一种中药降血糖药及其制备方法
专利名称：一种中药降血糖药及其制备方法
技术领域：
本发明属于中药新药研发领域。涉及利用传统中药制备降血糖药及其制备方法， 尤其涉及采用现代提取分离、技术，从中药柞树叶中获得具有降血糖作用的有效组分，制备 降血糖药。
背景技术：
糖尿病为一种常见病，全世界现有糖尿病患者1. 5亿，据预测到2025年患者人数 将增加到3. 33亿.糖尿病中医辨证属于“消渴”病范畴。究其病机主要在于阴津亏损，燥热 偏甚，而以阴虚为本，燥热为标。燥热内生，津干液枯，气血涩滞，久而为瘀。近几年新的防治 技术主要有胰岛细胞移植、胰腺移植、胰岛素泵代替胰岛素注射以及糖尿病的免疫疗法等， 临床常用的治疗药物有双胍类降糖药物-盐酸二甲双胍和降糖灵(苯乙双胍)。降糖灵主 要副作用是胃肠道反应，有厌食、口苦、恶心、呕吐、腹泻等症状，因经肝脏代谢，易诱发乳酸 中毒。虽然二甲双胍诱乳酸酸中毒的可能性比降糖灵显著减少，但仍然有此副作用。最近， 美国已根据受体学说，开发出第三代治疗糖尿病的药物——曲格列酮，据目前报道来看，远 期疗效稳定，但有一定的副作用，仍未大面积推广。因此，如何使糖尿病病人的血糖长期保 持稳定，需要研发疗效好、副作用少且小、标本兼治的降糖中药现代制剂。柞树叶为壳斗科植物蒙栎Quercus mongolica Fisch的树叶，味微苦、涩、性平，清 热止痢，止咳，解毒消肿。主治痢疾，肠炎，消化不良，支气管炎，痈肿，痔疮。国内外关于其化 学成分研究仅见谷留醇、羽扇豆醇、粘霉烯醇及脂肪烃类成分。参见《中华本草》(第 2 卷，438-440 页)
发明内容
本发明要解决的技术问题是从柞树叶中，研究开发降血糖的有效组分的中药现代 制剂。副作用显著减少并降低，使其便于患者长期服用仍相当安全。能够减轻或抑制糖尿 病并发症的发生和发展。本发明要解决的技术问题还包括研究制备上述降血糖中药组合物 的提取分离方法，该方法应重现性好，能够用于工业化生产。为解决上述技术问题，本发明研究制定了如下技术方案本发明提供了一种具有降血糖作用的柞树叶有效组分。该组合物的制备方法，包括如下步骤(1)取柞树叶药材，用水和/或低级醇提取，得到提取液，将所得提取液浓缩，干 燥，即为有效组分；或者，(2)将步骤1)提取液直接上大孔吸附树脂柱，或者将步骤1)提取液先浓缩再分散 后，上大孔吸附树脂柱；依次用0-95%低级醇对大孔吸附树脂柱进行梯度洗脱，分别收集 各洗脱物；将其中45-55%低级醇洗脱物和/或85-99%低级醇洗脱物，浓缩干燥后即为有 效组分；或者，(3)取步骤2)中45-55%低级醇洗脱物和/或85_99%低级醇洗脱物浓缩后，用15-60目聚酰胺进行层析，用0-95%低级醇进行梯度洗脱，收集其30%和/或50%低级醇 浓度的洗脱物，浓缩干燥得到有效组分。所述提取物制备方法中，提取或者梯度洗脱时，所用的低级醇是指碳数为C1-C5 的直链或支链低级醇(所述低级醇优选甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇)；水和低级醇是V/V混 合(例如，在一定毫升数的低级醇中，加入一定毫升数的水)。步骤⑴提取中低级醇浓度为0-95% ；用回流、浸渍、渗漉或水煎方法提取；步骤2)中所述大孔树脂为聚苯乙烯型、聚丙烯酸酯型或聚甲基丙烯酸酯型 中的任意一种或几种为骨架材料的树脂；步骤2)中大孔吸附树脂柱梯度洗脱较好的方法 是先用5%以下的低级醇除去杂质，再用5-95%低级醇洗脱；收集50%低级醇洗脱物和/ 或95%低级醇洗脱物，浓缩，即得柞树叶有效组分；步骤3)中聚酰胺层析梯度洗脱优选用浓度为低于5%的低级醇除去杂质，再用浓度5-95%低级醇；收集30%和/或50%低级醇浓度的洗脱物，浓缩，即得 柞树叶有效组分；前述制备方法中优选提取所用溶剂是0-95%乙醇；提取溶剂用量为药材用量的10-12倍；提取时间为2h/次；共提取3次；大孔吸附树脂柱的梯度洗脱是 先用0-40%乙醇除去杂质，再用50-95%乙醇洗脱，收集50%低级醇洗脱物和/或95%低 级醇洗脱物，浓缩得有效组分；提取或者对大孔吸附树脂柱或聚酰胺层析进行梯度洗脱时， 所用低级醇选自甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇中的任意一种或它们的混合物；对大孔吸附树脂 柱进行洗脱时，洗脱溶剂的用量为所用树脂体积的8-12倍量，优选10倍量；对聚酰胺柱洗 脱时，各洗脱溶剂的用量为所用聚酰胺体积的2-5倍量，优选3倍量。所述大孔树脂选自 AB-8、D101型树脂；浓缩干燥选用减压、真空、冷冻或喷雾方法中的任意一种方法进行。更优选的制备方法中，梯度洗脱是先用0-5%乙醇杂质，再用10% -20%乙醇洗脱 杂质；再用50% -95%乙醇洗脱，收集50%低级醇洗脱物和/或95%低级醇洗脱物，浓缩得 有效组分。前述任一种预防或治疗高血糖组有效组分，将前述人一种柞树叶有效组分，与药 学上可接受载体混合，制成口服制剂或注射剂。所述的药学可接受载体，辅料和对本发明药 效没有明显影响的抗氧化剂、氨基酸、维生素、碳水化合物或植物提取物。所述口服制剂为 胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、片剂或滴丸，所述注射剂包括冻干粉针剂或注射液。前述降血糖有效组分，将前述任一种柞树叶有效组分与其它中药组成复方，所述 的中药包括活血化淤药丹参、川芎、龟箭羽、赤芍、牡丹皮、水蛭、当归；益气养阴药黄芪、人 参、山茱萸、枸杞子；及滋阴清热药黄连、麦冬、地骨皮、知母、地黄、玉竹、黄精。前述任一种柞树叶有效组分在制备预防或治疗高血糖疾病的药物或保健品中的 应用，所述高血糖疾病包括糖尿病。本发明以活性为先导，对柞树叶降糖的活性组分进行了追踪。实验从不同提取部 位着手，选用正常的和化学性糖尿病小鼠模型，在整体水平进行降血糖药学学比较，初步确 定柞树叶降糖的有效组分。为了得到具有降血糖作用的柞树叶有效组分，本发明人利用柞树叶为原料，经过 水或极性有机溶剂提取、大孔吸附树脂洗脱、洗脱液浓缩干燥，得到柞树叶有效组分。本发 明以柞树叶有效组分为有效活性组分，用于制备预防或治疗降血糖药物或保健品，该药物或保健品以柞树叶有效组分和药学上可接受的载体混合，药学上可接受的载体包括口服制 剂辅料、或胃肠外途径给药的辅料。给药途径可以口服、注射、局部给药等。根据本发明的技术方案，该中药制剂或保健品制剂，其中口服制剂或折射用制剂， 其中口服制剂包括胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、片剂或滴丸等。所述注射剂包括冻干 粉针剂或注射液。所用辅料包括，如淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二 醇、异丙醇、土温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、糊精、环糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨 酸、柠檬酸、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、硬脂酸盐和明胶等常规辅料。也包括对本发明药效没有 明显影响的抗氧化剂、氨基酸、维生素、碳水化合物或植物提取物。所述药用制剂为口服制 剂，包括胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、片剂或滴丸等；或者为注射剂，包括冻干粉针剂 和注射液等；或者为局部给药制剂，包括霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂、皮下植入剂等。制剂的 后期制备工艺均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定。糖尿病胰岛细胞受损，胰岛素分泌不足而引起的代谢紊乱的一种内分泌疾病，一 般认为降血糖的作用机制主要涉及两个方面一是促进胰岛素的分泌和释放或是胰高糖素 的分泌；二是影响胰岛素受体后代谢的某些环节，主要是抑制肝脏的糖异生作用，其目的均 是降低并控制血糖水平。研究结果显示柞树叶对健康小鼠血糖无明显影响，提示其没有明 显的刺激胰岛素释放作用或胰岛素样作用；柞树叶中提取分离的有效组分在低剂量条件 下，对四氧嘧啶所致的血糖升高有明显的降低作用，这表明其均有修复受损伤的B细胞的 功能和降低机体对胰岛素的拮抗性。糖尿病中医辨证属于“消渴”病范畴。究其病机主要在于阴津亏损，燥热偏甚，而 以阴虚为本，燥热为标。燥热内生，津干液枯，气血涩滞，久而为瘀。故治疗糖尿病当以养阴 清热、活血化淤为主。柞树叶性平，味微苦、涩，具清热止痢，止咳，解毒消肿。柞树叶中提取 分离的有效组分，其治疗消渴能兼顾标本，切中消渴病病机。本发明研究发现，柞树叶可与 人参、黄连、肉桂、黄芪、山萸肉、当归等中药，组成具有降糖作用的复方，降糖效果明显。由于采用了中药现代化技术中的树脂技术，制备工艺简单，成本低，适合工业化生 产。
具体实施例方式本发明人通过以下实施例详细说明本发明技术方案的实施，但不应以此限定本发 明的实施范围。实施例1 柞树叶有效组分的制备方法称取5kg药材，用10倍药材量水提取药材，回流提取三次，每次1小时，合并三 次提取液，抽滤提取液，浓缩至干，得210g样品，即得。样品溶解后，进行α-萘酚试验 (Molish)反应取溶液lml，加10% α -萘酚醇液1滴，摇勻，沿管壁缓慢加入&H2S0410滴， 不振摇，观察两液介面间有出现紫红色杯，说明存在糖、苷类成分；利用TLC(薄层色谱)检 识(展开剂n-BuOH HAc H20 = 4 1 5，V/V)，在 254nm 下有暗斑，FeCl3 溶液喷洒， 显深蓝色斑点；实施例2 柞树叶有效组分的制备方法称取5kg药材，用10倍药材量95%乙醇提取药材，回流提取三次，每次1小时，合 并三次提取液，抽滤提取液，浓缩至干，得143g样品，即得。样品溶解后，进行α-萘酚试验 (Molish)反应取溶液1ml，加10% α -萘酚醇液1滴，摇勻，沿管壁缓慢加入浓H2SO4IO滴，不振摇，观察两液介面间有出现紫红色杯，说明存在糖、苷类成分；利用TLC(薄层色谱)检 识(展开剂CHCl3 MeOH = 9 1，V/V))，在254nm下有暗斑，香兰醛-硫酸溶液喷洒，后 加热，有深红色斑点出现。实施例3 柞树叶有效组分的制备方法称取5kg药材，用10倍药材量水提取药材，回流提取三次，每次1小时，合并三次 提取液，抽滤提取液，上样于5kg处理好的DlOl大孔树脂，流速15ml/min，上样完成后，水 洗脱至洗脱液近无色，共用水50升，20%乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，50%乙醇 洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，80 %乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 30升，最后用 95%乙醇洗脱30升。浓缩，干燥，收集样品。各洗脱物浓缩后所得样品重量分别为2. 60g、 157. 5g、22. 40g、4. 60g和3. 7g。样品溶解后，进行α -萘酚试验(Molish)反应取溶液lml， 加10% α _萘酚醇液1滴，摇勻，沿管壁缓慢加入浓H2SO4IO滴，不振摇，观察两液介面间有 出现紫红色杯，说明存在糖、苷类成分。实施例4 柞树叶有效组分的制备方法称取5kg药材，用10倍药材量水提取药材，回流提取三次，每次1小时，合并三次 提取液，抽滤提取液，上样于5kg处理好的AB-8大孔树脂，流速15ml/min，上样完成后，水洗 脱至洗脱液近无色，共用水50升，20%乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，50%乙醇洗 脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，80 %乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 30升，最后用95 % 乙醇洗脱30升。浓缩干燥，收集样品。各洗脱物浓缩后所得样品重量分别为3. 20g、130. 0g、 26. 40g、8. 60g和5. 3g。样品溶解后，进行α-萘酚试验(Molish)反应取溶液lml，加10% α -萘酚醇液1滴，摇勻，沿管壁缓慢加入浓貼0410滴，不振摇，观察两液介面间有出现紫红 色杯，说明存在糖、苷类成分；利用TLC(薄层色谱)检识(展开剂CHCl3 MeOH = 9 1， V/V))，在254nm下有暗斑，香兰醛-硫酸溶液喷洒，后加热，有深红色斑点出现。实施例5 柞树叶聚酰胺层析分离的有效组分的制备方法称取5kg药材，用10倍药材量水提取药材，回流提取三次，每次1小时，合并三次 提取液，抽滤提取液，上样于5kg处理好的DlOl大孔树脂，流速15ml/min，上样完成后，水洗 脱至洗脱液近无色，共用水50升，20%乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，50%乙醇洗 脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，80 %乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 30升，最后用95 % 乙醇洗脱30升。浓缩，干燥，收集样品，即得。取上述柞树叶50%乙醇洗脱物组分，用15-60 目聚酰胺进行层析，用含水乙醇梯度洗脱，分别收集其30%乙醇浓度的洗脱部位，得到有效 组分6. 4g ；利用TLC (薄层色谱)检识(展开剂:n-BuOH HAc H2O = 4 1 5，V/V)， 在254nm下有暗斑，FeCl3溶液喷洒，显深蓝色斑点。实施例6 柞树叶聚酰胺层析分离的有效组分的制备方法称取5kg药材，用10倍药材量水提取药材，回流提取三次，每次1小时，合并三次 提取液，抽滤提取液，上样于5kg处理好的DlOl大孔树脂，流速15ml/min，上样完成后，水洗 脱至洗脱液近无色，共用水50升，20%乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，50%乙醇洗 脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，80 %乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 30升，最后用95 % 乙醇洗脱30升。浓缩，干燥，收集样品，即得。取上述柞树叶50%乙醇洗脱物组分，用15-60 目聚酰胺进行层析，用含水乙醇梯度洗脱，分别收集其50%乙醇浓度的洗脱部位，得到有效 组分9. 6g ；利用TLC (薄层色谱)检识(展开剂n-BuOH HAc H2O = 4 1 5，V/V)，
7在254nm下有暗斑，FeCl3溶液喷洒，显深蓝色斑点。实施例7 柞树叶有效组分的胶囊剂制备取实施例5或实施例6方法制备的柞树叶有效组分100g，60°C干燥，研磨粉碎，过 80目筛，加过80目筛的微晶纤维素100g，混合均勻，用70%乙醇适量制成软材，过30目筛 制颗粒，烘干，使水分小于5%，过40目筛整粒，分装于3号胶囊中。每粒胶囊含柞树叶有效 组分0. Ig,用铝塑复合包装，即得。口服给药，每日3次，每次1粒。实施例8 柞树叶有效组分的片剂制备取实施例5或实施例6方法制备的柞树叶有效组分60g，加入微晶纤维素60g，以 2%的羟丙甲纤维素作为粘合剂进行制软材，制粒干燥整粒，加入4%的崩解剂羧甲基淀粉 钠和润滑剂0. 5 %硬脂酸镁与细粉混合均勻，干粒加入硬脂酸镁，整粒，混勻，压片，即得。每 片含柞树叶有效组分0. lg。口服给药，每日3次，每次1片。实施例9 柞树叶水、醇提取物对四氧嘧啶致小鼠高血糖的影响取健康ICR小鼠88只，其中正常对照组10只，尾静脉注射生理盐水0. lml/10g,其 余小鼠尾静脉注射四氧嘧啶生理盐水溶液(45mg/kg)(造模剂量根据预试验结果定的)，造 模72h后测空腹血糖，血糖值大于11. lmmol/L的小鼠为糖尿病动物模型，按血糖值随机分 为模型对照组、阳性对照组(降糖灵150mg/kg)、柞树叶水提取物(实施例1所得样品)小 (IOg生药/kg)、大(20g生药/kg)剂量组，柞树叶醇提取物(实施例2所得样品)小(IOg 生药/kg)、大(20g生药/kg)剂量组共6组。各给药组均按0.2ml/10g体积灌胃给药，每 天1次，连续14天，正常对照组和模型对照组给予等体积生理盐水。给药第7天眶后取血 测空腹血糖，第14天摘眼球取血，测空腹血糖值。实验数据用表示，组间用t检验进行 统计学处理。表1柞树叶水、醇提取物对四氧嘧啶致小鼠高血糖的影响，药后7天和14天小鼠
血糖结果(x±s)
注与模型对照组比较*P < 0. 05**P < 0. 01***P < 0. 001与正常对照组比较ΔΔΔΡ
< 0. 001由表1血糖值结果可知，模型组与正常组比较，血糖值明显升高，经统计学处理差异有极显著性(P <0.001)；阳性组与模型组比较血糖值明显降低，经统计学处理差异有 极显著性(P <0.001)；柞树叶水提取物大剂量组与模型组比较，给药14天血糖值明显降 低，经统计学处理差异有显著性(P < 0.05)，降糖率为20.49% ；柞树叶醇提取物小、大剂 量组与模型组比较，给药14天血糖值明显降低，经统计学处理差异有显著性(P < 0. 05-P < 0.01)，降糖率分别为12. 13%和22. 49%。实施例10 柞树叶大孔吸附树脂洗脱物对四氧嘧啶致小鼠高血糖的影响取健康ICR小鼠87只，其中正常对照组10只，尾静脉注射生理盐水0. lml/10g, 其余小鼠尾静脉注射四氧嘧啶生理盐水溶液(45mg/kg)(造模剂量根据预试验结果定的)， 造模72h后测空腹血糖，血糖值大于11. lmmol/L的小鼠为糖尿病动物模型，按血糖值随机 分为模型对照组、阳性对照组(降糖灵150mg/kg)、柞树叶(实施例3所得样品)水洗脱 物组(200mg/kg)、20%乙醇洗脱物组(200mg/kg)、50%乙醇洗脱物组(200mg/kg)、80 %乙 醇洗脱物组(200mg/kg)、95%乙醇洗脱物组(200mg/kg)共7组。各给药组均按0. 2ml/10g 体积灌胃给药，每天1次，连续14天，正常对照组和模型对照组给予等体积生理盐水。给药 第7天眶后取血测空腹血糖，第14天摘眼球取血，测空腹血糖值。实验数据用表示，组 间用t检验进行统计学处理。表2柞树叶大孔吸附树脂洗脱物药后7天和14天对四氧嘧啶诱发高血糖小鼠血
糖的影响( 士S)
动物数(只) 剂量 血糖(mmol/L) 降糖率(％) 组别--- 注与模型对照组比较，***P < 0. 001广P <0.01,*P< 0. 05 ；与空白对照组比较， ΔΔΔΡ < 0. 001.由表2血糖值结果可知，药前血糖值各造模组与空白对照组比较，小鼠血 糖值明显升高，差异具有显著性(P < 0. 001)，符合随机分组要求。给药7天血糖值模型对 照组与空白对照组比较，小鼠的血糖值明显升高，差异有显著性(P <0.001)；降糖灵组与 模型对照组比较，小鼠的血糖值明显降低，差异有显著性(P < 0. 001)，降糖率为56. 2%;柞树叶50%乙醇洗脱物组、95%乙醇洗脱物组与模型对照组比较，小鼠的血糖值有所降低，出 现显著性差异(P < 0. 05)，降糖率分别为21. 6%,23. 6% ；柞树叶水洗脱物组、柞树叶20% 乙醇洗脱物组、柞树叶80%乙醇洗脱物组与模型对照组比较，小鼠的血糖值有所降低，但均 未出现显著性差异(P > 0. 05)，降糖率分别为9. 0%、3. 4%、9. 9%。给药14天血糖值模型 对照组与空白对照组比较，小鼠的血糖值明显升高，差异有显著性(P<0.001)；降糖灵组 与模型对照组比较，小鼠的血糖值明显降低，差异有显著性(P < 0. 001)，降糖率为50. 6%； 柞树叶50%乙醇洗脱物组、95%乙醇洗脱物组与模型对照组比较，小鼠的血糖值有所降低， 出现显著性差异(P < 0. 05)，降糖率分别为25. 3%,24.9% ；；柞树叶水洗脱物组、柞树叶 20%乙醇洗脱物组、柞树叶80%乙醇洗脱物组与模型对照组比较，小鼠的血糖值有所降低， 但均未出现显著性差异(P > 0. 05)，降糖率分别为5.4%、11.4%、11.7%。实施例11 柞树叶聚酰胺柱洗脱物对四氧嘧啶致小鼠高血糖的影响取健康ICR小鼠54只，其中正常对照组10只，尾静脉注射生理盐水0. lml/10g, 其余小鼠尾静脉注射四氧嘧啶生理盐水溶液(45mg/kg)(造模剂量根据预试验结果定的)， 造模72h后测空腹血糖，血糖值大于11. lmmol/L的小鼠为糖尿病动物模型，按血糖值随机 分为模型对照组、阳性对照组(降糖灵150mg/kg)、柞树叶(实施例5和6所得样品)30% 乙醇洗脱物组(200mg/kg)和50%乙醇醇洗脱物组(200mg/kg)共4组。各给药组均按 0. 2ml/10g体积灌胃给药，每天1次，连续14天，正常对照组和模型对照组给予等体积生理 盐水。给药第7天眶后取血测空腹血糖，第14天摘眼球取血，测空腹血糖值。实验数据用
表示，组间用t检验进行统计学处理。表3柞树叶聚酰胺柱洗脱物药后7天和14天对四氧嘧啶诱发高血糖小鼠血糖的 影响(x±S ) 注与模型对照组比较，***Ρ < 0. 001广P < 0. 01，*Ρ < 0. 05 ；与空白对照组比较， ΔΔΔΡ < 0. 001.由表2血糖值结果可知，药前血糖值模型对照组与空白对照组比较，小鼠 血糖值明显升高，差异具有显著性(P < 0.001)，各给药组与模型对照组比较，小鼠血糖值 没有明显变化，未出现统计学差异(P >0.05)，符合随机分组要求。给药7天血糖值模型 对照组与空白对照组比较，小鼠的血糖值明显升高，差异有显著性(Ρ<0.001)；降糖灵组 与模型对照组比较，小鼠的血糖值明显降低，差异有显著性(P < 0. 001)，降糖率为54. 8%； 柞树叶30%乙醇洗脱物组、50%乙醇洗脱物组与模型对照组比较，小鼠的血糖值明显降低，出现显著性差异(？<0.01)，降糖率分别为23.1%、25.8%。给药14天血糖值模型对照 组与空白对照组比较，小鼠的血糖值明显升高，差异有显著性(P <0.001)；降糖灵组与模 型对照组比较，小鼠的血糖值明显降低，差异有显著性(P < 0. 001)，降糖率为56. 5%;柞树 叶30%乙醇洗脱物组、50%乙醇洗脱物组与模型对照组比较，小鼠的血糖值明显降低，出现 显著性差异(P < 0. Ol-P < 0.001)，降糖率分别为25. 2%,27. 1%0实施例12 含柞树叶的降糖复方具体处方组成如下柞树叶20g|、人参15g、黄连5g以上各味药按比例混合后，加入500_600ml水，文火煎煮30min，过滤药渣，煎煮两 次。早晚各一次，口服。实施例13 含柞树叶的降糖复方具体处方组成如下柞树叶30g|、肉桂5g、生地10g、知母10g、红花5g以上各味药按比例混合后，加入SOO-IOOOml水，文火煎煮30min，过滤药渣，煎煮 两次。早晚各一次，口服。实施例14 含柞树叶的降糖复方具体处方组成如下柞树叶20g|、人参15g、黄连5g、山萸肉IOg以上各味药按比例混合后，加入500-600ml水，文火煎煮30min，过滤药渣，煎煮两 次。早晚各一次，口服。实施例15 含柞树叶的降糖复方具体处方组成如下柞树叶30g|、黄芪20g、葛根10、山萸肉10、黄连5g以上各味药按比例混合后，加入600-800ml水，文火煎煮30min，过滤药渣，煎煮两 次。早晚各一次，口服。实施例16 含柞树叶的降糖复方具体处方组成如下柞树叶30g|、黄芪20g、淫羊藿10g、当归10g、黄连5g以上各味药按比例混合后，加入SOO-IOOOml水，文火煎煮30min，过滤药渣，煎煮
两次。早晚各一次，口服。
权利要求
一种降血糖的药物组合物，其特征在于包括治疗有效量的有效组分，所述有效组分选自下述提取物柞树叶的水和/或低级醇提取物。
2.权利要求1的药物组合物，其特征在于低级醇选自碳数为C卜C5的直链或支链低级 醇；其中水和低级醇是V/V混合。
3.权利要求2的药物组合物，其中低级醇选自甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇中的任意一种 或它们的混合物。
4.一种降血糖的药物组合物的制备方法，其特征在于将治疗有效量的有效组分和药学 上可接受载体混合，所述有效组分用如下方法制得1)取柞树叶药材，用水和/或低级醇提取，得到提取液，将所得提取液浓缩，干燥，即为 有效组分；或者，2)将步骤1)提取液直接上大孔吸附树脂柱，或者将步骤1)提取液先浓缩再分散后， 上大孔吸附树脂柱；依次用0-95%低级醇对大孔吸附树脂柱进行梯度洗脱，分别收集各洗 脱物；将其中45-55%低级醇洗脱物和/或85-99%低级醇洗脱物，浓缩干燥后即为有效组 分；或者，3)取步骤2)中45-55%低级醇洗脱物和/或85-99%低级醇洗脱物浓缩后，用15-60 目聚酰胺进行层析，用0-95%低级醇进行梯度洗脱，收集其30%和/或50%低级醇浓度的 洗脱物，浓缩干燥得到有效组分。
5.权利要求4的制备方法，其中，提取或者对大孔吸附树脂柱或聚酰胺层析进行梯度洗脱时，所述低级醇是碳数为C1-C5 的直链或支链低级醇；其中水和低级醇是V/V混合；步骤1)提取中低级醇浓度为0-95% ；用回流、浸渍、渗漉或水煎方法提取；步骤2)中所述大孔树脂为聚苯乙烯型、聚丙烯酸酯型或聚甲基丙烯酸酯型中的任意 一种或几种为骨架材料的树脂；步骤2)中大孔吸附树脂柱梯度洗脱是先用浓度为低于5% 的低级醇洗脱除去杂质，再用浓度为X的低级醇洗脱，其中X ( 95% ；收集50%低级 醇洗脱物和/或95%低级醇洗脱物，浓缩；步骤3)中聚酰胺层析梯度洗脱是先用浓度为低于5%的低级醇洗脱除去杂质，再用浓 度为X的低级醇洗脱，其中X < 95%;收集其30%和/或50%低级醇浓度的洗脱物， 浓缩。
6.权利要求4的制备方法，其中，提取或者对大孔吸附树脂柱或聚酰胺层析进行梯度 洗脱时，所用低级醇选自甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇中的任意一种或它们的混合物；所述大 孔树脂选自AB-8、D101型树脂；浓缩干燥选用减压、真空、冷冻或喷雾方法中的任意一种方 法进行。
7.权利要求4的制备方法，其中，提取所用溶剂是0-95%乙醇；大孔吸附树脂柱的梯度 洗脱是先用0-40%乙醇除去杂质，再用50-95%乙醇洗脱，收集50%低级醇洗脱物和/或 95%低级醇洗脱物，浓缩得有效组分。
8.权利要求7制备方法，大孔吸附树脂柱的梯度洗脱是先用0-5%乙醇除去杂质，后用 10% -20%乙醇洗脱除去杂质；再用50% -95%乙醇洗脱，收集50%低级醇洗脱物和/或 95%低级醇洗脱物，浓缩得有效组分。
9.权利要求4的制备方法，所述药学上可接受载体包括常规口服制剂辅料，或者包括常规口服制剂辅料和对本发明药效没有明显影响的抗氧化剂、氨基酸、维生素、碳水化合物 或植物提取物。
10.权利要求1至9任一项中的柞树叶有效组分在制备预防或治疗高血糖疾病的药物 或保健品中的应用。
11.权利要求10的应用，所述高血糖疾病包括糖尿病。
全文摘要
本发明涉及一种柞树树叶的提取物在制备防治高血糖疾病药物中的应用。本发明提供了从该树叶中分离得到提取物的制备方法，并通过药理试验证明，该提取物具有明显的降低血糖作用。本发明同时还提供该提取物用于制备防治糖尿病的药物制剂。
文档编号A61P3/10GK101890063SQ20091014331
公开日2010年11月24日 申请日期2009年5月20日 优先权日2009年5月20日
发明者周亚伟 申请人:周亚伟
技术领域：
本发明属于中药新药研发领域。涉及利用传统中药制备降血糖药及其制备方法， 尤其涉及采用现代提取分离、技术，从中药柞树叶中获得具有降血糖作用的有效组分，制备 降血糖药。
背景技术：
糖尿病为一种常见病，全世界现有糖尿病患者1. 5亿，据预测到2025年患者人数 将增加到3. 33亿.糖尿病中医辨证属于“消渴”病范畴。究其病机主要在于阴津亏损，燥热 偏甚，而以阴虚为本，燥热为标。燥热内生，津干液枯，气血涩滞，久而为瘀。近几年新的防治 技术主要有胰岛细胞移植、胰腺移植、胰岛素泵代替胰岛素注射以及糖尿病的免疫疗法等， 临床常用的治疗药物有双胍类降糖药物-盐酸二甲双胍和降糖灵(苯乙双胍)。降糖灵主 要副作用是胃肠道反应，有厌食、口苦、恶心、呕吐、腹泻等症状，因经肝脏代谢，易诱发乳酸 中毒。虽然二甲双胍诱乳酸酸中毒的可能性比降糖灵显著减少，但仍然有此副作用。最近， 美国已根据受体学说，开发出第三代治疗糖尿病的药物——曲格列酮，据目前报道来看，远 期疗效稳定，但有一定的副作用，仍未大面积推广。因此，如何使糖尿病病人的血糖长期保 持稳定，需要研发疗效好、副作用少且小、标本兼治的降糖中药现代制剂。柞树叶为壳斗科植物蒙栎Quercus mongolica Fisch的树叶，味微苦、涩、性平，清 热止痢，止咳，解毒消肿。主治痢疾，肠炎，消化不良，支气管炎，痈肿，痔疮。国内外关于其化 学成分研究仅见谷留醇、羽扇豆醇、粘霉烯醇及脂肪烃类成分。参见《中华本草》(第 2 卷，438-440 页)
发明内容
本发明要解决的技术问题是从柞树叶中，研究开发降血糖的有效组分的中药现代 制剂。副作用显著减少并降低，使其便于患者长期服用仍相当安全。能够减轻或抑制糖尿 病并发症的发生和发展。本发明要解决的技术问题还包括研究制备上述降血糖中药组合物 的提取分离方法，该方法应重现性好，能够用于工业化生产。为解决上述技术问题，本发明研究制定了如下技术方案本发明提供了一种具有降血糖作用的柞树叶有效组分。该组合物的制备方法，包括如下步骤(1)取柞树叶药材，用水和/或低级醇提取，得到提取液，将所得提取液浓缩，干 燥，即为有效组分；或者，(2)将步骤1)提取液直接上大孔吸附树脂柱，或者将步骤1)提取液先浓缩再分散 后，上大孔吸附树脂柱；依次用0-95%低级醇对大孔吸附树脂柱进行梯度洗脱，分别收集 各洗脱物；将其中45-55%低级醇洗脱物和/或85-99%低级醇洗脱物，浓缩干燥后即为有 效组分；或者，(3)取步骤2)中45-55%低级醇洗脱物和/或85_99%低级醇洗脱物浓缩后，用15-60目聚酰胺进行层析，用0-95%低级醇进行梯度洗脱，收集其30%和/或50%低级醇 浓度的洗脱物，浓缩干燥得到有效组分。所述提取物制备方法中，提取或者梯度洗脱时，所用的低级醇是指碳数为C1-C5 的直链或支链低级醇(所述低级醇优选甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇)；水和低级醇是V/V混 合(例如，在一定毫升数的低级醇中，加入一定毫升数的水)。步骤⑴提取中低级醇浓度为0-95% ；用回流、浸渍、渗漉或水煎方法提取；步骤2)中所述大孔树脂为聚苯乙烯型、聚丙烯酸酯型或聚甲基丙烯酸酯型 中的任意一种或几种为骨架材料的树脂；步骤2)中大孔吸附树脂柱梯度洗脱较好的方法 是先用5%以下的低级醇除去杂质，再用5-95%低级醇洗脱；收集50%低级醇洗脱物和/ 或95%低级醇洗脱物，浓缩，即得柞树叶有效组分；步骤3)中聚酰胺层析梯度洗脱优选用浓度为低于5%的低级醇除去杂质，再用浓度5-95%低级醇；收集30%和/或50%低级醇浓度的洗脱物，浓缩，即得 柞树叶有效组分；前述制备方法中优选提取所用溶剂是0-95%乙醇；提取溶剂用量为药材用量的10-12倍；提取时间为2h/次；共提取3次；大孔吸附树脂柱的梯度洗脱是 先用0-40%乙醇除去杂质，再用50-95%乙醇洗脱，收集50%低级醇洗脱物和/或95%低 级醇洗脱物，浓缩得有效组分；提取或者对大孔吸附树脂柱或聚酰胺层析进行梯度洗脱时， 所用低级醇选自甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇中的任意一种或它们的混合物；对大孔吸附树脂 柱进行洗脱时，洗脱溶剂的用量为所用树脂体积的8-12倍量，优选10倍量；对聚酰胺柱洗 脱时，各洗脱溶剂的用量为所用聚酰胺体积的2-5倍量，优选3倍量。所述大孔树脂选自 AB-8、D101型树脂；浓缩干燥选用减压、真空、冷冻或喷雾方法中的任意一种方法进行。更优选的制备方法中，梯度洗脱是先用0-5%乙醇杂质，再用10% -20%乙醇洗脱 杂质；再用50% -95%乙醇洗脱，收集50%低级醇洗脱物和/或95%低级醇洗脱物，浓缩得 有效组分。前述任一种预防或治疗高血糖组有效组分，将前述人一种柞树叶有效组分，与药 学上可接受载体混合，制成口服制剂或注射剂。所述的药学可接受载体，辅料和对本发明药 效没有明显影响的抗氧化剂、氨基酸、维生素、碳水化合物或植物提取物。所述口服制剂为 胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、片剂或滴丸，所述注射剂包括冻干粉针剂或注射液。前述降血糖有效组分，将前述任一种柞树叶有效组分与其它中药组成复方，所述 的中药包括活血化淤药丹参、川芎、龟箭羽、赤芍、牡丹皮、水蛭、当归；益气养阴药黄芪、人 参、山茱萸、枸杞子；及滋阴清热药黄连、麦冬、地骨皮、知母、地黄、玉竹、黄精。前述任一种柞树叶有效组分在制备预防或治疗高血糖疾病的药物或保健品中的 应用，所述高血糖疾病包括糖尿病。本发明以活性为先导，对柞树叶降糖的活性组分进行了追踪。实验从不同提取部 位着手，选用正常的和化学性糖尿病小鼠模型，在整体水平进行降血糖药学学比较，初步确 定柞树叶降糖的有效组分。为了得到具有降血糖作用的柞树叶有效组分，本发明人利用柞树叶为原料，经过 水或极性有机溶剂提取、大孔吸附树脂洗脱、洗脱液浓缩干燥，得到柞树叶有效组分。本发 明以柞树叶有效组分为有效活性组分，用于制备预防或治疗降血糖药物或保健品，该药物或保健品以柞树叶有效组分和药学上可接受的载体混合，药学上可接受的载体包括口服制 剂辅料、或胃肠外途径给药的辅料。给药途径可以口服、注射、局部给药等。根据本发明的技术方案，该中药制剂或保健品制剂，其中口服制剂或折射用制剂， 其中口服制剂包括胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、片剂或滴丸等。所述注射剂包括冻干 粉针剂或注射液。所用辅料包括，如淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二 醇、异丙醇、土温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、糊精、环糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨 酸、柠檬酸、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、硬脂酸盐和明胶等常规辅料。也包括对本发明药效没有 明显影响的抗氧化剂、氨基酸、维生素、碳水化合物或植物提取物。所述药用制剂为口服制 剂，包括胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、片剂或滴丸等；或者为注射剂，包括冻干粉针剂 和注射液等；或者为局部给药制剂，包括霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂、皮下植入剂等。制剂的 后期制备工艺均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定。糖尿病胰岛细胞受损，胰岛素分泌不足而引起的代谢紊乱的一种内分泌疾病，一 般认为降血糖的作用机制主要涉及两个方面一是促进胰岛素的分泌和释放或是胰高糖素 的分泌；二是影响胰岛素受体后代谢的某些环节，主要是抑制肝脏的糖异生作用，其目的均 是降低并控制血糖水平。研究结果显示柞树叶对健康小鼠血糖无明显影响，提示其没有明 显的刺激胰岛素释放作用或胰岛素样作用；柞树叶中提取分离的有效组分在低剂量条件 下，对四氧嘧啶所致的血糖升高有明显的降低作用，这表明其均有修复受损伤的B细胞的 功能和降低机体对胰岛素的拮抗性。糖尿病中医辨证属于“消渴”病范畴。究其病机主要在于阴津亏损，燥热偏甚，而 以阴虚为本，燥热为标。燥热内生，津干液枯，气血涩滞，久而为瘀。故治疗糖尿病当以养阴 清热、活血化淤为主。柞树叶性平，味微苦、涩，具清热止痢，止咳，解毒消肿。柞树叶中提取 分离的有效组分，其治疗消渴能兼顾标本，切中消渴病病机。本发明研究发现，柞树叶可与 人参、黄连、肉桂、黄芪、山萸肉、当归等中药，组成具有降糖作用的复方，降糖效果明显。由于采用了中药现代化技术中的树脂技术，制备工艺简单，成本低，适合工业化生 产。
具体实施例方式本发明人通过以下实施例详细说明本发明技术方案的实施，但不应以此限定本发 明的实施范围。实施例1 柞树叶有效组分的制备方法称取5kg药材，用10倍药材量水提取药材，回流提取三次，每次1小时，合并三 次提取液，抽滤提取液，浓缩至干，得210g样品，即得。样品溶解后，进行α-萘酚试验 (Molish)反应取溶液lml，加10% α -萘酚醇液1滴，摇勻，沿管壁缓慢加入&H2S0410滴， 不振摇，观察两液介面间有出现紫红色杯，说明存在糖、苷类成分；利用TLC(薄层色谱)检 识(展开剂n-BuOH HAc H20 = 4 1 5，V/V)，在 254nm 下有暗斑，FeCl3 溶液喷洒， 显深蓝色斑点；实施例2 柞树叶有效组分的制备方法称取5kg药材，用10倍药材量95%乙醇提取药材，回流提取三次，每次1小时，合 并三次提取液，抽滤提取液，浓缩至干，得143g样品，即得。样品溶解后，进行α-萘酚试验 (Molish)反应取溶液1ml，加10% α -萘酚醇液1滴，摇勻，沿管壁缓慢加入浓H2SO4IO滴，不振摇，观察两液介面间有出现紫红色杯，说明存在糖、苷类成分；利用TLC(薄层色谱)检 识(展开剂CHCl3 MeOH = 9 1，V/V))，在254nm下有暗斑，香兰醛-硫酸溶液喷洒，后 加热，有深红色斑点出现。实施例3 柞树叶有效组分的制备方法称取5kg药材，用10倍药材量水提取药材，回流提取三次，每次1小时，合并三次 提取液，抽滤提取液，上样于5kg处理好的DlOl大孔树脂，流速15ml/min，上样完成后，水 洗脱至洗脱液近无色，共用水50升，20%乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，50%乙醇 洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，80 %乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 30升，最后用 95%乙醇洗脱30升。浓缩，干燥，收集样品。各洗脱物浓缩后所得样品重量分别为2. 60g、 157. 5g、22. 40g、4. 60g和3. 7g。样品溶解后，进行α -萘酚试验(Molish)反应取溶液lml， 加10% α _萘酚醇液1滴，摇勻，沿管壁缓慢加入浓H2SO4IO滴，不振摇，观察两液介面间有 出现紫红色杯，说明存在糖、苷类成分。实施例4 柞树叶有效组分的制备方法称取5kg药材，用10倍药材量水提取药材，回流提取三次，每次1小时，合并三次 提取液，抽滤提取液，上样于5kg处理好的AB-8大孔树脂，流速15ml/min，上样完成后，水洗 脱至洗脱液近无色，共用水50升，20%乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，50%乙醇洗 脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，80 %乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 30升，最后用95 % 乙醇洗脱30升。浓缩干燥，收集样品。各洗脱物浓缩后所得样品重量分别为3. 20g、130. 0g、 26. 40g、8. 60g和5. 3g。样品溶解后，进行α-萘酚试验(Molish)反应取溶液lml，加10% α -萘酚醇液1滴，摇勻，沿管壁缓慢加入浓貼0410滴，不振摇，观察两液介面间有出现紫红 色杯，说明存在糖、苷类成分；利用TLC(薄层色谱)检识(展开剂CHCl3 MeOH = 9 1， V/V))，在254nm下有暗斑，香兰醛-硫酸溶液喷洒，后加热，有深红色斑点出现。实施例5 柞树叶聚酰胺层析分离的有效组分的制备方法称取5kg药材，用10倍药材量水提取药材，回流提取三次，每次1小时，合并三次 提取液，抽滤提取液，上样于5kg处理好的DlOl大孔树脂，流速15ml/min，上样完成后，水洗 脱至洗脱液近无色，共用水50升，20%乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，50%乙醇洗 脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，80 %乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 30升，最后用95 % 乙醇洗脱30升。浓缩，干燥，收集样品，即得。取上述柞树叶50%乙醇洗脱物组分，用15-60 目聚酰胺进行层析，用含水乙醇梯度洗脱，分别收集其30%乙醇浓度的洗脱部位，得到有效 组分6. 4g ；利用TLC (薄层色谱)检识(展开剂:n-BuOH HAc H2O = 4 1 5，V/V)， 在254nm下有暗斑，FeCl3溶液喷洒，显深蓝色斑点。实施例6 柞树叶聚酰胺层析分离的有效组分的制备方法称取5kg药材，用10倍药材量水提取药材，回流提取三次，每次1小时，合并三次 提取液，抽滤提取液，上样于5kg处理好的DlOl大孔树脂，流速15ml/min，上样完成后，水洗 脱至洗脱液近无色，共用水50升，20%乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，50%乙醇洗 脱至洗脱液近无色，洗脱了 40升，80 %乙醇洗脱至洗脱液近无色，洗脱了 30升，最后用95 % 乙醇洗脱30升。浓缩，干燥，收集样品，即得。取上述柞树叶50%乙醇洗脱物组分，用15-60 目聚酰胺进行层析，用含水乙醇梯度洗脱，分别收集其50%乙醇浓度的洗脱部位，得到有效 组分9. 6g ；利用TLC (薄层色谱)检识(展开剂n-BuOH HAc H2O = 4 1 5，V/V)，
7在254nm下有暗斑，FeCl3溶液喷洒，显深蓝色斑点。实施例7 柞树叶有效组分的胶囊剂制备取实施例5或实施例6方法制备的柞树叶有效组分100g，60°C干燥，研磨粉碎，过 80目筛，加过80目筛的微晶纤维素100g，混合均勻，用70%乙醇适量制成软材，过30目筛 制颗粒，烘干，使水分小于5%，过40目筛整粒，分装于3号胶囊中。每粒胶囊含柞树叶有效 组分0. Ig,用铝塑复合包装，即得。口服给药，每日3次，每次1粒。实施例8 柞树叶有效组分的片剂制备取实施例5或实施例6方法制备的柞树叶有效组分60g，加入微晶纤维素60g，以 2%的羟丙甲纤维素作为粘合剂进行制软材，制粒干燥整粒，加入4%的崩解剂羧甲基淀粉 钠和润滑剂0. 5 %硬脂酸镁与细粉混合均勻，干粒加入硬脂酸镁，整粒，混勻，压片，即得。每 片含柞树叶有效组分0. lg。口服给药，每日3次，每次1片。实施例9 柞树叶水、醇提取物对四氧嘧啶致小鼠高血糖的影响取健康ICR小鼠88只，其中正常对照组10只，尾静脉注射生理盐水0. lml/10g,其 余小鼠尾静脉注射四氧嘧啶生理盐水溶液(45mg/kg)(造模剂量根据预试验结果定的)，造 模72h后测空腹血糖，血糖值大于11. lmmol/L的小鼠为糖尿病动物模型，按血糖值随机分 为模型对照组、阳性对照组(降糖灵150mg/kg)、柞树叶水提取物(实施例1所得样品)小 (IOg生药/kg)、大(20g生药/kg)剂量组，柞树叶醇提取物(实施例2所得样品)小(IOg 生药/kg)、大(20g生药/kg)剂量组共6组。各给药组均按0.2ml/10g体积灌胃给药，每 天1次，连续14天，正常对照组和模型对照组给予等体积生理盐水。给药第7天眶后取血 测空腹血糖，第14天摘眼球取血，测空腹血糖值。实验数据用表示，组间用t检验进行 统计学处理。表1柞树叶水、醇提取物对四氧嘧啶致小鼠高血糖的影响，药后7天和14天小鼠
血糖结果(x±s)
注与模型对照组比较*P < 0. 05**P < 0. 01***P < 0. 001与正常对照组比较ΔΔΔΡ
< 0. 001由表1血糖值结果可知，模型组与正常组比较，血糖值明显升高，经统计学处理差异有极显著性(P <0.001)；阳性组与模型组比较血糖值明显降低，经统计学处理差异有 极显著性(P <0.001)；柞树叶水提取物大剂量组与模型组比较，给药14天血糖值明显降 低，经统计学处理差异有显著性(P < 0.05)，降糖率为20.49% ；柞树叶醇提取物小、大剂 量组与模型组比较，给药14天血糖值明显降低，经统计学处理差异有显著性(P < 0. 05-P < 0.01)，降糖率分别为12. 13%和22. 49%。实施例10 柞树叶大孔吸附树脂洗脱物对四氧嘧啶致小鼠高血糖的影响取健康ICR小鼠87只，其中正常对照组10只，尾静脉注射生理盐水0. lml/10g, 其余小鼠尾静脉注射四氧嘧啶生理盐水溶液(45mg/kg)(造模剂量根据预试验结果定的)， 造模72h后测空腹血糖，血糖值大于11. lmmol/L的小鼠为糖尿病动物模型，按血糖值随机 分为模型对照组、阳性对照组(降糖灵150mg/kg)、柞树叶(实施例3所得样品)水洗脱 物组(200mg/kg)、20%乙醇洗脱物组(200mg/kg)、50%乙醇洗脱物组(200mg/kg)、80 %乙 醇洗脱物组(200mg/kg)、95%乙醇洗脱物组(200mg/kg)共7组。各给药组均按0. 2ml/10g 体积灌胃给药，每天1次，连续14天，正常对照组和模型对照组给予等体积生理盐水。给药 第7天眶后取血测空腹血糖，第14天摘眼球取血，测空腹血糖值。实验数据用表示，组 间用t检验进行统计学处理。表2柞树叶大孔吸附树脂洗脱物药后7天和14天对四氧嘧啶诱发高血糖小鼠血
糖的影响( 士S)
动物数(只) 剂量 血糖(mmol/L) 降糖率(％) 组别--- 注与模型对照组比较，***P < 0. 001广P <0.01,*P< 0. 05 ；与空白对照组比较， ΔΔΔΡ < 0. 001.由表2血糖值结果可知，药前血糖值各造模组与空白对照组比较，小鼠血 糖值明显升高，差异具有显著性(P < 0. 001)，符合随机分组要求。给药7天血糖值模型对 照组与空白对照组比较，小鼠的血糖值明显升高，差异有显著性(P <0.001)；降糖灵组与 模型对照组比较，小鼠的血糖值明显降低，差异有显著性(P < 0. 001)，降糖率为56. 2%;柞树叶50%乙醇洗脱物组、95%乙醇洗脱物组与模型对照组比较，小鼠的血糖值有所降低，出 现显著性差异(P < 0. 05)，降糖率分别为21. 6%,23. 6% ；柞树叶水洗脱物组、柞树叶20% 乙醇洗脱物组、柞树叶80%乙醇洗脱物组与模型对照组比较，小鼠的血糖值有所降低，但均 未出现显著性差异(P > 0. 05)，降糖率分别为9. 0%、3. 4%、9. 9%。给药14天血糖值模型 对照组与空白对照组比较，小鼠的血糖值明显升高，差异有显著性(P<0.001)；降糖灵组 与模型对照组比较，小鼠的血糖值明显降低，差异有显著性(P < 0. 001)，降糖率为50. 6%； 柞树叶50%乙醇洗脱物组、95%乙醇洗脱物组与模型对照组比较，小鼠的血糖值有所降低， 出现显著性差异(P < 0. 05)，降糖率分别为25. 3%,24.9% ；；柞树叶水洗脱物组、柞树叶 20%乙醇洗脱物组、柞树叶80%乙醇洗脱物组与模型对照组比较，小鼠的血糖值有所降低， 但均未出现显著性差异(P > 0. 05)，降糖率分别为5.4%、11.4%、11.7%。实施例11 柞树叶聚酰胺柱洗脱物对四氧嘧啶致小鼠高血糖的影响取健康ICR小鼠54只，其中正常对照组10只，尾静脉注射生理盐水0. lml/10g, 其余小鼠尾静脉注射四氧嘧啶生理盐水溶液(45mg/kg)(造模剂量根据预试验结果定的)， 造模72h后测空腹血糖，血糖值大于11. lmmol/L的小鼠为糖尿病动物模型，按血糖值随机 分为模型对照组、阳性对照组(降糖灵150mg/kg)、柞树叶(实施例5和6所得样品)30% 乙醇洗脱物组(200mg/kg)和50%乙醇醇洗脱物组(200mg/kg)共4组。各给药组均按 0. 2ml/10g体积灌胃给药，每天1次，连续14天，正常对照组和模型对照组给予等体积生理 盐水。给药第7天眶后取血测空腹血糖，第14天摘眼球取血，测空腹血糖值。实验数据用
表示，组间用t检验进行统计学处理。表3柞树叶聚酰胺柱洗脱物药后7天和14天对四氧嘧啶诱发高血糖小鼠血糖的 影响(x±S ) 注与模型对照组比较，***Ρ < 0. 001广P < 0. 01，*Ρ < 0. 05 ；与空白对照组比较， ΔΔΔΡ < 0. 001.由表2血糖值结果可知，药前血糖值模型对照组与空白对照组比较，小鼠 血糖值明显升高，差异具有显著性(P < 0.001)，各给药组与模型对照组比较，小鼠血糖值 没有明显变化，未出现统计学差异(P >0.05)，符合随机分组要求。给药7天血糖值模型 对照组与空白对照组比较，小鼠的血糖值明显升高，差异有显著性(Ρ<0.001)；降糖灵组 与模型对照组比较，小鼠的血糖值明显降低，差异有显著性(P < 0. 001)，降糖率为54. 8%； 柞树叶30%乙醇洗脱物组、50%乙醇洗脱物组与模型对照组比较，小鼠的血糖值明显降低，出现显著性差异(？<0.01)，降糖率分别为23.1%、25.8%。给药14天血糖值模型对照 组与空白对照组比较，小鼠的血糖值明显升高，差异有显著性(P <0.001)；降糖灵组与模 型对照组比较，小鼠的血糖值明显降低，差异有显著性(P < 0. 001)，降糖率为56. 5%;柞树 叶30%乙醇洗脱物组、50%乙醇洗脱物组与模型对照组比较，小鼠的血糖值明显降低，出现 显著性差异(P < 0. Ol-P < 0.001)，降糖率分别为25. 2%,27. 1%0实施例12 含柞树叶的降糖复方具体处方组成如下柞树叶20g|、人参15g、黄连5g以上各味药按比例混合后，加入500_600ml水，文火煎煮30min，过滤药渣，煎煮两 次。早晚各一次，口服。实施例13 含柞树叶的降糖复方具体处方组成如下柞树叶30g|、肉桂5g、生地10g、知母10g、红花5g以上各味药按比例混合后，加入SOO-IOOOml水，文火煎煮30min，过滤药渣，煎煮 两次。早晚各一次，口服。实施例14 含柞树叶的降糖复方具体处方组成如下柞树叶20g|、人参15g、黄连5g、山萸肉IOg以上各味药按比例混合后，加入500-600ml水，文火煎煮30min，过滤药渣，煎煮两 次。早晚各一次，口服。实施例15 含柞树叶的降糖复方具体处方组成如下柞树叶30g|、黄芪20g、葛根10、山萸肉10、黄连5g以上各味药按比例混合后，加入600-800ml水，文火煎煮30min，过滤药渣，煎煮两 次。早晚各一次，口服。实施例16 含柞树叶的降糖复方具体处方组成如下柞树叶30g|、黄芪20g、淫羊藿10g、当归10g、黄连5g以上各味药按比例混合后，加入SOO-IOOOml水，文火煎煮30min，过滤药渣，煎煮
两次。早晚各一次，口服。
权利要求
一种降血糖的药物组合物，其特征在于包括治疗有效量的有效组分，所述有效组分选自下述提取物柞树叶的水和/或低级醇提取物。
2.权利要求1的药物组合物，其特征在于低级醇选自碳数为C卜C5的直链或支链低级 醇；其中水和低级醇是V/V混合。
3.权利要求2的药物组合物，其中低级醇选自甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇中的任意一种 或它们的混合物。
4.一种降血糖的药物组合物的制备方法，其特征在于将治疗有效量的有效组分和药学 上可接受载体混合，所述有效组分用如下方法制得1)取柞树叶药材，用水和/或低级醇提取，得到提取液，将所得提取液浓缩，干燥，即为 有效组分；或者，2)将步骤1)提取液直接上大孔吸附树脂柱，或者将步骤1)提取液先浓缩再分散后， 上大孔吸附树脂柱；依次用0-95%低级醇对大孔吸附树脂柱进行梯度洗脱，分别收集各洗 脱物；将其中45-55%低级醇洗脱物和/或85-99%低级醇洗脱物，浓缩干燥后即为有效组 分；或者，3)取步骤2)中45-55%低级醇洗脱物和/或85-99%低级醇洗脱物浓缩后，用15-60 目聚酰胺进行层析，用0-95%低级醇进行梯度洗脱，收集其30%和/或50%低级醇浓度的 洗脱物，浓缩干燥得到有效组分。
5.权利要求4的制备方法，其中，提取或者对大孔吸附树脂柱或聚酰胺层析进行梯度洗脱时，所述低级醇是碳数为C1-C5 的直链或支链低级醇；其中水和低级醇是V/V混合；步骤1)提取中低级醇浓度为0-95% ；用回流、浸渍、渗漉或水煎方法提取；步骤2)中所述大孔树脂为聚苯乙烯型、聚丙烯酸酯型或聚甲基丙烯酸酯型中的任意 一种或几种为骨架材料的树脂；步骤2)中大孔吸附树脂柱梯度洗脱是先用浓度为低于5% 的低级醇洗脱除去杂质，再用浓度为X的低级醇洗脱，其中X ( 95% ；收集50%低级 醇洗脱物和/或95%低级醇洗脱物，浓缩；步骤3)中聚酰胺层析梯度洗脱是先用浓度为低于5%的低级醇洗脱除去杂质，再用浓 度为X的低级醇洗脱，其中X < 95%;收集其30%和/或50%低级醇浓度的洗脱物， 浓缩。
6.权利要求4的制备方法，其中，提取或者对大孔吸附树脂柱或聚酰胺层析进行梯度 洗脱时，所用低级醇选自甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇中的任意一种或它们的混合物；所述大 孔树脂选自AB-8、D101型树脂；浓缩干燥选用减压、真空、冷冻或喷雾方法中的任意一种方 法进行。
7.权利要求4的制备方法，其中，提取所用溶剂是0-95%乙醇；大孔吸附树脂柱的梯度 洗脱是先用0-40%乙醇除去杂质，再用50-95%乙醇洗脱，收集50%低级醇洗脱物和/或 95%低级醇洗脱物，浓缩得有效组分。
8.权利要求7制备方法，大孔吸附树脂柱的梯度洗脱是先用0-5%乙醇除去杂质，后用 10% -20%乙醇洗脱除去杂质；再用50% -95%乙醇洗脱，收集50%低级醇洗脱物和/或 95%低级醇洗脱物，浓缩得有效组分。
9.权利要求4的制备方法，所述药学上可接受载体包括常规口服制剂辅料，或者包括常规口服制剂辅料和对本发明药效没有明显影响的抗氧化剂、氨基酸、维生素、碳水化合物 或植物提取物。
10.权利要求1至9任一项中的柞树叶有效组分在制备预防或治疗高血糖疾病的药物 或保健品中的应用。
11.权利要求10的应用，所述高血糖疾病包括糖尿病。
全文摘要
本发明涉及一种柞树树叶的提取物在制备防治高血糖疾病药物中的应用。本发明提供了从该树叶中分离得到提取物的制备方法，并通过药理试验证明，该提取物具有明显的降低血糖作用。本发明同时还提供该提取物用于制备防治糖尿病的药物制剂。
文档编号A61P3/10GK101890063SQ20091014331
公开日2010年11月24日 申请日期2009年5月20日 优先权日2009年5月20日
发明者周亚伟 申请人:周亚伟
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