中药口服制剂的检测方法及应用的制作方法

专利名称：：中药口服制剂的检测方法及应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药口服制剂的检测方法，本发明属于分析化学
技术领域：
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背景技术：
：中药口服制剂"独二味胶嚢"由独一味、三七两味药材制成，是本申请人结合长期用药经验，并经药理、毒理试验研究，采用新技术研究的新药品种。功能主治为活血止痛，化瘀止血。用于治疗血瘀证(软组织损伤、月经不调)，症见肿胀疼痛，痴血，关节活动受限，月经量多，经期不定，下腹疼痛，舌质紫，有瘀斑。独二味胶嚢使用的药材独一味系藏族习用药材，为唇形科植物独一味Lamiophlomisrotata(Benth.)Kudo的干燥全草，其作为藏族等少数民族的传统用药，应用历史已近2000年。根据有关文献报道，独一味中主要含有黄酮类成分，其中有木犀草素、木犀草素-7-0葡萄糖苷、槲皮素、槲皮素-3-0阿拉伯糖苷、芽菜素-7-0新陈皮苷和P-谷甾醇等成分；此外独一味根中尚含有环烯醚萜和苯乙醇苷类成分，其中有独一味素A(lamiophlomiolA，la)、独一味素B(lamiophlomiolB,lb)、独一味素C(lamiophlomiolC)等。三七为五加考牛4直物三七Panaxnotoginseng(Burk.)RH.Chen的干燥根及根茎。应用广泛，为伤科圣药。根据有关文献报道，三七中主要含有三七皂苷、氨基酸、黄酮类、生物碱、核苷类等成分。目前，尚缺乏一种能够有效控制独二味胶囊的产品质量，保证产品的有效性的检测方法。
发明内容因此，本发明的目的在于，提供一种中药口服制剂的检测方法。本发明的另一个目的在于，提供上述检测方法在中药口服制剂生产中质量控制方面的用途。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一方面，本发明提供一种中药口服制剂的检测方法，该口服制剂选自颗粒剂、胶嚢剂和片剂，优选为胶嚢剂，并且该制剂由独一味和三七制成，其中所述检测方法包括以下一项或多项检测项目木犀草素含量和皂苷类含量的测定、独一味的鉴别和/或树脂残留物的检查；优选地，所述木犀草素含量的测定是采用高效液相色谱法，其中所述高效液相色谱的条件为填充剂为十八烷基硅烷^t合硅胶，流动相为曱醇-0.4%磷酸溶液(50:50)，检测波长为350nm。优选地，^4居前述的^r测方法，所述木犀草素含量的测定方法包括以下步骤1)供试溶液的制备取所述胶嚢内容物，研细，取约0.5g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入2.5mol/L盐酸曱醇溶液25ml，称定重量，回流提取60分钟，取出，放冷，以2.5mol/L盐酸曱醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加曱醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试溶液；2)对照溶液的制备精密称取木犀草素对照品适量，加曱醇制成每lml含15ug的溶液，摇匀，作为对照溶液；3)分别取步骤1)和2)所制备的供试品溶液与对照品溶液进样，依法测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，所述每粒胶嚢(0.18g)中含独一味以木樨草素计在0.4mg以上。优选地，根据前述的检测方法，所述皂苷类含量的测定包括采用高效液相色语法测定三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl和人参皂苷Rbl的含量，其中所述高效液相色谱的条件为填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为水和乙腈，梯度洗脱条件为0~30分钟(81%水+19%乙腈)，30-65分钟(81—66%水+19—34%乙腈)，6570分钟(66—91%水+34~^19%乙腈)，70~80分钟(66~^91%水+34—19%乙腈)，检测波长为203nm。优选地，根据前述的检测方法，所述皂苷类含量的测定包括以下步骤l)供试溶液的制备取所述胶嚢内容物，研细，取约0.2g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入曱醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，取出，放冷，用曱醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试溶液；2)对照溶液的制备精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Rbl对照品和三七皂苷R1对照品适量，加曱醇制成每1ml含人参皂苷Rgl0.4mg，人参皂苷Rbl0.4mg、三七皂苷Rl0.1mg的混合溶液作为对照溶液；3)分别取步骤1)和2)所制备的供试品溶液与对照品溶液进样，依法测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，所述每粒胶嚢(0.18g)中含三七以三七急苷Rl、人参皂苷Rgl和人参皂苷Rbl三种皂苷总量计不得低于30.0mg。在本发明的另一个实施方案中，所述检测方法还包括独一味的鉴别，所述独一味的鉴别采用薄层色谱法，其中所述薄层色谱的条件为薄层板为硅胶薄层板，展开剂为三氯曱烷-曱醇(4:1),紫外200-500nm优选254nm下检视。优选地，根据前述的检测方法，所述薄层色谱鉴别法包括以下步骤1)供试溶液的制备取胶嚢剂内容物、片剂或颗粒剂，研细，加乙醇，加热回流5-30分钟优选15分钟，取出，滤过，滤液作为供试品溶液；2)对照溶液的制备另取独一味对照药材，按照步骤l)所述方法制成对照药材溶液；3)照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一块硅胶薄层板上，以三氯曱烷-曱醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯200-500nm优选254nm下枱4见；供试品色谱中，在与对照药材色镨相应的位置上，相同颜色的斑点。优选地，根据前述的检测方法，所述薄层色谱鉴别法包括以下步骤1)供试溶液的制备取所述胶嚢内容物l.Og,研细，加乙醇15ml，加热回流15分钟，耳又出，滤过，滤液作为供试品溶液；2)对照溶液的制备取独一味对照药材l.Og,按照步骤l)所述方法制成对照溶液；3)按照薄层鉴别法测定吸取步骤1)和2)所制备的两种溶液各5~lO[il，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯曱烷-曱醇为展开剂，所述展开剂中三氯曱烷-甲醇的体积比为1:1~9:l优选为4:1，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试溶液色谱中，在与对照溶液色镨相应的位置上，显相同颜色的斑点。在本发明的另一个实施方案中，所述检测方法还包括树脂残留物的的检查，所述树脂残留物的检查包括1)供试溶液的制备取胶嚢剂内容物、片剂或颗粒剂，加入N，N-二曱基曱酰胺和水，超声5分钟，作为供试溶液；2)对照溶液的制备分别取环己烷、苯、曱苯、二曱苯、苯乙烯、对二乙苯和二乙烯苯分别用N，N-二曱基曱酰胺配制成贮备液；分别取各贮备液混合后，用N，N-二曱基曱酰胺稀释成每lml中含环己烷4吗、苯0.4吗、曱苯4(ig、二曱苯4jig、苯乙烯4吗、对二乙苯4吗和二乙烯苯4fxg的溶液，加水，混匀，作为对照溶液；和3)分别取步骤1)和2)所制备的供试品溶液与对照品溶液进样，色谱柱为聚乙二醇石英毛细管柱，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，含环己烷、苯、曱苯、二曱苯、苯乙烯、对二乙苯和二乙烯苯应符合以下规定(质量百分比)含环己烷不得大于0.002%;含苯不得大于0.0002%;含曱苯不得大于0.002%;含二曱苯不得大于0.002%;含苯乙烯不得大于0.002%;含对二乙苯不得大于0.002%;含二乙烯基苯不得大于0.002%。优选地，根据前述的检测方法，树脂残留物的检查采用极性毛细管柱顶空进样系统程序升温法对环己烷、苯、曱苯、二曱苯、苯乙烯、对二乙苯和二乙烯苯进行测定，其中所述极性毛细管柱顶空进样系统程序升温法的条件为色谱柱为聚乙二醇(PEG-20M)石英毛细管柱；柱温为程序升温，初始温度40。C,保持5分钟，再以每分钟6。C升温至200°C，保持6分钟；检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度为250。C;进样口温度为230。C;顶空进样，顶空瓶平衡温度7(TC,平衡时间为45分钟。另一方面，本发明提供前述的检测方法在中药口服制剂质量生产中控制方面的应用，该口服制剂选自颗粒剂、胶嚢剂和片剂，优选为胶嚢剂，并且该制剂由独一p未和三七制成。综上所述，本发明提供了一种独二味胶嚢的检测方法，适用于对独二味胶嚢进行质量控制，有效控制相关产品的产品质量，保证产品的有效性。本发明人通过大量实验，按照相关规定，从大量检测项目中筛选出能够有效控制独二味胶嚢产品质量的项目，包括以下一项或多项检测项目树脂残留物的检查、独一味的鉴别，和/或木犀草素含量和皂苷类含量的测定。本发明经过大量实验，反复验证，所建立的检测方法具有重复性良好、中间精密度良好、专属性强、对数线性关系良好及回收率较高的优点，适合含有独一味和三七的中药口服制剂检测的要求。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。但这些实施例仅限于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中的样品及对照品来源如下1、样品来源本试验研究用独一味、三七药材购自成都雅星贸易有限公司，经检验符合中国药典2005年版要求。试验小试及中试样品制备方法如下取独一味药材1000g,加水煎煮后，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度，放冷，加于已处理好的树脂柱上，加水洗脱，继用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩至相对密度，备用；另取三七药材1000g，粉碎，加乙醇回流提取后，合并提取液，滤过，药渣备用；滤液回收乙醇，浓缩至相对密度，放冷，加于已处理好的树脂柱上，加水洗脱，继用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，干燥，粉碎，得三七提取物I;取三七醇提后的药渣，挥尽乙醇，加水提取后，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度，放冷，加于已处理好的树脂柱上，加水洗脱，继用氨水洗脱，收集氨水洗脱液，浓缩除氨，干燥，粉碎，得三七提取物II。以独一味浓缩液作粘合剂，以三七提取物和淀粉作底料，一步制粒，整粒，装胶嚢，每粒内容物为0.18g,制成1000粒，包装，即得。2、对照品的来源本研究所用的木犀草素对照品、购自独一味对照药材、三七皂苷Rl对照品、人参急苷Rgl以及人参皂香Rbl均购自中国药品生物制品检定所。下列实施例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。实施例1:本发明独二味胶嚢的鉴别本实施例为对本发明独二味胶嚢中的独一味、三七进行鉴别。以下结合本品特点对独二p未胶嚢(样品批号080301、080302、080303)进行了薄层层析鉴别研究，以独一味对照药材作为对照鉴别本品，并釆用不同的展开系统考察其薄层展开行为。1、独一味的鉴别方法供试品溶液的制备取本品内容物1.Og,研细，力口乙醇15ml,加热回流15分钟，耳又出，滤过，滤液作为供试品溶液。阴性样品溶液(缺独一味)的制备按照独二味胶嚢的制法，制备不含独一味药材的胶嚢样品，采用与供试品溶液相同的方法制备，即得。对照药材溶液的制备取独一味对照药材l.Og,同法制成对照药材溶液。吸取上述三种溶液各5~10^1，分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以三氯曱烷-曱醇(4:1)和三氯曱烷-丙酮(3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，在105。C加热至斑点明显。结果发现不同展开剂条件下，在与对照药材色谱相应位置附近，存在干扰情况，影响判断。换用硅胶GF254薄层板为展开材料，置紫外光灯(254nm)下检视，在与对照药材色语相应位置上，阴性样品溶液无干扰，对照药材及样品溶液色谱行为良好，能达到质量控制的目的，予以选择，综合考虑色谱行为等因素，选择三氯曱烷-曱醇(4:1)为展开剂。独一味鉴别方法如下取本品内容物1.0g，研细，加乙醇15ml，加热回流15分钟，耳又出，滤过，滤液作为供试品溶液。另取独一味对照药材l.Og，同法制成对照药材溶液。照薄层色i普法试验，吸取上述两种溶液各5~10|il,分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯曱烷-曱醇(4:l)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。2、三七的鉴别鉴于三七的指标成分为皂苷类，含量测定项下已有控制，故在鉴別项下未对三七药材进行控制。实施例2:本发明独二味胶嚢剂的树脂残留物根据国家药品监督管理局于2000年2月17日以药管注[2000]56号文下发了《大孔吸附树脂分离纯化中药提取液的技术要求(暂行)》，应对苯乙烯骨架型大孔树脂残留物检查项目为苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、烷烃类、二乙基苯类(二乙烯基)及其他可能因树脂引入的有机残留物进行检测，其限量不能高于国家标准或国际通用标准。独二味胶嚢在工艺中使用的苯乙烯骨架型大孔树脂可能引入的残留物及其限度见表1。表1引入树脂残留物限度结果大孔树脂残留物限度环己烷20苯2曱苯20二甲苯20苯乙烯20对二乙苯20苯乙烯骨架型大孔树脂引入的残留物，需要在方法学研究时要进行限度控制，再根据样品中的实际残留量，酌情定入质量标准。根据上述七种溶剂的沸点和极性，采用极性毛细管柱顶空进样系统程序升温法对环己烷、苯、曱苯、二甲苯、苯乙烯、对二乙苯和二乙烯苯进行测定和研究。1、色语条件仪器Agilent4890D气相色谱仪，Agilent7694E顶空进样器；色谱条件色谱柱Sepuclo-WAX石英毛细管柱(30mx0.32mmxl.0^im，固定液为聚乙二醇-20M);检测器氬火焰离子化检测器，温度25(TC;进样口230°C，流比为5:1;柱温40。C保持5分钟后，以每分钟6。C的速率升温至200。C，保持6分钟；载气N2,柱头压4.0psi;氬气流量35ml/min;空气流量350ml/min;进样方式顶空进样，进样量l.Oml;顶空瓶平纟軒温度70°C，平衡时间45min。2、溶液的配制(1)试剂环己烷、苯、曱苯、二曱苯、苯乙烯为分析纯；二乙烯苯和对二乙苯为进口气相对照品，N,N-二曱基曱酰胺为色谱纯，水为超纯水。分别取环己烷、苯、曱苯、二曱苯、苯乙烯、对二乙苯和二乙烯苯各适量，精密称定，用N,N-二曱基曱酰胺配制成贮备液；分别取各贮备液适当体积混合后，用N,N-二曱基曱酰胺稀释成每lml中含环己烷8|ig、苯0.8iag、曱苯8pg、二曱苯8pg、苯乙烯8pg、对二乙苯8pg和二乙烯苯8jig的溶液，即到标准溶液溶液I;精密量取标准溶液I适量，力。N,N-二曱基曱酰胺依次稀释2倍、4倍、8倍和16倍，分别得到标准溶液II、III、IV和V。精密量取标准溶液各l.Oml，分别置于20ml顶空瓶中，精密加入水5.0ml，封瓶，混匀，即得。(3)检测限溶液的配制取环己烷、苯、曱苯、对二曱苯、苯乙烯、对二乙苯和二乙烯苯的贮备液，用N，N-二曱基曱酰胺多次稀释混合后配制成含环己烷1.99xl(T5mg.mr1、苯3.30xl(T5mg.mr1、曱苯2.57x1(^mg.mr1、二甲苯7.27xl(r5mg.mr1、苯乙烯4.77xl(r5mg.mr1、对二乙苯2.80xlO國5mg.mr1和二乙烯苯1.69xl0"mg.mr1的溶液。精密量取检测限溶液l.Oml，置于20ml顶空瓶中，精密加入水5.0ml，封瓶，混匀，即得。3、系统适用性试^r:1)柱效以环己烷峰计算，色谱系统的理论塔板数为3.4X104;2)保留时间和分离度结果如表IO所示。表2树脂残留物保留时间、分离度试验结果溶剂保留时间(min)分离度环己烷7.3一苯14.850.5曱苯18.430.1曱苯(由四个峰组成)21.527.121.82.422.11.923.612.6苯乙烯25.918.012对二乙苯27.412.2N,N-二曱基曱酰胺(溶剂)28.26.231.020.531429二乙烯苯(由四个峰组成)'34.723.535.44.04、方法的考察(1)专属性在以上色谱条件下，环己烷、苯、曱苯、二曱苯、苯乙烯、对二乙苯和二乙烯苯能完全分离，且空白不干扰。(2)线性和范围精密量取标准溶液I、II、III、IV、V各1.0ml，分别置于20ml顶空瓶中，在精密加入水5.0ml,封瓶，混匀，在以上色谱条件下测定，记录环己烷、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、对二乙苯、二乙烯苯的保留时间和峰面积。二曱苯和二乙烯苯的峰面积分别以其四个峰的峰面积之和计算。各溶剂的进样量与峰面积的线性关系良好，结果见表3。表3树脂残留物保留时间、<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>(3)进样重复性-.取标准溶液m,重复进样6次，计算各溶剂的平均峰面积及其相对标准偏差(RSD)。二曱苯和二乙烯苯的峰面积分别以其四个峰的峰面积之和计算。本试验进样重复性较好，结果见表4。表4树脂残留物重复性试验结果大孔树脂残留物平均峰面积相对标准偏差RSD环己烷298201.91%苯15741.34%甲苯157351.08%二曱苯150121.27%苯乙烯100630.88%对二乙苯168651.31%二乙蹄苯73061.08%(4)4全测限精密量取检测限溶液lml，置于20ml顶空瓶中，在精密加入水5.0ml,封瓶混匀，在以上色谱条件下测定，记录环己烷、苯、曱苯、二曱苯、苯乙烯、对二乙苯和二乙烯苯的保留时间和峰高，结果在以上色谱条件下，S/N=3时，环己烷的检测限为O.llppm,苯的检测限为0.16ppm,曱苯的检测限为0.08ppm,二曱苯的检测限为0.33ppm,苯乙烯的检测限为0.24ppm,对二乙苯的检测限为0.14ppm,二乙烯苯的检测限为0.70ppm。二甲苯和二乙烯苯以其四个峰中最高的峰的峰高计算检测限。(5)准确度取本品批号为080101的样品约0.20g，精密称定，置于20ml顶空瓶中，精密加入标准溶液IIl.Oml和水5.0ml,封瓶，混匀，超声5分钟，在以上色语条件下测定，记录各溶剂的保留时间和峰面积，根据加入量和实测量计算分别计算回收率，结果见表5。_表5树脂残留物回收率试验结果_，一，供试称样量加入量实测量回收率平均回收RSD残留物、+_溶液(g)(昭)(ng)(%)率(％)(%)环己烷1#0.199933.98452.871572.0774.703.112#0.,199913.010875.563#0..199913.046976.471#0..199930.358489.43苯2#0.,199910.40080.351087.5888.291,133#0.,199910.352187.851#0.199933.489786,93曱苯2#0.199914.01443.403384.7885.921.263#0.,199913.453986.041#0.,199933,340582.60二曱苯2#0.199914細03.211780.1381.351.523#0.199913.259381.321#0.199933.381384.52笨乙歸2#0.199914.00063.304182.5983.381.213#0.199913.321683.031#0.199932.743668.70对二乙苯2#0.199913.99362.699467.5968.330.943#0.199912.743468.701#0.199933.057176.37二乙錄苯2#0.199914.00293.039475.9376.060.353#0.199913.037876.895、样品的测定(1)样品测定方法对照溶液的制备分别取环己烷、苯、甲苯、二曱苯、苯乙烯、对二乙苯和二乙烯苯各适量，精密称定，用N,N-二曱基曱酰胺配制成贮备液；分别取各贮备液适当体积混合后，用水稀释成每lml中含环己烷4吗、苯0.4吗、曱苯4吗、二曱苯4昭、苯乙烯4吗、对二乙苯4吗和二乙烯苯4吗的对照溶液；精密量取对照溶液l.Oml，置20ml顶空瓶中，再精密加入水5.0ml,封瓶，即得。供试溶液的制备取本品约0.20g,精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入N，N-二曱基曱酰胺l.Oml和水5ml，封瓶，超声5min，即得。测定法取对照品，在70。C下平衡45分钟后，取顶空气1.0ml注入气相色谱仪，记录色谱图；另取供试品，同法测定，记录色谱图；按外标法以峰面积计算，各溶剂的残留量应符合规定。环己烷的残留量不得大于0.002%;苯的残留量不得大于0.0002%;曱苯的残留量不得大于0.002%;二曱苯的残留量不得大于0.002%;苯乙烯的残留量不得大于0.002%;对二乙苯的残留量不得大于0.002%;二乙烯基苯的残留量不得大于0.002%。(2)样品测定结果如表6所示。表6各批样品残留物检测结果树脂批号批号批号批号残留物080101080301080302080303环己烷未检出未检出未检出未检出苯未检出未检出未检出未检出曱苯未检出未检出未检出未检出二曱苯未检出未检出未检出未检出笨乙歸未检出未检出未检出未检出对二乙苯未检出未检出未检出未检出二乙歸苯未检出未检出未检出未检出检查结果合格合格合格合格综上所述，本发明所提供的树脂残留物检测方法如下取本品约0.20g，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入N,N-二曱基曱酰胺l.Oml和水5.0ml，封瓶，超声5min,作为供试溶液。分别取环己烷、苯、曱苯、二曱苯、苯乙烯、对二乙苯和二乙烯苯各适量，精密称定，用N，N-二曱基曱酰胺配制成贝i备液；分别取各贮备液适当体积混合后，用N,N-二曱基曱酰胺稀释成每lml中含环己烷4吗、苯0.4[xg、曱苯4(ig、二曱苯4吗、苯乙烯4(ig、对二乙苯4吗和二乙烯苯4吗的溶液，精密量取l.Oml,置20ml顶空瓶中，再精密加入水5.0ml，封瓶，混匀，作为对照溶液。色谱柱为聚乙二醇(PEG-20M)石英毛细管柱，柱温程序升温，初始温度40。C,保持5分钟，再以每分钟6。C升温至200°C，保持6分钟；检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度为250°C;进样口温度为230°C。顶空进样，顶空瓶平衡温度为70°C，平衡时间为45分钟，进样体积为l.Oml。分别取供试品溶液与对照品溶液进样，依法测定，记录色镨图，按外标法以峰面积计算，含环己烷、苯、曱苯、二曱苯、苯乙烯、对二乙苯和二乙烯苯应符合以下规定含环己烷不得大于0.002%;含苯不得大于0.0002%;含曱苯不得大于0.002%;含二曱苯不得大于0.002%;含苯乙烯不得大于0.002%;含对二乙苯不得大于0.002%;含二乙烯基苯不得大于0.002%。实施例3:本发明独二味胶嚢剂的的主要成分含量测定本实施例为本发明独二味胶嚢剂的的主要成分含量测定。独二味胶嚢由独一味和三七药材经加工而成，参考药典和相关文献，采用了高效液相色语法(HPLC法)测定其中独一味药材中木犀草素和三七药材中皂苷类指标成分的含量作为控制手段。1、木犀草素的含量测定(1)仪器与试药仪器Agilent1100高效液相色谱仪及配套工作站SartoriusCP225D电子天平木犀草素对照品批号111520-200504,供含量测定用，购自中4企所。试剂色镨用曱醇为色谱纯(购自美国Fisher化学试剂公司)，水为重蒸馏水(自制)；其它试剂均为分析纯。(2)色镨条件1)检测波长的选择对木犀草素对照品溶液进行吸收波长扫描，结果木犀草素在350nm波长处有最大吸收，试验选择350nm为^r测波长。2)流动相的选择试验参曾选用流动相甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50);②乙腈-0.40/。磷酸溶液(25:75);③曱醇-水(50:50)，对独二味胶嚢中的木犀草素进行含量测定，结果均得到样品中木犀草素峰基线分离的对称色谱峰。方法学考察以流动相①曱醇-0.4。/。磷酸溶液(50:50)为流动相。3)色语柱的考察试验参曾选用ThermoODS-2HYPERSIL(250mmx4.6mm,5um)、PhenomenexLunaC18(250mmx4.6mm,5um)、AlltimaCis(250mmx4.6mm，5pm)三个品牌的色谱柱对独二味胶嚢中的木犀草素进行含量测定，均得到样品中木犀草素峰基线分离的对称色镨峰，分离度大于1.5，理论塔板数按木犀草素峰计算大于3000，故该方法适用范围较广。方法学考察以PhenomenexLunaC18(250mmx4.6mm,5um)为分析柱。(3)对照品溶液的制备对照品制备方法精密称取木犀草素对照品适量，加曱醇制成每lml含15ug的溶液，摇匀，即得。(4)供试品溶液的制备本试验沿用酸水解制备样品溶液的方法，对水解酸浓度、提取溶媒、提取方法、提取时间等因素做了考察，试验方法和结果如下。1)水解酸浓度选择取本品(批号080101)内容物，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入2.0mol/L盐酸曱醇溶液、2.5mol/L盐酸曱醇溶液、3.0mol/L盐酸曱醇溶液各25ml，称定重量，加热回流30分钟，取出，放冷，用各自水解溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加曱醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按上述色谱条件测定，测定结果见表7。表7水解酸(盐酸甲醇)不同浓度考察试验结果水解酸浓度2.0mol/L2.5mol/L3.0mol/L木犀草素含量(mg/g)3.504.244.24由表7可见，以2.5mol/L盐酸曱醇和3.0mol/L盐酸曱醇溶液为水解酸浓度时，木犀草素的提取效率基本无差异，选择水解介质为2.5mol/L盐酸曱醇溶液。2)提取溶媒选择取本品(批号080101)内容物，研细，取约0.4g,精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入2.5mol/L盐酸50。/。曱醇溶液、2.5mol/L盐酸曱醇溶液、2.5mol/L盐酸乙醇溶液各20ml，称定重量，加热回流30分钟，取出，放冷，用各自提取溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加曱醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按上述色谱条件测定，测定结果如表8所示。表8提取溶媒考察试验结果提取溶媒2.5mol/L盐酸2.5mol/L盐酸2.5mol/L盐酸50%曱醇溶液曱醇溶液乙醇溶液木犀草素含量(mg/g)1.674.223.88由表8可见，以2.5mol/L盐酸曱醇溶液提取，木犀草素的含量最高，故实验选择2.5mol/L盐酸曱醇溶液为提取溶液。3)提取时间选择取本品(批号080101)内容物，研细，取约0.4g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入2.5mol/L盐酸曱醇溶液20ml，称定重量，分别进行①回流提取30min，②回流提取60min,③回流提取卯min,取出，放冷，以提取溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加曱醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按上述色谱条件测定，测定结果如表9所示。表9提取时间考察试验结果提取时间30min60min90min木犀草素含量(mg/g)3.764.214.26由表9可见，提取60分钟后样品中木犀草素的含量影响几乎无差别，实验选择直接回流60分钟。综上所述，供试品溶液的制备方法为取本品内容物，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入2.5mol/L盐酸曱醇溶液25ml，称定重量，回流提取60分钟，取出，放冷，以2.5mol/L盐酸曱醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加曱醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。(5)空白试验按处方自配不含独一味的空白试剂，按制法制成空白制剂。依据供试品溶液制备方法制备并测定，结果空白溶液在与木犀草素对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。(6)标准曲线及线性范围考察分别精密吸取木犀草素对照品溶液(0.0116mg/ml)1、2.5、5、10、15nl，对照品溶液(0.1160mg/ml)2.5、5、10、15^1，注入液相色i普仪，测定峰面积，结果见表18。以峰面积(A)为纵坐标(Y),木犀草素对照品进样量(ug)为横坐标(X),绘制标准曲线，并计算回归方程标准曲线Y=4092.7X-20.2，相关系数l.O。表IO木犀草素对照品标准曲线测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>由表10可见，木犀草素进样量在0.0116-1.74ug范围内与色谱峰面积呈良好线性关系。(7)稳定性试验取批号为080101的样品，按质量标准正文含量测定项下的测定方法制备供试品溶液，室温下保存，分别精密吸取10jal于0、2、4、8小时，注入液相色镨仪，按正文测定条件进行测定，记录色谱图，考察其稳定性，试验结果如表11所示。_表ll稳定性考察试验结果_<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>由表ll可见，供试品溶液在配制后8小时内测定，结果稳定。(8)精密度试验精密吸取同一供试品溶液(批号080101),重复进样5次，每次10ul，测定木犀草素峰面积，试验结果如表20所示。_表12精密度试验考察试验结果_编号12345平均值RSD(%)样品峰面积652.9652.4658.3659.9661.3657.00.62表12可见，样品峰面积平均值为657.0，RSD=0.62%，表明精密度良好。(9)重复性试验取本品内容物，研细，取约0.5g，平行5份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入2.5mol/L盐酸曱醇溶液25ml,称定重量，回流提取60min，取出，放冷，以2.5mol/L盐酸曱醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按质量标准正文含量测定项下的测定方法进行测定，实验结果如表13所示。_表13重现性试验结果_编号_12345平均值RSD(%)含量(mg/g)4.164.264.084.404.244.232.83表13可见，含量平均值为4.23mg/g,RSD=2.83°/。，表明重现性较好。(10)回收率试验采用加样回收法，取已知含量的样品(批号080101木犀草素含量为4.23mg/g),研细，取上述样品0.15g(由于对照品浓度稍大，故样品的取样量有所调整，以便使峰面积相应匹配)，精密称定于锥形瓶中，平行6份，分别精密加入木犀草素对照品溶液(C-0.1160mg/m1)4.0、5.0、6.0ml,再精密加入2.5mol/L盐酸曱醇溶液20ml，称定重量，加热回流60分钟，取出，放冷，以2.5mol/L盐酸曱醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液2.0ml，置10ml量瓶中，加曱醇稀释至刻度，摇匀，即得。按质量标准正文含量测定项下的测定方法进行测定，按下式计算回收率，试验结果如表22所示，其中回收率的计算方法如下实测木犀草素含量(mg)-样品中木犀草素含量(mg)回收率％=-xioo%木犀草素对照品加入量(mg)表14加样回收率考察试验结果编号取样量(g)样品中的含量(mg)实测总量(mg)力口入量(mg)回收率(%)平均回收率(％)RSD(%)10.15170.64171.15900.524098.720.15260.64551.15800.524097.80.15280.64631.30260.6550100.298.60.8840.14710.62221.26370.655097.90.14380.60831.38000.786098.260.15260.64551.42040.786098.6由表14可见，采用加样回收试验所得平均回收率为98.6%，RSD为0.88%,表明回收率较好。(11)样品测定按照质量标准正文含量测定方法对3批中试产品木犀草素的含量进行了测定，每批平行测定2次，试验结果如表15所示。_表15样品中木犀草素含量测定结果__',a080301080302080303样品批号121212木厚草素(mg/g)4.034.114.084.154,084.10平均含量(mg/g)4.074.124.09装量差异(g/并立)0.18090.18020.1808平均含量(mg/^立)0.740.740.74(12)含量限度的确定根据自制样品的独一味药材质量及生产出独二味胶嚢的质量控制数据如表16所示。_表16独一味药材及木犀草素转移率_药材中木犀草~~成品中木犀草~~每粒中独一味成品中木犀草糸匕次_素含量(mg/g)素含量(mg/粒)药材含量(g)素转移率(％)0801011.620.76146.90803011.620.74145.70803021.620,74145.70803031.620.74145.7木犀草素在满足独一味药材符合中国药典2005年版要求的前提下，根据药效学研究及中试生产数据，每粒独二味胶嚢中含独一味药材lg,自制4批样品中木犀草素的转移率介于45.7%~46.9%，成品中木犀草素的含量介于0.74-0.76mg,独二味胶嚢中木犀草素的转移率均大于40%,不同批次间转移率差异较小，表明工艺基本稳定。考虑到独一味药材及独二味胶嚢装量差异等因素各批次之间存在差异，暂定每片独二味胶嚢中含独一味以木犀草素计不得低于0.4mg。2、皂苷类成分(1)仪器与试药仪器Agilent1100高效液相色谱仪及配套工作站SartoriusCP225D电子天平三七急苷Rl批号110745-200516;人参鸟苷Rgl批号110703-200424;人参急香Rbl批号110704-200420。试剂色镨用曱醇为色谱纯(购自美国Fisher化学试剂公司)，水为重蒸馏水(自制)；其它试剂均为分析纯。(2)色谱条件1)检测波长的选择分别对上述3种对照品溶液进行吸收波长光谱扫描，结果均在203nm波长处有最大吸收，试验选择203nm为检测波长。2)流动相的选择试验曾选用不同流动相，就独二味胶嚢中三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl进行含量测定，以色谱峰分离度、分析时间、理论塔板数等指标做综合评价，筛选出比较合适的分析条件。方法学考察按表17规定的流动相进行梯度洗脱。表17三七皂苷类成分含量测定流动相梯度表时间(分钟)_水(％)_乙腈(％)0~30811930~6581—6619—3465~7066—8134—1970~8081193)色镨柱的考察试验曾选用DikmaDiamonsil(250mmx4.6mm，5um)、PhenomenexLunaC18(250mmx4.6mm,5um)、AlltimaCi8(250mmx4.6mm，5(im)三个品牌的色谱柱对独二味胶嚢中的三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl进行含量测定，均得到样品中三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参急香Rbl基线分离的对称色语峰，分离度大于1.5，阴性样品溶液在对应时间处无吸收，理论塔板数按木犀草素峰计算大于4000,故该方法适用范围较广。方法学考察以PhenomenexLunaC18(250mmx4.6mm，5um)为分析柱。(3)对照品溶液的制备对照品制备方法精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Rbl对照品和三七皂苷Rl对照品适量，力a曱醇制成每lml含人参皂苷Rgl0.4mg，人参皂苷Rbl0.4mg、三七皂苷R10.1mg的混合溶液，即得。(4)供试品溶液的制备本试验考察了样品溶液的制备方法，对提取溶媒、提取方法、提取时间等因素做了考察，试验方法和结果如下。1)提取溶4某选择取本品(批号080101)内容物，研细，取约0.2g,精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入曱醇、70%曱醇、30%曱醇各50ml，称定重量，加热回流30分钟，取出，放冷，用各自提取溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。按上述色谱条件测定，测定结果如表18所示。表18提取溶媒考察试验结果提取溶媒曱醇i270%甲醇1230%曱醇12人参皂苷Rgl(mg/g)人参皂苷Rbl(mg/g)三七皂苷R1(mg/g)总量(mg/g)平均总量(％)112.1118.9106.3113.5126.1133.0118.7127.115.916.714.916.0254.1268.6239.9256.626.1423.2104.8104.1112.1112.314,814.7231.7231.123,1由表18可见，以曱醇提取时上述3种皂苷总量最高，故选择曱醇为提取溶液。2)提取方法选择取本品(批号080101)内容物，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入曱醇50ml,称定重量，分别进行(1)回流提取30分钟，(2)超声30分钟，取出，放冷，以曱醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。按上述色谱条件测定，测定结果见表19。表19提取方法考察试验结果提取方法回流30分钟超声30分钟i212人参皂苷Rgl(mg/g)99.397.396.498.9人参皂苷Rbl(mg/g)115.0111.9111.3114.3三七皂苷R1(mg/g)13.913.513.313.4总量(mg/g)228.2222.7221.0226.6平均总量(％)22.5422,38由表19可见，上述2种提取方法对样品中3种急香总量影响几乎无差别，故实验选择直接回流。3)提取时间选择取本品(批号080101)内容物，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入曱醇50ml,称定重量，分别进行(l)回流30分钟，(2)回流提取60分钟，(3)回流^是取90分钟，取出，放冷，以曱醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。按上述色谱条件测定，测定结果见表20。表20提取时间考察试验结果提取时间30分钟60分钟90分钟i21212人参皂苷Rgl(mg/g)96.396.495.395.595.695.6人参皂苷Rbl(mg/g)110.1110.5109.6109.6109.8110.0三七皂苷R1(mg/g)13,613.613.513.513.313.4总量(mg/g)220.0220.5218,4218.6218,7219.0平均总量(％)22.0221.8521.89由表20可见，提取不同时间对样品中3种皂香总量影响几乎无差别，RSD为0.41%，实验选择直接回流30分钟。综上所述，供试品溶液的制备方法为取独二味胶嚢内容物，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入曱醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，取出，放冷，用曱醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。(5)空白试验按处方自配不含三七的空白试剂，按制法制成空白制剂。依据供试品溶液制备方法制备并测定，结果空白溶液在与上述3种对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。(6)标准曲线及线性范围考察分别精密吸取对照品溶液(人参皂苷Rgl0.4298mg/ml,人参急苷Rbl0.3710mg/ml、三七鬼苦Rl0.1144mg/ml)1、2.5、5、7.5、10、15|il,对照品溶液(人参皂苷Rgl2.149mg/ml，人参皂苷Rbl1.855mg/ml、三七皂苷Rl0.572mg/ml)5、10、15nl，注入液相色谱仪，测定峰面积，结果见表29至表31。以峰面积(A)为纵坐标(Y),各对照品进样量(pg)为横坐标(X),绘制标准曲线图，并计算回归方程。表21人参皂苷Rgl标准曲线测定结果人参皂苷Rgl进样0.42981.07452.14卯3.22354.29806.447010.745021.4卯032.2350量(pg)峰面积120.5283.9573.7859.81155.41749.62638.15205.17515,5由表21可见，人参皂苷Rgl进样量在0.4298~32.2350ug范围内与色谱峰面积呈良好线性关系。表22人参皂苷RM标准曲线测定结果人参皂苷Rbl进样0.37100.92751.85502.78253.71005.56509.275018.550027.8250量(Hg)峰面积88.1218.8444.0662.0830.61279.01932.13828.55700.4由表22可见，人参皂苷Rbl进样量在0.3710~27.8250ug范围内与色语峰面积呈良好线性关系。表23三七皂苷R1标准曲线测定结果三七皂苷Rl进样量(吗)0.11440.28600.57200.85801.14401.71602.86005.7200峰面积30.576.4152.9230.5305.8437,9708.41397.8由表23可见，三七鸟苷Rl进样量在0.1144-5.7200ug范围内与色谱峰面积呈良好线性关系。(7)稳定性试验取批号为080101的样品，按质量标准正文含量测定项下的测定方法制备供试品溶液，室温下保存，分别精密吸取lOpl于0、4、8小时，注入液相色语仪，按正文测定条件进行测定，记录色镨图，考察其稳定性，试验结果如表24。表24稳定性考察试验结果放置时间(小时)048平均RSD(%)人参皂苷Rgl峰面积15161525.31521.91521.10.31人参皂苷Rbl峰面积1525.81520.214801508.71.66三七皂苦R1峰面积217.2222,5225.0221.61.80由表24可见，供试品溶液在配制后8小时内测定，各色镨峰面积RSD均小于2%，表明样品溶液稳定。(8)精密度试验精密吸取同一供试品溶液(批号080101)，重复进样5次，每次10ul，测定各色谱峰面积，试验结果如表25所示。_表25精密度试验考察试验结果_纟扁号12345平均RSD(%)人参皂苷Rgl151615221518.41525.31527.51521.81.34峰面积人参皂苷Rbl1525.81516.41518.11520.21510.31518.20.31峰面积三七皂苷R1217.2223.3221.3222.5225.2221.90.37峰面积由表25可见，供试品中各色谱峰面积RSD均小于2%,表明精密度良好。(9)重复性试验取独二味胶嚢内容物，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，取出，放冷，用曱醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得，按质量标准正文含量测定项下的测定方法进行测定，实验结果如表26所示。表26重现性试验结果编号i246平均RSD(%)取样量(g)0.23610.22290.20830.21800.23640.2042--人参皂苷124.11124.53125.498123.025123.663124.328124.1930.67Rgl(mg/g)330257884人参皂苷142.17143.47144.786142.081142.766143.303143.0980.70Rbl(mg/g)427392750三七皂苷20.74220.90720.292320.111420.465420.319520,47311.46Rl(mg/g)52由表26可见，各指标成分含量测定值的RSD均小于2%,认为选定方法重现性良好。(10)回收率试验1)人参皂苷Rgl回收率试验采用加样回收法，取已知含量的样品(批号080101,人参皂苷Rgl含量为124.1934mg/g,人参皂苷Rbl含量为143.0980mg/g、三七皂苷Rl含量为20.4731mg/g)O.lg,精密称定，平行6份，分别精密加入人参皂苷Rgl对照品溶液(人参皂苷Rgl含量为3.0858mg/g)4.0、5.0、6.0ml，再精密加入曱醇20ml，称定重量，加热回流30分钟，取出，放冷，以曱醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按质量标准正文含量测定项下的测定方法进行测定，按下式计算回收率，试验结果如表27所示。实测对照品含量(mg)-样品中对照品含量(mg)回收率％=-xlOO%对照品加入量(mg)表27人参皂苷Rgl加样回收率试验结果编号取样量(g)样品中的含量(mg)实测总量(mg)力口入量(mg)回收率(%)平均回收率(％)RSD(%)10.097812.146124.460912,14610.99820.082810.283222.765810.28321,01130.098912.282727.525912.28270.98899.21.2240.092211,450626.808911.45060,9950.101212.568430.665412.56840.97760.094011.674229.868911.67420.9832)人参皂苷RM回收率试验采用加样回收法，取已知含量的样品(批号080101，人参皂苷Rgl含量为124.1934mg/g，人参皂苷Rbl含量为143.0980mg/g、三七皂苷Rl含量为20.4731mg/g)O.lg，精密称定，平行6份，分别精密加入人参皂苷Rbl对照品溶液(人参皂苷Rbl含量为3.0592mg/g)4.0、5.0、6.0ml，再精密加入曱醇20ml，称定重量，加热回流30分钟，取出，放冷，以曱醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按质量标准正文含量测定项下的测定方法进行测定，按上面公式计算回收率，试验结果如表28所示。表28人参皂苷Rbl加样回收率试验结果编号取样样品中的实测总力口入量回收率平均回收RSD量(g)含量(mg)量(mg)(mg)(%)率(％)(%)10.103714.839327.229312.2368101.320.093213.336725.677312.2368100.830.103514.810629.947215.296099.040.085612.249227.284215.296098.399.61.200.099414.223932.441518.355299.360扁412.936131.069118.355298.83)三七皂苷R1回收率试验采用加样回收法，取已知含量的样品(批号080101,人参皂苦Rgl含量为124.1934mg/g，人参皂苷Rbl含量为143.0980mg/g、三七皂苷Rl含量为20.4731mg/g)O.lg,精密称定，平行6份，分别精密加入三七皂苷Rl对照品溶液(三七皂苷Rl含量为0.4128mg/g)4.0、5.0、6.0ml，再精密力口入曱西孚20ml，称定重量，力口热回流30分钟，取出，放冷，以曱醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按质量标准正文含量测定项下的测定方法进行测定，按上面公式计算回收率，试验结果如表29所示。表29三.七皂苷Rl加样回收率试验结果编号取样量(g)样品中的含量(mg实测总)量(mg)力口入量(mg)回收率(%)平均回收率(％)RSD(%)10扁31.80783.41411.651297.320扁72,02073.64471,651298.440.10340.10562.11692.16204.11244.14062.06402.064096.795.997.41.040.10022.05144.46612,476897.560.10012.04944,柳52.476898.6由表29可见，加样回收率法中各样品回收率均介于97.%~103.%，RSD(。/。)均小于3。/。，认为制样方法可行。(11)样品测定按照质量标准正文含量测定方法对3批中试产品三种皂苷类成分的含量进行了测定，每批平行测定2次，试验结果如表30所示。表30样品中三种皂苦含量测定结果样品批号08030108030208030:5121212人参皂苷Rgl118.3118.6118.5118.2121.0118.1人参皂苷Rbl131.9130.7130.1130.0132.0131.2三七急苷R116.716.016.816.117.016.7总量(mg/g)266.9265.3265.3264.2267.0265.9装量差异(g/粒)0.18090.18020.1808平均含量(mg/粒)48.147.748.5(12)含量限度的确定根据自制样品的三七药材质量及生产出独二味胶嚢的质量控制数据,现总结如表31所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>在满足三七药材符合中国药典2005年版要求的前提下，根据药效学研究及中试生产数据，每片独二味胶嚢中含三七药材6g,自制4批样品中三种皂苷成分的转移率为63.1%~68.8%,成品中三种皂苷的总量为47.7~51.8mg，独二味胶嚢中三种总皂苷的转移率均大于50%，不同批次间转移率差异较小，表明工艺基本稳定。考虑到三七药材及独二味胶嚢含膏量等因素各批次之间存在差异，暂定每粒独二味胶嚢中含三七以三种皂苷总量计不得低于30.0mg。权利要求1.一种中药口服制剂的检测方法，该口服制剂选自颗粒剂、胶囊剂和片剂，优选为胶囊剂，并且该制剂由独一味和三七制成，其特征在于，所述检测方法包括以下一项或多项检测项目木犀草素含量和皂苷类含量的测定、独一味的鉴别和/或树脂残留物的检查；优选地，所述木犀草素含量的测定是采用高效液相色谱法，其中所述高效液相色谱的条件为填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)，检测波长为350nm。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述木犀草素含量的测定方法包括以下步骤1)供试溶液的制备取所述胶嚢内容物，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入2.5mol/L盐酸曱醇溶液25ml，称定重量，回流提取60分钟，取出，放冷，以2.5mol/L盐酸曱醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加曱醇稀释至刻度，摇匀，滤过，f又续滤液作为供试溶液；2)对照溶液的制备精密称取木犀草素对照品适量，加曱醇制成每lml含15ug的溶液，摇匀，作为对照溶液；3)分别取步骤1)和2)所制备的供试品溶液与对照品溶液进样，依法测定，记录色谦图，按外标法以峰面积计算，所述每粒胶嚢中含独一味以木樨草素计在o.4mg以上。3.根据权利要求l或2所述的检测方法，其特征在于，所述皂苷类含量的测定包括釆用高效液相色谱法测定三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl和人参皂苷Rbl的含量，其中所述高效液相色谱的条件为填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为水和乙腈，梯度洗脱条件为0~30分钟(81%水+19%乙腈)，30~65分钟(81~66%水+19~34%乙腈)，65~70分钟(6691%水+34~19%乙腈)，70-80分钟(66~91%水+3419%乙腈)，检测波长为203nm。4.根据权利要求1-3中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述皂苷类含量的测定包括以下步骤l)供试溶液的制备取所述胶囊内容物，研细，取约0.2g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入曱醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，取出，放冷，用曱醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试溶液；(2)对照溶液的制备精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Rbl对照品和三七皂苷Rl对照品适量，加曱醇制成每1ml含人参皂苷Rgl0.4mg，人参皂苷Rbl0.4mg、三七皂苷R1O.lmg的混合溶液，作为对照溶液；(3)分别取步骤1)和2)所制备的供试品溶液与对照品溶液进样，依法测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，所述每粒胶嚢中含三七以三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl和人参皂苷Rbl三种皂苷总量计不得低于30.0mg。5.根据权利要求1-4中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述独一味的鉴别釆用薄层色谱法，其中所述薄层色谱的条件为薄层板为硅胶薄层板，展开剂为三氯曱烷-曱醇(4:1)，紫外200-500nm优选254nm下检视。6.根据权利要求1-5中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述薄层色语鉴别法包括以下步骤1)供试溶液的制备取胶嚢剂内容物、片剂或颗粒剂，研细，加乙醇，加热回流5-30分钟优选15分钟，取出，滤过，滤液作为供试品溶液；2)对照溶液的制备另取独一味对照药材，按照步骤1)所述方法制成对照药材溶液；3)照薄层色镨法试验，吸取步骤1)和2)所制备的两种溶液，分别点于同一块硅胶薄层板上，以三氯曱烷-曱醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯200-500nm优选254nm下检视；供试品色镨中，在与对照药材色镨相应的位置上，相同颜色的斑点。7.根据权利要求1-6中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述薄层色谱鉴别法包括以下步骤(1)供试溶液的制备取所述胶嚢内容物l.Og,研细，加乙醇15ml,加热回流15分钟，取出，滤过，滤液作为供试品溶液；(2)对照溶液的制备取独一味对照药材l.Og，按照步骤l)所述方法制成对照溶液；(3)照薄层色谱法试验，吸取步骤1)和2)所制备的两种溶液各5~IOW，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯曱烷-曱醇为展开剂，所述展开剂中三氯曱烷-曱醇的体积比为1:1~9:l优选为4:1，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试溶液色谱中，在与对照溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。8.根据权利要求1-7中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述树脂残留物的检查包括1)供试溶液的制备取胶嚢剂内容物、片剂或颗粒剂，加入N，N-二曱基甲酰胺和水，超声5分钟，作为供试溶液；2)对照溶液的制备分别取环己烷、苯、曱苯、二曱苯、苯乙烯、对二乙苯和二乙烯苯用N,N-二曱基曱酰胺配制成贮备液；分别取各贮备液混合后，用N，N-二曱基甲酰胺稀释成每lml中含环己烷4吗、苯0.4吗、曱苯4昭、二曱苯4iag、苯乙烯4pg、对二乙苯4吗和二乙烯苯4pg的溶液，加水，混匀，作为对照溶液；和3)分别取步骤1)和2)所制备的供试品溶液与对照品溶液进样，色谱柱为聚乙二醇石英毛细管柱，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，含环己烷、苯、曱苯、二曱苯、苯乙烯、对二乙苯和二乙烯苯应符合以下规定含环己烷不得大于0.002%;含苯不得大于0.0002%;含甲苯不得大于0.002%;含二曱苯不得大于0.002%;含苯乙烯不得大于0.002%;含对二乙苯不得大于0.002%;含二乙烯基苯不得大于0.002%。9.根据权利要求1-8中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述树脂残留物的检查是采用极性毛细管柱顶空进样系统程序升温法对环己烷、苯、甲笨、二曱苯、苯乙烯、对二乙苯和二乙烯苯进行测定，其中所述极性毛细管柱顶空进样系统程序升温法的条件为色语柱为聚乙二醇(PEG-20M)石英毛细管柱；柱温为程序升温，初始温度40°C，保持5分钟，再以每分钟6'C升温至200°C,保持6分钟；检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度为250。C;进样口温度为23(TC;顶空进样，顶空瓶平衡温度为70°C,平衡时间为45分钟。10.权利要求1-9中任一项所述的检测方法在中药口服制剂生产中质量控制方面的应用，该口服制剂选自颗粒剂、胶嚢剂和片剂，优选为胶嚢剂，并且该制剂由独一p未和三七制成。全文摘要本发明提供了一种中药口服制剂的检测方法，该口服制剂选自颗粒剂、胶囊剂和片剂，优选为胶囊剂，并且该制剂由独一味和三七制成，所述检测方法包括以下一项或多项检测项目木犀草素含量和皂苷类含量的测定、独一味的鉴别和/或树脂残留物的检查。本发明所提供的检测方法具有重复性良好、中间精密度良好、专属性强、对数线性关系良好，回收率较高的优点，适用于对独二味胶囊进行质量控制，有效控制相关产品的产品质量，保证产品的有效性。文档编号A61K36/185GK101606969SQ200910150099公开日2009年12月23日申请日期2009年7月13日优先权日2009年7月13日发明者廖立东,张康宁,艳邓申请人:甘肃独一味生物制药股份有限公司