金线莲多糖及其在制药中的应用和金线莲多糖的制备方法

专利名称：：金线莲多糖及其在制药中的应用和金线莲多糖的制备方法
技术领域：
：本发明涉及金线莲多糖，具体来说涉及这种多糖以及制备方法和其医药用途。
背景技术：
：金线莲别名金蚕、金石松、树草莲等，是兰科开唇兰属的植物花叶开唇兰的全草，味甘、性平，具有清热凉血、除湿解毒的功效，可治疗肺结核咯血、糖尿病、肾炎、膀胱炎、重症肌无力、遗精、风湿性及类风湿性关节炎等症。金线莲富含有多糖、微量元素、强心苷类、氨基酸、有机酸、甾体化合物、黄酮类化合物及生物碱等多种有效成分。金线莲的总糖含量为32%以上，其中还原糖含量为7%左右，寡糖含量为11%左右，多糖含量为14%左右。近年来研究表明，金线莲的水溶性多糖具有重要生理活性，比如消炎功效。
发明内容本发明的第一个目的在于提供一种金线莲多糖。本发明的第二个目的还在于提供一种金线莲多糖的制备方法。本发明的第三个目的在于提供本发明涉及的金线莲多糖的医药用途。本发明提供一种金线莲多糖，是从兰科开唇兰属多年生草本植物金线莲中提取出来，其分子量为100080000道尔顿，固态呈白色或灰白色。本发明的金线莲多糖由下述方法制备A.水提将金线莲药材粉碎，加水提取，取提取液；B.醇沉将步骤A中获得的提取液经过过滤后用乙醇进行醇沉，分离出沉淀物得金线莲粗多糖；C.沉淀将金线莲粗多糖溶于水后，过滤，滤液用碱调pH值至9.014.0，然后再向滤液中加入季铵盐进行沉淀，静置，离心，抽滤，取滤液；D.醇沉向步骤C中抽滤得到的滤液加入乙醇进行醇沉，取沉淀物；E.盐洗步骤D中的沉淀物用氯化物溶液溶解，调节pH值至3.07.0，静置，离心，抽滤，取滤液；F.精制将步骤E中得到的滤液经过醇沉精制或者用大孔树脂柱床精制得水溶液；G.醇沉向步骤F中得到的水溶液中加入乙醇进行醇沉，取沉淀物经干燥得金线莲多糖。在上述的制备方法中，步骤A的水提过程可以采用4(TC10(TC的水浸泡30min以上，过滤后滤渣在4(TC10(TC加水再提取一次，提取时间为30min以上，滤取两次提取液。在所述的步骤B、D和G中醇沉，可以采用体积浓度为95%的乙醇进行醇沉，并经过静置、离心后分离出沉淀物。所述的步骤B、D、G中醇沉后醇的最终体积浓度为30%95%。所述的步骤C中的季铵盐可以选用十六烷基三甲铵溴化物及其氢氧化物、十六烷基吡啶、碘化N-三甲基壳聚糖季铵盐或壳聚糖羟丙基三甲基氯化铵。所述的步骤C中调pH值用的碱可以为氢氧化钠、氢氧化韩、氢氧化钾、碳酸氢钠或氨水等。所述的步骤E中的氯化物可以为氯化钠或氯化钾。所述的步骤E中调pH值用的酸为盐酸、磷酸、柠檬酸或硫酸等。所述的步骤F中用的大孔树脂是AB-8型、X-5型、H107型、S-8型、D3520型、D4006型、D4020型、NKA-9型、XAD-2型、XAD-3型、HP型、SIP1300型、SIP1400型、HPDIOO型、HPD300型、HPD600型、M3型、ABD-4型、DM-130型、D101型、D201型、D301型、1300-型、1300-66型、100型、500型或者600型大孔树脂。所述的步骤F中的醇沉精制是将步骤E中的滤液浓縮至粗金线莲多糖重量的312倍后，加入体积浓度为95%的乙醇，使得溶液中乙醇体积含量达到30%95%，沉淀出金线莲多糖，再将金线莲多糖用312倍量的水加热溶解形成水溶液。所述步骤F中的大孔树脂床精制是将步骤E中的滤液上大孔树脂柱床，并用水洗脱至流出液无色透明，合并流出液，浓縮，过滤，得水溶液。还提供了本发明的金线莲多糖在制备降血糖、降血脂、保肝药物中的应用。本发明采用现代科学方法，对所述的金线莲多糖进行分离、提纯，所制得的金线莲多糖产品安全无毒，制备工艺可靠，原料易得，反应条件温和，收率高，纯度好，环保，稳定性好，对制备设备及场所要求也很低，适合于大规模工业化生产。根据药理、药效学研究的结果表明，本发明所制得的金线莲多糖产品对心血管系统具有明显的作用，可开发成降血糖、降血脂、保肝类药物。具体实施例方式下面通过具体实施例对本发明作进一步详细描述，以助于理解本发明的内容。实施例l:大孔树脂预处理本发明所用大孔树脂型号有AB-8型、X-5型、H107型、S-8型、D3520型、D4006型、D4020型、NKA-9型、XAD-2型、XAD-3型、HP型、SIP1300型、SIP1400型、HPD100型、HPD300型、HPD600型、M3型、ABD-4型、DM-130型、D101型、D201型、D301型、1300-型、1300-66型、100型、500型或者600型大孔树脂。这些型号的大孔树脂处理原理和步骤很相似，所以在下面的实施例中以X-5型大孔树脂为例来简单介绍树脂的预处理以水或乙醇溶胀过夜，湿法装柱，以乙醇或丙酮洗脱，至回收后无白色沉淀或浑浊即可，然后用水洗至无醇味，交替洗脱23次。也可用酸、碱浸，然后再水洗至中性。树脂的再生非吸附性杂质一般用水洗去；吸附性杂质可用一定浓度的酸或碱液除去(NaOH或HCl)。保存时加入一定量的乙醇。实施例2:金线莲多糖制备取金线莲药材，粉碎，取金线莲粉1.0kg，加水10.0L，8(TC加热浸泡提取，提取时间为3.0小时，降温，过滤，得滤液①；滤渣加水8.0L，8(TC加热提取，提取时间为2.0小时，降温，过滤，得滤液②，合并两次滤液得滤液15.5L。在此步骤中为了提取充分，水温低时需要适当延长提取时间。滤液浓縮至7.0L，过滤，得滤液6.7L。将滤液离心，得上清液6.0L，在上清液中加入95%乙醇(v%，以下乙醇浓度均指体积浓度)，使溶液中的乙醇浓度达到70%，静置，离心，取沉淀，沉淀用体积浓度为95%的乙醇和丙酮各洗两次，真空干燥，得金线莲粗多糖242.31g。将200.OOg的金线莲粗多糖溶于2.0L的水，过滤，滤液用10.Omol/L的Na0H溶液调pH值至12.5，然后再向滤液中加入质量浓度为5%的CTAB(十六垸基三甲基溴化铵)溶液，使溶液中的CTAB浓度达到1.5%，静置，离心，得滤液2.3L。滤液加入95%乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到70%,静置，离心，取沉淀，沉淀用l.OL质量浓度为5%的NaCl溶液溶解，再用质量浓度为38%的盐酸溶液调节pH值至5.5，静置，离心，过滤，得滤液0.8L。将滤液上大孔树脂柱床，并用水洗脱至流出液无色透明，得流出液4.4L，浓縮至1.0L，过滤，得滤液0.8L。滤液加入95%乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到70%，静置，离心，取沉淀，沉淀用95%的乙醇和丙酮各洗两次，真空干燥，得金线莲多糖4.62g。检验结果-1.多糖鉴别苯酚一硫酸试剂反应(阳性)2.性状白色粉末2.多糖含量92.94%(用苯酚一硫酸法测定)3.多糖分子量测定28961道尔顿(参考2005年药典二部附录VH)。实施例3:金线莲多糖制备取金线莲药材，粉碎，取金线莲粉1.0kg，加水12.0L，9(TC加热提取，提取时间为4.0小时，降温，过滤，得滤液①；滤渣加水10.0L，9(TC加热提取，提取时间为3.0小时，降温，过滤，得滤液②，合并两次滤液得滤液17.0L。滤液浓縮至7.8L，过滤，得滤液7.3L。将滤液离心，得上清液6.8L，在上清液中加入95%乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到60%，静置，离心，取沉淀，沉淀用95%的乙醇和丙酮各洗两次，真空干燥，得金线莲粗多糖254.22g。将200.00g的金线莲粗多糖溶于3.0L的水，过滤，滤液用10.0mol/L的NaOH溶液调pH值至13.0，然后再向滤液中加入5%的CTAB溶液，使溶液中的CTAB浓度达到1.5%,静置，离心，得滤液2.8L。滤液加入95%乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到60%，静置，离心，取沉淀，沉淀用1.2L质量浓度为5%的Nacl溶液溶解，再用38%的盐酸溶液调节pH值至5.0，静置，离心，过滤，得滤液1.0L。将滤液上大孔树脂柱床，并用水洗脱至流出液无色透明，得流出液5.0L，浓缩至1.2L，过滤，得滤液1.0L。滤液加入95%乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到60%，静置，离心，取沉淀，沉淀用95%的乙醇和丙酮各洗两次，真空干燥，得金线莲多糖4.55g。检验结果1.多糖鉴别苯酚一硫酸试剂反应(阳性)2.性状白色粉末2.多糖含量90.23%(用苯酚一硫酸法测定)3.多糖分子量测定27698道尔顿(参考2005年药典二部附录VH)。实施例4:金线莲多糖制备取金线莲药材，粉碎，取金线莲粉1.0kg，加水10.0L，80。C加热浸泡提取，提取时间为3.0小时，降温，过滤，得滤液9.0L;滤渣加水8.0L，8CTC加热提取，提取时间为2.0小时，降温，过滤，得滤液7.0L，合并两次滤液得滤液16.0L。在此步骤中为了提取充分，水温低时需要适当延长提取时间。滤液浓縮至7.0L，过滤，得滤液6.5L。将滤液离心，得上清液6.0L，在上清液中加入95%乙醇(v%，以下乙醇浓度均指体积浓度)，使溶液中的乙醇浓度达到70%，静置，离心，取沉淀，沉淀用体积浓度为95%的乙醇和丙酮各洗两次，真空干燥，得金线莲粗多糖253.63g。将200.OOg的金线莲粗多糖溶于2.0L的水，过滤，滤液用10.0mol/L的NaOH溶液调pH值至12.5，然后再向滤液中加入质量浓度为5%的CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)溶液，使溶液中的CTAB浓度达到1.5%,静置，离心，得滤液2.5L。滤液加入95%乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到70%,静置，离心，取沉淀，沉淀用1.2L质量浓度为5%的NaCl溶液溶解，再用质量浓度为38%的盐酸溶液调节pH值至5.5，静置，离心，过滤，得滤液l.1L。将滤液浓縮至0.7L，加入95%乙醇，使得溶液中乙醇含量达到70%，静置，离心，取沉淀。沉淀用l.OL水加热溶解，再加入95%乙醇，使得溶液中乙醇含量达到70%，静置，离心，取沉淀。沉淀用1.0L水加热溶解，再加入95%乙醇，使得溶液中乙醇含量达到70%，静置，离心，取沉淀，沉淀用95%的乙醇和丙酮各洗两次，真空干燥，得金线莲多糖4.61g。检验结果1.多糖鉴别苯酚一硫酸试剂反应(阳性)2.性状灰白色粉末2.多糖含量91.61%(用苯酚一硫酸法测定)3.多糖分子量测定31722道尔顿(参考2005年药典二部附录VH)。实验例药效试验结果A、金线莲多糖降低小鼠血糖的作用取小鼠随机分成5组，给药组分别为金线莲多糖(取实施例2制得的金线莲多糖，性状为白色粉末、多糖含量为92.94%、多糖分子量为28961道尔顿)80、160、240mg/kg;对照组为生理盐水，连续4d，在末次给药前动物禁食2h，给药后3h眼眶后静脉丛取血，用葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖含量，结果见表l，按统计学处理，表明金线莲多糖160mg/kg和240mg/kg连续给药4d后血糖水平明显低于对照组。表l金线莲多糖降低小鼠血糖的作用组别小鼠数齐l]量血糖平均值(只)(g/kg)(mmo1/1)正常对照组108.31模型组1021.64金线莲多糖组100.0806.45金线莲多糖组100.1605.62金线莲多糖组100.2404.73优降糖4.63注与正常对照组比较*P〈0.05，*P<0.01B、金线莲多糖预防小鼠高脂血症的作用取昆明种小鼠若干，随机分成6组，如表2与表3。连续灌胃给药10天，空白组给予生理盐水，其他组分别给予相应的药物。以末次给药1小时后腹腔注射蛋黄乳0.5ml/25g。空白组腹腔注射0.5ml的生理盐水。20小时后眼眶取血(禁食不禁水12小时)，低温离心2500转/分钟，取上清血清测量TC和TG两项指标。表2金线莲多糖预防小鼠的高胆固醇血症的作用动物数剂量TC平均值抑制率(只)(g/kg)(■ol/l)(%)正常对照组105.09蛋黄模型组1010.68金线莲多糖组①100.0805.4149.34金线莲多糖组②100.1604.9653.56金线莲多糖组③100.2404.4858.05辛伐他汀组104.5057.86实验结果表明，剂量为0.240g/kg的金线莲多糖组和辛伐他汀组作用相当，所以金线莲多糖对对预防小鼠的高胆固醇血症有非常显著的效果。表3金线莲多糖预防小鼠甘油三脂的作用动物数剂量TG平均值抑制率(只)(g/kg)(mmo1/1)(%)正常对照组103.31蛋黄模型组106.82金线莲多糖组①100.0803.4449.56金线莲多糖组②100.1603,1154.40金线莲多糖组③100.2402.8658.06辛伐他汀组102.9257.18实验结果表明，剂量为0.240g/kg的金线莲多糖组和辛伐他汀组作用相当，所以金线莲多糖对对预防小鼠的甘油三脂有非常显著的效果。C、金线莲多糖的护肝作用取小鼠50只，随机分为空白组、模型组、金线莲多糖低、中、高剂量组。各样品组小鼠每日灌胃给药受试样品，空白组和模型组均灌胃等体积蒸馏水，连续30天。于试验第31天将各组动物隔夜禁食16小时，对照组和个样品组一次空腹注射给予0.1%CC140.lmL/10g体重，空白组腹腔注射等体积蓖麻油，各样品组继续给予受试物。采血前禁食12h，24h后动物眼眶取血。用全自动生化分析仪测ALT、AST，并摘取肝脏，用10%甲醛溶液固定，做病理切片检査。表4金线莲多糖的护肝作用<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>从表4中可以看出金线莲多糖具有护肝的作用，同时表5和表6也能体现金线莲多糖具有明显的护肝作用。权利要求1、一种金线莲多糖，是从兰科开唇兰属多年生草本植物金线莲中提取出来，其分子量为1000～80000道尔顿，固态呈白色或灰白色。2、一种权利要求1中所述金线莲多糖的制备方法，包括如下过程A.水提将金线莲药材粉碎，加水提取，取提取液；B.醇沉将步骤A中中得到的提取液经过过滤后用乙醇进行醇沉，分离出沉淀物得金线莲粗多糖；C.沉淀将金线莲粗多糖溶于水后，过滤，滤液用碱调pH值至9.014.0，然后再向滤液中加入季铵盐进行沉淀，静置，离心，抽滤，取滤液；D.醇沉向步骤C中抽滤得到的滤液加入乙醇进行醇沉，取沉淀物；E.盐洗步骤D中的沉淀物用氯化物溶液溶解，调节pH值至3.07.0，静置，离心，抽滤，取滤液；F.精制将步骤E中得到的滤液经过醇沉精制或者用大孔树脂柱床精制得水溶液；G.醇沉向步骤F中得到的水溶液中加入乙醇进行醇沉，取沉淀物经干燥得金线莲多糖。3、如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的步骤A中的水提过程是采用4(TC100。C的水浸泡30min以上，过滤后滤渣在4(TC10(TC加水再提取一次，提取时间为30min以上，滤取两次提取液。4、如权利要求2所述的制备方法，其特征在于在所述的步骤B、D和G中的醇沉，是采用体积浓度为95%的乙醇进行醇沉，并经过静置、离心后分离出沉淀物，醇沉后醇的最终体积浓度为30%95%。5、如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的步骤C中的季铵盐选用十六烷基三甲铵溴化物及其氢氧化物、十六烷基吡啶、碘化N-三甲基壳聚糖季铵盐或壳聚糖羟丙基三甲基氯化铵。6、如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的步骤E中的氯化物为氯化钠或氯化钾。7、如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的步骤F中用的大孔树脂是AB-8型、X-5型、H107型、S-8型、D3520型、D4006型、D4020型、NKA-9型、XAD-2型、XAD-3型、HP型、SIP1300型、SIP1400型、HPD100型、HPD300型、HPD600型、M3型、ABD-4型、DM-130型、D101型、D201型、D301型、1300-型、1300-66型、100型、500型或者600型大孔树脂。8、如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的步骤F中的醇沉精制是将步骤E中滤液浓縮至粗金线莲多糖重量的312倍后，加入体积浓度为95%的乙醇，使得溶液中乙醇体积含量达到30%95%，沉淀出金线莲多糖，再将金线莲多糖用312倍重量的水加热溶解形成水溶液。9、如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述步骤F中的大孔树脂床精制是将步骤E中的滤液上大孔树脂柱床，并用水洗脱至流出液无色透明，合并流出液，浓縮，过滤，得水溶液。10、一种权利要求1所述的金线莲多糖在制备降血糖和/或降血脂的药物中的应用。11、一种权利要求1所述的金线莲多糖在制备保肝药物中的应用。全文摘要本发明提供一种金线莲多糖制品、其制备方法及其医药用途，金线莲多糖是从金线莲中提取出来，其分子量为1000与80000道尔顿之间，固态呈灰白色或白色。该制品可开发成降血糖、降血脂药物及保健品，其制备方法可靠易行，适合大规模生产，不污染环境，成本低。文档编号A61P1/16GK101580554SQ20091014848公开日2009年11月18日申请日期2009年7月1日优先权日2009年7月1日发明者韩金光申请人:韩金光