.427g/kg钾盐(口服) 1.1735g/kg1.0559～1.3041g/kg钾盐(静注) 0.382g/kg 0.3513～0.4154g/kg结果表明，各化合物对小鼠的急性毒性(口服)依次为N，N’-二苄基乙二胺盐＜钙盐＜苄胺盐＜叔丁胺盐＜钾盐，其中N，N’-二苄基乙二胺盐的毒性最小。
实施例5对大脑中动脉血栓模型(Middle Cerebral Artery Thrombosis，MCAT)大鼠神经症状及脑梗塞范围的影响本实施例选用一、动物SD大鼠，雌雄兼用，体重190～210g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK 11-00-0008。
二、药物与试剂受试药N，N’-二苄基乙二胺盐、钾盐、钙盐，均为北京天衡药物研究院提供，用0.5％CMC混悬，配制成不同浓度。
试剂FeCl3·6H2O(A.R.)，北京化工厂生产，用1mol/L盐酸配制；红四氮唑(TTC)，北京化工厂生产。
三、仪器XTT实体显微镜北京电光科学仪器厂生产；恒温水浴振荡器SHZ-22型江苏大仓医疗器械厂生产；电子分析天平AEG-220型，日本岛津产。
四、试验方法及结果(一)对MCAT大鼠神经症状的影响1、分组及给药将动物随机分为14组，即假手术组，MCAT模型组，N，N’-二苄基乙二胺盐340mg/kg、200mg/kg、170mg/kg、100mg/kg、85mg/kg、50mg/kg组，钾盐200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg组，钙盐200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg组。造模前预防给药，每天灌胃给药1次，连续给药3天，第4天造模，造模后即刻灌胃给予一次设定剂量，造模后12小时再灌胃给予一次设定剂量。对照组给予等量溶剂。
2、实施造模手术大鼠腹腔注射12％水合氯醛溶液(350mg/kg)麻醉。参照Tamura等的方法(Tamura A，Graham DI，McCulluoch J et al.Focal cerebral ischemia in therat.1.Description of technique and early neuropathological consequences following middleCerebral artery occlusion.J Cereb Blood Flow Metab，1981，153)并加以改进，将大鼠右侧卧位固定，在眼外眦和外耳道连线中点作一弧形切口，长约1.5cm，夹断颞肌并切去，暴露颞骨，用牙科钻在颧骨与颞鳞骨接合处向口侧1mm处作一直径2.5mm骨窗，清理残渣，暴露大脑中动脉(位于嗅束及大脑下静脉之间)。将吸有50％氯化铁溶液10μl的小片定量滤纸敷在此段大脑中动脉上，约30min待血管颜色变黑后取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回笼饲养。
3、行为检测参照Bederson等的方法(Bederson JB，Pitts LH，Tsuji M et al.Rat middlecerebral artery occlusionevaluation of the mode and development of a neurologicexamination.Stroke，1986，17472)并加以改进，在术后不同时间点(6h，24h)对动物进行行为评分。(1)提鼠尾离开地面约一尺，观察前肢屈曲情况。如双前肢对称伸向地面，记为0分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、肘屈曲、肩内旋或既有腕肘的屈曲又有内旋者，记为1分。(2)将动物置于平滑地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力记为0分；如向手术对侧推动时阻力下降者，记为1分。(3)将动物两前肢置一金属网上，观察两前肢的肌张力。双侧肌张力对等且有力者为0分；手术对侧前肢肌张力下降记为1分。(4)提鼠尾离开地面约一尺，动物有不停地向手术对侧旋转者，记为1分。根据以上标准评分，满分为4分，分数越高，动物的行为障碍越严重。
4、结果分析采用t检验对行为检测分值进行组间比较，结果见表四。
表四 对MCAT大鼠神经症状的影响
注与模型组比较，***P＜0.001，**P＜0.01，*P＜0.05结果表明，假手术组行为未见异常改变，模型组大鼠在术后6h、24h均出现偏瘫样症状，主要表现为手术对侧前肢内收，肩内旋，前肢肌张力降低，肩阻力下降。与模型组相比，术后6h，N，N’-二苄基乙二胺盐100～340mg/kg组大鼠的神经症状均显著改善，钾盐和钙盐各剂量组大鼠的神经症状均无显著改善(P＞0.05)；术后24h，N，N’-二苄基乙二胺盐50～340mg/kg组、钾盐和钙盐100mg/kg、200mg/kg组大鼠的神经症状均显著改善，并有明显的量效关系，钾盐和钙盐50mg/kg组均无显著改善(P＞0.05)。N，N’-二苄基乙二胺盐改善MCAT大鼠神经症状的显著性疗效剂量为50mg/kg，低于钾盐和钙盐(100mg/kg)。相同剂量下，N，N’-二苄基乙二胺盐对MCAT大鼠神经症状的改善作用强于钾盐和钙盐。
(二)对MCAT大鼠脑梗塞范围的影响动物经末次行为评分后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩余部份在4℃以下冠状切成5片。迅速将脑片置于TTC染液中(每5ml染液中含4％TTC 1.5ml，1M K2HPO40.1ml)，37℃避光温孵30分钟，再取出，置于10％甲醛液中避光保存。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占总脑重量的百分比作为脑梗塞范围。采用t检验对组间结果进行比较，结果见表五。
表五 对MCAT大鼠脑梗塞范围的影响
注与模型组比较，***P＜0.001，**P＜0.01，*P＜0.05结果表明，大鼠大脑中动脉梗塞24h后模型组大鼠出现了明显的梗塞灶，假手术组无任何改变。与模型组相比，N，N’-二苄基乙二胺盐50～340mg/kg组、钾盐、钙盐100mg/kg、200mg/kg组大鼠的脑梗塞范围均显著减轻，并有明显的量效关系；钾盐和钙盐50mg/kg组均无显著抑制作用(P＞0.05)。N，N’-二苄基乙二胺盐抑制MCAT大鼠脑梗塞范围的显著性疗效剂量为50mg/kg，低于钾盐和钙盐(100mg/kg)。相同剂量下，N，N’-二苄基乙二胺盐对MCAT大鼠脑梗塞范围的抑制作用强于钾盐和钙盐。
实施例6对大鼠血小板聚集的影响本实施例选用一、动物SD大鼠，雄性，体重220～250g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK11-00-0008。
二、药物与试剂N，N’-二苄基乙二胺盐、钾盐、钙盐，均为北京天衡药物研究院提供。阳性对照药阿司匹林(ASA)由牡丹江子宸化工制药有限公司生产，批号010622015。上述药物均用0.5％CMC混悬，配制成不同浓度。二磷酸腺苷(ADP)购自Sigma公司。
三、仪器TYXN-91智能血小板聚集仪(上海通用机电技术研究所生产)四、试验方法将大鼠随机分为11组，即溶剂对照组，ASA 100mg/kg，N，N’-二苄基乙二胺盐200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg组，钾盐200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg组、钙盐200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg组。每天灌胃给药一次，连续三天，溶剂对照组给予等量溶剂。末次给药后1小时自颈总动脉取血，用枸橼酸钠(3.8％)与全血按1∶9混合抗凝，按常规方法制备富血小板血浆(PRP)和贫血小板血浆(PPP)，用PPP调PRP至血小板数为6～7×1011·L-1。参照Born氏比浊法(G.V.R.Born and M.J.CROSSThe Aggregation of Blood Platelets，J.Physiology，1963，168178)，取200μl经调节的PRP加入比浊管内，37℃温育5分钟后加入诱导剂ADP至终浓度5μmol·L-1，测定加入ADP后5分钟内血小板的最大聚集率及聚集抑制率。
聚集抑制率＝(溶剂对照组聚集率-给药组聚集率)/溶剂对照组聚集率×100％五、试验结果结果表明，N，N’-二苄基乙二胺盐50～200mg/kg组、钾盐和钙盐100mg/kg、200mg/kg组大鼠的血小板聚集率与溶剂对照组相比均有显著差异，钾盐和钙盐50mg/kg组大鼠的血小板聚集率与溶剂对照组相比均无显著差异。相同剂量下，N，N’-二苄基乙二胺盐对大鼠血小板聚集的抑制作用强于钾盐和钙盐。结果见表六。
表六 对ADP诱导的大鼠血小板聚集的影响
注与溶剂对照组比较，***P＜0.001，**P＜0.01，*P＜0.05实施例7片剂
制备方法按配比将N，N’-二苄基乙二胺盐、淀粉、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠混匀，用水均匀润湿，制颗粒，干燥，整粒，加入硬脂酸镁、滑石粉，然后将混合物压片即得本品片剂。
实施例8胶囊
制备方法按配比将N，N’-二苄基乙二胺盐和辅料混匀，湿法制颗粒，干燥，整粒，然后将混合物按定量装入胃溶性硬胶囊中，即得本品胶囊。
实施例9颗粒剂
制备方法按配比将N，N’-二苄基乙二胺盐和辅料混匀后湿法制粒，干燥，整粒分级，分剂量包装，即得本品颗粒剂。
权利要求
1.2-(α-羟基戊基)苯甲酸N，N’-二苄基乙二胺盐，结构式如下
2.按照权利要求1中化合物的制备方法，其特征是将2-(α-羟基戊基)苯甲酸溶于有机溶剂中，然后在低温下与N，N’-二苄基乙二胺的有机溶剂的溶液反应。
3.按照权利要求1中化合物的制备方法，其特征是有机溶剂包括乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯。
4.按照权利要求1中化合物的制备方法，其特征是有机溶剂是乙醚。
5.按照权利要求1中化合物的制备方法，其特征是反应温度为-10℃至10℃。
6.按照权利要求1中化合物的制备方法，其特征是反应温度为-5℃至0℃。
7.权利要求1中化合物在制备治疗和预防心、脑缺血性疾病及心、脑动脉阻塞药物中的应用。
8.用于治疗和预防心、脑缺血性疾病、心、脑动脉阻塞，改善脑微循环的药物组合物，其特征是含有治疗有效量的权利要求1的化合物和药学上可接受的载体。
9.按照权利要求8中的药物组合物，其特征是可以制成片剂、胶囊、颗粒剂。
全文摘要
本发明涉及新的2－(α－羟基戊基)苯甲酸盐及其制法，和以该化合物为活性成分的药物组合物，还涉及该化合物在治疗心、脑缺血及心、脑动脉阻塞等方面的应用。
文档编号A61K31/185GK1523003SQ0315649
公开日2004年8月25日 申请日期2003年9月1日 优先权日2003年9月1日
发明者杨文斌, 秦华, 赵兴凯, 马喜生 申请人:北京天衡药物研究院
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