作为cxc趋化因子受体拮抗剂的3,4－二－取代的哒嗪二酮的制作方法
专利名称：作为cxc趋化因子受体拮抗剂的3,4－二－取代的哒嗪二酮的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的取代的哒嗪二酮化合物，含有所述化合物的药物组合物，和所述的化合物在治疗CXC趋化因子介导的疾病。
背景技术：
趋化因子是趋化性细胞因子，其由多种细胞释放使巨噬细胞、T-细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞和内皮细胞吸引到炎症和肿瘤生长的位点。存在两类主要的趋化因子，CXC-趋化因子和CC-趋化因子。所述的种类依赖于前两个半胱氨酸是否被一个氨基酸分开(CXC-趋化因子)或者相邻(CC-趋化因子)。所述的CXC-趋化因子包括白介素-8(IL-8)，嗜中性粒细胞-活化蛋白质-1(NAP-1)，嗜中性粒细胞-活化蛋白质-2(NAP-2)，GROα，GROβ，GROγ，ENA-78，GCP-2，IP-10，MIG和PF4。CC趋化因子包括RANTES，MIP-1α，MIP-2β，单核细胞趋化性蛋白质-1(MCP-1)，MCP-2，MCP-3和eotaxin。已知所述的趋化因子家族的各成员结合至少一种趋化因子受体，并且CXC-趋化因子一般与受体的CXCR类的成员受体结合，并且CC-趋化因子与受体的CCR类结合。例如，IL-8与CXCR-1和CXCR-2受体结合。
由于CXC-趋化因子促进嗜中性粒细胞的蓄积和激活，这些趋化因子参与多种急性和慢性炎性疾病，包括牛皮癣和类风湿性关节炎。Baggiolini等，FEBS Lett.307，97(1992)；Miller等，Crit.Rev.Immunol.12，17(1992)；Oppenheim等，Annu.Fev.Immunol.9，617(1991)；Seitz等，J.Clin.Invest.87，463(1991)；Miller等，Am.Rev.Respir.Dis.146，427(1992)；Donnely等，Lancet 341，643(1993)。
ELRCXC趋化因子包括IL-8，GROα，GROβ，GROγ，NAP-2，和ENA-78(Strieter等1995 JBC 270 p.27348-57)也参与肿瘤血管发生(新血管生长)的诱导。所有这些趋化因子被确信是通过结合7种跨膜G-蛋白偶联受体CXCR2(也称作IL-8RB)产生其作用的，而IL-8也结合CXCR1(也称作IL-8RA)。由此，其血管发生活性归因于其结合并激活CXCR2，和可能CXCR1对于IL-8，表达在四周血管中血管内皮细胞(ECs)的表面上。
已经证实许多不同类型的肿瘤产生ELRCXC趋化因子并且其产生与更强侵害性的表型(Inoue等2000Clin Cancer Res 6 p.2104-2119)和不良预后(Yoneda等1998 J Nat Cancer Inst 90 p.447-454)有关。趋化因子是有效的趋化性因子并且已经证实ELRCXC趋化因子诱发EC趋化性。由此，这些趋化因子可能诱发内皮细胞向肿瘤内的生成位点的趋化性。这可能是肿瘤诱发血管发生的一个关键步骤。CXCR2的抑制剂或CXCR2和CXCR1的双重抑制剂应抑制ELRCXC趋化因子的血管发生活性并由此阻滞肿瘤的生长。已经证实这种抗肿瘤活性存在于IL-8(Arenberg等1996 J Clin Invest 97 p.2792-2802)，ENA-78(Arenberg等1998 J Clin Invest 102 p.465-72)和GROα(Haghnegahdar等J.Leukoc Biology 2000 67 p.53-62)的抗体。
另外证实许多肿瘤细胞表达CXCR2并由此当它们分泌ELRCXC趋化因子时肿瘤细胞也可以促进自身的生长。所以，伴随血管发生的减弱，CXCR2的抑制剂可以直接抑制肿瘤细胞的生长。
因此，所述的CXC-趋化因子受体代表了开发新的抗炎和抗肿瘤药物的有希望靶标。
仍然需要能够调制在CXC-趋化因子受体的活性的化合物。例如，与提高IL-8产生有关的条件(其导致嗜中性粒细胞和T-细胞子集进入炎症位点和肿瘤生长的趋化性)将受益于是IL-8受体结合的抑制剂的化合物。
发明概述本发明提供新的式(I)的化合物 (I)，
其药学可接受盐、溶剂化物、异构体或前药，其中R1和R15相同或不同且各自独立地选自a)H，b)芳基，c)杂芳基，d)烷基，e)芳基烷基，f)杂芳基烷基，g)环烷基，h)杂环烷基，i)环烷基烷基和j)杂环烷基烷基，其中所述的芳基，杂芳基，烷基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，杂环烷基，环烷基烷基，和杂环烷基烷基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)卤素，b)CF3，c)COR13d)OH，e)NR13R14f)NO2，g)氰基，h)SO2OR13，i)-Si(烷基)，j)-Si(芳基)k)CO2R13l)CONR13R14，m)SO2NR13R14，n)SO2R13，o)-OR13，p)-O(C＝O)R13，q)-O(C＝O)NR13R14，
r)-NR13COR14，和s)-NR13CO2R14；A选自
B选自 和
其中R2选自a)氢，b)OH，c)C(O)OH，d)SH，e)SO2NR13R14，f)NHC(O)R13，g)NHSO2NR13R14，h)NR13R14，i)NHSO2R13，j)C(O)NR13R14，k)C(O)NHOR13，l)C(O)NR13OH，m)OC(O)R13和n)选择性取代的杂环酸性官能团，条件是如果R2是SO2NR13R14，则R13和R14的至少一个必须是氢；R3和R4相同或不同且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)烷基，d)烷氧基，e)OH，f)CF3，g)OCF3，h)NO2，i)C(O)R13，j)C(O)OR13，k)C(O)NR13R14，l)SO(t)NR13R14，m)SO(t)R13，n)C(O)NR13OR14，
o) p)氰基，q)芳基和r)杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基选择性地被一个或多个R9基团取代；R5和R6相同或不同且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)烷基，d)烷氧基，e)CF3，f)OCF3，g)NO2，h)C(O)R13i)C(O)OR13，j)C(O)NR13R14，k)SO(t)NR13R14，l)C(O)NR13OR14，m)氰基，n)芳基和o)杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基选择性地被一个或多个R9基团取代；R7和R8相同或不同且各自独立地选自a)H，b)烷基，c)芳基，d)杂芳基，
e)芳基烷基，f)杂芳基烷基，g)环烷基，h)环烷基烷基，i)CO2R13，j)CONR13R14k)氟烷基，l)链炔基，m)链烯基，n)链炔基烷基，o)链烯基烷基和p)环烯基，其中所述的烷基，芳基，杂芳基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，环烷基烷基，氟烷基，链炔基，链烯基，链炔基烷基，链烯基烷基，和环烯基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)卤素，b)CF3，c)COR13d)OH，e)NR13R14，f)NO2，g)氰基，h)SO2OR13i)-Si(烷基)，j)-Si(芳基)，k)(R13)2R14Si，l)CO2R13，m)C(O)NR13R14，n)SO2NR13R14，o)SO2R13，p)-OR13q)-O(C＝O)R13，
r)-O(C＝O)NR13R14，s)-NR13C(O)R14和t)-NR13CO2R14；R9选自a)R13；b)卤素；c)-CF3；d)-COR13；e)-OR13；f)-NR13R14；g)-NO2；h)氰基；i)-SO2R13；j)-SO2NR13R14；k)-NR13COR14；l)-CONR13R14；m)-NR13CO2R14；n)CO2R13，和o) R10和R11相同或不同并且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)CF3，d)OCF3，e)NR13R14，f)NR13C(O)NR13R14，g)OH，
h)C(O)OR13，i)SH，j)SO(t)NR13R14k)SO2R13，l)NHC(O)R13，m)NHSO2NR13R14，n)NHSO2R13o)C(O)NR13R14，p)C(O)NR13OR14，q)OC(O)R13和r)氰基；R12选自a)氢，b)OC(O)R13，c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，f)环烷基，g)烷基，h)环烷基烷基和i)杂芳基烷基，其中所述的芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，烷基，环烷基烷基和杂芳基烷基选择性地被一个或多个R9基团取代；R13和R14相同或不同且各自独立地选自a)H，b)烷基，c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，f)杂芳基烷基，g)环烷基，h)环烷基烷基和
i)氟烷基，其中所述的烷基，芳基，杂芳基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，环烷基烷基和氟烷基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素；或R13和R14当与其所连的原子一起构成3-7员杂环环时，其中当生成的环为6或7员杂环环时，该环选择性地含有1-2个独立选自O、S或N的附加杂原子，并且其中该杂环环选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素；n是0-6；m是1-5；p是0-4和
t是1或2。
本发明的另一方面是含有与药学可接受载体或稀释剂组合或结合的式(I)的化合物的药物组合物。
本发明的另一方面是一种治疗需要其的患者(例如哺乳动物例如人类)中趋化因子介导的疾病的方法，包括给该患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。
本发明的另一方面是一种在需要其的患者中治疗趋化因子介导的疾病的方法，其中在该患者(例如，哺乳动物，例如人类)中所述的趋化因子结合CXCR2和/或CXCR1受体，该方法包括给该患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。
本发明的另一方面一种在需要其的患者中治疗趋化因子介导的疾病的方法，其中在该患者(例如，哺乳动物，例如人类)中所述的趋化因子结合CXC受体，该方法包括给该患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。
趋化因子介导的疾病的实例包括牛皮癣，特应性皮炎，哮喘，慢性阻塞性肺病，成人呼吸窘迫综合征，关节炎，炎性肠病，节段性回肠炎，溃疡性结肠炎，脓毒性休克，内毒性休克，革兰氏阴性脓毒病，中毒性休克综合征，休克，心脏和肾脏再灌注损伤，肾小球性肾炎或血栓形成，阿尔茨海默氏病，移植物抗宿主反应，同种移植物排斥和疟疾。血管发生性眼病(例如，眼部炎症(例如，眼色素层炎)，早熟的视网膜病，糖尿病性视网膜病，黄斑变性和湿润型优先且角膜型新血管化)是趋化因子介导的疾病的另一个实例。
本发明的另一方面是一种治疗需要这种治疗的患者中的癌症的方法，包括给该患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。
本发明的另一方面是一种治疗需要这种治疗的患者中的癌症的方法，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，并且施用治疗有效量的至少一种已知抗癌药和/或放射疗法。
本发明的另一方面是一种治疗需要这种治疗的患者中的癌症的方法，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，和施用治疗有效量的至少一种已知抗癌药和/或放射疗法，其中所述的抗癌药物选自烷化剂，抗代谢药物，天然产物及其衍生物，激素，抗激素，抗血管发生剂和甾类化合物(包括合成的类似物)，和合成物。
本发明的另一方面是一种在需要这种抑制作用的患者中抑制血管发生的方法，包括给该患者施用血管发生抑制量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。
本发明的另一方面是一种在需要这种抑制作用的患者中抑制血管发生的方法，包括给该患者施用血管发生抑制量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，并施用至少一种抗血管发生的化合物。
本发明的另一方面是一种在需要这种抑制作用的患者中抑制血管发生的方法，包括给该患者施用血管发生抑制量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，并施用至少一种已知的抗血管发生的化合物，其中抗血管发生的化合物是选自Marimastat，AG3340，Col-3，Neovastat，BMS-275291，酞胺哌啶酮，Squal胺，Endostatin，SU-5416，SU-6668，干扰素-α，抗VEGF抗体，EMD121974，CAI，白介素-12，IM862，血小板因子-4，Vitaxin，Angiostatin，苏拉明，TNP-470，PTK-787，ZD-6474，ZD-101，Bay 129566，CGS27023A，VEGF受体激酶抑制剂，docetaxel(例如，Taxotere)，和紫杉酚(例如，紫杉醇)。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗疾病的方法，该疾病选自齿龈炎、呼吸病毒、疱疹病毒、肝炎病毒、HIV、卡波济氏肉瘤有关病毒和动脉粥样硬化，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗血管生成型眼部疾病的方法，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗血管生成型眼部疾病的方法，包括给该患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，其中该血管生成型眼部疾病选自眼部炎症(例如，眼色素层炎)，早熟的视网膜病，糖尿病性视网膜病，黄斑变性和湿润型优先且角膜型新血管化。
本发明的另一方面是一种治疗需要这种治疗的患者中的癌症的方法，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，和其中被治疗的癌症选自黑素瘤，胃癌或非小细胞肺癌。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗癌症的方法，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，并且施用至少一种已知抗癌药和/或放射疗法，和其中被治疗的癌症选自黑素瘤，胃癌或非小细胞肺癌。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗癌症的方法，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，并且施用至少一种已知的抗癌药和/或放射疗法，其中被治疗的癌症选自黑素瘤，胃癌或非小细胞肺癌，和其中所述的抗癌药选自烷基烷化剂，抗代谢药物，天然产物及其衍生物，激素，抗激素，抗血管发生剂和甾类化合物(包括合成的类似物)，和合成物。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗癌症的方法，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，并且施用至少一种已知的抗癌药和/或放射疗法，其中被治疗的癌症选自黑素瘤，胃癌或非小细胞肺癌，和其中所述的抗癌药选自烷基烷化剂，抗代谢药物，天然产物及其衍生物，激素，抗激素，抗血管发生剂和甾类化合物(包括合成的类似物)，和合成物，和其中所述的抗血管发生药物选自Marimastat，AG3340，Col-3，Neovastat，BMS-275291，酞胺哌啶酮，Squal胺，Endostatin，SU-5416，SU-6668，干扰素-α，抗VEGF抗体，EMD121974，CAI，白介素-12，IM862，血小板因子-4，Vitaxin，Angiostatin，苏拉明，TNP-470，PTK-787，ZD-6474，ZD-101，Bay 129566，CGS27023A，VEGF受体激酶抑制剂，docetaxel(例如，Taxotere)，和紫杉酚(例如，紫杉醇)。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗癌症的方法，包括给该患者并行地或顺序地施用，治疗有效量的(a)式(I)的化合物和(b)微管作用剂或抗肿瘤药物或抗血管生成药物或VEGF受体激酶抑制剂或VEGF受体的抗体或干扰素，和/或c)辐射。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗癌症的方法，包括给该患者并行或顺序地施用有效量的(a)式(I)的化合物和(b)微管作用剂(例如，紫杉酚)。
详述除非另外说明，下列定义适用于整个说明书和权利要求书。这些定义无论在自己单独使用或与其他术语合用时均适用。所以″烷基″的定义适用于″烷基″以及″烷氧基″的″烷基″部分等。
当任何变量(例如，芳基，R2)以任意组成出现一次以上时，其定义在各种情况中在其定义上独立于各其他情况。另外，取代基和/或变量的组合只有在这种组合得到稳定的化合物下才被允许。
烷基代表具有指定碳原子数目的直链或支链饱和烃链。虽然碳原子的数目没有说明，一般为1-20个碳。
术语卤素或卤代是指氟、氯、溴和碘。
术语氟烷基代表具有指定碳原子数目的直链或支链饱和烃链，被一个或多个氟原子取代。虽然取碳原子的数目没有说明，一般为1-20个碳。
芳基代表具有6-14个碳原子和具有至少一种苯型环的碳环基团，并且该碳环的所有可利用可取代芳族碳原子是可能的连接位点。实例包括，但不限于，苯基，萘基，茚基，四氢萘基，二氢茚基，蒽基，芴基等。芳基可以被1、2和3个独立选自下列的取代基取代低级烷基，卤素，氰基，硝基，卤代烷基，羟基，烷氧基，羧基，羧基烷基，甲酰胺，巯基，氢硫基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，磺酰基，磺酰氨基，芳基和杂芳基。
芳烷基-代表含有经低级烷基连接的芳基的部分；烷基芳基-代表含有经芳基连接的低级烷基的部分；环烷基-代表含有3-8个碳原子、优选5和6个碳原子的饱和碳环，其可以被取代。
术语杂环或杂环环定义为3-7个原子且其中含有1-3选自N、O和S的杂原子的全部非芳族杂环环，例如氧杂环丙烷，氧杂环丁烷，四氢呋喃，四氢吡喃，吡咯烷，哌啶，哌嗪，四氢吡啶，四氢嘧啶，四氢噻吩，四氢噻喃，吗啉，乙内酰脲，戊内酰脲，吡咯烷酮等。
术语杂环酸性官能团用于包括基团例如，吡咯，咪唑，三唑，四唑等。此类基团可以未被取代或被1、2或3个独立选自下列的取代基取代低级烷基，卤素，氰基，硝基，卤代烷基，羟基，烷氧基，羧基，羧基烷基，甲酰胺，氢硫基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，磺酰基，磺酰氨基，芳基和杂芳基。
杂芳基是指由1-3个独立选自-O-，-S和-N＝的杂原子组成的5-或10-员单或苯并稠合的芳族环，条件是该环不具有相邻的氧和/或硫原子。所述的杂芳基可以被1、2和3个独立选自下列的取代基取代低级烷基，卤素，氰基，硝基，卤代烷基，羟基，烷氧基，羧基，羧基烷基，甲酰胺，氢硫基，氨基，烷基氨基和二烷基氨基。
N-氧化物可以在R取代基中存在的叔氮上形成，或在杂芳基环取代基中的在＝N-上形成并且含在式(I)的化合物中。
另外本发明包括式I的化合物的互变异构体、对映异构体和其他光学异构体，以及其药学可接受盐和溶剂化物。
在此使用的术语″前药″，代表在体内迅速转化为上式的母体化合物的化合物，例如，通过在血液中水解。全面的讨论参见T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems，Vol.14 of the A.C.S.Symposium Series，和Edward B.Roche编辑，Bioreversible Carriers inDrug Design，American Pharmaceutical Association和Pergamon Press，1987，两者在此引入作为参考。
在此使用的术语″组合物″包括含有指定量的指定组分的产品，以及直接或接近得自指定量的指定组分的组合的任何产品。
在此使用的″一个或多个″的实例包括(a)1，2或3，(b)1或2，和(c)1。
在此使用的″至少一种″的实例包括(a)1，2或3，(b)1或2，和(c)1。
下列术语在此可以参考下列缩写四氢呋喃(THF)，乙醇(EtOH)，甲醇(MeOH)，乙酸(HOAc或AcOH)，乙酸乙酯(EtOAc)，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，三氟乙酸(TFA)，三氟乙酸酐(TFAA)，1-羟基苯并三唑(HOBT)，间氯过苯甲酸(MCPBA)，三乙胺(Et3N)，乙醚(Et2O)，氯甲酸乙酯(OLCO2Et)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(DEC)，N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)，氢氧化钠(NaOH)，硫酸镁(MgSO4)，二氯甲烷(CH2Cl2)，氢氧化铵(NH4OH)，硫酸钠(Na2SO4)，薄层层析(TLC)。
在一组优选的式(I)的化合物中，A选自
其中，R7和R8相同或不同且各自独立地选自a)H，b)烷基，c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，
f)杂芳基烷基，g)环烷基，h)环烷基烷基，i)CO2R13，j)CONR13R14，k)氟烷基，l)链炔基，m)链烯基，n)链炔基烷基，o)链烯基烷基和p)环烯基，其中所述的烷基，芳基，杂芳基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，环烷基烷基，氟烷基，链炔基，链烯基，链炔基烷基，链烯基烷基和环烯基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)氰基；b)CO2R13；c)C(O)NR13R14；d)SO2NR13R14，e)NO2；f)CF3；g)-OR13；h)-NR13R14；i)-O(C＝O)R13；j)-O(C＝O)NR13R14，和k)卤素；R9选自a)R13b)卤素，c)-CF3，d)-COR13，e)-OR13，f)-NR13R14，
g)-NO2，h)氰基，i)-SO2R13，j)-SO2NR13R14，k)-NR13COR14，l)-CONR13R14，m)-NR13CO2R14，n)CO2R13和 B选自 和
其中，R2选自a)氢，b)OH，c)C(O)OH，d)SH，e)SO2NR13R14，f)NHC(O)R13，g)NHSO2NR13R14，h)NR13R14，i)NHSO2R13，j)C(O)NR13R14，k)C(O)NHOR13，l)C(O)NR13OH，m)OC(O)R13和n)选择性取代的杂环酸性官能团，条件是如果R2是SO2NR13R14，R13和R14的至少一个必须氢；R3和R4相同或不同且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)烷基，d)烷氧基，e)OH，f)CF3，g)OCF3，h)NO2，i)C(O)R13，j)C(O)OR13，k)C(O)NR13R14，l)SO(t)NR13R14，m)SO(t)R13，n)C(O)NR13OR14，
o) p)氰基，q)芳基和r)杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基选择性地被一个或多个R9基团取代；R5和R6相同或不同且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)烷基，d)烷氧基，e)CF3，f)OCF3，g)NO2，h)C(O)R13，i)C(O)OR13，j)C(O)NR13R14，k)SO(t)NR13R14，l)C(O)NR13OR14，m)氰基，n)芳基和o)杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基选择性地被一个或多个R9基团取代；R10和R11相同或不同且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)CF3，d)OCF3，e)NR13R14，
f)NR13C(O)NR13R14，g)OH，h)C(O)OR13i)SH，j)SO(t)R13R14，k)SO2R13，l)NHC(O)R13，m)NHSO2NR13R14，n)NHSO2R13，o)C(O)NR13R14，p)C(O)NR13OR14，q)OC(O)R13和r)氰基；R12选自a)氢，b)OC(O)R13c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，f)环烷基，g)烷基，h)环烷基烷基和i)杂芳基烷基，其中所述的芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，烷基，环烷基烷基或杂芳基烷基选择性地被一个或多个R9基团取代；R13和R14相同或不同且各自独立地选自a)H；b)烷基，c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，f)杂芳基烷基，
g)环烷基，h)环烷基烷基和i)氟烷基，其中所述的烷基，芳基，杂芳基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，环烷基烷基和氟烷基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素或R13和R14当与其所连的原子一起构成3-7员杂环环时，其中当形成的环是6或7员杂环环，所述的环选择性地含有1-2个独立选自O、S或N的附加杂原子和其中所述的杂环环可以被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素；n是0-6；
m是1-5；p是0-4和t是1或2。
优选地，R1和R15相同或不同并且各自选自H，甲基，芳基和环己基。
更优选，A选自
其中，R7和R8相同或不同且各自独立地选自H，烷基，氟烷基例如CF3和CF2CH3，环烷基和环烷基烷基，例如，甲基，乙基，叔丁基，异丙基，环丙基，环丙基甲基和环己基和R9选自H，卤素(例如溴，氟或氯)，CH3，CF3，氟烷基，氰基，-OCH3和NO2。
更优选，B选自 其中R2选自H，OH，NHC(O)R13和NHSO2R13；R3选自SO2NR13R14，NO2，氰基，C(O)NR13R14，SO2R13；和C(O)OR13；R4选自H，NO2，卤素，氰基，CH3和CF3；R5选自H，CF3，NO2，卤素和氰基；R6选自H，烷基和CF3；R10和R11相同或不同并且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)CF3，d)OCF3，e)NR13R14，f)NR13C(O)NR13R14，
g)OH，h)C(O)OR13i)SH，j)SO(t)NR13R14，k)SO2R13，l)NHC(O)R13，m)NHSO2NR13R14，n)NHSO2R13，o)C(O)NR13R14，p)C(O)NR13OR14，q)OC(O)R13r)COR13s)OR13和t)氰基；R12选自氢和C(O)OR13；R13和R14相同或不同且各自独立地选自甲基，乙基和异丙基；或R13和R14当与其所连的原子一起构成3-7员杂环环时，其中当形成的环是6或7员杂环环时，所述的环选择性地含有1-2个独立选自O、S或N的附加杂原子和其中所述的杂环环可以被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素。
特别优选，A选自
其中，R7选自H，CF3，氟烷基，烷基和环烷基；R3选自H，烷基和氟烷基；R9选自H，F，Cl，Br，CF3，烷基和氟烷基。
仍然更优选，A选自
其中，R7选自H，CF3，CF2CH3，甲基，乙基，异丙基，环丙基和叔丁基；R8是HR9选自H，F，Cl，Br，CF3，烷基和氟烷基；和B是 其中R2选自H，OH，NHC(O)R13和NHSO2R13；R3选自SO2NR13R14，NO2，氰基，C(O)NR13R14，SO2R13；和C(O)OR13；R4选自H，NO2，卤素，氰基，CH3和CF3；R5选自H，CF3，NO2，卤素和氰基；R6选自H，烷基和CF3；和R13和R14相同或不同且各自独立地选自甲基，乙基和异丙基；或R13和R14当与其所连的原子一起构成3-7员杂环环时，其中当形成的环是6或7员杂环环时，所述的环选择性地含有1-2个独立选自O、S或N的附加杂原子，并且其中所述的杂环环可以被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，
c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素。
仍然更优选，A选自 和B是 其中R2选自H，OH，NHC(O)R13和NHSO2R13；R3选自SO2NR13R14，C(O)NR13R14，SO2R13，NO2或氰基；R4选自H，NO2，CF3，CH3，卤素和氰基，R5选自H，卤素，NO2，氰基和CF3；R6选自H，CF3和烷基；R7选自H，CF3，CF2CH3，甲基，乙基，异丙基，环丙基和叔丁基；
R8是H；R9选自H，F，Cl，Br，CF3，烷基和氟烷基；和R13和R14各自独立地选自甲基和乙基。
首选，A选自 和B是 其中，
R2是-OH；R3是CONR13R14；R4选自H，CH3，卤素和CF3；R5选自H和氰基；R6选自H，CH3和CF3；和R13和R14分别是甲基。
本发明的代表化合物如下所列
本发明的优选化合物如下所列
本发明的更优选化合物如下所列
对于具有至少一个不对称碳原子的本发明化合物，所有异构体，包括非对映异构体、对映异构体和旋光异构体，被考虑是本发明的组成部分。本发明包括纯净形式和混和形式(包括消旋混合物)的d和l异构体。异构体可以利用常规技术制备，或者通过分离式(I)的化合物的异构体获得。
式(I)的化合物可以存在非溶剂化和溶剂化形式，包括水合形式。通常，与药学可接受溶剂例如水、乙醇等的溶剂化形式等同于本发明目的的非溶剂化形式。
式(I)的化合物可以与有机和无机酸或碱形成药学可接受盐。适合形成盐的碱的实例包括但不限于氢氧化钠，氢氧化锂，氢氧化钾和氢氧化钙。酚类的盐可以通过加热酸化合物与上述碱按照所属领域技术人员熟知的方法来制成。适合成盐的酸的实例是盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、甲磺酸和其他所属领域技术人员已知的无机酸和羧酸。所述的盐通过将游离碱与足够量的所需酸以常规方式接触来制成盐。通过用适当稀释碱水溶液处理盐可以生成游离碱形式，例如稀释的氢氧化钠，氢氧化锂，氢氧化钾，氢氧化钙，碳酸钾，碳酸氢铵或钠的水溶液。中性形式在某些物理性质上多少不同于其各自的盐形式，例如在极性溶剂中的溶解度，但盐也等同于其各自符合本发明目的的中性形式。
为了从本发明的化合物制备药物组合物，惰性、药学可接受载体可以是固体或者液体。固体形式制剂包括散剂、片剂、可分散颗粒剂、胶囊、扁囊和栓剂。散剂和片剂可以含有约5-约95％活性成分。适当的固体载体是所属领域已知的，例如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、蔗糖或乳糖。片剂、散剂、扁囊和胶囊可以用作适合口服给药的固体剂型。药学可接受载体的实例和不同组合物的制备方法可以参见A.Gennaro(ed.)，Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania。
液体制剂包括溶液、混悬液和乳液。作为实例可以提及用于非肠道注射的水或水-丙二醇溶液或添加了甜味剂和遮光剂的口服溶液、混悬液和乳液。液体制剂还可以包括鼻内给药的溶液。
适合吸入的气雾剂制剂可以包括溶液或粉末形式的固体，其可以与药学可接受载体组合，例如惰性压缩气体，例如，氮。
另外包括可在使用之前立刻转化为液体制剂用于口服或非肠道给药的固体制剂。此类液体剂型包括溶液、混悬液和乳液。
本发明的化合物还可以经皮给药。透皮组合物可以采取霜剂、洗剂、气雾剂和/或乳液的形式并且可以含在所属领域常用于此目的的基质或储库型的透皮贴剂中。
本发明的化合物还可以在手术后直接用于肿瘤部位，例如，在海绵制品。
优选化合物经口服给药。
优选地，该药学制剂是单位剂型。以这种形式，制剂再分为适当规模的含有适量活性成分的单位剂型，例如，获得所需目的的有效量。
活性化合物在制剂的单位剂型中的量可以在约0.01mg-约1000mg，优选约0.01mg-约750mg，更优选约0.01mg-约500mg，和首选约0.01mg-约250mg之间按照特定用途来改变和调整。
所用的准确剂量可以根据患者的需要和被治疗病症的严重性来变化。在具体情况中确定适当剂量方案属于所属领域专业人员的范畴。为了方便，全部剂量可以划分且分次在1天内根据需要给药。
本发明的化合物和/或其药学可接受盐的量和频率应根据主治医生在考虑多种因素例如患者的年龄、状况和体重以及被治疗症状的严重性后的判断来调整。口服给药的典型推荐日剂量可以在约0.04mg/天-约4000mg/天内变化，分2-4次给药。
本发明的另一方面是一种治疗癌症的方法，包括给需要其的患者同时或顺序施用治疗有效量的(a)式(I)的化合物和(b)化疗药(即抗肿瘤药，微管作用剂或抗血管发生药)。
在一优选的实施方式中，式(I)的化合物与下列一种抗肿瘤药组合gemcitabine，紫杉酚(Taxol)，5-氟尿嘧啶(5-FU)，环磷酰胺(Cytoxan)，替莫泊芬，taxotere或长春新碱。
可以用作化疗药的化合物(抗肿瘤药)的种类包括烷化剂，抗代谢物，天然产物及其衍生物，激素，抗激素，抗血管发生剂和甾类化合物(包括合成的类似物)，和合成物。这些种类中的化合物的实例如下所述。
烷化剂(包括氮芥，亚乙基亚胺衍生物，烷基磺酸盐，nitrosoureas和三氮烯类)尿嘧啶氮芥，氮芥，环磷酰胺(Cytoxan)，异环磷酰胺，美法仑，苯丁酸氮芥，溴丙哌嗪，三亚乙基-蜜胺，三亚乙基硫代磷酰胺，白消安，卡氮芥，罗氮芥，链脲霉素，达卡巴嗪，和替莫唑胺。
抗代谢物(包括叶酸拮抗剂，嘧啶类似物，嘌呤类似物和腺嘌呤脱氨基酶抑制剂)甲氨喋呤，5-氟尿嘧啶，氟尿苷，阿糖胞苷，6-巯基嘌呤，6-硫代鸟嘌呤，Fludarabine phosphate，Pentostatine，和Gemcitabine。
天然产物及其衍生物(包括长春生物碱，抗肿瘤抗体，酶，淋巴因子和epipodophyllotoxins)长春碱，长春新碱，长春碱酰胺，博莱霉素，放线菌素，柔红霉素，阿霉素，表柔比星，伊达柔霉素，紫杉酚(紫杉酚商购为Taxon和在下面标题为″微管作用剂″中详细描述)，光辉霉素，Deoxyco-formycin，丝裂霉素-C，L-天门冬酰胺酶，干扰素(尤其IFN-α)，依托泊甙，和替尼泊苷。
激素和甾类化合物(包括合成类似物)17α-乙炔雌二醇，二乙基己烯雌酚，睾酮，强的松，氟羟甲基睾酮，屈他雄酮丙酸盐，睾内酯，Megestrolacetate，他莫昔芬，甲基强的松龙，甲基-睾酮，强的松龙，去炎松，三对甲氧苯氯乙烯，羟孕酮，氨鲁米特，雌莫司汀，乙酸甲羟孕酮，Leuprolide，氟他胺，Toremifene，Zoladex。
合成物(包括无机复合物例如铂螯合络合物)顺铂，卡铂，羟脲，安吖啶，丙卡巴肼，米托坦，米托蒽醌，左旋咪唑，和六甲蜜胺。
抗血管发生药包括Marimastat，AG3340，Col-3，Neovastat，BMS-275291，酞胺哌啶酮，Squal胺，Endostatin，SU-5416，SU-6668，干扰素-α，抗VEGF抗体，EMD121974，CAI，白介素-12，IM862，血小板因子-4，Vitaxin，Angiostatin，苏拉明，TNP-470，PTK-787，ZD-6474，ZD-101，Bay 129566，CGS27023A，taxotere和紫杉醇。
大多数的此类化疗药的安全和有效的给药方法是所属领域技术人员熟知的。此外，其给药公开在标准文献中。例如，许多化疗药的给药公开在″Physicians′Desk Reference″(PDR)，例如，1996编辑(MedicalEconomics Company，Montvale，NJ 07645-1742，USA)；其内容在此引入作为参考。
在此使用的微管作用剂是通过影响微管形成和/或作用干扰细胞有丝分裂的化合物，即，具有抗有丝分裂作用。此类药物可以是，例如，微管稳定剂或破坏微管形成的药剂。
适用于本发明的微管作用剂是所属领域技术人员熟知的并且包括，但不限于allocolchicine(NSC 406042)，Halichondrin B(NSC 609395)，秋水仙素(NSC 757)，秋水仙素衍生物(例如，NSC 33410)，dolastatin10(NSC 376128)，美坦素(NSC 153858)，rhizoxin(NSC 332598)，紫杉酚(Taxol，NSC 125973)，紫杉酚衍生物(例如，衍生物(例如，NSC608832)，硫代秋水仙素(NSC 361792)，三苯甲基半胱氨酸(NSC 83265)，硫酸长春碱(NSC 49842)，硫酸长春新碱(NSC 67574)，epothilone A，epothilone，和discodermolide(参见Service，(1996)Science，2742009)雌莫司汀，nocodazole，MAP4等。此类药物的实例还在所述的科技和专利文献中作了描述，参见，例如，Bulinski(1997)J.Cell Sci.1103055-3064；Panda(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9410560-10564；Muhlradt(1997)Cancer Res.573344-3346；Nicolaou(1997)Nature 387268-272；Vasquez(1997)Mol.Biol.Cell.8973-985；Panda(1996)J.Biol.Chem.27129807-29812。
特别优选的药物是具有紫杉酚样活性的化合物。这些包括，但不限于紫杉酚和紫杉酚衍生物(紫杉酚样化合物)和类似物。紫杉酚及其衍生物是可商购的。此外，制备紫杉酚和紫杉酚衍生物和类似物的方法是所属领域技术人员熟知的(参见，例如，美国专利Nos5,569,729；5,565,478；5,530,020；5,527,924；5,508,447；5,489,589；5,488,116；5,484,809；5,478,854；5,478,736；5,475,120；5,468,769；5,461,169；5,440,057；5,422,364；5,411,984；5,405,972；和5,296,506)。
更加具体地，在此使用的术语″紫杉酚″是指可商购的Taxol(NSC号125973)。Taxol通过增强微管蛋白部分聚合为无法识别有丝分裂的适当结构的稳定微管束来抑制eukaryotic细胞复制。在多种可商购的化疗药中，紫杉酚令人感兴趣，因为其在临床实验中对药物难治的肿瘤的有效性，包括卵巢和乳腺肿瘤(Hawkins(1992)Oncology，617-23，Horwitz(1992)Trends Pharmacol.Sci.13134-146，Rowinsky(1990)J.Natl.Canc.Inst.821247-1259)。
其他微管作用剂可以利用一种所属领域已知的此类实验来评估，例如，测定紫杉酚类似物的微管蛋白聚合活性的半自动分析法结合测量这些化合物阻滞细胞处于有丝分裂的潜能的细胞使用相(参见Lopes(1997)Cancer Chemother.Pharmacol.4137-47)。
通常，通过使细胞与该化合物接触且测定细胞周期是否被破坏、特别是通过抑制有丝分裂活动来测定试验化合物的活性。这样的抑制作用可以由有丝分裂器官的破裂来介导的，例如，正常纺锤形成的破坏。有丝分裂被打破的细胞的特征在于改变了形态(例如，微管收缩，染色体数量增加等)。
在一个优选实施方式中，对具有可能的微管蛋白聚合活性的化合物进行体外筛选。在一个优选实施方式中，化合物用培养的WR21细胞(衍生自69-2 wap-ras小鼠系)筛选对增殖的抑制作用和/或改变了的细胞形态，特别是微管收缩。试验阳性的化合物的体内筛选可以利用携带WR21肿瘤细胞的小鼠进行。这种筛选方法的详细方案由Porter(1995)Lab.Anim.Sci.，45(2)145-150公开。
筛选化合物的所需活性的其他方法是所属领域技术人员熟知的。通常，此类实验包括检测对微管装配和/或分解的抑制作用。微管装配的使用由例如，Gaskin等(1974)J.Molec.Biol.，89737-758公开。美国专利5,569,720也提供了对于具有紫杉酚样活性的化合物的体内和体外实验。
上述微管作用剂的安全且有效的给药方法是所属领域技术人员熟知的。此外，其给药记载在标准文献中。例如，许多化疗药的给药公开在″Physicians′Desk Reference″(PDR)，例如，1996编辑(MedicalEconomics Company，Montvale，NJ 07645-1742，USA)；其内容在此引入作为参考。
式(I)的化合物和化疗药和/或放射疗法的给药量和频率根据根据主治医生(医师)在考虑多种因素例如患者的年龄、状况和体重以及被治疗症状的严重性后的判断来调整。式(I)的化合物的剂量方案对于口服给药可以是10mg-2000mg/天，优选10-1000mg/天，更优选50-600mg/天，分2-4(优选2)次给药，从而阻断肿瘤生长。还可以利用限期疗法(例如，三周间隔一周或四周间隔三周)。
所述的化疗药和/或放射疗法可以按照所属领域熟知的治疗方案实施。对于所属领域技术人员显而易见的是，化疗药和/或放射疗法的施用可以依赖于被治疗疾病和化疗药和/或放射疗法对这些疾病的已知作用来改变。另外，根据专业临床人员的知识，治疗方案(例如，剂量和给药次数)可以根据观察到的所给治疗剂(即，抗肿瘤药或放射)对患者的效果，和观察到的该疾病对所给治疗剂的反应来调整。
在本发明的方法中，式(I)的化合物同时或顺序与化疗药和/或放射一起施用。因此，例如，化疗药和式(I)的化合物，或放射和式(I)的化合物，不一定同时或基本上同时给药。同时和基本上同时给药的优点是专业临床人员的决定范围内。
另外，通常，式(I)的化合物和化疗药不是以同一药物组合物给药，并且由于不同的物理和化学性质，可能不得不通过不同途径给药。例如，式(I)的化合物可以经口服给药来产生和保持良好的血液水平，而化疗药可以经静脉内给药。可能的话，同一药物组合物的给药方式和给药的正确性的判断属于专业临床人员的知识。初始给药可以按照所属领域已确立的方案进行，并且随后，基于观察到的效果，专业临床人员可以改变给药的剂量、方式和给药的次数。
对式(I)的化合物和化疗药和/或放射的具体选择应依赖于主治医师的诊断及其对患者状况和适当治疗方案的判断。
式(I)的化合物和化疗药和/或放射可以并行(例如，同时，基本上同时或在同一治疗方案中)或顺序施用，这依赖于增殖性疾病的性质、患者的状况和与式(I)的化合物联合施用的化疗药和/或放射的实际选择(即，在单一治疗方案中)。
如果式(I)的化合物和化疗药和/或放射不是同时或基本上同时给药，则式(I)的化合物和化疗药和/或放射的初始给药次序，可能并不重要。所以，式(I)的化合物可以首先给药，随后施用化疗药和/或放射；或化疗药和/或放射可以首先给药，随后施用式(I)的化合物。这种改变的给药可以在一个治疗方案中反复进行。在治疗方案中各治疗剂的给药顺序和给药反复次数的确定属于专业医师在评价被治疗疾病和患者状况的知识的范畴内。例如，化疗药和/或放射可以首先给药，尤其是如果它是细胞毒性药物，并且随后施用式(I)的化合物继续治疗，如果已测定出优越性，随后施用化疗药和/或放射，并且继续如此直至完成该治疗方案。
所以，根据经验和常识，主治医师可以根据个体患者的需要改变各方案中的给药组分(治疗剂--即，式(I)的化合物，化疗药或放射)，如果该治疗有益。
主治医师，在判断该治疗在所施用的剂量下是否有效，应考虑患者的整体情况以及更多明确的迹象，例如疾病有关的症状的减轻、肿瘤生长的抑制、肿瘤的实际皱缩，或转移的抑制。通过标准方法可以测量肿瘤的大小，例如放射性逻辑(radio-logical)研究，例如，CAT或MRI扫描，并且联系测量可以用来判断肿瘤的生长是否被延迟且甚至逆转。疾病有关的症状例如疼痛的减轻，和整体状况的改进也可以用来判断治疗的有效性。
生物实施例本发明的化合物有效治疗CXC-趋化因子介导的病症和疾病。其效用表现在其抑制IL-8和GRO-α趋化因子的性能，这可能通过下列体外实验来证实。
受体结合实验CXCR1SPA实验对于96孔平板的各孔，100μl的10μghCXCR1-CHO过度表达膜(Biosignal)和200μg/孔WGA-SPA珠(Amersham)的反应混合物是在CXCR1试验缓冲液(25mM HEPES，pH7.8，2mMCaCl2，1mM MgCl2，125mM NaCl，0.1％BSA)(Sigma)中制备。配体，-IL-8(NEN)的0.4nM储备液是在CXCR1试验缓冲液中制备。试验化合物的20X储备液是在DMSO(Sigma)中制备。IL-8(R & D)的6X储备液是在CXCR2试验缓冲液中制成。上述溶液按照下述加入到96-孔试验平板(PerkinElmer)10μl试验化合物或DMSO，40μlCXCR1试验缓冲液或IL-8储备液，100μl反应混合物，50μl的配体储备液(最终[配体]＝0.1nM)。该试验平板在平板振荡器上振摇5分钟，随后温育8小时，之后在Microbeta Trilux计数器(PerkinElmer)中测定cpm/孔。对总的结合-NSB(250nMIL-8)的％抑制率测定为IC50值。
CXCR2SPA试验对于96孔平板的各孔，100μl的4μghCXCR2-CHO过度表达膜(Biosignal)和200μg/孔WGA-SPA珠(Amersham)的反应混合物在CXCR2试验缓冲液(25mM HEPES，pH 7.4，2mMCaCl2，1mM MgCl2)中制成。配体-IL-8(NEN)的0.4nM储备液在CXCR2试验缓冲液中制成。试验化合物的20X储备液在DMSO(Sigma)中制备。GRO-α(R &D)的6X储备液在CXCR2试验缓冲液中制备。按照下述将上述溶液加入到96-孔试验平板(PerkinElmer或Corning)10μl试验化合物或DMSO，40ul CXCR2试验缓冲液或GRO-α储备液，100μl的反应混合物，50μl的配体储备液(最终[配体]＝0.1nM)。当制备试验化合物在DMSO中的40X储备液时，则采用上述方案但除替换5μl试验化合物或DMSO并使用45μlCXCR2试验缓冲液之外。该试验平板在平板振荡器上振摇5分钟，随后温育2-8小时，之后在Microbeta Trilux计数器(PerkinElmer)中测定cpm/孔。测定总结合减去非特应性结合(250nMGro-α或50μM拮抗剂)的％抑制率并计算IC50值。
钙荧光试验(FLIPR)稳定转染了hCXCR2和Gα1/q的HEK 293细胞以10,000细胞/孔铺板在Poly-D-LysineBlack/Clear plate(Becton Dickinson)且在5％CO2，37℃下温育48小时。培养物随后用4mMfluo-4，AM(Molecular Probes)在染料负载缓冲液(1％FBS，HBSS w.Ca & Mg，20mM HEPES(Cellgro)，Probenicid(Sigma))中温育1小时。该培养物用洗涤缓冲液(HBSS w Ca，& Mg，20mM HEPES，Probenicid(2.5mM))洗涤3次，随后加入100μl/孔洗涤缓冲液。
在温育期间，所述的化合物在0.4％DMSO(Sigma)和洗涤缓冲液中制备为4X储备液并加入到其第一附加平板的各孔内。IL-8或GRO-α(R & D Systems)浓度是在洗涤缓冲液+0.1％BSA中4X制备且将其加入到第二附加平板的各孔内。
将培养平板和两该附加平板随后置于FLIPR成像体系中通过加入的化合物和随后加入的配体来测定钙荧光的变化。简单而言，将50μl的化合物溶液或DMSO溶液加入到各孔中并利用FLIPR仪器测定1分钟钙荧光的变化。在该仪器内温育3分钟后，此后加入50ul的配体且并利用FLIPR仪器测定1分钟钙荧光的变化。各刺激曲线下的面积和数值用于测定化合物(激动剂)的％促进率和对于配体(0.3nMIL-8或GRO-α)的总钙反应的％抑制率用于测定试验化合物的IC50值。
293-CXCR2的趋化试验趋化试验利用Fluorblok inserts(Falcon)对293-CXCR2细胞(人HEK-293细胞过度表达的人CXCR2)进行装配。在此使用的标准方案如下1.插入物用胶原IV(2ug/ml)在37℃下涂层2小时。
2.除去胶原且令插入物风干过夜。
3.细胞用10uM钙黄绿素AM(Molecular Probes)标记2小时。在含有2％FBS的完全培养基中进行标记。
4.化合物的稀释是在最低培养基(minimal media)(0.1％BSA)中进行并且加入插入物，其位于24孔平板孔内。在孔中IL-8在最低培养基中的浓度为0.25nM。洗涤细胞且重新悬浮在最低培养基中且以50,000细胞/插入物的浓度加入插入物。
5.平板温育2小时且除去插入物并置于新的24孔内。在激发＝485nM和发射＝530nM下检测荧光。
细胞毒性试验CXCR2化合物的细胞毒性试验在293-CXCR2细胞上进行。在高浓度下试验化合物的浓度的毒性，从而判定它们是否可以进一步在结合和细胞基试验中进行评价。方案如下1.293-CXCR2细胞以5000细胞/孔的浓度在完全培养基中平板过夜。
2.化合物的稀释在w/0.1％BSA的最低培养基中进行。倾出完全培养基且加入化合物的稀释液。平板温育4、24和48小时。细胞用10uM钙黄绿素AM标记15分钟从而测定细胞成活率。检测方法与上述方法相同。
软琼脂试验将10,000SKMEL-5细胞/孔置于含有化合物的不同稀释液的1.2％琼脂和完全培养基中。琼脂的终浓度为0.6％。21天后，存活细胞克隆用MTT(1mg/ml在PBS中)的溶液染色。随后将平板扫描来测定菌落数目和规模。通过比较总面积和化合物浓度测定IC50。
本发明的化合物在约1nM-约10,000nM范围内可以具有CXCR2受体结合活性。
式(I)的化合物可以按照所属领域已知的方法以下列反应路线和制备例和实施例所述制备。
路线1 二溴马来酸酐与取代的或未取代的肼的缩合应得到环状酰肼衍生物B。B与一当量的胺(ANH2)的缩合得到C，当加入第二胺(BNH2)时得到D。
路线II 或者，环状酰肼与可利用的酸性N-H用碱脱质子化且通过适当亲电性试剂烷基化得到相应的N-取代的环状酰肼。该中间体按照路线I可以进一步达到所需目标。
下列实施例举例说明一些本发明的化合物的制备但不构成对本发明内容的限定。
其他机械途径和类似结构对于所属领域技术人员来说是显然的。
制备例1 混和3-硝基水杨酸(500mg，2.7mmol)，DCC(563mg)和乙酸乙酯(10mL)且搅拌10分钟。加入(R)-(-)-2-吡咯烷甲醇(0.27mL)且将所得混悬液室温下搅拌过夜。过滤固体和滤液用1NNaOH洗涤。将水相酸化且用EtOAc提取。所得的有机相用无水MgSO4干燥，过滤且真空浓缩。通过制备平板色谱纯化(硅胶，5％MeOH/CH2Cl2用AcOH饱和)得到产物(338mg，46％，MH+＝267)。
制备例2 步骤A将3-硝基水杨酸(9.2g)，溴三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(PyBroP，23g)和N，N-二异丙基乙基胺(DIEA，26mL)在无水CH2Cl2(125mL)中混且在25℃下搅拌30分钟。25分钟内加入在CH2Cl2(25mL)中的(R)-(+)-3-吡咯烷醇(8.7g)且将所得混悬液室温下搅拌过夜。该混合物用1MNaOH(aq)萃取且弃去有机相。水相用1M HCl(aq)酸化，用EtOAc萃取，用无水Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩得到粗产物(7g)，其无需进一步纯化。
步骤B上述步骤A的粗产物用10％Pd/C(0.7g)在MeOH(100mL)中在氢气氛下搅拌过夜。该反应混合物经硅藻土过滤，滤液真空浓缩，和所得残余物通过柱色谱纯化(硅胶，10％MeOH/CH2Cl2用NH4OH饱和)得到产物(2.5g，41％，MH+＝223)。
制备例3-9按照制备例2所述的方法，但使用下表所列的羧酸，胺，和适当的偶联剂(PyBrop)，得到酰胺产物且无需进一步纯化就可使用。
制备例10 步骤A按照类似于制备例1的方法，处理用二甲基胺(2M在THF中，33mL)代替(R)-(-)-2-吡咯烷甲醇和用5-甲基水杨酸(5g)代替3-硝基水杨酸，制备产物(6.5g)。
步骤B将在H2SO4中的硝酸(0.8mL)加入到上述步骤步骤A的产物(3g)在H2SO4(25mL)中的冷却(-20℃)混悬液内。该混合物滴加50％NaOH(aq)处理，用CH2Cl2萃取，用无水MgSO4干燥，过滤且真空浓缩，得到产物其为固体(2.1g，44％，MH+＝225)。
步骤C该产物按照类似于制备例2所述的方法制备，步骤B(0.7g，99％，MH+＝195)。
制备例11 步骤A按照类似于制备例2步骤A的方法制备，除了用二甲基胺代替(R)-(-)-2-吡咯烷甲醇之外，制得产物。
步骤B将上述步骤A的产物(8g)与碘(9.7g)，硫酸银(11.9g)，EtOH(200mL)和水(20mL)混和且搅拌过夜。过滤，浓缩滤液，再溶解在CH2Cl2中且用1M HCl(aq)洗涤得到有机溶液，其用无水MgSO4干燥，过滤且真空浓缩得到产物(7.3g，57％，MH+＝337)。
步骤C将上述步骤B的产物(3.1g)与DMF(50mL)和Mel(0.6mL)混和。滴加NaH(60％在矿物油中，0.4g)且将该混合物搅拌过夜。真空浓缩得到残余物，其用CH2Cl2稀释，用1M NaOH(aq)洗涤，用无水MgSO4干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶柱纯化(EtOAc/Hex，1∶1)得到产物(1.3g，41％，MH+＝351)。
步骤D上述步骤D的产物(200mg)，Zn(CN)2(132mg)，Pd(PPh3)4(130mg)和DMF(5mL)在80℃下加热48小时，随后冷却至室温并用EtOAc和2MNH4OH稀释。充分振摇后，有机提取液用无水MgSO4干燥，过滤，真空浓缩和通过制备平板色谱纯化(Silica，EtOAc/Hex，1∶1)得到产物(62mg，44％，MH+＝250)。
步骤E将BBr3(1.3mL，1M在CH2Cl2)加入到上述步骤D产物(160mg)的CH2Cl2溶液(5mL)中且搅拌30分钟。该混合物用水稀释，用CH2Cl2提取，用无水MgSO4干燥，过滤，和真空浓缩得到产物(158mg，MH+＝236)。
步骤F上述步骤E(160mg)，氧化铂(83％，19mg)，和EtOH(20mL)的混合物在氢(25-40psi)下搅拌1.5小时。经硅藻土过滤且真空浓缩得到产物(165mg，MH+＝206)。
制备例12 步骤A按照类似于制备例1的方法，但除了用二甲基胺(2M在THF中，50mL)代替(R)-(-)-2-吡咯烷甲醇和用4-甲基水杨酸(15g)代替3-硝基水杨酸之外，制得产物(6.3g，35％)。
步骤B上述步骤A的产物(1.5g)与碘(2.1g)、NaHCO3(1.1g)、EtOH(40mL)和水(10mL)混和并搅拌过夜。过滤，浓缩滤液，再溶解在CH2Cl2并用1M HCl(aq)洗涤得到有机溶液，其用无水MgSO4干燥，过滤且真空浓缩。通过快速柱色谱纯化(硅胶，0.5-0.7％MeOH/CH2Cl2)得到产物(0.3g，57％，MH+＝306)。
步骤C将在AcOH(10mL)中的硝酸(3.8mL)加入到上述步骤B的产物(0.8g)并将该混合物搅拌40分钟。该混合物用水稀释且用CH2Cl2萃取，用无水MgSO4干燥，过滤且真空浓缩得到产物其为固体(0.8g，92％，MH+＝351)。
步骤D将上述步骤C的产物(800mg)，10％Pd/C(100mg)，和EtOH/MeOH(40mL)在parr振摇器中氢气下(45psi)搅拌1.5小时。经硅藻土过滤和真空浓缩，通过制备平板色谱纯化后得到标题产物(Silica，10％MeOH/CH2Cl2，用NH4OH饱和)得到产物(92mg，22％，MH+＝195)。
制备例13 步骤A3-硝基-1，2-亚苯基二胺(10g)，亚硝酸钠(5.4g)和乙酸(20mL)在60℃下加热过夜，随后真空浓缩，用水稀释和用EtOAc萃取。产物有机相(5.7g)作为固体沉淀且直接用于步骤B。
步骤B上述步骤A的产物(2.8g)与10％Pd/C(0.3g)在MeOH(75mL)中在氢气氛下搅拌过夜。该反应混合物经硅藻土过滤和滤液真空浓缩，得到产物(2.2g，MH+＝135)。
制备例14
步骤A按照已知的方法制备4-溴吡唑-3-甲酸，参见Yu.A.M.；Andreeva，M.A.；Perevalov，V.P.；Stepanov，V.I.；Dubrovskaya，V.A.；和Seraya，V.I.in Zh.Obs.Khim.(Journal of General Chemistry ofthe USSR)1982，52，2592，和其中引用的参考文献。
步骤B25℃下向得自步骤A的4-溴吡唑-3-甲酸(2.0g)在65mL无水DMF中的溶液加入溴三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(PyBrop，4.60g)，二甲基胺(10mL，2.0M在THF)和二异丙基乙胺(5.2mL)。将该混合物搅拌26小时，并且减压下浓缩得到油性残余物。该残余物用1.0MNaOH水溶液处理，和用乙酸乙酯(4×50mL)萃取。合并有机提取液，用盐水洗涤，和用无水Na2SO4干燥。除去溶剂得到油，其通过制备薄层层析纯化，用CH2Cl2-MeOH(20∶1)洗脱，得到1.09g的酰胺产物(48％，MH+＝232.0)。
步骤C向步骤B的酰胺(0.67g)在8mL浓硫酸中的溶液内在0℃下分少量加入硝酸钾(1.16g)。撤去冷却浴且将该混合物在110℃下加热6小时。冷却至25℃后，将该混合物倾入80mL的H2O，并且用附加的20mL的H2O漂洗。含水混合物用CH2Cl2(100mL×4)萃取。合并的萃取液用盐水(50mL)、饱和NaHCO3水溶液(50mL)、盐水(50mL)洗涤，并且用Na2SO4干燥。蒸发溶剂得到浅黄色油，其在放置后固化。粗产物通过快速柱色谱纯化，用CH2Cl2-MeOH(1∶0，50∶1和40∶1)洗脱。除去溶剂得到0.521g(65％)的产物，其为固体(MH+＝277.1)。
步骤D将步骤C的产物(61mg)溶解在3mL的THF中。向该溶液在-78℃下沿烧瓶内壁滴加正丁基锂在己烷中的1.6M溶液。45分钟后，加入硼酸甲酯(0.1mL)在THF(1.0mL)中的溶液。1.5小时后，将乙酸在THF中的溶液(0.25mL，1∶10v/v)加入到冷却混合物中。继续搅拌10分钟，并且加入30wt％过氧化氢水溶液(0.1mL)。20分钟后加入另外份的过氧化氢水溶液(0.05mL)。撤去冷却浴，和将该混合物在25℃搅拌36小时。将黄色混合物倾入30mL的H2O，并且水混合物用乙酸乙酯(30mL×4)萃取。合并萃取液，用盐水(10mL)，5％NaHCO3水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机层用Na2SO4干燥且减压下浓缩得到残余物，其通过制备薄层层析纯化用CH2Cl2-MeOH(20∶1)洗脱得到羟基化产物(5mg，10％，MH+＝215.3)。
步骤E如步骤D的羟基化产物用H2在10％钯碳下乙醇中处理，应得到羟基-氨基化合物。
制备例15 步骤A按照类似于制备例12步骤C的方法，除了用已知化合物，4-甲基-嘧啶-5-醇起始，制备步骤A的产物。
步骤B按照类似于制备例14步骤A的氧化方法，由上述步骤A的产物起始，可以制备步骤B的产物。
步骤C按照类似于制备例10步骤A的方法、由上述步骤B的产物起始，可以制备步骤C的产物。
步骤D按照类似于制备例11步骤F的方法、由上述步骤C的产物起始，可以制备步骤D的产物。
制备例16 步骤A按照类似于制备例10步骤A的方法10、由已知的4-羟基烟酸起始，可以制备所述的产物。
步骤B按照类似于制备例12步骤C的方法、由上述步骤A的产物起始，可以制备步骤B的产物。
步骤C按照类似于制备例11步骤F的方法、由上述步骤C的产物起始，可以制备所述的胺产物。
制备例17 步骤A按照类似于制备例12步骤C的方法、由上述步骤A的化合物起始，可以制备该硝基产物。
步骤B在氢气氛下(1-4atm)搅拌上述步骤A的硝基产物与适当的Pt或Pd催化剂和EtOH，得到所述的胺产物。
制备例18
步骤A向5-硝基-3-吡唑羧酸(5.0g，31.83mmol)在160mL乙腈中的溶液内在室温下分小份加入溴三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(PyBrop，14.9g，31.98mmol)。将二甲基胺在THF(40.0mL，80.0mmol)中的2.0M溶液加入到该混合物中，随后加入二异丙基乙基胺的溶液(14.0mL，80.2mmol)。搅拌36小时后，该混合物在减压下浓缩得到残余物，固体和油的混合物。加入少量体积的CH2Cl2直至油性物质溶解为止并沉淀出细的无色固体。通过过滤收集固体，其为第一批产物。浓缩滤液得到油性残余物，其用CH2Cl2-己烷(-1∶1，v/v)处理，和过滤出无色沉淀，作为第二批产物。合并的固体产物进一步在高真空下干燥数小时得到5.86g(100％)的N，N’-二甲基5-硝基-3-吡唑甲酰胺其为固体(MH+＝185.0)。
步骤B向N，N’-二甲基5-硝基-3-吡唑酰胺(5.86g，31.83mmol，得自步骤A)在215mL无水THF中的溶液内在室温下分次加入固体甲醇锂。45分钟后，滴加碘甲烷。连续搅拌2.5天。该混合物经1.5-in硅胶垫过滤，用体积大大过量的乙酸乙酯漂洗。合并的滤液并漂洗液浓缩为深黄色油，其通过快速柱色谱纯化，用己烷，CH2Cl2，和CH2Cl2-MeOH(50∶1)洗脱。除去溶剂得到5.10g(81％)的N，N’-二甲基1-甲基-5-硝基-3-吡唑酰胺，其为固体(MH+＝199.0)，被～13％的2-甲基化异构体污染。
步骤C得自步骤B的N，N’-二甲基1-甲基-5-硝基-3-吡唑甲酰胺(5.10g，25.29mmol)在250mL乙醇中的溶液经室内真空脱气，并且随后再充入氮。加入固体钯(10％在活化的炭上，用＜50％水湿润，2.5g)，该黑色混悬液经室内真空(house vacuum)脱气且再充入气球提供的氢气。该混合物在室温下氢气氛下搅拌4小时，并且经硅藻土垫过滤，用乙醇漂洗。合并滤液和漂洗液，减压下浓缩得到4.17g(98％)的氨基-吡唑产物，其为固体(MH+＝169.0)。
步骤D向步骤C中制备的氨基-吡唑(1.0g，5.95mmol)在40mLCH2Cl2中的搅拌溶液内在室温下加入氯甲酸苄酯(2.7mL，17.97mmol)。一次性加入固体碳酸钾(4.1g，29.71mmol)。24小时后，将甲醇(5mL)加入到该混合物，并且连续搅拌2小时。通过过滤除去不溶物，并且用甲醇洗涤，合并的滤液和漂洗液减压下浓缩为稠的浆液，其通过制备TLC分离(CH2Cl2-MeOH＝30∶1)。该硅胶用MeOH和CH2Cl2萃取，将萃取液过滤和减压下浓缩得到1.16g(64％)的吡唑氨基甲酸苄酯，其为固体(MH+＝303.1)。
步骤E向步骤D制备的吡唑氨基甲酸苄酯(1.0g，3.31mmol)在100mL甲苯中的搅拌溶液内在室温下一次性加入″Clayfen″(参见下面的注释)(3.5g)。将深紫色混悬液70℃加热且继续在70-80℃下加热2.5天。冷却至室温，该混合物经薄硅藻土垫过滤。固体残余物和滤垫用CH2Cl2漂洗，和过滤。合并的滤液浓缩为黄色油，其通过制备TLC纯化(CH2Cl2-MeOH＝20∶1)。硅胶用CH2Cl2和甲醇萃取，将萃取液过滤和减压下浓缩得到0.822g(72％)的硝基-吡唑氨基甲酸苄酯，其为油(MH+＝348.1)。
注释″Clayfen″，粘土载硝酸铁(III)，按照文献方法制备，参见Cornelis，A.；Laszlo，P.Synthesis，1980，849。向搅拌的丙酮溶液(30mL)在室温下分次加入固体Fe(NO3)3.9H2O(1.8g)。5分钟后，加入K-10皂粘土(2.4g)。持续搅拌30分钟，和减压下浓缩所得混悬液(水浴温度＜＝30℃)。新制的物质在上述反应后立刻使用。
步骤F得自步骤E的硝基-吡唑氨基甲酸苄酯(410.0g，1.18mmol)在20mL乙醇中的溶液经室内真空脱气，并且再充入氮气。加入固体钯(10％在活化的炭上，以＜50％水湿润280.0mg)，该黑色混悬液经室内真空(house vacuum)脱气且再充入气球提供的氢气。该混合物在室温下氢气氛下搅拌20小时，并且经1-in硅藻土垫过滤，用过量体积的甲醇漂洗。浓缩滤液和漂洗液为红色油，其通过制备TLC纯化(CH2Cl2-MeOH＝15∶1)。硅胶用甲醇萃取，将萃取液过滤，并且滤液减压下浓缩为油，其在高真空下干燥固化，得到120.0mg(56％)二氨基-吡唑产物(MH+＝184.0)。
制备例19 步骤A硝基-吡唑氨基甲酸苄酯由5-硝基-3吡唑羧酸按照制备例18所述方法制备。
步骤B向得自步骤A的硝基-吡唑氨基甲酸苄酯(410.0mg，1.18mmol)在17mL乙酸乙酯中的溶液内在室温下一次性加入氯化锡(II)二水合物(1.33g，5.90mmol)。将该混合物加热至80℃且持续2小时。冷却至室温后，将饱和NaHCO3水溶液滴加到该混合物直至pH约7。加入附加体积的乙酸乙酯(20mL)，将该混合物搅拌过夜，和经1-in硅藻土垫过滤。分离两层的滤液。有机层用盐水洗涤1次。合并洗涤水和水层，并且用乙酸乙酯萃取1次。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤和浓缩，进一步高真空干燥，得到361.5mg(97％)的氨基吡唑氨基甲酸苄酯其为固体(MH+＝318.1)。
步骤C向步骤B制备的氨基-吡唑氨基甲酸苄酯(180.0mg，0.57mmol)在11mL的CH2Cl2中的搅拌溶液内在-78℃下加入三乙胺(0.32mL，2.30mmol)。沿烧瓶的内壁滴加甲磺酰氯在CH2Cl2(1.7mL，1.7mmol)中的1.0M溶液。将该混合物搅拌2.5小时且使冷却浴的温度缓慢由-78℃升高至-25℃。将饱和NaHCO3水溶液(5mL)加入到该混合物，和进一步用25mL的CH2Cl2稀释。撤去冷却浴，继续搅拌1.5小时。分离各层。水层用CH2Cl2(30mL)萃取，并且合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液(30mL)和盐水(30mL)洗涤。有机层用Na2SO4干燥，和浓缩为油，其通过制备TLC(CH2Cl2-MeOH＝20∶1)纯化。硅胶用CH2Cl2和甲醇萃取，将萃取液过滤和浓缩为无色油，固化并且在高真空下干燥，得到185.7mg(83％)的吡唑甲基磺酰胺，其为固体(MH+＝396.1)。
步骤D向步骤C的吡唑甲磺酰胺(275.0mg，0.70mmol)在10mL乙醇中的氮封溶液内加入固体钯(10％在活化炭上，用＜50％水湿润，550.0mg)。该混合物经室内真空脱气，随后充入气球提供的氢气。该混合物在氢气氛下搅拌3.5小时，并且经硅藻土层过滤。固体残余物和滤垫用乙醇和乙酸乙酯漂洗，合并的滤液和漂洗液减压下浓缩得到173.0mg(95％)of氨基-吡唑甲磺酰胺，是固体(MH+＝262.0)。
制备例20 步骤A吡唑氨基甲酸苄酯由5-硝基-3-吡唑羧酸以4个步骤按照制备例18所述方法制备。
步骤B一次性向步骤A中制备的吡唑氨基甲酸苄酯(115.0mg，0.38mmol)在6mLCH2Cl2中的溶液内在室温下加入固体碳酸钾。将溴溶液滴加到搅拌的混合物中，6小时后，加入30mL H2O，和该混合物用CH2Cl2(30mL×3)萃取。合并的有机萃取液用10％Na2S2O3水溶液(20mL)、饱和NaHCO3水溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤，并且用Na2SO4干燥。蒸发溶剂得到浅黄色油，其通过制备TLC纯化(CH2Cl2-MeOH＝20∶1)。硅胶用CH2Cl2和甲醇萃取，将萃取液过滤和减压下浓缩得到油，其进一步高真空干燥，得到134.2mg(93％)的溴-吡唑氨基甲酸苄酯(MH+＝381)。
步骤C步骤B的溴-吡唑氨基甲酸苄酯化合物用正丁基锂处理、随后加入硼酸甲酯可转化溴-吡唑氨基甲酸苄酯为相应的硼酸酯。随后该硼酸酯与H2O2水溶液的一锅式氧化反应得到羟基-吡唑氨基甲酸苄酯。
步骤D步骤C的羟基-吡唑氨基甲酸苄酯与氢在钯的条件下(10％在活化炭上)在乙醇中的处理得到所需氨基-羟基吡唑。
制备例21 步骤A向3-甲氧基噻吩羧基甲酯(2.0g，11.6mmol)在20mL THF中的溶液内在室温下滴加1.0M氢氧化钠水溶液(17.0mL，17.0mmol)。加料后，将该混合物加热至75℃(油浴温)并且持续18小时。将该混合物冷却至室温，用1.0M盐水水溶液处理直至pH约为2。酸化的混合物用100mLCH2Cl2-CH3CN(1∶1，v/v)、50mL的CH2Cl2和50mL的CH3CN萃取。合并的有机萃取液用盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，和减压下浓缩得到固体，其进一步高真空干燥，得到1.84g(100％)的3-甲氧基噻吩羧酸(MH+＝159.0)。
步骤B向步骤A的3-甲氧基噻吩羧酸(1.84g，11.61mmol)在60mL乙腈中的混悬液在室温下依次加入溴三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(PyBrop，5.40g，11.60mmol)、二甲基胺(2.0M在THF中，14.5ml，29.0mmol)和二异丙基乙胺(5.0mL，28.63mmol)。搅拌1.5天后，该混合物减压下浓缩得到黄色油，其通过制备TLC纯化(CH2Cl2-MeOH＝40∶1)。硅胶用CH2Cl2和甲醇萃取，将萃取液过滤和浓缩为油，其进一步高真空干燥，生成4.16g的N，N-二甲基3-甲氧基噻吩酰胺(污染有PyBrop杂质)(MH+＝186.0)。
步骤C向噻吩酰胺(4.16g，步骤B中制备)在6mL浓硫酸中的剧烈搅拌溶液内在-10℃下滴加发烟硝酸(0.6mL，14.28mmol)。1.5小时后，将该混合物倾入80mL的1.0MNaOH水溶液和冰(1∶1，v/v)的混合物内。利用另外40mL的H2O进行转移。通过过滤收集黄色沉淀，用H2O洗涤2次，并且高真空干燥，得到1.67g的硝基-噻吩产物。含水滤液用CH2Cl2(50mL×3)萃取。萃取液用饱和NaHCO3水溶液(30mL)和盐水(30mL)洗涤，并且用Na2SO4干燥。蒸发溶剂得到黄色油，其通过制备TLC纯化(CH2Cl2-MeOH＝50∶1)得到另外0.144g的硝基-噻吩其为固体(总量1.81g，68％共两步，MH+＝231.0)。
步骤D在15分钟内向步骤C得到的甲氧基-硝基-噻吩(900.0mg，3.91mmol)在55mL无水CH2Cl2中的搅拌溶液内在-78℃下沿烧瓶内壁滴加三溴化硼在CH2Cl2中的1.0M溶液。将该混合物搅拌4小时且使冷却浴的温度缓慢由-78℃升高至-10℃，并且倾入100mL的冰和H2O(-1∶1，v/v)的混合物中。用另外30mL的H2O和30mL的CH2Cl2漂洗烧瓶。合并的混合物在室温下搅拌过夜，分离两层，并且水层用CH2Cl2(50mL×3)萃取。合并有机层，用饱和NaHCO3水溶液(50mL×2)和盐水(50mL×2)洗涤，用Na2SO4干燥，和浓缩至黄色固体。粗产物通过快速柱色谱纯化，用己烷、CH2Cl2-己烷(1∶1和2∶1)洗脱。除去溶剂得到固体，其为进一步高真空干燥，得到615.2mg(73％)的羟基-硝基-噻吩酰胺(MH+＝217.0)。
步骤E向步骤D中制备的羟基-硝基-噻吩酰胺(610.0mg，2.82mmol)在60mL的乙醇中的氮封溶液内加入氢氧化钯(20wt％在活化炭上，用＜＝50％水湿润，610.0mg)。该混合物经室内真空脱气并且再充入气球提供的氢气。该混合物首先在室温下在氢气氛下搅拌2小时，随后加热至70-80℃并且持续20小时。经1-in硅藻土垫过滤除去固体物质，滤垫用100mL乙醇洗涤，和合并的滤液浓缩为浅黄色固体。粗产物用CH2Cl2-MeOH的混合物(约1∶1，v/v)处理，沉淀出米色固体并通过过滤收集第一批产物(75.4mg)。滤液浓缩为固体残余物，其通过快速柱色谱纯化，用CH2Cl2-EtOH(10∶1和2∶1)洗脱。除去溶剂得到226.8mg的氨基-羟基-噻吩酰胺其为固体(302.2mg总产率，58％，MH+＝187.0)。
制备例22 步骤A将2-噻吩羰基氯化物(2.0mL，18.7mmol)溶解在100mL二氯甲烷中。加入二异丙基乙基胺(4.1mL，23.4mmol)和Boc-哌嗪(3.66g，19.7mmol)后，将该混合物在室温下搅拌4小时。将所得浑浊混合物置于水(500mL)中且用3N HCl酸化为pH-1。用二氯甲烷(2×100mL)萃取且用硫酸钠干燥得到足够纯的产物，其无需进一步纯化就可用于下个步骤。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)1.60(s，9H)，3.29(dd，4H)，3.69(dd，4H)，7.23(dd，1H)，7.49(d，1H)，7.79(d，1H)。
步骤B将步骤A的粗产物溶解在三氟乙酸/二氯甲烷(75mL，4/1)中。搅拌2小时后，该反应混合物置于1N氢氧化钠(400mL)。用二氯甲烷(2×100mL)萃取且用硫酸钠干燥得到足够纯的产物，其无需进一步纯化就可用于步骤C。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)2.81(dd，4H)，3.63(dd，4H)，7.21(dd，1H)，7.46(d，1H)，7.82(d，1H)。
步骤C将步骤B的粗产物(3.50g，17.8mmol)溶解在二氯甲烷(100mL)中。加入二异丙基乙基胺(18.7mL，107mol)，3-硝基水杨酸(3.3g，18.0mmol)，和PyBrOP(10.4g，22.3mmol)，所得的黄色混合物在室温下搅拌过夜，之后置于1N氢氧化钠(200mL)中。用二氯甲烷(2×200mL)萃取除去全部PyBrOP副产物。水相用3N HCl酸化且随后用二氯甲烷(3×100mL)萃取。酸性萃取液的合并有机相用硫酸钠干燥，浓缩，和最后通过柱色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到所需产物(2.31g，34％共3步骤)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)3.30-3.90(m，8H)，7.10-8.20(m，双信号，由于E/Z-异构体，6H)，10.82(s，1H)。
步骤D将步骤C的硝基-化合物(2.3g，6.4mmol)溶解在甲醇(50mL)中并且与10％Pd/C在氢气氛下搅拌过夜。该反应混合物经硅藻土过滤且用甲醇彻底洗涤。最后，将滤液真空浓缩和通过柱色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)生成所需产物(1.78g，84％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)3.30-3.90(m，8H)，7.22(m，2H)，7.55(d，1H)，7.71(d，1H)，7.88(d，1H)，8.15(d，1H)，10.85(bs，1H)。
制备例23 步骤A将吡啶甲酸(3.0g，24.3mmol)悬浮在SOCl2(15mL)中。加入二甲基甲酰胺(5滴)后，将该反应混合物搅拌4小时。在此期间颜色由白色转变为绿色，再转变为褐色，最终制备为酒红色并且全部固体溶于溶液中。蒸发溶剂得到相应的酰氯，其为HCl-盐。无需进一步纯化，将该固体悬浮在120mL二氯甲烷中。加入二异丙基乙基胺(12.7mL，73mmol)和Boc-piparazine(4.8g，25.5mmol)，将该反应在室温下搅拌过夜。所得浑浊混合物置于水(500mL)中且用二氯甲烷(2×100mL)萃取。用硫酸钠干燥得到足够纯的产物，其无效进一步纯化就可用于步骤。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)1.63(s，9H)，3.21(dd，4H)，3.61(dd，4H)，7.57(dd，1H)，7.63(d，1H)，7.98(dd，1H)，8.70(d，1H)。
步骤B将步骤A的粗产物溶解在三氟乙酸/二氯甲烷(75mL，4/1)。搅拌2天后，将该反应混合物置于1N氢氧化钠(400mL)中。用二氯甲烷(2×100mL)萃取且用硫酸钠干燥得到足够纯的产物，其无需进一步纯化就可用于步骤C。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)2.77(dd，2H)，2.83(dd，1H)，3.38(dd，2H)，3.64(dd，1H)，7.58(dd，1H)，7.62(d，1H)，8.00(dd，1H)，8.67(d，1H)。
步骤C将得自步骤B的粗产物(1.35g，7.06mmol)溶解在二氯甲烷(50mL)。加入二异丙基乙基胺(3.7mL，21.2mmol)，3-硝基水杨酸(1.36g，7.41mmol)，和PyBrOP(3.62g，7.77mmol)，所得黄色混合物在室温下搅拌过夜，之后置于1N氢氧化钠(300mL)中。用二氯甲烷(2×100mL)萃取除去PyBrOP产物。水相用3NHCl酸化。用饱和碳酸钠溶液小心调整pH至几乎中性，使所需化合物析出溶液。水相顺序用二氯甲烷(3×100mL)萃取。中性萃取液的合并有机层用硫酸钠干燥，浓缩，和最后通过柱色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到所需产物(1.35g，16％共3步骤)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)3.30-3.95(m，8H)，7.22(m，1H)，7.61(m，1H)，7.73(d，2H)，8.03(m，1H)，8.17(m，1H)，8.69(m，1H)，10.82(s，1H)。
步骤D将得自步骤C的硝基-化合物(1.35g，3.79mmol)溶解在甲醇(60mL)中且与10％Pd/C在氢气氛下搅拌过夜。该反应混合物经硅藻土过滤且用甲醇充分洗涤。最后，滤液真空浓缩和通过柱色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到所需产物(1.10g，89％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)3.50-3.85(m，8H)，6.47(dd 1H)，6.74(m，2H)，7.59(dd，1H)，7.71(d，1H)，8.04(dd，1H)，8.68(d，1H)。
制备例24 步骤1在圆底烧瓶中将3-硝基水杨酸(3.61g，0.0197mol)，DCC(2.03g，0.0099mol)和乙酸乙酯(130mL)混和且搅拌15分钟。加入4-二甲基氨基甲酰基-哌嗪-2-羧酸乙酯(4.51g，0.0197mol)，并且将该反应搅拌72小时。浓缩该反应混合物，随后溶于二氯甲烷。该有机相用0.1N氢氧化钠洗涤1次。水相用二氯甲烷萃取1次。酸化水相且用乙酸乙酯洗涤3次。浓缩水相和通过柱色谱纯化(5％甲醇/DCM)。
MS理论值394.15，实测值395.01H NMR(300MHz，CDCl3)1.32(t，3H)，2.86(m，7H)，3.15(m，1H)，3.51(m，4H)，4.24(m，3H)，7.15(m，1H)，7.66(m，1H)，8.20(m，1H)，10.86(bs，1H)。
步骤2在圆底烧瓶中混和4-二甲基氨基甲酰基-1-(2-羟基-3-硝基-苯甲酰基)-哌嗪-2-羧酸乙酯(0.80g，0.002mol)和甲醇(50mL)。向该体系吹入氩气。向该溶液内加入5％碳载钯(-100mg)。向烧瓶内吹入氢并搅拌过夜。该反应经硅藻土垫过滤并用甲醇洗涤。浓缩该物质，随后通过柱色谱纯化(6％甲醇/DCM)。分离产物(0.74g，0.002mol，100％)。
MS理论值364.17，实测值365.11H NMR(300MHz，CDCl3)1.27(t，3H)，2.85(m，8H)，3.18(1H)，3.45(m，3H)，4.19(m，3H)，3.90(m，3H)步骤31-(3-氨基-2-羟基-苯甲酰基)-4-二甲基氨基甲酰基-哌嗪-2-羧酸乙酯(0.74g，0.002mol)悬浮在二噁烷(10mL)和水(10mL)的混合物中。加入氢氧化锂(0.26g，0.0061mol)且将该混合物搅拌2小时。该溶液用3NHCl酸化为pH＝6，随后用丁醇萃取。合并萃取液，用硫酸钠干燥且浓缩。
MS理论值336.14，实测值337.11H NMR(300MHz，CD3OD)2.86(m，7H)，3.23(m，3H)，3.54(m，3H)，6.92(m，2H)，7.23(m，1H)。
制备例25 将制备例1的产物与10％Pd/C在氢气氛下搅拌过夜。该反应混合物经硅藻土过滤，真空浓缩滤液，和所得残余物通过柱色谱纯化(硅胶，4％MeOH/CH2Cl2用NH4OH饱和)得到产物(129mg，43％，MH+＝237)。
制备例26 以基本上与制备例25相似的方法，得到上述胺产物；(收率50％，MH+＝300.1)。
制备例27 该产物按照文献方法制备(Zh.Obshch.Khim.；24；1954；1216，1220；engl.Ausg.S.1205，1207)。
制备例28-31按照制备例27中的方法，利用下表中所列的市售肼，可以制备下列环状二溴酰肼。
制备例32 该产物按照文献方法制备(Farmaco Ed.Sci.IT；32；1977；173-179)。
制备例33 按照文献所述的方法(J.Heterocycl.Chem.；EN；34；4；1997；1307-1314)用苄基溴代替1-氯-丙烷-2-酮，可以得到该产物。
制备例34
按照文献所列的类似方法(Farmaco Ed.Sci.IT；32；1977；173-179)用制备例3的产物代替2-甲基氨基-苯硫醇，可以得到该产物。
制备例35-133按照上述制备例34的方法利用所述的胺和所述制备例的二溴中间体，可以得到下表中产物。
制备例134 步骤A向N-保护的氨基酸(1.5g，6.9mmol)在CH2Cl2(25mL)中的溶液内在室温下加入DIPEA(3.6mL，20.7mmol)，和(PyBrop)(3.4g，6.9mmol)，随后加入MeNH2(6.9mL，13.8mmol，2.0M在CH2Cl2中)。所得溶液在室温下搅拌18小时(直至TLC分析显示反应完全)。所得混合物顺序用10％柠檬酸(3×20mL)，饱和NaHCO3水溶液(3×20mL)，和盐水(3×20mL)洗涤。干燥有机层(Na2SO4)，过滤，和减压下浓缩。粗产物通过快速色谱纯化，用CH2Cl2/MeOH(40∶1)洗脱得到1.0g(收率63％)固体。
步骤B向含有上述步骤A的N-保护酰胺(1.0g，4.35mmol)的圆底烧瓶内加入4NHCl/二噁烷(10mL)。将该混合物在室温下搅拌2小时。该混合物用Et2O(20mL)稀释且减压下浓缩。粗产物用Et2O(2×20mL)处理和减压下浓缩得到0.72g(收率约100％)的粗产物，其为HCl盐。该原料无需进一步纯化就可使用或定性。
制备例135-137按照制备例134的方法但利用市售的N-保护的氨基酸和胺，得到下表所列的胺盐酸盐产物。
制备例138 向3-氯苯甲醛(2.0g，14.2mmol)在THF(5mL)中的溶液内在0℃滴加LiN(TMS)2(17.0ml，1.0M in THF)且将所得溶液搅拌20分钟。滴加EtMgBr(6.0mL，3.0M in Et2O)且将该混合物回流24小时。将该混合物冷却至室温，倾入饱和NH4Cl水溶液(50mL)，并且随后用CH2Cl2(3×50体积)萃取。合并有机层且减压下浓缩。粗残余物与3M HCl(25mL)搅拌30分钟，随后水层用CH2Cl2(3×15mL)萃取且弃去有机层。将水层冷却至0℃且用固体NaOH片处理直至达到pH＝10。水层用CH2Cl2(3×15mL)萃取且合并有机层。有机层用盐水(1×25mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，和减压下浓缩得到1.6g(66％产率)的粗胺，其为油(MH+170)。测定该原料纯度为＞90％且无需进一步纯化就可使用。
制备例139-142按照制备例138所述的方法但用市售的醛和格氏试剂，得到下表所列的胺。
制备例143
步骤A2-(三氟乙酰基)噻吩(2mL，15.6mmol)，羟胺盐酸盐(2.2g，2eq)，二异丙基乙基胺(5.5mL，2当量)和MeOH(50mL)的混合物在回流下搅拌48-72小时，随后真空浓缩。残余物用EtOAc稀释，用10％KH2PO4洗涤且用Na2SO4(无水)干燥。过滤和浓缩得到所需肟(2.9g，96％)，其直接用于步骤B无需进一步纯化。
步骤B30分钟内向上述步骤A在TFA(20mL)中的混合物中滴加Zn粉(3g，3eq)。该混合物室温下搅拌过夜。过滤固体并在真空下减少该混合物。加入NaOH水溶液(2M)并且该混合物用CH2Cl2萃取数次。有机相用无水Na2SO4干燥，过滤和浓缩得到产物(1.4g，50％)。
制备例144-148按照制备例143所述的方法但利用所述的市售酮，得到下表所列的胺产物。
制备例149 步骤A向(D)-valinol(4.16g，40.3mmol)在CH2Cl2(60mL)中的溶液内在0℃下加入MgSO4(20g)，随后滴加3-氟苯甲醛(5.0g，40.3mmol)。将非均相溶液在0℃下搅拌2小时，随后升至室温并且搅拌过夜(14小时)。过滤该混合物且干燥剂用CH2Cl2(2×10mL)洗涤。滤液在减压下浓缩得到8.4g(100％)的无色油，其无需进一步纯化可用于下面的步骤。
步骤B向步骤A的亚胺(8.4g，40.2mmol)在CH2Cl2(60mL)中的溶液在室温下加入Et3N(6.2mL，44.5mmol)，随后滴加TMSCl(5.7mL，44.5mmol)。将该混合物在室温下搅拌6小时，过滤出生成的沉淀且用CH2Cl2(2×10mL)洗涤。合并的滤液在减压下浓缩且溶于Et2O/己烷(1∶1/150mL)。过滤出沉淀且滤液在减压下浓缩得到10.1g(89％)的保护亚胺，其为油。该原料可用于下面的步骤无需进一步纯化。
步骤C向EtI(4.0g，25.6mmol)在Et2O(40mL)中的溶液内在-78℃下加入t-BuLi(30.1mL，51.2mmol，1.7M in戊烷)并且将该混合物搅拌10分钟。该混合物升至室温，搅拌1小时，并且冷却至-40℃。将步骤B的亚胺(6.0g，21.4mmol)在Et2O(30mL)中的溶液经滴液漏斗滴加得到亮橙色混合物。该反应混合物在-40℃下搅拌搅拌1.5小时，加入3MHCl(50mL)并且令该混合物升至室温。加入水(50mL)且分离各层。水层用Et2O(2×30mL)萃取且合并有机层并弃去。水层冷却至0℃且仔细用固体NaOH片处理直至得到pH＝12。水层用Et2O(3×30mL)萃取且合并的层用盐水(1×30mL)洗涤。干燥有机层(Na2SO4)，过滤，和减压下浓缩得到4.8g(收率94％)的胺，其为红色油。该原料可用于下面的步骤无需进一步纯化。
步骤D向步骤C的胺(4.5g，18.8mmol)在MeOH(80mL)中的溶液内在室温下加入MeNH2(25mL，40％在水中)，随后加入H5IO6(14.0g，61.4mmol)在H2O(25mL)中的溶液。将该非均相混合物搅拌1.5小时(直至该反应通过TLC显示达到完全)并且过滤出沉淀。所得滤液用水(50mL)稀释且该混合物用Et2O(4×60mL)萃取。合并的有机层浓缩为约30mL的体积，加入3M HCl(75mL)。搅拌该混合物过夜(12小时在室温下)，浓缩该混合物除去挥发物。水层用Et2O(3×40mL)萃取且弃去有机层。水层冷却至0℃且小心用固体NaOH片处理直至达到pH约12。水层用Et2O(3×60mL)萃取且干燥合并的有机层(MgSO4)。有机层在减压下浓缩得到2.8g(收率97％)所需胺，其为黄色油[MH+＝154]。通过1H NMR这种化合物被证明是＞85％纯度并且无需进一步纯化就可使用。
制备例150-156按照制备例149所述的方法但利用市售的醛、氨基醇和有机锂试剂，得到光学纯的胺产物在下表中。
制备例157 按照已有方法制备该产物J.Med.Chem.1996，39，3319-3323。
制备例158 按照已有方法制备该产物J.Med.Chem.1996，39，3319-3323。
制备例159 按照已有方法制备该产物Chem.Pharm.Bull.1991，39，181-183。
制备例160 按照已有方法制备该产物Chem.Pharm.Bull.1991，39，181-183。
制备例161 按照已有方法制备该产物J.Med.Chem.1988，31，2176-2186。
制备例162 按照已有方法制备该产物J.Org.Chem.1978，43，892-898。
制备例163 按照已有方法制备该产物J.Org.Chem.1987，52，4437-4444。
制备例164
按照已有方法制备该产物Bull.Chem.Soc.Jpn.1962，35，11-16。
实施例500 基本上按照制备例34所述的方法(文献Farmaco Ed.Sci.；IT；32；1977；173-179所述)使用制备例34的产物和苄胺，应当得到该产物。
实施例501-828基本上按照与实施例500相同的方法使用制备例的产物和制备或市售胺，可以得到下表所列的产物。
虽然本发明已经结合上述具体实施方式
加以说明，其许多替换、改进和变化对于所属领域普通技术人员来说是显而易见的。这些替换、改进和变化落入本发明的实质和范围内。
权利要求
1.式(I)的化合物 或其药学可接受盐或溶剂化物，其中R1和R15相同或不同且各自独立地选自a)H，b)芳基，c)杂芳基，d)烷基，e)芳基烷基，f)杂芳基烷基，g)环烷基，h)杂环烷基，i)环烷基烷基和j)杂环烷基烷基，其中所述的芳基，杂芳基，烷基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，杂环烷基，环烷基烷基，和杂环烷基烷基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)卤素，b)CF3，c)COR13d)OH，e)NR13R14f)NO2，g)氰基，h)SO2OR13，i)-Si(烷基)，j)-Si(芳基)k)CO2R13l)CONR13R14，m)SO2NR13R14，n)SO2R13，o)-OR13，p)-O(C＝O)R13，q)-O(C＝O)NR13R14，r)-NR13COR14，和s)-NR13CO2R14；A选自 和 B选自 和 其中R2选自a)氢，b)OH，c)C(O)OH，d)SH，e)SO2NR13R14，f)NHC(O)R13，g)NHSO2NR13R14，h)NR13R14，i)NHSO2R13，j)C(O)NR13R14，k)C(O)NHOR13，l)C(O)NR13OH，m)OC(O)R13和n)选择性取代的杂环酸性官能团，条件是如果R2是SO2NR13R14，则R13和R14的至少一个必须是氢；R3和R4相同或不同且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)烷基，d)烷氧基，e)OH，f)CF3，g)OCF3，h)NO2，i)C(O)R13，j)C(O)OR13，k)C(O)NR13R14，l)SO(t)NR13R14，m)SO(t)R13，n)C(O)NR13OR14，o) p)氰基，q)芳基和r)杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基选择性地被一个或多个R9基团取代；R5和R6相同或不同且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)烷基，d)烷氧基，e)CF3，f)OCF3，g)NO2，h)C(O)R13i)C(O)OR13，j)C(O)NR13R14，k)SO(t)NR13R14，l)C(O)NR13OR14，m)氰基，n)芳基和o)杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基选择性地被一个或多个R9基团取代；R7和R8相同或不同且各自独立地选自a)H，b)烷基，c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，f)杂芳基烷基，g)环烷基，h)环烷基烷基，i)CO2R13，j)CONR13R14k)氟烷基，l)链炔基，m)链烯基，n)链炔基烷基，o)链烯基烷基和p)环烯基，其中所述的烷基，芳基，杂芳基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，环烷基烷基，氟烷基，链炔基，链烯基，链炔基烷基，链烯基烷基，和环烯基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)卤素，b)CF3，c)COR13d)OH，e)NR13R14，f)NO2，g)氰基，h)SO2OR13i)-Si(烷基)，j)-Si(芳基)，k)(R13)2R14Si，l)CO2R13，m)C(O)NR13R14，n)SO2NR13R14，o)SO2R13，p)-OR13q)-O(C＝O)R13，r)-O(C＝O)NR13R14，s)-NR13C(O)R14和t)-NR13CO2R14；R9选自a)R13；b)卤素；c)-CF3；d)-COR13；e)-OR13；f)-NR13R14；g)-NO2；h)氰基；i)-SO2R13；j)-SO2NR13R14；k)-NR13COR14；l)-CONR13R14；m)-NR13CO2R14；n)CO2R13，和o) R10和R11相同或不同并且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)CF3，d)OCF3，e)NR13R14，f)NR13C(O)NR13R14，g)OH，h)C(O)OR13，i)SH，j)SO(t)NR13R14k)SO2R13，l)NHC(O)R13，m)NHSO2NR13R14，n)NHSO2R13o)C(O)NR13R14，p)C(O)NR13OR14，q)OC(O)R13和r)氰基；R12选自a)氢，b)OC(O)R13，c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，f)环烷基，g)烷基，h)环烷基烷基和i)杂芳基烷基，其中所述的芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，烷基，环烷基烷基和杂芳基烷基选择性地被一个或多个R9基团取代；R13和R14相同或不同且各自独立地选自a)H，b)烷基，c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，f)杂芳基烷基，g)环烷基，h)环烷基烷基和i)氟烷基，其中所述的烷基，芳基，杂芳基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，环烷基烷基和氟烷基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素；或R13和R14当与其所连的原子一起构成3-7员杂环环时，其中当生成的环为6或7员杂环环时，该环选择性地含有1-2个独立选自O、S或N的附加杂原子，并且其中该杂环环选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素；n是0-6；m是1-5；p是0-4和t是1或2。
2.权利要求1的化合物，其中A选自 和 其中，R7选自H，CF3，氟烷基，烷基和环烷基；R8选自H，烷基和氟烷基；和R9选自H，F，Cl，Br，CF3，烷基和氟烷基。
3.权利要求1的化合物其中B选自 和 其中R2选自H，OH，NHC(O)R13和NHSO2R13；R3选自SO2NR13R14，NO2，氰基，C(O)NR13R14，SO2R13；和C(O)OR13；R4选自H，NO2，卤素，氰基，CH3和CF3；R5选自H，CF3，NO2，卤素和氰基；R6选自H，烷基和CF3，R10和R11相同或不同并且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)CF3，d)OCF3，e)NR13R14，f)NR13C(O)NR13R14，g)OH，h)C(O)OR13i)SH，j)SO(t)NR13R14k)SO2R13，l)NHC(O)R13，m)NHSO2NR13R14，n)NHSO2R13o)C(O)NR13R14，p)C(O)NR13OR14，q)OC(O)R13，r)COR13和t)氰基；R12选自氢和C(O)OR13；R13和R14相同或不同且各自独立地选自甲基，乙基和异丙基；R13和R14当与其所连的原子一起构成3-7员杂环环时，其中当生成的环为6或7员杂环环时，该环选择性地含有1-2个独立选自O、S或N的附加杂原子，并且其中该杂环环选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素。
4.权利要求1的化合物其中R1和R15相同或不同并且各自选自H，甲基，芳基和环己基。
5.权利要求1的化合物，其中A选自 和 其中，R7选自H，CF3，CF2CH3，甲基，乙基，异丙基，环丙基和叔丁基；R8是H和R9选自H，F，Cl，Br，CF3，烷基，和氟烷基。
6.权利要求1的化合物其中B是 其中R2选自H，OH，NHC(O)R13和NHSO2R13；R3选自SO2NR13R14，NO2，氰基，C(O)NR13R14，SO2R13；和C(O)OR13；R4选自H，NO2，卤素，氰基，CH3和CF3；R5选自H，CF3，NO2，卤素和氰基；R6选自H，烷基和CF3；和R13和R14相同或不同且各自独立地选自甲基，乙基和异丙基；或R13和R14当与其所连的原子一起构成3-7员杂环环时，其中当生成的环为6或7员杂环环时，该环选择性地含有1-2个独立选自O、S或N的附加杂原子，并且其中该杂环环选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素。
7.权利要求1的化合物，其中A选自 和 和B是 其中R2选自H，OH，NHC(O)R13和NHSO2R13；R3选自SO2NR13R14，C(O)NR13R14，SO2R13，NO2和氰基；R4选自H，NO2，CF3，CH3，卤素和氰基；R5选自H，卤素，NO2，氰基和CF3；R6选自H，CF3和烷基；R7选自H，CF3，CF2CH3，甲基，乙基，异丙基，环丙基和叔丁基；R8是H；R9选自H，F，Cl，Br，CF3，烷基，和氟烷基；和R13和R14各自独立地选自甲基和乙基。
8.权利要求1的化合物，其中A选自 和 和B是 其中，R2是-OH；R3是CONR13R14；R4选自H，CH3，卤素和CF3；R5选自H和氰基；R6选自H，CH3和CF3；和R13和R14各自是甲基。
9.权利要求1的化合物，其中所述的化合物选自
10.权利要求1的化合物，其中所述的化合物选自 和
11.权利要求1的化合物，其中所述的化合物选自 和
12.含有权利要求1的化合物和药学可接受载体的药物组合物。
13.权利要求1的化合物在需要这种治疗的患者中制备用于治疗趋化因子介导的疾病的药物中的用途，其中在该患者中所述的趋化因子结合CXCR2和/或CXCR1受体。
14.权利要求1的化合物在需要这种治疗的患者中制备用于治疗趋化因子介导的疾病的药物中的用途，其中在该患者中所述的趋化因子结合CXC受体。
15.权利要求13的用途，其中趋化因子介导的疾病选自牛皮癣，特应性皮炎，哮喘，慢性阻塞性肺病，成人呼吸窘迫综合征，关节炎，炎性肠病，节段性回肠炎，溃疡性结肠炎，脓毒性休克，内毒性休克，革兰氏阴性脓毒病，中毒性休克综合征，休克，心脏和肾脏再灌注损伤，肾小球性肾炎或血栓形成，阿尔茨海默氏病，移植物抗宿主反应，同种移植物排斥、疟疾、急性呼吸窘迫综合征、延迟型高血压反应、动脉粥样硬化和脑与心脏局部缺血。
16.权利要求1的化合物在需要这种治疗的患者中制备癌症的药物中的用途。
17.权利要求16的用途，其中该治疗进一步包括利用至少一种抗癌药和/或放射疗法。
18.权利要求17的用途，其中所述的抗癌药选自烷化剂，抗代谢物，天然产物及其衍生物，激素，抗激素，抗血管发生剂和甾类化合物(包括合成的类似物)，和合成物。
19.权利要求1的化合物在需要这种抑制的患者中制备抑制血管发生的药物中的用途。
20.权利要求19的用途，其中该治疗进一步包括至少一种已知的抗血管发生化合物。
21.权利要求20的用途，其中所述的抗血管发生化合物选自Marimastat，AG3340，Col-3，Neovastat，BMS-275291，酞胺哌啶酮，Squal胺，Endostatin，SU-5416，SU-6668，干扰素-α，抗VEGF抗体，EMD121974，CAI，白介素-12，IM862，血小板因子-4，Vitaxin，Angiostatin，苏拉明，TNP-470，PTK-787，ZD-6474，ZD-101，Bay129566，CGS27023A，VEGF受体激酶抑制剂，docetaxel，和紫杉酚。
22.利要求1的化合物在需要这种治疗的患者中制备疾病的药物中的用途，所述的齿龈炎、呼吸病毒、疱疹病毒、肝炎病毒、HIV、卡波济氏肉瘤有关病毒和动脉粥样硬化。
23.权利要求13的用途，其中所述的趋化因子介导的疾病是血管发生性眼部疾病。
24.权利要求23的用途，其中所述的疾病选自眼部炎症，早熟的视网膜病，糖尿病性视网膜病，黄斑变性和湿润型优先且角膜型新血管化。
25.权利要求16的用途，其中肿瘤类型是黑素瘤，胃癌或非小细胞肺癌。
26.权利要求25的用途，其中该治疗包括使用至少一种已知的抗癌药和/或放射疗法。
27.权利要求26的用途，其中所述的抗癌药选自烷化剂，抗代谢物，天然产物及其衍生物，激素，抗激素，抗血管发生剂和甾类化合物(包括合成的类似物)，和合成物。
28.权利要求27的用途，其中所述的抗血管发生化合物选自Marimastat，AG3340，Col-3，Neovastat，BMS-275291，酞胺哌啶酮，Squal胺，Endostatin，SU-5416，SU-6668，干扰素-α，抗VEGF抗体，EMD121974，CAI，白介素-12，IM862，血小板因子-4，Vitaxin，Angiostatin，苏拉明，TNP-470，PTK-787，ZD-6474，ZD-101，Bay129566，CGS27023A，VEGF受体激酶抑制剂，docetaxel，和紫杉酚。
全文摘要
本发明公开了式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。该化合物有效治疗趋化因子介导的疾病，例如急性和慢性炎性疾病和癌症。
文档编号A61P13/12GK1582280SQ03801923
公开日2005年2月16日 申请日期2003年1月3日 优先权日2002年1月4日
发明者A·G·塔维拉斯, M·德怀尔, 巢健萍, J·J·巴尔德温, R·J·默里特, 李革, J·朝, 郁有农 申请人:先灵公司, 法马科皮亚公司
技术领域：
本发明涉及新的取代的哒嗪二酮化合物，含有所述化合物的药物组合物，和所述的化合物在治疗CXC趋化因子介导的疾病。
背景技术：
趋化因子是趋化性细胞因子，其由多种细胞释放使巨噬细胞、T-细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞和内皮细胞吸引到炎症和肿瘤生长的位点。存在两类主要的趋化因子，CXC-趋化因子和CC-趋化因子。所述的种类依赖于前两个半胱氨酸是否被一个氨基酸分开(CXC-趋化因子)或者相邻(CC-趋化因子)。所述的CXC-趋化因子包括白介素-8(IL-8)，嗜中性粒细胞-活化蛋白质-1(NAP-1)，嗜中性粒细胞-活化蛋白质-2(NAP-2)，GROα，GROβ，GROγ，ENA-78，GCP-2，IP-10，MIG和PF4。CC趋化因子包括RANTES，MIP-1α，MIP-2β，单核细胞趋化性蛋白质-1(MCP-1)，MCP-2，MCP-3和eotaxin。已知所述的趋化因子家族的各成员结合至少一种趋化因子受体，并且CXC-趋化因子一般与受体的CXCR类的成员受体结合，并且CC-趋化因子与受体的CCR类结合。例如，IL-8与CXCR-1和CXCR-2受体结合。
由于CXC-趋化因子促进嗜中性粒细胞的蓄积和激活，这些趋化因子参与多种急性和慢性炎性疾病，包括牛皮癣和类风湿性关节炎。Baggiolini等，FEBS Lett.307，97(1992)；Miller等，Crit.Rev.Immunol.12，17(1992)；Oppenheim等，Annu.Fev.Immunol.9，617(1991)；Seitz等，J.Clin.Invest.87，463(1991)；Miller等，Am.Rev.Respir.Dis.146，427(1992)；Donnely等，Lancet 341，643(1993)。
ELRCXC趋化因子包括IL-8，GROα，GROβ，GROγ，NAP-2，和ENA-78(Strieter等1995 JBC 270 p.27348-57)也参与肿瘤血管发生(新血管生长)的诱导。所有这些趋化因子被确信是通过结合7种跨膜G-蛋白偶联受体CXCR2(也称作IL-8RB)产生其作用的，而IL-8也结合CXCR1(也称作IL-8RA)。由此，其血管发生活性归因于其结合并激活CXCR2，和可能CXCR1对于IL-8，表达在四周血管中血管内皮细胞(ECs)的表面上。
已经证实许多不同类型的肿瘤产生ELRCXC趋化因子并且其产生与更强侵害性的表型(Inoue等2000Clin Cancer Res 6 p.2104-2119)和不良预后(Yoneda等1998 J Nat Cancer Inst 90 p.447-454)有关。趋化因子是有效的趋化性因子并且已经证实ELRCXC趋化因子诱发EC趋化性。由此，这些趋化因子可能诱发内皮细胞向肿瘤内的生成位点的趋化性。这可能是肿瘤诱发血管发生的一个关键步骤。CXCR2的抑制剂或CXCR2和CXCR1的双重抑制剂应抑制ELRCXC趋化因子的血管发生活性并由此阻滞肿瘤的生长。已经证实这种抗肿瘤活性存在于IL-8(Arenberg等1996 J Clin Invest 97 p.2792-2802)，ENA-78(Arenberg等1998 J Clin Invest 102 p.465-72)和GROα(Haghnegahdar等J.Leukoc Biology 2000 67 p.53-62)的抗体。
另外证实许多肿瘤细胞表达CXCR2并由此当它们分泌ELRCXC趋化因子时肿瘤细胞也可以促进自身的生长。所以，伴随血管发生的减弱，CXCR2的抑制剂可以直接抑制肿瘤细胞的生长。
因此，所述的CXC-趋化因子受体代表了开发新的抗炎和抗肿瘤药物的有希望靶标。
仍然需要能够调制在CXC-趋化因子受体的活性的化合物。例如，与提高IL-8产生有关的条件(其导致嗜中性粒细胞和T-细胞子集进入炎症位点和肿瘤生长的趋化性)将受益于是IL-8受体结合的抑制剂的化合物。
发明概述本发明提供新的式(I)的化合物 (I)，
其药学可接受盐、溶剂化物、异构体或前药，其中R1和R15相同或不同且各自独立地选自a)H，b)芳基，c)杂芳基，d)烷基，e)芳基烷基，f)杂芳基烷基，g)环烷基，h)杂环烷基，i)环烷基烷基和j)杂环烷基烷基，其中所述的芳基，杂芳基，烷基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，杂环烷基，环烷基烷基，和杂环烷基烷基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)卤素，b)CF3，c)COR13d)OH，e)NR13R14f)NO2，g)氰基，h)SO2OR13，i)-Si(烷基)，j)-Si(芳基)k)CO2R13l)CONR13R14，m)SO2NR13R14，n)SO2R13，o)-OR13，p)-O(C＝O)R13，q)-O(C＝O)NR13R14，
r)-NR13COR14，和s)-NR13CO2R14；A选自
B选自 和
其中R2选自a)氢，b)OH，c)C(O)OH，d)SH，e)SO2NR13R14，f)NHC(O)R13，g)NHSO2NR13R14，h)NR13R14，i)NHSO2R13，j)C(O)NR13R14，k)C(O)NHOR13，l)C(O)NR13OH，m)OC(O)R13和n)选择性取代的杂环酸性官能团，条件是如果R2是SO2NR13R14，则R13和R14的至少一个必须是氢；R3和R4相同或不同且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)烷基，d)烷氧基，e)OH，f)CF3，g)OCF3，h)NO2，i)C(O)R13，j)C(O)OR13，k)C(O)NR13R14，l)SO(t)NR13R14，m)SO(t)R13，n)C(O)NR13OR14，
o) p)氰基，q)芳基和r)杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基选择性地被一个或多个R9基团取代；R5和R6相同或不同且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)烷基，d)烷氧基，e)CF3，f)OCF3，g)NO2，h)C(O)R13i)C(O)OR13，j)C(O)NR13R14，k)SO(t)NR13R14，l)C(O)NR13OR14，m)氰基，n)芳基和o)杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基选择性地被一个或多个R9基团取代；R7和R8相同或不同且各自独立地选自a)H，b)烷基，c)芳基，d)杂芳基，
e)芳基烷基，f)杂芳基烷基，g)环烷基，h)环烷基烷基，i)CO2R13，j)CONR13R14k)氟烷基，l)链炔基，m)链烯基，n)链炔基烷基，o)链烯基烷基和p)环烯基，其中所述的烷基，芳基，杂芳基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，环烷基烷基，氟烷基，链炔基，链烯基，链炔基烷基，链烯基烷基，和环烯基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)卤素，b)CF3，c)COR13d)OH，e)NR13R14，f)NO2，g)氰基，h)SO2OR13i)-Si(烷基)，j)-Si(芳基)，k)(R13)2R14Si，l)CO2R13，m)C(O)NR13R14，n)SO2NR13R14，o)SO2R13，p)-OR13q)-O(C＝O)R13，
r)-O(C＝O)NR13R14，s)-NR13C(O)R14和t)-NR13CO2R14；R9选自a)R13；b)卤素；c)-CF3；d)-COR13；e)-OR13；f)-NR13R14；g)-NO2；h)氰基；i)-SO2R13；j)-SO2NR13R14；k)-NR13COR14；l)-CONR13R14；m)-NR13CO2R14；n)CO2R13，和o) R10和R11相同或不同并且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)CF3，d)OCF3，e)NR13R14，f)NR13C(O)NR13R14，g)OH，
h)C(O)OR13，i)SH，j)SO(t)NR13R14k)SO2R13，l)NHC(O)R13，m)NHSO2NR13R14，n)NHSO2R13o)C(O)NR13R14，p)C(O)NR13OR14，q)OC(O)R13和r)氰基；R12选自a)氢，b)OC(O)R13，c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，f)环烷基，g)烷基，h)环烷基烷基和i)杂芳基烷基，其中所述的芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，烷基，环烷基烷基和杂芳基烷基选择性地被一个或多个R9基团取代；R13和R14相同或不同且各自独立地选自a)H，b)烷基，c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，f)杂芳基烷基，g)环烷基，h)环烷基烷基和
i)氟烷基，其中所述的烷基，芳基，杂芳基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，环烷基烷基和氟烷基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素；或R13和R14当与其所连的原子一起构成3-7员杂环环时，其中当生成的环为6或7员杂环环时，该环选择性地含有1-2个独立选自O、S或N的附加杂原子，并且其中该杂环环选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素；n是0-6；m是1-5；p是0-4和
t是1或2。
本发明的另一方面是含有与药学可接受载体或稀释剂组合或结合的式(I)的化合物的药物组合物。
本发明的另一方面是一种治疗需要其的患者(例如哺乳动物例如人类)中趋化因子介导的疾病的方法，包括给该患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。
本发明的另一方面是一种在需要其的患者中治疗趋化因子介导的疾病的方法，其中在该患者(例如，哺乳动物，例如人类)中所述的趋化因子结合CXCR2和/或CXCR1受体，该方法包括给该患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。
本发明的另一方面一种在需要其的患者中治疗趋化因子介导的疾病的方法，其中在该患者(例如，哺乳动物，例如人类)中所述的趋化因子结合CXC受体，该方法包括给该患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。
趋化因子介导的疾病的实例包括牛皮癣，特应性皮炎，哮喘，慢性阻塞性肺病，成人呼吸窘迫综合征，关节炎，炎性肠病，节段性回肠炎，溃疡性结肠炎，脓毒性休克，内毒性休克，革兰氏阴性脓毒病，中毒性休克综合征，休克，心脏和肾脏再灌注损伤，肾小球性肾炎或血栓形成，阿尔茨海默氏病，移植物抗宿主反应，同种移植物排斥和疟疾。血管发生性眼病(例如，眼部炎症(例如，眼色素层炎)，早熟的视网膜病，糖尿病性视网膜病，黄斑变性和湿润型优先且角膜型新血管化)是趋化因子介导的疾病的另一个实例。
本发明的另一方面是一种治疗需要这种治疗的患者中的癌症的方法，包括给该患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。
本发明的另一方面是一种治疗需要这种治疗的患者中的癌症的方法，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，并且施用治疗有效量的至少一种已知抗癌药和/或放射疗法。
本发明的另一方面是一种治疗需要这种治疗的患者中的癌症的方法，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，和施用治疗有效量的至少一种已知抗癌药和/或放射疗法，其中所述的抗癌药物选自烷化剂，抗代谢药物，天然产物及其衍生物，激素，抗激素，抗血管发生剂和甾类化合物(包括合成的类似物)，和合成物。
本发明的另一方面是一种在需要这种抑制作用的患者中抑制血管发生的方法，包括给该患者施用血管发生抑制量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。
本发明的另一方面是一种在需要这种抑制作用的患者中抑制血管发生的方法，包括给该患者施用血管发生抑制量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，并施用至少一种抗血管发生的化合物。
本发明的另一方面是一种在需要这种抑制作用的患者中抑制血管发生的方法，包括给该患者施用血管发生抑制量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，并施用至少一种已知的抗血管发生的化合物，其中抗血管发生的化合物是选自Marimastat，AG3340，Col-3，Neovastat，BMS-275291，酞胺哌啶酮，Squal胺，Endostatin，SU-5416，SU-6668，干扰素-α，抗VEGF抗体，EMD121974，CAI，白介素-12，IM862，血小板因子-4，Vitaxin，Angiostatin，苏拉明，TNP-470，PTK-787，ZD-6474，ZD-101，Bay 129566，CGS27023A，VEGF受体激酶抑制剂，docetaxel(例如，Taxotere)，和紫杉酚(例如，紫杉醇)。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗疾病的方法，该疾病选自齿龈炎、呼吸病毒、疱疹病毒、肝炎病毒、HIV、卡波济氏肉瘤有关病毒和动脉粥样硬化，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗血管生成型眼部疾病的方法，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗血管生成型眼部疾病的方法，包括给该患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，其中该血管生成型眼部疾病选自眼部炎症(例如，眼色素层炎)，早熟的视网膜病，糖尿病性视网膜病，黄斑变性和湿润型优先且角膜型新血管化。
本发明的另一方面是一种治疗需要这种治疗的患者中的癌症的方法，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，和其中被治疗的癌症选自黑素瘤，胃癌或非小细胞肺癌。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗癌症的方法，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，并且施用至少一种已知抗癌药和/或放射疗法，和其中被治疗的癌症选自黑素瘤，胃癌或非小细胞肺癌。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗癌症的方法，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，并且施用至少一种已知的抗癌药和/或放射疗法，其中被治疗的癌症选自黑素瘤，胃癌或非小细胞肺癌，和其中所述的抗癌药选自烷基烷化剂，抗代谢药物，天然产物及其衍生物，激素，抗激素，抗血管发生剂和甾类化合物(包括合成的类似物)，和合成物。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗癌症的方法，包括给该患者施用治疗有效量的含有式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物，并且施用至少一种已知的抗癌药和/或放射疗法，其中被治疗的癌症选自黑素瘤，胃癌或非小细胞肺癌，和其中所述的抗癌药选自烷基烷化剂，抗代谢药物，天然产物及其衍生物，激素，抗激素，抗血管发生剂和甾类化合物(包括合成的类似物)，和合成物，和其中所述的抗血管发生药物选自Marimastat，AG3340，Col-3，Neovastat，BMS-275291，酞胺哌啶酮，Squal胺，Endostatin，SU-5416，SU-6668，干扰素-α，抗VEGF抗体，EMD121974，CAI，白介素-12，IM862，血小板因子-4，Vitaxin，Angiostatin，苏拉明，TNP-470，PTK-787，ZD-6474，ZD-101，Bay 129566，CGS27023A，VEGF受体激酶抑制剂，docetaxel(例如，Taxotere)，和紫杉酚(例如，紫杉醇)。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗癌症的方法，包括给该患者并行地或顺序地施用，治疗有效量的(a)式(I)的化合物和(b)微管作用剂或抗肿瘤药物或抗血管生成药物或VEGF受体激酶抑制剂或VEGF受体的抗体或干扰素，和/或c)辐射。
本发明的另一方面是一种在需要这种治疗的患者中治疗癌症的方法，包括给该患者并行或顺序地施用有效量的(a)式(I)的化合物和(b)微管作用剂(例如，紫杉酚)。
详述除非另外说明，下列定义适用于整个说明书和权利要求书。这些定义无论在自己单独使用或与其他术语合用时均适用。所以″烷基″的定义适用于″烷基″以及″烷氧基″的″烷基″部分等。
当任何变量(例如，芳基，R2)以任意组成出现一次以上时，其定义在各种情况中在其定义上独立于各其他情况。另外，取代基和/或变量的组合只有在这种组合得到稳定的化合物下才被允许。
烷基代表具有指定碳原子数目的直链或支链饱和烃链。虽然碳原子的数目没有说明，一般为1-20个碳。
术语卤素或卤代是指氟、氯、溴和碘。
术语氟烷基代表具有指定碳原子数目的直链或支链饱和烃链，被一个或多个氟原子取代。虽然取碳原子的数目没有说明，一般为1-20个碳。
芳基代表具有6-14个碳原子和具有至少一种苯型环的碳环基团，并且该碳环的所有可利用可取代芳族碳原子是可能的连接位点。实例包括，但不限于，苯基，萘基，茚基，四氢萘基，二氢茚基，蒽基，芴基等。芳基可以被1、2和3个独立选自下列的取代基取代低级烷基，卤素，氰基，硝基，卤代烷基，羟基，烷氧基，羧基，羧基烷基，甲酰胺，巯基，氢硫基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，磺酰基，磺酰氨基，芳基和杂芳基。
芳烷基-代表含有经低级烷基连接的芳基的部分；烷基芳基-代表含有经芳基连接的低级烷基的部分；环烷基-代表含有3-8个碳原子、优选5和6个碳原子的饱和碳环，其可以被取代。
术语杂环或杂环环定义为3-7个原子且其中含有1-3选自N、O和S的杂原子的全部非芳族杂环环，例如氧杂环丙烷，氧杂环丁烷，四氢呋喃，四氢吡喃，吡咯烷，哌啶，哌嗪，四氢吡啶，四氢嘧啶，四氢噻吩，四氢噻喃，吗啉，乙内酰脲，戊内酰脲，吡咯烷酮等。
术语杂环酸性官能团用于包括基团例如，吡咯，咪唑，三唑，四唑等。此类基团可以未被取代或被1、2或3个独立选自下列的取代基取代低级烷基，卤素，氰基，硝基，卤代烷基，羟基，烷氧基，羧基，羧基烷基，甲酰胺，氢硫基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，磺酰基，磺酰氨基，芳基和杂芳基。
杂芳基是指由1-3个独立选自-O-，-S和-N＝的杂原子组成的5-或10-员单或苯并稠合的芳族环，条件是该环不具有相邻的氧和/或硫原子。所述的杂芳基可以被1、2和3个独立选自下列的取代基取代低级烷基，卤素，氰基，硝基，卤代烷基，羟基，烷氧基，羧基，羧基烷基，甲酰胺，氢硫基，氨基，烷基氨基和二烷基氨基。
N-氧化物可以在R取代基中存在的叔氮上形成，或在杂芳基环取代基中的在＝N-上形成并且含在式(I)的化合物中。
另外本发明包括式I的化合物的互变异构体、对映异构体和其他光学异构体，以及其药学可接受盐和溶剂化物。
在此使用的术语″前药″，代表在体内迅速转化为上式的母体化合物的化合物，例如，通过在血液中水解。全面的讨论参见T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems，Vol.14 of the A.C.S.Symposium Series，和Edward B.Roche编辑，Bioreversible Carriers inDrug Design，American Pharmaceutical Association和Pergamon Press，1987，两者在此引入作为参考。
在此使用的术语″组合物″包括含有指定量的指定组分的产品，以及直接或接近得自指定量的指定组分的组合的任何产品。
在此使用的″一个或多个″的实例包括(a)1，2或3，(b)1或2，和(c)1。
在此使用的″至少一种″的实例包括(a)1，2或3，(b)1或2，和(c)1。
下列术语在此可以参考下列缩写四氢呋喃(THF)，乙醇(EtOH)，甲醇(MeOH)，乙酸(HOAc或AcOH)，乙酸乙酯(EtOAc)，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，三氟乙酸(TFA)，三氟乙酸酐(TFAA)，1-羟基苯并三唑(HOBT)，间氯过苯甲酸(MCPBA)，三乙胺(Et3N)，乙醚(Et2O)，氯甲酸乙酯(OLCO2Et)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(DEC)，N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)，氢氧化钠(NaOH)，硫酸镁(MgSO4)，二氯甲烷(CH2Cl2)，氢氧化铵(NH4OH)，硫酸钠(Na2SO4)，薄层层析(TLC)。
在一组优选的式(I)的化合物中，A选自
其中，R7和R8相同或不同且各自独立地选自a)H，b)烷基，c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，
f)杂芳基烷基，g)环烷基，h)环烷基烷基，i)CO2R13，j)CONR13R14，k)氟烷基，l)链炔基，m)链烯基，n)链炔基烷基，o)链烯基烷基和p)环烯基，其中所述的烷基，芳基，杂芳基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，环烷基烷基，氟烷基，链炔基，链烯基，链炔基烷基，链烯基烷基和环烯基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)氰基；b)CO2R13；c)C(O)NR13R14；d)SO2NR13R14，e)NO2；f)CF3；g)-OR13；h)-NR13R14；i)-O(C＝O)R13；j)-O(C＝O)NR13R14，和k)卤素；R9选自a)R13b)卤素，c)-CF3，d)-COR13，e)-OR13，f)-NR13R14，
g)-NO2，h)氰基，i)-SO2R13，j)-SO2NR13R14，k)-NR13COR14，l)-CONR13R14，m)-NR13CO2R14，n)CO2R13和 B选自 和
其中，R2选自a)氢，b)OH，c)C(O)OH，d)SH，e)SO2NR13R14，f)NHC(O)R13，g)NHSO2NR13R14，h)NR13R14，i)NHSO2R13，j)C(O)NR13R14，k)C(O)NHOR13，l)C(O)NR13OH，m)OC(O)R13和n)选择性取代的杂环酸性官能团，条件是如果R2是SO2NR13R14，R13和R14的至少一个必须氢；R3和R4相同或不同且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)烷基，d)烷氧基，e)OH，f)CF3，g)OCF3，h)NO2，i)C(O)R13，j)C(O)OR13，k)C(O)NR13R14，l)SO(t)NR13R14，m)SO(t)R13，n)C(O)NR13OR14，
o) p)氰基，q)芳基和r)杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基选择性地被一个或多个R9基团取代；R5和R6相同或不同且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)烷基，d)烷氧基，e)CF3，f)OCF3，g)NO2，h)C(O)R13，i)C(O)OR13，j)C(O)NR13R14，k)SO(t)NR13R14，l)C(O)NR13OR14，m)氰基，n)芳基和o)杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基选择性地被一个或多个R9基团取代；R10和R11相同或不同且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)CF3，d)OCF3，e)NR13R14，
f)NR13C(O)NR13R14，g)OH，h)C(O)OR13i)SH，j)SO(t)R13R14，k)SO2R13，l)NHC(O)R13，m)NHSO2NR13R14，n)NHSO2R13，o)C(O)NR13R14，p)C(O)NR13OR14，q)OC(O)R13和r)氰基；R12选自a)氢，b)OC(O)R13c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，f)环烷基，g)烷基，h)环烷基烷基和i)杂芳基烷基，其中所述的芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，烷基，环烷基烷基或杂芳基烷基选择性地被一个或多个R9基团取代；R13和R14相同或不同且各自独立地选自a)H；b)烷基，c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，f)杂芳基烷基，
g)环烷基，h)环烷基烷基和i)氟烷基，其中所述的烷基，芳基，杂芳基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，环烷基烷基和氟烷基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素或R13和R14当与其所连的原子一起构成3-7员杂环环时，其中当形成的环是6或7员杂环环，所述的环选择性地含有1-2个独立选自O、S或N的附加杂原子和其中所述的杂环环可以被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素；n是0-6；
m是1-5；p是0-4和t是1或2。
优选地，R1和R15相同或不同并且各自选自H，甲基，芳基和环己基。
更优选，A选自
其中，R7和R8相同或不同且各自独立地选自H，烷基，氟烷基例如CF3和CF2CH3，环烷基和环烷基烷基，例如，甲基，乙基，叔丁基，异丙基，环丙基，环丙基甲基和环己基和R9选自H，卤素(例如溴，氟或氯)，CH3，CF3，氟烷基，氰基，-OCH3和NO2。
更优选，B选自 其中R2选自H，OH，NHC(O)R13和NHSO2R13；R3选自SO2NR13R14，NO2，氰基，C(O)NR13R14，SO2R13；和C(O)OR13；R4选自H，NO2，卤素，氰基，CH3和CF3；R5选自H，CF3，NO2，卤素和氰基；R6选自H，烷基和CF3；R10和R11相同或不同并且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)CF3，d)OCF3，e)NR13R14，f)NR13C(O)NR13R14，
g)OH，h)C(O)OR13i)SH，j)SO(t)NR13R14，k)SO2R13，l)NHC(O)R13，m)NHSO2NR13R14，n)NHSO2R13，o)C(O)NR13R14，p)C(O)NR13OR14，q)OC(O)R13r)COR13s)OR13和t)氰基；R12选自氢和C(O)OR13；R13和R14相同或不同且各自独立地选自甲基，乙基和异丙基；或R13和R14当与其所连的原子一起构成3-7员杂环环时，其中当形成的环是6或7员杂环环时，所述的环选择性地含有1-2个独立选自O、S或N的附加杂原子和其中所述的杂环环可以被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素。
特别优选，A选自
其中，R7选自H，CF3，氟烷基，烷基和环烷基；R3选自H，烷基和氟烷基；R9选自H，F，Cl，Br，CF3，烷基和氟烷基。
仍然更优选，A选自
其中，R7选自H，CF3，CF2CH3，甲基，乙基，异丙基，环丙基和叔丁基；R8是HR9选自H，F，Cl，Br，CF3，烷基和氟烷基；和B是 其中R2选自H，OH，NHC(O)R13和NHSO2R13；R3选自SO2NR13R14，NO2，氰基，C(O)NR13R14，SO2R13；和C(O)OR13；R4选自H，NO2，卤素，氰基，CH3和CF3；R5选自H，CF3，NO2，卤素和氰基；R6选自H，烷基和CF3；和R13和R14相同或不同且各自独立地选自甲基，乙基和异丙基；或R13和R14当与其所连的原子一起构成3-7员杂环环时，其中当形成的环是6或7员杂环环时，所述的环选择性地含有1-2个独立选自O、S或N的附加杂原子，并且其中所述的杂环环可以被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，
c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素。
仍然更优选，A选自 和B是 其中R2选自H，OH，NHC(O)R13和NHSO2R13；R3选自SO2NR13R14，C(O)NR13R14，SO2R13，NO2或氰基；R4选自H，NO2，CF3，CH3，卤素和氰基，R5选自H，卤素，NO2，氰基和CF3；R6选自H，CF3和烷基；R7选自H，CF3，CF2CH3，甲基，乙基，异丙基，环丙基和叔丁基；
R8是H；R9选自H，F，Cl，Br，CF3，烷基和氟烷基；和R13和R14各自独立地选自甲基和乙基。
首选，A选自 和B是 其中，
R2是-OH；R3是CONR13R14；R4选自H，CH3，卤素和CF3；R5选自H和氰基；R6选自H，CH3和CF3；和R13和R14分别是甲基。
本发明的代表化合物如下所列
本发明的优选化合物如下所列
本发明的更优选化合物如下所列
对于具有至少一个不对称碳原子的本发明化合物，所有异构体，包括非对映异构体、对映异构体和旋光异构体，被考虑是本发明的组成部分。本发明包括纯净形式和混和形式(包括消旋混合物)的d和l异构体。异构体可以利用常规技术制备，或者通过分离式(I)的化合物的异构体获得。
式(I)的化合物可以存在非溶剂化和溶剂化形式，包括水合形式。通常，与药学可接受溶剂例如水、乙醇等的溶剂化形式等同于本发明目的的非溶剂化形式。
式(I)的化合物可以与有机和无机酸或碱形成药学可接受盐。适合形成盐的碱的实例包括但不限于氢氧化钠，氢氧化锂，氢氧化钾和氢氧化钙。酚类的盐可以通过加热酸化合物与上述碱按照所属领域技术人员熟知的方法来制成。适合成盐的酸的实例是盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、甲磺酸和其他所属领域技术人员已知的无机酸和羧酸。所述的盐通过将游离碱与足够量的所需酸以常规方式接触来制成盐。通过用适当稀释碱水溶液处理盐可以生成游离碱形式，例如稀释的氢氧化钠，氢氧化锂，氢氧化钾，氢氧化钙，碳酸钾，碳酸氢铵或钠的水溶液。中性形式在某些物理性质上多少不同于其各自的盐形式，例如在极性溶剂中的溶解度，但盐也等同于其各自符合本发明目的的中性形式。
为了从本发明的化合物制备药物组合物，惰性、药学可接受载体可以是固体或者液体。固体形式制剂包括散剂、片剂、可分散颗粒剂、胶囊、扁囊和栓剂。散剂和片剂可以含有约5-约95％活性成分。适当的固体载体是所属领域已知的，例如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、蔗糖或乳糖。片剂、散剂、扁囊和胶囊可以用作适合口服给药的固体剂型。药学可接受载体的实例和不同组合物的制备方法可以参见A.Gennaro(ed.)，Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania。
液体制剂包括溶液、混悬液和乳液。作为实例可以提及用于非肠道注射的水或水-丙二醇溶液或添加了甜味剂和遮光剂的口服溶液、混悬液和乳液。液体制剂还可以包括鼻内给药的溶液。
适合吸入的气雾剂制剂可以包括溶液或粉末形式的固体，其可以与药学可接受载体组合，例如惰性压缩气体，例如，氮。
另外包括可在使用之前立刻转化为液体制剂用于口服或非肠道给药的固体制剂。此类液体剂型包括溶液、混悬液和乳液。
本发明的化合物还可以经皮给药。透皮组合物可以采取霜剂、洗剂、气雾剂和/或乳液的形式并且可以含在所属领域常用于此目的的基质或储库型的透皮贴剂中。
本发明的化合物还可以在手术后直接用于肿瘤部位，例如，在海绵制品。
优选化合物经口服给药。
优选地，该药学制剂是单位剂型。以这种形式，制剂再分为适当规模的含有适量活性成分的单位剂型，例如，获得所需目的的有效量。
活性化合物在制剂的单位剂型中的量可以在约0.01mg-约1000mg，优选约0.01mg-约750mg，更优选约0.01mg-约500mg，和首选约0.01mg-约250mg之间按照特定用途来改变和调整。
所用的准确剂量可以根据患者的需要和被治疗病症的严重性来变化。在具体情况中确定适当剂量方案属于所属领域专业人员的范畴。为了方便，全部剂量可以划分且分次在1天内根据需要给药。
本发明的化合物和/或其药学可接受盐的量和频率应根据主治医生在考虑多种因素例如患者的年龄、状况和体重以及被治疗症状的严重性后的判断来调整。口服给药的典型推荐日剂量可以在约0.04mg/天-约4000mg/天内变化，分2-4次给药。
本发明的另一方面是一种治疗癌症的方法，包括给需要其的患者同时或顺序施用治疗有效量的(a)式(I)的化合物和(b)化疗药(即抗肿瘤药，微管作用剂或抗血管发生药)。
在一优选的实施方式中，式(I)的化合物与下列一种抗肿瘤药组合gemcitabine，紫杉酚(Taxol)，5-氟尿嘧啶(5-FU)，环磷酰胺(Cytoxan)，替莫泊芬，taxotere或长春新碱。
可以用作化疗药的化合物(抗肿瘤药)的种类包括烷化剂，抗代谢物，天然产物及其衍生物，激素，抗激素，抗血管发生剂和甾类化合物(包括合成的类似物)，和合成物。这些种类中的化合物的实例如下所述。
烷化剂(包括氮芥，亚乙基亚胺衍生物，烷基磺酸盐，nitrosoureas和三氮烯类)尿嘧啶氮芥，氮芥，环磷酰胺(Cytoxan)，异环磷酰胺，美法仑，苯丁酸氮芥，溴丙哌嗪，三亚乙基-蜜胺，三亚乙基硫代磷酰胺，白消安，卡氮芥，罗氮芥，链脲霉素，达卡巴嗪，和替莫唑胺。
抗代谢物(包括叶酸拮抗剂，嘧啶类似物，嘌呤类似物和腺嘌呤脱氨基酶抑制剂)甲氨喋呤，5-氟尿嘧啶，氟尿苷，阿糖胞苷，6-巯基嘌呤，6-硫代鸟嘌呤，Fludarabine phosphate，Pentostatine，和Gemcitabine。
天然产物及其衍生物(包括长春生物碱，抗肿瘤抗体，酶，淋巴因子和epipodophyllotoxins)长春碱，长春新碱，长春碱酰胺，博莱霉素，放线菌素，柔红霉素，阿霉素，表柔比星，伊达柔霉素，紫杉酚(紫杉酚商购为Taxon和在下面标题为″微管作用剂″中详细描述)，光辉霉素，Deoxyco-formycin，丝裂霉素-C，L-天门冬酰胺酶，干扰素(尤其IFN-α)，依托泊甙，和替尼泊苷。
激素和甾类化合物(包括合成类似物)17α-乙炔雌二醇，二乙基己烯雌酚，睾酮，强的松，氟羟甲基睾酮，屈他雄酮丙酸盐，睾内酯，Megestrolacetate，他莫昔芬，甲基强的松龙，甲基-睾酮，强的松龙，去炎松，三对甲氧苯氯乙烯，羟孕酮，氨鲁米特，雌莫司汀，乙酸甲羟孕酮，Leuprolide，氟他胺，Toremifene，Zoladex。
合成物(包括无机复合物例如铂螯合络合物)顺铂，卡铂，羟脲，安吖啶，丙卡巴肼，米托坦，米托蒽醌，左旋咪唑，和六甲蜜胺。
抗血管发生药包括Marimastat，AG3340，Col-3，Neovastat，BMS-275291，酞胺哌啶酮，Squal胺，Endostatin，SU-5416，SU-6668，干扰素-α，抗VEGF抗体，EMD121974，CAI，白介素-12，IM862，血小板因子-4，Vitaxin，Angiostatin，苏拉明，TNP-470，PTK-787，ZD-6474，ZD-101，Bay 129566，CGS27023A，taxotere和紫杉醇。
大多数的此类化疗药的安全和有效的给药方法是所属领域技术人员熟知的。此外，其给药公开在标准文献中。例如，许多化疗药的给药公开在″Physicians′Desk Reference″(PDR)，例如，1996编辑(MedicalEconomics Company，Montvale，NJ 07645-1742，USA)；其内容在此引入作为参考。
在此使用的微管作用剂是通过影响微管形成和/或作用干扰细胞有丝分裂的化合物，即，具有抗有丝分裂作用。此类药物可以是，例如，微管稳定剂或破坏微管形成的药剂。
适用于本发明的微管作用剂是所属领域技术人员熟知的并且包括，但不限于allocolchicine(NSC 406042)，Halichondrin B(NSC 609395)，秋水仙素(NSC 757)，秋水仙素衍生物(例如，NSC 33410)，dolastatin10(NSC 376128)，美坦素(NSC 153858)，rhizoxin(NSC 332598)，紫杉酚(Taxol，NSC 125973)，紫杉酚衍生物(例如，衍生物(例如，NSC608832)，硫代秋水仙素(NSC 361792)，三苯甲基半胱氨酸(NSC 83265)，硫酸长春碱(NSC 49842)，硫酸长春新碱(NSC 67574)，epothilone A，epothilone，和discodermolide(参见Service，(1996)Science，2742009)雌莫司汀，nocodazole，MAP4等。此类药物的实例还在所述的科技和专利文献中作了描述，参见，例如，Bulinski(1997)J.Cell Sci.1103055-3064；Panda(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9410560-10564；Muhlradt(1997)Cancer Res.573344-3346；Nicolaou(1997)Nature 387268-272；Vasquez(1997)Mol.Biol.Cell.8973-985；Panda(1996)J.Biol.Chem.27129807-29812。
特别优选的药物是具有紫杉酚样活性的化合物。这些包括，但不限于紫杉酚和紫杉酚衍生物(紫杉酚样化合物)和类似物。紫杉酚及其衍生物是可商购的。此外，制备紫杉酚和紫杉酚衍生物和类似物的方法是所属领域技术人员熟知的(参见，例如，美国专利Nos5,569,729；5,565,478；5,530,020；5,527,924；5,508,447；5,489,589；5,488,116；5,484,809；5,478,854；5,478,736；5,475,120；5,468,769；5,461,169；5,440,057；5,422,364；5,411,984；5,405,972；和5,296,506)。
更加具体地，在此使用的术语″紫杉酚″是指可商购的Taxol(NSC号125973)。Taxol通过增强微管蛋白部分聚合为无法识别有丝分裂的适当结构的稳定微管束来抑制eukaryotic细胞复制。在多种可商购的化疗药中，紫杉酚令人感兴趣，因为其在临床实验中对药物难治的肿瘤的有效性，包括卵巢和乳腺肿瘤(Hawkins(1992)Oncology，617-23，Horwitz(1992)Trends Pharmacol.Sci.13134-146，Rowinsky(1990)J.Natl.Canc.Inst.821247-1259)。
其他微管作用剂可以利用一种所属领域已知的此类实验来评估，例如，测定紫杉酚类似物的微管蛋白聚合活性的半自动分析法结合测量这些化合物阻滞细胞处于有丝分裂的潜能的细胞使用相(参见Lopes(1997)Cancer Chemother.Pharmacol.4137-47)。
通常，通过使细胞与该化合物接触且测定细胞周期是否被破坏、特别是通过抑制有丝分裂活动来测定试验化合物的活性。这样的抑制作用可以由有丝分裂器官的破裂来介导的，例如，正常纺锤形成的破坏。有丝分裂被打破的细胞的特征在于改变了形态(例如，微管收缩，染色体数量增加等)。
在一个优选实施方式中，对具有可能的微管蛋白聚合活性的化合物进行体外筛选。在一个优选实施方式中，化合物用培养的WR21细胞(衍生自69-2 wap-ras小鼠系)筛选对增殖的抑制作用和/或改变了的细胞形态，特别是微管收缩。试验阳性的化合物的体内筛选可以利用携带WR21肿瘤细胞的小鼠进行。这种筛选方法的详细方案由Porter(1995)Lab.Anim.Sci.，45(2)145-150公开。
筛选化合物的所需活性的其他方法是所属领域技术人员熟知的。通常，此类实验包括检测对微管装配和/或分解的抑制作用。微管装配的使用由例如，Gaskin等(1974)J.Molec.Biol.，89737-758公开。美国专利5,569,720也提供了对于具有紫杉酚样活性的化合物的体内和体外实验。
上述微管作用剂的安全且有效的给药方法是所属领域技术人员熟知的。此外，其给药记载在标准文献中。例如，许多化疗药的给药公开在″Physicians′Desk Reference″(PDR)，例如，1996编辑(MedicalEconomics Company，Montvale，NJ 07645-1742，USA)；其内容在此引入作为参考。
式(I)的化合物和化疗药和/或放射疗法的给药量和频率根据根据主治医生(医师)在考虑多种因素例如患者的年龄、状况和体重以及被治疗症状的严重性后的判断来调整。式(I)的化合物的剂量方案对于口服给药可以是10mg-2000mg/天，优选10-1000mg/天，更优选50-600mg/天，分2-4(优选2)次给药，从而阻断肿瘤生长。还可以利用限期疗法(例如，三周间隔一周或四周间隔三周)。
所述的化疗药和/或放射疗法可以按照所属领域熟知的治疗方案实施。对于所属领域技术人员显而易见的是，化疗药和/或放射疗法的施用可以依赖于被治疗疾病和化疗药和/或放射疗法对这些疾病的已知作用来改变。另外，根据专业临床人员的知识，治疗方案(例如，剂量和给药次数)可以根据观察到的所给治疗剂(即，抗肿瘤药或放射)对患者的效果，和观察到的该疾病对所给治疗剂的反应来调整。
在本发明的方法中，式(I)的化合物同时或顺序与化疗药和/或放射一起施用。因此，例如，化疗药和式(I)的化合物，或放射和式(I)的化合物，不一定同时或基本上同时给药。同时和基本上同时给药的优点是专业临床人员的决定范围内。
另外，通常，式(I)的化合物和化疗药不是以同一药物组合物给药，并且由于不同的物理和化学性质，可能不得不通过不同途径给药。例如，式(I)的化合物可以经口服给药来产生和保持良好的血液水平，而化疗药可以经静脉内给药。可能的话，同一药物组合物的给药方式和给药的正确性的判断属于专业临床人员的知识。初始给药可以按照所属领域已确立的方案进行，并且随后，基于观察到的效果，专业临床人员可以改变给药的剂量、方式和给药的次数。
对式(I)的化合物和化疗药和/或放射的具体选择应依赖于主治医师的诊断及其对患者状况和适当治疗方案的判断。
式(I)的化合物和化疗药和/或放射可以并行(例如，同时，基本上同时或在同一治疗方案中)或顺序施用，这依赖于增殖性疾病的性质、患者的状况和与式(I)的化合物联合施用的化疗药和/或放射的实际选择(即，在单一治疗方案中)。
如果式(I)的化合物和化疗药和/或放射不是同时或基本上同时给药，则式(I)的化合物和化疗药和/或放射的初始给药次序，可能并不重要。所以，式(I)的化合物可以首先给药，随后施用化疗药和/或放射；或化疗药和/或放射可以首先给药，随后施用式(I)的化合物。这种改变的给药可以在一个治疗方案中反复进行。在治疗方案中各治疗剂的给药顺序和给药反复次数的确定属于专业医师在评价被治疗疾病和患者状况的知识的范畴内。例如，化疗药和/或放射可以首先给药，尤其是如果它是细胞毒性药物，并且随后施用式(I)的化合物继续治疗，如果已测定出优越性，随后施用化疗药和/或放射，并且继续如此直至完成该治疗方案。
所以，根据经验和常识，主治医师可以根据个体患者的需要改变各方案中的给药组分(治疗剂--即，式(I)的化合物，化疗药或放射)，如果该治疗有益。
主治医师，在判断该治疗在所施用的剂量下是否有效，应考虑患者的整体情况以及更多明确的迹象，例如疾病有关的症状的减轻、肿瘤生长的抑制、肿瘤的实际皱缩，或转移的抑制。通过标准方法可以测量肿瘤的大小，例如放射性逻辑(radio-logical)研究，例如，CAT或MRI扫描，并且联系测量可以用来判断肿瘤的生长是否被延迟且甚至逆转。疾病有关的症状例如疼痛的减轻，和整体状况的改进也可以用来判断治疗的有效性。
生物实施例本发明的化合物有效治疗CXC-趋化因子介导的病症和疾病。其效用表现在其抑制IL-8和GRO-α趋化因子的性能，这可能通过下列体外实验来证实。
受体结合实验CXCR1SPA实验对于96孔平板的各孔，100μl的10μghCXCR1-CHO过度表达膜(Biosignal)和200μg/孔WGA-SPA珠(Amersham)的反应混合物是在CXCR1试验缓冲液(25mM HEPES，pH7.8，2mMCaCl2，1mM MgCl2，125mM NaCl，0.1％BSA)(Sigma)中制备。配体，-IL-8(NEN)的0.4nM储备液是在CXCR1试验缓冲液中制备。试验化合物的20X储备液是在DMSO(Sigma)中制备。IL-8(R & D)的6X储备液是在CXCR2试验缓冲液中制成。上述溶液按照下述加入到96-孔试验平板(PerkinElmer)10μl试验化合物或DMSO，40μlCXCR1试验缓冲液或IL-8储备液，100μl反应混合物，50μl的配体储备液(最终[配体]＝0.1nM)。该试验平板在平板振荡器上振摇5分钟，随后温育8小时，之后在Microbeta Trilux计数器(PerkinElmer)中测定cpm/孔。对总的结合-NSB(250nMIL-8)的％抑制率测定为IC50值。
CXCR2SPA试验对于96孔平板的各孔，100μl的4μghCXCR2-CHO过度表达膜(Biosignal)和200μg/孔WGA-SPA珠(Amersham)的反应混合物在CXCR2试验缓冲液(25mM HEPES，pH 7.4，2mMCaCl2，1mM MgCl2)中制成。配体-IL-8(NEN)的0.4nM储备液在CXCR2试验缓冲液中制成。试验化合物的20X储备液在DMSO(Sigma)中制备。GRO-α(R &D)的6X储备液在CXCR2试验缓冲液中制备。按照下述将上述溶液加入到96-孔试验平板(PerkinElmer或Corning)10μl试验化合物或DMSO，40ul CXCR2试验缓冲液或GRO-α储备液，100μl的反应混合物，50μl的配体储备液(最终[配体]＝0.1nM)。当制备试验化合物在DMSO中的40X储备液时，则采用上述方案但除替换5μl试验化合物或DMSO并使用45μlCXCR2试验缓冲液之外。该试验平板在平板振荡器上振摇5分钟，随后温育2-8小时，之后在Microbeta Trilux计数器(PerkinElmer)中测定cpm/孔。测定总结合减去非特应性结合(250nMGro-α或50μM拮抗剂)的％抑制率并计算IC50值。
钙荧光试验(FLIPR)稳定转染了hCXCR2和Gα1/q的HEK 293细胞以10,000细胞/孔铺板在Poly-D-LysineBlack/Clear plate(Becton Dickinson)且在5％CO2，37℃下温育48小时。培养物随后用4mMfluo-4，AM(Molecular Probes)在染料负载缓冲液(1％FBS，HBSS w.Ca & Mg，20mM HEPES(Cellgro)，Probenicid(Sigma))中温育1小时。该培养物用洗涤缓冲液(HBSS w Ca，& Mg，20mM HEPES，Probenicid(2.5mM))洗涤3次，随后加入100μl/孔洗涤缓冲液。
在温育期间，所述的化合物在0.4％DMSO(Sigma)和洗涤缓冲液中制备为4X储备液并加入到其第一附加平板的各孔内。IL-8或GRO-α(R & D Systems)浓度是在洗涤缓冲液+0.1％BSA中4X制备且将其加入到第二附加平板的各孔内。
将培养平板和两该附加平板随后置于FLIPR成像体系中通过加入的化合物和随后加入的配体来测定钙荧光的变化。简单而言，将50μl的化合物溶液或DMSO溶液加入到各孔中并利用FLIPR仪器测定1分钟钙荧光的变化。在该仪器内温育3分钟后，此后加入50ul的配体且并利用FLIPR仪器测定1分钟钙荧光的变化。各刺激曲线下的面积和数值用于测定化合物(激动剂)的％促进率和对于配体(0.3nMIL-8或GRO-α)的总钙反应的％抑制率用于测定试验化合物的IC50值。
293-CXCR2的趋化试验趋化试验利用Fluorblok inserts(Falcon)对293-CXCR2细胞(人HEK-293细胞过度表达的人CXCR2)进行装配。在此使用的标准方案如下1.插入物用胶原IV(2ug/ml)在37℃下涂层2小时。
2.除去胶原且令插入物风干过夜。
3.细胞用10uM钙黄绿素AM(Molecular Probes)标记2小时。在含有2％FBS的完全培养基中进行标记。
4.化合物的稀释是在最低培养基(minimal media)(0.1％BSA)中进行并且加入插入物，其位于24孔平板孔内。在孔中IL-8在最低培养基中的浓度为0.25nM。洗涤细胞且重新悬浮在最低培养基中且以50,000细胞/插入物的浓度加入插入物。
5.平板温育2小时且除去插入物并置于新的24孔内。在激发＝485nM和发射＝530nM下检测荧光。
细胞毒性试验CXCR2化合物的细胞毒性试验在293-CXCR2细胞上进行。在高浓度下试验化合物的浓度的毒性，从而判定它们是否可以进一步在结合和细胞基试验中进行评价。方案如下1.293-CXCR2细胞以5000细胞/孔的浓度在完全培养基中平板过夜。
2.化合物的稀释在w/0.1％BSA的最低培养基中进行。倾出完全培养基且加入化合物的稀释液。平板温育4、24和48小时。细胞用10uM钙黄绿素AM标记15分钟从而测定细胞成活率。检测方法与上述方法相同。
软琼脂试验将10,000SKMEL-5细胞/孔置于含有化合物的不同稀释液的1.2％琼脂和完全培养基中。琼脂的终浓度为0.6％。21天后，存活细胞克隆用MTT(1mg/ml在PBS中)的溶液染色。随后将平板扫描来测定菌落数目和规模。通过比较总面积和化合物浓度测定IC50。
本发明的化合物在约1nM-约10,000nM范围内可以具有CXCR2受体结合活性。
式(I)的化合物可以按照所属领域已知的方法以下列反应路线和制备例和实施例所述制备。
路线1 二溴马来酸酐与取代的或未取代的肼的缩合应得到环状酰肼衍生物B。B与一当量的胺(ANH2)的缩合得到C，当加入第二胺(BNH2)时得到D。
路线II 或者，环状酰肼与可利用的酸性N-H用碱脱质子化且通过适当亲电性试剂烷基化得到相应的N-取代的环状酰肼。该中间体按照路线I可以进一步达到所需目标。
下列实施例举例说明一些本发明的化合物的制备但不构成对本发明内容的限定。
其他机械途径和类似结构对于所属领域技术人员来说是显然的。
制备例1 混和3-硝基水杨酸(500mg，2.7mmol)，DCC(563mg)和乙酸乙酯(10mL)且搅拌10分钟。加入(R)-(-)-2-吡咯烷甲醇(0.27mL)且将所得混悬液室温下搅拌过夜。过滤固体和滤液用1NNaOH洗涤。将水相酸化且用EtOAc提取。所得的有机相用无水MgSO4干燥，过滤且真空浓缩。通过制备平板色谱纯化(硅胶，5％MeOH/CH2Cl2用AcOH饱和)得到产物(338mg，46％，MH+＝267)。
制备例2 步骤A将3-硝基水杨酸(9.2g)，溴三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(PyBroP，23g)和N，N-二异丙基乙基胺(DIEA，26mL)在无水CH2Cl2(125mL)中混且在25℃下搅拌30分钟。25分钟内加入在CH2Cl2(25mL)中的(R)-(+)-3-吡咯烷醇(8.7g)且将所得混悬液室温下搅拌过夜。该混合物用1MNaOH(aq)萃取且弃去有机相。水相用1M HCl(aq)酸化，用EtOAc萃取，用无水Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩得到粗产物(7g)，其无需进一步纯化。
步骤B上述步骤A的粗产物用10％Pd/C(0.7g)在MeOH(100mL)中在氢气氛下搅拌过夜。该反应混合物经硅藻土过滤，滤液真空浓缩，和所得残余物通过柱色谱纯化(硅胶，10％MeOH/CH2Cl2用NH4OH饱和)得到产物(2.5g，41％，MH+＝223)。
制备例3-9按照制备例2所述的方法，但使用下表所列的羧酸，胺，和适当的偶联剂(PyBrop)，得到酰胺产物且无需进一步纯化就可使用。
制备例10 步骤A按照类似于制备例1的方法，处理用二甲基胺(2M在THF中，33mL)代替(R)-(-)-2-吡咯烷甲醇和用5-甲基水杨酸(5g)代替3-硝基水杨酸，制备产物(6.5g)。
步骤B将在H2SO4中的硝酸(0.8mL)加入到上述步骤步骤A的产物(3g)在H2SO4(25mL)中的冷却(-20℃)混悬液内。该混合物滴加50％NaOH(aq)处理，用CH2Cl2萃取，用无水MgSO4干燥，过滤且真空浓缩，得到产物其为固体(2.1g，44％，MH+＝225)。
步骤C该产物按照类似于制备例2所述的方法制备，步骤B(0.7g，99％，MH+＝195)。
制备例11 步骤A按照类似于制备例2步骤A的方法制备，除了用二甲基胺代替(R)-(-)-2-吡咯烷甲醇之外，制得产物。
步骤B将上述步骤A的产物(8g)与碘(9.7g)，硫酸银(11.9g)，EtOH(200mL)和水(20mL)混和且搅拌过夜。过滤，浓缩滤液，再溶解在CH2Cl2中且用1M HCl(aq)洗涤得到有机溶液，其用无水MgSO4干燥，过滤且真空浓缩得到产物(7.3g，57％，MH+＝337)。
步骤C将上述步骤B的产物(3.1g)与DMF(50mL)和Mel(0.6mL)混和。滴加NaH(60％在矿物油中，0.4g)且将该混合物搅拌过夜。真空浓缩得到残余物，其用CH2Cl2稀释，用1M NaOH(aq)洗涤，用无水MgSO4干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶柱纯化(EtOAc/Hex，1∶1)得到产物(1.3g，41％，MH+＝351)。
步骤D上述步骤D的产物(200mg)，Zn(CN)2(132mg)，Pd(PPh3)4(130mg)和DMF(5mL)在80℃下加热48小时，随后冷却至室温并用EtOAc和2MNH4OH稀释。充分振摇后，有机提取液用无水MgSO4干燥，过滤，真空浓缩和通过制备平板色谱纯化(Silica，EtOAc/Hex，1∶1)得到产物(62mg，44％，MH+＝250)。
步骤E将BBr3(1.3mL，1M在CH2Cl2)加入到上述步骤D产物(160mg)的CH2Cl2溶液(5mL)中且搅拌30分钟。该混合物用水稀释，用CH2Cl2提取，用无水MgSO4干燥，过滤，和真空浓缩得到产物(158mg，MH+＝236)。
步骤F上述步骤E(160mg)，氧化铂(83％，19mg)，和EtOH(20mL)的混合物在氢(25-40psi)下搅拌1.5小时。经硅藻土过滤且真空浓缩得到产物(165mg，MH+＝206)。
制备例12 步骤A按照类似于制备例1的方法，但除了用二甲基胺(2M在THF中，50mL)代替(R)-(-)-2-吡咯烷甲醇和用4-甲基水杨酸(15g)代替3-硝基水杨酸之外，制得产物(6.3g，35％)。
步骤B上述步骤A的产物(1.5g)与碘(2.1g)、NaHCO3(1.1g)、EtOH(40mL)和水(10mL)混和并搅拌过夜。过滤，浓缩滤液，再溶解在CH2Cl2并用1M HCl(aq)洗涤得到有机溶液，其用无水MgSO4干燥，过滤且真空浓缩。通过快速柱色谱纯化(硅胶，0.5-0.7％MeOH/CH2Cl2)得到产物(0.3g，57％，MH+＝306)。
步骤C将在AcOH(10mL)中的硝酸(3.8mL)加入到上述步骤B的产物(0.8g)并将该混合物搅拌40分钟。该混合物用水稀释且用CH2Cl2萃取，用无水MgSO4干燥，过滤且真空浓缩得到产物其为固体(0.8g，92％，MH+＝351)。
步骤D将上述步骤C的产物(800mg)，10％Pd/C(100mg)，和EtOH/MeOH(40mL)在parr振摇器中氢气下(45psi)搅拌1.5小时。经硅藻土过滤和真空浓缩，通过制备平板色谱纯化后得到标题产物(Silica，10％MeOH/CH2Cl2，用NH4OH饱和)得到产物(92mg，22％，MH+＝195)。
制备例13 步骤A3-硝基-1，2-亚苯基二胺(10g)，亚硝酸钠(5.4g)和乙酸(20mL)在60℃下加热过夜，随后真空浓缩，用水稀释和用EtOAc萃取。产物有机相(5.7g)作为固体沉淀且直接用于步骤B。
步骤B上述步骤A的产物(2.8g)与10％Pd/C(0.3g)在MeOH(75mL)中在氢气氛下搅拌过夜。该反应混合物经硅藻土过滤和滤液真空浓缩，得到产物(2.2g，MH+＝135)。
制备例14
步骤A按照已知的方法制备4-溴吡唑-3-甲酸，参见Yu.A.M.；Andreeva，M.A.；Perevalov，V.P.；Stepanov，V.I.；Dubrovskaya，V.A.；和Seraya，V.I.in Zh.Obs.Khim.(Journal of General Chemistry ofthe USSR)1982，52，2592，和其中引用的参考文献。
步骤B25℃下向得自步骤A的4-溴吡唑-3-甲酸(2.0g)在65mL无水DMF中的溶液加入溴三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(PyBrop，4.60g)，二甲基胺(10mL，2.0M在THF)和二异丙基乙胺(5.2mL)。将该混合物搅拌26小时，并且减压下浓缩得到油性残余物。该残余物用1.0MNaOH水溶液处理，和用乙酸乙酯(4×50mL)萃取。合并有机提取液，用盐水洗涤，和用无水Na2SO4干燥。除去溶剂得到油，其通过制备薄层层析纯化，用CH2Cl2-MeOH(20∶1)洗脱，得到1.09g的酰胺产物(48％，MH+＝232.0)。
步骤C向步骤B的酰胺(0.67g)在8mL浓硫酸中的溶液内在0℃下分少量加入硝酸钾(1.16g)。撤去冷却浴且将该混合物在110℃下加热6小时。冷却至25℃后，将该混合物倾入80mL的H2O，并且用附加的20mL的H2O漂洗。含水混合物用CH2Cl2(100mL×4)萃取。合并的萃取液用盐水(50mL)、饱和NaHCO3水溶液(50mL)、盐水(50mL)洗涤，并且用Na2SO4干燥。蒸发溶剂得到浅黄色油，其在放置后固化。粗产物通过快速柱色谱纯化，用CH2Cl2-MeOH(1∶0，50∶1和40∶1)洗脱。除去溶剂得到0.521g(65％)的产物，其为固体(MH+＝277.1)。
步骤D将步骤C的产物(61mg)溶解在3mL的THF中。向该溶液在-78℃下沿烧瓶内壁滴加正丁基锂在己烷中的1.6M溶液。45分钟后，加入硼酸甲酯(0.1mL)在THF(1.0mL)中的溶液。1.5小时后，将乙酸在THF中的溶液(0.25mL，1∶10v/v)加入到冷却混合物中。继续搅拌10分钟，并且加入30wt％过氧化氢水溶液(0.1mL)。20分钟后加入另外份的过氧化氢水溶液(0.05mL)。撤去冷却浴，和将该混合物在25℃搅拌36小时。将黄色混合物倾入30mL的H2O，并且水混合物用乙酸乙酯(30mL×4)萃取。合并萃取液，用盐水(10mL)，5％NaHCO3水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机层用Na2SO4干燥且减压下浓缩得到残余物，其通过制备薄层层析纯化用CH2Cl2-MeOH(20∶1)洗脱得到羟基化产物(5mg，10％，MH+＝215.3)。
步骤E如步骤D的羟基化产物用H2在10％钯碳下乙醇中处理，应得到羟基-氨基化合物。
制备例15 步骤A按照类似于制备例12步骤C的方法，除了用已知化合物，4-甲基-嘧啶-5-醇起始，制备步骤A的产物。
步骤B按照类似于制备例14步骤A的氧化方法，由上述步骤A的产物起始，可以制备步骤B的产物。
步骤C按照类似于制备例10步骤A的方法、由上述步骤B的产物起始，可以制备步骤C的产物。
步骤D按照类似于制备例11步骤F的方法、由上述步骤C的产物起始，可以制备步骤D的产物。
制备例16 步骤A按照类似于制备例10步骤A的方法10、由已知的4-羟基烟酸起始，可以制备所述的产物。
步骤B按照类似于制备例12步骤C的方法、由上述步骤A的产物起始，可以制备步骤B的产物。
步骤C按照类似于制备例11步骤F的方法、由上述步骤C的产物起始，可以制备所述的胺产物。
制备例17 步骤A按照类似于制备例12步骤C的方法、由上述步骤A的化合物起始，可以制备该硝基产物。
步骤B在氢气氛下(1-4atm)搅拌上述步骤A的硝基产物与适当的Pt或Pd催化剂和EtOH，得到所述的胺产物。
制备例18
步骤A向5-硝基-3-吡唑羧酸(5.0g，31.83mmol)在160mL乙腈中的溶液内在室温下分小份加入溴三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(PyBrop，14.9g，31.98mmol)。将二甲基胺在THF(40.0mL，80.0mmol)中的2.0M溶液加入到该混合物中，随后加入二异丙基乙基胺的溶液(14.0mL，80.2mmol)。搅拌36小时后，该混合物在减压下浓缩得到残余物，固体和油的混合物。加入少量体积的CH2Cl2直至油性物质溶解为止并沉淀出细的无色固体。通过过滤收集固体，其为第一批产物。浓缩滤液得到油性残余物，其用CH2Cl2-己烷(-1∶1，v/v)处理，和过滤出无色沉淀，作为第二批产物。合并的固体产物进一步在高真空下干燥数小时得到5.86g(100％)的N，N’-二甲基5-硝基-3-吡唑甲酰胺其为固体(MH+＝185.0)。
步骤B向N，N’-二甲基5-硝基-3-吡唑酰胺(5.86g，31.83mmol，得自步骤A)在215mL无水THF中的溶液内在室温下分次加入固体甲醇锂。45分钟后，滴加碘甲烷。连续搅拌2.5天。该混合物经1.5-in硅胶垫过滤，用体积大大过量的乙酸乙酯漂洗。合并的滤液并漂洗液浓缩为深黄色油，其通过快速柱色谱纯化，用己烷，CH2Cl2，和CH2Cl2-MeOH(50∶1)洗脱。除去溶剂得到5.10g(81％)的N，N’-二甲基1-甲基-5-硝基-3-吡唑酰胺，其为固体(MH+＝199.0)，被～13％的2-甲基化异构体污染。
步骤C得自步骤B的N，N’-二甲基1-甲基-5-硝基-3-吡唑甲酰胺(5.10g，25.29mmol)在250mL乙醇中的溶液经室内真空脱气，并且随后再充入氮。加入固体钯(10％在活化的炭上，用＜50％水湿润，2.5g)，该黑色混悬液经室内真空(house vacuum)脱气且再充入气球提供的氢气。该混合物在室温下氢气氛下搅拌4小时，并且经硅藻土垫过滤，用乙醇漂洗。合并滤液和漂洗液，减压下浓缩得到4.17g(98％)的氨基-吡唑产物，其为固体(MH+＝169.0)。
步骤D向步骤C中制备的氨基-吡唑(1.0g，5.95mmol)在40mLCH2Cl2中的搅拌溶液内在室温下加入氯甲酸苄酯(2.7mL，17.97mmol)。一次性加入固体碳酸钾(4.1g，29.71mmol)。24小时后，将甲醇(5mL)加入到该混合物，并且连续搅拌2小时。通过过滤除去不溶物，并且用甲醇洗涤，合并的滤液和漂洗液减压下浓缩为稠的浆液，其通过制备TLC分离(CH2Cl2-MeOH＝30∶1)。该硅胶用MeOH和CH2Cl2萃取，将萃取液过滤和减压下浓缩得到1.16g(64％)的吡唑氨基甲酸苄酯，其为固体(MH+＝303.1)。
步骤E向步骤D制备的吡唑氨基甲酸苄酯(1.0g，3.31mmol)在100mL甲苯中的搅拌溶液内在室温下一次性加入″Clayfen″(参见下面的注释)(3.5g)。将深紫色混悬液70℃加热且继续在70-80℃下加热2.5天。冷却至室温，该混合物经薄硅藻土垫过滤。固体残余物和滤垫用CH2Cl2漂洗，和过滤。合并的滤液浓缩为黄色油，其通过制备TLC纯化(CH2Cl2-MeOH＝20∶1)。硅胶用CH2Cl2和甲醇萃取，将萃取液过滤和减压下浓缩得到0.822g(72％)的硝基-吡唑氨基甲酸苄酯，其为油(MH+＝348.1)。
注释″Clayfen″，粘土载硝酸铁(III)，按照文献方法制备，参见Cornelis，A.；Laszlo，P.Synthesis，1980，849。向搅拌的丙酮溶液(30mL)在室温下分次加入固体Fe(NO3)3.9H2O(1.8g)。5分钟后，加入K-10皂粘土(2.4g)。持续搅拌30分钟，和减压下浓缩所得混悬液(水浴温度＜＝30℃)。新制的物质在上述反应后立刻使用。
步骤F得自步骤E的硝基-吡唑氨基甲酸苄酯(410.0g，1.18mmol)在20mL乙醇中的溶液经室内真空脱气，并且再充入氮气。加入固体钯(10％在活化的炭上，以＜50％水湿润280.0mg)，该黑色混悬液经室内真空(house vacuum)脱气且再充入气球提供的氢气。该混合物在室温下氢气氛下搅拌20小时，并且经1-in硅藻土垫过滤，用过量体积的甲醇漂洗。浓缩滤液和漂洗液为红色油，其通过制备TLC纯化(CH2Cl2-MeOH＝15∶1)。硅胶用甲醇萃取，将萃取液过滤，并且滤液减压下浓缩为油，其在高真空下干燥固化，得到120.0mg(56％)二氨基-吡唑产物(MH+＝184.0)。
制备例19 步骤A硝基-吡唑氨基甲酸苄酯由5-硝基-3吡唑羧酸按照制备例18所述方法制备。
步骤B向得自步骤A的硝基-吡唑氨基甲酸苄酯(410.0mg，1.18mmol)在17mL乙酸乙酯中的溶液内在室温下一次性加入氯化锡(II)二水合物(1.33g，5.90mmol)。将该混合物加热至80℃且持续2小时。冷却至室温后，将饱和NaHCO3水溶液滴加到该混合物直至pH约7。加入附加体积的乙酸乙酯(20mL)，将该混合物搅拌过夜，和经1-in硅藻土垫过滤。分离两层的滤液。有机层用盐水洗涤1次。合并洗涤水和水层，并且用乙酸乙酯萃取1次。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤和浓缩，进一步高真空干燥，得到361.5mg(97％)的氨基吡唑氨基甲酸苄酯其为固体(MH+＝318.1)。
步骤C向步骤B制备的氨基-吡唑氨基甲酸苄酯(180.0mg，0.57mmol)在11mL的CH2Cl2中的搅拌溶液内在-78℃下加入三乙胺(0.32mL，2.30mmol)。沿烧瓶的内壁滴加甲磺酰氯在CH2Cl2(1.7mL，1.7mmol)中的1.0M溶液。将该混合物搅拌2.5小时且使冷却浴的温度缓慢由-78℃升高至-25℃。将饱和NaHCO3水溶液(5mL)加入到该混合物，和进一步用25mL的CH2Cl2稀释。撤去冷却浴，继续搅拌1.5小时。分离各层。水层用CH2Cl2(30mL)萃取，并且合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液(30mL)和盐水(30mL)洗涤。有机层用Na2SO4干燥，和浓缩为油，其通过制备TLC(CH2Cl2-MeOH＝20∶1)纯化。硅胶用CH2Cl2和甲醇萃取，将萃取液过滤和浓缩为无色油，固化并且在高真空下干燥，得到185.7mg(83％)的吡唑甲基磺酰胺，其为固体(MH+＝396.1)。
步骤D向步骤C的吡唑甲磺酰胺(275.0mg，0.70mmol)在10mL乙醇中的氮封溶液内加入固体钯(10％在活化炭上，用＜50％水湿润，550.0mg)。该混合物经室内真空脱气，随后充入气球提供的氢气。该混合物在氢气氛下搅拌3.5小时，并且经硅藻土层过滤。固体残余物和滤垫用乙醇和乙酸乙酯漂洗，合并的滤液和漂洗液减压下浓缩得到173.0mg(95％)of氨基-吡唑甲磺酰胺，是固体(MH+＝262.0)。
制备例20 步骤A吡唑氨基甲酸苄酯由5-硝基-3-吡唑羧酸以4个步骤按照制备例18所述方法制备。
步骤B一次性向步骤A中制备的吡唑氨基甲酸苄酯(115.0mg，0.38mmol)在6mLCH2Cl2中的溶液内在室温下加入固体碳酸钾。将溴溶液滴加到搅拌的混合物中，6小时后，加入30mL H2O，和该混合物用CH2Cl2(30mL×3)萃取。合并的有机萃取液用10％Na2S2O3水溶液(20mL)、饱和NaHCO3水溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤，并且用Na2SO4干燥。蒸发溶剂得到浅黄色油，其通过制备TLC纯化(CH2Cl2-MeOH＝20∶1)。硅胶用CH2Cl2和甲醇萃取，将萃取液过滤和减压下浓缩得到油，其进一步高真空干燥，得到134.2mg(93％)的溴-吡唑氨基甲酸苄酯(MH+＝381)。
步骤C步骤B的溴-吡唑氨基甲酸苄酯化合物用正丁基锂处理、随后加入硼酸甲酯可转化溴-吡唑氨基甲酸苄酯为相应的硼酸酯。随后该硼酸酯与H2O2水溶液的一锅式氧化反应得到羟基-吡唑氨基甲酸苄酯。
步骤D步骤C的羟基-吡唑氨基甲酸苄酯与氢在钯的条件下(10％在活化炭上)在乙醇中的处理得到所需氨基-羟基吡唑。
制备例21 步骤A向3-甲氧基噻吩羧基甲酯(2.0g，11.6mmol)在20mL THF中的溶液内在室温下滴加1.0M氢氧化钠水溶液(17.0mL，17.0mmol)。加料后，将该混合物加热至75℃(油浴温)并且持续18小时。将该混合物冷却至室温，用1.0M盐水水溶液处理直至pH约为2。酸化的混合物用100mLCH2Cl2-CH3CN(1∶1，v/v)、50mL的CH2Cl2和50mL的CH3CN萃取。合并的有机萃取液用盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，和减压下浓缩得到固体，其进一步高真空干燥，得到1.84g(100％)的3-甲氧基噻吩羧酸(MH+＝159.0)。
步骤B向步骤A的3-甲氧基噻吩羧酸(1.84g，11.61mmol)在60mL乙腈中的混悬液在室温下依次加入溴三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(PyBrop，5.40g，11.60mmol)、二甲基胺(2.0M在THF中，14.5ml，29.0mmol)和二异丙基乙胺(5.0mL，28.63mmol)。搅拌1.5天后，该混合物减压下浓缩得到黄色油，其通过制备TLC纯化(CH2Cl2-MeOH＝40∶1)。硅胶用CH2Cl2和甲醇萃取，将萃取液过滤和浓缩为油，其进一步高真空干燥，生成4.16g的N，N-二甲基3-甲氧基噻吩酰胺(污染有PyBrop杂质)(MH+＝186.0)。
步骤C向噻吩酰胺(4.16g，步骤B中制备)在6mL浓硫酸中的剧烈搅拌溶液内在-10℃下滴加发烟硝酸(0.6mL，14.28mmol)。1.5小时后，将该混合物倾入80mL的1.0MNaOH水溶液和冰(1∶1，v/v)的混合物内。利用另外40mL的H2O进行转移。通过过滤收集黄色沉淀，用H2O洗涤2次，并且高真空干燥，得到1.67g的硝基-噻吩产物。含水滤液用CH2Cl2(50mL×3)萃取。萃取液用饱和NaHCO3水溶液(30mL)和盐水(30mL)洗涤，并且用Na2SO4干燥。蒸发溶剂得到黄色油，其通过制备TLC纯化(CH2Cl2-MeOH＝50∶1)得到另外0.144g的硝基-噻吩其为固体(总量1.81g，68％共两步，MH+＝231.0)。
步骤D在15分钟内向步骤C得到的甲氧基-硝基-噻吩(900.0mg，3.91mmol)在55mL无水CH2Cl2中的搅拌溶液内在-78℃下沿烧瓶内壁滴加三溴化硼在CH2Cl2中的1.0M溶液。将该混合物搅拌4小时且使冷却浴的温度缓慢由-78℃升高至-10℃，并且倾入100mL的冰和H2O(-1∶1，v/v)的混合物中。用另外30mL的H2O和30mL的CH2Cl2漂洗烧瓶。合并的混合物在室温下搅拌过夜，分离两层，并且水层用CH2Cl2(50mL×3)萃取。合并有机层，用饱和NaHCO3水溶液(50mL×2)和盐水(50mL×2)洗涤，用Na2SO4干燥，和浓缩至黄色固体。粗产物通过快速柱色谱纯化，用己烷、CH2Cl2-己烷(1∶1和2∶1)洗脱。除去溶剂得到固体，其为进一步高真空干燥，得到615.2mg(73％)的羟基-硝基-噻吩酰胺(MH+＝217.0)。
步骤E向步骤D中制备的羟基-硝基-噻吩酰胺(610.0mg，2.82mmol)在60mL的乙醇中的氮封溶液内加入氢氧化钯(20wt％在活化炭上，用＜＝50％水湿润，610.0mg)。该混合物经室内真空脱气并且再充入气球提供的氢气。该混合物首先在室温下在氢气氛下搅拌2小时，随后加热至70-80℃并且持续20小时。经1-in硅藻土垫过滤除去固体物质，滤垫用100mL乙醇洗涤，和合并的滤液浓缩为浅黄色固体。粗产物用CH2Cl2-MeOH的混合物(约1∶1，v/v)处理，沉淀出米色固体并通过过滤收集第一批产物(75.4mg)。滤液浓缩为固体残余物，其通过快速柱色谱纯化，用CH2Cl2-EtOH(10∶1和2∶1)洗脱。除去溶剂得到226.8mg的氨基-羟基-噻吩酰胺其为固体(302.2mg总产率，58％，MH+＝187.0)。
制备例22 步骤A将2-噻吩羰基氯化物(2.0mL，18.7mmol)溶解在100mL二氯甲烷中。加入二异丙基乙基胺(4.1mL，23.4mmol)和Boc-哌嗪(3.66g，19.7mmol)后，将该混合物在室温下搅拌4小时。将所得浑浊混合物置于水(500mL)中且用3N HCl酸化为pH-1。用二氯甲烷(2×100mL)萃取且用硫酸钠干燥得到足够纯的产物，其无需进一步纯化就可用于下个步骤。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)1.60(s，9H)，3.29(dd，4H)，3.69(dd，4H)，7.23(dd，1H)，7.49(d，1H)，7.79(d，1H)。
步骤B将步骤A的粗产物溶解在三氟乙酸/二氯甲烷(75mL，4/1)中。搅拌2小时后，该反应混合物置于1N氢氧化钠(400mL)。用二氯甲烷(2×100mL)萃取且用硫酸钠干燥得到足够纯的产物，其无需进一步纯化就可用于步骤C。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)2.81(dd，4H)，3.63(dd，4H)，7.21(dd，1H)，7.46(d，1H)，7.82(d，1H)。
步骤C将步骤B的粗产物(3.50g，17.8mmol)溶解在二氯甲烷(100mL)中。加入二异丙基乙基胺(18.7mL，107mol)，3-硝基水杨酸(3.3g，18.0mmol)，和PyBrOP(10.4g，22.3mmol)，所得的黄色混合物在室温下搅拌过夜，之后置于1N氢氧化钠(200mL)中。用二氯甲烷(2×200mL)萃取除去全部PyBrOP副产物。水相用3N HCl酸化且随后用二氯甲烷(3×100mL)萃取。酸性萃取液的合并有机相用硫酸钠干燥，浓缩，和最后通过柱色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到所需产物(2.31g，34％共3步骤)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)3.30-3.90(m，8H)，7.10-8.20(m，双信号，由于E/Z-异构体，6H)，10.82(s，1H)。
步骤D将步骤C的硝基-化合物(2.3g，6.4mmol)溶解在甲醇(50mL)中并且与10％Pd/C在氢气氛下搅拌过夜。该反应混合物经硅藻土过滤且用甲醇彻底洗涤。最后，将滤液真空浓缩和通过柱色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)生成所需产物(1.78g，84％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)3.30-3.90(m，8H)，7.22(m，2H)，7.55(d，1H)，7.71(d，1H)，7.88(d，1H)，8.15(d，1H)，10.85(bs，1H)。
制备例23 步骤A将吡啶甲酸(3.0g，24.3mmol)悬浮在SOCl2(15mL)中。加入二甲基甲酰胺(5滴)后，将该反应混合物搅拌4小时。在此期间颜色由白色转变为绿色，再转变为褐色，最终制备为酒红色并且全部固体溶于溶液中。蒸发溶剂得到相应的酰氯，其为HCl-盐。无需进一步纯化，将该固体悬浮在120mL二氯甲烷中。加入二异丙基乙基胺(12.7mL，73mmol)和Boc-piparazine(4.8g，25.5mmol)，将该反应在室温下搅拌过夜。所得浑浊混合物置于水(500mL)中且用二氯甲烷(2×100mL)萃取。用硫酸钠干燥得到足够纯的产物，其无效进一步纯化就可用于步骤。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)1.63(s，9H)，3.21(dd，4H)，3.61(dd，4H)，7.57(dd，1H)，7.63(d，1H)，7.98(dd，1H)，8.70(d，1H)。
步骤B将步骤A的粗产物溶解在三氟乙酸/二氯甲烷(75mL，4/1)。搅拌2天后，将该反应混合物置于1N氢氧化钠(400mL)中。用二氯甲烷(2×100mL)萃取且用硫酸钠干燥得到足够纯的产物，其无需进一步纯化就可用于步骤C。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)2.77(dd，2H)，2.83(dd，1H)，3.38(dd，2H)，3.64(dd，1H)，7.58(dd，1H)，7.62(d，1H)，8.00(dd，1H)，8.67(d，1H)。
步骤C将得自步骤B的粗产物(1.35g，7.06mmol)溶解在二氯甲烷(50mL)。加入二异丙基乙基胺(3.7mL，21.2mmol)，3-硝基水杨酸(1.36g，7.41mmol)，和PyBrOP(3.62g，7.77mmol)，所得黄色混合物在室温下搅拌过夜，之后置于1N氢氧化钠(300mL)中。用二氯甲烷(2×100mL)萃取除去PyBrOP产物。水相用3NHCl酸化。用饱和碳酸钠溶液小心调整pH至几乎中性，使所需化合物析出溶液。水相顺序用二氯甲烷(3×100mL)萃取。中性萃取液的合并有机层用硫酸钠干燥，浓缩，和最后通过柱色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到所需产物(1.35g，16％共3步骤)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)3.30-3.95(m，8H)，7.22(m，1H)，7.61(m，1H)，7.73(d，2H)，8.03(m，1H)，8.17(m，1H)，8.69(m，1H)，10.82(s，1H)。
步骤D将得自步骤C的硝基-化合物(1.35g，3.79mmol)溶解在甲醇(60mL)中且与10％Pd/C在氢气氛下搅拌过夜。该反应混合物经硅藻土过滤且用甲醇充分洗涤。最后，滤液真空浓缩和通过柱色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到所需产物(1.10g，89％)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)3.50-3.85(m，8H)，6.47(dd 1H)，6.74(m，2H)，7.59(dd，1H)，7.71(d，1H)，8.04(dd，1H)，8.68(d，1H)。
制备例24 步骤1在圆底烧瓶中将3-硝基水杨酸(3.61g，0.0197mol)，DCC(2.03g，0.0099mol)和乙酸乙酯(130mL)混和且搅拌15分钟。加入4-二甲基氨基甲酰基-哌嗪-2-羧酸乙酯(4.51g，0.0197mol)，并且将该反应搅拌72小时。浓缩该反应混合物，随后溶于二氯甲烷。该有机相用0.1N氢氧化钠洗涤1次。水相用二氯甲烷萃取1次。酸化水相且用乙酸乙酯洗涤3次。浓缩水相和通过柱色谱纯化(5％甲醇/DCM)。
MS理论值394.15，实测值395.01H NMR(300MHz，CDCl3)1.32(t，3H)，2.86(m，7H)，3.15(m，1H)，3.51(m，4H)，4.24(m，3H)，7.15(m，1H)，7.66(m，1H)，8.20(m，1H)，10.86(bs，1H)。
步骤2在圆底烧瓶中混和4-二甲基氨基甲酰基-1-(2-羟基-3-硝基-苯甲酰基)-哌嗪-2-羧酸乙酯(0.80g，0.002mol)和甲醇(50mL)。向该体系吹入氩气。向该溶液内加入5％碳载钯(-100mg)。向烧瓶内吹入氢并搅拌过夜。该反应经硅藻土垫过滤并用甲醇洗涤。浓缩该物质，随后通过柱色谱纯化(6％甲醇/DCM)。分离产物(0.74g，0.002mol，100％)。
MS理论值364.17，实测值365.11H NMR(300MHz，CDCl3)1.27(t，3H)，2.85(m，8H)，3.18(1H)，3.45(m，3H)，4.19(m，3H)，3.90(m，3H)步骤31-(3-氨基-2-羟基-苯甲酰基)-4-二甲基氨基甲酰基-哌嗪-2-羧酸乙酯(0.74g，0.002mol)悬浮在二噁烷(10mL)和水(10mL)的混合物中。加入氢氧化锂(0.26g，0.0061mol)且将该混合物搅拌2小时。该溶液用3NHCl酸化为pH＝6，随后用丁醇萃取。合并萃取液，用硫酸钠干燥且浓缩。
MS理论值336.14，实测值337.11H NMR(300MHz，CD3OD)2.86(m，7H)，3.23(m，3H)，3.54(m，3H)，6.92(m，2H)，7.23(m，1H)。
制备例25 将制备例1的产物与10％Pd/C在氢气氛下搅拌过夜。该反应混合物经硅藻土过滤，真空浓缩滤液，和所得残余物通过柱色谱纯化(硅胶，4％MeOH/CH2Cl2用NH4OH饱和)得到产物(129mg，43％，MH+＝237)。
制备例26 以基本上与制备例25相似的方法，得到上述胺产物；(收率50％，MH+＝300.1)。
制备例27 该产物按照文献方法制备(Zh.Obshch.Khim.；24；1954；1216，1220；engl.Ausg.S.1205，1207)。
制备例28-31按照制备例27中的方法，利用下表中所列的市售肼，可以制备下列环状二溴酰肼。
制备例32 该产物按照文献方法制备(Farmaco Ed.Sci.IT；32；1977；173-179)。
制备例33 按照文献所述的方法(J.Heterocycl.Chem.；EN；34；4；1997；1307-1314)用苄基溴代替1-氯-丙烷-2-酮，可以得到该产物。
制备例34
按照文献所列的类似方法(Farmaco Ed.Sci.IT；32；1977；173-179)用制备例3的产物代替2-甲基氨基-苯硫醇，可以得到该产物。
制备例35-133按照上述制备例34的方法利用所述的胺和所述制备例的二溴中间体，可以得到下表中产物。
制备例134 步骤A向N-保护的氨基酸(1.5g，6.9mmol)在CH2Cl2(25mL)中的溶液内在室温下加入DIPEA(3.6mL，20.7mmol)，和(PyBrop)(3.4g，6.9mmol)，随后加入MeNH2(6.9mL，13.8mmol，2.0M在CH2Cl2中)。所得溶液在室温下搅拌18小时(直至TLC分析显示反应完全)。所得混合物顺序用10％柠檬酸(3×20mL)，饱和NaHCO3水溶液(3×20mL)，和盐水(3×20mL)洗涤。干燥有机层(Na2SO4)，过滤，和减压下浓缩。粗产物通过快速色谱纯化，用CH2Cl2/MeOH(40∶1)洗脱得到1.0g(收率63％)固体。
步骤B向含有上述步骤A的N-保护酰胺(1.0g，4.35mmol)的圆底烧瓶内加入4NHCl/二噁烷(10mL)。将该混合物在室温下搅拌2小时。该混合物用Et2O(20mL)稀释且减压下浓缩。粗产物用Et2O(2×20mL)处理和减压下浓缩得到0.72g(收率约100％)的粗产物，其为HCl盐。该原料无需进一步纯化就可使用或定性。
制备例135-137按照制备例134的方法但利用市售的N-保护的氨基酸和胺，得到下表所列的胺盐酸盐产物。
制备例138 向3-氯苯甲醛(2.0g，14.2mmol)在THF(5mL)中的溶液内在0℃滴加LiN(TMS)2(17.0ml，1.0M in THF)且将所得溶液搅拌20分钟。滴加EtMgBr(6.0mL，3.0M in Et2O)且将该混合物回流24小时。将该混合物冷却至室温，倾入饱和NH4Cl水溶液(50mL)，并且随后用CH2Cl2(3×50体积)萃取。合并有机层且减压下浓缩。粗残余物与3M HCl(25mL)搅拌30分钟，随后水层用CH2Cl2(3×15mL)萃取且弃去有机层。将水层冷却至0℃且用固体NaOH片处理直至达到pH＝10。水层用CH2Cl2(3×15mL)萃取且合并有机层。有机层用盐水(1×25mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，和减压下浓缩得到1.6g(66％产率)的粗胺，其为油(MH+170)。测定该原料纯度为＞90％且无需进一步纯化就可使用。
制备例139-142按照制备例138所述的方法但用市售的醛和格氏试剂，得到下表所列的胺。
制备例143
步骤A2-(三氟乙酰基)噻吩(2mL，15.6mmol)，羟胺盐酸盐(2.2g，2eq)，二异丙基乙基胺(5.5mL，2当量)和MeOH(50mL)的混合物在回流下搅拌48-72小时，随后真空浓缩。残余物用EtOAc稀释，用10％KH2PO4洗涤且用Na2SO4(无水)干燥。过滤和浓缩得到所需肟(2.9g，96％)，其直接用于步骤B无需进一步纯化。
步骤B30分钟内向上述步骤A在TFA(20mL)中的混合物中滴加Zn粉(3g，3eq)。该混合物室温下搅拌过夜。过滤固体并在真空下减少该混合物。加入NaOH水溶液(2M)并且该混合物用CH2Cl2萃取数次。有机相用无水Na2SO4干燥，过滤和浓缩得到产物(1.4g，50％)。
制备例144-148按照制备例143所述的方法但利用所述的市售酮，得到下表所列的胺产物。
制备例149 步骤A向(D)-valinol(4.16g，40.3mmol)在CH2Cl2(60mL)中的溶液内在0℃下加入MgSO4(20g)，随后滴加3-氟苯甲醛(5.0g，40.3mmol)。将非均相溶液在0℃下搅拌2小时，随后升至室温并且搅拌过夜(14小时)。过滤该混合物且干燥剂用CH2Cl2(2×10mL)洗涤。滤液在减压下浓缩得到8.4g(100％)的无色油，其无需进一步纯化可用于下面的步骤。
步骤B向步骤A的亚胺(8.4g，40.2mmol)在CH2Cl2(60mL)中的溶液在室温下加入Et3N(6.2mL，44.5mmol)，随后滴加TMSCl(5.7mL，44.5mmol)。将该混合物在室温下搅拌6小时，过滤出生成的沉淀且用CH2Cl2(2×10mL)洗涤。合并的滤液在减压下浓缩且溶于Et2O/己烷(1∶1/150mL)。过滤出沉淀且滤液在减压下浓缩得到10.1g(89％)的保护亚胺，其为油。该原料可用于下面的步骤无需进一步纯化。
步骤C向EtI(4.0g，25.6mmol)在Et2O(40mL)中的溶液内在-78℃下加入t-BuLi(30.1mL，51.2mmol，1.7M in戊烷)并且将该混合物搅拌10分钟。该混合物升至室温，搅拌1小时，并且冷却至-40℃。将步骤B的亚胺(6.0g，21.4mmol)在Et2O(30mL)中的溶液经滴液漏斗滴加得到亮橙色混合物。该反应混合物在-40℃下搅拌搅拌1.5小时，加入3MHCl(50mL)并且令该混合物升至室温。加入水(50mL)且分离各层。水层用Et2O(2×30mL)萃取且合并有机层并弃去。水层冷却至0℃且仔细用固体NaOH片处理直至得到pH＝12。水层用Et2O(3×30mL)萃取且合并的层用盐水(1×30mL)洗涤。干燥有机层(Na2SO4)，过滤，和减压下浓缩得到4.8g(收率94％)的胺，其为红色油。该原料可用于下面的步骤无需进一步纯化。
步骤D向步骤C的胺(4.5g，18.8mmol)在MeOH(80mL)中的溶液内在室温下加入MeNH2(25mL，40％在水中)，随后加入H5IO6(14.0g，61.4mmol)在H2O(25mL)中的溶液。将该非均相混合物搅拌1.5小时(直至该反应通过TLC显示达到完全)并且过滤出沉淀。所得滤液用水(50mL)稀释且该混合物用Et2O(4×60mL)萃取。合并的有机层浓缩为约30mL的体积，加入3M HCl(75mL)。搅拌该混合物过夜(12小时在室温下)，浓缩该混合物除去挥发物。水层用Et2O(3×40mL)萃取且弃去有机层。水层冷却至0℃且小心用固体NaOH片处理直至达到pH约12。水层用Et2O(3×60mL)萃取且干燥合并的有机层(MgSO4)。有机层在减压下浓缩得到2.8g(收率97％)所需胺，其为黄色油[MH+＝154]。通过1H NMR这种化合物被证明是＞85％纯度并且无需进一步纯化就可使用。
制备例150-156按照制备例149所述的方法但利用市售的醛、氨基醇和有机锂试剂，得到光学纯的胺产物在下表中。
制备例157 按照已有方法制备该产物J.Med.Chem.1996，39，3319-3323。
制备例158 按照已有方法制备该产物J.Med.Chem.1996，39，3319-3323。
制备例159 按照已有方法制备该产物Chem.Pharm.Bull.1991，39，181-183。
制备例160 按照已有方法制备该产物Chem.Pharm.Bull.1991，39，181-183。
制备例161 按照已有方法制备该产物J.Med.Chem.1988，31，2176-2186。
制备例162 按照已有方法制备该产物J.Org.Chem.1978，43，892-898。
制备例163 按照已有方法制备该产物J.Org.Chem.1987，52，4437-4444。
制备例164
按照已有方法制备该产物Bull.Chem.Soc.Jpn.1962，35，11-16。
实施例500 基本上按照制备例34所述的方法(文献Farmaco Ed.Sci.；IT；32；1977；173-179所述)使用制备例34的产物和苄胺，应当得到该产物。
实施例501-828基本上按照与实施例500相同的方法使用制备例的产物和制备或市售胺，可以得到下表所列的产物。
虽然本发明已经结合上述具体实施方式
加以说明，其许多替换、改进和变化对于所属领域普通技术人员来说是显而易见的。这些替换、改进和变化落入本发明的实质和范围内。
权利要求
1.式(I)的化合物 或其药学可接受盐或溶剂化物，其中R1和R15相同或不同且各自独立地选自a)H，b)芳基，c)杂芳基，d)烷基，e)芳基烷基，f)杂芳基烷基，g)环烷基，h)杂环烷基，i)环烷基烷基和j)杂环烷基烷基，其中所述的芳基，杂芳基，烷基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，杂环烷基，环烷基烷基，和杂环烷基烷基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)卤素，b)CF3，c)COR13d)OH，e)NR13R14f)NO2，g)氰基，h)SO2OR13，i)-Si(烷基)，j)-Si(芳基)k)CO2R13l)CONR13R14，m)SO2NR13R14，n)SO2R13，o)-OR13，p)-O(C＝O)R13，q)-O(C＝O)NR13R14，r)-NR13COR14，和s)-NR13CO2R14；A选自 和 B选自 和 其中R2选自a)氢，b)OH，c)C(O)OH，d)SH，e)SO2NR13R14，f)NHC(O)R13，g)NHSO2NR13R14，h)NR13R14，i)NHSO2R13，j)C(O)NR13R14，k)C(O)NHOR13，l)C(O)NR13OH，m)OC(O)R13和n)选择性取代的杂环酸性官能团，条件是如果R2是SO2NR13R14，则R13和R14的至少一个必须是氢；R3和R4相同或不同且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)烷基，d)烷氧基，e)OH，f)CF3，g)OCF3，h)NO2，i)C(O)R13，j)C(O)OR13，k)C(O)NR13R14，l)SO(t)NR13R14，m)SO(t)R13，n)C(O)NR13OR14，o) p)氰基，q)芳基和r)杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基选择性地被一个或多个R9基团取代；R5和R6相同或不同且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)烷基，d)烷氧基，e)CF3，f)OCF3，g)NO2，h)C(O)R13i)C(O)OR13，j)C(O)NR13R14，k)SO(t)NR13R14，l)C(O)NR13OR14，m)氰基，n)芳基和o)杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基选择性地被一个或多个R9基团取代；R7和R8相同或不同且各自独立地选自a)H，b)烷基，c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，f)杂芳基烷基，g)环烷基，h)环烷基烷基，i)CO2R13，j)CONR13R14k)氟烷基，l)链炔基，m)链烯基，n)链炔基烷基，o)链烯基烷基和p)环烯基，其中所述的烷基，芳基，杂芳基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，环烷基烷基，氟烷基，链炔基，链烯基，链炔基烷基，链烯基烷基，和环烯基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)卤素，b)CF3，c)COR13d)OH，e)NR13R14，f)NO2，g)氰基，h)SO2OR13i)-Si(烷基)，j)-Si(芳基)，k)(R13)2R14Si，l)CO2R13，m)C(O)NR13R14，n)SO2NR13R14，o)SO2R13，p)-OR13q)-O(C＝O)R13，r)-O(C＝O)NR13R14，s)-NR13C(O)R14和t)-NR13CO2R14；R9选自a)R13；b)卤素；c)-CF3；d)-COR13；e)-OR13；f)-NR13R14；g)-NO2；h)氰基；i)-SO2R13；j)-SO2NR13R14；k)-NR13COR14；l)-CONR13R14；m)-NR13CO2R14；n)CO2R13，和o) R10和R11相同或不同并且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)CF3，d)OCF3，e)NR13R14，f)NR13C(O)NR13R14，g)OH，h)C(O)OR13，i)SH，j)SO(t)NR13R14k)SO2R13，l)NHC(O)R13，m)NHSO2NR13R14，n)NHSO2R13o)C(O)NR13R14，p)C(O)NR13OR14，q)OC(O)R13和r)氰基；R12选自a)氢，b)OC(O)R13，c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，f)环烷基，g)烷基，h)环烷基烷基和i)杂芳基烷基，其中所述的芳基，杂芳基，芳基烷基，环烷基，烷基，环烷基烷基和杂芳基烷基选择性地被一个或多个R9基团取代；R13和R14相同或不同且各自独立地选自a)H，b)烷基，c)芳基，d)杂芳基，e)芳基烷基，f)杂芳基烷基，g)环烷基，h)环烷基烷基和i)氟烷基，其中所述的烷基，芳基，杂芳基，芳基烷基，杂芳基烷基，环烷基，环烷基烷基和氟烷基选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素；或R13和R14当与其所连的原子一起构成3-7员杂环环时，其中当生成的环为6或7员杂环环时，该环选择性地含有1-2个独立选自O、S或N的附加杂原子，并且其中该杂环环选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素；n是0-6；m是1-5；p是0-4和t是1或2。
2.权利要求1的化合物，其中A选自 和 其中，R7选自H，CF3，氟烷基，烷基和环烷基；R8选自H，烷基和氟烷基；和R9选自H，F，Cl，Br，CF3，烷基和氟烷基。
3.权利要求1的化合物其中B选自 和 其中R2选自H，OH，NHC(O)R13和NHSO2R13；R3选自SO2NR13R14，NO2，氰基，C(O)NR13R14，SO2R13；和C(O)OR13；R4选自H，NO2，卤素，氰基，CH3和CF3；R5选自H，CF3，NO2，卤素和氰基；R6选自H，烷基和CF3，R10和R11相同或不同并且各自独立地选自a)氢，b)卤素，c)CF3，d)OCF3，e)NR13R14，f)NR13C(O)NR13R14，g)OH，h)C(O)OR13i)SH，j)SO(t)NR13R14k)SO2R13，l)NHC(O)R13，m)NHSO2NR13R14，n)NHSO2R13o)C(O)NR13R14，p)C(O)NR13OR14，q)OC(O)R13，r)COR13和t)氰基；R12选自氢和C(O)OR13；R13和R14相同或不同且各自独立地选自甲基，乙基和异丙基；R13和R14当与其所连的原子一起构成3-7员杂环环时，其中当生成的环为6或7员杂环环时，该环选择性地含有1-2个独立选自O、S或N的附加杂原子，并且其中该杂环环选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素。
4.权利要求1的化合物其中R1和R15相同或不同并且各自选自H，甲基，芳基和环己基。
5.权利要求1的化合物，其中A选自 和 其中，R7选自H，CF3，CF2CH3，甲基，乙基，异丙基，环丙基和叔丁基；R8是H和R9选自H，F，Cl，Br，CF3，烷基，和氟烷基。
6.权利要求1的化合物其中B是 其中R2选自H，OH，NHC(O)R13和NHSO2R13；R3选自SO2NR13R14，NO2，氰基，C(O)NR13R14，SO2R13；和C(O)OR13；R4选自H，NO2，卤素，氰基，CH3和CF3；R5选自H，CF3，NO2，卤素和氰基；R6选自H，烷基和CF3；和R13和R14相同或不同且各自独立地选自甲基，乙基和异丙基；或R13和R14当与其所连的原子一起构成3-7员杂环环时，其中当生成的环为6或7员杂环环时，该环选择性地含有1-2个独立选自O、S或N的附加杂原子，并且其中该杂环环选择性地被一个或多个选自下列的取代基取代a)烷基，b)芳基，c)芳基烷基，d)氟烷基，e)环烷基，f)环烷基烷基，g)杂芳基，h)杂芳基烷基，i)氨基，j)羰基和k)卤素。
7.权利要求1的化合物，其中A选自 和 和B是 其中R2选自H，OH，NHC(O)R13和NHSO2R13；R3选自SO2NR13R14，C(O)NR13R14，SO2R13，NO2和氰基；R4选自H，NO2，CF3，CH3，卤素和氰基；R5选自H，卤素，NO2，氰基和CF3；R6选自H，CF3和烷基；R7选自H，CF3，CF2CH3，甲基，乙基，异丙基，环丙基和叔丁基；R8是H；R9选自H，F，Cl，Br，CF3，烷基，和氟烷基；和R13和R14各自独立地选自甲基和乙基。
8.权利要求1的化合物，其中A选自 和 和B是 其中，R2是-OH；R3是CONR13R14；R4选自H，CH3，卤素和CF3；R5选自H和氰基；R6选自H，CH3和CF3；和R13和R14各自是甲基。
9.权利要求1的化合物，其中所述的化合物选自
10.权利要求1的化合物，其中所述的化合物选自 和
11.权利要求1的化合物，其中所述的化合物选自 和
12.含有权利要求1的化合物和药学可接受载体的药物组合物。
13.权利要求1的化合物在需要这种治疗的患者中制备用于治疗趋化因子介导的疾病的药物中的用途，其中在该患者中所述的趋化因子结合CXCR2和/或CXCR1受体。
14.权利要求1的化合物在需要这种治疗的患者中制备用于治疗趋化因子介导的疾病的药物中的用途，其中在该患者中所述的趋化因子结合CXC受体。
15.权利要求13的用途，其中趋化因子介导的疾病选自牛皮癣，特应性皮炎，哮喘，慢性阻塞性肺病，成人呼吸窘迫综合征，关节炎，炎性肠病，节段性回肠炎，溃疡性结肠炎，脓毒性休克，内毒性休克，革兰氏阴性脓毒病，中毒性休克综合征，休克，心脏和肾脏再灌注损伤，肾小球性肾炎或血栓形成，阿尔茨海默氏病，移植物抗宿主反应，同种移植物排斥、疟疾、急性呼吸窘迫综合征、延迟型高血压反应、动脉粥样硬化和脑与心脏局部缺血。
16.权利要求1的化合物在需要这种治疗的患者中制备癌症的药物中的用途。
17.权利要求16的用途，其中该治疗进一步包括利用至少一种抗癌药和/或放射疗法。
18.权利要求17的用途，其中所述的抗癌药选自烷化剂，抗代谢物，天然产物及其衍生物，激素，抗激素，抗血管发生剂和甾类化合物(包括合成的类似物)，和合成物。
19.权利要求1的化合物在需要这种抑制的患者中制备抑制血管发生的药物中的用途。
20.权利要求19的用途，其中该治疗进一步包括至少一种已知的抗血管发生化合物。
21.权利要求20的用途，其中所述的抗血管发生化合物选自Marimastat，AG3340，Col-3，Neovastat，BMS-275291，酞胺哌啶酮，Squal胺，Endostatin，SU-5416，SU-6668，干扰素-α，抗VEGF抗体，EMD121974，CAI，白介素-12，IM862，血小板因子-4，Vitaxin，Angiostatin，苏拉明，TNP-470，PTK-787，ZD-6474，ZD-101，Bay129566，CGS27023A，VEGF受体激酶抑制剂，docetaxel，和紫杉酚。
22.利要求1的化合物在需要这种治疗的患者中制备疾病的药物中的用途，所述的齿龈炎、呼吸病毒、疱疹病毒、肝炎病毒、HIV、卡波济氏肉瘤有关病毒和动脉粥样硬化。
23.权利要求13的用途，其中所述的趋化因子介导的疾病是血管发生性眼部疾病。
24.权利要求23的用途，其中所述的疾病选自眼部炎症，早熟的视网膜病，糖尿病性视网膜病，黄斑变性和湿润型优先且角膜型新血管化。
25.权利要求16的用途，其中肿瘤类型是黑素瘤，胃癌或非小细胞肺癌。
26.权利要求25的用途，其中该治疗包括使用至少一种已知的抗癌药和/或放射疗法。
27.权利要求26的用途，其中所述的抗癌药选自烷化剂，抗代谢物，天然产物及其衍生物，激素，抗激素，抗血管发生剂和甾类化合物(包括合成的类似物)，和合成物。
28.权利要求27的用途，其中所述的抗血管发生化合物选自Marimastat，AG3340，Col-3，Neovastat，BMS-275291，酞胺哌啶酮，Squal胺，Endostatin，SU-5416，SU-6668，干扰素-α，抗VEGF抗体，EMD121974，CAI，白介素-12，IM862，血小板因子-4，Vitaxin，Angiostatin，苏拉明，TNP-470，PTK-787，ZD-6474，ZD-101，Bay129566，CGS27023A，VEGF受体激酶抑制剂，docetaxel，和紫杉酚。
全文摘要
本发明公开了式(I)的化合物或其药学可接受盐或溶剂化物。该化合物有效治疗趋化因子介导的疾病，例如急性和慢性炎性疾病和癌症。
文档编号A61P13/12GK1582280SQ03801923
公开日2005年2月16日 申请日期2003年1月3日 优先权日2002年1月4日
发明者A·G·塔维拉斯, M·德怀尔, 巢健萍, J·J·巴尔德温, R·J·默里特, 李革, J·朝, 郁有农 申请人:先灵公司, 法马科皮亚公司
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