(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯组合物及用途的制作方法
专利名称：(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯组合物及用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(以下简称EGCG)与药学上可 结合辅料制备药物制剂组合物及用途。
背景技术：
茶叶中主要成分为黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等多酚类物 质，根据酚性物质特点，采用物理及化学方法提取精制茶叶中的总多酚，其中的活性成分主 要为(-)_表没食子儿茶素没食子酸酯印igallocatechin gal late (EGCG), (_)_表没食子 儿茶素 epigallocatechin (EGC)，(-)-表儿茶素没食子酸酯 epicatechin gallate (ECG)， (+)_表儿茶素epicatechin (EC)，(+)-没食子儿茶素没食子酸酯gallocatechin gallate (GCG)等。EGCG是茶叶中抗氧化活性最强的活性成分，是茶叶保健功能的物质基础。公开的 EGCG有关组合物及应用的专利主要包括02111627. X公开了 EGCG应用于治疗肿瘤药物，不 仅能抑制肿瘤细胞增殖、同时具有使肿瘤细胞不易产生耐药性和提高肿瘤细胞对治疗药物 的敏感性作用；01106982. 1公开了一种EGCG注射剂，用于治疗急性早幼粒白血病，慢性粒 细胞白血病，维甲酸耐药早幼粒细胞白血病；200410015898. 6公开了一种EGCG在制备预防 和治疗因化疗引起脱发药物或功能性食品中的应用；03816788. 3公开了 EGCG和乳铁蛋白、 维生素E、维生素C和类胡萝卜素的组合物用于预防或治疗牙菌斑、牙龈炎、牙周病和口腔 恶臭(口臭)以及增强整个生物体内的抗氧化能力的宠物饲料中的用途；03819982. 3公开 了 EGCG与泛硫乙胺或其代谢物、植烷酸、硫辛酸和普利醇等组合物用于治疗1型糖尿病和 2型糖尿病；02809782. 3公开了 EGCG与多糖、特别是果胶混合形成粉末或颗粒而获得制剂； 03824662. 7公开了 EGCG、泛硫乙胺或其代谢物、植烷酸、硫辛酸、普利醇和辅酶Q-IO的组的 成分，用于治疗或预防糖尿病或肥胖中的用途；200480014636. 6公开了 EGCG活性成分的白 藜芦醇、其衍生物、代谢物或类似物和至少一种选自、染料木黄酮、维生素E、多不饱和脂肪 酸、gamma-亚麻酸和维生素K的药物组合物的抗炎症作用；200510018522. 5公开了一种鼻 腔或口腔喷雾给药EGCG和ECG抗感冒病毒功效成分的单体或复方制剂；200610053032. 3 公开了一种儿茶素(EGCG)、蜂蜜、甘油、EDTA-2Na、l，3-丁二醇、油溶性防腐剂、肝素钠和缓 冲溶液有的皮肤抗衰老作用；200580002404. 3公开了一种含有表没食子儿(EGCG)的绿茶 提取物、毛喉鞘蕊花提取物、白桦提取物和瓜拉那或巴拉圭茶提取物的治疗肥胖症及相关 代谢综合征的制剂；200710096434. 6公开了 EGCG与多糖、特别是果胶混合形成粉末或颗 粒而获得制剂；200680038310. 6公开了一种选自EGCG、羟基酪醇、白藜芦醇及其衍生物、代 谢物或类似物的至少一种组分在制造营养药物性组合物中的用途，用于肌肉损耗、肌肉萎 缩的肌肉消瘦和其它相关肌肉失调症；200710094207. X公开了一种EGCG在制备防治胆石 症、降低胆色素结石及胆固醇结石的形成率的药物中的应用；200680038272. 4公开了一种 EGCG与白藜芦醇、其衍生物、代谢物或类似物的至少一种成分组合用于制造延迟衰老和/ 或用于治疗或预防年龄相关的疾病；200480042552. 3公开了人参皂苷Fl和EGCG的护肤组合物，抑制表皮细胞中细胞凋亡的方法；200510036982. 0公开了一种EGCG与聚乙烯吡咯烷 酮(PVP-k30)固体分散体用于治疗老年性疾病。尽管目前公开的EGCG专利较多，但未见公开的EGCG制剂组合物专利及其它公开 的文献资料报道；查询美国、欧洲及日本等国专利，未见EGCG用于老年性痴呆的组合物专 利。总之，未见EGCG制剂组合物用于预防及治疗老年性痴呆的专利及其它公开资料。
发明内容
本发明目的是提供一种EGCG与药学上可接受辅料制备胶囊或片剂组合物；本发 明另一目的是提供一种EGCG胶囊或片剂组合物用于老年性痴呆的用途。本发明有效成分EGCG可以是从茶叶中提取精制而来，也可以通过化学半合成的 方法而来，含量范围为90. 0% 99. 5%, EGCG分子结构式如下 本发明EGCG原料与药学上可接受的辅料制成胶囊或片剂组合物主要包括但不限 于填充剂(或稀释剂)、粘合剂、润滑剂或助流剂、抗氧化剂、PH调节剂的一种或多种制成， EGCG制剂组合物主要为胶囊剂或片剂，其中胶囊剂主要为硬胶囊，片剂为普通片、包衣片、 糖衣片、薄膜衣片、肠溶衣片、泡腾片、咀嚼片、多层片、分散片、舌下片、口含片、植入片、溶 液片、缓释片等。制备EGCG胶囊或片剂组合物常见辅料包括，但不仅限于此(1)填充剂如淀粉、糖 粉、糊精、淀粉/糖粉/糊精混合使用、乳糖、可压性淀粉、微晶纤维素(MCC)、甘露醇、硫酸 钙(含两个分子结晶水)、磷酸氢钙、药用碳酸钙等；(2)湿润剂与黏合剂如淀粉浆、羧甲基 纤维素钠(CMC-Na)、羟丙纤维素(HPC)、甲基纤维素(MC)、乙基纤维素(EC)、羟丙甲纤维素 (HPMC) ,10% -20%明胶溶液、50% -70%蔗糖溶液、3% -5%聚维酮K30 (PVP)水溶液或醇溶 液、-75%乙醇溶液、纯化水等；(3)润滑剂或助流剂如硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、硬 脂酸镁、氢化植物油等；(4)抗氧化剂如VE、BHA等；pH调节剂为乙二酸、磷酸二氢钠等。EGCG组合物中，EGCG与辅料的重量比可为1 20，比如取25mg EGCG，加500mg的 辅料压片或装胶囊，上述辅料可以为一种也可以为几种混合物；如采用全原料压片或装胶 囊，则原料在片或胶囊中的重量比为100%，辅料为0%，即EGCG在胶囊或片剂组合物的重 量比可为1 0。本发明组合物为口服常释组合物，也可为缓控释组合物。缓控释胶囊或片采用缓 控释辅料制成，如采用不溶性骨架材料如EC、聚乙烯、聚氯乙烯(PVC)、聚丙烯等制成不溶 性骨架缓/控释片；采用亲水性高分子材料甲基纤维素、HPMC等亲水骨架制成凝胶骨架缓/控释胶囊或片；采用蜡质骨架材料如硬酯酸、巴西棕榈蜡、峰蜡、氢化植物油制成生物溶蚀 骨架；也可采用2种以上不溶性蜡质、亲水凝胶骨架材料等相互混合后也可制成混合材料 骨架缓/控释胶囊或片。以ECGC为原料制成胶囊或片剂组合物即为(-)_表没食子儿茶素没食子酸酯胶囊 (简称为EGCG胶囊或依基西基胶囊)或(-)_表没食子儿茶素没食子酸酯片(简称为EGCG 片或依基西基片)。制备EGCG胶囊或片的方法可以是EGCG与辅料混勻后直接粉末装胶囊或压片，也 可以与辅料制粒后装胶囊或压片。例如，取EGCG原料，与可压性淀粉、无水乳糖、二氧化硅 适量混合，过筛，直接压片即得；上述处方也可以与辅料混合，加10%淀粉浆制粒、干燥整 粒后压片。以上胶囊或片剂组合物，经检验合格后，可置包衣锅中进行包衣得EGCG包衣胶 囊或包衣片。为了防湿遮光，在片剂外常采用胃溶性包衣材料进行包衣，常见包衣材料包括，但 不仅限于羟丙甲纤维素(HPMC)、羟丙纤维素、聚维酮K30 (PVP)、聚乙二醇类(PEG)、聚乙烯 缩乙醛二乙胺醋酸酯(AEA)、胃溶性丙烯酸树脂类、欧巴代(Opadry)、天然高分子材料玉米 朊(zein)、聚乙烯_乙烯吡啶共聚体等。包衣溶液常加入增塑剂、遮光材料混合使用，以起 到较满意的包衣效果。按中国药典2005版一部附录VI B对EGCG胶囊或片进行EGCG薄层鉴别试验取 本品胶囊内容物或片，研碎，精密称取约20mg，加乙酸乙酯20ml超声提取10分钟，滤过，取 滤液作为供试品溶液；另取EGCG对照品，加乙酸乙酯溶解制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为 对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各10μ 1，分 别点于同一硅胶薄层板上，以甲酸乙酸乙酯甲醇(4 4 1)为展开剂，展开，取出，晾 干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜 色的斑点。本鉴别试验方法可以根据薄层层析好坏，对层析条件进行调整及改变，如对展开 剂、薄层板、供试品及对照品浓度、点样量等进行调整，以达到最佳层析效果。EGCG胶囊或片有关物质的检查方法取含量测定项下的供试品作为供试品溶液， 精密量取供试品溶液适量，用流动相稀释至每ml中含2. 5ug的溶液，作为对照品溶液。照 含量测定项下的色谱条件，取对照品溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主 成分色谱峰的峰高为记录仪满刻度的10% _20%，再精密量取对照品溶液、供试品溶液各 20μ 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液的色谱 图中如显杂质峰，除溶剂峰外，最大杂质峰面积，不得大于对照品主峰面积，即最大单一杂 质< 5. 0%，各杂质峰面积之和不得大于对照品主峰面积1. 6倍，即总杂质之和< 8. 0%。本发明组合物有关物质也可单独规定多个单一峰杂质小于规定值，如(-)_表 没食子儿茶素印igallocatechir^EGC)，(_)-表儿茶素没食子酸酯印icatechin gal late (ECG)，(+)_表儿茶素印icatechin (EC)，(+) _没食子儿茶素没食子酸酯 gallocatechin gal late (GCG)等小于2%，总杂质之和小于8%等。本发明制成EGCG 口服常释组合物时，其溶出度检查如下取本品，照溶出度测定 法(中国药典2005年版二部附录X C第二法)，以0. lmol/L盐酸溶液900ml为溶剂，转速 每分钟50转，依法操作，经45分钟时取溶液IOml滤过，精密量取续滤液2ml，置IOml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，作为供试品溶液；另取EGCG对照品适量，精密称定，用流动 相稀释制成每ImL含0. 05mg的溶液作为对照品溶液。照含量测定项下的方法，精密量取供 试品溶液和对照品溶液各20μ 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以主成份峰 面积计算每粒胶囊或片的溶出量，限度为标示量的75%，应符合规定。溶出度测定也以紫外 分光光度法测定，限度为标示量的75%，应符合规定。本发明组合物溶出度较好，制定溶出 度限度时可适当调整，如限度为标示量的80%、85%、90%、95%等。采用高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定组合物中 EGCG含量的方法如下以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为水甲醇甲酸 (73 23 1)，检测波长278nm，柱温40°C，流速l.Oml/min，理论板数按EGCG计算应不低 于 2000。取本品10粒胶囊或片，研碎，精密称定(约相当于25mg EGCG)，置25ml的量瓶 中，用流动相稀释制成每Iml含Img的溶液作为供试品母液，精密量取供试品母液2. 5ml置 50ml的量瓶中，用流动相稀释制成每Iml含0. 05mg的溶液作为供试品溶液；另取EGCG对 照品适量，精密称定，用流动相稀释制成每Iml含0. 05mg的溶液作为对照品溶液。精密量 取20 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以主成分峰面积计算，即得。按目前最新 《药品注册管理办法》(局令第28号)规定，当单一有效成分EGCG含量大于90%，达到中药 新药1类(有效成分)原料要求，制成组合物为中药新药1类制剂；如按保健食品报批则不 按上述类别限制。本发明提供一种有效剂量的EGCG的口服组合物，以EGCG为原料，其日有效量(以 EGCG计)在50mg至4000mg之间，最终组合物有效量根据药理药效及临床试验确定。本发明制剂规格按1类新药报批，制剂规格以EGCG计，在25mg 500mg之间，如 胶囊或片剂规格为 25mg、50mg、lOOmg、150mg、200mg、250mg、350mg、400mg、500mg 等。具体规 格可根据药理药效及临床试验的日剂量而定，如成人(60kg)每日800mg EGCG为给药剂量， 按每天4粒或4片，则新药处方设计为每粒或每片规格为200mg，按每天8粒或8片给药，则 新药处方设计为每粒或每片规格为lOOmg。此外，本发明组合物除作为药物开发外，也包括用于预防和治疗老年性痴呆的保 健食品(或功能性食品)以及食品。为了解EGCG的急性毒性情况，我们将小鼠分5组(每组10只)，EGCG与水1 1 稀释灌胃，连续观测7d，计算茶多酚LD5tlt5结果EGCG的LD5tl为2. 6g/kg。该剂量相当于成 人临床拟用量(0.7g/60kg/日)的100倍以上，提示EGCG毒性较低，临床用药安全。试药EGCG由上海强圣医药科技有限公司提供，符合EGCG申报临床研究质量标 准。动物昆明种小鼠，体重20士2g，II级(清洁级)。取小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，每组10只。给药前禁食12h，不禁水。通 过预试找出最大致死量为5.6g/kg，最小致死量为1.8g/kg，按EGCG与水重量比1 1溶解。 分别按预定的剂量给5组小鼠1日1次灌胃。灌胃后即刻观察动物进食、活动、毛发、粪便 等行为学活动情况，连续7d。记录动物毒性反应情况和死亡动物分布。动物死亡后及时进 行尸检，若肉眼观察异常时则进行病理检查，LD5tl测定结果经电脑统计结果。结果EGCG给药灌胃后，部分小鼠先后出现四肢紫绀，呼吸短促，最后呼吸停止死 亡。经解剖肉眼观察肝、肾、肺等内脏均未见明显异常改变。按Bliss法经电脑计算，测得EGCG的LD50为2. 6g/kg (见表1)。LD50的95%可信限为2. 17 3. 2g/kg，相当于成人(60kg) 每天临床拟给药量(0. 7g)的100倍以上。表IBliss 法测定 EGCG 的 LD50 按Bliss法算得EGCG的LD5tl为2. 6g/kg，显示EGCG毒性很低，该剂量相当于成人 临床拟用量(0. 7g/60kg/日)100倍以上，提示临床用药量较安全。为了证明本品用于老年性痴呆的药效，我们对有效成分EGCG做了初步药效学研 究。EGCG —日二次给小鼠灌胃，以生理盐水做空白对照，本试验结果表明EGCG具有提高小 鼠学习记忆，延长小鼠一次性回避反应箱中的步入潜伏期，延缓记忆的衰退，提示EGCG具 有促进学习、延缓记忆衰退的功效，有利于老年性痴呆的预防及治疗，为进一步研究EGCG 用于老年性痴呆提供依据。试验方法及结果如下试药EGCG由上海强圣医药科技有限公司提供，使用时用加9倍量的纯化水溶解； 空白对照组纯化水；动物昆明种小鼠，体重20士2g，II级(清洁级)。一.提高小鼠学习记忆的药效学试验1.试验方法取把20只小鼠随机分为2组，每组10只，一组为纯化水对照组，另一组为EGCG试验组。对照组每天以生理盐水灌胃，试验组每天以EGCG灌胃，剂量0. 15g/kg，每天1次， 连续20d，给药结束后，进行行为训练。采用三等分辐射式明暗辨别迷宫箱，电击电压30V，灯亮保持15S。每天训练20次， 两次间隔20 40S，记录小鼠每天的正确反应率，直至20次中正确反应率为90%，即达学 会标准，记录达标所需训练次数。行为指标采用Microsoft Excel软件进行统计，结果用χ士s表示，t检测，P <0. 05为显著性差异。2.试验结果2. IEGCG对小鼠行为正确反应率的影响由表2可见，随着行为训练的进行，各组小鼠的正确反应率均呈上升趋势。EGCG 组在行为训练第1 4天，动物的正确反应率均高于对照组(P < 0. 05)，在行为训练的第3 天，动物达学会标准，明显高于第5天的对照组。试验结果表明EGCG能提高小鼠学习能力。表2EGCG对小鼠正确反应率的影响(％，η = 10) 注与对照组比较，**P< 0. 01 ；*P < 0. 052. 2EGCG对小鼠达标所需训练次数的影响由表3可见，EGCG组动物达标所需的训练次数(57. 4士 18. 0)明显少于生理盐水 对照组的(92.0 士 19. 7) (P <0.01)。结果表明EGCG能减少动物达标所需的训练次数，提高 小鼠的学习记忆能力。表3EGCG提物对动物达标所需训练次数的影响(η = 10) 注与对照组比较#Ρ < 0.01二、促进小鼠记忆保持的药效学实验1.试验方法把20只小鼠随机分为2组，各10只，一组为生理盐水对照组；另一组为EGCG治疗 组，按照上述分组，对照组灌生理盐水，EGCG组每天灌胃相应的药物，剂量为0. 15g/kg，每 天一次，连续20天，给药结束后进行行为训练。行为检测采用一次性被动回避反应箱模型，回避反应箱由25CmX25CmX25Cm的 塑料板组成的暗箱，内底面由直径为3mm、间距为9mm的铜质栅条组成，可以通电，箱前壁有 一 10X7cm的方形门洞，门前连一块10X7cm的平台，为安全区。实验时将暗箱置于桌子边 缘，安全平台悬空。将小鼠尾朝暗箱门放在平台上，记录其在平台上的停留时间，即步入潜 伏期，重复3次，每次间隔12 15min。次日，进行正式的实验训练，当动物进入暗箱后，立 即给予电击(参数15mA，电击时间5s)，电击后第1、6、11天分别检测潜伏期的长短作为动 物记忆保持的指标，潜伏期越长，记忆保持越好，以300s作为上限，凡300s仍不进入暗箱 的，即视为记忆保持良好。计算各组中潜伏期> 300s者占该组动物的百分比率，即记忆的 保持率。一次性被动回避反应的潜伏期采用秩和检验，记忆保持率采用卡方检验。2.试验结果2. IEGCG促进动物记忆的影响由表4可见对小鼠步入潜伏期的影响，电击后第1天、第6天，EGCG组步入潜伏期显著高于生理盐水对照组的(P < 0. 05或P < 0. 01)，电击后第11天，EGCG组的步入潜伏 期(217. 8s)仍明显高于生理盐水对照组(78. 6s) (P < 0. 05)。结果表明EGCG能明显延长 动物步入潜伏期。表4EGCG对动物步入潜伏期的影响 注与对照组比较**P< 0. 01，*P < 0. 052. 2EGCG对动物记忆保持率的影响由表5可见，电击后第1天、第6天、第11天，EGCG组记忆保持率均明显高于生理 盐水对照组(P < 0. 05)，表明EGCG能够明显提高动物的记忆保持率(P < 0. 05)，延缓动物 记忆的消退。表5EGCG对动物记忆保持率的影响 注与对照组比较*P < 0. 05本发明的突出优点是提供了一种服用安全、质量可控、使用方便的用于防治老年 性痴呆的EGCG胶囊或片的组合物。
具体实施例方式实施例IEGCG片的制备取EGCG原料50g (HPLC检测，含量93. 8 % )，加可压性淀粉20g，微晶纤维素40g， 乙二酸0. lg，二氧化硅lg，直接粉末压片，平均片重0. 22g (约含EGCG IOOmg)，规格lOOmg，即得。包衣锅加异性空白片约1kg，以8%欧巴代0Y-C-700A的乙醇溶液包衣，包衣锅转 速5转/分，片床温度40-43°C，控制热风温度及适当的喷速，保持片面及时干燥，包衣约3 小时，使片增重5%，筛出EGCG片，即得，以下为片剂检测结果。
结论本品符合依基西基(EGCG)片临床研究用药品质量标准(草案)实施例2EGCG胶囊的制备取EGCG原料175g (HPLC检测，含量93. 8 % )，加淀粉50g，微晶纤维素50g，二氧化 硅2g，高速搅拌使混合均勻，直接装胶囊，平均片重0. 27g (约含EGCG 175mg)，规格175mg，即得。经检查，本胶囊最大单一杂质1.7%，总杂质之和4. 2%，溶出度93. 5%，EGCG 含量98. 5%。实施例3EGCG胶囊的制备取EGCG原料100g(HPLC检测，含量93.8% )，加75%的乙醇适量制粒，干燥，直接 装胶囊，平均片重0. 38g (约含EGCG 350mg)，规格350mg，即得。经检查，本胶囊最大单一杂质1.7%，总杂质之和:4.0%，溶出度94.4%, EGCG 含量101. 6%o
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权利要求
( ) 表没食子儿茶素没食子酸酯(简称EGCG，下同)组合物及用途，包括EGCG与药学上可结合的辅料制成口服制剂以及该制剂用于防治老年性痴呆的用途。
2.如权利要求1所述的(-)_表没食子儿茶素没食子酸酯，其化学结构式如下
3.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于EGCG与药学上可结合的辅料的重量 比为1 0 20之间。
4.如权利要求1、3所述的药学上可结合的辅料，其特征在于辅料含有填充剂、粘合剂、 润滑剂、抗氧化剂及PH调节剂等中的一种或多种。
5.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于EGCG原料的含量为90.0% 99. 5%.
6.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于制剂规格以EGCG计，为25 500mg。
7.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于制剂质量标准中有关物质检查，最大 单一杂质< 5.0%，总杂质之和< 8.0%。
8.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于制剂质量标准中溶出度限度分别大于 或等于标示量的75%，结果应符合规定。
9.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于EGCG组合物的成人一天剂量以EGCG 计为 50mg 至 4000mg。
10.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于制剂组合物为胶囊剂或片剂中的一种。
11.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于EGCG组合物用于预防及治疗老年性痴呆。
全文摘要
本发明公开了一种(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(以下简称EGCG)与药学上可结合辅料制备药物制剂组合物及用途，具体是(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯与药学上可结合辅料制备防治老年性痴呆的片剂及胶囊组合物及其组合物的制备方法；本发明的突出特点是为老年性痴呆患者提供了一种安全有效、质量可控、使用方便的口服制剂。
文档编号A61K31/353GK101926790SQ200910149818
公开日2010年12月29日 申请日期2009年6月26日 优先权日2009年6月26日
发明者饶品昌, 黎俊 申请人:上海强圣医药科技有限公司
技术领域：
本发明涉及一种(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(以下简称EGCG)与药学上可 结合辅料制备药物制剂组合物及用途。
背景技术：
茶叶中主要成分为黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等多酚类物 质，根据酚性物质特点，采用物理及化学方法提取精制茶叶中的总多酚，其中的活性成分主 要为(-)_表没食子儿茶素没食子酸酯印igallocatechin gal late (EGCG), (_)_表没食子 儿茶素 epigallocatechin (EGC)，(-)-表儿茶素没食子酸酯 epicatechin gallate (ECG)， (+)_表儿茶素epicatechin (EC)，(+)-没食子儿茶素没食子酸酯gallocatechin gallate (GCG)等。EGCG是茶叶中抗氧化活性最强的活性成分，是茶叶保健功能的物质基础。公开的 EGCG有关组合物及应用的专利主要包括02111627. X公开了 EGCG应用于治疗肿瘤药物，不 仅能抑制肿瘤细胞增殖、同时具有使肿瘤细胞不易产生耐药性和提高肿瘤细胞对治疗药物 的敏感性作用；01106982. 1公开了一种EGCG注射剂，用于治疗急性早幼粒白血病，慢性粒 细胞白血病，维甲酸耐药早幼粒细胞白血病；200410015898. 6公开了一种EGCG在制备预防 和治疗因化疗引起脱发药物或功能性食品中的应用；03816788. 3公开了 EGCG和乳铁蛋白、 维生素E、维生素C和类胡萝卜素的组合物用于预防或治疗牙菌斑、牙龈炎、牙周病和口腔 恶臭(口臭)以及增强整个生物体内的抗氧化能力的宠物饲料中的用途；03819982. 3公开 了 EGCG与泛硫乙胺或其代谢物、植烷酸、硫辛酸和普利醇等组合物用于治疗1型糖尿病和 2型糖尿病；02809782. 3公开了 EGCG与多糖、特别是果胶混合形成粉末或颗粒而获得制剂； 03824662. 7公开了 EGCG、泛硫乙胺或其代谢物、植烷酸、硫辛酸、普利醇和辅酶Q-IO的组的 成分，用于治疗或预防糖尿病或肥胖中的用途；200480014636. 6公开了 EGCG活性成分的白 藜芦醇、其衍生物、代谢物或类似物和至少一种选自、染料木黄酮、维生素E、多不饱和脂肪 酸、gamma-亚麻酸和维生素K的药物组合物的抗炎症作用；200510018522. 5公开了一种鼻 腔或口腔喷雾给药EGCG和ECG抗感冒病毒功效成分的单体或复方制剂；200610053032. 3 公开了一种儿茶素(EGCG)、蜂蜜、甘油、EDTA-2Na、l，3-丁二醇、油溶性防腐剂、肝素钠和缓 冲溶液有的皮肤抗衰老作用；200580002404. 3公开了一种含有表没食子儿(EGCG)的绿茶 提取物、毛喉鞘蕊花提取物、白桦提取物和瓜拉那或巴拉圭茶提取物的治疗肥胖症及相关 代谢综合征的制剂；200710096434. 6公开了 EGCG与多糖、特别是果胶混合形成粉末或颗 粒而获得制剂；200680038310. 6公开了一种选自EGCG、羟基酪醇、白藜芦醇及其衍生物、代 谢物或类似物的至少一种组分在制造营养药物性组合物中的用途，用于肌肉损耗、肌肉萎 缩的肌肉消瘦和其它相关肌肉失调症；200710094207. X公开了一种EGCG在制备防治胆石 症、降低胆色素结石及胆固醇结石的形成率的药物中的应用；200680038272. 4公开了一种 EGCG与白藜芦醇、其衍生物、代谢物或类似物的至少一种成分组合用于制造延迟衰老和/ 或用于治疗或预防年龄相关的疾病；200480042552. 3公开了人参皂苷Fl和EGCG的护肤组合物，抑制表皮细胞中细胞凋亡的方法；200510036982. 0公开了一种EGCG与聚乙烯吡咯烷 酮(PVP-k30)固体分散体用于治疗老年性疾病。尽管目前公开的EGCG专利较多，但未见公开的EGCG制剂组合物专利及其它公开 的文献资料报道；查询美国、欧洲及日本等国专利，未见EGCG用于老年性痴呆的组合物专 利。总之，未见EGCG制剂组合物用于预防及治疗老年性痴呆的专利及其它公开资料。
发明内容
本发明目的是提供一种EGCG与药学上可接受辅料制备胶囊或片剂组合物；本发 明另一目的是提供一种EGCG胶囊或片剂组合物用于老年性痴呆的用途。本发明有效成分EGCG可以是从茶叶中提取精制而来，也可以通过化学半合成的 方法而来，含量范围为90. 0% 99. 5%, EGCG分子结构式如下 本发明EGCG原料与药学上可接受的辅料制成胶囊或片剂组合物主要包括但不限 于填充剂(或稀释剂)、粘合剂、润滑剂或助流剂、抗氧化剂、PH调节剂的一种或多种制成， EGCG制剂组合物主要为胶囊剂或片剂，其中胶囊剂主要为硬胶囊，片剂为普通片、包衣片、 糖衣片、薄膜衣片、肠溶衣片、泡腾片、咀嚼片、多层片、分散片、舌下片、口含片、植入片、溶 液片、缓释片等。制备EGCG胶囊或片剂组合物常见辅料包括，但不仅限于此(1)填充剂如淀粉、糖 粉、糊精、淀粉/糖粉/糊精混合使用、乳糖、可压性淀粉、微晶纤维素(MCC)、甘露醇、硫酸 钙(含两个分子结晶水)、磷酸氢钙、药用碳酸钙等；(2)湿润剂与黏合剂如淀粉浆、羧甲基 纤维素钠(CMC-Na)、羟丙纤维素(HPC)、甲基纤维素(MC)、乙基纤维素(EC)、羟丙甲纤维素 (HPMC) ,10% -20%明胶溶液、50% -70%蔗糖溶液、3% -5%聚维酮K30 (PVP)水溶液或醇溶 液、-75%乙醇溶液、纯化水等；(3)润滑剂或助流剂如硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、硬 脂酸镁、氢化植物油等；(4)抗氧化剂如VE、BHA等；pH调节剂为乙二酸、磷酸二氢钠等。EGCG组合物中，EGCG与辅料的重量比可为1 20，比如取25mg EGCG，加500mg的 辅料压片或装胶囊，上述辅料可以为一种也可以为几种混合物；如采用全原料压片或装胶 囊，则原料在片或胶囊中的重量比为100%，辅料为0%，即EGCG在胶囊或片剂组合物的重 量比可为1 0。本发明组合物为口服常释组合物，也可为缓控释组合物。缓控释胶囊或片采用缓 控释辅料制成，如采用不溶性骨架材料如EC、聚乙烯、聚氯乙烯(PVC)、聚丙烯等制成不溶 性骨架缓/控释片；采用亲水性高分子材料甲基纤维素、HPMC等亲水骨架制成凝胶骨架缓/控释胶囊或片；采用蜡质骨架材料如硬酯酸、巴西棕榈蜡、峰蜡、氢化植物油制成生物溶蚀 骨架；也可采用2种以上不溶性蜡质、亲水凝胶骨架材料等相互混合后也可制成混合材料 骨架缓/控释胶囊或片。以ECGC为原料制成胶囊或片剂组合物即为(-)_表没食子儿茶素没食子酸酯胶囊 (简称为EGCG胶囊或依基西基胶囊)或(-)_表没食子儿茶素没食子酸酯片(简称为EGCG 片或依基西基片)。制备EGCG胶囊或片的方法可以是EGCG与辅料混勻后直接粉末装胶囊或压片，也 可以与辅料制粒后装胶囊或压片。例如，取EGCG原料，与可压性淀粉、无水乳糖、二氧化硅 适量混合，过筛，直接压片即得；上述处方也可以与辅料混合，加10%淀粉浆制粒、干燥整 粒后压片。以上胶囊或片剂组合物，经检验合格后，可置包衣锅中进行包衣得EGCG包衣胶 囊或包衣片。为了防湿遮光，在片剂外常采用胃溶性包衣材料进行包衣，常见包衣材料包括，但 不仅限于羟丙甲纤维素(HPMC)、羟丙纤维素、聚维酮K30 (PVP)、聚乙二醇类(PEG)、聚乙烯 缩乙醛二乙胺醋酸酯(AEA)、胃溶性丙烯酸树脂类、欧巴代(Opadry)、天然高分子材料玉米 朊(zein)、聚乙烯_乙烯吡啶共聚体等。包衣溶液常加入增塑剂、遮光材料混合使用，以起 到较满意的包衣效果。按中国药典2005版一部附录VI B对EGCG胶囊或片进行EGCG薄层鉴别试验取 本品胶囊内容物或片，研碎，精密称取约20mg，加乙酸乙酯20ml超声提取10分钟，滤过，取 滤液作为供试品溶液；另取EGCG对照品，加乙酸乙酯溶解制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为 对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各10μ 1，分 别点于同一硅胶薄层板上，以甲酸乙酸乙酯甲醇(4 4 1)为展开剂，展开，取出，晾 干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜 色的斑点。本鉴别试验方法可以根据薄层层析好坏，对层析条件进行调整及改变，如对展开 剂、薄层板、供试品及对照品浓度、点样量等进行调整，以达到最佳层析效果。EGCG胶囊或片有关物质的检查方法取含量测定项下的供试品作为供试品溶液， 精密量取供试品溶液适量，用流动相稀释至每ml中含2. 5ug的溶液，作为对照品溶液。照 含量测定项下的色谱条件，取对照品溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主 成分色谱峰的峰高为记录仪满刻度的10% _20%，再精密量取对照品溶液、供试品溶液各 20μ 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液的色谱 图中如显杂质峰，除溶剂峰外，最大杂质峰面积，不得大于对照品主峰面积，即最大单一杂 质< 5. 0%，各杂质峰面积之和不得大于对照品主峰面积1. 6倍，即总杂质之和< 8. 0%。本发明组合物有关物质也可单独规定多个单一峰杂质小于规定值，如(-)_表 没食子儿茶素印igallocatechir^EGC)，(_)-表儿茶素没食子酸酯印icatechin gal late (ECG)，(+)_表儿茶素印icatechin (EC)，(+) _没食子儿茶素没食子酸酯 gallocatechin gal late (GCG)等小于2%，总杂质之和小于8%等。本发明制成EGCG 口服常释组合物时，其溶出度检查如下取本品，照溶出度测定 法(中国药典2005年版二部附录X C第二法)，以0. lmol/L盐酸溶液900ml为溶剂，转速 每分钟50转，依法操作，经45分钟时取溶液IOml滤过，精密量取续滤液2ml，置IOml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，作为供试品溶液；另取EGCG对照品适量，精密称定，用流动 相稀释制成每ImL含0. 05mg的溶液作为对照品溶液。照含量测定项下的方法，精密量取供 试品溶液和对照品溶液各20μ 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以主成份峰 面积计算每粒胶囊或片的溶出量，限度为标示量的75%，应符合规定。溶出度测定也以紫外 分光光度法测定，限度为标示量的75%，应符合规定。本发明组合物溶出度较好，制定溶出 度限度时可适当调整，如限度为标示量的80%、85%、90%、95%等。采用高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定组合物中 EGCG含量的方法如下以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为水甲醇甲酸 (73 23 1)，检测波长278nm，柱温40°C，流速l.Oml/min，理论板数按EGCG计算应不低 于 2000。取本品10粒胶囊或片，研碎，精密称定(约相当于25mg EGCG)，置25ml的量瓶 中，用流动相稀释制成每Iml含Img的溶液作为供试品母液，精密量取供试品母液2. 5ml置 50ml的量瓶中，用流动相稀释制成每Iml含0. 05mg的溶液作为供试品溶液；另取EGCG对 照品适量，精密称定，用流动相稀释制成每Iml含0. 05mg的溶液作为对照品溶液。精密量 取20 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以主成分峰面积计算，即得。按目前最新 《药品注册管理办法》(局令第28号)规定，当单一有效成分EGCG含量大于90%，达到中药 新药1类(有效成分)原料要求，制成组合物为中药新药1类制剂；如按保健食品报批则不 按上述类别限制。本发明提供一种有效剂量的EGCG的口服组合物，以EGCG为原料，其日有效量(以 EGCG计)在50mg至4000mg之间，最终组合物有效量根据药理药效及临床试验确定。本发明制剂规格按1类新药报批，制剂规格以EGCG计，在25mg 500mg之间，如 胶囊或片剂规格为 25mg、50mg、lOOmg、150mg、200mg、250mg、350mg、400mg、500mg 等。具体规 格可根据药理药效及临床试验的日剂量而定，如成人(60kg)每日800mg EGCG为给药剂量， 按每天4粒或4片，则新药处方设计为每粒或每片规格为200mg，按每天8粒或8片给药，则 新药处方设计为每粒或每片规格为lOOmg。此外，本发明组合物除作为药物开发外，也包括用于预防和治疗老年性痴呆的保 健食品(或功能性食品)以及食品。为了解EGCG的急性毒性情况，我们将小鼠分5组(每组10只)，EGCG与水1 1 稀释灌胃，连续观测7d，计算茶多酚LD5tlt5结果EGCG的LD5tl为2. 6g/kg。该剂量相当于成 人临床拟用量(0.7g/60kg/日)的100倍以上，提示EGCG毒性较低，临床用药安全。试药EGCG由上海强圣医药科技有限公司提供，符合EGCG申报临床研究质量标 准。动物昆明种小鼠，体重20士2g，II级(清洁级)。取小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，每组10只。给药前禁食12h，不禁水。通 过预试找出最大致死量为5.6g/kg，最小致死量为1.8g/kg，按EGCG与水重量比1 1溶解。 分别按预定的剂量给5组小鼠1日1次灌胃。灌胃后即刻观察动物进食、活动、毛发、粪便 等行为学活动情况，连续7d。记录动物毒性反应情况和死亡动物分布。动物死亡后及时进 行尸检，若肉眼观察异常时则进行病理检查，LD5tl测定结果经电脑统计结果。结果EGCG给药灌胃后，部分小鼠先后出现四肢紫绀，呼吸短促，最后呼吸停止死 亡。经解剖肉眼观察肝、肾、肺等内脏均未见明显异常改变。按Bliss法经电脑计算，测得EGCG的LD50为2. 6g/kg (见表1)。LD50的95%可信限为2. 17 3. 2g/kg，相当于成人(60kg) 每天临床拟给药量(0. 7g)的100倍以上。表IBliss 法测定 EGCG 的 LD50 按Bliss法算得EGCG的LD5tl为2. 6g/kg，显示EGCG毒性很低，该剂量相当于成人 临床拟用量(0. 7g/60kg/日)100倍以上，提示临床用药量较安全。为了证明本品用于老年性痴呆的药效，我们对有效成分EGCG做了初步药效学研 究。EGCG —日二次给小鼠灌胃，以生理盐水做空白对照，本试验结果表明EGCG具有提高小 鼠学习记忆，延长小鼠一次性回避反应箱中的步入潜伏期，延缓记忆的衰退，提示EGCG具 有促进学习、延缓记忆衰退的功效，有利于老年性痴呆的预防及治疗，为进一步研究EGCG 用于老年性痴呆提供依据。试验方法及结果如下试药EGCG由上海强圣医药科技有限公司提供，使用时用加9倍量的纯化水溶解； 空白对照组纯化水；动物昆明种小鼠，体重20士2g，II级(清洁级)。一.提高小鼠学习记忆的药效学试验1.试验方法取把20只小鼠随机分为2组，每组10只，一组为纯化水对照组，另一组为EGCG试验组。对照组每天以生理盐水灌胃，试验组每天以EGCG灌胃，剂量0. 15g/kg，每天1次， 连续20d，给药结束后，进行行为训练。采用三等分辐射式明暗辨别迷宫箱，电击电压30V，灯亮保持15S。每天训练20次， 两次间隔20 40S，记录小鼠每天的正确反应率，直至20次中正确反应率为90%，即达学 会标准，记录达标所需训练次数。行为指标采用Microsoft Excel软件进行统计，结果用χ士s表示，t检测，P <0. 05为显著性差异。2.试验结果2. IEGCG对小鼠行为正确反应率的影响由表2可见，随着行为训练的进行，各组小鼠的正确反应率均呈上升趋势。EGCG 组在行为训练第1 4天，动物的正确反应率均高于对照组(P < 0. 05)，在行为训练的第3 天，动物达学会标准，明显高于第5天的对照组。试验结果表明EGCG能提高小鼠学习能力。表2EGCG对小鼠正确反应率的影响(％，η = 10) 注与对照组比较，**P< 0. 01 ；*P < 0. 052. 2EGCG对小鼠达标所需训练次数的影响由表3可见，EGCG组动物达标所需的训练次数(57. 4士 18. 0)明显少于生理盐水 对照组的(92.0 士 19. 7) (P <0.01)。结果表明EGCG能减少动物达标所需的训练次数，提高 小鼠的学习记忆能力。表3EGCG提物对动物达标所需训练次数的影响(η = 10) 注与对照组比较#Ρ < 0.01二、促进小鼠记忆保持的药效学实验1.试验方法把20只小鼠随机分为2组，各10只，一组为生理盐水对照组；另一组为EGCG治疗 组，按照上述分组，对照组灌生理盐水，EGCG组每天灌胃相应的药物，剂量为0. 15g/kg，每 天一次，连续20天，给药结束后进行行为训练。行为检测采用一次性被动回避反应箱模型，回避反应箱由25CmX25CmX25Cm的 塑料板组成的暗箱，内底面由直径为3mm、间距为9mm的铜质栅条组成，可以通电，箱前壁有 一 10X7cm的方形门洞，门前连一块10X7cm的平台，为安全区。实验时将暗箱置于桌子边 缘，安全平台悬空。将小鼠尾朝暗箱门放在平台上，记录其在平台上的停留时间，即步入潜 伏期，重复3次，每次间隔12 15min。次日，进行正式的实验训练，当动物进入暗箱后，立 即给予电击(参数15mA，电击时间5s)，电击后第1、6、11天分别检测潜伏期的长短作为动 物记忆保持的指标，潜伏期越长，记忆保持越好，以300s作为上限，凡300s仍不进入暗箱 的，即视为记忆保持良好。计算各组中潜伏期> 300s者占该组动物的百分比率，即记忆的 保持率。一次性被动回避反应的潜伏期采用秩和检验，记忆保持率采用卡方检验。2.试验结果2. IEGCG促进动物记忆的影响由表4可见对小鼠步入潜伏期的影响，电击后第1天、第6天，EGCG组步入潜伏期显著高于生理盐水对照组的(P < 0. 05或P < 0. 01)，电击后第11天，EGCG组的步入潜伏 期(217. 8s)仍明显高于生理盐水对照组(78. 6s) (P < 0. 05)。结果表明EGCG能明显延长 动物步入潜伏期。表4EGCG对动物步入潜伏期的影响 注与对照组比较**P< 0. 01，*P < 0. 052. 2EGCG对动物记忆保持率的影响由表5可见，电击后第1天、第6天、第11天，EGCG组记忆保持率均明显高于生理 盐水对照组(P < 0. 05)，表明EGCG能够明显提高动物的记忆保持率(P < 0. 05)，延缓动物 记忆的消退。表5EGCG对动物记忆保持率的影响 注与对照组比较*P < 0. 05本发明的突出优点是提供了一种服用安全、质量可控、使用方便的用于防治老年 性痴呆的EGCG胶囊或片的组合物。
具体实施例方式实施例IEGCG片的制备取EGCG原料50g (HPLC检测，含量93. 8 % )，加可压性淀粉20g，微晶纤维素40g， 乙二酸0. lg，二氧化硅lg，直接粉末压片，平均片重0. 22g (约含EGCG IOOmg)，规格lOOmg，即得。包衣锅加异性空白片约1kg，以8%欧巴代0Y-C-700A的乙醇溶液包衣，包衣锅转 速5转/分，片床温度40-43°C，控制热风温度及适当的喷速，保持片面及时干燥，包衣约3 小时，使片增重5%，筛出EGCG片，即得，以下为片剂检测结果。
结论本品符合依基西基(EGCG)片临床研究用药品质量标准(草案)实施例2EGCG胶囊的制备取EGCG原料175g (HPLC检测，含量93. 8 % )，加淀粉50g，微晶纤维素50g，二氧化 硅2g，高速搅拌使混合均勻，直接装胶囊，平均片重0. 27g (约含EGCG 175mg)，规格175mg，即得。经检查，本胶囊最大单一杂质1.7%，总杂质之和4. 2%，溶出度93. 5%，EGCG 含量98. 5%。实施例3EGCG胶囊的制备取EGCG原料100g(HPLC检测，含量93.8% )，加75%的乙醇适量制粒，干燥，直接 装胶囊，平均片重0. 38g (约含EGCG 350mg)，规格350mg，即得。经检查，本胶囊最大单一杂质1.7%，总杂质之和:4.0%，溶出度94.4%, EGCG 含量101. 6%o
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权利要求
( ) 表没食子儿茶素没食子酸酯(简称EGCG，下同)组合物及用途，包括EGCG与药学上可结合的辅料制成口服制剂以及该制剂用于防治老年性痴呆的用途。
2.如权利要求1所述的(-)_表没食子儿茶素没食子酸酯，其化学结构式如下
3.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于EGCG与药学上可结合的辅料的重量 比为1 0 20之间。
4.如权利要求1、3所述的药学上可结合的辅料，其特征在于辅料含有填充剂、粘合剂、 润滑剂、抗氧化剂及PH调节剂等中的一种或多种。
5.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于EGCG原料的含量为90.0% 99. 5%.
6.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于制剂规格以EGCG计，为25 500mg。
7.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于制剂质量标准中有关物质检查，最大 单一杂质< 5.0%，总杂质之和< 8.0%。
8.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于制剂质量标准中溶出度限度分别大于 或等于标示量的75%，结果应符合规定。
9.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于EGCG组合物的成人一天剂量以EGCG 计为 50mg 至 4000mg。
10.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于制剂组合物为胶囊剂或片剂中的一种。
11.如权利要求1所述的EGCG组合物，其特征在于EGCG组合物用于预防及治疗老年性痴呆。
全文摘要
本发明公开了一种(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(以下简称EGCG)与药学上可结合辅料制备药物制剂组合物及用途，具体是(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯与药学上可结合辅料制备防治老年性痴呆的片剂及胶囊组合物及其组合物的制备方法；本发明的突出特点是为老年性痴呆患者提供了一种安全有效、质量可控、使用方便的口服制剂。
文档编号A61K31/353GK101926790SQ200910149818
公开日2010年12月29日 申请日期2009年6月26日 优先权日2009年6月26日
发明者饶品昌, 黎俊 申请人:上海强圣医药科技有限公司
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