Vla－4拮抗剂的制作方法
专利名称：Vla－4拮抗剂的制作方法
技术领域：
本发明取代的N-[N-(氰基苯基)磺酰基-脯氨酰基]苯基丙氨酸衍生物是VLA-4整联蛋白拮抗剂，并可用于治疗预防和抑制通过VLA-4结合和细胞粘连和活化介导的疾病。并且在口服后本发明化合物对带有VLA-4的细胞显示出显著的受体占用，并且适于每天一次、两次或三次给药。本发明还涉及含有这些化合物的组合物以及使用这些化合物的治疗方法。
背景技术：
VLA-4(“极迟抗原-4”；CD49d/CD29，或α4β1)是一种在所有白血球(除了血小板和成熟中性白细胞外，包括树突状细胞和巨噬细胞类细胞)上表达的整联蛋白，并且在所有这些细胞类型中是细胞-细胞和细胞-基质相互作用的关键介质。VLA-4的配体包括血管细胞粘连分子-1(VCAM-1)和纤维结合蛋白(FN)的CS-1功能区，以及基质蛋白和骨桥蛋白。已经表明，中和抗-α4抗体或阻断抑制VLA-4与其配体之间相互作用的肽，在包括哮喘、多发性硬化、炎症性肠病和类风湿性关节炎等疾病的几种动物模型中同时具有预防和治疗的效力。
α4人单克隆抗体那他珠单抗(Antegren，Elan/Biogen)已经在治疗多发性硬化(D.H.Miller等人，New England Journal of Medicine，348，15(2003))和克罗恩氏病(S.Ghosh等人，New England Journal ofMedicine，348，23(2003))中显示出效果。在治疗哮喘、关节炎、多发性硬化和克罗恩氏病的早期临床试验中还有几种VLA-4拮抗剂。
在使用那他珠单抗的早期临床试验中，观察到淋巴细胞增生(VLA-4官能阻断的代用标志)和＞80％受体占用。报道证明小分子VLA-4拮抗剂在大鼠试验的自身免疫脑脊髓炎(EAE)试验(进行皮下给药后的多发性硬化动物模型)中显示出官能活性(D.R.Leone等人，J.Pharmacol.Exper.Therap.，305，1150(2003))。显示该化合物诱导淋巴细胞增生并具有缓慢的离解速率(分离速率)，导致在带有VLA-4的细胞显示出显著和持续的受体占用。在该文献中描述的EAE模型的受体占用、淋巴细胞增生和效果之间存在正相关。
G.Doherty等人在Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，13，1891(2003)中已经报道了一系列异烟酰-L-氨基苯基丙氨酸衍生物，其具有从Jurkat细胞的VLA-4上缓慢的离解速率(分离速率)。然而该化合物另外显示出非常差的药物代谢动力学性质，例如低口服生物利用率、中到高血浆清除率和短半衰期，以致于其不适于口服给药。本发明化合物为有效的VLA-4拮抗剂，其在足以允许口服给药的时间内实现并维持受体占用。
发明详述本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐， 其中A为N或N+-O-；X和Y独立地选自卤素、C1-3烷基和C1-3烷氧基；R1选自(1)氢，(2)C1-10烷基，(3)-(C1-10烷基)-芳基，(4)-(C1-10烷基)-O-C1-10烷基，(5)-(C1-10烷基)-OC(O)-C1-10烷基，(6)-(C1-10烷基)-OC(O)-芳基，(7)-(C1-10烷基)-OC(O)O-C1-10烷基和(8)-(C1-10烷基)N+(C1-3烷基)3；其中烷基任选被1-3个独立地选自Ra的取代基取代，并且芳基任选被1-3个独立地选自Rb的取代基取代；R2为氢或甲基；
R3和R4独立地选自(1)氢，(2)-NRdRe，(3)-NRdS(O)mRe，(4)-NRdC(O)Re，(5)-NRdC(O)ORe，和(6)-NRdC(O)NRdRe，条件是R3和R4不同时为氢；Ra选自(1)-ORd，(2)-NRdS(O)mRe，(3)-NO2，(4)卤素，(5)-S(O)mRd，(6)-SRd，(7)-S(O)2ORd，(8)-S(O)mNRdRe，(9)-NRdRe，(10)-O(CRfRg)nNRdRe，(11)-C(O)Rd，(12)-CO2Rd，(13)-CO2(CRfRg)nCONRdRe，(14)-OC(O)Rd，(15)-CN，(16)-C(O)NRdRe，(17)-NRdC(O)Re，(18)-OC(O)NRdRe，(19)-NRdC(O)ORe，(20)-NRdC(O)NRdRe，(21)-CRd(N-ORe)，(22)CF3，(23)-OCF3，(24)C3-8环烷基，和(25)杂环基，其中环烷基和杂环基任选被1-3个独立地选自Re的基团取代；Rb选自(1)选自Ra的基团，(2)C1-10烷基，(3)C2-10烯基，(4)C2-10炔基，(5)芳基，和(6)-(C1-10烷基)-芳基，其中烷基、烯基、炔基和芳基任选被1-3个选自独立地选自Rc的基团的取代基取代；Rc为(1)卤素，(2)氨基，(3)羧基，(4)C1-4烷基，(5)C1-4烷氧基，(6)芳基，(7)-(C1-4烷基)-芳基，(8)羟基，(9)CF3，(10)OC(O)C1-4烷基，(11)OC(O)NRfRg或(12)芳氧基；Rd和Re独立地选自氢、C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy，其中烷基、烯基、炔基和Cy任选被1-4个独立地选自Rc的取代基取代；或Rd和Re与其所连接的原子(们)一起形成含有0-2个独立地选自O、S和N-Rh的其它杂原子的4-7元杂环，并且所述杂环任选与C3-8碳环稠和或任选被1-4个独立地选自C1-10烷基的基团取代；Rf和Rg独立地选自氢、C1-10烷基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy；或Rf和Rg与其所连接的碳原子一起形成含有0-2个独立地选自氧、硫和氮的杂原子的5-7元环；Rh选自Rf和-C(O)Rf；Cy选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；并且m是1或2。
在式I的一个实施方案中，X和Y中的一个为卤素并且另一个选自卤素、C1-3烷基和C1-3烷氧基。在此实施方案的一个子集中，X和Y中的一个为氯并且另一个为氯或甲氧基。在另一子集中X和Y分别为氯。
在式I的另一实施方案中，R1为氢、C1-4烷基、-(C1-4烷基)OC(O)-C1-4烷基或-(C1-4烷基)OC(O)-C1-4烷基。在一个子集中R1为氢，并且在另一子集中R1为C1-4烷基。
在式I的另一实施方案中，R3为氢并且R4为NRdRe。在此实施方案的一个子集中，Rd为氢。在此实施方案的第二个子集中，Rd为氢并且Re选自C1-10烷基和环烷基。在第三个子集中Rd和Re与其所连接的原子一起形成不含有其它杂原子并且任选被1或2个独立地选自C1-4烷基的基团取代的4-7元杂环。R4的例子包括1-氮杂环丁烷基、1-吡咯烷基、1-哌啶基、2-甲基-1-哌啶基、3-甲基-1-哌啶基、4-甲基-1-哌啶基、3，5-二甲基-1-哌啶基、3，3-二甲基-1-哌啶基、4，4-二甲基-1-哌啶基、八氢喹啉-1-基、2-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基、叔丁氨基和环丁氨基。
在式I的另一实施方案中，R3为NRdRe并且R4为氢。在此实施方案的一个子集中，Rd为氢。在此实施方案的一个子集中，该实施方案的第二个子集中，Rd为氢并且Re选自C1-10烷基和环烷基。R3的例子包括叔丁氨基和环丁氨基。
式I的一个实施方案提供式Ia化合物或其药学上可接受的盐， 其中A为N或N+O-；R1选自氢、C1-10烷基、-(C1-4烷基)-芳基、-(C1-4烷基)-O-C1-4烷基和-(C1-4烷基)-OC(O)-C1-4烷基；
R3和R4中的一个为NRdRe并且另一个为氢。
在式Ia的一个实施方案中，是如下化合物其中Rd为氢并且Re为叔丁基或环丁基，或者其中Rd、Re与其所连接的氮原子一起形成不含有其它杂原子并且任选被1或2个独立地选自C1-4烷基的基团取代的杂环。
在式Ia的一个实施方案中，是如下化合物其中R3为氢，R4为任选被1或2个独立地选自C1-4烷基的基团取代的哌啶-1-基，和R1是氢或C1-4烷基。
代表性的式I化合物包括但不限于N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4(R)-环丁氨基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸及其乙酯；N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-3(S)-叔丁氨基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸及其乙酯、新戊酰氧基甲酯和1-(乙氧羰基氧基)乙酯；N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4(R)-氮杂环丁烷基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(2-甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(3-甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(4-甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(3，5-二甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(3，3-二甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(4，4-二甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(八氢喹啉-1(2H)-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(八氢异喹啉-2(1H)-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-4-(2-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其甲酯；及其药学上可接受的盐。
本发明另一方面提供了用于在哺乳动物中预防或治疗细胞粘连介导的疾病、紊乱、病症或症状的方法，其包含向所述哺乳动物给药有效量的式I化合物。这个方面包括式I化合物在制造用于在哺乳动物中治疗细胞粘连介导的疾病、紊乱、病症或症状的药物中的应用。在一个实施方案中，所述疾病或紊乱选自哮喘、过敏性鼻炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、炎症性肠病、类风湿性关节炎、器官移植、急性白血病和镰刀细胞性贫血。在另一实施方案中，所述方法用于预防或治疗马气喘病。在又一实施方案中，所述方法用于预防或治疗狗关节炎。
本发明另一方面提供在哺乳动物中预防VLA-4作用的方法，其包含向所述哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物。这个方面包括式I化合物在制造用于在哺乳动物中预防VLA-4作用的药物中的应用。
本发明另一方面提供一种药物组合物，其包含式I化合物和药学上可接受的载体。
“烷基”以及其它具有前缀“烷”的基团，例如烷氧基、链烷酰基，指的是可为直链或支链的碳链或其组合。烷基的例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲和叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基等等。
“烯基”指的是含有至少一个碳碳双键并且可为直链或支链的碳链或其组合。烯基的例子包括乙烯基、烯丙基、异丙烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、1-丙烯基、2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基等等。
“炔基”指的是含有至少一个碳碳三键并且可为直链或支链的碳链或其组合。炔基的例子包括乙炔基、丙炔基、3-甲基-1-戊炔基、2-庚炔基等等。
“环烷基”指的是各自具有3-10个碳原子的单或双环饱和碳环。此处术语还包括稠和到芳基上的单环，其中连接点在非芳香部分。环烷基的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、四氢萘基、十氢化萘基、茚满基等等。
“芳基”指的是仅仅含有碳原子的单环或双环芳香环。此处术语还包括稠和到单环环烷基或单环杂环基上的芳基，其中连接点在芳香部分。芳基的例子包括苯基、萘基、茚满基、茚基、四氢萘基、2，3-二氢苯并呋喃基、二氢苯并吡喃基、1，4-苯并二氧六环基等等。
“杂芳基”指的是含有至少一个选自N、O和S的杂原子并且每个环含有5-6个原子的单环或双环芳香环。杂芳基的例子包括吡咯基、异唑基、异噻唑基、吡唑基、吡啶基、唑基、二唑基、噻二唑基、噻唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、三嗪基、噻吩基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、苯并唑基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、furo(2，3-b)吡啶基、喹啉基、吲哚基、异喹啉基等等。
“杂环基”指的是含有至少一个选自N、S和O的杂原子并且每个所述环具有3-10个原子的单环或双环饱和环，其中连接点可为碳原子或氮原子。该术语还包括稠和到芳基或杂芳基上的单环杂环，其中连接点在非芳香部分。“杂环基”的例子包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、咪唑烷基、2，3-二氢furo(2，3-b)吡啶基、苯并嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、二氢吲哚基等等。该术语还包括通过氮原子连接的部分不饱和的非芳香单环，例如2-或4-吡啶酮，或N-取代的-(1H，3H)-嘧啶-2，4-二酮(N-取代的脲嘧啶)。
“卤素”包括氟、氯、溴和碘。
光学异构体-非对映体-几何异构体-互变异构体式I化合物含有一个或多个不对称中心并因此可作为外消旋体和外消旋混合物、单一对映体、非对映体混合物和单一非对映体存在。
本发明意图包括式I化合物的所有这些异构形式。
此处所述某些化合物含有烯属双键，并且如果没有另外指出，则包括E和Z几何异构体。
此处所述的某些化合物以不同氢连接点存在，称为互变异构体。这种例子可以为称为酮-烯醇互变异构体的酮及其烯醇形式。单个互变异构体以及其混合物都包括在式I化合物内。
通过例如分级结晶的方法，式I化合物可从例如甲醇或乙酸乙酯或其混合物的合适溶剂中分离成对映体的非对映异构体对。由此得到的对映体对可通过常规方法分离成单个立体异构体，例如使用旋光活性胺作为拆分试剂或通过手性HPLC塔分离。
或者，通式I或Ia化合物的任何对映体还可使用已知构形的旋光纯起始物料或试剂通过立体专一性合成得到。
盐术语“药学上可接受的盐”指的是由药学上可接受的无毒碱或酸(包括无机或有机碱和无机或有机酸)制备得到的盐。由无机碱衍生得到的盐包括铝、铵、钙、铜、铁、亚铁、锂、镁、锰盐、亚锰、钾、钠、锌等盐。特别优选铵、钙、镁、钾和钠盐。由药学上可接受的有机无毒碱衍生的盐包括伯、仲和叔胺的盐，取代胺包括天然存在的取代胺、环胺和碱性离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡碱、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡糖胺(glucosamine)、组胺酸、海葱次苷、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤类、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、三羧甲基氨甲烷等。
当本发明化合物为碱性时，其盐可通过药学上可接受的无毒酸(包括无机和有机酸)制备。这些酸包括醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。特别优选柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。
应当理解时的是，此处使用的式I化合物还意指包括其药学上可接受的盐。
应用式I化合物拮抗VLA-4整联蛋白作用的能力使其可用于预防或逆转通过VLA-4结合到其多种配体所介导的症状、紊乱或疾病。因此这些拮抗剂将抑制细胞粘连过程，包括细胞活化、移植、增生和变异。因此本发明的另一个方面提供一种用于治疗(包括预防、缓和、改善或抑制)通过VLA-4结合和细胞粘连和活化所介导的疾病或紊乱或症状的方法，其包含对哺乳动物给药有效量的式I化合物。这些疾病、紊乱、病症或症状例如为(1)多发性硬化，(2)哮喘，(3)过敏性鼻炎，(4)过敏性结膜炎，(5)炎性肺病，包括慢性阻塞性肺病，(6)类风湿性关节炎，(7)脓毒性关节炎，(8)I型糖尿病，(9)器官移植排斥，(10)再狭窄，(11)自体骨髓移植，(12)病毒感染的炎性后遗症，(13)心肌炎，(14)炎症性肠病，包括溃疡性结肠炎和克罗恩氏病，(15)特定种类的基于毒性和免疫的肾炎，(16)接触性皮肤过敏，(17)牛皮藓，(18)肿瘤转移，(19)动脉粥样硬化，(20)镰头细胞性贫血，(21)某些急性白血病，(22)各种黑素瘤、癌和肉瘤(包括多发性脑髓瘤)，(23)急性呼吸窘迫综合症，(24)葡萄膜炎，(25)循环休克；和(26)肝炎。这些疾病可发生在人和动物中，并且动物疾病可为多种不同名称，例如马气喘病为马中发病的气道阻塞疾病，并且其还被不同的称为COPD或复发性气道阻塞疾病。式I化合物可用于在人和非人类动物(例如马、猫和狗)中治疗VLA-4介导的疾病。
本发明化合物在这些疾病或紊乱中的应用可在文献中已经报导的动物疾病模型中得到证实。以下为这些动物疾病模型的例子i)实验性变应性脑脊髓炎，类似于多发性硬化的神经元脱髓鞘作用模型(例如参见T.Yednock等人，Nature，356，63(1993)和E.Keszthelyi等人，Neurology，47，1053(1996))；ii)作为不同时期哮喘模型的羊和豚鼠中支气管过度反响(例如参见W.M.Abraham等人，J.Clin.Invest.93，776(1993)和A.A.r.Milne和P.P. Piper，Eur.J.Pharmacol.，282，243(1995))；iii)作为炎性关节炎模型的大鼠中的辅助诱发关节炎(参见C.Barbadillo等人，Arthr.Rheuma.(Suppl.)，3695(1993)和D.Seiffge，J.Rheumatol.，23，12(1996))；iv)NOD小鼠中继承性自身免疫糖尿病(参见J.L.Baron等人，J.Clin.Invest.，93，1700(1994)，A.Jakubowski等人，J.Immunol.，155，938(1995)和X.D.Yang等人，Diabetes.46，1542(1997))；v)作为器官移植模型的小鼠中心脏同种移植存活率(参见M.Isobe等人，Transplant.Proc.，26，867(1994)和S.Molossi等人，J.Clin Invest.，95，2601(1995))；vi)在cotton-top娟毛猴中的自发慢性结肠炎，其类似于人溃疡性结肠炎，炎症性肠病中的一种形式(参见D.K.Podolsky等人，J，Clin.Invest.，92，372(1993))；vii)作为皮肤过敏性反应模型的接触过敏性模型(参见T.A.Ferguson and T.S.Kupper，J.Immunol.，150，1172(1993)和P.L. Chisholm等人，Eur.J.Immunol.，23，682(1993))；Viii)急性肾毒性肾炎(参见M.S.Mulligan等人，J，Clin.Invest.，91，577(1993))；ix)肿瘤转移(例如参见M.Edward，Curr.Opin.Oncol.，7，185(1995))；x)试验自身免疫甲状腺炎(参见R.W.McMurray等人，Autoimmunity，23，9(1996))；xi)大鼠中动脉阻塞之后的局部缺血性组织损伤(参见F.Squadrito等人，Eur.J.Pharmacol.，318，153(1996))；xii)通过VLA-4抗体抑制TH2 T细胞细胞因子(包括IL-4和IL-5)的产生，其将减弱过敏反应(J.Clinical Investigation 100.3083(1997))；viii)VLA-4整联蛋白抗体使得长期重组细胞在灵长目动物和小鼠中流通并增加细胞因子所诱导的活化(Blood.90 4779-4788(1997))；xiv)到VCAM-1的镰状网状细胞粘连(Blood 85 268-274(1995)和Blood88 4348-4358(1996))；xv)由趋化因子基质细胞源因子1调整的VLA-4整联蛋白介导的到CS-1/纤维结合蛋白和VCAM-1的多发性骨髓瘤细胞粘连(Blood，97，346-3512001)。
剂量范围式I化合物预防剂量或治疗剂量的大小当然随待治疗的病症的本质和严重程度、使用的特定式I化合物以及其给药途径而变化。剂量还将根据具体病人的年龄、体重和反应变化。通常，相对于哺乳动物每公斤体重，日剂量范围为约0.001毫克-约100毫克，优选0.01毫克-约50毫克每公斤体重，最优选0.1毫克-10毫克/公斤，以单次或分开的剂量给药。另一方面，有时还需要使用此范围之外的剂量。
对于组合物使用静脉内给药的应用，合适的剂量范围为对于每公斤体重每天约0.01毫克-约25毫克(优选0.1毫克-约10毫克)式I化合物。
对于使用口服组合物的情形，合适的剂量范围为每公斤体重每天约0.01毫克-约100毫克式I化合物，优选约0.1毫克-约10毫克每公斤体重。
对于组合物使用舌下给药的情形，合适的剂量范围为对于每公斤体重每天0.01毫克-约25毫克(优选0.1毫克-约5毫克)式I化合物。
对于哮喘的治疗，式I化合物可以以约0.1毫克/公斤-约100毫克/公斤，优选约1毫克/公斤-10毫克/公斤的剂量通过口服/吸入/舌下/等途径每天给药一次、两次、三次等。该剂量可以单一日剂量给药或每天分两次或三次给药。
对于多发性硬化的治疗，式I化合物可以以约0.1毫克/公斤-约100毫克/公斤，优选约1毫克/公斤-10毫克/公斤的剂量通过口服/吸入/舌下/等途径每天给药一次、两次、三次等。该剂量可以单一日剂量给药或每天分两次或三次给药。
对于炎症性肠病的治疗，式I化合物可以以约0.1毫克/公斤-约100毫克/公斤，优选约1毫克/公斤-10毫克/公斤的剂量通过口服/吸入/等途径每天给药一次、两次、三次等。该剂量可以单一日剂量给药或每天分两次或三次给药。
对于类风湿性关节炎的治疗，式I化合物可以以约0.1毫克/公斤-约100毫克/公斤，优选约1毫克/公斤-10毫克/公斤的剂量通过口服/吸入/舌下/等途径每天给药一次、两次、三次等。该剂量可以单一日剂量给药或每天分两次或三次给药。
药物组合物本发明另一方面提供包含式I化合物以及药学上可接受的载体的药物组合物。药物组合物中的术语“组合物”意图包括含有活性组分(们)、构成载体的惰性成分(们)(药学上可接受的赋形剂)，以及所有直接或间接由任何两种或多种组分的组合、络合或聚集，或一种或多种组分的分解，或由其一种或多种组分的其它类型的反应或互相作用得到的任何产品。因此本发明药物组合物包括通过混合式I化合物、其它活性组分(们)和药学上可接受的赋形剂制成的任何组合物。
可以使用任何合适的给药途径以向哺乳动物特别是人提供有效剂量的本发明化合物。例如可使用口服、舌下、直肠、局部、肠胃外、眼部给药、肺部给药、经鼻给药等方式。剂型包括片剂、锭剂、分散体、悬浮液、溶液、胶囊、乳剂、膏剂、气雾剂等。
本发明药物组合物包含作为活性组分的式I化合物或其药学上可接受的盐，并且还可含有药学上可接受的载体以及任选的其它治疗成分。术语“药学上可接受的盐”指的是由药学上可接受的无毒碱或酸(包括无机碱或酸和有机碱或酸)制成的盐。
组合物中包括适于口服、舌下、直肠、局部、肠胃外(包括皮下、肌肉注射和静脉内注射)、眼部给药(眼科)、肺部(吸入)或经鼻给药的组合物，不过在任何给定的情况下最合适的给药途径将取决于待治疗病症的本质和严重程度以及活性组分的特性。药物组合物可以便利地以单位剂型提供并可通过药学领域公知的任何方法制备。
对于吸入法给药，本发明化合物方便地以气溶胶喷剂的形式从加压包装或喷雾器中递送。所述化合物还可以可进行配制的粉末形式递送，并且粉末组合物可借助于吹入法粉末吸入器装置吸入。吸入法优选的递送系统为计量剂量吸入(MDI)气雾剂，其可在合适的气雾剂推动剂(例如碳氧化合物或烃)中以式I化合物的悬浮液或溶液的形式配制，或配制成干粉吸入(DPI)气雾剂，其可在使用或不使用其它赋形剂的情况下以式I化合物的干燥粉末配制。
式I化合物合适的局部制剂包括透皮装置、气雾剂、乳剂、膏剂、洗剂、扑粉等。
实际应用中，式I化合物可以作为活性组分根据常规药物复方技术与药物载体致密混合。根据例如口服或肠胃外(包括静脉内)给药所需的制剂形式，载体可为各种形式。为了制备适于口服剂型的组合物，可使用任何通常的药物介质，例如水、二元醇、油类、醇类、调味剂、防腐剂、着色剂等等可用于形成口服液体制剂，例如悬浮剂、酏剂和溶液；或载体例如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等可用于形成例如粉剂、胶囊和片剂的口服固体制剂，固体口服制剂比液体制剂更加优选。由于易于给药，片剂和胶囊代表为最有利的口服剂量单位形式，在这种情况下显然使用固态药物载体。如果需要的话，片剂可通过标准水成或非水成技术涂布。
除了上述常用剂型外，式I化合物还可通过缓释方式和/或例如美国专利号3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；3,630,200和4,008,719中所述的递送装置给药。
本发明适于口服的药物组合物还可以离散单位存在，例如胶囊、扁胶囊或片剂，其中各自含有预定量的活性组分，组合物可以作为粉剂或粒剂、或在含水液体、非水液体、水包油型乳状液或油包水型液体乳状液中以溶液或悬浮液的形式存在。这种组合物可通过所有药学方法制备，然而所有这些方法中包括使活性组分与组成一种或多种必要组分的载体组合的步骤。所述组合物通常通过将活性组分与液态载体或精细分散的固体载体或两者均匀、致密混合而制备，然后如果需要的话，所得产品压制成所需外观。例如片剂可通过任选与一种或多种辅助组分压缩或模压制备。压片可通过在合适的机器中压制自由流动形式例如粉末或颗粒的活性组分制备，活性组分任选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或分散剂混合。模压片可在合适的机器中模压，用惰性液体稀释剂湿润的粉状化合物的混合物而制造。理想地，每个片剂中含有约1-约500毫克活性组分，并且每个扁胶囊或胶囊剂中含有约1-约500毫克活性组分。
以下为式I化合物典型药物剂型的例子式I化合物注射悬浮液(I.M.) 毫克/毫升式I化合物 10甲基纤维素5.0吐温800.5苯甲醇9.0苯扎氯铵 1.0注射用水加至总体积为1毫升片剂 毫克/片式I化合物 25
微晶纤维素415聚烯吡酮 14.0预胶凝淀粉43.5硬脂酸镁 2.5500胶囊 毫克/胶囊式I化合物 25乳糖粉末 573.5硬脂酸镁 1.5600气溶胶每桶式I化合物 24毫克卵磷脂，NF浓缩液 1.2毫克三氯氟甲烷，NF4.025克二氯二氟甲烷，NF 12.15克联合治疗式I化合物还可以与可用于治疗/预防/抑制或改善的式I化合物对其有用的疾病或病症的其它药物联合使用。这些其它药物可通过通常使用的途径和用量与式I化合物同时给药或相继给药。当式I化合物与一种或多种其它药物同时使用时，优选除了包括式I化合物还包括这些其它药物的药物组合物。因此本发明药物组合物还包括除了包含式I化合物还含有一种或多种其它活性组分的那些。可以与式I化合物联合使用、分别给药或在相同药物组合物中的其它活性成分的例子包括但不限于(a)例如US 5,510,332、WO 97/03094、WO 97/02289、WO96/40781、WO 96/22966、WO 96/20216、WO 96/01644、WO 96/06108、WO95/15973和WO 96/31206中公开的其它VLA-4拮抗剂和那他珠单抗；(b)甾体类，例如倍氯米松、甲基强的松龙、培他米松、脱氢可的松、地塞米松和氢化可的松；(c)免疫抑制剂，例如环孢子菌素、他克莫司、雷帕霉素以及其它FK-506类型免疫抑制剂；(d)抗组胺药(H1-组胺拮抗剂)，例如溴苯扑尔敏、氯苯扑儿敏、右氯苯那敏、曲普立啶、克立马丁、本海拉明、二苯珀瑞玲、特赖皮伦胺、羟嗪、甲地拉嗪、普鲁米近、三甲泼拉嗪、阿扎他定、赛庚啶、安他唑林、非尼拉敏、新安替根、阿司咪唑、特非那定、氯雷他定、西替利嗪、非索非那定、脱碳乙氧基氯雷他定等等；(e)非甾体抗哮喘药，例如β2-激动剂(特布它林、二羟苯基异丙氨基乙醇、非诺特罗、新异丙肾上腺素、舒喘宁、比托特罗、沙美特罗和吡布特罗)、茶碱、色甘酸钠、阿托品、异丙托溴铵、白细胞三烯拮抗剂(扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特、依拉司特、泊比司特、SKB-106，203)、白细胞三烯生物合成抑制剂(齐留通、BAY-1005)；(f)非甾体消炎药(NSAIDs)例如丙酸衍生物(阿明洛芬、苯恶洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非诺洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、恶洛芬、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫恶洛芬)、乙酸衍生物(茚甲新、阿西美辛、阿氯芬酸、环氯茚酸、双氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、呋罗芬酸、异丁苯乙酸、伊索克酸、oxpinac、舒林酸、硫平酸、托美汀、齐多美辛和佐美酸)、灭酸衍生物(氟灭酸、甲氯灭酸、甲灭酸、尼氟灭酸和托灭酸)、联苯羧酸衍生物(双氟尼酸和氟苯沙酸)、昔康类(伊索昔康、吡罗昔康、舒多昔康和特诺昔康(tenoxican))、水杨酸盐(乙酰水杨酸、柳氮磺胺吡啶)和吡唑啉酮类(炎爽痛、bezpiperylon、戊烯保泰松、莫非保松、羟保泰松、苯基保泰松)；(g)环加氧酶-2(COX-2)抑制剂，例如塞来考昔、罗非考昔和帕瑞考昔；(h)IV型磷酸二酯酶抑制剂(PDE-IV)；(i)趋化因子受体拮抗剂，尤其是CCR-1、CCR-2和CCR-3；(j)胆固醇降低剂，例如HMG-CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀和其它他汀)、多价螯合剂(消胆胺和降脂树脂II号)、烟酸、非诺贝酸酸衍生物(吉非罗齐、安妥明、非诺贝特和扎贝特)和普罗布可；(k)抗糖尿病剂，例如胰岛素制剂、磺酰脲类、缩二胍(二甲双胍)、a-萄糖苷酶抑制剂(阿卡波糖)和格列酮类(曲格列酮、吡咯列酮、恩格列酮、MCC-555、BRL49653等等)；(l)β干扰素制剂(干扰素β-1a、干扰素β-1b)；(m)抗胆碱能药，例如毒蕈碱拮抗剂(异丙托和tiatropium)；(n)用于多发性硬化的当前治疗药物，包括氢化泼尼松、格拉太咪尔、脱氧腺苷、米托蒽醌、甲氨蝶呤和环磷酰胺；(o)p38激酶抑制剂；(p)其它化合物，例如5-氨基水杨酸及其前药，抗代谢物，例如咪唑硫嘌呤和6-巯基嘌呤，以及细胞毒素癌化疗剂。
式I化合物与第二种活性组分的重量比可以变化并且取决于各个组分的有效剂量。通常将使用各个组分的有效剂量。因此，例如当式I化合物与NSAID组合使用时，式I化合物与NSAID的重量比通常为约1000∶1-约1∶1000，优选约200∶1-约1∶200。式I化合物与其它活性组分的组合也通常在上述范围之内，然而在每种情况下应当使用各个活性组分的有效剂量。
以下方案和实施例中可以使用的缩写包括4-DMAP4-二甲氨基吡啶；AcCN乙腈；BOC叔丁氧基羰基；BOC-ON2-(叔丁氧基羰基氧基亚氨基)-2-苯基乙腈；BOP苯并三唑-1-基氧基-三(二甲氨基)六氟磷酸盐；盐水饱和氯化钠溶液；DIPEAN，N-二异丙基乙胺；DMF二甲基甲酰胺；DMSO二甲亚砜；Et乙基；EtOAc乙酸乙酯；EtOH；乙醇；g或gm克；h或hr小时；HATUO-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基(uronium)六氟磷酸盐；HBTUO-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基六氟磷酸盐；HOAc乙酸；HOAt1-羟基-7-氮杂苯并三唑；HOBt1-羟基-苯并三唑；HPLC高压液相色谱真空中；旋转蒸发；Me甲基；
MeOH甲醇；mg毫克；MHz兆赫；min分钟；mL毫升；mmol毫摩尔；MS或ms质谱；MsCl甲磺酰氯；Ph苯基；Ph3P三苯基膦；PyBOP(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷子基六氟磷酸盐；rt室温；TEA三乙胺；TFA三氟乙酸；THF四氢呋喃。
本发明化合物可通过以下方案中所述的方法制备。在方案1中，取代的吡啶基-4-羧酸衍生物A用亚硫酰氯处理以制造羧酰氯衍生物，其随后与4-氨基-(L)-苯基丙氨酸衍生物反应以得到酰胺B。用强酸(TFA或盐酸)除去B中的N-BOC保护基以得到游离胺C。
方案1
在方案2中，在碱(DIPEA或Na2CO3)的存在下适当取代的(L)脯氨酸酯D(R′＝H)用3-氰基苯磺酰氯L磺酰化以得到磺酰胺E，其中若含有酯保护基则用氢氧化物处理以得到游离酸。胺C和酸E在合适的偶联剂(例如PyBOP、HBTU/HOAt，或者E可首先转化为相应的酰氯)的存在下一起反应以得到酰胺F。或者，脯氨酸酯D(R′＝BOC)通过用例如氢氧化锂的碱处理水解得到相应的酸。酸然后如上所述与C偶联，除去BOC基后得到M。胺M然后在碱的存在下用L磺酰化以得到F。F中的酯可用氢氧化物(如果R1为正或异烷基)或TFA或HCl(如果R1为叔丁基)水解以得到相应的酸。
方案2
方案2(续) 生物学评价式I化合物为VLA-4的有效拮抗剂，对具有VLA-4的细胞具有显著和持久的受体占用。测试化合物从Jurkat细胞上的VLA-4离解速率可根据G.Doherty等人在Bioorganic & Medicinal ChemistryLetters，13，1891(2003)中所述的方法进行测定。在此测试中，本发明化合物具有超过3小时(t1/2＞3小时)的离解半衰期，表明其为VLA-4的强结合抑制剂。
大鼠和狗口服后的VLA-4受体占用可通过D.R.Leone等人在J.Pharmacol.Exper.Therap.，305，1150(2003)中所述的方法进行测定。口服后，本发明化合物显示出持续并显著的受体占用(＞50％)。
本发明化合物可通过以下实施例中详述的方法制备。实施例的提供仅仅用于说明本发明而不能理解为以任何方式对本发明范围的限制。
参考实施例14-((3′，5′-二氯异烟酰基)氨基)-(L)-苯基丙氨酸乙酯盐酸盐
步骤A在5分钟内，在氮气气氛下在0℃向500毫升无水乙醇中加入亚硫酰氯(21毫升，0.29摩尔)，并将透明溶液在0℃搅拌10分钟并在室温搅拌30分钟。一次加入4-硝基-L-苯基丙氨酸(50.2克，0.24摩尔)并将混合物回流过夜。所得混合物真空浓缩，得到白色固体状的4-硝基-L-苯基丙氨酸乙酯盐酸盐(60克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.21(d，2H)，7.54(d.2H)，4.39(dd，1H)，4.22(q，2H)，3.24-3.40(m，2H)，1.22(t，3H).
步骤B在氮气气氛下向步骤A化合物(60克，0.22摩尔)在二氯甲烷(1.5升)的悬浮液中加入TEA(31毫升)。在室温下搅拌10分钟后加入连二碳酸二叔丁基酯(49克，0.22摩尔)和4-DMAP(0.1克)，然后反应混合物在室温下搅拌过夜、用1N盐酸(2×200毫升)、水(2×200毫升)和盐水(1×250毫升)洗涤、通过无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩以得到N-BOC-4-硝基-L-苯基丙氨酸乙酯(78克)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.14(d，2H)，7.28(d，2H)，4.30-4.65(m，1H)，4.15(q，2H)，3.00-3.30(m.2H)，1.35(s，9H)，1.20(t，3H).
步骤C步骤B化合物(78.3克，0.22摩尔)在无水乙醇(300毫升)的溶液用氮气吹扫并加入10％碳载钯(1.0克)。在40-50psi氢化1小时后，反应混合物通过硅藻土过滤并且滤饼用乙醇洗涤，然后用乙酸乙酯洗涤。浓缩滤液，并将残余物通过快速柱色谱在用4∶1-1∶1的乙酸乙酯/己烷洗脱的硅胶上纯化，以得到N-BOC-4-氨基-L-苯基丙氨酸乙酯(60克)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.90(d，2H)，6.63(d，2H)，4.20-4.50(m，1H)，4.14(q，2H)，3.76-3.00(m，2H)，1.36(s，9H)，1.20(t，3H).
步骤D向吹氮处理的500毫升圆底烧瓶中加入3，5-二氯异烟酸(46.5克，0.24摩尔)、二氯甲烷(150毫升)、DMF(0.5毫升)和亚硫酰氯(20毫升，33.9克，0.28摩尔)。浆液回流5小时后另外加入亚硫酰氯(5毫升，0.70摩尔)和二氯甲烷(100毫升)，并将反应混合物另外回流45分钟并浓缩，残余物与甲苯共沸以得到粗酰基氯，其立即使用。将粗酰基氯溶于二氯甲烷(150毫升)并在0℃在5分钟内加入到二氯甲烷(400毫升)中的步骤C化合物(60克，0.20摩尔)和4-甲基吗啉(44毫升，0.40摩尔)中。在0℃搅拌1小时后反应用稀碳酸氢钠水溶液猝灭。分离有机层并将水层用二氯甲烷(500毫升)萃取。合并有机层、通过无水硫酸镁干燥并真空浓缩，并将残余物通过快速柱色谱在用4∶1-3∶2的乙酸乙酯/己烷洗脱的硅胶上纯化，以得到N-BOC-4-((3′，5′-二氯异烟酰基)氨基)-L-苯基丙氨酸乙酯(95克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.60(s，2H)，7.54(d，2H)，7.20(d，2H)，4.20-4.36(m，1H)，4.10(q，2H)，3.02-3.12(m，1H)，2.82-2.92(m，1H)，1.34/1.30(s，9H)，1.20(t，3H).
步骤E在室温下在2小时内，步骤D化合物(95克，0.197摩尔)在乙酸乙酯(1.2升)中的溶液用氯化氢气流处理。所得黄色悬浮液用己烷(250毫升)稀释、冷却至0℃并过滤。滤饼用己烷洗涤并真空干燥以黄色固体得到标题化合物(80克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，7.66(d，2H)，7.30(d，2H)，4.28(dd，1H)，4.25(q，2H)，3.20(q，2H)，1.26(t，3H).
参考实施例2N-BOC-顺式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯 步骤A反式-4-羟基-L-脯氨酸(72.8克，0.56摩尔)、2.5M氢氧化钠(480毫升，1.20摩尔，2.18eq)、THF(100毫升)和连二碳酸二叔丁基酯(128克，0.58摩尔，1.07eq)的混合物在室温下搅拌过夜。所得白色悬浮液冷却到0℃、用浓盐酸(105毫升，0.26摩尔，2.29eq)酸化并用二氯甲烷(1×1升，3×0.5升)和乙酸乙酯(2×1升)萃取。合并的有机萃取液用硫酸镁干燥、过滤并浓缩，以粘稠油状物得到N-Boc-反式-4-羟基-L-脯氨酸(146.3克)。合并粗产物(144.5克，理论量0.56摩尔)、甲基碘(100毫升，1.6摩尔，2.90eq)、碳酸钾(110克，0.8摩尔，1.42eq)和丙酮(2.5升)并将混合物回流4小时。反应冷却至室温并搅拌过夜。混合物过滤并将滤饼用丙酮洗涤。浓缩滤液，残余物溶于含有少量二氯甲烷的乙酸乙酯中并用盐水洗涤、通过硫酸镁干燥、过滤并浓缩得到白色浆液。浆液用己烷冲洗、冷却到0℃并过滤。干燥滤饼以白色固体得到121.7克N-Boc-反式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯。
步骤B将步骤A化合物(144.5克，0.59摩尔)、三苯基膦(200克，0.76摩尔，1.29eq)、对硝基苯甲酸(150克，0.9摩尔，1.52eq)和THF(2.5升)混合并冷却至0℃。在10分钟内加入重氮二甲酸二乙酯(120毫升，0.76摩尔，1.29eq)。反应放热至30℃并冷却至室温并搅拌过夜。将反应浓缩、残余物用醚(1升)稀释并将所得悬浮液过滤。滤液再次浓缩、重新溶于二氯甲烷并色谱纯化(硅胶，二氯甲烷至5％乙酸乙酯/二氯甲烷的线性梯度)。合并产品馏分并浓缩。浓缩液用醚冲洗然后用己烷冲洗以得到白色浆液，将其过滤并干燥，以白色固体得到218.7克标题化合物。
参考实施例3(4S)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-羟基脯氨酸甲酯 (4S)-4-羟基脯氨酸甲酯(52.0克，0.286摩尔)溶于500毫升二氯甲烷并冷却至0℃。加入三乙胺(83.6毫升，0.600摩尔)，然后缓慢加入3-氰基苯磺酰氯(55.0，0.273摩尔)。反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水，并将水层用二氯甲烷萃取3次。合并的有机层用1N盐酸、H2O、1N氢氧化钠和盐水洗涤、通过硫酸镁干燥并浓缩以得到粘稠残余物。加入乙酸乙酯(300毫升)以完全溶解残余物。缓慢加入约100毫升己烷直到溶液变得略微浑浊。然后混合物再次搅拌整夜以使产物沉淀。过滤克，固体并用30％乙酸乙酯/己烷漂洗2次，以灰白色粉末得到所需产品(66.2克，78％)。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ8.20-8.18(m，1H，8.15-8.12(m，1H，7.92-7.89(m，1H，7.72(t，1H)，4.51-4.47(m，1H，4.42(br s，1H)，3.74(s，3H，3.53-3.49(m，1H)，3.46-3.43(m，1H)，3.39(br s，1H)，2.29-2.25(m，1H)，2.21-2.02(m，1H).MS(ESI)，计算值C13H14N2O5S 310.3，实测值m/e311.2(MH+).
实施例1N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4(R)-环丁氨基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸 步骤A在-20℃在45分钟内，向N-BOC-顺式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯(60克，0.25摩尔)和DIPEA(100毫升，0.57摩尔)在二氯甲烷(800毫升)的溶液中加入三氟甲磺酸酐。在-20℃另外搅拌45分钟后，一次加入环丁胺(55克，0.78摩尔)，并将反应升温至室温并维持过夜。反应用1N氢氧化钠(250毫升)和饱和碳酸氢钠水溶液(250毫升)淬灭。分离有机层、用盐水洗涤、通过硫酸镁干燥、过滤并浓缩，并将残余物通过快速柱色谱通过用二氯甲烷至乙酸乙酯至5％甲醇/乙酸乙酯洗脱的硅胶纯化，得到N-BOC-4(R)-环丁氨基-L-脯氨酸甲酯(77克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ4.8(br s，1H)，4.24-4.32(m，1H)，3.67/3.68(s，3H)，3.56-3.64(m，1H)，3.1-3.38(m，3H)，2.12-2.21(m，2H)，2.00-2.12(m，2H)，1.54-1.82(m，4H)，1.36/1.43(s，9H).
步骤B向步骤A化合物(77克，0.25摩尔)在CH3CN(350毫升)和水(150毫升)的溶液中加入氢氧化锂一水合物(21克，0.50摩尔)，并将悬浮液在室温下搅拌过夜。将反应混合物用CH3CN稀释到总体积为1升、冷却到0℃并过滤，并以N-BOC-4(R)-环丁氨基-(L)-脯氨酸锂盐的溶液得到滤液。将部分上述滤液(484毫升，0.22M，0.11摩尔)浓缩，并向残余物中加入水(1升)、二氯甲烷(1升)、EDC(20.8克，0.11摩尔)、HOBt(14.6克，0.11摩尔)和4-((3′，5′-二氯异烟酰基)氨基)-(L)-苯基丙氨酸乙酯盐酸盐(39克，0.090摩尔)在水(1升)中的溶液。在室温下将该两相混合物剧烈搅拌4小时。分离有机层并将水层用二氯甲烷(0.5升)萃取。合并的有机层通过硫酸钠干燥、过滤并浓缩，并将残余物通过快速柱色谱在用乙酸乙酯至乙酸乙酯/甲醇/NH4OH(98∶1∶1)洗脱的硅胶上纯化得到N-[N-BOC-4(R)-环丁氨基-(L)-脯氨酰基]-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯(48克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，7.57(d，2H)，7.20-7.30(m，2H)，4.80(br s，1H)，4.58-4.70(m，1H)，4.08-4.30(m，3H)，3.56-3.64(m，1H)，2.90-3.30(m，5H)，3.00-3.08(m，1H)，1.5-2.2(m，8H)，1.22(br s，9H)，1.2(t，3H).
步骤C向步骤B化合物在乙醇(300毫升)的溶液中加入4M二氧六环中的盐酸(250ml)。室温下搅拌整夜后将黄色透明溶液浓缩，并将残余物用醚(1升)研制。所得悬浮液在室温下搅拌2小时，并通过过滤收集沉淀。用醚洗涤滤饼并干燥以得到N-[4(R)-环丁氨基-(L)-脯氨酰基]-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯盐酸盐(45.6克)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.86(d，1H)，8.62(s，2H)，7.58(d，2H)，7.26(d，2H)，4.80(br s，1H)，4.70(m，1H)，4.64(dd，1H)，4.15(q，2H)，3.80-3.95(m，3H)，3.5(dd，1H)，3.24(dd，1H)，3.00(dd，1H)，2.50-2.70(m，2H)，2.20-2.40(m，4H)，1.8-2.0(m，2H)，1.22(t，3H).
步骤D在0℃，向步骤C化合物(18克，30毫摩尔)、3-氰基苯磺酰氯(6.0克，30毫摩尔)、4-DMAP(50毫克)在THF(80毫升)和二氯甲烷(80毫升)的悬浮液中加入DIPEA(21毫升，0.12摩尔)。反应混合物在3小时内温热至室温，并将所得混合物浓缩。残余物溶于乙酸乙酯(400毫升)、用1N氢氧化钠和盐水洗涤并浓缩至干燥。残余物通过快速柱色谱在用甲醇中的2N氨水/乙酸乙酯(0-3％)洗脱的硅胶上纯化得到N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4(R)-环丁氨基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯(18克)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.19(m，1H)，8.00-8.04(m，2H)7.72(dd，1H)，7.63(d，2H)，7.32(d，2H)，4.70(dd，1H)，4.28(dd，1H)，4.20(q，2H)，3.60(dd，1H)，3.30(m，1H)，3.25(dd，1H)，3.10(m，1H)，3.06(dd，1H)，3.08(dd，1H)，2.07-2.14(m，2H)，1.98(m，1H)，1.75(m，1H)，1.60-1.66(m，4H)，1.27(t，3H).LC-MS计算值C33H34Cl2N6O6S 712，实测值m/e 713(M+H)+(2.8min).
向上述化合物(5.6克)在100毫升乙醇中的样品中加入甲磺酸(1.1eq)。加入醚直到溶液变得浑浊。在室温下搅拌6小时后通过过滤收集晶体以得到上述酯的甲磺酸盐。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.30(s，1H)，8.02(dd，1H)，7.82(d，1H)，7.64-7.71(m，3H)，7.36(d，2H)，4.63(dd，1H)，4.56(dd，1H)，4.18(m，2H)，3.88(m，1H)，3.76-3.83(m，2H)，3.44(dd，1H)，3.24(dd，1H)，3.04(dd，1H)，2.70(s，3H)，2.30-2.38(m，3H)，2.13-2.24(m，3H)1.90-1.96(m，2H)，1.26(t，3H).LC-MS计算值C33H34Cl2N6O6S 712，实测值m/e 713(M+H)+(2.9min).
步骤E向步骤D化合物(游离胺，23克，32毫摩尔)在80毫升AcCN和40毫升水的溶液中加入氢氧化锂一水合物(2.7克，65毫摩尔)。在室温下搅拌2小时后反应用甲酸水溶液(98％，2.4毫升，65毫摩尔)淬灭。反应用水(20毫升)稀释并在室温下搅拌整夜。通过过滤收集形成的结晶以得到标题化合物(18g)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.63(s，2H)，8.15(s，1H)，8.00(dd，1H)，7.88(dd，1H)，7.69(t，1H)，7.62(d，2H)，7.36(d，2H)，4.44-4.50(m，2H)，3.68-3.73(m，1H)，3.62-3.66(m，1H)，3.50-3.58(m，1H)，3.20-3.29(m，2H)，3.12(dd，1H)，2.20-2.32(m，3H)，1.92-2.00(m，3H)，1.76-1.84(m，2H).LC-MS计算值C31H30Cl2N6O6S 684，实测值m/e 685(M+H)+(2.6min).
向上述化合物(1.2克)在20毫升水和AcCN(3∶1)的样品中加入甲磺酸(1.1eq)。将混合物冻干，并将固体残余物在AcCN中结晶，以甲磺酸盐得到标题化合物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.54(br d，1H)，8.08(s，1H) 8.00(br d，1H)，7.76(br d，1H)，7.66(d，2H)，7.65(t，1H)，7.38(d，2H)，4.64(br d，1H)，4.56(m，1H)，3.90-3.73(m，3H)，3.44(dd，1H)，3.28(dd，1H)，3.00(dd，1H)，2.70(s，3H)，2.39-2.30(m，3H)，2.24-2.12(m，3H)，1.96-1.89(m，2H).LC-MS计算值C31H30Cl2N6O6S 684，实测值m/e685(M+H)+(2.6min).
实施例2N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-3(S)-叔丁氨基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸(R1＝H)、乙酯(R1＝CH2CH3)、新戊酰氧基甲酯(R1＝-CH2OC(O)C(CH3)3)和1-(乙氧羰基氧基)乙酯(R1＝-CH(CH3)OC(O)OCH2CH3) 步骤A在0℃向(3S)-羟基-(L)-脯氨酸(Acros，20克，0.15摩尔)和碳酸钠(26克，0.25摩尔)在500毫升水的溶液中加入粉末状3-氰基苯磺酰氯(25克，0.12摩尔)。在室温下搅拌整夜后，反应混合物用浓盐酸(pH＝3)酸化并将产物用乙酸乙酯萃取(3×100毫升)。将有机萃取物干燥(硫酸镁)、过滤并浓缩至干燥。然后将残余物溶于二氯甲烷(100毫升)和甲醇(100毫升)，然后在0℃加入三甲基甲硅烷基重氮甲烷(醚中2M)直到黄色是持久的。在室温搅拌15分钟后，将混合物浓缩至干燥以得到N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-(3S)-羟基-(L)-脯氨酸甲酯(31.5克)。
LC-MS计算值C13H14N2O5S 310，实测值m/e 311(M+H)+(2.3min).
步骤B在0℃向步骤A化合物(31.5克，0.10摩尔)在200毫升乙酸乙酯的溶液中加入TEA(20毫升，0.14摩尔)和MsCl(9.5毫升，0.12摩尔)。在0℃搅拌20分钟后，反应用100毫升碳酸氢钠水溶液淬灭。搅拌15分钟后，反应混合物在乙酸乙酯(300毫升)和碳酸氢钠水溶液(200毫升)之间分配。分离有机层、用盐水洗涤并浓缩至干燥，得到N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-(3S)-甲磺酰氧基-(L)-脯氨酸甲酯(40克)。
LC-MS计算值C14H16N2O7S2388，实测值m/e 389(M+H)+(2.7min).
步骤C向步骤B化合物(39.5克，0.10摩尔)在300毫升AcCN的溶液中加入TEA(35毫升，0.25摩尔)。在75℃加热4小时后将反应混合物冷却至室温并浓缩。残余物溶于乙酸乙酯(600毫升)并用1N氢氧化钠水溶液和盐水洗涤，并浓缩至干燥得到N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-2，3-二氢脯氨酸甲酯(28克)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.22(s，1H)，8.17(d，1H)，8.05(d，1H)，7.80(t，1H)，6.35(t，1H)，3.98(t，2H)，3.81(s，3H)，2.14(td，2H)，8.63(s，2H).LC-MS计算值C13H12N2O4S 292，实测值m/e 293(M+H)+(2.7min).
步骤D向步骤C化合物(26.4克，90毫摩尔)在225毫升环己烷和75毫升叔丁醇的悬浮液中加入叔丁胺(95毫升，0.90摩尔)。在50℃加热48小时后将反应混合物冷却至室温并浓缩。固体残余物与己烷一起研制并通过过滤收集，以外消旋混合物得到N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-3-叔丁氨基脯氨酸甲酯(29克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.24(br s，1H)，8.16(br d，1H)，8.03(brd，1H)，7.80(dd，1H)，3.99(d，1H)，3.75(s，3H)，3.45-3.55(m，2H)，3.33(m，1H)，2.17(m，1H)，1.62(m，1H)，0.97(s，9H).LC-MS计算值C17H23N3O4S 365，实测值m/e 366(M+H)+(1.9min).
上述外消旋体(46克，0.13摩尔)样品和(1R)-(10)樟脑磺酸(29克，0.13摩尔)溶于热AcCN(210毫升)。冷却至室温后通过过滤收集结晶，其在AcCN中重结晶以(1R)-(10)-樟脑磺酸盐得到12.4克一种纯对应体。通过将(1R)-(10)-樟脑磺酸盐与乙酸乙酯和2N氢氧化钠水溶液一起搅拌然后浓缩有机层，得到游离碱的纯(3S)对应体。LC-MS计算值C17H23N3O4S 365，实测值m/e 366(M+H)+(1.9min).
步骤E向步骤D中纯(3S)对应体(6.7克，18毫摩尔)在100毫升AcCN/水(2.5∶1)的溶液中加入氢氧化锂一水合物(2.0克，46摩尔)。在室温下搅拌2.5小时后，通过加入2N盐酸水溶液(23毫升，46毫摩尔)将反应淬灭，并将反应混合物冻干以得到粗锂盐，其无须进一步纯化就可使用。向粗锂盐在70毫升无水DMF的悬浮液中加入4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯盐酸盐(8.0克，19毫摩尔)、PyBOP(11克，22毫摩尔)和N-甲基吗啉(6.0毫升，55毫摩尔)。在室温下搅拌2.5小时后，反应混合物用乙酸乙酯(250毫升)稀释、用水(150毫升×2)和盐水洗涤、通过无水硫酸镁干燥、过滤并浓缩至干燥。残余物通过快速柱色谱在硅胶上纯化以得到标题化合物的乙酯(R1＝CH2CH3，7.5克)。通过在AcCN中重结晶得到乙酯的晶体。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.63(s，2H)，8.23(br s，1H)，8.10(br d，1H)，8.03(br d，1H)，7.77(t，1H)，7.62(d，2H)，7.32(d，2H)，4.78(m，1H)，4.22(q，2H)，3.81(d，1H)，3.44(m，2H)，3.30-3，22(m，2H)，3.12(dd，1H)，1.83(m，1H)，1.43(m，1H)，1.31(t，3H)，0.91(s，9H).LC-MS计算值C33H36Cl2N6O6S 714，实测值m/e 715(M+H)+(2.9min).
步骤F向步骤E的乙酯(2.0克，2.8毫摩尔)在12毫升AcCN和6毫升水的溶液中加入NaOH(1N，7毫升，7.0毫摩尔)，并将反应混合物在室温下搅拌20分钟。反应用2N盐酸淬灭到pH＝5，并用200毫升THF/乙酸乙酯(1∶3/v/v)稀释。混合物用水(50毫升)洗涤并浓缩以除去有机溶剂，并将残余物冻干以得到标题酸化合物(R1＝H，1.9克)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.20(br s，1H)，7.99(br d，2H)，7.72(t，1H)，7.59(d，2H)，7.38(d，2H)，4.55(m，1H)，4.21(br s，1H)，3.69-3.61(m，2H)，3.39(m，2H)，3.25(dd，1H)，3.08(dd，1H)，2.17(m， 1H)，1.72(m，1H)，1.18(s，9H).LC-MS计算值C31H32Cl2N6O6S 686，实测值m/e 687(M+H)+(2.7min).
新戊酰基甲酯(R1＝-CH2OC(O)C(CH3)3)通过用1当量NaOH处理并随后冻干，将步骤F的酸样品转化成钠盐。向由此得到的钠盐(0.10克，0.14毫摩尔)在0.5毫升DMSO的悬浮液中加入新戊酸氯乙酯(0.050毫升，0.35毫摩尔)，将反应混合物在室温下搅拌3小时、用TEA(0.1毫升)、AcCN(0.5毫升)和水(0.5毫升)稀释，并通过用水中40-90％AcCN(含有0.1％TEA)洗脱的反相HPLC纯化以得到含有一定杂质的标题化合物的新戊酰氧基甲酯。通过HPLC在用35％庚烷中异丙醇洗脱的chiralpak AD柱进一步纯化得到标题化合物的新戊酰氧基甲酯。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.62(s，2H)，8.22(br s，1H)，1，8.03(br d，1H)，8.00(br d，1H)，7.75(t，1H)，7.62(d，2H)，7.32(d，2H)，5.85(d，1H)，5.77(d，1H)，4.78(dd，1H)，3.80(d，1H)，3.50-3.40(m，2H)，3.30-3.22(m，2H)，3.10(dd，1H)，1.92(m，1H)，1.43(m，1H)，1.20(s，9H)，0.89(s，9H).LC-MS计算值C37H42Cl2N6O8S800，实测值m/e 801(M+H)+(3.1min).
1-(乙氧羰基氧基)乙酯(R1＝-CH(CH3)OC(O)OCH2CH3)通过上述对于新戊酰基甲酯所述相同的步骤，用碳酸1-氯乙基乙酯代替新戊酸氯甲酯制备了该酯。
LC-MS计算值C36H40Cl2N6O9S 802，实测值m/e 803(M+H)+(3.2min).
实施例3N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4(R)-氮杂环丁烷基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯 根据对实施例1步骤A-D所述的方法，在步骤A中用氮杂环丁烷代替环丁胺制备了标题化合物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.62(s，2H)，8.22(br s，1H)，8.03(br d，2H).7.75(t，1H)，7.62(d，2H)，7.32(d，2H)，4.73(dd，1H)，4.24(dd，1H)，4.18(q，2H)，3.42(dd，1H)，3.23(dd，1H)，3.08(d，1H)，3.06(dd，1H)，2.97(m，2H)，2.88(m，2H)，2.82(m，1H)，1.85-1.75(m，3H)，1.74-1.68(1H).LC-MS计算值C32H32Cl2N6O6S 698，实测值m/e 699(M+H)+(3.1min).
实施例4(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸三氟乙酸盐
步骤A参考实施例3的化合物(3.0克，9.67毫摩尔)溶于100毫升二氯甲烷。加入N，N-二异丙基乙胺(4.23毫升，24.22毫摩尔)并在氮气气氛下将反应混合物冷却至-78℃。在10分钟内向溶液中滴加三氟甲磺酸酐(2.28毫升，13.55毫摩尔)。将混合物在-78℃搅拌1小时并然后在30分钟内缓慢温热至-30℃。在5分钟内滴加哌啶(1.91毫升，19.31毫摩尔)，并将溶液缓慢温热至室温并搅拌整夜。向溶液中加入50毫升水。水层用二氯甲烷萃取3次。合并的有机层通过硫酸镁干燥并浓缩。残余物通过快速色谱纯化，以橙色油状物得到(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-脯氨酸甲酯(3.61克，99％)，将其溶于15毫升乙腈和5毫升水。加入氢氧化锂(1.00克，23.84毫摩尔)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。LCMS表明没有留下起始物料，因此反应混合物用23.84毫升1N盐酸(23.84毫摩尔)中和。溶液在丙酮-干冰浴中冷冻并冻干16小时，以得到粗(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-脯氨酸，其无须进一步纯化直接用于下一反应。
MS(ESI)计算值C17H21N3O4S 363.4，实测值m/e 364.2(MH+).
步骤B步骤A的化合物(9.56毫摩尔)悬浮在25毫升DMF中。加入(2S)-3-{4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]苯基}-1-乙氧基-1-氧代丙烷-2-铵(aminium)氯化物(3.99克，9.53毫摩尔)、HATU(3.99克，10.49毫摩尔)和N-甲基吗啉(2.62毫升，23.83毫摩尔)，并将反应混合物在室温下搅拌24小时。将悬浮液在强力搅拌下滴加到100毫升水中。立即滤出沉淀并用水洗涤3次。浅黄色粉末真空干燥并通过制备性反相HPLC纯化，以白色绒毛状固体得到(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸乙酯三氟乙酸盐(4.42克，55％)。
1H-NMR(MeOD，500MHz)δ8.63(s，2H)，8.49(d，1H)，8.15(s，1H)，8.04-8.01(m，1H)，7.91-7.87(m，1H)，7.71(t，1H)，7.64(d，2H)，7.34(d，2H)，4.63-4.57(m，2H)，4.18(q，2H)，3.96-3.93(m，2H)，3.49-3.44(m，3H)，3.25-3.20(m，1H)，3.06-2.97(m，3H)，2.40-2.37(m，1H)，2.20-2.16(m，1H)，1.98-1.93(m，2H)，1.80-1.78(m，1H)，1.70-1.66(m，2H)，1.54-1.50(m，1H)，1.25(t，3H).MS(ESI)计算值C34H36Cl2N6O6S 727.7，实测值m/e 727.2(M+).
步骤C步骤B的化合物(0.100克，0.14毫摩尔)溶于1.5毫升乙腈和0.5毫升水。加入氢氧化锂(0.014克，0.33毫摩尔)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。LCMS表明没有留下起始物料，因此将反应混合物用三氟乙酸(0.03毫升，0.33毫摩尔)中和。溶液通过制备性反相HPLC纯化以绒毛状白色固体得到标题化合物(0.043克，45％)。
1H-NMR(MeOD，500MHz)δ8.63(s，2H)，8.45(d，1H)，8.13(s，1H)，8.01(d，1H)，7.82(d，1H)，7.69-7.61(m，3H)，7.36(d，2H)，4.65-4.57(m，2H)，3.98-3.88(m，3H)，3.50-3.44(m，3H)，3.31-3.25(m，1H)，3.04-2.98(m，2H)，2.47-2.41(m，1H)，2.23-2.15(m，1H)，2.12-1.44(m，7H).MS(ESI)计算值C32H32Cl2N6O6S699.6，实测值m/e 699.1(M+).
实施例4A(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸乙酯，及其盐酸盐和甲磺酸盐实施例4步骤B的淡黄色粗粉末通过用乙酸乙酯(1％NH4OH)洗脱，随后用乙酸乙酯(1％NH4OH)/甲醇＝99/1洗脱的正相硅胶色谱纯化，以白色固体得到化合物游离碱。
标题化合物游离碱(200毫克，0.28毫摩尔)溶于乙酸乙酯。滴加盐酸(二氧六环中4N，100微升)并在室温下搅拌30分钟。将得到的沉淀过滤、用二乙醚洗涤(3×)并在高真空干燥，以白色固体得到标题化合物盐酸盐。
标题化合物游离碱(5.7克，7.8毫摩尔)溶于乙醇(200毫升)。滴加甲磺酸(570微升)并加入二乙醚(200毫升)。反应混合物在室温下搅拌4小时。将得到的沉淀过滤、用二乙醚洗涤(3×)并在高真空干燥，以白色固体得到标题化合物甲磺酸盐。
使用实施例4中所述的方法制备了以下化合物的三氟乙酸盐
权利要求
1.式I化合物或其药学上可接受的盐， 其中A为N或N+-O-；X和Y独立地选自卤素、C1-3烷基和C1-3烷氧基；R1选自(1)氢，(2)C1-10烷基，(3)-(C1-10烷基)-芳基，(4)-(C1-10烷基)-O-C1-10烷基，(5)-(C1-10烷基)-OC(O)-C1-10烷基，(6)-(C1-10烷基)-OC(O)-芳基，(7)-(C1-10烷基)-OC(O)O-C1-10烷基和(8)-(C1-10烷基)N+(C1-3烷基)3；其中烷基任选被1-3个独立地选自Ra的取代基取代，并且芳基任选被1-3个独立地选自Rb的取代基取代；R2为氢或甲基；R3和R4独立地选自(1)氢，(2)-NRdRe，(3)-NRdS(O)mRe，(4)-NRdC(O)Re，(5)-NRdC(O)ORe，(6)-NRdC(O)NRdRe，条件是R3和R4不同时为氢；Ra选自(1)-ORd，(2)-NRdS(O)mRe，(3)-NO2，(4)卤素，(5)-S(O)mRd，(6)-SRd，(7)-S(O)2ORd，(8)-S(O)mNRdRe，(9)-NRdRe，(10)-O(CRfRg)nNRdRe，(11)-C(O)Rd，(12)-CO2Rd，(13)-CO2(CRfRg)nCONRdRe，(14)-OC(O)Rd，(15)-CN，(16)-C(O)NRdRe，(17)-NRdC(O)Re，(18)-OC(O)NRdRe，(19)-NRdC(O)ORe，(20)-NRdC(O)NRdRe，(21)-CRd(N-ORe)，(22)CF3，(23)-OCF3，(24)C3-8环烷基，和(25)杂环基；其中环烷基和杂环基任选被1-3个独立地选自Rc的基团取代；Rb选自(1)选自Ra的基团，(2)C1-10烷基，(3)C2-10烯基，(4)C2-10炔基，(5)芳基，(6)-(C1-10烷基)-芳基，其中烷基、烯基、炔基和芳基任选被1-3个选自独立地选自Rc的基团的取代基取代；Rc为(1)卤素，(2)氨基，(3)羧基，(4)C1-4烷基，(5)C1-4烷氧基，(6)芳基，(7)-(C1-4烷基)-芳基，(8)羟基，(9)CF3，(10)OC(O)C1-4烷基，(11)OC(O)NRfRg或(12)芳氧基；Rd和Re独立地选自氢、C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy，其中烷基、烯基、炔基和Cy任选被1-4个独立地选自Rc的取代基取代；或Rd和Re与其所连接的原子(们)一起形成含有0-2个独立地选自O、S和N-Rh的其它杂原子的4-7元杂环，并且其中所述杂环任选与C3-8碳环稠和或任选被1-4个独立地选自C1-10烷基的基团取代；Rf和Rg独立地选自氢、C1-10烷基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy；或Rf和Rg与其所连接的碳原子一起形成含有0-2个独立地选自氧、硫和氮的杂原子的5-7元环；Rh选自Rf和-C(O)Rf；Cy选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；并且m是1或2。
2.权利要求1的化合物，其中X和Y之一为卤素并且另一个选自卤素、C1-3烷基和C1-3烷氧基。
3.权利要求1的化合物，其中R1为氢、C1-4烷基、-(C1-4烷基)OC(O)-C1-4烷基或-(C1-4烷基)OC(O)-C1-4烷基。
4.权利要求1的化合物，其中R3为氢并且R4为NRdRe。
5.权利要求1的化合物，其中R3为NRdRe并且R4为氢。
6.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其具有式Ia， 其中A为N或N+O-；R1选自氢、C1-10烷基、-(C1-4烷基)-芳基、-(C1-4烷基)-O-C1-4烷基和-(C1-4烷基)-OC(O)-C1-4烷基；R3和R4中的一个为NRdRe并且另一个为氢。
7.权利要求6的化合物，其中Rd为氢并且Re为叔丁基或环丁基。
8.权利要求6的化合物，其中R3为氢，并且Rd和Re与其所连接的氮原子一起形成不含有其它杂原子并且任选被1或2个独立地选自C1-4烷基的基团取代的4-7元杂环。
9.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
10.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗或预防细胞粘连所介导的疾病的药物中的应用。
11.权利要求9的应用，其中所述疾病选自哮喘、多发性硬化、炎症性肠病、慢性阻塞性肺病、镰状细胞性贫血、白血病和类风湿性关节炎。
12.权利要求9的应用，其中所述疾病为马气喘病。
全文摘要
式I化合物为VLA－4拮抗剂，并因而可用于抑制或预防细胞粘连和细胞粘连介导的疾病。这些化合物可以配制成药物组合物并可适于治疗包括溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、多发性硬化、哮喘和类风湿性关节炎的炎症性肠病。
文档编号A61K31/44GK1930147SQ200580007438
公开日2007年3月14日 申请日期2005年3月7日 优先权日2004年3月10日
发明者W·K·哈格曼, 林寿忠, 刘平, R·A·穆姆福德, T·S·雷格尔, N·D·史密斯, N·S·斯托克, J·祖尼克 申请人:默克公司
技术领域：
本发明取代的N-[N-(氰基苯基)磺酰基-脯氨酰基]苯基丙氨酸衍生物是VLA-4整联蛋白拮抗剂，并可用于治疗预防和抑制通过VLA-4结合和细胞粘连和活化介导的疾病。并且在口服后本发明化合物对带有VLA-4的细胞显示出显著的受体占用，并且适于每天一次、两次或三次给药。本发明还涉及含有这些化合物的组合物以及使用这些化合物的治疗方法。
背景技术：
VLA-4(“极迟抗原-4”；CD49d/CD29，或α4β1)是一种在所有白血球(除了血小板和成熟中性白细胞外，包括树突状细胞和巨噬细胞类细胞)上表达的整联蛋白，并且在所有这些细胞类型中是细胞-细胞和细胞-基质相互作用的关键介质。VLA-4的配体包括血管细胞粘连分子-1(VCAM-1)和纤维结合蛋白(FN)的CS-1功能区，以及基质蛋白和骨桥蛋白。已经表明，中和抗-α4抗体或阻断抑制VLA-4与其配体之间相互作用的肽，在包括哮喘、多发性硬化、炎症性肠病和类风湿性关节炎等疾病的几种动物模型中同时具有预防和治疗的效力。
α4人单克隆抗体那他珠单抗(Antegren，Elan/Biogen)已经在治疗多发性硬化(D.H.Miller等人，New England Journal of Medicine，348，15(2003))和克罗恩氏病(S.Ghosh等人，New England Journal ofMedicine，348，23(2003))中显示出效果。在治疗哮喘、关节炎、多发性硬化和克罗恩氏病的早期临床试验中还有几种VLA-4拮抗剂。
在使用那他珠单抗的早期临床试验中，观察到淋巴细胞增生(VLA-4官能阻断的代用标志)和＞80％受体占用。报道证明小分子VLA-4拮抗剂在大鼠试验的自身免疫脑脊髓炎(EAE)试验(进行皮下给药后的多发性硬化动物模型)中显示出官能活性(D.R.Leone等人，J.Pharmacol.Exper.Therap.，305，1150(2003))。显示该化合物诱导淋巴细胞增生并具有缓慢的离解速率(分离速率)，导致在带有VLA-4的细胞显示出显著和持续的受体占用。在该文献中描述的EAE模型的受体占用、淋巴细胞增生和效果之间存在正相关。
G.Doherty等人在Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，13，1891(2003)中已经报道了一系列异烟酰-L-氨基苯基丙氨酸衍生物，其具有从Jurkat细胞的VLA-4上缓慢的离解速率(分离速率)。然而该化合物另外显示出非常差的药物代谢动力学性质，例如低口服生物利用率、中到高血浆清除率和短半衰期，以致于其不适于口服给药。本发明化合物为有效的VLA-4拮抗剂，其在足以允许口服给药的时间内实现并维持受体占用。
发明详述本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐， 其中A为N或N+-O-；X和Y独立地选自卤素、C1-3烷基和C1-3烷氧基；R1选自(1)氢，(2)C1-10烷基，(3)-(C1-10烷基)-芳基，(4)-(C1-10烷基)-O-C1-10烷基，(5)-(C1-10烷基)-OC(O)-C1-10烷基，(6)-(C1-10烷基)-OC(O)-芳基，(7)-(C1-10烷基)-OC(O)O-C1-10烷基和(8)-(C1-10烷基)N+(C1-3烷基)3；其中烷基任选被1-3个独立地选自Ra的取代基取代，并且芳基任选被1-3个独立地选自Rb的取代基取代；R2为氢或甲基；
R3和R4独立地选自(1)氢，(2)-NRdRe，(3)-NRdS(O)mRe，(4)-NRdC(O)Re，(5)-NRdC(O)ORe，和(6)-NRdC(O)NRdRe，条件是R3和R4不同时为氢；Ra选自(1)-ORd，(2)-NRdS(O)mRe，(3)-NO2，(4)卤素，(5)-S(O)mRd，(6)-SRd，(7)-S(O)2ORd，(8)-S(O)mNRdRe，(9)-NRdRe，(10)-O(CRfRg)nNRdRe，(11)-C(O)Rd，(12)-CO2Rd，(13)-CO2(CRfRg)nCONRdRe，(14)-OC(O)Rd，(15)-CN，(16)-C(O)NRdRe，(17)-NRdC(O)Re，(18)-OC(O)NRdRe，(19)-NRdC(O)ORe，(20)-NRdC(O)NRdRe，(21)-CRd(N-ORe)，(22)CF3，(23)-OCF3，(24)C3-8环烷基，和(25)杂环基，其中环烷基和杂环基任选被1-3个独立地选自Re的基团取代；Rb选自(1)选自Ra的基团，(2)C1-10烷基，(3)C2-10烯基，(4)C2-10炔基，(5)芳基，和(6)-(C1-10烷基)-芳基，其中烷基、烯基、炔基和芳基任选被1-3个选自独立地选自Rc的基团的取代基取代；Rc为(1)卤素，(2)氨基，(3)羧基，(4)C1-4烷基，(5)C1-4烷氧基，(6)芳基，(7)-(C1-4烷基)-芳基，(8)羟基，(9)CF3，(10)OC(O)C1-4烷基，(11)OC(O)NRfRg或(12)芳氧基；Rd和Re独立地选自氢、C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy，其中烷基、烯基、炔基和Cy任选被1-4个独立地选自Rc的取代基取代；或Rd和Re与其所连接的原子(们)一起形成含有0-2个独立地选自O、S和N-Rh的其它杂原子的4-7元杂环，并且所述杂环任选与C3-8碳环稠和或任选被1-4个独立地选自C1-10烷基的基团取代；Rf和Rg独立地选自氢、C1-10烷基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy；或Rf和Rg与其所连接的碳原子一起形成含有0-2个独立地选自氧、硫和氮的杂原子的5-7元环；Rh选自Rf和-C(O)Rf；Cy选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；并且m是1或2。
在式I的一个实施方案中，X和Y中的一个为卤素并且另一个选自卤素、C1-3烷基和C1-3烷氧基。在此实施方案的一个子集中，X和Y中的一个为氯并且另一个为氯或甲氧基。在另一子集中X和Y分别为氯。
在式I的另一实施方案中，R1为氢、C1-4烷基、-(C1-4烷基)OC(O)-C1-4烷基或-(C1-4烷基)OC(O)-C1-4烷基。在一个子集中R1为氢，并且在另一子集中R1为C1-4烷基。
在式I的另一实施方案中，R3为氢并且R4为NRdRe。在此实施方案的一个子集中，Rd为氢。在此实施方案的第二个子集中，Rd为氢并且Re选自C1-10烷基和环烷基。在第三个子集中Rd和Re与其所连接的原子一起形成不含有其它杂原子并且任选被1或2个独立地选自C1-4烷基的基团取代的4-7元杂环。R4的例子包括1-氮杂环丁烷基、1-吡咯烷基、1-哌啶基、2-甲基-1-哌啶基、3-甲基-1-哌啶基、4-甲基-1-哌啶基、3，5-二甲基-1-哌啶基、3，3-二甲基-1-哌啶基、4，4-二甲基-1-哌啶基、八氢喹啉-1-基、2-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基、叔丁氨基和环丁氨基。
在式I的另一实施方案中，R3为NRdRe并且R4为氢。在此实施方案的一个子集中，Rd为氢。在此实施方案的一个子集中，该实施方案的第二个子集中，Rd为氢并且Re选自C1-10烷基和环烷基。R3的例子包括叔丁氨基和环丁氨基。
式I的一个实施方案提供式Ia化合物或其药学上可接受的盐， 其中A为N或N+O-；R1选自氢、C1-10烷基、-(C1-4烷基)-芳基、-(C1-4烷基)-O-C1-4烷基和-(C1-4烷基)-OC(O)-C1-4烷基；
R3和R4中的一个为NRdRe并且另一个为氢。
在式Ia的一个实施方案中，是如下化合物其中Rd为氢并且Re为叔丁基或环丁基，或者其中Rd、Re与其所连接的氮原子一起形成不含有其它杂原子并且任选被1或2个独立地选自C1-4烷基的基团取代的杂环。
在式Ia的一个实施方案中，是如下化合物其中R3为氢，R4为任选被1或2个独立地选自C1-4烷基的基团取代的哌啶-1-基，和R1是氢或C1-4烷基。
代表性的式I化合物包括但不限于N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4(R)-环丁氨基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸及其乙酯；N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-3(S)-叔丁氨基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸及其乙酯、新戊酰氧基甲酯和1-(乙氧羰基氧基)乙酯；N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4(R)-氮杂环丁烷基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(2-甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(3-甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(4-甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(3，5-二甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(3，3-二甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(4，4-二甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(八氢喹啉-1(2H)-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(八氢异喹啉-2(1H)-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-4-(2-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其甲酯；及其药学上可接受的盐。
本发明另一方面提供了用于在哺乳动物中预防或治疗细胞粘连介导的疾病、紊乱、病症或症状的方法，其包含向所述哺乳动物给药有效量的式I化合物。这个方面包括式I化合物在制造用于在哺乳动物中治疗细胞粘连介导的疾病、紊乱、病症或症状的药物中的应用。在一个实施方案中，所述疾病或紊乱选自哮喘、过敏性鼻炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、炎症性肠病、类风湿性关节炎、器官移植、急性白血病和镰刀细胞性贫血。在另一实施方案中，所述方法用于预防或治疗马气喘病。在又一实施方案中，所述方法用于预防或治疗狗关节炎。
本发明另一方面提供在哺乳动物中预防VLA-4作用的方法，其包含向所述哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物。这个方面包括式I化合物在制造用于在哺乳动物中预防VLA-4作用的药物中的应用。
本发明另一方面提供一种药物组合物，其包含式I化合物和药学上可接受的载体。
“烷基”以及其它具有前缀“烷”的基团，例如烷氧基、链烷酰基，指的是可为直链或支链的碳链或其组合。烷基的例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲和叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基等等。
“烯基”指的是含有至少一个碳碳双键并且可为直链或支链的碳链或其组合。烯基的例子包括乙烯基、烯丙基、异丙烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、1-丙烯基、2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基等等。
“炔基”指的是含有至少一个碳碳三键并且可为直链或支链的碳链或其组合。炔基的例子包括乙炔基、丙炔基、3-甲基-1-戊炔基、2-庚炔基等等。
“环烷基”指的是各自具有3-10个碳原子的单或双环饱和碳环。此处术语还包括稠和到芳基上的单环，其中连接点在非芳香部分。环烷基的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、四氢萘基、十氢化萘基、茚满基等等。
“芳基”指的是仅仅含有碳原子的单环或双环芳香环。此处术语还包括稠和到单环环烷基或单环杂环基上的芳基，其中连接点在芳香部分。芳基的例子包括苯基、萘基、茚满基、茚基、四氢萘基、2，3-二氢苯并呋喃基、二氢苯并吡喃基、1，4-苯并二氧六环基等等。
“杂芳基”指的是含有至少一个选自N、O和S的杂原子并且每个环含有5-6个原子的单环或双环芳香环。杂芳基的例子包括吡咯基、异唑基、异噻唑基、吡唑基、吡啶基、唑基、二唑基、噻二唑基、噻唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、三嗪基、噻吩基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、苯并唑基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、furo(2，3-b)吡啶基、喹啉基、吲哚基、异喹啉基等等。
“杂环基”指的是含有至少一个选自N、S和O的杂原子并且每个所述环具有3-10个原子的单环或双环饱和环，其中连接点可为碳原子或氮原子。该术语还包括稠和到芳基或杂芳基上的单环杂环，其中连接点在非芳香部分。“杂环基”的例子包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、咪唑烷基、2，3-二氢furo(2，3-b)吡啶基、苯并嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、二氢吲哚基等等。该术语还包括通过氮原子连接的部分不饱和的非芳香单环，例如2-或4-吡啶酮，或N-取代的-(1H，3H)-嘧啶-2，4-二酮(N-取代的脲嘧啶)。
“卤素”包括氟、氯、溴和碘。
光学异构体-非对映体-几何异构体-互变异构体式I化合物含有一个或多个不对称中心并因此可作为外消旋体和外消旋混合物、单一对映体、非对映体混合物和单一非对映体存在。
本发明意图包括式I化合物的所有这些异构形式。
此处所述某些化合物含有烯属双键，并且如果没有另外指出，则包括E和Z几何异构体。
此处所述的某些化合物以不同氢连接点存在，称为互变异构体。这种例子可以为称为酮-烯醇互变异构体的酮及其烯醇形式。单个互变异构体以及其混合物都包括在式I化合物内。
通过例如分级结晶的方法，式I化合物可从例如甲醇或乙酸乙酯或其混合物的合适溶剂中分离成对映体的非对映异构体对。由此得到的对映体对可通过常规方法分离成单个立体异构体，例如使用旋光活性胺作为拆分试剂或通过手性HPLC塔分离。
或者，通式I或Ia化合物的任何对映体还可使用已知构形的旋光纯起始物料或试剂通过立体专一性合成得到。
盐术语“药学上可接受的盐”指的是由药学上可接受的无毒碱或酸(包括无机或有机碱和无机或有机酸)制备得到的盐。由无机碱衍生得到的盐包括铝、铵、钙、铜、铁、亚铁、锂、镁、锰盐、亚锰、钾、钠、锌等盐。特别优选铵、钙、镁、钾和钠盐。由药学上可接受的有机无毒碱衍生的盐包括伯、仲和叔胺的盐，取代胺包括天然存在的取代胺、环胺和碱性离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡碱、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡糖胺(glucosamine)、组胺酸、海葱次苷、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤类、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、三羧甲基氨甲烷等。
当本发明化合物为碱性时，其盐可通过药学上可接受的无毒酸(包括无机和有机酸)制备。这些酸包括醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。特别优选柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。
应当理解时的是，此处使用的式I化合物还意指包括其药学上可接受的盐。
应用式I化合物拮抗VLA-4整联蛋白作用的能力使其可用于预防或逆转通过VLA-4结合到其多种配体所介导的症状、紊乱或疾病。因此这些拮抗剂将抑制细胞粘连过程，包括细胞活化、移植、增生和变异。因此本发明的另一个方面提供一种用于治疗(包括预防、缓和、改善或抑制)通过VLA-4结合和细胞粘连和活化所介导的疾病或紊乱或症状的方法，其包含对哺乳动物给药有效量的式I化合物。这些疾病、紊乱、病症或症状例如为(1)多发性硬化，(2)哮喘，(3)过敏性鼻炎，(4)过敏性结膜炎，(5)炎性肺病，包括慢性阻塞性肺病，(6)类风湿性关节炎，(7)脓毒性关节炎，(8)I型糖尿病，(9)器官移植排斥，(10)再狭窄，(11)自体骨髓移植，(12)病毒感染的炎性后遗症，(13)心肌炎，(14)炎症性肠病，包括溃疡性结肠炎和克罗恩氏病，(15)特定种类的基于毒性和免疫的肾炎，(16)接触性皮肤过敏，(17)牛皮藓，(18)肿瘤转移，(19)动脉粥样硬化，(20)镰头细胞性贫血，(21)某些急性白血病，(22)各种黑素瘤、癌和肉瘤(包括多发性脑髓瘤)，(23)急性呼吸窘迫综合症，(24)葡萄膜炎，(25)循环休克；和(26)肝炎。这些疾病可发生在人和动物中，并且动物疾病可为多种不同名称，例如马气喘病为马中发病的气道阻塞疾病，并且其还被不同的称为COPD或复发性气道阻塞疾病。式I化合物可用于在人和非人类动物(例如马、猫和狗)中治疗VLA-4介导的疾病。
本发明化合物在这些疾病或紊乱中的应用可在文献中已经报导的动物疾病模型中得到证实。以下为这些动物疾病模型的例子i)实验性变应性脑脊髓炎，类似于多发性硬化的神经元脱髓鞘作用模型(例如参见T.Yednock等人，Nature，356，63(1993)和E.Keszthelyi等人，Neurology，47，1053(1996))；ii)作为不同时期哮喘模型的羊和豚鼠中支气管过度反响(例如参见W.M.Abraham等人，J.Clin.Invest.93，776(1993)和A.A.r.Milne和P.P. Piper，Eur.J.Pharmacol.，282，243(1995))；iii)作为炎性关节炎模型的大鼠中的辅助诱发关节炎(参见C.Barbadillo等人，Arthr.Rheuma.(Suppl.)，3695(1993)和D.Seiffge，J.Rheumatol.，23，12(1996))；iv)NOD小鼠中继承性自身免疫糖尿病(参见J.L.Baron等人，J.Clin.Invest.，93，1700(1994)，A.Jakubowski等人，J.Immunol.，155，938(1995)和X.D.Yang等人，Diabetes.46，1542(1997))；v)作为器官移植模型的小鼠中心脏同种移植存活率(参见M.Isobe等人，Transplant.Proc.，26，867(1994)和S.Molossi等人，J.Clin Invest.，95，2601(1995))；vi)在cotton-top娟毛猴中的自发慢性结肠炎，其类似于人溃疡性结肠炎，炎症性肠病中的一种形式(参见D.K.Podolsky等人，J，Clin.Invest.，92，372(1993))；vii)作为皮肤过敏性反应模型的接触过敏性模型(参见T.A.Ferguson and T.S.Kupper，J.Immunol.，150，1172(1993)和P.L. Chisholm等人，Eur.J.Immunol.，23，682(1993))；Viii)急性肾毒性肾炎(参见M.S.Mulligan等人，J，Clin.Invest.，91，577(1993))；ix)肿瘤转移(例如参见M.Edward，Curr.Opin.Oncol.，7，185(1995))；x)试验自身免疫甲状腺炎(参见R.W.McMurray等人，Autoimmunity，23，9(1996))；xi)大鼠中动脉阻塞之后的局部缺血性组织损伤(参见F.Squadrito等人，Eur.J.Pharmacol.，318，153(1996))；xii)通过VLA-4抗体抑制TH2 T细胞细胞因子(包括IL-4和IL-5)的产生，其将减弱过敏反应(J.Clinical Investigation 100.3083(1997))；viii)VLA-4整联蛋白抗体使得长期重组细胞在灵长目动物和小鼠中流通并增加细胞因子所诱导的活化(Blood.90 4779-4788(1997))；xiv)到VCAM-1的镰状网状细胞粘连(Blood 85 268-274(1995)和Blood88 4348-4358(1996))；xv)由趋化因子基质细胞源因子1调整的VLA-4整联蛋白介导的到CS-1/纤维结合蛋白和VCAM-1的多发性骨髓瘤细胞粘连(Blood，97，346-3512001)。
剂量范围式I化合物预防剂量或治疗剂量的大小当然随待治疗的病症的本质和严重程度、使用的特定式I化合物以及其给药途径而变化。剂量还将根据具体病人的年龄、体重和反应变化。通常，相对于哺乳动物每公斤体重，日剂量范围为约0.001毫克-约100毫克，优选0.01毫克-约50毫克每公斤体重，最优选0.1毫克-10毫克/公斤，以单次或分开的剂量给药。另一方面，有时还需要使用此范围之外的剂量。
对于组合物使用静脉内给药的应用，合适的剂量范围为对于每公斤体重每天约0.01毫克-约25毫克(优选0.1毫克-约10毫克)式I化合物。
对于使用口服组合物的情形，合适的剂量范围为每公斤体重每天约0.01毫克-约100毫克式I化合物，优选约0.1毫克-约10毫克每公斤体重。
对于组合物使用舌下给药的情形，合适的剂量范围为对于每公斤体重每天0.01毫克-约25毫克(优选0.1毫克-约5毫克)式I化合物。
对于哮喘的治疗，式I化合物可以以约0.1毫克/公斤-约100毫克/公斤，优选约1毫克/公斤-10毫克/公斤的剂量通过口服/吸入/舌下/等途径每天给药一次、两次、三次等。该剂量可以单一日剂量给药或每天分两次或三次给药。
对于多发性硬化的治疗，式I化合物可以以约0.1毫克/公斤-约100毫克/公斤，优选约1毫克/公斤-10毫克/公斤的剂量通过口服/吸入/舌下/等途径每天给药一次、两次、三次等。该剂量可以单一日剂量给药或每天分两次或三次给药。
对于炎症性肠病的治疗，式I化合物可以以约0.1毫克/公斤-约100毫克/公斤，优选约1毫克/公斤-10毫克/公斤的剂量通过口服/吸入/等途径每天给药一次、两次、三次等。该剂量可以单一日剂量给药或每天分两次或三次给药。
对于类风湿性关节炎的治疗，式I化合物可以以约0.1毫克/公斤-约100毫克/公斤，优选约1毫克/公斤-10毫克/公斤的剂量通过口服/吸入/舌下/等途径每天给药一次、两次、三次等。该剂量可以单一日剂量给药或每天分两次或三次给药。
药物组合物本发明另一方面提供包含式I化合物以及药学上可接受的载体的药物组合物。药物组合物中的术语“组合物”意图包括含有活性组分(们)、构成载体的惰性成分(们)(药学上可接受的赋形剂)，以及所有直接或间接由任何两种或多种组分的组合、络合或聚集，或一种或多种组分的分解，或由其一种或多种组分的其它类型的反应或互相作用得到的任何产品。因此本发明药物组合物包括通过混合式I化合物、其它活性组分(们)和药学上可接受的赋形剂制成的任何组合物。
可以使用任何合适的给药途径以向哺乳动物特别是人提供有效剂量的本发明化合物。例如可使用口服、舌下、直肠、局部、肠胃外、眼部给药、肺部给药、经鼻给药等方式。剂型包括片剂、锭剂、分散体、悬浮液、溶液、胶囊、乳剂、膏剂、气雾剂等。
本发明药物组合物包含作为活性组分的式I化合物或其药学上可接受的盐，并且还可含有药学上可接受的载体以及任选的其它治疗成分。术语“药学上可接受的盐”指的是由药学上可接受的无毒碱或酸(包括无机碱或酸和有机碱或酸)制成的盐。
组合物中包括适于口服、舌下、直肠、局部、肠胃外(包括皮下、肌肉注射和静脉内注射)、眼部给药(眼科)、肺部(吸入)或经鼻给药的组合物，不过在任何给定的情况下最合适的给药途径将取决于待治疗病症的本质和严重程度以及活性组分的特性。药物组合物可以便利地以单位剂型提供并可通过药学领域公知的任何方法制备。
对于吸入法给药，本发明化合物方便地以气溶胶喷剂的形式从加压包装或喷雾器中递送。所述化合物还可以可进行配制的粉末形式递送，并且粉末组合物可借助于吹入法粉末吸入器装置吸入。吸入法优选的递送系统为计量剂量吸入(MDI)气雾剂，其可在合适的气雾剂推动剂(例如碳氧化合物或烃)中以式I化合物的悬浮液或溶液的形式配制，或配制成干粉吸入(DPI)气雾剂，其可在使用或不使用其它赋形剂的情况下以式I化合物的干燥粉末配制。
式I化合物合适的局部制剂包括透皮装置、气雾剂、乳剂、膏剂、洗剂、扑粉等。
实际应用中，式I化合物可以作为活性组分根据常规药物复方技术与药物载体致密混合。根据例如口服或肠胃外(包括静脉内)给药所需的制剂形式，载体可为各种形式。为了制备适于口服剂型的组合物，可使用任何通常的药物介质，例如水、二元醇、油类、醇类、调味剂、防腐剂、着色剂等等可用于形成口服液体制剂，例如悬浮剂、酏剂和溶液；或载体例如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等可用于形成例如粉剂、胶囊和片剂的口服固体制剂，固体口服制剂比液体制剂更加优选。由于易于给药，片剂和胶囊代表为最有利的口服剂量单位形式，在这种情况下显然使用固态药物载体。如果需要的话，片剂可通过标准水成或非水成技术涂布。
除了上述常用剂型外，式I化合物还可通过缓释方式和/或例如美国专利号3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；3,630,200和4,008,719中所述的递送装置给药。
本发明适于口服的药物组合物还可以离散单位存在，例如胶囊、扁胶囊或片剂，其中各自含有预定量的活性组分，组合物可以作为粉剂或粒剂、或在含水液体、非水液体、水包油型乳状液或油包水型液体乳状液中以溶液或悬浮液的形式存在。这种组合物可通过所有药学方法制备，然而所有这些方法中包括使活性组分与组成一种或多种必要组分的载体组合的步骤。所述组合物通常通过将活性组分与液态载体或精细分散的固体载体或两者均匀、致密混合而制备，然后如果需要的话，所得产品压制成所需外观。例如片剂可通过任选与一种或多种辅助组分压缩或模压制备。压片可通过在合适的机器中压制自由流动形式例如粉末或颗粒的活性组分制备，活性组分任选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或分散剂混合。模压片可在合适的机器中模压，用惰性液体稀释剂湿润的粉状化合物的混合物而制造。理想地，每个片剂中含有约1-约500毫克活性组分，并且每个扁胶囊或胶囊剂中含有约1-约500毫克活性组分。
以下为式I化合物典型药物剂型的例子式I化合物注射悬浮液(I.M.) 毫克/毫升式I化合物 10甲基纤维素5.0吐温800.5苯甲醇9.0苯扎氯铵 1.0注射用水加至总体积为1毫升片剂 毫克/片式I化合物 25
微晶纤维素415聚烯吡酮 14.0预胶凝淀粉43.5硬脂酸镁 2.5500胶囊 毫克/胶囊式I化合物 25乳糖粉末 573.5硬脂酸镁 1.5600气溶胶每桶式I化合物 24毫克卵磷脂，NF浓缩液 1.2毫克三氯氟甲烷，NF4.025克二氯二氟甲烷，NF 12.15克联合治疗式I化合物还可以与可用于治疗/预防/抑制或改善的式I化合物对其有用的疾病或病症的其它药物联合使用。这些其它药物可通过通常使用的途径和用量与式I化合物同时给药或相继给药。当式I化合物与一种或多种其它药物同时使用时，优选除了包括式I化合物还包括这些其它药物的药物组合物。因此本发明药物组合物还包括除了包含式I化合物还含有一种或多种其它活性组分的那些。可以与式I化合物联合使用、分别给药或在相同药物组合物中的其它活性成分的例子包括但不限于(a)例如US 5,510,332、WO 97/03094、WO 97/02289、WO96/40781、WO 96/22966、WO 96/20216、WO 96/01644、WO 96/06108、WO95/15973和WO 96/31206中公开的其它VLA-4拮抗剂和那他珠单抗；(b)甾体类，例如倍氯米松、甲基强的松龙、培他米松、脱氢可的松、地塞米松和氢化可的松；(c)免疫抑制剂，例如环孢子菌素、他克莫司、雷帕霉素以及其它FK-506类型免疫抑制剂；(d)抗组胺药(H1-组胺拮抗剂)，例如溴苯扑尔敏、氯苯扑儿敏、右氯苯那敏、曲普立啶、克立马丁、本海拉明、二苯珀瑞玲、特赖皮伦胺、羟嗪、甲地拉嗪、普鲁米近、三甲泼拉嗪、阿扎他定、赛庚啶、安他唑林、非尼拉敏、新安替根、阿司咪唑、特非那定、氯雷他定、西替利嗪、非索非那定、脱碳乙氧基氯雷他定等等；(e)非甾体抗哮喘药，例如β2-激动剂(特布它林、二羟苯基异丙氨基乙醇、非诺特罗、新异丙肾上腺素、舒喘宁、比托特罗、沙美特罗和吡布特罗)、茶碱、色甘酸钠、阿托品、异丙托溴铵、白细胞三烯拮抗剂(扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特、依拉司特、泊比司特、SKB-106，203)、白细胞三烯生物合成抑制剂(齐留通、BAY-1005)；(f)非甾体消炎药(NSAIDs)例如丙酸衍生物(阿明洛芬、苯恶洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非诺洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、恶洛芬、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫恶洛芬)、乙酸衍生物(茚甲新、阿西美辛、阿氯芬酸、环氯茚酸、双氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、呋罗芬酸、异丁苯乙酸、伊索克酸、oxpinac、舒林酸、硫平酸、托美汀、齐多美辛和佐美酸)、灭酸衍生物(氟灭酸、甲氯灭酸、甲灭酸、尼氟灭酸和托灭酸)、联苯羧酸衍生物(双氟尼酸和氟苯沙酸)、昔康类(伊索昔康、吡罗昔康、舒多昔康和特诺昔康(tenoxican))、水杨酸盐(乙酰水杨酸、柳氮磺胺吡啶)和吡唑啉酮类(炎爽痛、bezpiperylon、戊烯保泰松、莫非保松、羟保泰松、苯基保泰松)；(g)环加氧酶-2(COX-2)抑制剂，例如塞来考昔、罗非考昔和帕瑞考昔；(h)IV型磷酸二酯酶抑制剂(PDE-IV)；(i)趋化因子受体拮抗剂，尤其是CCR-1、CCR-2和CCR-3；(j)胆固醇降低剂，例如HMG-CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀和其它他汀)、多价螯合剂(消胆胺和降脂树脂II号)、烟酸、非诺贝酸酸衍生物(吉非罗齐、安妥明、非诺贝特和扎贝特)和普罗布可；(k)抗糖尿病剂，例如胰岛素制剂、磺酰脲类、缩二胍(二甲双胍)、a-萄糖苷酶抑制剂(阿卡波糖)和格列酮类(曲格列酮、吡咯列酮、恩格列酮、MCC-555、BRL49653等等)；(l)β干扰素制剂(干扰素β-1a、干扰素β-1b)；(m)抗胆碱能药，例如毒蕈碱拮抗剂(异丙托和tiatropium)；(n)用于多发性硬化的当前治疗药物，包括氢化泼尼松、格拉太咪尔、脱氧腺苷、米托蒽醌、甲氨蝶呤和环磷酰胺；(o)p38激酶抑制剂；(p)其它化合物，例如5-氨基水杨酸及其前药，抗代谢物，例如咪唑硫嘌呤和6-巯基嘌呤，以及细胞毒素癌化疗剂。
式I化合物与第二种活性组分的重量比可以变化并且取决于各个组分的有效剂量。通常将使用各个组分的有效剂量。因此，例如当式I化合物与NSAID组合使用时，式I化合物与NSAID的重量比通常为约1000∶1-约1∶1000，优选约200∶1-约1∶200。式I化合物与其它活性组分的组合也通常在上述范围之内，然而在每种情况下应当使用各个活性组分的有效剂量。
以下方案和实施例中可以使用的缩写包括4-DMAP4-二甲氨基吡啶；AcCN乙腈；BOC叔丁氧基羰基；BOC-ON2-(叔丁氧基羰基氧基亚氨基)-2-苯基乙腈；BOP苯并三唑-1-基氧基-三(二甲氨基)六氟磷酸盐；盐水饱和氯化钠溶液；DIPEAN，N-二异丙基乙胺；DMF二甲基甲酰胺；DMSO二甲亚砜；Et乙基；EtOAc乙酸乙酯；EtOH；乙醇；g或gm克；h或hr小时；HATUO-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基(uronium)六氟磷酸盐；HBTUO-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基六氟磷酸盐；HOAc乙酸；HOAt1-羟基-7-氮杂苯并三唑；HOBt1-羟基-苯并三唑；HPLC高压液相色谱真空中；旋转蒸发；Me甲基；
MeOH甲醇；mg毫克；MHz兆赫；min分钟；mL毫升；mmol毫摩尔；MS或ms质谱；MsCl甲磺酰氯；Ph苯基；Ph3P三苯基膦；PyBOP(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷子基六氟磷酸盐；rt室温；TEA三乙胺；TFA三氟乙酸；THF四氢呋喃。
本发明化合物可通过以下方案中所述的方法制备。在方案1中，取代的吡啶基-4-羧酸衍生物A用亚硫酰氯处理以制造羧酰氯衍生物，其随后与4-氨基-(L)-苯基丙氨酸衍生物反应以得到酰胺B。用强酸(TFA或盐酸)除去B中的N-BOC保护基以得到游离胺C。
方案1
在方案2中，在碱(DIPEA或Na2CO3)的存在下适当取代的(L)脯氨酸酯D(R′＝H)用3-氰基苯磺酰氯L磺酰化以得到磺酰胺E，其中若含有酯保护基则用氢氧化物处理以得到游离酸。胺C和酸E在合适的偶联剂(例如PyBOP、HBTU/HOAt，或者E可首先转化为相应的酰氯)的存在下一起反应以得到酰胺F。或者，脯氨酸酯D(R′＝BOC)通过用例如氢氧化锂的碱处理水解得到相应的酸。酸然后如上所述与C偶联，除去BOC基后得到M。胺M然后在碱的存在下用L磺酰化以得到F。F中的酯可用氢氧化物(如果R1为正或异烷基)或TFA或HCl(如果R1为叔丁基)水解以得到相应的酸。
方案2
方案2(续) 生物学评价式I化合物为VLA-4的有效拮抗剂，对具有VLA-4的细胞具有显著和持久的受体占用。测试化合物从Jurkat细胞上的VLA-4离解速率可根据G.Doherty等人在Bioorganic & Medicinal ChemistryLetters，13，1891(2003)中所述的方法进行测定。在此测试中，本发明化合物具有超过3小时(t1/2＞3小时)的离解半衰期，表明其为VLA-4的强结合抑制剂。
大鼠和狗口服后的VLA-4受体占用可通过D.R.Leone等人在J.Pharmacol.Exper.Therap.，305，1150(2003)中所述的方法进行测定。口服后，本发明化合物显示出持续并显著的受体占用(＞50％)。
本发明化合物可通过以下实施例中详述的方法制备。实施例的提供仅仅用于说明本发明而不能理解为以任何方式对本发明范围的限制。
参考实施例14-((3′，5′-二氯异烟酰基)氨基)-(L)-苯基丙氨酸乙酯盐酸盐
步骤A在5分钟内，在氮气气氛下在0℃向500毫升无水乙醇中加入亚硫酰氯(21毫升，0.29摩尔)，并将透明溶液在0℃搅拌10分钟并在室温搅拌30分钟。一次加入4-硝基-L-苯基丙氨酸(50.2克，0.24摩尔)并将混合物回流过夜。所得混合物真空浓缩，得到白色固体状的4-硝基-L-苯基丙氨酸乙酯盐酸盐(60克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.21(d，2H)，7.54(d.2H)，4.39(dd，1H)，4.22(q，2H)，3.24-3.40(m，2H)，1.22(t，3H).
步骤B在氮气气氛下向步骤A化合物(60克，0.22摩尔)在二氯甲烷(1.5升)的悬浮液中加入TEA(31毫升)。在室温下搅拌10分钟后加入连二碳酸二叔丁基酯(49克，0.22摩尔)和4-DMAP(0.1克)，然后反应混合物在室温下搅拌过夜、用1N盐酸(2×200毫升)、水(2×200毫升)和盐水(1×250毫升)洗涤、通过无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩以得到N-BOC-4-硝基-L-苯基丙氨酸乙酯(78克)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.14(d，2H)，7.28(d，2H)，4.30-4.65(m，1H)，4.15(q，2H)，3.00-3.30(m.2H)，1.35(s，9H)，1.20(t，3H).
步骤C步骤B化合物(78.3克，0.22摩尔)在无水乙醇(300毫升)的溶液用氮气吹扫并加入10％碳载钯(1.0克)。在40-50psi氢化1小时后，反应混合物通过硅藻土过滤并且滤饼用乙醇洗涤，然后用乙酸乙酯洗涤。浓缩滤液，并将残余物通过快速柱色谱在用4∶1-1∶1的乙酸乙酯/己烷洗脱的硅胶上纯化，以得到N-BOC-4-氨基-L-苯基丙氨酸乙酯(60克)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.90(d，2H)，6.63(d，2H)，4.20-4.50(m，1H)，4.14(q，2H)，3.76-3.00(m，2H)，1.36(s，9H)，1.20(t，3H).
步骤D向吹氮处理的500毫升圆底烧瓶中加入3，5-二氯异烟酸(46.5克，0.24摩尔)、二氯甲烷(150毫升)、DMF(0.5毫升)和亚硫酰氯(20毫升，33.9克，0.28摩尔)。浆液回流5小时后另外加入亚硫酰氯(5毫升，0.70摩尔)和二氯甲烷(100毫升)，并将反应混合物另外回流45分钟并浓缩，残余物与甲苯共沸以得到粗酰基氯，其立即使用。将粗酰基氯溶于二氯甲烷(150毫升)并在0℃在5分钟内加入到二氯甲烷(400毫升)中的步骤C化合物(60克，0.20摩尔)和4-甲基吗啉(44毫升，0.40摩尔)中。在0℃搅拌1小时后反应用稀碳酸氢钠水溶液猝灭。分离有机层并将水层用二氯甲烷(500毫升)萃取。合并有机层、通过无水硫酸镁干燥并真空浓缩，并将残余物通过快速柱色谱在用4∶1-3∶2的乙酸乙酯/己烷洗脱的硅胶上纯化，以得到N-BOC-4-((3′，5′-二氯异烟酰基)氨基)-L-苯基丙氨酸乙酯(95克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.60(s，2H)，7.54(d，2H)，7.20(d，2H)，4.20-4.36(m，1H)，4.10(q，2H)，3.02-3.12(m，1H)，2.82-2.92(m，1H)，1.34/1.30(s，9H)，1.20(t，3H).
步骤E在室温下在2小时内，步骤D化合物(95克，0.197摩尔)在乙酸乙酯(1.2升)中的溶液用氯化氢气流处理。所得黄色悬浮液用己烷(250毫升)稀释、冷却至0℃并过滤。滤饼用己烷洗涤并真空干燥以黄色固体得到标题化合物(80克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，7.66(d，2H)，7.30(d，2H)，4.28(dd，1H)，4.25(q，2H)，3.20(q，2H)，1.26(t，3H).
参考实施例2N-BOC-顺式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯 步骤A反式-4-羟基-L-脯氨酸(72.8克，0.56摩尔)、2.5M氢氧化钠(480毫升，1.20摩尔，2.18eq)、THF(100毫升)和连二碳酸二叔丁基酯(128克，0.58摩尔，1.07eq)的混合物在室温下搅拌过夜。所得白色悬浮液冷却到0℃、用浓盐酸(105毫升，0.26摩尔，2.29eq)酸化并用二氯甲烷(1×1升，3×0.5升)和乙酸乙酯(2×1升)萃取。合并的有机萃取液用硫酸镁干燥、过滤并浓缩，以粘稠油状物得到N-Boc-反式-4-羟基-L-脯氨酸(146.3克)。合并粗产物(144.5克，理论量0.56摩尔)、甲基碘(100毫升，1.6摩尔，2.90eq)、碳酸钾(110克，0.8摩尔，1.42eq)和丙酮(2.5升)并将混合物回流4小时。反应冷却至室温并搅拌过夜。混合物过滤并将滤饼用丙酮洗涤。浓缩滤液，残余物溶于含有少量二氯甲烷的乙酸乙酯中并用盐水洗涤、通过硫酸镁干燥、过滤并浓缩得到白色浆液。浆液用己烷冲洗、冷却到0℃并过滤。干燥滤饼以白色固体得到121.7克N-Boc-反式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯。
步骤B将步骤A化合物(144.5克，0.59摩尔)、三苯基膦(200克，0.76摩尔，1.29eq)、对硝基苯甲酸(150克，0.9摩尔，1.52eq)和THF(2.5升)混合并冷却至0℃。在10分钟内加入重氮二甲酸二乙酯(120毫升，0.76摩尔，1.29eq)。反应放热至30℃并冷却至室温并搅拌过夜。将反应浓缩、残余物用醚(1升)稀释并将所得悬浮液过滤。滤液再次浓缩、重新溶于二氯甲烷并色谱纯化(硅胶，二氯甲烷至5％乙酸乙酯/二氯甲烷的线性梯度)。合并产品馏分并浓缩。浓缩液用醚冲洗然后用己烷冲洗以得到白色浆液，将其过滤并干燥，以白色固体得到218.7克标题化合物。
参考实施例3(4S)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-羟基脯氨酸甲酯 (4S)-4-羟基脯氨酸甲酯(52.0克，0.286摩尔)溶于500毫升二氯甲烷并冷却至0℃。加入三乙胺(83.6毫升，0.600摩尔)，然后缓慢加入3-氰基苯磺酰氯(55.0，0.273摩尔)。反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水，并将水层用二氯甲烷萃取3次。合并的有机层用1N盐酸、H2O、1N氢氧化钠和盐水洗涤、通过硫酸镁干燥并浓缩以得到粘稠残余物。加入乙酸乙酯(300毫升)以完全溶解残余物。缓慢加入约100毫升己烷直到溶液变得略微浑浊。然后混合物再次搅拌整夜以使产物沉淀。过滤克，固体并用30％乙酸乙酯/己烷漂洗2次，以灰白色粉末得到所需产品(66.2克，78％)。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ8.20-8.18(m，1H，8.15-8.12(m，1H，7.92-7.89(m，1H，7.72(t，1H)，4.51-4.47(m，1H，4.42(br s，1H)，3.74(s，3H，3.53-3.49(m，1H)，3.46-3.43(m，1H)，3.39(br s，1H)，2.29-2.25(m，1H)，2.21-2.02(m，1H).MS(ESI)，计算值C13H14N2O5S 310.3，实测值m/e311.2(MH+).
实施例1N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4(R)-环丁氨基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸 步骤A在-20℃在45分钟内，向N-BOC-顺式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯(60克，0.25摩尔)和DIPEA(100毫升，0.57摩尔)在二氯甲烷(800毫升)的溶液中加入三氟甲磺酸酐。在-20℃另外搅拌45分钟后，一次加入环丁胺(55克，0.78摩尔)，并将反应升温至室温并维持过夜。反应用1N氢氧化钠(250毫升)和饱和碳酸氢钠水溶液(250毫升)淬灭。分离有机层、用盐水洗涤、通过硫酸镁干燥、过滤并浓缩，并将残余物通过快速柱色谱通过用二氯甲烷至乙酸乙酯至5％甲醇/乙酸乙酯洗脱的硅胶纯化，得到N-BOC-4(R)-环丁氨基-L-脯氨酸甲酯(77克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ4.8(br s，1H)，4.24-4.32(m，1H)，3.67/3.68(s，3H)，3.56-3.64(m，1H)，3.1-3.38(m，3H)，2.12-2.21(m，2H)，2.00-2.12(m，2H)，1.54-1.82(m，4H)，1.36/1.43(s，9H).
步骤B向步骤A化合物(77克，0.25摩尔)在CH3CN(350毫升)和水(150毫升)的溶液中加入氢氧化锂一水合物(21克，0.50摩尔)，并将悬浮液在室温下搅拌过夜。将反应混合物用CH3CN稀释到总体积为1升、冷却到0℃并过滤，并以N-BOC-4(R)-环丁氨基-(L)-脯氨酸锂盐的溶液得到滤液。将部分上述滤液(484毫升，0.22M，0.11摩尔)浓缩，并向残余物中加入水(1升)、二氯甲烷(1升)、EDC(20.8克，0.11摩尔)、HOBt(14.6克，0.11摩尔)和4-((3′，5′-二氯异烟酰基)氨基)-(L)-苯基丙氨酸乙酯盐酸盐(39克，0.090摩尔)在水(1升)中的溶液。在室温下将该两相混合物剧烈搅拌4小时。分离有机层并将水层用二氯甲烷(0.5升)萃取。合并的有机层通过硫酸钠干燥、过滤并浓缩，并将残余物通过快速柱色谱在用乙酸乙酯至乙酸乙酯/甲醇/NH4OH(98∶1∶1)洗脱的硅胶上纯化得到N-[N-BOC-4(R)-环丁氨基-(L)-脯氨酰基]-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯(48克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，7.57(d，2H)，7.20-7.30(m，2H)，4.80(br s，1H)，4.58-4.70(m，1H)，4.08-4.30(m，3H)，3.56-3.64(m，1H)，2.90-3.30(m，5H)，3.00-3.08(m，1H)，1.5-2.2(m，8H)，1.22(br s，9H)，1.2(t，3H).
步骤C向步骤B化合物在乙醇(300毫升)的溶液中加入4M二氧六环中的盐酸(250ml)。室温下搅拌整夜后将黄色透明溶液浓缩，并将残余物用醚(1升)研制。所得悬浮液在室温下搅拌2小时，并通过过滤收集沉淀。用醚洗涤滤饼并干燥以得到N-[4(R)-环丁氨基-(L)-脯氨酰基]-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯盐酸盐(45.6克)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.86(d，1H)，8.62(s，2H)，7.58(d，2H)，7.26(d，2H)，4.80(br s，1H)，4.70(m，1H)，4.64(dd，1H)，4.15(q，2H)，3.80-3.95(m，3H)，3.5(dd，1H)，3.24(dd，1H)，3.00(dd，1H)，2.50-2.70(m，2H)，2.20-2.40(m，4H)，1.8-2.0(m，2H)，1.22(t，3H).
步骤D在0℃，向步骤C化合物(18克，30毫摩尔)、3-氰基苯磺酰氯(6.0克，30毫摩尔)、4-DMAP(50毫克)在THF(80毫升)和二氯甲烷(80毫升)的悬浮液中加入DIPEA(21毫升，0.12摩尔)。反应混合物在3小时内温热至室温，并将所得混合物浓缩。残余物溶于乙酸乙酯(400毫升)、用1N氢氧化钠和盐水洗涤并浓缩至干燥。残余物通过快速柱色谱在用甲醇中的2N氨水/乙酸乙酯(0-3％)洗脱的硅胶上纯化得到N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4(R)-环丁氨基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯(18克)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.19(m，1H)，8.00-8.04(m，2H)7.72(dd，1H)，7.63(d，2H)，7.32(d，2H)，4.70(dd，1H)，4.28(dd，1H)，4.20(q，2H)，3.60(dd，1H)，3.30(m，1H)，3.25(dd，1H)，3.10(m，1H)，3.06(dd，1H)，3.08(dd，1H)，2.07-2.14(m，2H)，1.98(m，1H)，1.75(m，1H)，1.60-1.66(m，4H)，1.27(t，3H).LC-MS计算值C33H34Cl2N6O6S 712，实测值m/e 713(M+H)+(2.8min).
向上述化合物(5.6克)在100毫升乙醇中的样品中加入甲磺酸(1.1eq)。加入醚直到溶液变得浑浊。在室温下搅拌6小时后通过过滤收集晶体以得到上述酯的甲磺酸盐。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.30(s，1H)，8.02(dd，1H)，7.82(d，1H)，7.64-7.71(m，3H)，7.36(d，2H)，4.63(dd，1H)，4.56(dd，1H)，4.18(m，2H)，3.88(m，1H)，3.76-3.83(m，2H)，3.44(dd，1H)，3.24(dd，1H)，3.04(dd，1H)，2.70(s，3H)，2.30-2.38(m，3H)，2.13-2.24(m，3H)1.90-1.96(m，2H)，1.26(t，3H).LC-MS计算值C33H34Cl2N6O6S 712，实测值m/e 713(M+H)+(2.9min).
步骤E向步骤D化合物(游离胺，23克，32毫摩尔)在80毫升AcCN和40毫升水的溶液中加入氢氧化锂一水合物(2.7克，65毫摩尔)。在室温下搅拌2小时后反应用甲酸水溶液(98％，2.4毫升，65毫摩尔)淬灭。反应用水(20毫升)稀释并在室温下搅拌整夜。通过过滤收集形成的结晶以得到标题化合物(18g)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.63(s，2H)，8.15(s，1H)，8.00(dd，1H)，7.88(dd，1H)，7.69(t，1H)，7.62(d，2H)，7.36(d，2H)，4.44-4.50(m，2H)，3.68-3.73(m，1H)，3.62-3.66(m，1H)，3.50-3.58(m，1H)，3.20-3.29(m，2H)，3.12(dd，1H)，2.20-2.32(m，3H)，1.92-2.00(m，3H)，1.76-1.84(m，2H).LC-MS计算值C31H30Cl2N6O6S 684，实测值m/e 685(M+H)+(2.6min).
向上述化合物(1.2克)在20毫升水和AcCN(3∶1)的样品中加入甲磺酸(1.1eq)。将混合物冻干，并将固体残余物在AcCN中结晶，以甲磺酸盐得到标题化合物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.54(br d，1H)，8.08(s，1H) 8.00(br d，1H)，7.76(br d，1H)，7.66(d，2H)，7.65(t，1H)，7.38(d，2H)，4.64(br d，1H)，4.56(m，1H)，3.90-3.73(m，3H)，3.44(dd，1H)，3.28(dd，1H)，3.00(dd，1H)，2.70(s，3H)，2.39-2.30(m，3H)，2.24-2.12(m，3H)，1.96-1.89(m，2H).LC-MS计算值C31H30Cl2N6O6S 684，实测值m/e685(M+H)+(2.6min).
实施例2N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-3(S)-叔丁氨基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸(R1＝H)、乙酯(R1＝CH2CH3)、新戊酰氧基甲酯(R1＝-CH2OC(O)C(CH3)3)和1-(乙氧羰基氧基)乙酯(R1＝-CH(CH3)OC(O)OCH2CH3) 步骤A在0℃向(3S)-羟基-(L)-脯氨酸(Acros，20克，0.15摩尔)和碳酸钠(26克，0.25摩尔)在500毫升水的溶液中加入粉末状3-氰基苯磺酰氯(25克，0.12摩尔)。在室温下搅拌整夜后，反应混合物用浓盐酸(pH＝3)酸化并将产物用乙酸乙酯萃取(3×100毫升)。将有机萃取物干燥(硫酸镁)、过滤并浓缩至干燥。然后将残余物溶于二氯甲烷(100毫升)和甲醇(100毫升)，然后在0℃加入三甲基甲硅烷基重氮甲烷(醚中2M)直到黄色是持久的。在室温搅拌15分钟后，将混合物浓缩至干燥以得到N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-(3S)-羟基-(L)-脯氨酸甲酯(31.5克)。
LC-MS计算值C13H14N2O5S 310，实测值m/e 311(M+H)+(2.3min).
步骤B在0℃向步骤A化合物(31.5克，0.10摩尔)在200毫升乙酸乙酯的溶液中加入TEA(20毫升，0.14摩尔)和MsCl(9.5毫升，0.12摩尔)。在0℃搅拌20分钟后，反应用100毫升碳酸氢钠水溶液淬灭。搅拌15分钟后，反应混合物在乙酸乙酯(300毫升)和碳酸氢钠水溶液(200毫升)之间分配。分离有机层、用盐水洗涤并浓缩至干燥，得到N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-(3S)-甲磺酰氧基-(L)-脯氨酸甲酯(40克)。
LC-MS计算值C14H16N2O7S2388，实测值m/e 389(M+H)+(2.7min).
步骤C向步骤B化合物(39.5克，0.10摩尔)在300毫升AcCN的溶液中加入TEA(35毫升，0.25摩尔)。在75℃加热4小时后将反应混合物冷却至室温并浓缩。残余物溶于乙酸乙酯(600毫升)并用1N氢氧化钠水溶液和盐水洗涤，并浓缩至干燥得到N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-2，3-二氢脯氨酸甲酯(28克)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.22(s，1H)，8.17(d，1H)，8.05(d，1H)，7.80(t，1H)，6.35(t，1H)，3.98(t，2H)，3.81(s，3H)，2.14(td，2H)，8.63(s，2H).LC-MS计算值C13H12N2O4S 292，实测值m/e 293(M+H)+(2.7min).
步骤D向步骤C化合物(26.4克，90毫摩尔)在225毫升环己烷和75毫升叔丁醇的悬浮液中加入叔丁胺(95毫升，0.90摩尔)。在50℃加热48小时后将反应混合物冷却至室温并浓缩。固体残余物与己烷一起研制并通过过滤收集，以外消旋混合物得到N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-3-叔丁氨基脯氨酸甲酯(29克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.24(br s，1H)，8.16(br d，1H)，8.03(brd，1H)，7.80(dd，1H)，3.99(d，1H)，3.75(s，3H)，3.45-3.55(m，2H)，3.33(m，1H)，2.17(m，1H)，1.62(m，1H)，0.97(s，9H).LC-MS计算值C17H23N3O4S 365，实测值m/e 366(M+H)+(1.9min).
上述外消旋体(46克，0.13摩尔)样品和(1R)-(10)樟脑磺酸(29克，0.13摩尔)溶于热AcCN(210毫升)。冷却至室温后通过过滤收集结晶，其在AcCN中重结晶以(1R)-(10)-樟脑磺酸盐得到12.4克一种纯对应体。通过将(1R)-(10)-樟脑磺酸盐与乙酸乙酯和2N氢氧化钠水溶液一起搅拌然后浓缩有机层，得到游离碱的纯(3S)对应体。LC-MS计算值C17H23N3O4S 365，实测值m/e 366(M+H)+(1.9min).
步骤E向步骤D中纯(3S)对应体(6.7克，18毫摩尔)在100毫升AcCN/水(2.5∶1)的溶液中加入氢氧化锂一水合物(2.0克，46摩尔)。在室温下搅拌2.5小时后，通过加入2N盐酸水溶液(23毫升，46毫摩尔)将反应淬灭，并将反应混合物冻干以得到粗锂盐，其无须进一步纯化就可使用。向粗锂盐在70毫升无水DMF的悬浮液中加入4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯盐酸盐(8.0克，19毫摩尔)、PyBOP(11克，22毫摩尔)和N-甲基吗啉(6.0毫升，55毫摩尔)。在室温下搅拌2.5小时后，反应混合物用乙酸乙酯(250毫升)稀释、用水(150毫升×2)和盐水洗涤、通过无水硫酸镁干燥、过滤并浓缩至干燥。残余物通过快速柱色谱在硅胶上纯化以得到标题化合物的乙酯(R1＝CH2CH3，7.5克)。通过在AcCN中重结晶得到乙酯的晶体。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.63(s，2H)，8.23(br s，1H)，8.10(br d，1H)，8.03(br d，1H)，7.77(t，1H)，7.62(d，2H)，7.32(d，2H)，4.78(m，1H)，4.22(q，2H)，3.81(d，1H)，3.44(m，2H)，3.30-3，22(m，2H)，3.12(dd，1H)，1.83(m，1H)，1.43(m，1H)，1.31(t，3H)，0.91(s，9H).LC-MS计算值C33H36Cl2N6O6S 714，实测值m/e 715(M+H)+(2.9min).
步骤F向步骤E的乙酯(2.0克，2.8毫摩尔)在12毫升AcCN和6毫升水的溶液中加入NaOH(1N，7毫升，7.0毫摩尔)，并将反应混合物在室温下搅拌20分钟。反应用2N盐酸淬灭到pH＝5，并用200毫升THF/乙酸乙酯(1∶3/v/v)稀释。混合物用水(50毫升)洗涤并浓缩以除去有机溶剂，并将残余物冻干以得到标题酸化合物(R1＝H，1.9克)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.20(br s，1H)，7.99(br d，2H)，7.72(t，1H)，7.59(d，2H)，7.38(d，2H)，4.55(m，1H)，4.21(br s，1H)，3.69-3.61(m，2H)，3.39(m，2H)，3.25(dd，1H)，3.08(dd，1H)，2.17(m， 1H)，1.72(m，1H)，1.18(s，9H).LC-MS计算值C31H32Cl2N6O6S 686，实测值m/e 687(M+H)+(2.7min).
新戊酰基甲酯(R1＝-CH2OC(O)C(CH3)3)通过用1当量NaOH处理并随后冻干，将步骤F的酸样品转化成钠盐。向由此得到的钠盐(0.10克，0.14毫摩尔)在0.5毫升DMSO的悬浮液中加入新戊酸氯乙酯(0.050毫升，0.35毫摩尔)，将反应混合物在室温下搅拌3小时、用TEA(0.1毫升)、AcCN(0.5毫升)和水(0.5毫升)稀释，并通过用水中40-90％AcCN(含有0.1％TEA)洗脱的反相HPLC纯化以得到含有一定杂质的标题化合物的新戊酰氧基甲酯。通过HPLC在用35％庚烷中异丙醇洗脱的chiralpak AD柱进一步纯化得到标题化合物的新戊酰氧基甲酯。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.62(s，2H)，8.22(br s，1H)，1，8.03(br d，1H)，8.00(br d，1H)，7.75(t，1H)，7.62(d，2H)，7.32(d，2H)，5.85(d，1H)，5.77(d，1H)，4.78(dd，1H)，3.80(d，1H)，3.50-3.40(m，2H)，3.30-3.22(m，2H)，3.10(dd，1H)，1.92(m，1H)，1.43(m，1H)，1.20(s，9H)，0.89(s，9H).LC-MS计算值C37H42Cl2N6O8S800，实测值m/e 801(M+H)+(3.1min).
1-(乙氧羰基氧基)乙酯(R1＝-CH(CH3)OC(O)OCH2CH3)通过上述对于新戊酰基甲酯所述相同的步骤，用碳酸1-氯乙基乙酯代替新戊酸氯甲酯制备了该酯。
LC-MS计算值C36H40Cl2N6O9S 802，实测值m/e 803(M+H)+(3.2min).
实施例3N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4(R)-氮杂环丁烷基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯 根据对实施例1步骤A-D所述的方法，在步骤A中用氮杂环丁烷代替环丁胺制备了标题化合物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.62(s，2H)，8.22(br s，1H)，8.03(br d，2H).7.75(t，1H)，7.62(d，2H)，7.32(d，2H)，4.73(dd，1H)，4.24(dd，1H)，4.18(q，2H)，3.42(dd，1H)，3.23(dd，1H)，3.08(d，1H)，3.06(dd，1H)，2.97(m，2H)，2.88(m，2H)，2.82(m，1H)，1.85-1.75(m，3H)，1.74-1.68(1H).LC-MS计算值C32H32Cl2N6O6S 698，实测值m/e 699(M+H)+(3.1min).
实施例4(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸三氟乙酸盐
步骤A参考实施例3的化合物(3.0克，9.67毫摩尔)溶于100毫升二氯甲烷。加入N，N-二异丙基乙胺(4.23毫升，24.22毫摩尔)并在氮气气氛下将反应混合物冷却至-78℃。在10分钟内向溶液中滴加三氟甲磺酸酐(2.28毫升，13.55毫摩尔)。将混合物在-78℃搅拌1小时并然后在30分钟内缓慢温热至-30℃。在5分钟内滴加哌啶(1.91毫升，19.31毫摩尔)，并将溶液缓慢温热至室温并搅拌整夜。向溶液中加入50毫升水。水层用二氯甲烷萃取3次。合并的有机层通过硫酸镁干燥并浓缩。残余物通过快速色谱纯化，以橙色油状物得到(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-脯氨酸甲酯(3.61克，99％)，将其溶于15毫升乙腈和5毫升水。加入氢氧化锂(1.00克，23.84毫摩尔)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。LCMS表明没有留下起始物料，因此反应混合物用23.84毫升1N盐酸(23.84毫摩尔)中和。溶液在丙酮-干冰浴中冷冻并冻干16小时，以得到粗(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-脯氨酸，其无须进一步纯化直接用于下一反应。
MS(ESI)计算值C17H21N3O4S 363.4，实测值m/e 364.2(MH+).
步骤B步骤A的化合物(9.56毫摩尔)悬浮在25毫升DMF中。加入(2S)-3-{4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]苯基}-1-乙氧基-1-氧代丙烷-2-铵(aminium)氯化物(3.99克，9.53毫摩尔)、HATU(3.99克，10.49毫摩尔)和N-甲基吗啉(2.62毫升，23.83毫摩尔)，并将反应混合物在室温下搅拌24小时。将悬浮液在强力搅拌下滴加到100毫升水中。立即滤出沉淀并用水洗涤3次。浅黄色粉末真空干燥并通过制备性反相HPLC纯化，以白色绒毛状固体得到(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸乙酯三氟乙酸盐(4.42克，55％)。
1H-NMR(MeOD，500MHz)δ8.63(s，2H)，8.49(d，1H)，8.15(s，1H)，8.04-8.01(m，1H)，7.91-7.87(m，1H)，7.71(t，1H)，7.64(d，2H)，7.34(d，2H)，4.63-4.57(m，2H)，4.18(q，2H)，3.96-3.93(m，2H)，3.49-3.44(m，3H)，3.25-3.20(m，1H)，3.06-2.97(m，3H)，2.40-2.37(m，1H)，2.20-2.16(m，1H)，1.98-1.93(m，2H)，1.80-1.78(m，1H)，1.70-1.66(m，2H)，1.54-1.50(m，1H)，1.25(t，3H).MS(ESI)计算值C34H36Cl2N6O6S 727.7，实测值m/e 727.2(M+).
步骤C步骤B的化合物(0.100克，0.14毫摩尔)溶于1.5毫升乙腈和0.5毫升水。加入氢氧化锂(0.014克，0.33毫摩尔)并将反应混合物在室温下搅拌1小时。LCMS表明没有留下起始物料，因此将反应混合物用三氟乙酸(0.03毫升，0.33毫摩尔)中和。溶液通过制备性反相HPLC纯化以绒毛状白色固体得到标题化合物(0.043克，45％)。
1H-NMR(MeOD，500MHz)δ8.63(s，2H)，8.45(d，1H)，8.13(s，1H)，8.01(d，1H)，7.82(d，1H)，7.69-7.61(m，3H)，7.36(d，2H)，4.65-4.57(m，2H)，3.98-3.88(m，3H)，3.50-3.44(m，3H)，3.31-3.25(m，1H)，3.04-2.98(m，2H)，2.47-2.41(m，1H)，2.23-2.15(m，1H)，2.12-1.44(m，7H).MS(ESI)计算值C32H32Cl2N6O6S699.6，实测值m/e 699.1(M+).
实施例4A(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯异烟酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸乙酯，及其盐酸盐和甲磺酸盐实施例4步骤B的淡黄色粗粉末通过用乙酸乙酯(1％NH4OH)洗脱，随后用乙酸乙酯(1％NH4OH)/甲醇＝99/1洗脱的正相硅胶色谱纯化，以白色固体得到化合物游离碱。
标题化合物游离碱(200毫克，0.28毫摩尔)溶于乙酸乙酯。滴加盐酸(二氧六环中4N，100微升)并在室温下搅拌30分钟。将得到的沉淀过滤、用二乙醚洗涤(3×)并在高真空干燥，以白色固体得到标题化合物盐酸盐。
标题化合物游离碱(5.7克，7.8毫摩尔)溶于乙醇(200毫升)。滴加甲磺酸(570微升)并加入二乙醚(200毫升)。反应混合物在室温下搅拌4小时。将得到的沉淀过滤、用二乙醚洗涤(3×)并在高真空干燥，以白色固体得到标题化合物甲磺酸盐。
使用实施例4中所述的方法制备了以下化合物的三氟乙酸盐
权利要求
1.式I化合物或其药学上可接受的盐， 其中A为N或N+-O-；X和Y独立地选自卤素、C1-3烷基和C1-3烷氧基；R1选自(1)氢，(2)C1-10烷基，(3)-(C1-10烷基)-芳基，(4)-(C1-10烷基)-O-C1-10烷基，(5)-(C1-10烷基)-OC(O)-C1-10烷基，(6)-(C1-10烷基)-OC(O)-芳基，(7)-(C1-10烷基)-OC(O)O-C1-10烷基和(8)-(C1-10烷基)N+(C1-3烷基)3；其中烷基任选被1-3个独立地选自Ra的取代基取代，并且芳基任选被1-3个独立地选自Rb的取代基取代；R2为氢或甲基；R3和R4独立地选自(1)氢，(2)-NRdRe，(3)-NRdS(O)mRe，(4)-NRdC(O)Re，(5)-NRdC(O)ORe，(6)-NRdC(O)NRdRe，条件是R3和R4不同时为氢；Ra选自(1)-ORd，(2)-NRdS(O)mRe，(3)-NO2，(4)卤素，(5)-S(O)mRd，(6)-SRd，(7)-S(O)2ORd，(8)-S(O)mNRdRe，(9)-NRdRe，(10)-O(CRfRg)nNRdRe，(11)-C(O)Rd，(12)-CO2Rd，(13)-CO2(CRfRg)nCONRdRe，(14)-OC(O)Rd，(15)-CN，(16)-C(O)NRdRe，(17)-NRdC(O)Re，(18)-OC(O)NRdRe，(19)-NRdC(O)ORe，(20)-NRdC(O)NRdRe，(21)-CRd(N-ORe)，(22)CF3，(23)-OCF3，(24)C3-8环烷基，和(25)杂环基；其中环烷基和杂环基任选被1-3个独立地选自Rc的基团取代；Rb选自(1)选自Ra的基团，(2)C1-10烷基，(3)C2-10烯基，(4)C2-10炔基，(5)芳基，(6)-(C1-10烷基)-芳基，其中烷基、烯基、炔基和芳基任选被1-3个选自独立地选自Rc的基团的取代基取代；Rc为(1)卤素，(2)氨基，(3)羧基，(4)C1-4烷基，(5)C1-4烷氧基，(6)芳基，(7)-(C1-4烷基)-芳基，(8)羟基，(9)CF3，(10)OC(O)C1-4烷基，(11)OC(O)NRfRg或(12)芳氧基；Rd和Re独立地选自氢、C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy，其中烷基、烯基、炔基和Cy任选被1-4个独立地选自Rc的取代基取代；或Rd和Re与其所连接的原子(们)一起形成含有0-2个独立地选自O、S和N-Rh的其它杂原子的4-7元杂环，并且其中所述杂环任选与C3-8碳环稠和或任选被1-4个独立地选自C1-10烷基的基团取代；Rf和Rg独立地选自氢、C1-10烷基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy；或Rf和Rg与其所连接的碳原子一起形成含有0-2个独立地选自氧、硫和氮的杂原子的5-7元环；Rh选自Rf和-C(O)Rf；Cy选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；并且m是1或2。
2.权利要求1的化合物，其中X和Y之一为卤素并且另一个选自卤素、C1-3烷基和C1-3烷氧基。
3.权利要求1的化合物，其中R1为氢、C1-4烷基、-(C1-4烷基)OC(O)-C1-4烷基或-(C1-4烷基)OC(O)-C1-4烷基。
4.权利要求1的化合物，其中R3为氢并且R4为NRdRe。
5.权利要求1的化合物，其中R3为NRdRe并且R4为氢。
6.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其具有式Ia， 其中A为N或N+O-；R1选自氢、C1-10烷基、-(C1-4烷基)-芳基、-(C1-4烷基)-O-C1-4烷基和-(C1-4烷基)-OC(O)-C1-4烷基；R3和R4中的一个为NRdRe并且另一个为氢。
7.权利要求6的化合物，其中Rd为氢并且Re为叔丁基或环丁基。
8.权利要求6的化合物，其中R3为氢，并且Rd和Re与其所连接的氮原子一起形成不含有其它杂原子并且任选被1或2个独立地选自C1-4烷基的基团取代的4-7元杂环。
9.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
10.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗或预防细胞粘连所介导的疾病的药物中的应用。
11.权利要求9的应用，其中所述疾病选自哮喘、多发性硬化、炎症性肠病、慢性阻塞性肺病、镰状细胞性贫血、白血病和类风湿性关节炎。
12.权利要求9的应用，其中所述疾病为马气喘病。
全文摘要
式I化合物为VLA－4拮抗剂，并因而可用于抑制或预防细胞粘连和细胞粘连介导的疾病。这些化合物可以配制成药物组合物并可适于治疗包括溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、多发性硬化、哮喘和类风湿性关节炎的炎症性肠病。
文档编号A61K31/44GK1930147SQ200580007438
公开日2007年3月14日 申请日期2005年3月7日 优先权日2004年3月10日
发明者W·K·哈格曼, 林寿忠, 刘平, R·A·穆姆福德, T·S·雷格尔, N·D·史密斯, N·S·斯托克, J·祖尼克 申请人:默克公司
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