老鹰茶醇提物在制备抗炎免疫药物中的应用的制作方法
专利名称：老鹰茶醇提物在制备抗炎免疫药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及老鹰茶醇提物的用途，尤其涉及老鹰茶醇提物在制备抗炎免疫药物中的应用。
背景技术：
老鹰茶是我国江南农村的一种传统饮料，千百年来深受饮用者的喜爱和欢迎，原因在于原料丰富，加工简单，便于保管，饮用方便，而且是一种无毒、无污染的纯天然饮料。近年来，由于环境受到一定程度的污染，人们回归自然的意识不断增加，这种纯天然饮料越来越受到人们的青睐。
老鹰茶的植物学分类属于樟科、木姜子属、毛豹皮樟，俗称“白茶”，也叫老鹰茶。学名Litsea coreana Leve.var.是一种常绿小乔木或乔木。常生长在海拔1000米左右的低山常绿阔叶林中，分布在四川、贵州、安徽、云南、重庆、湖南和江西等地。
当年生枝紫褐色或绿色，有卷曲柔毛，皮孔黄褐色或绿色，第二年枝秃净。芽卵形，鳞片外绿色或黄褐色绢毛。
叶革质、互生、椭圆形、狭椭圆形或倒卵状椭圆形，先端渐尖或突尖，基部楔形，长5-15cm，宽1.5-5.cm，背面灰白色，有卷曲柔毛，有时秃净，侧脉6-10条，叶柄长0.5-1.5cm，有毛。在自然环境下，年萌发新芽2轮，4-5月为春芽，8-9月为秋芽，以春芽产量为高。花，腊黄色、花序无梗，数个簇生在叶腋，总苞外有短毛，每序有花4-8朵，花朵直径4-5mm。果，近球状(有长椭圆形和倒椭圆形)，直径约6mm，果梗粗壮，长0.5-0.8mm，有毛，果托扁平膨大，有宿存的花被裂片。花期8-9月，果期次年5-8月。种子，由一层较薄的果皮包裹，种子坚硬，有蜡质。种子直径约6mm。
老鹰茶化学成分老鹰茶中含有丰富的氨基酸，总含量为0.82％，8种人体必需氨基酸齐全，含量以亮氨酸最高，赖氨酸次之，蛋氨酸最低，这和绿茶相似，其中蛋氨酸含量还略高于绿茶。在非必需氨基酸中，以谷氨酸含量最高，其次是天冬氨酸和精氨酸，与绿茶相比无明显差异。从氨基酸总量上看，绿茶的氨基酸高于老鹰茶，其主要原因是绿茶中特有茶氨酸的含量高，茶氨酸在一定程度上反映绿茶与老鹰茶的口感差异，另一方面也说明绿茶原植物与老鹰茶植物有不同的氨基酸代谢类型。
老鹰茶富含多种矿物质元素，其中钾(K)、磷(P)、钙(Ca)、镁(Mg)、钠(Na)、锌(Zn)、铁(Fe)、硒(Se)都是人体必需的营养元素，尤其是锌(Zn)、铁(Fe)、硒(Se)元素含量高于绿茶，对造血、健脑有较好作用。更值得一提的是有害元素铅的含量明显低于绿茶。
老鹰茶含有的水溶性维生素主要是Vc、VB1和VB2，其含量比绿茶稍低，可能与加工过程与代谢途径等因素有关。
老鹰茶中总黄酮(TF，total flavonoid)含量远高于绿茶，绿茶只有1.22％左右，而老鹰茶可高达3.45％，已知黄酮有山柰酚(kaempferol)，山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside)，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside)。
老鹰茶经过常压水蒸汽蒸馏提取老鹰茶的挥发性成分，得到浅黄色油状液体，香味浓郁，出油率0.1％左右。经气相色谱-质谱联用分析，鉴定出32种成分(其中萜类化合物及其衍生物20种)，占挥发油组成的95％，主要成分是正癸醛(decanal)含量为71.53％；然后依次为10-烯-十一醛(10-undecenal)，含量为5.02％；壬醛(n-nonaldehyde)，含量3.58％；正十二酸乙烯酯(dodecanoic acid，ethenyl ester)，含量2.63％。香味的主要成分为萜类。
老鹰茶中还含有多糖、皂甙、多酚和天然色素等。
另外，尤其值得一提的是，与绿茶相比，老鹰茶的化学成分不含咖啡碱物质，无兴奋作用，不影响睡眠，这对需要控制咖啡碱摄入的人更是一种良好的选择。
老鹰茶(Litsea coreana Leve.var)在我国江南广大农村饮用由来已久，深受广大劳动人民的喜爱，但仅仅作为一种饮料。近年来，四川、贵州等地进行了一些开发和利用，但也仅限于粗加工，还没有充分认识到它的药理功能，它所潜在的药理作用机制更无前人探讨。根据文献报道，长期饮用有防馊、防腐、消暑解渴、消食化积、解毒、消肿利尿，明目、健胃、益思的作用。
本发明的目的在于提供老鹰茶醇提物的新用途，即在制药中的新应用。
实际上，本发明涉及老鹰茶醇提物在制备抗炎免疫药物中的应用。
抗炎免疫药的现状及分类免疫是机体接触抗原性异物或异已成份的一种特异性生理反应，其作用是识别、排除抗原性异物，以维持机体的生理平衡。炎症是各种伤害的因素引起的机体常见病理过程。免疫反应和炎症反应都是机体保护性防御反应，但过度的免疫和炎症对人体又都是有害的。免疫和炎症是机体对异物的两种不同反应，但细观其实质，免疫和炎症是一个问题的两个侧面，两者相互重叠，不可分割。目前按照药物治标与治本的目的，并参考化学结构与药理学特点，将抗炎免疫药分为非甾体抗炎免疫药、甾体抗炎免疫药和疾病调修药。
1、非甾体抗炎免疫药这是一类非同质且具有不同药理作用机制的化合物。药理学特点是起效迅速，可减轻炎症性肿胀、缓解疼痛和改善功能，但不影响炎症的病程；停药后不久可出现“反跳”症状和再现。本类药物均无选择性地抑制前列腺素的合成，但前列腺素在慢性炎症反应中有致炎与抗炎的双重作用，这就导致很多副作用的发生。该类药物对环氧化酶的非特异性抑制作用可能也是其药理作用和不良反应不一致的原因之一。
2、甾体类抗炎免疫药这是一类包括天然和合成的糖皮质激素，主要有强大的抗炎作用和弱的免疫抑制作用，能从多个环节影响炎症和免疫过程，广泛用于治疗以慢性炎症为特征的自身免疫病。但因为其严重的不良反应，故一般甾体抗炎免疫药在临床上不作为相对较轻的炎症免疫性疾病的常规治疗药。
3、疾病调修药这类药物包括金盐、D-青霉胺、羟氯喹、免疫抑制药和免疫增强药等。其中不少药物本身并无抗炎作用，与一般抗炎药相比，它们更多地影响疾病的基本过程。
老鹰茶醇提物物理性状为墨绿色粉末，易吸潮，水溶性较差，易溶于亲脂性有机溶剂。具有特殊香味。
老鹰茶醇提物具有抗炎作用，老鹰茶醇提物200mg/kg能明显抑制二甲苯诱导的小鼠耳肿胀，400mg/kg作用尤其明显(与模型组比较，P＜0.05)；老鹰茶醇提物266mg/kg能明显减轻角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀(与模型组比较，P＜0.05)；老鹰茶醇提物266mg/kg能明显抑制棉球诱导的大鼠肉芽肿(与模型组比较，P＜0.05)。
老鹰茶醇提物具有免疫调节作用，老鹰茶醇提物100，200，400mg/kg能提高Cy抑制小鼠脏器重量指数，提高Cy抑制小鼠吞噬指数K值；应用定量溶血分光光度法(QHS)检测抗体形成细胞所分泌的抗SRBC抗体，其结果不仅反映抗体形成细胞的数量，也提示合成抗体的能力；可显著提高Cy抑制小鼠的体液免疫功能。
为了更好地理解本发明的实质，下面将用老鹰茶醇提物的药理试验及结果来说明其在制药领域中的新用途。
(一)老鹰茶醇提物对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用试验1.材料1.1药物及试剂 老鹰茶醇提物，安徽医科大学药学系提供；萘普生(naproxen，NAP)，广东何济公药厂生产，批号19950423。上述药物使用时均用0.5％CMC-Na制成混悬液。二甲苯，安徽蚌埠新科电化试剂厂产品，批号200008012。
1.2仪器 电子天平FA2004A，上海精天电子仪器厂生产1.3动物昆明种小鼠，♂，体重20±2g，皖医实动准第01号，安徽省医学科学研究所动物实验中心提供2.方法昆明种小鼠50只，♂，随机分为5组，每组10只，依次为阳性药组，老鹰茶醇提物组(100mg/kg，200mg/kg，400mg/kg)及模型组。灌胃给药，每天一次，连续3天，模型组给予相应体积的CMC-Na。末次给药后1.5h于小鼠左耳前后两面涂抹二甲苯0.05ml，右耳作对照，1.5h后将小鼠脱颈处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9mm的打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，以左右耳片之差为肿胀度。
3.结果老鹰茶醇提物对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用(x±s，n＝10)组别 剂量(mg/kg)左右耳重量之差(mg)
模型-18.00±6.71老鹰茶醇提物100 12.86±5.92200 11.40±5.43*400 10.71±6.57*萘普生 30 9.95 ±7.45*注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.014.结论老鹰茶醇提物(200mg/kg，400mg/kg)能明显抑制由二甲苯诱导的小鼠耳肿胀。
(二)老鹰茶醇提物对角叉菜胶诱导大鼠足爪肿胀的抑制作用试验1.材料1.1药物及试剂 老鹰茶醇提物，安徽医科大学药学系提供。萘普生(naproxen，NAP)，广东何济公药厂生产，批号19950423。上述药物使用时均用0.5％CMC-Na制成混悬液。角叉菜胶，青岛海洋所提供，应用前一天以无菌生理盐水配制成10g·L-1浓度的角叉菜胶，放置4℃冰箱过夜。
1.2仪器MK-500型Volume metert，日本产品。
1.3动物Spague-Dawlay(SD)大鼠，♀♂各半，体重180±20g，河南医科大学动物实验中心提供。
2.方法取SD大鼠60只，♀♂各半，每组10只，依次为阳性药组，老鹰茶醇提物组(66.5mg/kg，133mg/kg，266mg/kg)、模型组及假手术组。灌胃给药，每天一次，连续3天，模型组及假手术组给予相应体积的CMC-Na。然后于每鼠右足趾皮下注射1％角叉菜胶0.1ml致炎，假手术组给予相应体积的生理盐水。分别在致炎前和致炎后1，3，5，7h，用Volume meter测量致炎侧足容积，以各鼠致炎前，后容积的差值为肿胀度。
3.结果老鹰茶醇提物对角叉菜诱导大鼠足肿胀的抑制作用(x±s，n＝10)组别剂量 足跖肿胀度(ml)mg/kg 1h 3h 5h 7h
模型 -0.45±0.36 1.19±0.37 1.11±0.33 1.07±0.29老鹰茶醇提物 66.5 0.41±0.19 0.96±0.43 1.14±0.41 0.88±0.28133 0.45±0.17 0.99±0.31 1.11±0.22 0.89±0.24266 0.50±0.13 1.10±0.29 1.04±0.21 0.72±0.29**萘普生 20 0.36±0.19 1.01±0.40 1.04±0.34 0.88±0.20假手术 -0.09±0.08 0.16±0.14 0.32±0.13 0.54±0.27注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.014.结论老鹰茶醇提物(266mg/kg)对角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀有一定抑制作用。
(三)老鹰茶醇提物对棉球诱导大鼠肉芽肿的影响试验1.材料1.1药物及试剂 老鹰茶醇提物，安徽医科大学药学系提供。萘普生(naproxen，NAP)，广东何济公药厂生产，批号19950423。上述药物使用时均用0.5％CMC-Na制成混悬液。
1.2仪器真空干燥箱DZF6021，上海一恒科技有限公司生产1.3动物Spague-Dawlay(SD)大鼠，♀♂各半，体重180±20g，河南医科大学动物实验中心提供。
2.方法取SD大鼠50只，♀♂各半，依次为模型组、老鹰茶醇提物组(66.5mg/kg，133mg/kg，266mg/kg)及阳性药组。用10％水合氯醛(350mg/kg)ip注射麻醉，在无菌条件下操作，将棉球(每个50±1mg，高压灭菌)分别植入大鼠两侧腹股沟皮下，肌肉注射氨苄青霉素。手术当天开始灌胃给药，连续7天，第8天颈椎脱臼致死，取出棉球，置60℃烤箱烤至恒重，减去原棉球净重，即为肉芽肿净重，按mg/100g表示。
3.结果老鹰茶醇提物对棉球诱导大鼠肉芽肿的影响(x±s，n＝10)组别 剂量(mg/kg)肉芽肿重(mg/100g)
模型 -- 63.17±15.31老鹰茶醇提物 66.5 53.64±12.74*133 53.33±6.69*266 37.44±27.98**萘普生20 51.23±9.70*注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.014.结论老鹰茶醇提物(133，266mg/kg)对棉球诱导的肉芽肿有明显的抑制作用。
(四)老鹰茶醇提物对免疫低下小鼠体液免疫功能的影响1.材料1.1药物及试剂 老鹰茶醇提物，安徽医科大学药学系提供。雷公藤多苷片，上海复旦复华药业有限公司生产，批号20030402，上述药物使用时均用0.5％CMC-Na制成混悬液；绵羊红细胞，安徽省防疫站提供。
1.2仪器真空干燥箱DZF6021，上海一恒科技有限公司生产；酶标仪，labsystems公司生产。
1.3动物昆明种小鼠60只，♀♂各半，体重18-22g，皖医实动准第01号，安徽省医学科学研究所动物实验中心提供2.方法I.抗体形成细胞的测定昆明种小鼠60只，♀♂各半，体重18-22g，随机分6组，每组10只，分别为正常组、环磷酰胺模型组、老鹰茶醇提物(100，200，400mg/kg)组及阳性药(雷公藤60mg/kg)组。灌胃给药，每天一次，连续7天，正常组及模型组给予相应体积的CMC-Na。d3每鼠腹腔注射10％的SRBC0.2mL致敏。同时除正常组外腹腔注射Cy50mg/kg，连续3天。致敏后5d，摘除小鼠眼球取血。用冷的Gey’s制成5×106/mL脾细胞悬液，然后取试管若干只，每管依次加入脾细胞悬液、0.2％SRBC、1∶10豚鼠血清各0.5mL，另设不加补体的空白对照。置37℃水浴中温浴1h，离心(3000r/min)5min，取上清液。用分光光度计在波长413nm处测吸光度。
II.血清中IgM的测定昆明种小鼠60只，♀♂各半，体重18-22g，随机分6组，每组10只，分别为正常组、环磷酰胺模型组、老鹰茶醇提物(100，200，400mg/kg)组及阳性药(雷公藤60mg/kg)组。灌胃给药，每天一次，连续7天，正常组及模型组给予相应体积的CMC-Na。d3每鼠腹腔注射10％的SRBC0.2ml致敏。同时除正常组外腹腔注射Cy50mg/kg，连续3天。致敏后5d，摘除小鼠眼球取血。把收集的血清作800倍稀释后，吸取0.5mL稀释的血清放入另一试管中，依次加入10％SRBC，补体，生理盐水各0.5mL，空白管用生理盐水代替血清，混匀，置37℃温箱温育1h，然后离心(3000R/min)5min，取上清液，用722分光光度计在540nm处测OD值。
III.血清中IgG的测定分组及致敏同IgM的测定，测定IgG时于第一次致敏后d5同剂量再次致敏，再次免疫后d8眼球取血。放血的试管置室温中数小时或放4℃冰箱过夜，离心分离血清。把血清加等量2-巯基乙醇后37℃水浴保温0.5小时，随后血清作800倍稀释。取2-巯基乙醇处理后的血清0.5mL和5％的SRBC0.5mL，充分混匀，再加羊抗小鼠IgG和补体各0.5mL，空白管以0.5mLNS代替血清。置37℃温箱温育1h，离心(3000R/min，10min)，取上清液，用722分光光度计在540nm处测OD值。
溶血素含量(hemolysin concentration HC)计算HCIgM＝样本稀释血清的OD值×稀释倍数HCIgG＝2-巯基乙醇处理样本血清的OD值×稀释倍数3.结果老鹰茶醇提物对小鼠体液免疫功能的影响(x±s，n＝10)组别 剂量(mg/kg) IgM(10-2) IgG(10-2) 脾(溶血素)(10-2)正常组 -6.60±0.59* 48.80±13.00** 8.92±0.68*模型组 -5.70±0.95 30.60±10.80 6.80±1.90老鹰茶醇提物100 4.60±1.10* 29.30±6.50 5.40±0.47200 3.90±0.51**26.80±6.50 4.60±1.41
400 4.80±0.34* 29.60±7.10 3.60±0.57**雷公藤60 5.00±1.50 22.60±6.60 4.50±0.41*注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.014.结论老鹰茶醇提物(200，400mg/kg)可显著降低免疫低下小鼠血清中IgM水平，老鹰茶醇提物(400mg/kg)可显著降低免疫低下小鼠脾细胞溶血素的生成，对体液免疫具有一定的抑制作用。
从以上结果，可以得出本发明的有益效果在于A、本发明对老鹰茶醇提物发掘了新的医疗用途，开拓了一个新应用领域。
B、本发明的老鹰茶醇提物既能治标，又能治本，安全无毒，药理作用强，预示着很好的药用前景。
C、本发明的老鹰茶醇提物原料来源丰富、价廉工、制备工艺成熟，可制成各种口服剂型，使用方便。
D、本发明的老鹰茶醇提物具有显著的抗炎免疫作用，长期服药无危害。
具体实施例方式
下面结合实施例，对本发明作进一步地说明。
实施例称取老鹰茶2800g，依次以95％和65％乙醇超声提取3次，每次30分钟，醇提液合并、浓缩得浸膏。醇提后的茶叶1000g再以水煮，反复三次，所得水层浓缩得粉末(90g)。浸膏加适量水(3400ml)，超声促溶，用6％HCL调PH至酸性(PH2)，用乙醚提取酸性成分(148g，5.3％)，水层再用4％NAOH调PH至9，用正丁醇萃取碱性成分，正丁醇萃取后水层浓缩得粉末(115g)。
以上老鹰茶醇提物临用前均以0.5％CMC-Na配成混悬液，所用剂量均以浸膏粉末量表示。
老鹰茶醇提物推荐临床剂量600-2400mg/日，口服，分三次服用。
权利要求
1.老鹰茶醇提物在制备抗炎免疫药物中的应用，其特征在于老鹰茶醇提物在制备抗炎免疫药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及老鹰茶醇提物的新用途，即在制备抗炎免疫药物中的应用。本发明对老鹰茶醇提物发掘了新的医疗用途，开拓了一个新应用领域。老鹰茶醇提物既能治标，又能治本，安全无毒，药理作用强，预示着很好的药用前景；其原料来源丰富、价廉、制备工艺成熟，可制成各种口服剂型，使用方便。
文档编号A61K31/7048GK1522707SQ03158230
公开日2004年8月25日 申请日期2003年9月11日 优先权日2003年9月11日
发明者俊 李, 李俊, 金涌, 高署, 程文明, 胡成穆, 李 荣 申请人:安徽医科大学
技术领域：
本发明涉及老鹰茶醇提物的用途，尤其涉及老鹰茶醇提物在制备抗炎免疫药物中的应用。
背景技术：
老鹰茶是我国江南农村的一种传统饮料，千百年来深受饮用者的喜爱和欢迎，原因在于原料丰富，加工简单，便于保管，饮用方便，而且是一种无毒、无污染的纯天然饮料。近年来，由于环境受到一定程度的污染，人们回归自然的意识不断增加，这种纯天然饮料越来越受到人们的青睐。
老鹰茶的植物学分类属于樟科、木姜子属、毛豹皮樟，俗称“白茶”，也叫老鹰茶。学名Litsea coreana Leve.var.是一种常绿小乔木或乔木。常生长在海拔1000米左右的低山常绿阔叶林中，分布在四川、贵州、安徽、云南、重庆、湖南和江西等地。
当年生枝紫褐色或绿色，有卷曲柔毛，皮孔黄褐色或绿色，第二年枝秃净。芽卵形，鳞片外绿色或黄褐色绢毛。
叶革质、互生、椭圆形、狭椭圆形或倒卵状椭圆形，先端渐尖或突尖，基部楔形，长5-15cm，宽1.5-5.cm，背面灰白色，有卷曲柔毛，有时秃净，侧脉6-10条，叶柄长0.5-1.5cm，有毛。在自然环境下，年萌发新芽2轮，4-5月为春芽，8-9月为秋芽，以春芽产量为高。花，腊黄色、花序无梗，数个簇生在叶腋，总苞外有短毛，每序有花4-8朵，花朵直径4-5mm。果，近球状(有长椭圆形和倒椭圆形)，直径约6mm，果梗粗壮，长0.5-0.8mm，有毛，果托扁平膨大，有宿存的花被裂片。花期8-9月，果期次年5-8月。种子，由一层较薄的果皮包裹，种子坚硬，有蜡质。种子直径约6mm。
老鹰茶化学成分老鹰茶中含有丰富的氨基酸，总含量为0.82％，8种人体必需氨基酸齐全，含量以亮氨酸最高，赖氨酸次之，蛋氨酸最低，这和绿茶相似，其中蛋氨酸含量还略高于绿茶。在非必需氨基酸中，以谷氨酸含量最高，其次是天冬氨酸和精氨酸，与绿茶相比无明显差异。从氨基酸总量上看，绿茶的氨基酸高于老鹰茶，其主要原因是绿茶中特有茶氨酸的含量高，茶氨酸在一定程度上反映绿茶与老鹰茶的口感差异，另一方面也说明绿茶原植物与老鹰茶植物有不同的氨基酸代谢类型。
老鹰茶富含多种矿物质元素，其中钾(K)、磷(P)、钙(Ca)、镁(Mg)、钠(Na)、锌(Zn)、铁(Fe)、硒(Se)都是人体必需的营养元素，尤其是锌(Zn)、铁(Fe)、硒(Se)元素含量高于绿茶，对造血、健脑有较好作用。更值得一提的是有害元素铅的含量明显低于绿茶。
老鹰茶含有的水溶性维生素主要是Vc、VB1和VB2，其含量比绿茶稍低，可能与加工过程与代谢途径等因素有关。
老鹰茶中总黄酮(TF，total flavonoid)含量远高于绿茶，绿茶只有1.22％左右，而老鹰茶可高达3.45％，已知黄酮有山柰酚(kaempferol)，山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside)，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside)。
老鹰茶经过常压水蒸汽蒸馏提取老鹰茶的挥发性成分，得到浅黄色油状液体，香味浓郁，出油率0.1％左右。经气相色谱-质谱联用分析，鉴定出32种成分(其中萜类化合物及其衍生物20种)，占挥发油组成的95％，主要成分是正癸醛(decanal)含量为71.53％；然后依次为10-烯-十一醛(10-undecenal)，含量为5.02％；壬醛(n-nonaldehyde)，含量3.58％；正十二酸乙烯酯(dodecanoic acid，ethenyl ester)，含量2.63％。香味的主要成分为萜类。
老鹰茶中还含有多糖、皂甙、多酚和天然色素等。
另外，尤其值得一提的是，与绿茶相比，老鹰茶的化学成分不含咖啡碱物质，无兴奋作用，不影响睡眠，这对需要控制咖啡碱摄入的人更是一种良好的选择。
老鹰茶(Litsea coreana Leve.var)在我国江南广大农村饮用由来已久，深受广大劳动人民的喜爱，但仅仅作为一种饮料。近年来，四川、贵州等地进行了一些开发和利用，但也仅限于粗加工，还没有充分认识到它的药理功能，它所潜在的药理作用机制更无前人探讨。根据文献报道，长期饮用有防馊、防腐、消暑解渴、消食化积、解毒、消肿利尿，明目、健胃、益思的作用。
本发明的目的在于提供老鹰茶醇提物的新用途，即在制药中的新应用。
实际上，本发明涉及老鹰茶醇提物在制备抗炎免疫药物中的应用。
抗炎免疫药的现状及分类免疫是机体接触抗原性异物或异已成份的一种特异性生理反应，其作用是识别、排除抗原性异物，以维持机体的生理平衡。炎症是各种伤害的因素引起的机体常见病理过程。免疫反应和炎症反应都是机体保护性防御反应，但过度的免疫和炎症对人体又都是有害的。免疫和炎症是机体对异物的两种不同反应，但细观其实质，免疫和炎症是一个问题的两个侧面，两者相互重叠，不可分割。目前按照药物治标与治本的目的，并参考化学结构与药理学特点，将抗炎免疫药分为非甾体抗炎免疫药、甾体抗炎免疫药和疾病调修药。
1、非甾体抗炎免疫药这是一类非同质且具有不同药理作用机制的化合物。药理学特点是起效迅速，可减轻炎症性肿胀、缓解疼痛和改善功能，但不影响炎症的病程；停药后不久可出现“反跳”症状和再现。本类药物均无选择性地抑制前列腺素的合成，但前列腺素在慢性炎症反应中有致炎与抗炎的双重作用，这就导致很多副作用的发生。该类药物对环氧化酶的非特异性抑制作用可能也是其药理作用和不良反应不一致的原因之一。
2、甾体类抗炎免疫药这是一类包括天然和合成的糖皮质激素，主要有强大的抗炎作用和弱的免疫抑制作用，能从多个环节影响炎症和免疫过程，广泛用于治疗以慢性炎症为特征的自身免疫病。但因为其严重的不良反应，故一般甾体抗炎免疫药在临床上不作为相对较轻的炎症免疫性疾病的常规治疗药。
3、疾病调修药这类药物包括金盐、D-青霉胺、羟氯喹、免疫抑制药和免疫增强药等。其中不少药物本身并无抗炎作用，与一般抗炎药相比，它们更多地影响疾病的基本过程。
老鹰茶醇提物物理性状为墨绿色粉末，易吸潮，水溶性较差，易溶于亲脂性有机溶剂。具有特殊香味。
老鹰茶醇提物具有抗炎作用，老鹰茶醇提物200mg/kg能明显抑制二甲苯诱导的小鼠耳肿胀，400mg/kg作用尤其明显(与模型组比较，P＜0.05)；老鹰茶醇提物266mg/kg能明显减轻角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀(与模型组比较，P＜0.05)；老鹰茶醇提物266mg/kg能明显抑制棉球诱导的大鼠肉芽肿(与模型组比较，P＜0.05)。
老鹰茶醇提物具有免疫调节作用，老鹰茶醇提物100，200，400mg/kg能提高Cy抑制小鼠脏器重量指数，提高Cy抑制小鼠吞噬指数K值；应用定量溶血分光光度法(QHS)检测抗体形成细胞所分泌的抗SRBC抗体，其结果不仅反映抗体形成细胞的数量，也提示合成抗体的能力；可显著提高Cy抑制小鼠的体液免疫功能。
为了更好地理解本发明的实质，下面将用老鹰茶醇提物的药理试验及结果来说明其在制药领域中的新用途。
(一)老鹰茶醇提物对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用试验1.材料1.1药物及试剂 老鹰茶醇提物，安徽医科大学药学系提供；萘普生(naproxen，NAP)，广东何济公药厂生产，批号19950423。上述药物使用时均用0.5％CMC-Na制成混悬液。二甲苯，安徽蚌埠新科电化试剂厂产品，批号200008012。
1.2仪器 电子天平FA2004A，上海精天电子仪器厂生产1.3动物昆明种小鼠，♂，体重20±2g，皖医实动准第01号，安徽省医学科学研究所动物实验中心提供2.方法昆明种小鼠50只，♂，随机分为5组，每组10只，依次为阳性药组，老鹰茶醇提物组(100mg/kg，200mg/kg，400mg/kg)及模型组。灌胃给药，每天一次，连续3天，模型组给予相应体积的CMC-Na。末次给药后1.5h于小鼠左耳前后两面涂抹二甲苯0.05ml，右耳作对照，1.5h后将小鼠脱颈处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9mm的打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，以左右耳片之差为肿胀度。
3.结果老鹰茶醇提物对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用(x±s，n＝10)组别 剂量(mg/kg)左右耳重量之差(mg)
模型-18.00±6.71老鹰茶醇提物100 12.86±5.92200 11.40±5.43*400 10.71±6.57*萘普生 30 9.95 ±7.45*注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.014.结论老鹰茶醇提物(200mg/kg，400mg/kg)能明显抑制由二甲苯诱导的小鼠耳肿胀。
(二)老鹰茶醇提物对角叉菜胶诱导大鼠足爪肿胀的抑制作用试验1.材料1.1药物及试剂 老鹰茶醇提物，安徽医科大学药学系提供。萘普生(naproxen，NAP)，广东何济公药厂生产，批号19950423。上述药物使用时均用0.5％CMC-Na制成混悬液。角叉菜胶，青岛海洋所提供，应用前一天以无菌生理盐水配制成10g·L-1浓度的角叉菜胶，放置4℃冰箱过夜。
1.2仪器MK-500型Volume metert，日本产品。
1.3动物Spague-Dawlay(SD)大鼠，♀♂各半，体重180±20g，河南医科大学动物实验中心提供。
2.方法取SD大鼠60只，♀♂各半，每组10只，依次为阳性药组，老鹰茶醇提物组(66.5mg/kg，133mg/kg，266mg/kg)、模型组及假手术组。灌胃给药，每天一次，连续3天，模型组及假手术组给予相应体积的CMC-Na。然后于每鼠右足趾皮下注射1％角叉菜胶0.1ml致炎，假手术组给予相应体积的生理盐水。分别在致炎前和致炎后1，3，5，7h，用Volume meter测量致炎侧足容积，以各鼠致炎前，后容积的差值为肿胀度。
3.结果老鹰茶醇提物对角叉菜诱导大鼠足肿胀的抑制作用(x±s，n＝10)组别剂量 足跖肿胀度(ml)mg/kg 1h 3h 5h 7h
模型 -0.45±0.36 1.19±0.37 1.11±0.33 1.07±0.29老鹰茶醇提物 66.5 0.41±0.19 0.96±0.43 1.14±0.41 0.88±0.28133 0.45±0.17 0.99±0.31 1.11±0.22 0.89±0.24266 0.50±0.13 1.10±0.29 1.04±0.21 0.72±0.29**萘普生 20 0.36±0.19 1.01±0.40 1.04±0.34 0.88±0.20假手术 -0.09±0.08 0.16±0.14 0.32±0.13 0.54±0.27注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.014.结论老鹰茶醇提物(266mg/kg)对角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀有一定抑制作用。
(三)老鹰茶醇提物对棉球诱导大鼠肉芽肿的影响试验1.材料1.1药物及试剂 老鹰茶醇提物，安徽医科大学药学系提供。萘普生(naproxen，NAP)，广东何济公药厂生产，批号19950423。上述药物使用时均用0.5％CMC-Na制成混悬液。
1.2仪器真空干燥箱DZF6021，上海一恒科技有限公司生产1.3动物Spague-Dawlay(SD)大鼠，♀♂各半，体重180±20g，河南医科大学动物实验中心提供。
2.方法取SD大鼠50只，♀♂各半，依次为模型组、老鹰茶醇提物组(66.5mg/kg，133mg/kg，266mg/kg)及阳性药组。用10％水合氯醛(350mg/kg)ip注射麻醉，在无菌条件下操作，将棉球(每个50±1mg，高压灭菌)分别植入大鼠两侧腹股沟皮下，肌肉注射氨苄青霉素。手术当天开始灌胃给药，连续7天，第8天颈椎脱臼致死，取出棉球，置60℃烤箱烤至恒重，减去原棉球净重，即为肉芽肿净重，按mg/100g表示。
3.结果老鹰茶醇提物对棉球诱导大鼠肉芽肿的影响(x±s，n＝10)组别 剂量(mg/kg)肉芽肿重(mg/100g)
模型 -- 63.17±15.31老鹰茶醇提物 66.5 53.64±12.74*133 53.33±6.69*266 37.44±27.98**萘普生20 51.23±9.70*注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.014.结论老鹰茶醇提物(133，266mg/kg)对棉球诱导的肉芽肿有明显的抑制作用。
(四)老鹰茶醇提物对免疫低下小鼠体液免疫功能的影响1.材料1.1药物及试剂 老鹰茶醇提物，安徽医科大学药学系提供。雷公藤多苷片，上海复旦复华药业有限公司生产，批号20030402，上述药物使用时均用0.5％CMC-Na制成混悬液；绵羊红细胞，安徽省防疫站提供。
1.2仪器真空干燥箱DZF6021，上海一恒科技有限公司生产；酶标仪，labsystems公司生产。
1.3动物昆明种小鼠60只，♀♂各半，体重18-22g，皖医实动准第01号，安徽省医学科学研究所动物实验中心提供2.方法I.抗体形成细胞的测定昆明种小鼠60只，♀♂各半，体重18-22g，随机分6组，每组10只，分别为正常组、环磷酰胺模型组、老鹰茶醇提物(100，200，400mg/kg)组及阳性药(雷公藤60mg/kg)组。灌胃给药，每天一次，连续7天，正常组及模型组给予相应体积的CMC-Na。d3每鼠腹腔注射10％的SRBC0.2mL致敏。同时除正常组外腹腔注射Cy50mg/kg，连续3天。致敏后5d，摘除小鼠眼球取血。用冷的Gey’s制成5×106/mL脾细胞悬液，然后取试管若干只，每管依次加入脾细胞悬液、0.2％SRBC、1∶10豚鼠血清各0.5mL，另设不加补体的空白对照。置37℃水浴中温浴1h，离心(3000r/min)5min，取上清液。用分光光度计在波长413nm处测吸光度。
II.血清中IgM的测定昆明种小鼠60只，♀♂各半，体重18-22g，随机分6组，每组10只，分别为正常组、环磷酰胺模型组、老鹰茶醇提物(100，200，400mg/kg)组及阳性药(雷公藤60mg/kg)组。灌胃给药，每天一次，连续7天，正常组及模型组给予相应体积的CMC-Na。d3每鼠腹腔注射10％的SRBC0.2ml致敏。同时除正常组外腹腔注射Cy50mg/kg，连续3天。致敏后5d，摘除小鼠眼球取血。把收集的血清作800倍稀释后，吸取0.5mL稀释的血清放入另一试管中，依次加入10％SRBC，补体，生理盐水各0.5mL，空白管用生理盐水代替血清，混匀，置37℃温箱温育1h，然后离心(3000R/min)5min，取上清液，用722分光光度计在540nm处测OD值。
III.血清中IgG的测定分组及致敏同IgM的测定，测定IgG时于第一次致敏后d5同剂量再次致敏，再次免疫后d8眼球取血。放血的试管置室温中数小时或放4℃冰箱过夜，离心分离血清。把血清加等量2-巯基乙醇后37℃水浴保温0.5小时，随后血清作800倍稀释。取2-巯基乙醇处理后的血清0.5mL和5％的SRBC0.5mL，充分混匀，再加羊抗小鼠IgG和补体各0.5mL，空白管以0.5mLNS代替血清。置37℃温箱温育1h，离心(3000R/min，10min)，取上清液，用722分光光度计在540nm处测OD值。
溶血素含量(hemolysin concentration HC)计算HCIgM＝样本稀释血清的OD值×稀释倍数HCIgG＝2-巯基乙醇处理样本血清的OD值×稀释倍数3.结果老鹰茶醇提物对小鼠体液免疫功能的影响(x±s，n＝10)组别 剂量(mg/kg) IgM(10-2) IgG(10-2) 脾(溶血素)(10-2)正常组 -6.60±0.59* 48.80±13.00** 8.92±0.68*模型组 -5.70±0.95 30.60±10.80 6.80±1.90老鹰茶醇提物100 4.60±1.10* 29.30±6.50 5.40±0.47200 3.90±0.51**26.80±6.50 4.60±1.41
400 4.80±0.34* 29.60±7.10 3.60±0.57**雷公藤60 5.00±1.50 22.60±6.60 4.50±0.41*注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.014.结论老鹰茶醇提物(200，400mg/kg)可显著降低免疫低下小鼠血清中IgM水平，老鹰茶醇提物(400mg/kg)可显著降低免疫低下小鼠脾细胞溶血素的生成，对体液免疫具有一定的抑制作用。
从以上结果，可以得出本发明的有益效果在于A、本发明对老鹰茶醇提物发掘了新的医疗用途，开拓了一个新应用领域。
B、本发明的老鹰茶醇提物既能治标，又能治本，安全无毒，药理作用强，预示着很好的药用前景。
C、本发明的老鹰茶醇提物原料来源丰富、价廉工、制备工艺成熟，可制成各种口服剂型，使用方便。
D、本发明的老鹰茶醇提物具有显著的抗炎免疫作用，长期服药无危害。
具体实施例方式
下面结合实施例，对本发明作进一步地说明。
实施例称取老鹰茶2800g，依次以95％和65％乙醇超声提取3次，每次30分钟，醇提液合并、浓缩得浸膏。醇提后的茶叶1000g再以水煮，反复三次，所得水层浓缩得粉末(90g)。浸膏加适量水(3400ml)，超声促溶，用6％HCL调PH至酸性(PH2)，用乙醚提取酸性成分(148g，5.3％)，水层再用4％NAOH调PH至9，用正丁醇萃取碱性成分，正丁醇萃取后水层浓缩得粉末(115g)。
以上老鹰茶醇提物临用前均以0.5％CMC-Na配成混悬液，所用剂量均以浸膏粉末量表示。
老鹰茶醇提物推荐临床剂量600-2400mg/日，口服，分三次服用。
权利要求
1.老鹰茶醇提物在制备抗炎免疫药物中的应用，其特征在于老鹰茶醇提物在制备抗炎免疫药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及老鹰茶醇提物的新用途，即在制备抗炎免疫药物中的应用。本发明对老鹰茶醇提物发掘了新的医疗用途，开拓了一个新应用领域。老鹰茶醇提物既能治标，又能治本，安全无毒，药理作用强，预示着很好的药用前景；其原料来源丰富、价廉、制备工艺成熟，可制成各种口服剂型，使用方便。
文档编号A61K31/7048GK1522707SQ03158230
公开日2004年8月25日 申请日期2003年9月11日 优先权日2003年9月11日
发明者俊 李, 李俊, 金涌, 高署, 程文明, 胡成穆, 李 荣 申请人:安徽医科大学
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