新型二氯－苯基吡啶并[2,3－d]嘧啶类衍生物、它们的制备及作为药学试剂的用途的制作方法
专利名称：新型二氯－苯基吡啶并[2,3－d]嘧啶类衍生物、它们的制备及作为药学试剂的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及新型的双环吡啶并[2，3-d]嘧啶类，涉及它们的制备方法，含有它们的药剂及它们的制备，以及这些化合物作为药学活性试剂的用途。
某些取代的双环氮杂环类对于它们的蛋白激酶以及它们的酪氨酸激酶抑制活性在本领域是已知的。WO 02/090360公开了吡啶并[2，3-d]嘧啶类，其用作激酶酶抑制剂并且用于治疗过增生性疾病。
WO 03/000011公开了吡啶并[2，3-d]嘧啶的含磷衍生物，其用作蛋白激酶抑制剂并且通常用于治疗骨病、癌症和信号疾病。
WO 96/15128公开了6-芳基-吡啶并[2，3-d]嘧啶，其用作蛋白酪氨酸激酶的抑制剂并且用于治疗动脉粥样硬化、再狭窄、银屑病、细菌感染和癌症。
尽管在上述文献中记载了进展，但是，对于仅指定少数的、具有改善的治疗指数如改善的活性、耐受性、选择性或稳定性的新化合物保留有需要。
本发明的衍生物是下面通式的新化合物
(式I)，其中R1是-C(O)-NH-烷基或-C(O)-N(烷基)2，所述的烷基任选被以下基团取代-OH；-NH(烷基)；-N(烷基)2；-NH-C(O)-烷基；-C(O)-NH-烷基；-C(O)-N(烷基)2；-C(O)-NH2；-O-烷基；-杂环基；-NH-杂环基；-NH-S(O)2-烷基；-S(O)2-NH2；或-S(O)-烷基，所有的烷基任选被-OH取代；或以下基团-CN；-C(O)-NH2；-C(O)-NH-杂环基；-C(O)-NH-NH-C(O)-NH2；或-C(O)-NH-NH-C(O)-烷基，所述的烷基任选被以下基团取代
-NH(烷基)；或-N(烷基)2；并且R2是卤素；杂环基；烷基；-NH-C(O)-烷基；-NH-S(O)2-烷基；-(CH2)m-S(O)2-NH2；-(CH2)m-S(O)2-N(烷基)2；-(CH2)m-S(O)2-NH-(烷基)；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有的烷基任选被以下基团取代-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；X是-CH＝或-N＝；m是0、1、2、3、4、5或6；n是0、1或2；及其药用盐。
根据本发明的化合物显示出作为蛋白激酶抑制剂的活性，特别是src家族酪氨酸激酶抑制剂活性，因而可用于治疗由所述酪氨酸激酶介导的疾病。酪氨酸激酶家族通过磷酸化多肽和蛋白质的酪氨酸残基在细胞信号和细胞增殖调节中起重要作用。已知酪氨酸激酶的不当活化和多种病态有关，这些病态包括炎性的、免疫的、CNS紊乱，或者肿瘤病症，或者骨病。例如，参见Susva，M.等，Trends Pharmacol.Sci.，21(2000)489-495；Biscardi，J.S.等，Adv.Cancer Res.76(2000)61-119。
可以将本发明的化合物用作活性药剂，用于防止和治疗例如移植排斥、炎性肠综合征、类风湿性关节炎、银屑病、再狭窄、变应性哮喘、阿尔茨海默病、帕金森病、中风、骨质疏松症、癌症和良性增生。
令人惊奇地发现与本领域中已知的化合物相比，本发明的化合物显示出改善的代谢稳定和/或选择性，以及至少相同的抗src-酪氨酸激酶的活性。
本发明的目的在于式I的化合物及其药用盐以及它们的对映异构体形式、上述化合物的制备、含有它们的药剂及它们的制备以及上述化合物在控制或预防疾病，特别是如上所述的疾病和病症中的应用，或在制备相应药剂中的应用。
如本文所使用的，术语″烷基″是指含有1至6个，优选1至4个碳原子的饱和的、直链或支链烃基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、2-丁基、叔丁基、正戊基、正己基以及它们的异构体。“任选取代的”烷基是如上所定义的烷基，其是未被取代，或被一次取代的，或如果可能，被两次取代的。
如本文所使用的，术语“(C1-C4)烷基”指含有1至4个碳原子的饱和的、直链或支链烃基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、2-丁基、叔丁基。
如本文所用的术语“杂环基”是指5至10元的、单-或双环的、芳香或非芳香烃基，其中1至3个，优选1或2个碳原子被氮原子、氧原子或硫原子或-S(O)2-基团所代替。所述的杂环基任选被烷基，氧或-C(O)-NH2取代一次或数次。实例是2-氧代-咪唑烷-1-基；吡咯烷-2-基；吡咯烷-3-基；2-氧代-吡咯烷-1-基；1-甲基-吡咯烷-2-基；咪唑-4-基；吡唑-3-基；2-甲基-吡唑-3-基；1-甲基-吡唑-5-基；1，5-二甲基-吡唑-3-基；4-氨基甲酰基-吡唑-3-基；哌啶-3-基；哌啶-4-基；1-甲基-哌啶-4-基；吗啉-4-基；吡啶-2-基；1-氮杂-双环[2.2.2]辛-3-基或4，4-二氧代-2，3-二氢-苯并[1，4]氧硫杂环己二烯-6-基。
如本文所使用的，术语卤素是指氟、氯、溴和碘，优选氟、氯和溴，并且更优选氟和氯。
优选式I中的取代基R2位于对位或间位。
本发明一个优选的实施方案是式I的化合物，其中X是-CH＝；
R1是-C(O)-NH-烷基，所述的烷基任选被以下基团取代-OH；-NH(烷基)；-N(烷基)2；-NH-C(O)-烷基；-C(O)-NH-烷基；-C(O)-N(烷基)2；-C(O)-NH2；-O-烷基；-杂环基；-NH-杂环基；-NH-S(O)2-烷基；-S(O)2-NH2；或-S(O)-烷基，所有的烷基任选被-OH取代；并且R2具有上面给出的含义。
本发明的另一个实施方案是式I的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH-甲基；或-C(O)-NH-乙基，所述的甲基或乙基是未取代的或被以下基团取代一次的-OH；-吡咯烷基；或-NH-S(O)2-CH3；并且R2具有上面给出的含义。
本发明的再一个实施方案是式I的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH-乙基或-C(O)-NH-甲基，所述的乙基或甲基被以下基团取代一次
-OH；或-吡咯烷基；并且R2是吗啉-4-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有的烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；以及其药用盐。
这种化合物是例如6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-羟基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-羟基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸((R)-1-吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；或6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸((R)-1-吡咯烷-2-基甲基)-酰胺。
本发明的又一个实施方案是式I的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH-(CH2)2-NH-S(O)2-CH3；并且R2是吗啉-4-基；
4-甲基-哌嗪-1-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有的烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；以及其药用盐。
这样的化合物是例如6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-(3-甲磺酰基氨基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[3-(2-羟基-乙硫基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；或6-(2，6-二氯-苯基)-2-(3-甲硫基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺。
本发明的再另一个实施方案是式I的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH2；并且R2是吗啉-4-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有的烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；以及其药用盐。
这样的化合物是例如6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸酰胺；或6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸酰胺。
本发明的再另一个实施方案是式I的化合物，其中X是-CH＝；R1是-CN；并且R2是吗啉-4-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有的烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；
-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；以及其药用盐。
这样的化合物是例如6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈；6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈；或6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈。
本发明的再另一个实施方案是式I的化合物，其中X是-N＝；R1是-C(O)-NH-(CH2)2-NH-S(O)2-CH3；并且R2是烷基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有的烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；以及其药用盐。
这样的化合物是例如6-(2，6-二氯-苯基)-2-(6-甲基-吡啶-3-基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺。
本发明的再另一个实施方案是一种制备根据本发明的化合物的方法，其中(a)将通式(II)化合物中的硫醚基 式(II)，转变成为相应的亚砜基，该亚砜基被(b)相应的式(II-A)的苯胺取代 式(II-A)其中R2和X具有上面所给出的含义，得到通式(IV)的化合物 (IV)，(c)将式(IV)中的-COOH基转变成为式(I)的酰胺衍生物；并且
(d)如果需要，将从(c)得到的伯酰胺衍生物进一步转变为其相应的式(I)的7-腈衍生物；并且(e)如果需要，将从(c)或(d)得到的、所述通式(I)的化合物，转变成为药用盐。
在更详细的描述中，由通式(Ia)表示其中R1是通过酰胺基连接的式(I)的化合物。可以由式(II)的羧酸，使用对于本领域的技术人员已知的标准反应，来制备这样的化合物。通式(Ia)的化合物的合成示于方案1中，其中R3具有上面对于R1给出的含义，而没有-CN基团，因此R3是-C(O)-NH-烷基或-C(O)-N(烷基)2，所述的烷基任选被以下基团取代-OH；-NH(烷基)；-N(烷基)2；-NH-C(O)-烷基；-C(O)-NH-烷基；-C(O)-N(烷基)2；-C(O)-NH2；-O-烷基；-杂环基；-NH-杂环基；-NH-S(O)2-烷基；-S(O)2-NH2；或-S(O)-烷基，所有的烷基任选被-OH取代；或以下基团-C(O)-NH2；-C(O)-NH-杂环基；-C(O)-NH-NH-C(O)-NH2；或-C(O)-NH-NH-C(O)-烷基，所述的烷基任选被以下基团取代-NH(烷基)；或
-N(烷基)2；并且R2和X具有上面给出的含义。
可以由本领域的技术人员已知可以应用于制备化学相关化合物的任何方法，来制备通式(I)的衍生物或其药用盐。这些方法，当用于制备式(I)的二嗪衍生物或其药用盐时，是作为本发明的另外特征提供的，并且由下面方案1至方案4的代表性实例所举例说明，其中，除非另外指出，R1、R2和X具有上面所给出的含义。必须的原料是可商购的或可以通过有机化学的标准程序得到的。在后面的实施例中描述了这样的原料的制备。备选地，可以通过与在有机化学家的普通技术之内的程序相类似的程序得到必须的原料。
方案1
备选地，根据方案2，可以将羧酸(II)首先转变成羧酰胺(V)，随后由苯胺类在2位上取代，其中R3、R2和X具有上面给出的含义。
方案2 可以由常规方法，例如用SOCl2或POCl3脱水，将其中R3是-C(O)-NH2的式(Ia)或(V)的伯酰胺转变成通式(Ib)的腈。根据方案3，可以由已知的吡啶衍生物(VII)制备所述的式(Ib)的腈，其中R2和X具有上面所给出的含义，并且L是适宜的离去基团。
方案3 步骤1可以将式(B)的3-(2，6-二氯-苯基)-丙酮酸或通常的芳基丙酮酸与适宜的式(A)的嘧啶甲醛缩合，得到化合物(II)。可以在碱性条件下，例如用在水或甲醇(MeOH)中的氢氧化钠(NaOH)，或在二甲基甲酰胺(DMF)、1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)或四氢呋喃(THF)中的1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)或叔丁醇钾(KOtBu)，进行所述的缩合反应。备选地，在乙酸钠存在，在乙酸中进行缩合反应。反应温度范围为室温(RT)至150℃。
步骤2、6和10可以将式(II)、(V)或(IX)的吡啶并嘧啶类2位上的甲硫基或备选地，任何其它烷硫基或芳硫基通过氧化为相应的式(III)、(VI)或(X)的砜或亚砜而转变为适宜的离去基团。适宜的试剂是例如，在-40℃至+65℃范围的温度下、在惰性溶剂如二氯甲烷(CH2Cl2)、氯仿(CHCl3)或甲基叔丁基醚(MTBE)中的3-氯过氧苯甲酸(mCPBA)或2-苯磺酰基-3-苯基-氧杂氮丙啶(oxaziridine)。
步骤3、7和11来自步骤2、6或10的亚砜或砜可以以纯的形式或作为粗产物与苯胺类反应，得到式(IV)的2-苯胺基取代的吡啶并嘧啶类，(Ia，方案2)或(Ib)。可以在作为溶剂过量的苯胺或在惰性溶剂如CH2Cl2、甲苯、乙腈、DMF、二甲基亚砜(DMSO)或NMP中，并且在0℃至150℃范围内的温度下进行该反应。可以加入酸如三氟乙酸(TFA)或盐酸(HCl)以催化该反应。如果已经将mCPBA用于前面的氧化步骤，所生成的在粗反应混合物中存在的间氯苯甲酸可以起催化剂的作用。
步骤4和5可以通过本领域中已知的标准程序，将适宜的式(IV)或(II，方案2)的羧酸转变为式(Ia，方案1)或(V)的酰胺衍生物。例如，可以首先将该酸通过与碳二亚胺或碳酰二咪唑或草酰氯反应而活化，然后在没有分离的情况下与适宜的取代胺或氨反应。最好在惰性溶剂如THF、CH2Cl2或NMP中，在0℃至150℃的温度下进行此反应。
步骤8(VIII)中的适宜的离去基团“L”可以是三氟甲磺酸酯，其可以通过在碱如三乙胺(NEt3)、吡啶、叔丁醇钾(KOtBu)，二异丙基氨基化锂(LDA)、NaH，或K2CO3的存在下，由(VII)与在惰性溶剂如THF或CH2Cl2或NMP中的三氟甲磺酸酐(Tf2O)或N-苯基甲磺酰亚胺(PhN(Tf)2)反应来制备。另一种离去基团是氯或溴原子，其可以通过用POCl3或POBr3卤化吡啶酮来引入。
步骤9式(VIII)中的离去基团“L”可以被在RT至180℃的惰性溶剂如二甘醇二甲醚、DMF、NMP或环丁砜中的无机氰化物所取代，所述的无机氰化物如氰化钾、氰化钠(NaCN)或氰化铜(CuCN)，得到(IX)。优选地，该反应也可以由过渡金属催化剂如Pd-或Ni催化剂催化。在此情况下，可以采用氰化锌(Zn(CN)2)作为氰化物源。
R3或R2中的某些侧链在反应顺序的过程中可能需要保护。这里，可以采用本领域所周知的标准保护和脱保护程序。例如，可以以叔丁氧碳基(Boc)或苄氧碳基保护的形式使用伯胺和仲胺，并且可以作为最后的反应步骤通过用酸如HCl或三氟乙酸(TFA)处理而将保护基团除去。
通式I的化合物可以含有一个或几个手性中心，且随后可以以外消旋或旋光形式存在。可以按照公知的方法将外消旋物分离成对映体。例如，通过与旋光酸反应可以由外消旋混合物形成可以通过结晶分离的非对映体盐，所述的旋光酸如D-或L-酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或樟脑磺酸。另一方面，还可以通过使用在商购的手性HPLC-相上进行的色谱法分离对映体。
根据本发明的化合物可以以其药用盐形式存在。术语″药用盐″指的是保持式I化合物的生物有效性和特性且由适宜的非毒性有机酸或无机酸或有机碱或无机碱形成的常用酸加成盐或碱加成盐。酸加成盐包括例如来源于无机酸和那些来源于有机酸的那些盐，所述的无机酸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸；所述的有机酸如对-甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸等。碱加成的盐包括那些来源于铵、钾、钠的盐和季铵氢氧化物，如氢氧化四甲基铵的那些盐。将药物化合物化学修饰成盐是药物化学工作者众所周知的技术，目的是为使化合物获得改善的物理和化学稳定性、吸湿性、流动性和溶解性。其例如描述于Bastin，R.J.等，Organic Proc.Res.Dev.4(2000)427-435。
可以将根据本发明的化合物及其药用盐作为药剂使用，例如药物制剂形式。可以通过口服、例如以片剂、包衣片、锭剂、硬明胶胶囊和软明胶胶囊、溶液、乳剂或混悬剂形式给予所述药物制剂。然而，还可以通过直肠、例如以栓剂形式或通过非肠道、例如以注射液形式进行给药。
可以通过用药物上惰性的、无机或有机载体加工根据本发明的化合物而得到上述药物制剂。例如，可以将乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等用作片剂、包衣片、锭剂和硬明胶胶囊的载体。用于软明胶胶囊的适宜载体为例如植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇类等。然而，随活性物质特性的不同，就软明胶胶囊而言通常不需要载体。用于生产溶液和糖浆剂的适宜载体例如有水、多元醇类、甘油、植物油等。用于栓剂的适宜载体例如有天然或硬化油、蜡、脂肪、半固体或液体多元醇类等。
此外，药物制剂可以含有防腐剂、加溶剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、增甜剂、着色剂、调味剂、用于改变渗透压的盐、缓冲剂、掩蔽剂或抗氧化剂。它们还可以含有其它治疗上有价值的物质。
通过使用下列步骤得到药物制剂1.将4.0g玻璃珠称入定制的管GL 25，4cm(该珠填充半支管)。
2.加入50mg化合物、用刮刀(spatulum)分散并涡旋。
3.加入2ml明胶溶液(重量珠∶明胶溶液＝2∶1)并涡旋。
4.加盖并用铝箔包封以避光。
5.为研磨物制备平衡重。
6.在Retsch研磨机中以20/s研磨4小时(对某些物质以30/s研磨达24小时)。
7.通过以400g离心2分钟，在与接收小瓶连接的过滤储蓄器上用两层滤膜(100μm)从珠上提取混悬剂。
8.将提取物移入量筒。
9.用小体积反复洗涤(本文为1ml步骤)至达到终体积或提取物澄清。
10.用明胶填充至终体积并匀化。
上述描述的制备产生具有1至10μm颗粒大小的式I化合物的微混悬剂。该混悬剂适合于口服应用且用于下述体内药动学测试。
src-家族酪氨酸激酶的抑制根据本发明的化合物作为src-家族酪氨酸激酶的抑制剂的活性是通过使用下面的试验显示的。如本文所用的，Ro是指肽NH2-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH2；Ja133-Ro是指肽Ja133-G-氨基辛酸-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH2，其中Ja133是LightCycler-Red 640-N-羟基琥珀酰亚胺酯；PT66是指磷酸酪氨酸特定抗体，其可以检测蛋白酪氨酸激酶的磷酸化(phoyphorylated)酪氨酸；并且TCEP是指三(2-羧基乙基)膦Lck Cisbio Mab PT66-K是指抗-磷酸酪氨酸(PT66)-穴状化合物；并且Src EG&G Wallac PT66Eu-W1024是指Eu3+-标记的抗-磷酸酪氨酸(PT66)-穴状化合物。
SRC抑制剂试验参数反应混合物ATP5μM肽(Ro+Ja133-Ro)10μMJa133-Ro 196nMRo 9.8μMPT66 230ng/ml试验缓冲液4mM MgCl22mM TCEP50mM HEPES0.1％吐温20pH 7.3酶2.5U/ml抑制剂最大25μM最小0.42nM材料Eu-标记的磷酸酪氨酸抗体-用于Lck Cisbio Mab PT66-K，-用于Src EG&G Wallac PT66 Eu-W1024(均可商购)。
肽RoNH2-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH2，和Ja133-RoJa133-G-氨基辛酸-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH2，其中Ja133是LightCycler-Red640-N-羟基琥珀酰亚胺酯；这两种肽都是在Zinsser SMP350肽合成仪上用优化固相肽合成法合成的(Merrifield，Fed.Proc.Fed.Amer.Soc.Exp.Biol.21(1962)412)。简言之，通过重复共轭结合20倍过量的氨基酸，每种氨基酸都根据侧链功能用临时的哌啶不稳定的Fmoc-以及永久的酸不稳定叔丁基-、BOC-和叔丁氧基保护，在160mg(22.8μmol尺度)的Rink-Linker改性的聚苯乙烯固相上组装所述肽。将底物序列AEEEIYGEFEAKKKK的N-末端再安装上间隔氨基酸氨基辛酸和甘氨酸。在断开N-末端临时保护基后，用1.5倍量的LightCycler-Red 640-N-羟基琥珀酰亚胺酯(购自Roche Diagnostics GmbH)和三乙胺标记仍然附着和保护着的肽。3小时后，用二甲基甲酰胺和异丙醇冲洗树脂，直至蓝色树脂的洗脱物变无色。将全保护和标记的肽从固相中除去，并且通过用80％三氟乙酸、10％乙二硫醇、5％苯硫基甲烷(Thioanisol)和5％水的混合物进行处理，除去永久保护基。通过制备型反相HPLC纯化最后分离底物。纯化后得到12.2mg RP-HPLC单峰纯的蓝色材料(冻干物)。用MALDI质谱[2720.0]证实为同一物。
酶Upstate Lck(p56lck，活性)，Upstate Src(p60c-src，部分纯化)，均购自UBI。
时间分辨的荧光分析读数器Perkin Elmer，Wallac Viktor 1420-040多标记计数器；液体处理系统Beckman Coulter，Biomek 2000。
ATP、吐温20、HEPES购自Roche Molecular Biochemicals，MgCl2和MnCl2购自Merck Eurolab，TCEP购自Pierce，384孔小体积荧光板购自Falcon。
试验描述首先将酶和相应量的根据本发明的抑制剂在水溶液中于15℃预温育15分钟。然后，通过加入包含ATP、肽和PT66的反应混合物并进行振荡，开始磷酸化反应。立即在合适的孔板读数器中使用时间分辨的荧光光谱监测该反应的进程。
使用非线性曲线拟合(Excelfit软件(ID Business Solution Ltd.，Guilford，Surrey，UK))，可以从反应速度获得IC50值。
肿瘤抑制作用的体内试验为了产生原发瘤，用1ml注射器和26G针头将HT-29结肠癌细胞(2.5×106，体积为100μl)皮下注射到雌性Severe Combined Immunodeficient(SCID)小鼠的左肋中。HT-29细胞最初获自NCI，并保藏在运行的细胞库中。在实验前将细胞解冻并体外培养扩大。在第9天将小鼠分到治疗组。分组(每组12只小鼠)时，将小鼠随机分组，使每组的平均原发瘤体积约为120mm3。将测试化合物以在7.5％明胶、0.22％NaCl中的悬浮液形式每天口服给药一次，基于实际体重，给药体积为10ml/kg。治疗开始于第10天并一直进行到第30天，即研究的最后一天。在肿瘤细胞植入后第7天开始，每周测量两次皮下原发瘤，用电子测径器测量两个方向(长度和宽度)。原发瘤体积用公式V[mm3]＝(长度[mm]×宽度[mm]×宽度[mm])/2计算。另外，所有动物的体重每周至少记录两次。最后，在研究结束时，取出肿瘤并称重。
提供下面的实施例、参考文献以帮助理解本发明，其真正的范围列出在后附权利要求中。应当理解的是，在没有离开本发明的精神的情况下，可以在所列出的程序中进行修饰。
原料a)3-(2，6-二氯苯基)-2-氧代丙酸乙酯将12.4g镁粉通过在Ar气氛下干式搅拌1小时而活化。加入250ml无水乙醚。将25g 2，6-二氯苄基溴溶解于150ml乙醚中，并且将10ml的此溶液加入至搅拌的镁悬浮液中。加入少量的碘，并且混合物温和地温热10分钟，以开始反应。然后，将余量的2，6-二氯苄基溴溶液在室温(RT)于1小时加入，接着使混合物回流2小时。
将上述的格利雅溶液冷却至-30℃，并且迅速地加入至预冷却至-50℃的29,5g草酸二乙酯在150ml乙醚中的溶液。使该混合物达到RT，并且进行室温下的搅拌另外14小时。
将该混合物用HCl水溶液洗涤，干燥并且真空浓缩。通过过滤分离出第一批8,1g的晶体标题化合物。在70℃/20mbar下蒸发所有挥发物后，得到第二批8,7g。
b)3-(2，6-二氯苯基)-2-氧代丙酸将在70ml乙醇中的8,1g上述乙酯与50ml 1,6M NaOH在RT下一起搅拌4小时。将该混合物用二氯甲烷稀释，并且用HCl水溶液酸化至pH为1-2，然后用二氯甲烷萃取。用1M NaOH萃取合并的二氯甲烷相，再次酸化水相，并且再用二氯甲烷萃取一次。真空蒸发溶剂，得到5,0g的标题化合物。
c)6-(2，6-二氯-苯基)-2-甲硫基吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸将3,0g来自上面b)的产物溶解于20ml无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，并且冷却至-20℃。慢慢地加入2,55g叔丁醇钾。在-10℃，加入1,777g的4-氨基-2-甲硫基嘧啶-5-醛，并且将该混合物温热至70℃。用另外30mlDMF稀释得到的悬浮物，并且继续在70℃下的搅拌3小时。
将混合物冷却至RT，并且用300ml水稀释。通过用HCl酸化至pH1-2，粗产物沉淀，并且将其滤出，并进一步由色谱(二氧化硅，乙酸乙酯+5％乙酸)纯化。
得到1,35g的标题化合物。
d)6-(2，6-二氯-苯基)-2-甲硫基吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺将0,45g上面c)的产物溶解于10ml无水DMF中，加入0,215g碳酰二咪唑并且将混合物在RT搅拌1小时。滴加在4ml DMF中的0,228g 2-甲基磺酰基氨基-乙胺，并且将混合物搅拌另外2小时。将混合物用200ml水稀释。粗标题产物沉淀，并且通过过滤收集。用二氯甲烷萃取滤液，有机相干燥和蒸发，并且将剩余物与第一次沉淀的粗产物合并。经二氧化硅色谱得到375mg的标题化合物。
e)2-({[6-(2，6-二氯-苯基)-2-甲硫基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羰基]-氨基}-甲基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯类似于上面的d)，采用0,2g的原料c)、0,096g 1，1′-碳酰二咪唑(CDI)和0,153g(R)-2-氨基甲基-1-Boc-吡咯烷(购自Astatech)。
将在DMF中的反应混合物稀释于100ml水中，并且通过过滤分离沉淀的粗产物。用HCl酸化滤液，并且用二氯甲烷萃取。将来自上面的粗沉淀物溶解于二氯甲烷，并且用稀HCl洗涤，然后与另外的二氯甲烷萃取物合并。剩余物经在二氧化硅上的蒸发和色谱得到152mg的标题产物。
f)6-(2，6-二氯-苯基)-2-甲硫基-8H-吡啶[2，3-d]嘧啶-7-酮向5,0g 4-氨基-2-甲硫基嘧啶-5-甲醛在50ml四氢化萘中的混合物中，顺序地加入10,91g 2，6-二氯苯基乙酸、10,76g三乙胺和22,45g新戊酰氯。将混合物于190℃搅拌30分钟，然后加入另外的2,04ml新戊酰氯。30分钟后，加入另一份2,04ml新戊酰氯，并且将温度升高至195℃。在另外的30分钟和60分钟之后，加入另两份新戊酰氯，最后在195℃再继续搅拌1小时。
真空除去约40ml的溶剂，加入100ml乙醚，并且通过过滤分离沉淀的粗产物。用乙醚和水洗涤粗产物，得到4,16g的标题化合物。
g)三氟-甲磺酸6-(2，6-二氯-苯基)-2-甲硫基-吡啶[2，3-d]嘧啶-7-基酯将4,0g的原料f)悬浮于20ml无水N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)中，并且用0,562g的60％氢化钠处理。于40℃搅拌30分钟之后，将混合物冷却至RT，并且加入7,02g N-苯基三氟甲烷磺酰亚胺。RT下45分钟后，加入另外的2,01g N-苯基三氟甲烷磺酰亚胺，并且继续搅拌另外30分钟。
于60℃，真空除去溶剂，并且通过二氧化硅上的色谱纯化剩余物，得到5,38g的标题产物，其含有约25％N-苯基三氟甲烷磺酰胺。将2,4g的该材料通过溶解于二氯甲烷中并且用碳酸钠水溶液洗涤而进一步纯化，得到1,72g，其在下一步骤中使用。
h)6-(2，6-二氯-苯基)-2-甲硫基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈将来自上面的1,72g原料g)在17,5ml无水NMP中用0,423g四-(三苯膦基)钯(O)和0,859g氰化锌于90℃处理75分钟。真空蒸发溶剂，并且剩余物经二氧化硅色谱纯化，得到0,50g的标题化合物。
最终产物实施例16-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺将36mg的70％间氯过苯甲酸(mCPBA)溶解于4ml二氯甲烷中，并且通过在硫酸钠上过滤干燥该溶液。在RT下，将干燥的mCPBA溶液加入至75mg的原料e)在4ml二氯甲烷中的溶液，并且由TLC监测氧化反应。在1小时后，原料被消耗掉，并且通过加入几滴的二甲硫醚而淬灭过量的mCPBA。加入37mg 4-吗啉代苯胺，并且在RT下继续搅拌14小时。
用二氯甲烷稀释混合物，并且用10％乙酸水溶液洗涤。蒸发有机相，剩余物经色谱纯化得到67mg Boc保护的标题产物。
将上述物质溶解于2ml二氯甲烷中，并且与2ml 2M的HCl的乙醚溶液一起于RT搅拌3小时。通过过滤分离沉淀物，溶解于少量的甲醇中，并且用碳酸氢钾水溶液和二氯甲烷的混合物稀释。分离二氯甲烷相，干燥并且蒸发，得到41mg的标题产物。
1H-NMR(CDCl3)9.15(s，1H)；8.47(br s，1H)；7.95(s，1H)；7.69(br m，3H)；7.40(d，2H)；7.26(t，1H)；6.98(d，2H)；3.89(t，4H)；3.48(m，1H)；3.34(m，1H)；3.17(m，5H)；2.94(m，2H)；1.60-2.00(m，3H)；1.40(m，1H)；实施例26-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺类似于实施例1，将50mg的原料d)用在二氯甲烷中的29mg mCPBA于RT氧化。
加入22mg 4-(4-甲基哌嗪基)苯胺，并且将混合物于RT搅拌14小时。在用另外10ml二氯甲烷稀释后，用水洗涤混合物，将有机相干燥，蒸发，并且进一步由二氧化硅色谱(二氯甲烷19/甲醇1/氨水0,5)。得到44mg的标题产物。
1H-NMR(CD3OD)9.28(s，1H)；8.18(s，1H)；7.78(br d，2H)；7.48(d，2H)；7.36(t，1H)；7.03(d，2H)；4.60(br s，1H)；3.46(t，2H)；3.26(t)和3.22(t，共6H)；3.20(s，3H)；2.65(t，4H)；2.36(s，3H)。
实施例36-(2，6-二氯-苯基)-2-[3-(2-羟基-乙硫基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺类似于实施例1，将60mg的原料d)用mCPBA氧化。
加入27mg的3-(2-羟基乙硫基)苯胺，并且将反应混合物于RT搅拌15小时。用10ml二氯甲烷稀释，用10％的乙酸水溶液洗涤混合物，干燥且蒸发。首先由二氧化硅柱色谱(二氯甲烷/甲醇)，随后由制备型HPLC-MS，并且最后由制备型二氧化硅TLC(二氯甲烷/甲醇)纯化，得到12mg标题产物。
1H-NMR(CDCl3)9.21(s，1H)；8.91(br s，1H)；8.07(s，1H)；7.83(br s，1H)；7.77(s，1H)；7.43(d，2H)；7.31(t，1H)；7.25(m，1H)；7.05(d，1H)；6.85(br s和d，2H)；5.67(br，1H)；4.13(m，2H)；3.58(m，2H)；3.35(m，4H)；2.93(s，3H)。
实施例46-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈将在3，5ml二氯甲烷中的100mg的原料h)用301mg 2-苯磺酰基-3-苯基-氧杂氮丙啶于RT处理。5,5小时之后，通过加入70mg二甲硫醚而使过量的氧化试剂淬灭。加入在2,5ml NMP中的265mg 4-(2-羟基乙基)苯胺，并且于RT搅拌混合物18,5小时。
真空除去溶剂，并且剩余物经二氧化硅色谱纯化，得到220mg被过量苯胺试剂污染的粗产物。将粗产物溶解于乙酸乙酯中，并且用稀HCl水溶液洗涤。将有机相干燥、蒸发，并且最后用庚烷研磨剩余物，得到94mg的标题产物。
1H-NMR(CDCl3)9.19(s，1H)；8.08(s，1H)；7.80(br m，2H)；7.63(br s，1H)；7.52(d，2H)；7.42(t，1H)；7.00(d，2H)；4.12(m，2H)；3.99(m，2H)；实施例56-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸酰胺在Ar气氛下，将在1ml THF中的20mg来自实施例3中的产物与13,5mg三甲基硅醇钾混合。将混合物在微波反应器中加热至100℃20分钟。
将冷却的反应混合物用0,1ml水稀释，并且加入少量氧化铝色谱材料。将悬浮液在真空下蒸发至干燥，并且将剩余物充填到二氧化硅色谱柱中。用乙酸乙酯6/庚烷1洗脱，得到6mg的标题产物。
1H-NMR(DMSO-d6)10.24(br s，1H)；9.41(s，1H)；8.31(s，1H)；8.13(br s，1H)；7.92(m，2H)；7.56(m，3H)；7.42(t，1H)；6.99(d，2H)；4.87(t，1H)；4.00(t，2H)；3.73(m，2H)
实施例6类似于实施例1中所述的程序，但使用如上所述的相应原料，可以得到下面的化合物
实施例7类似于实施例4中所述的程序，但使用如上所述的相应原料，可以得到下面的化合物
实施例8类似于实施例5中所述的程序，但使用如上所述的相应原料，可以得到下面的化合物
参考文献目录Bastin，R.J.等，Organic Proc.Res.Dev.4(2000)427-435Biscardi，J.S.，等，Adv.Cancer Res.76(2000)61-119Merrifield，Fed.Proc.Fed.Amer.Soc.Exp.Biol.21(1962)412Susva，M.，等，Trends Pharmacol.Sci.，21(2000)489-495WO 02/090360WO 03/000011WO 96/15128
权利要求
1.式I的化合物 (式I)，其中R1是-C(O)-NH-烷基或-C(O)-N(烷基)2，所述的烷基任选被以下基团取代-OH；-NH(烷基)；-N(烷基)2；-NH-C(O)-烷基；-C(O)-NH-烷基；-C(O)-N(烷基)2；-C(O)-NH2；-O-烷基；-杂环基；-NH-杂环基；-NH-S(O)2-烷基；-S(O)2-NH2；或-S(O)-烷基，所有的烷基任选被-OH取代；或以下基团-CN；-C(O)-NH2；-C(O)-NH-杂环基；-C(O)-NH-NH-C(O)-NH2；或-C(O)-NH-NH-C(O)-烷基，所述的烷基任选被以下基团取代-NH(烷基)；或-N(烷基)2；并且R2是卤素；杂环基；烷基；-NH-C(O)-烷基；-NH-S(O)2-烷基；-(CH2)m-S(O)2-NH2；-(CH2)m-S(O)2-N(烷基)2；-(CH2)m-S(O)2-NH-(烷基)；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有的烷基任选被以下基团取代-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；X是-CH＝或-N＝；m是0、1、2、3、4、5或6；n是0、1或2；及其药用盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH-烷基，所述的烷基任选被以下基团取代-OH；-NH(烷基)；-N(烷基)2；-NH-C(O)-烷基；-C(O)-NH-烷基；-C(O)-N(烷基)2；-C(O)-NH2；-O-烷基；-杂环基；-NH-杂环基；-NH-S(O)2-烷基；-S(O)2-NH2；或-S(O)-烷基，所有的烷基任选被-OH取代，并且R2具有权利要求1中所给出的含义。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH-甲基；或-C(O)-NH-乙基，所述的甲基或乙基是未取代的或被以下基团取代一次的-OH；-吡咯烷基；或-NH-S(O)2-CH3；并且R2具有权利要求1中所给出的含义。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH-乙基或-C(O)-NH-甲基，所述的乙基或甲基被以下的基团取代一次-OH；或-吡咯烷基；并且R2是吗啉-4-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；和其药用盐。
5.根据权利要求4所述的化合物6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-羟基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-羟基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸((R)-1-吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；和6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸((R)-1-吡咯烷-2-基甲基)-酰胺。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH-(CH2)2-NH-S(O)2-CH3；并且R2是吗啉-4-基；4-甲基-哌嗪-1-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；和其药用盐。
7.根据权利要求6所述的化合物6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-(3-甲磺酰基氨基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[3-(2-羟基-乙硫基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；和6-(2，6-二氯-苯基)-2-(3-甲硫基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺。
8.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH2；并且R2是吗啉-4-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；和其药用盐。
9.根据权利要求8所述的化合物6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸酰胺；和6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸酰胺。
10.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-CH＝；R1是-CN；并且R2是吗啉-4-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；和其药用盐。
11.根据权利要求10所述的化合物6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈；6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈；和6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-N＝；R1是-C(O)-NH-(CH2)2-NH-S(O)2-CH3；并且R2是烷基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有烷基任选被以下基团取代-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；和其药用盐。
13.根据权利要求12所述的化合物6-(2，6-二氯-苯基)-2-(6-甲基-吡啶-3-基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺。
14.一种通过进行以下的反应步骤制备根据权利要求1的式(I)化合物的方法(a)将通式(II)的化合物中的羧基转变成 式(II)，相应的式(V)的酰胺 式(V)，其中R3是-C(O)-NH-烷基或-C(O)-N(烷基)2，所述的烷基任选被以下基团取代-OH；-NH(烷基)；-N(烷基)2；-NH-C(O)-烷基；-C(O)-NH-烷基；-C(O)-N(烷基)2；-C(O)-NH2；-O-烷基；-杂环基；-NH-杂环基；-NH-S(O)2-烷基；-S(O)2-NH2；或-S(O)-烷基，所有烷基任选被-OH取代；或以下基团C(O)-NH2；-C(O)-NH-杂环基；-C(O)-NH-NH-C(O)-NH2；或-C(O)-NH-NH-C(O)-烷基，所述的烷基任选被以下基团取代-NH(烷基)；或-N(烷基)2；(b)将通式(V)的化合物中的甲硫基转变成为相应的式(VI)的亚砜 式(VI)，其中R3具有如上所给出的含义；(c)由相应的式(II-A)的苯胺取代式(VI)的亚砜基 式(II-A)其中R2和X具有对于权利要求1中的式(I)所给出的含义，得到相应的式(Ia)的化合物 式(Ia)其中R3具有如上所给出的含义；并且R2和X具有对于权利要求1中的式(I)所给出的含义，(d)如果需要，进一步将从步骤(c)得到的式(Ia)的伯酰胺衍生物转变为其相应的根据权利要求1的式(I)的7-腈衍生物；并且(e)如果需要，将从步骤(c)或(d)得到的、所述的式(I)的化合物转变成药用盐。
15.一种药剂，其含有与药用辅剂一起的根据权利要求1至13中任何一项的一种或多种化合物作为活性成分。
16.根据权利要求15的药剂，其用于治疗由src家族酪氨酸激酶的不适宜激活介导的疾病。
17.根据权利要求15的药剂，其用于治疗癌症。
18.根据权利要求15的药剂，其用于治疗炎性疾病、免疫疾病、CNS疾病或骨病。
19.根据权利要求1至13中任何一项的一种或多种化合物在制备用于治疗由src家族酪氨酸激酶的不适宜激活介导的疾病的药剂中的应用。
20.根据权利要求1至13中任何一项的一种或多种化合物在制备用于治疗癌症的药剂中的应用。
21.根据权利要求1至13中任何一项的一种或多种化合物作为src家族酪氨酸激酶抑制剂的应用。
22.根据权利要求1至13中任何一项的一种或多种式I的化合物用于治疗癌症的应用。
全文摘要
本发明描述的是通式I的化合物、它们的制备方法、含有它们的药剂及它们的制备，以及这些化合物作为药学活性试剂的用途。所述的化合物显示出作为蛋白激酶抑制剂的活性，特别是src家族酪氨酸激酶抑制剂的活性，因此可以用于治疗由所述酪氨酸激酶介导的疾病。
文档编号A61K31/519GK1930163SQ200580007763
公开日2007年3月14日 申请日期2005年3月14日 优先权日2004年3月15日
发明者K·霍诺尔德, W·舍费尔, S·沙伊布利科 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司
技术领域：
本发明涉及新型的双环吡啶并[2，3-d]嘧啶类，涉及它们的制备方法，含有它们的药剂及它们的制备，以及这些化合物作为药学活性试剂的用途。
某些取代的双环氮杂环类对于它们的蛋白激酶以及它们的酪氨酸激酶抑制活性在本领域是已知的。WO 02/090360公开了吡啶并[2，3-d]嘧啶类，其用作激酶酶抑制剂并且用于治疗过增生性疾病。
WO 03/000011公开了吡啶并[2，3-d]嘧啶的含磷衍生物，其用作蛋白激酶抑制剂并且通常用于治疗骨病、癌症和信号疾病。
WO 96/15128公开了6-芳基-吡啶并[2，3-d]嘧啶，其用作蛋白酪氨酸激酶的抑制剂并且用于治疗动脉粥样硬化、再狭窄、银屑病、细菌感染和癌症。
尽管在上述文献中记载了进展，但是，对于仅指定少数的、具有改善的治疗指数如改善的活性、耐受性、选择性或稳定性的新化合物保留有需要。
本发明的衍生物是下面通式的新化合物
(式I)，其中R1是-C(O)-NH-烷基或-C(O)-N(烷基)2，所述的烷基任选被以下基团取代-OH；-NH(烷基)；-N(烷基)2；-NH-C(O)-烷基；-C(O)-NH-烷基；-C(O)-N(烷基)2；-C(O)-NH2；-O-烷基；-杂环基；-NH-杂环基；-NH-S(O)2-烷基；-S(O)2-NH2；或-S(O)-烷基，所有的烷基任选被-OH取代；或以下基团-CN；-C(O)-NH2；-C(O)-NH-杂环基；-C(O)-NH-NH-C(O)-NH2；或-C(O)-NH-NH-C(O)-烷基，所述的烷基任选被以下基团取代
-NH(烷基)；或-N(烷基)2；并且R2是卤素；杂环基；烷基；-NH-C(O)-烷基；-NH-S(O)2-烷基；-(CH2)m-S(O)2-NH2；-(CH2)m-S(O)2-N(烷基)2；-(CH2)m-S(O)2-NH-(烷基)；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有的烷基任选被以下基团取代-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；X是-CH＝或-N＝；m是0、1、2、3、4、5或6；n是0、1或2；及其药用盐。
根据本发明的化合物显示出作为蛋白激酶抑制剂的活性，特别是src家族酪氨酸激酶抑制剂活性，因而可用于治疗由所述酪氨酸激酶介导的疾病。酪氨酸激酶家族通过磷酸化多肽和蛋白质的酪氨酸残基在细胞信号和细胞增殖调节中起重要作用。已知酪氨酸激酶的不当活化和多种病态有关，这些病态包括炎性的、免疫的、CNS紊乱，或者肿瘤病症，或者骨病。例如，参见Susva，M.等，Trends Pharmacol.Sci.，21(2000)489-495；Biscardi，J.S.等，Adv.Cancer Res.76(2000)61-119。
可以将本发明的化合物用作活性药剂，用于防止和治疗例如移植排斥、炎性肠综合征、类风湿性关节炎、银屑病、再狭窄、变应性哮喘、阿尔茨海默病、帕金森病、中风、骨质疏松症、癌症和良性增生。
令人惊奇地发现与本领域中已知的化合物相比，本发明的化合物显示出改善的代谢稳定和/或选择性，以及至少相同的抗src-酪氨酸激酶的活性。
本发明的目的在于式I的化合物及其药用盐以及它们的对映异构体形式、上述化合物的制备、含有它们的药剂及它们的制备以及上述化合物在控制或预防疾病，特别是如上所述的疾病和病症中的应用，或在制备相应药剂中的应用。
如本文所使用的，术语″烷基″是指含有1至6个，优选1至4个碳原子的饱和的、直链或支链烃基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、2-丁基、叔丁基、正戊基、正己基以及它们的异构体。“任选取代的”烷基是如上所定义的烷基，其是未被取代，或被一次取代的，或如果可能，被两次取代的。
如本文所使用的，术语“(C1-C4)烷基”指含有1至4个碳原子的饱和的、直链或支链烃基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、2-丁基、叔丁基。
如本文所用的术语“杂环基”是指5至10元的、单-或双环的、芳香或非芳香烃基，其中1至3个，优选1或2个碳原子被氮原子、氧原子或硫原子或-S(O)2-基团所代替。所述的杂环基任选被烷基，氧或-C(O)-NH2取代一次或数次。实例是2-氧代-咪唑烷-1-基；吡咯烷-2-基；吡咯烷-3-基；2-氧代-吡咯烷-1-基；1-甲基-吡咯烷-2-基；咪唑-4-基；吡唑-3-基；2-甲基-吡唑-3-基；1-甲基-吡唑-5-基；1，5-二甲基-吡唑-3-基；4-氨基甲酰基-吡唑-3-基；哌啶-3-基；哌啶-4-基；1-甲基-哌啶-4-基；吗啉-4-基；吡啶-2-基；1-氮杂-双环[2.2.2]辛-3-基或4，4-二氧代-2，3-二氢-苯并[1，4]氧硫杂环己二烯-6-基。
如本文所使用的，术语卤素是指氟、氯、溴和碘，优选氟、氯和溴，并且更优选氟和氯。
优选式I中的取代基R2位于对位或间位。
本发明一个优选的实施方案是式I的化合物，其中X是-CH＝；
R1是-C(O)-NH-烷基，所述的烷基任选被以下基团取代-OH；-NH(烷基)；-N(烷基)2；-NH-C(O)-烷基；-C(O)-NH-烷基；-C(O)-N(烷基)2；-C(O)-NH2；-O-烷基；-杂环基；-NH-杂环基；-NH-S(O)2-烷基；-S(O)2-NH2；或-S(O)-烷基，所有的烷基任选被-OH取代；并且R2具有上面给出的含义。
本发明的另一个实施方案是式I的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH-甲基；或-C(O)-NH-乙基，所述的甲基或乙基是未取代的或被以下基团取代一次的-OH；-吡咯烷基；或-NH-S(O)2-CH3；并且R2具有上面给出的含义。
本发明的再一个实施方案是式I的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH-乙基或-C(O)-NH-甲基，所述的乙基或甲基被以下基团取代一次
-OH；或-吡咯烷基；并且R2是吗啉-4-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有的烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；以及其药用盐。
这种化合物是例如6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-羟基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-羟基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸((R)-1-吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；或6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸((R)-1-吡咯烷-2-基甲基)-酰胺。
本发明的又一个实施方案是式I的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH-(CH2)2-NH-S(O)2-CH3；并且R2是吗啉-4-基；
4-甲基-哌嗪-1-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有的烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；以及其药用盐。
这样的化合物是例如6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-(3-甲磺酰基氨基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[3-(2-羟基-乙硫基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；或6-(2，6-二氯-苯基)-2-(3-甲硫基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺。
本发明的再另一个实施方案是式I的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH2；并且R2是吗啉-4-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有的烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；以及其药用盐。
这样的化合物是例如6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸酰胺；或6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸酰胺。
本发明的再另一个实施方案是式I的化合物，其中X是-CH＝；R1是-CN；并且R2是吗啉-4-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有的烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；
-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；以及其药用盐。
这样的化合物是例如6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈；6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈；或6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈。
本发明的再另一个实施方案是式I的化合物，其中X是-N＝；R1是-C(O)-NH-(CH2)2-NH-S(O)2-CH3；并且R2是烷基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有的烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；以及其药用盐。
这样的化合物是例如6-(2，6-二氯-苯基)-2-(6-甲基-吡啶-3-基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺。
本发明的再另一个实施方案是一种制备根据本发明的化合物的方法，其中(a)将通式(II)化合物中的硫醚基 式(II)，转变成为相应的亚砜基，该亚砜基被(b)相应的式(II-A)的苯胺取代 式(II-A)其中R2和X具有上面所给出的含义，得到通式(IV)的化合物 (IV)，(c)将式(IV)中的-COOH基转变成为式(I)的酰胺衍生物；并且
(d)如果需要，将从(c)得到的伯酰胺衍生物进一步转变为其相应的式(I)的7-腈衍生物；并且(e)如果需要，将从(c)或(d)得到的、所述通式(I)的化合物，转变成为药用盐。
在更详细的描述中，由通式(Ia)表示其中R1是通过酰胺基连接的式(I)的化合物。可以由式(II)的羧酸，使用对于本领域的技术人员已知的标准反应，来制备这样的化合物。通式(Ia)的化合物的合成示于方案1中，其中R3具有上面对于R1给出的含义，而没有-CN基团，因此R3是-C(O)-NH-烷基或-C(O)-N(烷基)2，所述的烷基任选被以下基团取代-OH；-NH(烷基)；-N(烷基)2；-NH-C(O)-烷基；-C(O)-NH-烷基；-C(O)-N(烷基)2；-C(O)-NH2；-O-烷基；-杂环基；-NH-杂环基；-NH-S(O)2-烷基；-S(O)2-NH2；或-S(O)-烷基，所有的烷基任选被-OH取代；或以下基团-C(O)-NH2；-C(O)-NH-杂环基；-C(O)-NH-NH-C(O)-NH2；或-C(O)-NH-NH-C(O)-烷基，所述的烷基任选被以下基团取代-NH(烷基)；或
-N(烷基)2；并且R2和X具有上面给出的含义。
可以由本领域的技术人员已知可以应用于制备化学相关化合物的任何方法，来制备通式(I)的衍生物或其药用盐。这些方法，当用于制备式(I)的二嗪衍生物或其药用盐时，是作为本发明的另外特征提供的，并且由下面方案1至方案4的代表性实例所举例说明，其中，除非另外指出，R1、R2和X具有上面所给出的含义。必须的原料是可商购的或可以通过有机化学的标准程序得到的。在后面的实施例中描述了这样的原料的制备。备选地，可以通过与在有机化学家的普通技术之内的程序相类似的程序得到必须的原料。
方案1
备选地，根据方案2，可以将羧酸(II)首先转变成羧酰胺(V)，随后由苯胺类在2位上取代，其中R3、R2和X具有上面给出的含义。
方案2 可以由常规方法，例如用SOCl2或POCl3脱水，将其中R3是-C(O)-NH2的式(Ia)或(V)的伯酰胺转变成通式(Ib)的腈。根据方案3，可以由已知的吡啶衍生物(VII)制备所述的式(Ib)的腈，其中R2和X具有上面所给出的含义，并且L是适宜的离去基团。
方案3 步骤1可以将式(B)的3-(2，6-二氯-苯基)-丙酮酸或通常的芳基丙酮酸与适宜的式(A)的嘧啶甲醛缩合，得到化合物(II)。可以在碱性条件下，例如用在水或甲醇(MeOH)中的氢氧化钠(NaOH)，或在二甲基甲酰胺(DMF)、1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)或四氢呋喃(THF)中的1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)或叔丁醇钾(KOtBu)，进行所述的缩合反应。备选地，在乙酸钠存在，在乙酸中进行缩合反应。反应温度范围为室温(RT)至150℃。
步骤2、6和10可以将式(II)、(V)或(IX)的吡啶并嘧啶类2位上的甲硫基或备选地，任何其它烷硫基或芳硫基通过氧化为相应的式(III)、(VI)或(X)的砜或亚砜而转变为适宜的离去基团。适宜的试剂是例如，在-40℃至+65℃范围的温度下、在惰性溶剂如二氯甲烷(CH2Cl2)、氯仿(CHCl3)或甲基叔丁基醚(MTBE)中的3-氯过氧苯甲酸(mCPBA)或2-苯磺酰基-3-苯基-氧杂氮丙啶(oxaziridine)。
步骤3、7和11来自步骤2、6或10的亚砜或砜可以以纯的形式或作为粗产物与苯胺类反应，得到式(IV)的2-苯胺基取代的吡啶并嘧啶类，(Ia，方案2)或(Ib)。可以在作为溶剂过量的苯胺或在惰性溶剂如CH2Cl2、甲苯、乙腈、DMF、二甲基亚砜(DMSO)或NMP中，并且在0℃至150℃范围内的温度下进行该反应。可以加入酸如三氟乙酸(TFA)或盐酸(HCl)以催化该反应。如果已经将mCPBA用于前面的氧化步骤，所生成的在粗反应混合物中存在的间氯苯甲酸可以起催化剂的作用。
步骤4和5可以通过本领域中已知的标准程序，将适宜的式(IV)或(II，方案2)的羧酸转变为式(Ia，方案1)或(V)的酰胺衍生物。例如，可以首先将该酸通过与碳二亚胺或碳酰二咪唑或草酰氯反应而活化，然后在没有分离的情况下与适宜的取代胺或氨反应。最好在惰性溶剂如THF、CH2Cl2或NMP中，在0℃至150℃的温度下进行此反应。
步骤8(VIII)中的适宜的离去基团“L”可以是三氟甲磺酸酯，其可以通过在碱如三乙胺(NEt3)、吡啶、叔丁醇钾(KOtBu)，二异丙基氨基化锂(LDA)、NaH，或K2CO3的存在下，由(VII)与在惰性溶剂如THF或CH2Cl2或NMP中的三氟甲磺酸酐(Tf2O)或N-苯基甲磺酰亚胺(PhN(Tf)2)反应来制备。另一种离去基团是氯或溴原子，其可以通过用POCl3或POBr3卤化吡啶酮来引入。
步骤9式(VIII)中的离去基团“L”可以被在RT至180℃的惰性溶剂如二甘醇二甲醚、DMF、NMP或环丁砜中的无机氰化物所取代，所述的无机氰化物如氰化钾、氰化钠(NaCN)或氰化铜(CuCN)，得到(IX)。优选地，该反应也可以由过渡金属催化剂如Pd-或Ni催化剂催化。在此情况下，可以采用氰化锌(Zn(CN)2)作为氰化物源。
R3或R2中的某些侧链在反应顺序的过程中可能需要保护。这里，可以采用本领域所周知的标准保护和脱保护程序。例如，可以以叔丁氧碳基(Boc)或苄氧碳基保护的形式使用伯胺和仲胺，并且可以作为最后的反应步骤通过用酸如HCl或三氟乙酸(TFA)处理而将保护基团除去。
通式I的化合物可以含有一个或几个手性中心，且随后可以以外消旋或旋光形式存在。可以按照公知的方法将外消旋物分离成对映体。例如，通过与旋光酸反应可以由外消旋混合物形成可以通过结晶分离的非对映体盐，所述的旋光酸如D-或L-酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或樟脑磺酸。另一方面，还可以通过使用在商购的手性HPLC-相上进行的色谱法分离对映体。
根据本发明的化合物可以以其药用盐形式存在。术语″药用盐″指的是保持式I化合物的生物有效性和特性且由适宜的非毒性有机酸或无机酸或有机碱或无机碱形成的常用酸加成盐或碱加成盐。酸加成盐包括例如来源于无机酸和那些来源于有机酸的那些盐，所述的无机酸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸；所述的有机酸如对-甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸等。碱加成的盐包括那些来源于铵、钾、钠的盐和季铵氢氧化物，如氢氧化四甲基铵的那些盐。将药物化合物化学修饰成盐是药物化学工作者众所周知的技术，目的是为使化合物获得改善的物理和化学稳定性、吸湿性、流动性和溶解性。其例如描述于Bastin，R.J.等，Organic Proc.Res.Dev.4(2000)427-435。
可以将根据本发明的化合物及其药用盐作为药剂使用，例如药物制剂形式。可以通过口服、例如以片剂、包衣片、锭剂、硬明胶胶囊和软明胶胶囊、溶液、乳剂或混悬剂形式给予所述药物制剂。然而，还可以通过直肠、例如以栓剂形式或通过非肠道、例如以注射液形式进行给药。
可以通过用药物上惰性的、无机或有机载体加工根据本发明的化合物而得到上述药物制剂。例如，可以将乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等用作片剂、包衣片、锭剂和硬明胶胶囊的载体。用于软明胶胶囊的适宜载体为例如植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇类等。然而，随活性物质特性的不同，就软明胶胶囊而言通常不需要载体。用于生产溶液和糖浆剂的适宜载体例如有水、多元醇类、甘油、植物油等。用于栓剂的适宜载体例如有天然或硬化油、蜡、脂肪、半固体或液体多元醇类等。
此外，药物制剂可以含有防腐剂、加溶剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、增甜剂、着色剂、调味剂、用于改变渗透压的盐、缓冲剂、掩蔽剂或抗氧化剂。它们还可以含有其它治疗上有价值的物质。
通过使用下列步骤得到药物制剂1.将4.0g玻璃珠称入定制的管GL 25，4cm(该珠填充半支管)。
2.加入50mg化合物、用刮刀(spatulum)分散并涡旋。
3.加入2ml明胶溶液(重量珠∶明胶溶液＝2∶1)并涡旋。
4.加盖并用铝箔包封以避光。
5.为研磨物制备平衡重。
6.在Retsch研磨机中以20/s研磨4小时(对某些物质以30/s研磨达24小时)。
7.通过以400g离心2分钟，在与接收小瓶连接的过滤储蓄器上用两层滤膜(100μm)从珠上提取混悬剂。
8.将提取物移入量筒。
9.用小体积反复洗涤(本文为1ml步骤)至达到终体积或提取物澄清。
10.用明胶填充至终体积并匀化。
上述描述的制备产生具有1至10μm颗粒大小的式I化合物的微混悬剂。该混悬剂适合于口服应用且用于下述体内药动学测试。
src-家族酪氨酸激酶的抑制根据本发明的化合物作为src-家族酪氨酸激酶的抑制剂的活性是通过使用下面的试验显示的。如本文所用的，Ro是指肽NH2-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH2；Ja133-Ro是指肽Ja133-G-氨基辛酸-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH2，其中Ja133是LightCycler-Red 640-N-羟基琥珀酰亚胺酯；PT66是指磷酸酪氨酸特定抗体，其可以检测蛋白酪氨酸激酶的磷酸化(phoyphorylated)酪氨酸；并且TCEP是指三(2-羧基乙基)膦Lck Cisbio Mab PT66-K是指抗-磷酸酪氨酸(PT66)-穴状化合物；并且Src EG&G Wallac PT66Eu-W1024是指Eu3+-标记的抗-磷酸酪氨酸(PT66)-穴状化合物。
SRC抑制剂试验参数反应混合物ATP5μM肽(Ro+Ja133-Ro)10μMJa133-Ro 196nMRo 9.8μMPT66 230ng/ml试验缓冲液4mM MgCl22mM TCEP50mM HEPES0.1％吐温20pH 7.3酶2.5U/ml抑制剂最大25μM最小0.42nM材料Eu-标记的磷酸酪氨酸抗体-用于Lck Cisbio Mab PT66-K，-用于Src EG&G Wallac PT66 Eu-W1024(均可商购)。
肽RoNH2-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH2，和Ja133-RoJa133-G-氨基辛酸-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH2，其中Ja133是LightCycler-Red640-N-羟基琥珀酰亚胺酯；这两种肽都是在Zinsser SMP350肽合成仪上用优化固相肽合成法合成的(Merrifield，Fed.Proc.Fed.Amer.Soc.Exp.Biol.21(1962)412)。简言之，通过重复共轭结合20倍过量的氨基酸，每种氨基酸都根据侧链功能用临时的哌啶不稳定的Fmoc-以及永久的酸不稳定叔丁基-、BOC-和叔丁氧基保护，在160mg(22.8μmol尺度)的Rink-Linker改性的聚苯乙烯固相上组装所述肽。将底物序列AEEEIYGEFEAKKKK的N-末端再安装上间隔氨基酸氨基辛酸和甘氨酸。在断开N-末端临时保护基后，用1.5倍量的LightCycler-Red 640-N-羟基琥珀酰亚胺酯(购自Roche Diagnostics GmbH)和三乙胺标记仍然附着和保护着的肽。3小时后，用二甲基甲酰胺和异丙醇冲洗树脂，直至蓝色树脂的洗脱物变无色。将全保护和标记的肽从固相中除去，并且通过用80％三氟乙酸、10％乙二硫醇、5％苯硫基甲烷(Thioanisol)和5％水的混合物进行处理，除去永久保护基。通过制备型反相HPLC纯化最后分离底物。纯化后得到12.2mg RP-HPLC单峰纯的蓝色材料(冻干物)。用MALDI质谱[2720.0]证实为同一物。
酶Upstate Lck(p56lck，活性)，Upstate Src(p60c-src，部分纯化)，均购自UBI。
时间分辨的荧光分析读数器Perkin Elmer，Wallac Viktor 1420-040多标记计数器；液体处理系统Beckman Coulter，Biomek 2000。
ATP、吐温20、HEPES购自Roche Molecular Biochemicals，MgCl2和MnCl2购自Merck Eurolab，TCEP购自Pierce，384孔小体积荧光板购自Falcon。
试验描述首先将酶和相应量的根据本发明的抑制剂在水溶液中于15℃预温育15分钟。然后，通过加入包含ATP、肽和PT66的反应混合物并进行振荡，开始磷酸化反应。立即在合适的孔板读数器中使用时间分辨的荧光光谱监测该反应的进程。
使用非线性曲线拟合(Excelfit软件(ID Business Solution Ltd.，Guilford，Surrey，UK))，可以从反应速度获得IC50值。
肿瘤抑制作用的体内试验为了产生原发瘤，用1ml注射器和26G针头将HT-29结肠癌细胞(2.5×106，体积为100μl)皮下注射到雌性Severe Combined Immunodeficient(SCID)小鼠的左肋中。HT-29细胞最初获自NCI，并保藏在运行的细胞库中。在实验前将细胞解冻并体外培养扩大。在第9天将小鼠分到治疗组。分组(每组12只小鼠)时，将小鼠随机分组，使每组的平均原发瘤体积约为120mm3。将测试化合物以在7.5％明胶、0.22％NaCl中的悬浮液形式每天口服给药一次，基于实际体重，给药体积为10ml/kg。治疗开始于第10天并一直进行到第30天，即研究的最后一天。在肿瘤细胞植入后第7天开始，每周测量两次皮下原发瘤，用电子测径器测量两个方向(长度和宽度)。原发瘤体积用公式V[mm3]＝(长度[mm]×宽度[mm]×宽度[mm])/2计算。另外，所有动物的体重每周至少记录两次。最后，在研究结束时，取出肿瘤并称重。
提供下面的实施例、参考文献以帮助理解本发明，其真正的范围列出在后附权利要求中。应当理解的是，在没有离开本发明的精神的情况下，可以在所列出的程序中进行修饰。
原料a)3-(2，6-二氯苯基)-2-氧代丙酸乙酯将12.4g镁粉通过在Ar气氛下干式搅拌1小时而活化。加入250ml无水乙醚。将25g 2，6-二氯苄基溴溶解于150ml乙醚中，并且将10ml的此溶液加入至搅拌的镁悬浮液中。加入少量的碘，并且混合物温和地温热10分钟，以开始反应。然后，将余量的2，6-二氯苄基溴溶液在室温(RT)于1小时加入，接着使混合物回流2小时。
将上述的格利雅溶液冷却至-30℃，并且迅速地加入至预冷却至-50℃的29,5g草酸二乙酯在150ml乙醚中的溶液。使该混合物达到RT，并且进行室温下的搅拌另外14小时。
将该混合物用HCl水溶液洗涤，干燥并且真空浓缩。通过过滤分离出第一批8,1g的晶体标题化合物。在70℃/20mbar下蒸发所有挥发物后，得到第二批8,7g。
b)3-(2，6-二氯苯基)-2-氧代丙酸将在70ml乙醇中的8,1g上述乙酯与50ml 1,6M NaOH在RT下一起搅拌4小时。将该混合物用二氯甲烷稀释，并且用HCl水溶液酸化至pH为1-2，然后用二氯甲烷萃取。用1M NaOH萃取合并的二氯甲烷相，再次酸化水相，并且再用二氯甲烷萃取一次。真空蒸发溶剂，得到5,0g的标题化合物。
c)6-(2，6-二氯-苯基)-2-甲硫基吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸将3,0g来自上面b)的产物溶解于20ml无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，并且冷却至-20℃。慢慢地加入2,55g叔丁醇钾。在-10℃，加入1,777g的4-氨基-2-甲硫基嘧啶-5-醛，并且将该混合物温热至70℃。用另外30mlDMF稀释得到的悬浮物，并且继续在70℃下的搅拌3小时。
将混合物冷却至RT，并且用300ml水稀释。通过用HCl酸化至pH1-2，粗产物沉淀，并且将其滤出，并进一步由色谱(二氧化硅，乙酸乙酯+5％乙酸)纯化。
得到1,35g的标题化合物。
d)6-(2，6-二氯-苯基)-2-甲硫基吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺将0,45g上面c)的产物溶解于10ml无水DMF中，加入0,215g碳酰二咪唑并且将混合物在RT搅拌1小时。滴加在4ml DMF中的0,228g 2-甲基磺酰基氨基-乙胺，并且将混合物搅拌另外2小时。将混合物用200ml水稀释。粗标题产物沉淀，并且通过过滤收集。用二氯甲烷萃取滤液，有机相干燥和蒸发，并且将剩余物与第一次沉淀的粗产物合并。经二氧化硅色谱得到375mg的标题化合物。
e)2-({[6-(2，6-二氯-苯基)-2-甲硫基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羰基]-氨基}-甲基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯类似于上面的d)，采用0,2g的原料c)、0,096g 1，1′-碳酰二咪唑(CDI)和0,153g(R)-2-氨基甲基-1-Boc-吡咯烷(购自Astatech)。
将在DMF中的反应混合物稀释于100ml水中，并且通过过滤分离沉淀的粗产物。用HCl酸化滤液，并且用二氯甲烷萃取。将来自上面的粗沉淀物溶解于二氯甲烷，并且用稀HCl洗涤，然后与另外的二氯甲烷萃取物合并。剩余物经在二氧化硅上的蒸发和色谱得到152mg的标题产物。
f)6-(2，6-二氯-苯基)-2-甲硫基-8H-吡啶[2，3-d]嘧啶-7-酮向5,0g 4-氨基-2-甲硫基嘧啶-5-甲醛在50ml四氢化萘中的混合物中，顺序地加入10,91g 2，6-二氯苯基乙酸、10,76g三乙胺和22,45g新戊酰氯。将混合物于190℃搅拌30分钟，然后加入另外的2,04ml新戊酰氯。30分钟后，加入另一份2,04ml新戊酰氯，并且将温度升高至195℃。在另外的30分钟和60分钟之后，加入另两份新戊酰氯，最后在195℃再继续搅拌1小时。
真空除去约40ml的溶剂，加入100ml乙醚，并且通过过滤分离沉淀的粗产物。用乙醚和水洗涤粗产物，得到4,16g的标题化合物。
g)三氟-甲磺酸6-(2，6-二氯-苯基)-2-甲硫基-吡啶[2，3-d]嘧啶-7-基酯将4,0g的原料f)悬浮于20ml无水N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)中，并且用0,562g的60％氢化钠处理。于40℃搅拌30分钟之后，将混合物冷却至RT，并且加入7,02g N-苯基三氟甲烷磺酰亚胺。RT下45分钟后，加入另外的2,01g N-苯基三氟甲烷磺酰亚胺，并且继续搅拌另外30分钟。
于60℃，真空除去溶剂，并且通过二氧化硅上的色谱纯化剩余物，得到5,38g的标题产物，其含有约25％N-苯基三氟甲烷磺酰胺。将2,4g的该材料通过溶解于二氯甲烷中并且用碳酸钠水溶液洗涤而进一步纯化，得到1,72g，其在下一步骤中使用。
h)6-(2，6-二氯-苯基)-2-甲硫基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈将来自上面的1,72g原料g)在17,5ml无水NMP中用0,423g四-(三苯膦基)钯(O)和0,859g氰化锌于90℃处理75分钟。真空蒸发溶剂，并且剩余物经二氧化硅色谱纯化，得到0,50g的标题化合物。
最终产物实施例16-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺将36mg的70％间氯过苯甲酸(mCPBA)溶解于4ml二氯甲烷中，并且通过在硫酸钠上过滤干燥该溶液。在RT下，将干燥的mCPBA溶液加入至75mg的原料e)在4ml二氯甲烷中的溶液，并且由TLC监测氧化反应。在1小时后，原料被消耗掉，并且通过加入几滴的二甲硫醚而淬灭过量的mCPBA。加入37mg 4-吗啉代苯胺，并且在RT下继续搅拌14小时。
用二氯甲烷稀释混合物，并且用10％乙酸水溶液洗涤。蒸发有机相，剩余物经色谱纯化得到67mg Boc保护的标题产物。
将上述物质溶解于2ml二氯甲烷中，并且与2ml 2M的HCl的乙醚溶液一起于RT搅拌3小时。通过过滤分离沉淀物，溶解于少量的甲醇中，并且用碳酸氢钾水溶液和二氯甲烷的混合物稀释。分离二氯甲烷相，干燥并且蒸发，得到41mg的标题产物。
1H-NMR(CDCl3)9.15(s，1H)；8.47(br s，1H)；7.95(s，1H)；7.69(br m，3H)；7.40(d，2H)；7.26(t，1H)；6.98(d，2H)；3.89(t，4H)；3.48(m，1H)；3.34(m，1H)；3.17(m，5H)；2.94(m，2H)；1.60-2.00(m，3H)；1.40(m，1H)；实施例26-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺类似于实施例1，将50mg的原料d)用在二氯甲烷中的29mg mCPBA于RT氧化。
加入22mg 4-(4-甲基哌嗪基)苯胺，并且将混合物于RT搅拌14小时。在用另外10ml二氯甲烷稀释后，用水洗涤混合物，将有机相干燥，蒸发，并且进一步由二氧化硅色谱(二氯甲烷19/甲醇1/氨水0,5)。得到44mg的标题产物。
1H-NMR(CD3OD)9.28(s，1H)；8.18(s，1H)；7.78(br d，2H)；7.48(d，2H)；7.36(t，1H)；7.03(d，2H)；4.60(br s，1H)；3.46(t，2H)；3.26(t)和3.22(t，共6H)；3.20(s，3H)；2.65(t，4H)；2.36(s，3H)。
实施例36-(2，6-二氯-苯基)-2-[3-(2-羟基-乙硫基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺类似于实施例1，将60mg的原料d)用mCPBA氧化。
加入27mg的3-(2-羟基乙硫基)苯胺，并且将反应混合物于RT搅拌15小时。用10ml二氯甲烷稀释，用10％的乙酸水溶液洗涤混合物，干燥且蒸发。首先由二氧化硅柱色谱(二氯甲烷/甲醇)，随后由制备型HPLC-MS，并且最后由制备型二氧化硅TLC(二氯甲烷/甲醇)纯化，得到12mg标题产物。
1H-NMR(CDCl3)9.21(s，1H)；8.91(br s，1H)；8.07(s，1H)；7.83(br s，1H)；7.77(s，1H)；7.43(d，2H)；7.31(t，1H)；7.25(m，1H)；7.05(d，1H)；6.85(br s和d，2H)；5.67(br，1H)；4.13(m，2H)；3.58(m，2H)；3.35(m，4H)；2.93(s，3H)。
实施例46-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈将在3，5ml二氯甲烷中的100mg的原料h)用301mg 2-苯磺酰基-3-苯基-氧杂氮丙啶于RT处理。5,5小时之后，通过加入70mg二甲硫醚而使过量的氧化试剂淬灭。加入在2,5ml NMP中的265mg 4-(2-羟基乙基)苯胺，并且于RT搅拌混合物18,5小时。
真空除去溶剂，并且剩余物经二氧化硅色谱纯化，得到220mg被过量苯胺试剂污染的粗产物。将粗产物溶解于乙酸乙酯中，并且用稀HCl水溶液洗涤。将有机相干燥、蒸发，并且最后用庚烷研磨剩余物，得到94mg的标题产物。
1H-NMR(CDCl3)9.19(s，1H)；8.08(s，1H)；7.80(br m，2H)；7.63(br s，1H)；7.52(d，2H)；7.42(t，1H)；7.00(d，2H)；4.12(m，2H)；3.99(m，2H)；实施例56-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸酰胺在Ar气氛下，将在1ml THF中的20mg来自实施例3中的产物与13,5mg三甲基硅醇钾混合。将混合物在微波反应器中加热至100℃20分钟。
将冷却的反应混合物用0,1ml水稀释，并且加入少量氧化铝色谱材料。将悬浮液在真空下蒸发至干燥，并且将剩余物充填到二氧化硅色谱柱中。用乙酸乙酯6/庚烷1洗脱，得到6mg的标题产物。
1H-NMR(DMSO-d6)10.24(br s，1H)；9.41(s，1H)；8.31(s，1H)；8.13(br s，1H)；7.92(m，2H)；7.56(m，3H)；7.42(t，1H)；6.99(d，2H)；4.87(t，1H)；4.00(t，2H)；3.73(m，2H)
实施例6类似于实施例1中所述的程序，但使用如上所述的相应原料，可以得到下面的化合物
实施例7类似于实施例4中所述的程序，但使用如上所述的相应原料，可以得到下面的化合物
实施例8类似于实施例5中所述的程序，但使用如上所述的相应原料，可以得到下面的化合物
参考文献目录Bastin，R.J.等，Organic Proc.Res.Dev.4(2000)427-435Biscardi，J.S.，等，Adv.Cancer Res.76(2000)61-119Merrifield，Fed.Proc.Fed.Amer.Soc.Exp.Biol.21(1962)412Susva，M.，等，Trends Pharmacol.Sci.，21(2000)489-495WO 02/090360WO 03/000011WO 96/15128
权利要求
1.式I的化合物 (式I)，其中R1是-C(O)-NH-烷基或-C(O)-N(烷基)2，所述的烷基任选被以下基团取代-OH；-NH(烷基)；-N(烷基)2；-NH-C(O)-烷基；-C(O)-NH-烷基；-C(O)-N(烷基)2；-C(O)-NH2；-O-烷基；-杂环基；-NH-杂环基；-NH-S(O)2-烷基；-S(O)2-NH2；或-S(O)-烷基，所有的烷基任选被-OH取代；或以下基团-CN；-C(O)-NH2；-C(O)-NH-杂环基；-C(O)-NH-NH-C(O)-NH2；或-C(O)-NH-NH-C(O)-烷基，所述的烷基任选被以下基团取代-NH(烷基)；或-N(烷基)2；并且R2是卤素；杂环基；烷基；-NH-C(O)-烷基；-NH-S(O)2-烷基；-(CH2)m-S(O)2-NH2；-(CH2)m-S(O)2-N(烷基)2；-(CH2)m-S(O)2-NH-(烷基)；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有的烷基任选被以下基团取代-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；X是-CH＝或-N＝；m是0、1、2、3、4、5或6；n是0、1或2；及其药用盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH-烷基，所述的烷基任选被以下基团取代-OH；-NH(烷基)；-N(烷基)2；-NH-C(O)-烷基；-C(O)-NH-烷基；-C(O)-N(烷基)2；-C(O)-NH2；-O-烷基；-杂环基；-NH-杂环基；-NH-S(O)2-烷基；-S(O)2-NH2；或-S(O)-烷基，所有的烷基任选被-OH取代，并且R2具有权利要求1中所给出的含义。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH-甲基；或-C(O)-NH-乙基，所述的甲基或乙基是未取代的或被以下基团取代一次的-OH；-吡咯烷基；或-NH-S(O)2-CH3；并且R2具有权利要求1中所给出的含义。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH-乙基或-C(O)-NH-甲基，所述的乙基或甲基被以下的基团取代一次-OH；或-吡咯烷基；并且R2是吗啉-4-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；和其药用盐。
5.根据权利要求4所述的化合物6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-羟基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-羟基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸((R)-1-吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；和6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸((R)-1-吡咯烷-2-基甲基)-酰胺。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH-(CH2)2-NH-S(O)2-CH3；并且R2是吗啉-4-基；4-甲基-哌嗪-1-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；和其药用盐。
7.根据权利要求6所述的化合物6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-(3-甲磺酰基氨基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[3-(2-羟基-乙硫基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；和6-(2，6-二氯-苯基)-2-(3-甲硫基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺。
8.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-CH＝；R1是-C(O)-NH2；并且R2是吗啉-4-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；和其药用盐。
9.根据权利要求8所述的化合物6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸酰胺；和6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸酰胺。
10.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-CH＝；R1是-CN；并且R2是吗啉-4-基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有烷基任选被以下基团取代一次-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；和其药用盐。
11.根据权利要求10所述的化合物6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈；6-(2，6-二氯-苯基)-2-(4-吗啉-4-基-苯基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈；和6-(2，6-二氯-苯基)-2-[4-(2-羟基-乙氧基)-苯基氨基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-腈。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-N＝；R1是-C(O)-NH-(CH2)2-NH-S(O)2-CH3；并且R2是烷基；-NH-S(O)2-CH3；-O-烷基；或-S(O)n-烷基，所有烷基任选被以下基团取代-OH；-O-烷基；-NH-烷基；或-N(烷基)2；n是0、1或2；和其药用盐。
13.根据权利要求12所述的化合物6-(2，6-二氯-苯基)-2-(6-甲基-吡啶-3-基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺。
14.一种通过进行以下的反应步骤制备根据权利要求1的式(I)化合物的方法(a)将通式(II)的化合物中的羧基转变成 式(II)，相应的式(V)的酰胺 式(V)，其中R3是-C(O)-NH-烷基或-C(O)-N(烷基)2，所述的烷基任选被以下基团取代-OH；-NH(烷基)；-N(烷基)2；-NH-C(O)-烷基；-C(O)-NH-烷基；-C(O)-N(烷基)2；-C(O)-NH2；-O-烷基；-杂环基；-NH-杂环基；-NH-S(O)2-烷基；-S(O)2-NH2；或-S(O)-烷基，所有烷基任选被-OH取代；或以下基团C(O)-NH2；-C(O)-NH-杂环基；-C(O)-NH-NH-C(O)-NH2；或-C(O)-NH-NH-C(O)-烷基，所述的烷基任选被以下基团取代-NH(烷基)；或-N(烷基)2；(b)将通式(V)的化合物中的甲硫基转变成为相应的式(VI)的亚砜 式(VI)，其中R3具有如上所给出的含义；(c)由相应的式(II-A)的苯胺取代式(VI)的亚砜基 式(II-A)其中R2和X具有对于权利要求1中的式(I)所给出的含义，得到相应的式(Ia)的化合物 式(Ia)其中R3具有如上所给出的含义；并且R2和X具有对于权利要求1中的式(I)所给出的含义，(d)如果需要，进一步将从步骤(c)得到的式(Ia)的伯酰胺衍生物转变为其相应的根据权利要求1的式(I)的7-腈衍生物；并且(e)如果需要，将从步骤(c)或(d)得到的、所述的式(I)的化合物转变成药用盐。
15.一种药剂，其含有与药用辅剂一起的根据权利要求1至13中任何一项的一种或多种化合物作为活性成分。
16.根据权利要求15的药剂，其用于治疗由src家族酪氨酸激酶的不适宜激活介导的疾病。
17.根据权利要求15的药剂，其用于治疗癌症。
18.根据权利要求15的药剂，其用于治疗炎性疾病、免疫疾病、CNS疾病或骨病。
19.根据权利要求1至13中任何一项的一种或多种化合物在制备用于治疗由src家族酪氨酸激酶的不适宜激活介导的疾病的药剂中的应用。
20.根据权利要求1至13中任何一项的一种或多种化合物在制备用于治疗癌症的药剂中的应用。
21.根据权利要求1至13中任何一项的一种或多种化合物作为src家族酪氨酸激酶抑制剂的应用。
22.根据权利要求1至13中任何一项的一种或多种式I的化合物用于治疗癌症的应用。
全文摘要
本发明描述的是通式I的化合物、它们的制备方法、含有它们的药剂及它们的制备，以及这些化合物作为药学活性试剂的用途。所述的化合物显示出作为蛋白激酶抑制剂的活性，特别是src家族酪氨酸激酶抑制剂的活性，因此可以用于治疗由所述酪氨酸激酶介导的疾病。
文档编号A61K31/519GK1930163SQ200580007763
公开日2007年3月14日 申请日期2005年3月14日 优先权日2004年3月15日
发明者K·霍诺尔德, W·舍费尔, S·沙伊布利科 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司
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