眼镜蛇短链神经毒素在制备治疗关节炎药物中的用途的制作方法

专利名称：：眼镜蛇短链神经毒素在制备治疗关节炎药物中的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxiii)在制备治疗关节炎药物中的用途。
背景技术：
：蛇毒是由蛇的毒腺分泌的多种组分构成的复杂混合物。蛇毒的干物质中90%以上是蛋白质，是其毒性和其生物学活性的主要成分。祖国传统医学认为眼镜蛇及其毒性成分可通经络，祛风湿，并具有强身健体之功效，早在二十世纪初，人们就开始应用蛇毒来缓解恶性肿瘤疼痛、神经痛和关节痛，随后出现一系列关于蛇毒有类似吗啡样镇痛作用的报道。随着研究的不断深入，现在，蛇毒及其制品已应用于临床，除了镇痛作用外，在抗风湿、抗肿瘤以及在神经系统疾病治疗方面都有很好的疗效。眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)其序列是mktllltllvvtivcldlgytlechnqqssqtptttgcsggetncykkrwrdhrgyrtergcgcpsvkngieinccttdrcnn，所提纯的眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)含64-83个氨基酸，其分子量为6946左右。目前关于眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxiii)治疗风湿性关节炎的研究还没有报道，我们首先发现其有良好的抗风湿性关节炎的作用。
发明内容本发明目的是提供一种眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)在制备治疗关节炎药物中的用途。本发明的技术方案是一种眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxhi)在制备治疗关节炎药物中的用途，所述药物包括口服液、胶囊、涂剂、巴布剂、喷雾剂和注射剂等，所述药物还包括各种单方和复方制剂。尽管中华眼镜蛇蛇毒在临床上已用于治疗风湿和缓解恶性肿瘤疼痛、神经痛和关节痛等，但目前还没有文献报道中华眼镜蛇中提纯的短链神经毒素(Cobrotoxin)可通过口服、鼻(口)粘膜喷雾、透皮给药和注射给药能治疗风湿，尤其是类风湿的报道。我们研究发现眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)对弗氏完全佐剂导致的实验动物类风湿性关节炎，包括原发性和继发性类风湿性关节炎都有很好的治疗作用。这一发现，将对风湿性关节炎的研究和药物开发产生重大的影响，并有临床实用价值，为眼镜蛇短链神经毒素3(Cobrotoxin)开辟临床新的用途。本发明的优点是1.眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)不仅能改善关节肿大和疼痛等症状，还能改善骨关节和滑膜病理改变。2.眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)用量少，有效范围大，从l-600fig/kg都有很好的治疗风湿性关节炎的作用。3.眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)多种给药途径包括皮肤给药、口服、口(鼻)粘膜喷雾和注射等均有效。下面结合实施例对本发明作进一步描述具体实施例方式实施例根据眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)在治疗类风湿性关节炎中的动物实验结果，以及眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxiii)可制成巴布剂的情况。本发明在治疗关节炎时，可采用巴布剂，0.1-10毫克/贴，贴于患病关节处，二天一次。支持本发明的研究结果1、眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin，l-100jig/kg)腹腔注射给药能降低原发性佐剂关节炎大鼠踝关节周长，提高大鼠机械痛阈。2、眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxiii，l-100pg/kg)腹腔注射给药能降低继发性佐剂关节炎大鼠踝关节周长，提高大鼠机械痛阈。3、眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxhi，l-400pg/kg)灌胃给药能降低原发性佐剂关节炎大鼠踝关节周长，提髙大鼠机械痛阈。4、眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin，l-400jig/kg)皮肤涂布给药能降低继发性佐剂关节炎大鼠踝关节周长，提髙大鼠机械痛阈。5、眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin,l-400fig/kg)皮肤涂布给药能降低继发性佐剂关节炎大鼠踝关节周长，提高大鼠机械痛阈。支持本发明的部分实验结果(图表)如下表1眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)灌胃或经皮肤给药对弗氏完全佐剂致大鼠原发性关节炎踝关节周长的影响组别剂量(|ig/kg)6h关节周长差(mm)18h42h灌胃组5011.3±2.611.0±2.07.3±4.210010.7±1.7*10.7±1.45.0±3.6*20013.肚2.110.9±1,59.4±0.9*皮肤涂布4013.1±2.712.4±2.212.0±2.58015.8±2.710.0±1.2*9.3±1.51609.5±4.7*9.0±4.1*8,6±3.7空白对照——13.8士1.7##12.5±1厕11.9士1.8##正常对照—0.13±0.12O.ll士O.lO0.24±0.19*P<0.05，与空白对照组相比；糾P〈0.01，与正常对照组相比结果提示，与正常对照组相比，空白对照组大鼠在注射弗氏完全佐剂后，6，18和42小时，踝关节周长明显增加。注射弗氏完全佐剂6小时，灌胃(IOOpg/kg)和皮肤涂剂(160pg/kg)与空白对照组相比，大鼠踝关节周长明显降低；18小时，皮肤涂布(80，160pg/kg)与空白对照组相比，大鼠踝关节周长差明显降低；42小时，眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)灌胃(100，200jig/kg)与空白对照组相比，大鼠踝关节周长差明显降低。结果见表l。原发性佐剂关节炎病变持续3天后逐渐减轻，继发性病变由迟发性超敏反应引起，于致炎10天后出现新一轮的肿胀。佐剂致炎后11-19天，与正常对照组相比，大鼠踝关节差明显升高。13天，皮肤涂剂组(40,80pg/kg)明显降低大鼠关节周长。15天，灌胃组(200pg/kg)和皮肤涂布组(40,80pg/kg)明显降低大鼠关节周长差，17天，皮肤涂布组(40，80，160jig/kg)明显降低大鼠关节周长差。结果见表2。另外，我们采用注射给药的方法，考察眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxiii)对佐剂关节炎大鼠的抗炎和镇痛作用，实验结果如下眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin，9，18jig/kg)注射给药能明显降低原发性大鼠关节周长差，提髙痛阈，其镇痛效果优于阿司匹林(100000pg/kg)。结果见表3,4。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表4眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)对弗氏完全佐剂致大鼠原发性关节炎机械痛阈的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*P<0.05，***P<0.001，与空白对照组相比眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)明显降低继发性大鼠关节周长差，提高痛阈。在注射弗氏完全佐剂后第15天，眼镜蛇短链神经毒素(18吗/kg)与空白对照组相比，有显著性差异。结果见表5。在注射弗氏完全佐剂后第15和17天，眼镜蛇短链神经毒素(9，18pg/kg)与空白对照组相比，有显著性差异，提示其能降低关节炎疼痛。结果见表6。表5眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)对弗氏完全佐剂致大鼠继发性关节炎踝关节周长的影响_关节周长差(ram)组别剂量11天13天15天17天19天_(^g/kg)_眼镜蛇短链神经毒95.6±1.1素阿司匹林1000004.2±0.9空白对照一5.4±组0.5#抑正常对照--0.4士0.2*P<0.05，***P<0.001，与空白对照组相比，###P<0.001，与正常对照组相比5.8±1.06.5±0.86.2±1.25.8±1.0*5.3±1.05.2±0.87.3±0.7腳0.2±0.24.1±1.1林*5.8±0.7*8.7±0.8甜tt0.5±0,26.4±0.74.3±0.9*6.9±0.8ffiW0.8±0.46.8±1.24.8±0.8*8.2±0.6#抑5.8±1.07表6眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)对弗氏完全佐剂致大鼠继发性关节炎机械痛阈的影响组别剂量g)11天痛阈(g)13天15天17天19天眼镜蛇短91820.6±3.419.3±8.739.7±9.6*42.0±11.4*37.7±10.3阿司匹林100000空白对照一组正常对照--组15.5±3.520.5±2.514.2±2.9#38,5±9.812.7±4.313.8±3.07.0±1.1#14.8±3.854.3±5.7氺氺氺60.0±0.o氺氺氺16.0±3.6tttt48.7±7.260.0±48.7±7.2*16.0±3.5tt35.5±7.945.0±15.054.3±5.733.7±8.654.3±5.7*P<0.05，*"P<0.001,与空白对照组相比，#P<0.05,##P<0.01，与正常对照组相比。8权利要求1.一种眼镜蛇短链神经毒素在制备治疗关节炎药物中的用途。2.根据权利要求1所述的眼镜蛇短链神经毒素在制备治疗关节炎药物中的用途，其特征在于所述药物包括口服液、胶囊、涂剂、巴布剂、喷雾剂和注射剂等各种剂型。3.根据权利要求1所述的眼镜蛇短链神经毒素在制备治疗关节炎药物中的用途，其特征在于所述药物还包括各种单方和复方制剂。全文摘要本发明公开了一种眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)在制备治疗关节炎药物中的用途，眼镜蛇短链神经毒素(Cobrotoxin)是从中华眼镜蛇蛇毒中提纯的神经毒素。我们的研究发现眼镜蛇短链神经毒素在(1-600μg/kg)范围内对风湿性关节炎有明显的治疗作用，其能减轻关节肿大，疼痛等症状，具有用量小、安全、可口服、可注射、可透过口鼻粘膜和皮肤给药等优点。文档编号A61K38/17GK101648000SQ200910144909公开日2010年2月17日申请日期2009年9月7日优先权日2009年9月7日发明者刘艳丽,秦正红,容邹申请人:苏州大学