竹叶黄酮在制备预防或治疗血栓性疾病或缺血性疾病的药物或保健品方面的用途的制作方法
专利名称：竹叶黄酮在制备预防或治疗血栓性疾病或缺血性疾病的药物或保健品方面的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及竹叶黄酮的新用途，具体来说是竹叶黄酮在制备预防或治疗血栓性疾病的药物或保健品方面的用途，竹叶黄酮在制备预防或治疗缺血性疾病的药物或保健品方面的用途。
背景技术：
竹子是禾本科(Poaceae)竹亚科(Bambusoideae)的多年生常绿植物，在东南亚广泛分布，我国拥有丰富的竹资源，据不完全统计竹林面积有6000多万亩，其中有300多个品种。
在我国很早以前人们就认识到竹子的医疗保健作用，淡竹叶、竹衣和竹沥就是传统中医的清热药，其中入药的淡竹叶是用淡竹Phyllostachysnigra(Lodd.)Munro var.henonis(Mitf.)Stapf ex Rendled的叶，具有清热除烦和生津利尿的功效，可治疗热病烦渴，小儿惊痫，咳逆吐衄、面赤、小便短赤和口糜舌疮。竹衣是金竹Phyllostachys sulphurea(Carr.)A.etC.Riv.秆内的衣膜，可治喉哑劳嗽。竹沥为淡竹的茎用火烤灼而流出的液汁，具有清热滑痰、镇惊利窍的功效，可治疗中风痰迷、肺热痰壅、惊风、癫痫、壮热烦渴、子烦和破伤风。
近年来人们开始应用现代化学分析手段对竹叶的有效成分及其生物活性进行了进一步的研究开发，发现竹叶中含有丰富的黄酮等酚性化合物、蒽醌类化合物、萜类内酯、活性多糖、特种氨基酸(δ-羟基赖氨酸)和锰、锌、铁、硒等微量元素，其中黄酮类化合物是主要功能成分。如CN1228968A公开了从竹叶中提取黄酮类化合物浸膏或粉剂的生产方法，竹叶所含的黄酮类化合物基本上是黄酮糖苷，相当部分是碳苷黄酮如荭草苷、异荭草苷、4′-甲氧基-牡荆苷等。该专利申请还提到了竹叶黄酮的提取方法是以竹叶为原料，将竹叶烘干、破碎，用20-40％的低级醇如甲醇或乙醇为溶剂，以1∶10-15的固液比热回流提取1-2小时，提取液浓缩后去杂，再用中级醇如丁醇或戊醇液液萃取，萃取液减压浓缩回收溶剂后，加少量水转溶，成黄酮类化合物浸膏或再经喷雾或真空干燥得到黄酮类化合物粉剂。在该专利中还特别指出用乙醇-水溶液热回流提取，过滤，减压浓缩，静止絮凝，分离去杂，正丁醇分步萃取，减压浓缩回收溶剂，热水转溶，减压浓缩，得到浸膏，真空或喷雾干燥制成粉剂。用该技术制备的竹叶黄酮类化合物粉剂为黄色粉末或黄色结晶颗粒，带有明显的竹叶芳香，总黄酮含量在24-30％，绝大部分是黄酮糖苷，相当部分是碳苷黄酮如荭草苷、异荭草苷、4′-甲氧基-牡荆苷等，其他成分为植物酚酸、蒽醌、萜类内酯、含氮化合物、可溶性糖和矿物质等。该专利申请还公开了从毛金竹Phyllostachy nigra var.Henonis(Bean)Stapf ex Rendle的干青叶和桂竹Phyllostachy bambusoides Sieb.Et Zucc的干青叶中提取得到竹叶黄酮类化合物。该专利还公开了竹叶黄酮提取物具有优良的抗自由基、抗氧化和抗衰老活性，并且能够显著降低大鼠血甘油三酯和总胆固醇的浓度，增加HDL-胆固醇浓度、降低LDL-胆固醇浓度，抑制大鼠体重的增加。急性毒性试验表明，该竹叶黄酮提取物经口LD50＞10g/kg体重，可视为实际无毒，Ames试验表明无致突变性。该专利在本文中全文引用为参考文献。
CN12291131A公开了添加竹叶黄酮提取物的保健啤酒。其中每升啤酒中加入粗提物100-500mg，或者加入精提物40-250mg，使得该啤酒成品每升的总黄酮含量在90-200mg。
尽管如此，本发明人又进一步对竹叶黄酮进行了研究，发现它具有抗血栓、抗心肌或脑缺血、常压耐缺氧的功效。而这些新用途在现有技术中从来没有报道过。因此完成了本发明。
发明内容
本发明的目的就是提供竹叶黄酮在制备预防或治疗血栓性疾病的药物或保健品方面的用途。
本发明的另外一个目的是提供竹叶黄酮在制备预防或治疗缺血性疾病的药物或保健品方面的用途。
本发明中所述的“竹叶黄酮”是指从竹叶中提取的黄酮类成分，其中的竹叶并不限定为金毛竹、桂竹、淡竹，只要可以从中提取出黄酮的禾本科的竹亚科内的各种竹子都包括在本发明内。
本发明所述的竹叶黄酮预防或治疗的血栓性疾病是指脑部血管、静脉血管中因血栓而引起的疾病，包括但不限于脑血栓、静脉血栓等疾病。
本发明所述的竹叶黄酮预防或治疗的缺血性疾病是指由缺血所引起的疾病，包括但不限于脑缺血、心肌缺血等疾病。
本发明竹叶黄酮的用途就是基于上述发现，可以将竹叶黄酮制备成预防或治疗血栓性疾病的药物或保健品如保健食品等，或者将竹叶黄酮制备成预防或治疗缺血性疾病的药物或保健品如保健食品等。
以下通过试验来进一步证实竹叶黄酮具有上述功效。采用三氯化铁局部贴敷大脑中动脉造成局灶性脑缺血损伤大鼠模型(MCAT)，通过对模型大鼠神经症状和脑梗塞范围的测定，探讨竹叶黄酮对三氯化铁局部贴敷大脑中动脉造成局灶性脑缺血损伤模型大鼠的保护作用。结果表明竹叶黄酮的给药剂量为10-40mg/kg时，在一定程度上可以改善造模后大鼠的神经症状，并可缩小其脑梗塞范围，减轻局灶性脑缺血损伤。
采用大鼠舌下静脉注射垂体后叶素造成心肌缺血模型，以J点及T波变化幅度为指标观察竹叶黄酮抗心肌缺血作用。结果表明，模型组大鼠舌下静脉注射垂体后叶素后，J点和T波的变化幅度，与正常组相比具有明显差异(P＜0.05～0.01)，竹叶黄酮的给药剂量为10-40mg/kg时，在一定程度上能对抗此种变化。
采用大鼠动静脉旁路血栓形成模型，研究竹叶黄酮的对血栓形成的影响。结果表明，对照组血栓干、湿重较用药组高，其中竹叶黄酮小剂量组、天保宁组与对照组比较，具有明显差异，竹叶黄酮大、中剂量组亦有降低趋势，说明竹叶黄酮的给药剂量为10-40mg/kg时，对动静脉旁路血栓形成有一定的抑制作用，表现为减轻血栓干重及湿重。
具体的实施方式试验例1竹叶黄酮对局灶性脑缺血大鼠的保护作用研究实验材料动物SD大鼠，雄性，体重190-210g，合格证号SCXK(京)2002-0003，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
药物与试剂受试药竹叶黄酮，实验时用0.5％CMCNa溶解。
对照药天保宁银杏叶片，浙江康恩贝制药股份有限公司生产，每片含银杏叶精提物40mg(其中银杏总黄酮甙9.6mg)，批号为010613-2，实验时用0.5％CMCNa溶解。
试剂红四氮唑(TTC)，为淡黄色粉末，北京马氏精细化学品有限公司产品，批号011102。
仪器XTT实体显微镜，云南光学仪器厂产品。AEG-220电子分析天平，日本Shimadzu公司产品。307-6台式牙科车，上海齿科医械厂产品。HZQ-C空气浴振荡器，哈尔滨东明医疗仪器厂产品。932电热烧灼器，上海医疗器械高技术公司产品，标准号Q/CYBV16-1996。手术器械若干。
方法与结果分组及给药实验动物随机分为六组，即假手术组、模型组、竹叶黄酮小剂量组(10mg/kg)、竹叶黄酮中剂量组(20mg/kg)、竹叶黄酮大剂量组(40mg/kg)、天保宁(24mg/kg)组。各组动物均于术前3天灌胃给药(10ml/kg)，第4天手术前1小时给药，手术后24小时处死，处死前1小时再给药一次。假手术组和模型对照组给予等容积的溶媒。
大脑中动脉血栓模型制作大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液(350mg/kg)麻醉，左侧卧位固定，在眼外眦和外耳道连线中点作一弧形切口，夹断颞肌并切除，电热烧灼器烧灼止血。暴露颞骨，于实体显微镜下，用牙科钻在颧骨与颞鳞骨接合处靠近口侧约1mm处开一直径约2.5mm的骨窗，清理残渣，暴露大脑中动脉(位于嗅束及大脑下静脉之间)。置一小片塑料薄膜保护血管周围组织。将吸有50％氯化铁溶液10μL的小片定量滤纸敷在此段大脑中动脉上，30min后取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回笼饲养。室温控制在24℃。模型组与给药组进行上述操作，假手术组除不贴敷吸有氯化铁溶液的滤纸外，其余步骤同。
神经症状评分标准试验动物在术后24h，进行行为检测。评分标准①提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称前伸，记为0分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、肘屈曲、肩内旋或兼具，记为1分。②将动物置于平面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力，记为0分；如手术对侧阻力下降，记为1分。③将动物两前肢置一金属网上，观察肌张力。双侧肌张力对等且有力为0分；手术对侧前肢肌张力下降记为1分。④提鼠尾，动物有不停地向手术对侧旋转者，记为1分。根据以上标准评分，满分为4分，分数越高，动物的行为障碍越严重。
脑梗塞范围的测定动物经神经症状评分后断头取脑，将嗅球、小脑和低位脑干去除后，其余部分在4℃以下冠状切成5片，并迅速将脑片置于TTC染液中(每5ml染液中含4％ TTC 1.5ml，1M K2HPO40.1ml，其余加蒸馏水至刻度)，37℃温孵20分钟，取出，置于10％甲醛液固定。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占全脑重量及患侧脑重量的百分比作为脑梗塞范围。
结果上述实验结果用x±s表示，统计学采用组间比较t检验，结果见表1和表2。
表1竹叶黄酮对MCAT大鼠神经症状的影响(x±s)组别 剂 量n(只) 24小时神经症状评分(mg/kg)假手术组- 120±0**模型组 - 122.75±0.75天保宁组24 122.42±0.90竹叶黄酮组 10 112.36±0.92竹叶黄酮组 20 112.00±0.77*竹叶黄酮组 40 122.33±1.07注与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
表2竹叶黄酮对MCAT大鼠脑梗塞范围的影响(x±s)组 别剂量N(只)梗塞占全脑梗塞占半脑(mg/kg) 范围％范围％假手术组 12 0±0**0±0**模型组 12 6.34±2.693.26±1.31天保宁组 24 12 5.04±1.712.48±0.89竹叶黄酮组10 11 4.76±2.382.40±1.15竹叶黄酮组20 11 3.93±2.451.95±1.15*竹叶黄酮组40 12 6.07±2.643.09±1.29注与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
由表可见，竹叶黄酮中剂量组可改善造模后大鼠的神经症状，并可缩小其脑梗塞范围，大、小剂量组及天宝宁组则有一定的作用趋势；表明竹叶黄酮在一定程度上具有抑制脑血栓形成、减轻局灶性脑缺血损伤作用。
试验例2竹叶黄酮对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血模型的影响实验材料动物Wistar大鼠，雄性，体重220-250g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。合格证号为SCXK 2002-0003。
药物竹叶黄酮，实验时用蒸馏水溶解。垂体后叶注射液(pit)，规格6u/1ml/支，南京新天生物化学制药有限公司，批号020601，实验时用生理盐水稀释。消心痛，规格5mg/片，北京双桥制药公司，批号030302，以蒸馏水溶解。复方丹参滴丸，规格25mg/粒，天津天士力制药股份有限公司，批号20020812311，以蒸馏水溶解。
仪器Medlab-U/4C生物信号采集处理系统，南京美易科技有限公司生产，通过USB接口与PC机相连，PC机内装配套之处理软件。采样条件通道3，采样方式为连续采样，采样间隔为1ms，图形放大1000倍，上限频率1000Hz，下限频率0.8Hz，平滑5点，交流电，心电单位mv，图形横向压缩比20∶1，统计时为5∶1。
方法与结果分组及给药实验动物随机分为7组，即正常对照组、模型对照组、竹叶黄酮小剂量组(10mg/kg)、竹叶黄酮中剂量组(20mg/kg)、竹叶黄酮大剂量组(40mg/kg)、消心痛组(6mg/kg)、复方丹参滴丸组(300mg/kg)。连续灌胃给药3天(10ml/kg体重)，正常组和模型组给予等容积的溶媒。
大鼠心肌缺血模型制作及心电图描记于末次给药1小时后以10％水合氯醛3.5ml/kg(350mg/kg)腹腔注射麻醉动物，仰位固定，将心电电极插入四肢皮下，记录标II导联正常心电图。待心电图稳定后，由舌下静脉注射垂体后叶素0.5U/kg(2ml/kg)，时间控制在15秒，正常对照组注射相同量的生理盐水，立即采集心电图，连续记录20分钟。
分别测定注射垂体后叶素前、即刻、5秒、10秒、15秒、30秒、45秒、1分钟、2分钟、5分钟、10分钟、15分钟、20分钟共13个时间点的心电图J点位移及T波高度变化(即ΔJ、ΔT)，每个时间点连续取10个波形，求平均值。注射垂体后叶素前J点及T波高度平均值分别与其余各时间点J点及T波高度的差的绝对值，即为各时间点J点及T波变化幅度。
结果统计方法采用组间比较t检验，结果如下表3竹叶黄酮对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血模型J点变化幅度的影响(mv，x±s)组别剂量(mg/kg)N(只) 给pit前 即刻 5s10s 15s正常组 - 120.11±0.040.04±0.020.04±0.010.04±0.020.04±0.02模型组 - 120.14±0.040.04±0.030.05±0.030.06±0.030.07±0.07丹参滴丸300 110.12±0.030.05±0.030.05±0.030.06±0.040.05±0.04竹叶黄酮10 110.12±0.040.06±0.070.06±0.060.06±0.060.07±0.06竹叶黄酮20 100.13±0.050.08±0.050.08±0.050.07±0.040.08±0.03竹叶黄酮40 110.11±0.040.04±0.030.04±0.030.05±0.040.05±0.03
(续上表3)30s 45s1min 2min 5min 10min 15min 20min0.04±0.020.04±0.02*0.04±0.03*0.04±0.030.03±0.01*0.04±0.020.05±0.030.04±0.030.06±0.030.09±0.07 0.08±0.06 0.06±0.040.06±0.04 0.05±0.030.05±0.030.06±0.030.06±0.020.06±0.03 0.04±0.02 0.04±0.020.04±0.02 0.04±0.020.04±0.010.03±0.010.05±0.030.07±0.03 0.05±0.05 0.04±0.020.04±0.02 0.04±0.020.04±0.030.05±0.03*0.11±0.090.10±0.09 0.07±0.06 0.06±0.030.05±0.02 0.04±0.030.04±0.030.04±0.020.06±0.040.07±0.04 0.06±0.05 0.05±0.030.03±0.02*0.04±0.020.04±0.020.04±0.020.06±0.040.07±0.06 0.07±0.07 0.04±0.020.04±0.02 0.05±0.020.04±0.020.05±0.03注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
表4.竹叶黄酮对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血模型T波变化幅度的影响(mv，x±s)组别剂量N(只) 给pit前 即刻5s 10s 15s(mg/kg)正常组 - 12 0.20±0.040.03±0.01*0.03±0.01*0.03±0.01*0.03±0.01*模型组 - 12 0.23±0.040.05±0.03 0.05±0.04 0.06±0.030.07±0.06消心痛组6 10 0.21±0.030.04±0.02 0.06±0.05 0.07±0.060.07±0.06丹参滴丸300 11 0.21±0.070.04±0.03 0.05±0.03 0.05±0.030.05±0.03竹叶黄酮10 11 0.20±0.040.06±0.05 0.06±0.04 0.06±0.050.06±0.04竹叶黄酮20 10 0.22±0.040.06±0.04 0.08±0.06 0.07±0.040.06±0.04竹叶黄酮40 11 0.20±0.050.04±0.02 0.04±0.04 0.05±0.040.06±0.05(续上表4)30s45s 1min 2min 5min 10min 15min 20min0.04±0.02*0.04±0.02*0.03±0.02**0.03±0.010.03±0.010.03±0.01 0.03±0.010.03±0.010.06±0.04 0.07±0.060.09±0.05 0.07±0.060.06±0.060.04±0.04 0.04±0.030.06±0.030.05±0.03 0.07±0.040.05±0.05 0.06±0.040.05±0.030.04±0.02 0.04±0.020.05±0.020.05±0.04 0.07±0.070.06±0.06 0.06±0.060.04±0.030.04±0.03 0.04±0.020.03±0.010.08±0.05 0.09±0.060.07±0.06 0.06±0.040.05±0.030.03±0.02 0.03±0.020.04±0.020.05±0.03 0.04±0.020.05±0.05 0.06±0.040.05±0.030.04±0.02 0.04±0.020.05±0.020.06±0.05 0.09±0.070.09±0.07 0.06±0.060.03±0.020.04±0.03 0.06±0.030.03±0.02注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
上述结果表明，模型组大鼠腹腔注射垂体后叶素后45s、1min、5min，J点变化幅度较大，与正常组相比具有明显差异(P＜0.05)；T波则在注射垂体后叶素后即刻、5s、10s、15s、30s、45s、1min、20min发生明显变化，与正常组相比差异明显(P＜0.05～0.01)，说明大鼠出现了明显的心肌缺血，造模成功。而用药各组则在一定程度上对抗此种变化，其中复方丹参滴丸在20min、竹叶黄酮中剂量在5min J点变化幅度明显小于模型组，具有显著性差异；复方丹参滴丸在20min时T波的变化幅度明显小于模型组，具有显著性差异。
实施例3竹叶黄酮对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响实验材料动物SD大鼠，雄性，体重210-230g，合格证号SCXK(京)2002-0003，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
药物竹叶黄酮。天保宁银杏叶片(生产于浙江康恩贝制药股份有限公司，批号为064701)。以上药物均以0.5％CMC-Na配成所需浓度。
仪器
AEG-220型电子分析天平，日本Shimadzu公司产品；Df-206型鼓风干燥箱，北京西城医疗器械厂产品。微血管夹。人体静脉输液用聚乙烯塑料管，药店购入。
方法与结果分组及给药实验动物随机分为五组，即空白对照组、竹叶黄酮小剂量组(10mg/kg)、竹叶黄酮中剂量组(20mg/kg)、竹叶黄酮大剂量组(40mg/kg)、天保宁(24mg/kg)组。各组动物均于术前3天灌胃给药(10ml/kg体重)，手术前1小时给药一次，空白对照组给予等容积的溶媒。
模型制作大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液(350mg/kg)麻醉，仰位固定，分离右侧颈总动脉和左颈外静脉，将三段聚乙烯管相连，一端插入右颈总动脉，另一端插入左颈外静脉，中间段长7cm，放入一根长为5cm的7#手术线(已称重)，管内注满生理盐水(注意不得有气泡)，建立动静脉旁路。20分钟后取下套管，小心取出血栓，在湿润的滤纸上滚动，去除多余浮血，置已称重的硫酸纸上称湿重。再置于烘箱内60℃烘烤1小时至恒重，冷却称重得血栓干重。
结果上述实验结果用x±s表示，统计学采用组间比较t检验进行处理，结果见下表。
表5竹叶黄酮对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响剂 量组别 N(只) 血栓湿重(10-4g) 血栓干重(10-4g)(mg/kg)对照组 - 152806.93±588.71 627.73±123.10大剂量组40132560.87±360.47 591.20±71.64中剂量组20122480.31±487.63 559.63±111.75小剂量组10122323.38±491.74*503.38±103.07**天保宁组24122336.87±455.63*541.13±89.8*注与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
从以上结果可以看出，对照组血栓干、湿重较用药组为高，其中竹叶黄酮小剂量组、天宝宁组与对照组比较，具有明显差异，竹叶黄酮大、中剂量组亦有降低趋势，说明竹叶黄酮对动静脉旁路血栓形成有一定的抑制作用。
权利要求
1.竹叶黄酮在制备治疗或预防血栓性疾病的药物或保健品的用途。
2.按照权利要求1所述的用途，其中所述的血栓性疾病为脑血栓。
3.按照权利要求1所述的用途，其中所述的血栓性疾病为脑梗塞。
4.按照权利要求1所述的用途，其中所述的血栓性疾病为静脉血栓。
5.竹叶黄酮在在制备治疗或预防缺血性疾病的药物或保健品的用途。
6.按照权利要求5所述的用途，其中所述的缺血性疾病为脑缺血。
7.按照权利要求5所述的用途，其中所述的缺血性疾病为心肌缺血。
全文摘要
本发明公开了竹叶黄酮在制备治疗或预防血栓性疾病的药物或保健品的用途，本发明还公开了竹叶黄酮在制备治疗或预防缺血性疾病的药物或保健品的用途。
文档编号A61P9/14GK1596907SQ03157158
公开日2005年3月23日 申请日期2003年9月17日 优先权日2003年9月17日
发明者苏杰 申请人:昆明老拨云堂药业有限公司
技术领域：
本发明涉及竹叶黄酮的新用途，具体来说是竹叶黄酮在制备预防或治疗血栓性疾病的药物或保健品方面的用途，竹叶黄酮在制备预防或治疗缺血性疾病的药物或保健品方面的用途。
背景技术：
竹子是禾本科(Poaceae)竹亚科(Bambusoideae)的多年生常绿植物，在东南亚广泛分布，我国拥有丰富的竹资源，据不完全统计竹林面积有6000多万亩，其中有300多个品种。
在我国很早以前人们就认识到竹子的医疗保健作用，淡竹叶、竹衣和竹沥就是传统中医的清热药，其中入药的淡竹叶是用淡竹Phyllostachysnigra(Lodd.)Munro var.henonis(Mitf.)Stapf ex Rendled的叶，具有清热除烦和生津利尿的功效，可治疗热病烦渴，小儿惊痫，咳逆吐衄、面赤、小便短赤和口糜舌疮。竹衣是金竹Phyllostachys sulphurea(Carr.)A.etC.Riv.秆内的衣膜，可治喉哑劳嗽。竹沥为淡竹的茎用火烤灼而流出的液汁，具有清热滑痰、镇惊利窍的功效，可治疗中风痰迷、肺热痰壅、惊风、癫痫、壮热烦渴、子烦和破伤风。
近年来人们开始应用现代化学分析手段对竹叶的有效成分及其生物活性进行了进一步的研究开发，发现竹叶中含有丰富的黄酮等酚性化合物、蒽醌类化合物、萜类内酯、活性多糖、特种氨基酸(δ-羟基赖氨酸)和锰、锌、铁、硒等微量元素，其中黄酮类化合物是主要功能成分。如CN1228968A公开了从竹叶中提取黄酮类化合物浸膏或粉剂的生产方法，竹叶所含的黄酮类化合物基本上是黄酮糖苷，相当部分是碳苷黄酮如荭草苷、异荭草苷、4′-甲氧基-牡荆苷等。该专利申请还提到了竹叶黄酮的提取方法是以竹叶为原料，将竹叶烘干、破碎，用20-40％的低级醇如甲醇或乙醇为溶剂，以1∶10-15的固液比热回流提取1-2小时，提取液浓缩后去杂，再用中级醇如丁醇或戊醇液液萃取，萃取液减压浓缩回收溶剂后，加少量水转溶，成黄酮类化合物浸膏或再经喷雾或真空干燥得到黄酮类化合物粉剂。在该专利中还特别指出用乙醇-水溶液热回流提取，过滤，减压浓缩，静止絮凝，分离去杂，正丁醇分步萃取，减压浓缩回收溶剂，热水转溶，减压浓缩，得到浸膏，真空或喷雾干燥制成粉剂。用该技术制备的竹叶黄酮类化合物粉剂为黄色粉末或黄色结晶颗粒，带有明显的竹叶芳香，总黄酮含量在24-30％，绝大部分是黄酮糖苷，相当部分是碳苷黄酮如荭草苷、异荭草苷、4′-甲氧基-牡荆苷等，其他成分为植物酚酸、蒽醌、萜类内酯、含氮化合物、可溶性糖和矿物质等。该专利申请还公开了从毛金竹Phyllostachy nigra var.Henonis(Bean)Stapf ex Rendle的干青叶和桂竹Phyllostachy bambusoides Sieb.Et Zucc的干青叶中提取得到竹叶黄酮类化合物。该专利还公开了竹叶黄酮提取物具有优良的抗自由基、抗氧化和抗衰老活性，并且能够显著降低大鼠血甘油三酯和总胆固醇的浓度，增加HDL-胆固醇浓度、降低LDL-胆固醇浓度，抑制大鼠体重的增加。急性毒性试验表明，该竹叶黄酮提取物经口LD50＞10g/kg体重，可视为实际无毒，Ames试验表明无致突变性。该专利在本文中全文引用为参考文献。
CN12291131A公开了添加竹叶黄酮提取物的保健啤酒。其中每升啤酒中加入粗提物100-500mg，或者加入精提物40-250mg，使得该啤酒成品每升的总黄酮含量在90-200mg。
尽管如此，本发明人又进一步对竹叶黄酮进行了研究，发现它具有抗血栓、抗心肌或脑缺血、常压耐缺氧的功效。而这些新用途在现有技术中从来没有报道过。因此完成了本发明。
发明内容
本发明的目的就是提供竹叶黄酮在制备预防或治疗血栓性疾病的药物或保健品方面的用途。
本发明的另外一个目的是提供竹叶黄酮在制备预防或治疗缺血性疾病的药物或保健品方面的用途。
本发明中所述的“竹叶黄酮”是指从竹叶中提取的黄酮类成分，其中的竹叶并不限定为金毛竹、桂竹、淡竹，只要可以从中提取出黄酮的禾本科的竹亚科内的各种竹子都包括在本发明内。
本发明所述的竹叶黄酮预防或治疗的血栓性疾病是指脑部血管、静脉血管中因血栓而引起的疾病，包括但不限于脑血栓、静脉血栓等疾病。
本发明所述的竹叶黄酮预防或治疗的缺血性疾病是指由缺血所引起的疾病，包括但不限于脑缺血、心肌缺血等疾病。
本发明竹叶黄酮的用途就是基于上述发现，可以将竹叶黄酮制备成预防或治疗血栓性疾病的药物或保健品如保健食品等，或者将竹叶黄酮制备成预防或治疗缺血性疾病的药物或保健品如保健食品等。
以下通过试验来进一步证实竹叶黄酮具有上述功效。采用三氯化铁局部贴敷大脑中动脉造成局灶性脑缺血损伤大鼠模型(MCAT)，通过对模型大鼠神经症状和脑梗塞范围的测定，探讨竹叶黄酮对三氯化铁局部贴敷大脑中动脉造成局灶性脑缺血损伤模型大鼠的保护作用。结果表明竹叶黄酮的给药剂量为10-40mg/kg时，在一定程度上可以改善造模后大鼠的神经症状，并可缩小其脑梗塞范围，减轻局灶性脑缺血损伤。
采用大鼠舌下静脉注射垂体后叶素造成心肌缺血模型，以J点及T波变化幅度为指标观察竹叶黄酮抗心肌缺血作用。结果表明，模型组大鼠舌下静脉注射垂体后叶素后，J点和T波的变化幅度，与正常组相比具有明显差异(P＜0.05～0.01)，竹叶黄酮的给药剂量为10-40mg/kg时，在一定程度上能对抗此种变化。
采用大鼠动静脉旁路血栓形成模型，研究竹叶黄酮的对血栓形成的影响。结果表明，对照组血栓干、湿重较用药组高，其中竹叶黄酮小剂量组、天保宁组与对照组比较，具有明显差异，竹叶黄酮大、中剂量组亦有降低趋势，说明竹叶黄酮的给药剂量为10-40mg/kg时，对动静脉旁路血栓形成有一定的抑制作用，表现为减轻血栓干重及湿重。
具体的实施方式试验例1竹叶黄酮对局灶性脑缺血大鼠的保护作用研究实验材料动物SD大鼠，雄性，体重190-210g，合格证号SCXK(京)2002-0003，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
药物与试剂受试药竹叶黄酮，实验时用0.5％CMCNa溶解。
对照药天保宁银杏叶片，浙江康恩贝制药股份有限公司生产，每片含银杏叶精提物40mg(其中银杏总黄酮甙9.6mg)，批号为010613-2，实验时用0.5％CMCNa溶解。
试剂红四氮唑(TTC)，为淡黄色粉末，北京马氏精细化学品有限公司产品，批号011102。
仪器XTT实体显微镜，云南光学仪器厂产品。AEG-220电子分析天平，日本Shimadzu公司产品。307-6台式牙科车，上海齿科医械厂产品。HZQ-C空气浴振荡器，哈尔滨东明医疗仪器厂产品。932电热烧灼器，上海医疗器械高技术公司产品，标准号Q/CYBV16-1996。手术器械若干。
方法与结果分组及给药实验动物随机分为六组，即假手术组、模型组、竹叶黄酮小剂量组(10mg/kg)、竹叶黄酮中剂量组(20mg/kg)、竹叶黄酮大剂量组(40mg/kg)、天保宁(24mg/kg)组。各组动物均于术前3天灌胃给药(10ml/kg)，第4天手术前1小时给药，手术后24小时处死，处死前1小时再给药一次。假手术组和模型对照组给予等容积的溶媒。
大脑中动脉血栓模型制作大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液(350mg/kg)麻醉，左侧卧位固定，在眼外眦和外耳道连线中点作一弧形切口，夹断颞肌并切除，电热烧灼器烧灼止血。暴露颞骨，于实体显微镜下，用牙科钻在颧骨与颞鳞骨接合处靠近口侧约1mm处开一直径约2.5mm的骨窗，清理残渣，暴露大脑中动脉(位于嗅束及大脑下静脉之间)。置一小片塑料薄膜保护血管周围组织。将吸有50％氯化铁溶液10μL的小片定量滤纸敷在此段大脑中动脉上，30min后取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回笼饲养。室温控制在24℃。模型组与给药组进行上述操作，假手术组除不贴敷吸有氯化铁溶液的滤纸外，其余步骤同。
神经症状评分标准试验动物在术后24h，进行行为检测。评分标准①提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称前伸，记为0分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、肘屈曲、肩内旋或兼具，记为1分。②将动物置于平面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力，记为0分；如手术对侧阻力下降，记为1分。③将动物两前肢置一金属网上，观察肌张力。双侧肌张力对等且有力为0分；手术对侧前肢肌张力下降记为1分。④提鼠尾，动物有不停地向手术对侧旋转者，记为1分。根据以上标准评分，满分为4分，分数越高，动物的行为障碍越严重。
脑梗塞范围的测定动物经神经症状评分后断头取脑，将嗅球、小脑和低位脑干去除后，其余部分在4℃以下冠状切成5片，并迅速将脑片置于TTC染液中(每5ml染液中含4％ TTC 1.5ml，1M K2HPO40.1ml，其余加蒸馏水至刻度)，37℃温孵20分钟，取出，置于10％甲醛液固定。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占全脑重量及患侧脑重量的百分比作为脑梗塞范围。
结果上述实验结果用x±s表示，统计学采用组间比较t检验，结果见表1和表2。
表1竹叶黄酮对MCAT大鼠神经症状的影响(x±s)组别 剂 量n(只) 24小时神经症状评分(mg/kg)假手术组- 120±0**模型组 - 122.75±0.75天保宁组24 122.42±0.90竹叶黄酮组 10 112.36±0.92竹叶黄酮组 20 112.00±0.77*竹叶黄酮组 40 122.33±1.07注与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
表2竹叶黄酮对MCAT大鼠脑梗塞范围的影响(x±s)组 别剂量N(只)梗塞占全脑梗塞占半脑(mg/kg) 范围％范围％假手术组 12 0±0**0±0**模型组 12 6.34±2.693.26±1.31天保宁组 24 12 5.04±1.712.48±0.89竹叶黄酮组10 11 4.76±2.382.40±1.15竹叶黄酮组20 11 3.93±2.451.95±1.15*竹叶黄酮组40 12 6.07±2.643.09±1.29注与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
由表可见，竹叶黄酮中剂量组可改善造模后大鼠的神经症状，并可缩小其脑梗塞范围，大、小剂量组及天宝宁组则有一定的作用趋势；表明竹叶黄酮在一定程度上具有抑制脑血栓形成、减轻局灶性脑缺血损伤作用。
试验例2竹叶黄酮对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血模型的影响实验材料动物Wistar大鼠，雄性，体重220-250g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。合格证号为SCXK 2002-0003。
药物竹叶黄酮，实验时用蒸馏水溶解。垂体后叶注射液(pit)，规格6u/1ml/支，南京新天生物化学制药有限公司，批号020601，实验时用生理盐水稀释。消心痛，规格5mg/片，北京双桥制药公司，批号030302，以蒸馏水溶解。复方丹参滴丸，规格25mg/粒，天津天士力制药股份有限公司，批号20020812311，以蒸馏水溶解。
仪器Medlab-U/4C生物信号采集处理系统，南京美易科技有限公司生产，通过USB接口与PC机相连，PC机内装配套之处理软件。采样条件通道3，采样方式为连续采样，采样间隔为1ms，图形放大1000倍，上限频率1000Hz，下限频率0.8Hz，平滑5点，交流电，心电单位mv，图形横向压缩比20∶1，统计时为5∶1。
方法与结果分组及给药实验动物随机分为7组，即正常对照组、模型对照组、竹叶黄酮小剂量组(10mg/kg)、竹叶黄酮中剂量组(20mg/kg)、竹叶黄酮大剂量组(40mg/kg)、消心痛组(6mg/kg)、复方丹参滴丸组(300mg/kg)。连续灌胃给药3天(10ml/kg体重)，正常组和模型组给予等容积的溶媒。
大鼠心肌缺血模型制作及心电图描记于末次给药1小时后以10％水合氯醛3.5ml/kg(350mg/kg)腹腔注射麻醉动物，仰位固定，将心电电极插入四肢皮下，记录标II导联正常心电图。待心电图稳定后，由舌下静脉注射垂体后叶素0.5U/kg(2ml/kg)，时间控制在15秒，正常对照组注射相同量的生理盐水，立即采集心电图，连续记录20分钟。
分别测定注射垂体后叶素前、即刻、5秒、10秒、15秒、30秒、45秒、1分钟、2分钟、5分钟、10分钟、15分钟、20分钟共13个时间点的心电图J点位移及T波高度变化(即ΔJ、ΔT)，每个时间点连续取10个波形，求平均值。注射垂体后叶素前J点及T波高度平均值分别与其余各时间点J点及T波高度的差的绝对值，即为各时间点J点及T波变化幅度。
结果统计方法采用组间比较t检验，结果如下表3竹叶黄酮对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血模型J点变化幅度的影响(mv，x±s)组别剂量(mg/kg)N(只) 给pit前 即刻 5s10s 15s正常组 - 120.11±0.040.04±0.020.04±0.010.04±0.020.04±0.02模型组 - 120.14±0.040.04±0.030.05±0.030.06±0.030.07±0.07丹参滴丸300 110.12±0.030.05±0.030.05±0.030.06±0.040.05±0.04竹叶黄酮10 110.12±0.040.06±0.070.06±0.060.06±0.060.07±0.06竹叶黄酮20 100.13±0.050.08±0.050.08±0.050.07±0.040.08±0.03竹叶黄酮40 110.11±0.040.04±0.030.04±0.030.05±0.040.05±0.03
(续上表3)30s 45s1min 2min 5min 10min 15min 20min0.04±0.020.04±0.02*0.04±0.03*0.04±0.030.03±0.01*0.04±0.020.05±0.030.04±0.030.06±0.030.09±0.07 0.08±0.06 0.06±0.040.06±0.04 0.05±0.030.05±0.030.06±0.030.06±0.020.06±0.03 0.04±0.02 0.04±0.020.04±0.02 0.04±0.020.04±0.010.03±0.010.05±0.030.07±0.03 0.05±0.05 0.04±0.020.04±0.02 0.04±0.020.04±0.030.05±0.03*0.11±0.090.10±0.09 0.07±0.06 0.06±0.030.05±0.02 0.04±0.030.04±0.030.04±0.020.06±0.040.07±0.04 0.06±0.05 0.05±0.030.03±0.02*0.04±0.020.04±0.020.04±0.020.06±0.040.07±0.06 0.07±0.07 0.04±0.020.04±0.02 0.05±0.020.04±0.020.05±0.03注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
表4.竹叶黄酮对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血模型T波变化幅度的影响(mv，x±s)组别剂量N(只) 给pit前 即刻5s 10s 15s(mg/kg)正常组 - 12 0.20±0.040.03±0.01*0.03±0.01*0.03±0.01*0.03±0.01*模型组 - 12 0.23±0.040.05±0.03 0.05±0.04 0.06±0.030.07±0.06消心痛组6 10 0.21±0.030.04±0.02 0.06±0.05 0.07±0.060.07±0.06丹参滴丸300 11 0.21±0.070.04±0.03 0.05±0.03 0.05±0.030.05±0.03竹叶黄酮10 11 0.20±0.040.06±0.05 0.06±0.04 0.06±0.050.06±0.04竹叶黄酮20 10 0.22±0.040.06±0.04 0.08±0.06 0.07±0.040.06±0.04竹叶黄酮40 11 0.20±0.050.04±0.02 0.04±0.04 0.05±0.040.06±0.05(续上表4)30s45s 1min 2min 5min 10min 15min 20min0.04±0.02*0.04±0.02*0.03±0.02**0.03±0.010.03±0.010.03±0.01 0.03±0.010.03±0.010.06±0.04 0.07±0.060.09±0.05 0.07±0.060.06±0.060.04±0.04 0.04±0.030.06±0.030.05±0.03 0.07±0.040.05±0.05 0.06±0.040.05±0.030.04±0.02 0.04±0.020.05±0.020.05±0.04 0.07±0.070.06±0.06 0.06±0.060.04±0.030.04±0.03 0.04±0.020.03±0.010.08±0.05 0.09±0.060.07±0.06 0.06±0.040.05±0.030.03±0.02 0.03±0.020.04±0.020.05±0.03 0.04±0.020.05±0.05 0.06±0.040.05±0.030.04±0.02 0.04±0.020.05±0.020.06±0.05 0.09±0.070.09±0.07 0.06±0.060.03±0.020.04±0.03 0.06±0.030.03±0.02注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
上述结果表明，模型组大鼠腹腔注射垂体后叶素后45s、1min、5min，J点变化幅度较大，与正常组相比具有明显差异(P＜0.05)；T波则在注射垂体后叶素后即刻、5s、10s、15s、30s、45s、1min、20min发生明显变化，与正常组相比差异明显(P＜0.05～0.01)，说明大鼠出现了明显的心肌缺血，造模成功。而用药各组则在一定程度上对抗此种变化，其中复方丹参滴丸在20min、竹叶黄酮中剂量在5min J点变化幅度明显小于模型组，具有显著性差异；复方丹参滴丸在20min时T波的变化幅度明显小于模型组，具有显著性差异。
实施例3竹叶黄酮对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响实验材料动物SD大鼠，雄性，体重210-230g，合格证号SCXK(京)2002-0003，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
药物竹叶黄酮。天保宁银杏叶片(生产于浙江康恩贝制药股份有限公司，批号为064701)。以上药物均以0.5％CMC-Na配成所需浓度。
仪器
AEG-220型电子分析天平，日本Shimadzu公司产品；Df-206型鼓风干燥箱，北京西城医疗器械厂产品。微血管夹。人体静脉输液用聚乙烯塑料管，药店购入。
方法与结果分组及给药实验动物随机分为五组，即空白对照组、竹叶黄酮小剂量组(10mg/kg)、竹叶黄酮中剂量组(20mg/kg)、竹叶黄酮大剂量组(40mg/kg)、天保宁(24mg/kg)组。各组动物均于术前3天灌胃给药(10ml/kg体重)，手术前1小时给药一次，空白对照组给予等容积的溶媒。
模型制作大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液(350mg/kg)麻醉，仰位固定，分离右侧颈总动脉和左颈外静脉，将三段聚乙烯管相连，一端插入右颈总动脉，另一端插入左颈外静脉，中间段长7cm，放入一根长为5cm的7#手术线(已称重)，管内注满生理盐水(注意不得有气泡)，建立动静脉旁路。20分钟后取下套管，小心取出血栓，在湿润的滤纸上滚动，去除多余浮血，置已称重的硫酸纸上称湿重。再置于烘箱内60℃烘烤1小时至恒重，冷却称重得血栓干重。
结果上述实验结果用x±s表示，统计学采用组间比较t检验进行处理，结果见下表。
表5竹叶黄酮对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响剂 量组别 N(只) 血栓湿重(10-4g) 血栓干重(10-4g)(mg/kg)对照组 - 152806.93±588.71 627.73±123.10大剂量组40132560.87±360.47 591.20±71.64中剂量组20122480.31±487.63 559.63±111.75小剂量组10122323.38±491.74*503.38±103.07**天保宁组24122336.87±455.63*541.13±89.8*注与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
从以上结果可以看出，对照组血栓干、湿重较用药组为高，其中竹叶黄酮小剂量组、天宝宁组与对照组比较，具有明显差异，竹叶黄酮大、中剂量组亦有降低趋势，说明竹叶黄酮对动静脉旁路血栓形成有一定的抑制作用。
权利要求
1.竹叶黄酮在制备治疗或预防血栓性疾病的药物或保健品的用途。
2.按照权利要求1所述的用途，其中所述的血栓性疾病为脑血栓。
3.按照权利要求1所述的用途，其中所述的血栓性疾病为脑梗塞。
4.按照权利要求1所述的用途，其中所述的血栓性疾病为静脉血栓。
5.竹叶黄酮在在制备治疗或预防缺血性疾病的药物或保健品的用途。
6.按照权利要求5所述的用途，其中所述的缺血性疾病为脑缺血。
7.按照权利要求5所述的用途，其中所述的缺血性疾病为心肌缺血。
全文摘要
本发明公开了竹叶黄酮在制备治疗或预防血栓性疾病的药物或保健品的用途，本发明还公开了竹叶黄酮在制备治疗或预防缺血性疾病的药物或保健品的用途。
文档编号A61P9/14GK1596907SQ03157158
公开日2005年3月23日 申请日期2003年9月17日 优先权日2003年9月17日
发明者苏杰 申请人:昆明老拨云堂药业有限公司
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