一种榄香烯注射液及其制备方法

专利名称：：一种榄香烯注射液及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及药物制剂
技术领域：
，具体涉及一种榄香烯注射液及其制备方法。
背景技术：
：载药乳剂是在脂肪乳的基础上研究产生的。脂肪乳创始于20世纪60年代，是应西方发达国家医院为抢救危重病人如严重烧伤病人、车祸受伤者、接受手术后需禁食者、晚期肿瘤兼恶液质病人等的需要而开发的，其是以大豆油(富含油酸、亚油酸等长链脂肪酸)为原料，加乳化剂及注射用水，经高压均质、高温灭菌制备而成的一种水包油型可供静脉注射的乳剂。由于该乳剂含有数量巨多、粒径0.01150iim的乳粒，分散度大，总表面积大，表面自由能很高，属于热力学不稳定体系，故脂肪乳剂制备技术难度较高；当乳化条件不当时，极易在加热灭菌或储存期间发生乳化膜破裂导致破乳，出现分层、漂油、絮凝等现象。依据脂肪乳制剂技术基础，国内外药物学家进而广泛进行了载药乳剂的研究，该剂型具有载药量大、可将亲脂性药物供动静脉注射且具靶向作用等优点。榄香烯注射液(载药乳剂)系我国自主研发，榄香烯(Elemene)化学名为1_甲基_1_乙烯基-2，4-二异丙烯基环己烷，分子式(:151124，分子量204.35，有P-榄香烯、Y-榄香烯和S-榄香烯三种同分异构体，系从传统中药姜科植物温郁金(Curcumawenyujin)中提取分离的倍半萜类抗癌有效成分，以P-榄香烯为主要活性成分，是一种新型的、具有高度选择性和免疫功能的抗癌药物。榄香烯注射液(载药乳剂)系将呈液态油状的榄香烯(倍半萜类，易挥发)制备成分散度很大的o/w型乳剂，有利于增加药物的化学稳定性、加快药物吸收和药效发挥、提高药物的生物利用度等，且静脉注射后能发挥靶向作用。经多年的临床使用逐渐发现脂肪乳的副作用，如报道大剂量或长期连续使用长链脂肪乳会引起高脂血症、损害免疫系统和影响网状内皮系统、肝脏等重要脏器功能(脂肪乳剂工艺研究，广东药学院学报，2001年Vo117No3P170)。另报道脂肪乳类产品在临床使用中存在的不良反应如发热、肝功能异常等与原辅料中带入的杂质有关，大剂量、长期使用该类产品后果严重，其产生的毒副作用甚至不可逆。国外报道狗的亚急性毒性试验已经发现不同脂肪乳会造成不同的脏器损害，甚至在试验结束前死亡(中/长链脂肪乳注射液制备工艺研究，广东药学院学报，2001年9月第17巻第3期，P170)。但对于原辅料带入何种杂质引起脂肪乳类产品产生毒性查现有文献均语焉不详，未研究确认。申请号为93110091.7的中国专利(专利甲)公开的一种榄香烯乳注射液及其制备方法，系采用榄香烯、胆固醇、大豆卵磷脂及磷酸盐缓冲液配制而成的小容量注射剂。按照该专利制备的榄香烯乳注射液(国药准字H109601115)被批准上市以来，大量临床研究论文均报道发生静脉炎、注射疼痛和药物热等副作用，患者医从性差，甚至因难以忍受注射疼痛导致停药，或需与输液、脂肪乳等其他药品联用，增加患者药费开支及联合用药的配制质量风险(榄香烯乳对晚期肺癌癌性胸水的治疗作用，中国肿瘤临床，1996年23巻第1期P73-74;榄香烯乳加联合化疗治疗急性非淋巴细胞白血病疗效观察，中国肿瘤临床，1999年29巻第3期P237-238;榄香烯乳治疗膀胱癌的临床观察，贵州医药2002年9月第第9期P810-811);并因无法应用于浅静脉用药，只能采取导管深静脉用药，对护理技术要求较高，亦导致临床使用的不便。申请人:经研究证实专利甲制备的榄香烯乳注射液临床发生静脉炎、注射疼痛和药物热等副作用系溶血作用导致，原因有三点(l)未对乳化剂大豆卵磷脂成分之一的"溶血磷脂"进行限量控制，静脉输注后由于富含溶血磷脂导致溶血；(2)未对乳化剂的渗透压进行控制，静脉大剂量输注后由于低渗导致溶血；(3)制备过程未在惰性气体保护下进行，易使磷脂因氧化水解产生溶血磷脂，增强了乳化剂的溶血作用。研究证实，溶血磷脂的乳化能力为普通磷脂的5倍(溶血磷脂的乳化性能研究，安徽农业科学，2007，35(13)P3800-3801)，因此，专利甲制备的榄香烯乳注射液必须在乳化剂大豆卵磷脂中溶血磷脂的重量百分含量^20%的前提下，方可乳化成功；溶血磷脂含量<20%时，乳粒乳化膜不牢固、热稳定性差，一经加热灭菌就发生破乳，出现漂油现象。因此，按照专利甲制备的注射液，经检测溶血呈现阳性，导致临床应用发生如静脉炎、注射疼痛和药物热等副作用。另外专利甲配方中含辅料胆固醇，胆固醇自牛、马、羊、猪等动物大脑中提取，因目前在欧洲爆发的疯牛病、疯羊病等病原体及传染源至今不明，故存在感染疯牛病等潜在不安全因素。临床报道榄香烯注射液单次用药剂量可达8001200mg，以100mg/20ml支的规格计单次注射体积可达160240ml(持续灌注榄香烯治疗恶性脑肿瘤，中国肿瘤临床，2001年第28巻第9期P682-683;中药榄香烯乳注射液治疗恶性脑肿瘤40例临床研究，中国中西医结合杂志，2000年9月第20巻第9期P645-646)，且著名肿瘤专家储大同研究发现榄香烯乳注射液直至2000mg/d仍未摸索到人体最大耐受剂量，以100mg/20ml支规格计、单次注射剂量已达400ml(榄香烯乳注射液耐受性试验I期临床研究，中国新药杂志2006年第15巻第21期P1867-1870)。因该药临床剂量较大，制剂应调节渗透压与血液等渗，才能防止静脉注射进入体内后引发溶血现象。专利甲制备的注射液中无渗透压调节剂，质量标准无"渗透压"检测项目，检测专利甲制备的注射液各批次渗透压显示在95115mOsmol/kg(相当于0.3087%浓度的NaCl溶液，当NaCl溶液浓度<0.35%时将导致完全溶血)。因血浆渗透压为313mOsmol/kg，故按专利甲所制备的注射液与血液不等渗，当大剂量注入体内时，将导致血液中红血球破裂产生溶血，亦造成临床副作用(生理学第五版，主编姚泰，人民卫生出版社，P49-50;《中华人民共和国药典》2005年版一部附录IXG渗透压摩尔浓度测定法)。专利甲终端湿热灭菌条件系采用10(TC灭菌40分钟，其F。值为0.32，不符合2005年版《中华人民共和国药典》(简称中国药典)中关于"湿热灭菌F。值一般不低于8分钟，确保无菌保证值SAL《10—6"的要求。因为无菌制剂在F。值<8分钟时，经灭菌后污染菌存活概率增加、患者存在感染药源性败血症风险，严重时将危及患者生命安全(F。值是将被灭菌物品在灭菌过程中不同的受热温度与时间折算到i2rc灭菌时热效力相当的灭菌时间。)作为天然药物的载药乳剂，专利甲未对原料药材的来源加以限定，也未对原料(莪术油)、原料药(榄香烯)、制剂(榄香烯注射液)的有效成分进行指纹图谱的鉴别，未能进行植物药的物种控制和真伪鉴定，不利于药品质量的"安全、稳定、有效、可控"。由于药品质量关系公众的生命，不能允许存在任何潜在的质量隐患，故需研究没有潜在质量风险的、临床使用安全有效的榄香烯注射液配方和制备方法。申请号为02155072.7的中国专利(专利乙)公开了一种榄香烯脂肪乳注射液及其制备方法，该专利制备的注射液系大容量注射剂，主成分为榄香烯和大豆油(大豆油的重量百分含量高达10%30%)，系在治疗癌症的同时补充营养成分和提供高能量，临床适应症主要用于晚期癌症患者改善生存质量，其临床禁忌应等同于脂肪乳。由于脂肪乳注射液说明书中明确规定脂肪乳禁用于休克和严重脂质代谢紊乱(如高脂血症)血栓患者，慎用于脂肪代谢功能减退的患者如肝、肾功能不全，糖尿病、酮中毒、胰腺炎、甲状腺机能低下(伴有高脂血症)以及败血症者；存在可引起体温升高，偶见发冷畏寒以及恶心、呕吐等的不良反应。此外，近年实验研究发现长期口服脂肪乳导致动物诱发非酒精性脂肪肝及骨质疏松症(脂肪乳剂致动物骨质疏松及复方丹参的防治作用观察，中国学位论文文摘数据库，尤婷婷)。因此，该专利制备的榄香烯脂肪乳注射液临床使用有一定的局限性，并非所有癌症患者均可以使用。另外，专利乙采用115t:灭菌30分钟，其F。值二7.53分钟，亦不符合2005年版《中华人民共和国药典》提出的湿热灭菌F。值一般不低于8分钟，保证符合无菌标准SAL《10—6。作为天然药物的载药乳剂，专利乙同样未对原料药材的来源加以限定，也未对原料药材、原料药、制剂的有效成分进行指纹图谱的鉴别，未能进行植物药的物种控制和真伪鉴定，不利于药品质量的"安全、稳定、有效、可控"。作为大容量静脉输注药品，专利乙中亦未对溶血、渗透压等重要的安全性项目进行质量控制，按照专利乙制备的注射液，由于未控制大豆卵磷脂中溶血磷脂的含量，仍然存在使成品产生溶血，静脉给药时发生注射疼痛、静脉炎、药物热、机体产生脏器损害的安全风险。溶血磷脂的病理、生理作用溶血磷脂(lysoph-osphatidylcholine)是由磷脂失去一个脂肪酸基团所形成的磷脂的统称，是普通磷脂被磷脂酶A水解或在约pH4.8时由磷脂氧化水解生成的一组化合物。已清楚低浓度(2X10—4mol/L)的溶血磷脂就能使细胞膜溶解，更低的浓度则使红细胞的形状发生很大的改变，形成棘皮细胞，所以公认溶血磷脂对红细胞具有强溶血作用。因溶血会使毛细血管通透性增加而引起出血，使组织释放组织胺、5_羟色胺、肾上腺素、缓动素等等，间接影响心血管及神经系统的功能并剌激发热中枢产生药物热。当大剂量溶血磷脂进入人体时，还会因短时间内红细胞大量溶解，导致人体出现各种出血症状如呕血、便血、尿血、皮下出血等等，严重时导致死亡。此外，大量外源性溶血磷脂如溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰丝胺酸(LPS)、溶血磷脂酰肌醇(LPI)等溶血磷脂类分子，进入人体后，会在机体内磷脂酶D(PLD)的作用下产生溶血磷脂酸(LPA)(溶血磷脂酸在缺血性脑血管病中的作用，临床荟萃，2006年IO月5日，第21巻第19期，P1427)。近年来国内外医学界有关溶血磷脂尤其是LPA、LPC等等对心、脑血管、肾炎、慢性疼痛等疾病的关联性研究深入细致、方兴未艾。如LPA是一种具有多种生物学活性的磷脂信使，对各种血细胞、血管壁细胞、心肌细胞、成纤维细胞等具有多种特异性作用。研究发现，在一定条件下LPA会促进动脉粥样硬化和血栓形成，从而可能加重心血管疾病特别是缺血性心脏病的发展。在冠状动脉粥样硬化早期，LPA增加血管内膜的通透性，使内膜的屏障功能异常，并在发病的后期加重血小板在内膜上的聚集和黏附，动脉内血栓形成，甚至粥样斑块破裂，冠状动脉闭塞，以致发生心肌缺血或心肌梗死丄PA还具有促进心肌细胞肥大和成纤维细胞增殖等作用，加重了心肌梗死后的心肌肥厚，因此，LPA与缺血性心脏病的发生和发展有密切关系(溶血磷脂酸与缺血性心脏病，医学研究生学报，V01.19No2P172)。实验还证实，LPA能引起海马神经元凋亡，tau蛋白异常磷酸化以及脑内皮细胞紧密连接通透性增加，与缺血性脑血管病和血管性痴呆的病理学改变密切相关，提示在病理情况下LPA能引起血脑屏障开放，并通过血脑屏障进入中枢神经系统，作用于各类细胞而产生不同的病变效应，包括引发脑血管痉挛，LPA对缺血性脑血管疾病发生发展起着至关重要的作用(溶血磷脂酸对血脑屏障通透性的影响，国际脑血管病杂志，2006年4月第14巻第4期，P286)。研究表明，LPA具有神经毒性作用，通过增加线粒体内活性氧(ROS)形成，继而诱导神经元凋亡可能是其损伤机制之一(溶血磷脂酸与神经系统，山西医科大学学报，2004年8月，35(4)P399;溶血磷脂酸诱导小脑颗粒细胞氧化性损伤与凋亡，萃中与神经疾病，2004年12月第11巻第6期，P321)。溶血磷脂酰胆碱(LPC)是氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的主要活性成分，也具有广泛的生物学效应，参与动脉粥样硬化发生发展的各个环节。LPC可以诱发炎症反应，增加氧化应激，干扰血管内皮功能，破坏斑块稳定性(溶血磷脂酰胆碱在动脉粥样硬化中的作用，中国动脉硬化杂志，2006年第14巻第12期，P1083)。日本长崎大学的科学家通过动物实验发现，吗啡和抗炎药物等无法抑制的慢性疼痛(也称为神经性疼痛，由神经受伤、疼痛感觉过敏引起，包括由癌症引起的疼痛、腰痛，患带状疱疹后的疼痛等)系由溶血磷脂所致(日本科学家发现导致慢性疼痛的物质溶血磷脂，2004.06.21来自新浪科技)。由于溶血磷脂的强致溶血性和对机体潜在的损害，在制备注射用乳剂时对产品进行"溶血"等安全性指标的检测显得尤为重要，中国国家药典委员会在网站发布国药典化发〔2007〕4号"注射剂质量标准提高工作会议纪要"(2007.1.10)，公布的首批拟提高质量标准的注射液品种中榄香烯注射液亦被要求增加"其他(溶血与凝聚、异常毒性、过敏试验、有关物质)"等的检测项目(《注射剂标准提高工作方案》及附表)，标志着我国药监部门对该产品存在溶血风险的高度重视。灭菌条件终端湿热灭菌是注射液(乳剂)关键生产工序，我国SFDA《化学药品注射剂和多组分生化药注射剂基本技术要求》(国食药监注[2008]7号，08.1.10)要求"(3)小容量注射剂①应首选终端灭菌工艺，相关技术要求同大容量注射剂。"即"①应采取终端灭菌工艺，建议首选过度杀灭法(F。》12)，如产品不能耐受过度杀灭的条件，可考虑采用残存概率法(8《F。<12)，但均应保证产品灭菌后的SAL不大于10—6。采用其它F。值小于8的终端灭菌条件的工艺，原则上不予认可。"按照国际惯例如英国药典(1973年)、美国药典(1980增补版)均记载的对灭菌制剂的无菌保证的量化标准F。值不小于8分钟，即经灭菌后，产品中污染菌存活的概率不得大于百万分之一(无菌标准SAL《10—6)。F。值越低对降低生产过程中微生物污染的要求就严格，即同等微生物污染控制能力水平时，经灭菌之后的药品因为灭菌不彻底、残留存活微生物的概率就越高。由于药品关系人的生命安全，不能允许存在由潜在的质量隐患导致的临床用药安全风险，故需要研究一种安全有效的榄香烯注射液。
发明内容本发明提供了一种无质量风险的、安全有效的抗癌药榄香烯注射液及其制备方法，通过限制辅料大豆卵磷脂中溶血磷脂的含量、增加渗透压调节剂、湿热灭菌条件提升F。值至8分钟15分钟，将注射液的配制过程在惰性气体的保护下进行，杜绝磷脂因氧化水解产生溶血磷脂，克服了以往榄香烯注射液由于配方及灭菌条件不能满足无菌保证值(SAL《10—6)导致潜在的质量安全性风险，如溶血作用、血管剌激性、灭菌后微生物存活等等，降低了临床ADR如静脉炎、注射疼痛、药物热等发生率，以及制剂带入的溶血磷脂导致对人体产生近、远期的致病性，或因微生物杀灭不彻底造成患者感染败血症等质量隐患。本发明提供的注射液不仅解决了以往榄香烯注射液的溶血作用和血管剌激性，而且使榄香烯注射液热稳定性良好，可保证灭菌效果，F。值>8分钟，无菌保证值SAL>10—6。—种榄香烯注射液，以注射液的总体积1L计，由下列原料药和药用辅料组成榄香烯5g20g、注射用大豆卵磷脂15g60g、注射用油5g99.9g、注射用甘油12g30g，余量为磷酸盐缓冲液。作为优选所述的注射用大豆卵磷脂中溶血磷脂酰胆碱的重量百分含量应小于3.0%，可选用德国Lipoid公司生产的注射级大豆卵磷脂系列产品(如S75、S100等)，该系列大豆卵磷脂产品的安全性关键质量标准为溶血磷脂酰胆碱(Lysophosphatidylcholine,LPC)的重量百分含量小于3.0%，碘值(Lodlnevalue)为8595，过氧化物值(Peroxidevalue)小于3。通过对大豆卵磷脂中的溶血磷脂进行限量控制，避免榄香烯注射液静脉输注后由于富含溶血磷脂导致溶血。所述的注射用油作为榄香烯和大豆卵磷脂的溶剂，选用注射用大豆油、注射用红花油、注射用紫苏油或注射用棕榈油中的一种。所述的磷酸盐缓冲液pH值为6.56.8，浓度优选为0.01mol/L，可用药用磷酸氢二钠和药用磷酸二氢钠来配制，其中药用磷酸氢二钠可选用无水磷酸氢二钠或磷酸氢二钠水合物，药用磷酸二氢钠可选用无水磷酸二氢钠或磷酸二氢钠水合物。所述的榄香烯是由姜科植物温郁金(CurcumawenyujinY.H.ChenetC.Ling)的干燥根茎经水蒸汽蒸馏获得的莪术油中提取的；温郁金又名温莪术(Wenezhu，拉丁名RhizomaCurcumae)，选用浙江省温州地区道地产区的温郁金，采收期一般为1月份。所述的莪术油的指纹图谱与莪术油标准指纹图谱进行对照，相似度不得低于0.95。所述的莪术油标准指纹图谱采用气相色谱法记录117分钟，标准指纹图谱应有19个特征峰，以e-榄香烯色谱峰的保留时间为1计算相对保留时间，所述19个特征峰的相对保留时间依次为0.2857，0.3011，0.3428，0.4819，0.5649，0.5904，0.6394，0.6745，0.9073，0.9861，1，1.0453，1.0640，1.0723，1.1074，1.1629，1.1726，1.3455，1.5062;以P_榄香烯色谱峰的峰面积为1计算相对峰面积，所述19个特征峰的相对峰面积依次为0.1216±0.OIOO，O.2198±0.0170，0.0572±0.0042，0.2693±0.0240，0.4973±0.0308，0.1953±0.0144，0.0416±0.0031，0.0823±0.0057，0.1545±0.0011,0.0335±0.00005，1.0000，0.1873±0.0060，0.0205±0.0006，0.0653±0.0023，0.1096±0.0051，0.3731±0.0084，0.0905±0.0077，0.5639±0.0216，0.2406±0.0617。所述的榄香烯的指纹图谱与榄香烯标准指纹图谱进行对照，相似度不得低于0.995。所述的榄香烯标准指纹图谱采用气相色谱法记录47分钟，标准指纹图谱应有6个特征峰，以P-榄香烯色谱峰的保留时间为l计算相对保留时间，所述6个特征峰的相对保留时间依次为0.9061，0.9851，1，1.0439，1.0623，1.0709;以P_榄香烯色谱峰的峰面积为1计算相对峰面积，所述6个特征峰的相对峰面积依次为0.0297±0.0131，0.0392±0.0049，1.OOOO，O.1153±0.0214，0.0155±0.0109，0.0530±0.0320。所述的榄香烯注射液的指纹图谱与榄香烯注射液标准指纹图谱进行对照，相似度不得低于O.995。所述的榄香烯注射液标准指纹图谱采用气相色谱法记录47分钟，标准指纹图谱应有6个特征峰，以e-榄香烯色谱峰的保留时间为1计算相对保留时间，所述6个特征峰的相对保留时间依次为0.9063，0.9853，1.0000，1.0440，1.0625，1.0710;以e-榄香烯色谱峰的峰面积为1计算相对峰面积，所述6个特征峰的相对峰面积依次为0.0300±0.0134，0.0395±0.0049，1.OOOO，O.1141±0.0208，0.0154±0.0108，0.0493±0.0301。所述的莪术油的指纹图谱、莪术油标准指纹图谱、榄香烯的指纹图谱、榄香烯标准指纹图谱、榄香烯注射液指纹图谱和榄香烯注射液标准指纹图谱均按照中国药典2005版附录VIE气相色谱法进行测定。所述的榄香烯注射液的制备方法，包括步骤(1)取药用磷酸氢二钠和药用磷酸二氢钠，加注射用水溶解后再加入注射用甘油，搅拌均匀，用注射用水定容，配制pH值为6.56.8、磷酸盐浓度为0.Olmol/L的磷酸盐缓冲液_甘油溶液，过滤后滤液即为水相；(2)在惰性气体保护下将榄香烯、注射用大豆卵磷脂、注射用油混合均匀，于温度《95t:的夹套水浴中加热至完全熔融，制成油相；(3)在惰性气体保护下，将上述油相乳化后加入占水相总重量50%90%、预热至40°C8(TC的水相中，循环乳化10分钟60分钟后，加入余下的40°C8(TC的水相定容，在40°C8(TC乳化后于90MPa620MPa的高压中均质直至粒径《1Pm的粒子数目大于90%，经过滤，滤液经湿热灭菌至F。值为8分钟15分钟后即得榄香烯注射液。步骤(3)中，所述的湿热灭菌条件选自114t:湿热灭菌40分钟、116t:湿热灭菌30分钟、117t:湿热灭菌25分钟或12rC湿热灭菌15分钟中的任意一种。所述的惰性气体可选用本领域广义上所指的惰性气体，如氮气、氦气、氩气等，优选氮气。本发明与现有技术相比具有以下优点(1)本发明采用德国Lipoid公司的大豆卵磷脂，其溶血磷脂酰胆碱重量百分比含量小于3%，可对注射液中溶血磷脂的含量进行控制，同时改进制备方法如油相混合时抽真空、充氮，有效避免各种磷脂成分因氧化水解产生溶血磷脂。(2)榄香烯注射液给药方式为静脉注射，并且其临床注射剂量有增大趋势，其渗透压应与血浆相等或接近，才能保证临床用药的安全，本发明中加入了注射用甘油以调节注射液的渗透压，使其接近血液的渗透压，经调整后榄香烯注射液的渗透压达到了295315m0smol/kg，与血液渗透压313m0smol/kg接近。(3)本发明采用湿热灭菌，灭菌条件为F。值8分钟15分钟，如114。C湿热灭菌40分钟(F。值8.0分钟)或116。C湿热灭菌30分钟(F。值9.48分钟)或121。C湿热灭菌15分钟(F。值15分钟)，符合中国药典和SFDA的最新技术要求，为制剂无菌量化标准SAL(无菌保证值)>10—6，提供了安全的前提。(4)本发明中仅用少量注射用油作为油相溶剂，制备的小容量榄香烯注射液，以每日注射6支榄香烯注射液(600mg/日)计，人体仅注入注射用油1.211.88g/日(系活性成分的219.8倍)，在饮食正常范围内，无临床使用的禁忌，可供临床广泛使用。(5)本发明中无辅料胆固醇，胆固醇系牛、马、羊、猪等动物大脑中提取，虽然经过大量的研究，但目前在欧洲爆发的疯牛病、疯羊病等病原体及传染源至今仍然不明，一旦疯牛病、疯羊病等在中国境内发生，注射液含有胆固醇就存在感染疯牛病等潜在的质量风险。(6)通过稳定性考察已证实本发明的榄香烯注射液在三年有效期限内不发生破乳现象，各项质量指标稳定，无溶血作用、无血管剌激性、无灭菌后存活微生物的风险(配合灭菌工艺验证)。(7)本发明通过对原料、原料药、制剂指纹图谱的控制，达到鉴别真伪(不同药材物种来源、不同药材产地来源)的目的。本发明制备的榄香烯注射液主要质量标准如下1.性状为乳白色的均匀乳状液体(见质量标准WS「(X-095)-2000Z)。2.鉴别见质量标准WS「(X-095)-2000Z。3.溶血阴性(见中国药典2005版一部附录XVIIIB中药注射剂安全性检查法应用指导原则溶血与凝聚检查法)。4.渗透压295315m0smol/Kg(见中国药典2005版二部附录IXG渗透压摩尔浓度测定法)。5.pH值5.57.0(见WS「(X-095)-2000Z标准)。6.粒度粒径《lym的粒子数目大于90X(见中国药典2005版二部附录IB注射剂之注射用浓溶液乳剂)。7.含量含榄香烯应为标示量的80.0110.0%(见质量标WS「(X-095)-2000Z标准)。8.热原应符合规定(见质量标准WS「(X-095)-2000Z)。9.其他除澄明度不检查外，应符合注射剂项下有关的各项规定(见中国药典2005版二部附录IB)。本发明制备的榄香烯注射液规格及适应症、用法用量如下规格小容量，100mg/20ml、200mg/20ml、300mg/20ml、400mg/20ml、200mg/40ml、300mg/20ml、400mg/20ml;大容量，250mg/50ml、500mg/50ml、1000mg/50ml、500mg/100ml、1000mg/100ml、2000mg/100ml;适应症本品合并放、化疗常规方案，对肺癌、肝癌、食道癌、鼻咽癌、脑癌、骨转移癌等恶性肿瘤可以增强疗效，降低放、化疗的毒副作用。并可用于介入、腔内化疗及癌性胸腹水的治疗。用法用量静注一次0.40.6g，一日1次，23周为一疗程。用于恶性胸腹水治疗一般200mg400mg/m2，抽胸腹水后，胸腔或腹腔内注射，每周12次或遵照医嘱。具体实施方式实施例1:取0.284Kg药用磷酸氢二钠(Na2HP04)禾P0.470Kg药用磷酸二氢钠(NaH2P042H20)，加适量注射用水溶解后，加入12.5Kg注射用甘油，加注射用水至50万ml，搅拌均匀，配制磷酸盐浓度为0.01mol/L的磷酸盐缓冲液_甘油溶液，pH值为6.6，经0.45iim聚醚砜滤芯过滤，滤液即为水相。取2.5Kg榄香烯、7.5Kg注射用大豆油和7.5Kg德国Lipoid公司生产的注射级大豆卵磷脂S75，放置于油相罐内，抽真空、充氮、搅拌、9(TC夹套水浴加热至完全混合熔融，制成油相。先取占水相总重量的60X、预热至63t:的水相至剪切罐中，加入油相循环剪切乳化40分钟；再加入余下的63t:的水相定容至50万ml，再剪切乳化若干分钟，取样检测含量、pH等符合规定后在100MPa的高压均质机中于72t:乳化5遍；取样检测粒度，粒径《1ym的粒子数目大于90%，检验符合要求后，经3iim聚偏二氟乙烯滤膜过滤，灌封于安瓿中，充氮、封口，用旋转式灭菌器在114t:湿热灭菌40分钟，即得榄香烯注射液，F。值为8.0分钟。实施例2:除了湿热灭菌的条件为116t:灭菌30分钟之外，其余操作均同实施例l，制备榄香烯注射液，其F。值为9.48分钟。实施例3:除了湿热灭菌的条件为12rC灭菌15分钟之外，其余操作均同实施例l，制备榄香烯注射液，其F。值为15分钟。实施例4:取0.715Kg药用磷酸氢二钠(Na2HP0412H20)禾P0.470Kg药用磷酸二氢钠(NaH2P042H20)，加适量注射用水溶解后，加入13.5Kg注射用甘油，加注射用水至50万ml，搅拌均匀，配制磷酸盐浓度为0.Olmol/L的磷酸盐缓冲液_甘油溶液，pH值为6.5，经0.45iim聚醚砜滤芯过滤，滤液即为水相。取5.0Kg榄香烯，15.OKg注射用大豆油，15.OKg德国Lipoid公司生产的注射级大豆卵磷脂S75，放置于油相罐内，抽真空、充氮、搅拌、夹套水浴7(TC加热至完全混合熔融，制成油相。先取占水相总重量的60%、预热至65t:的水相至剪切罐中，加入油相循环剪切乳化30分钟；加入余下的65t:的水相定容至50万ml，再剪切乳化若干分钟，取样检测含量、pH等符合规定后，再经压强为500MPa的高压均质机中于63t:乳化3遍；取样检测粒度，粒径《1ym的粒子数目大于90%，检验符合要求后，经3m聚四氟乙烯滤膜过滤，灌封于安瓿中，充氮、封口，用旋转式灭菌器在114t:湿热灭菌40分钟，即得榄香烯注射液，F。值为8.O分钟。实施例5:除了湿热灭菌的条件为116t:灭菌30分钟之外，其余操作均同实施例4，制备榄香烯注射液，其F。值为9.48分钟。实施例6:除了湿热灭菌的条件为12rC灭菌15分钟之外，其余操作均同实施例4，制备榄香烯注射液，其F。值为15分钟。实施例7:取0.284Kg药用磷酸氢二钠(Na2HP04)和0.470Kg药用磷酸二氢钠(NaH2P0421120)，加适量注射用水溶解后，加入14.OKg注射用甘油，加注射用水至50万ml，搅拌均匀，配制磷酸盐浓度为0.Olmol/L的磷酸盐缓冲液_甘油溶液，pH值为6.7，经0.45iim聚醚砜滤芯过滤，滤液即为水相。取10.0Kg榄香烯，30Kg注射用大豆油，30Kg德国Lipoid公司生产的注射级大豆卵磷脂S100，放置于油相罐内，抽真空、充氮、搅拌、夹套水浴5(TC加热至完全混合熔融，制成油相。先取占水相总量60%、预热至6rC的水相至剪切罐中，加入油相循环剪切乳化15分钟；加入余下的6rC的水相定容至50万ml，再剪切乳化若干分钟，取样检测含量、pH等负荷规定后，在580MPa的高压均质机中于63t:乳化3遍；取样检测粒度，粒径《1Pm的粒子数目大于90^，检验符合要求后，经3iim聚四氟乙烯滤膜过滤，灌封于安瓿中，充氮、封口，用旋转式灭菌器在114t:湿热灭菌40分钟，即得榄香烯注射液，F。值为8.0分钟。实施例8:除了湿热灭菌的条件为116t:灭菌30分钟之外，其余操作均同实施例7，制备榄香烯注射液，其F。值为9.48分钟。实施例9:除了湿热灭菌的条件为12rC灭菌15分钟之外，其余操作均同实施例7，制备榄香烯注射液，其F。值为15分钟。实施例19中所用的榄香烯的指纹图谱与榄香烯标准指纹图谱的相似度均不低于O.995，且实施例19中制得的榄香烯注射液与榄香烯注射液标准指纹图谱的相似度均不低于O.995。—、本发明制备的榄香烯注射液的检测结果对实施例1、实施例4和实施例7制备的榄香烯注射液进行检测，其检测结果如表l所示表1<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>二、稳定性试验对实施例1至实施例9制备的注射液进行影响因素为光照、4(TC、6(rC、7(rC的加速实验，实验结果光照条件下放置10天、4(TC恒温放置6个月、6(TC、7(TC各恒温放置至3个月后，均未出现破乳现象，溶血检测呈阴性，性状、乳粒粒径、pH、含量、渗透压等各项指标均符合质量标准。三、以实施例1制备的榄香烯注射液为代表与专利甲的榄香烯乳注射液的特殊安全性比较试验，前后两者的浓度及规格相当。1、试验依据《中华人民共和国药典》一部附录XVIIIB中药注射剂安全性检查法应用指导原则。2、试验对象本发明制备的榄香烯注射液(简称本配方)和其去掉活性成分榄香烯的空白注射液(简称本配方空白液)，与专利甲制备的榄香烯乳注射液(简称甲配方)和其去掉活性成分榄香烯的空白注射液(简称甲配方空白液)。3、特殊安全性实验结果毒性经急性毒性试验测半数致死量(LD5。)，本配方和本配方空白液LD5。均大于40ml/kg，甲配方LD5。为20.9ml/kg，甲配方空白液LD5。为31.3ml/kg;结论本配方小于甲配方，本配方空白液小于甲配方空白液。血管剌激性经血管剌激性试验，本配方肉眼观察对家兔耳静脉无剌激性，病理检查对家兔耳静脉有轻度剌激性；本配方空白液肉眼观察对家兔耳静脉无剌激性，病理检查对家兔耳静脉有中度剌激性；甲配方肉眼观察及病理检查对家兔耳静脉均有中度剌激性；甲配方空白液肉眼观察及病理检查对家兔耳静脉均有中度剌激性；结论甲配方家兔耳静脉血管剌激性大于本配方血管剌激性；甲配方空白液家兔耳静脉血管剌激性大于本配方空白液血管剌激性。降压试验经降压试验，本配方和本配方空白液两者与磷酸组胺对照品比较dt所致的反应值均小于ds反应值的一半；甲配方与磷酸组胺对照品比较dt所致的反应值均小于ds反应值；甲配方空白液与磷酸组胺对照品比较dt所致的反应值均大于ds反应值；结论本配方降压幅度小于甲配方，本配方空白液降压幅度小于甲配方空白液。过敏反应均无过敏反应。四、本发明的榄香烯注射液与专利甲的榄香烯乳注射液的药理试验结果进行比较取本发明实施例1制备的榄香烯注射液，研究其对裸小鼠SGC-7901胃癌的实验治疗作用。从60只预先接种SGC-7901裸小鼠中选择肿瘤生长较一致的47只裸小鼠随机分成6组。1)溶剂对照组注射未添加榄香烯的空白溶剂(即空白乳剂)，12只；2)实施例l-100mg/kg组，6只；3)实施例l-50mg/kg组，6只；4)实施例l_25mg/kg组，6只；5)专利甲-50mg/kg组，6只；6)Taxol(注射用紫杉醇，百时美施贵宝公司产品)10mg/kg组，6只。溶剂对照组每日静脉注射空白乳剂，榄香烯各给药组小鼠每日给予相应剂量的药液；Taxol组分别于第1天、第3天、第5天、第7天、第9天、第11天、第13天、第16天、第18天尾静脉给药共9次，第20天结束实验。各实验组裸小鼠体重在药物治疗前后均无显著降低，并且无动物死亡。溶剂对照组相对瘤体积(RTV)为11.1，专利甲-50mg/kg组RTV值为7.6，相应的相对肿瘤增值率(T/C)为68.8%，本发明实施例l-100mg/kg组、实施例l-50mg/kg组和实施例l-25mg/kg组的RTV值分别为5.1、6.6和6.5，相应的相对肿瘤增值率(T/C)分别为46.1%、59.1%和58.6%。而阳性对照Taxol10mg/kg组RTV值为1.7，相应的相对肿瘤增值率(T/C)为14.9%，具体见表2。20天后剖杀取瘤块称重，专利甲-5011^/1^组人非小细胞肺胃癌SGC-7901裸小鼠移植瘤平均重量为0.52±0.10g，其抑瘤率为36.6%。本发明实施例l-100mg/kg组、实施例l-50mg/kg组和实施例l-25mg/kg组的裸小鼠移植瘤平均重量分别为0.41±0.10g、0.54±0.10g、0.56士0.17g，相对应的肿瘤抑瘤率分别为50.0%、34.1%、31.7%。Taxol10mg/kg组移植瘤重量为0.13±0.06g，相对应的肿瘤抑瘤率为84.1%，具体见表3。表2榄香烯注射液对人胃癌SGC-7901裸小鼠移植瘤的实验效果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表2中，dl表示给药第1天，d24表示给药第24天。与同一天的溶剂对照组相比承表示P<0.01，***表示P<0.0001。表3榄香烯注射液对人胃癌SGC-7901裸小鼠移植瘤肿瘤重量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表3中，与同一天的溶剂对照组相比^表示P<0.01。取本发明实施例4制备的榄香烯注射液，研究其对裸小鼠CHP126原位脑癌的实验治疗作用。将原位接种CHP126神经母细胞瘤的裸鼠随机分为溶剂对照组、专利甲_50mg/kgg组、实施例4-25mg/kg组、实施例4-50mg/kg组和实施例4-100mg/kg组，以及Taxol30mg/kg组。溶剂对照组每日静脉注射空白乳剂，榄香烯各给药组小鼠每日给予相应剂量的药液，Taxol组分别于第1天、第3天、第5天、第8天、第10天、第12天、第15天尾静脉给药共10次，第17天结束实验。实验结束后取裸鼠脑部在荧光体视显微镜下观察，采用ImageProPlus6.0软件测定荧光面积和荧光强度，计算荧光相对面积。各实验组裸小鼠体重在药物治疗前后均无显著降低，并无动物死亡。溶剂对照组荧光相对面积(F/B)为0.56±0.22，专利甲-50mg/kg组为0.35±0.15，实施例4-25mg/kg组、实施例4-50mg/kg组和实施例4-100mg/kg组分别为0.43±0.17、0.34±0.16和0.27±0.15。而阳性对照Taxol10mg/kg组为0.08±0.02，具体见表4。并进一步分析各实验组荧光强度，溶剂对照组66.2±22.3(a.u.)，榄香烯注射液专利甲-50mg/kg组为44.0±23.6(a.u.)，实施例4_25mg/kg组、实施例4-50mg/kg组和实施例4-100mg/kg组分别为46.3±19.4(a.u.)、42.2±17.3(a.u.)和39.2±21.4(a.u.)。而阳性对照Taxol10mg/kg组为7.3±3.0(a.u.)，具体见表5。表4.榄香烯注射液对原位人神经母细胞瘤CHP126肿瘤荧光相对面积的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表4中，与同一天的溶剂对照组相比Z表示P<0.05，^表示P<0.001。表5榄香烯注射液对原位人神经母细胞瘤CHP126肿瘤荧光强度的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表5中，与同一天的溶剂对照组相比*表示P<0.01，***表示P<0.001。取本发明实施例7制备的榄香烯注射液，研究其对裸小鼠U87MG脑癌的实验治疗作用。从60只预先接种U87MG裸小鼠中选择肿瘤生长较一致的32只裸小鼠随机分成5组。1)溶剂对照组(榄香烯空白乳)，8只；2)实施例7-120mg/kg组，6只；3)实施例7-60mg/kg组，6只；4)实施例7-30mg/kg组，6只；5)专利甲-60mg/kg组，6只。溶剂对照组每日静脉注射空白乳剂，榄香烯各给药组小鼠每日给予相应剂量的药液，连续给药16天，于第17天处死裸小鼠。各组裸小鼠实验期间体重均无显著性变化。溶剂对照组相对瘤体积(RTV)为46.7，实施例7-120mg/kg、实施例7-60mg/kg、实施例7-30mg/kg组RTV值分别为25.0、28.5和24.2，相应的相对肿瘤增值率(T/C)分别为53.6%，60.7%及51.9%。专利甲-60mg/kg组RTV值为24.4，相对肿瘤增值率(T/C)为52.4%，具体见表6。给药16天后剖杀取瘤块称重，实施例7-120mg/kg、实施例7-60mg/kg、实施例7-30mg/kg组人脑癌裸小鼠移植瘤平均重量分别为1.18±0.10g、1.26±0.06g和1.14±0.09g，其抑瘤率分别为38.4%，34.2%，及40.6%，而专利甲-60mg/kg组小鼠移植瘤平均重量为1.29±0.15g，抑瘤率为32.8%，具体见表7。表6.榄香烯注射剂对人脑癌U87MG裸小鼠移植瘤的实验治疗作用G±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表6中，dl表示给药第l天，dl6表示给药第16天。与同一天的溶剂对照组相比***表示P<0.001。表7榄香烯注射剂对人脑癌U87MG裸小鼠移植瘤肿瘤重量的影响G±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表7中，与同一天的溶剂对照组相比广表示P<O.Ol，微P<0.001。取本发明实施例3制备的榄香烯注射液，研究其对荷A549肺癌裸小鼠的实验治疗作用。从60只预先接种A549裸小鼠中选择肿瘤生长较一致的43只裸小鼠随机分成6组。分别为1)溶剂对照组(榄香烯空白乳)，8只；2)实施例3-120mg/kg组，7只；3)实施例3-60mg/kg组，7只；4)实施例3-30mg/kg组，7只；5)专利甲_60mg/kg组，7只；6)Taxol10mg/kg组，7只。溶剂对照组每日静脉注射空白乳剂，榄香烯各给药组小鼠每日给予相应剂量的药液，连续给药33天；Taxol组(给药前用生理盐水稀释)腹腔注射lmg/ml的Taxol溶液0.lml/10g，每周给药两到三次，于第34天处死裸小鼠。溶剂对照组裸小鼠实验期间体重保持增长，实施例3各剂量组、专利甲组及Taxol组裸小鼠体重均出现不同程度下降。溶剂对照组相对瘤体积(RTV)为16.9，实施例3-120mg/kg组、实施例3-60mg/kg组、实施例3-30mg/kg组RTV值分别为7.8、9.0和11.2，相应的相对肿瘤增值率(T/C)分别为46.1%、53.2%及66.3%。专利甲60mg/kg组及Taxol10mg/kg组RTV值为9.9及7.9，相对肿瘤增值率(T/C)为59.0%及46.9%，具体见表8。给药33天后剖杀取瘤块称重，实施例3-120mg/kg组、实施例3-60mg/kg组、实施例3-30mg/kg组人肺癌裸小鼠移植瘤平均重量分别为0.25±0.04g、0.30±0.06g和0.34±0.06g，其抑瘤率分别为44.8%、33.4%及24.2%，而专利甲-60mg/kg组及Taxol10mg/kg组小鼠移植瘤平均重量为0.29±0.05g和0.25±0.06g，抑瘤率为35.3%及43.4%，具体见表9。实施例3-60mg/kg与专利甲-60mg/kg的抑瘤效果相近。表8榄香烯注射液对人肺癌A549裸小鼠移植瘤的实验治疗作用(；±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表8中，dl表示给药第1天，d34表示给药第34天。与同一天的溶剂对照组相比承表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001。表9榄香烯注射液对人肺癌A549裸小鼠移植瘤肿瘤重量的影响G±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表9中，与同一天的溶剂对照组相比Z表示P<0.05，"表示P<0.001。结论本发明榄香烯注射液对小鼠人A549肺癌、人SGC胃癌、人CHP126神经母细胞瘤原位移植瘤及人U87MG脑癌均有实验治疗作用，与专利甲的榄香烯乳注射液在同等剂量下的抑瘤作用无显著性差异，其中对人CHP126神经母细胞瘤原位移植瘤的抗肿瘤活性本专利略好于专利甲。权利要求一种榄香烯注射液，以注射液的总体积1L计，由下列原料药和药用辅料组成榄香烯5g～20g、注射用大豆卵磷脂15g～60g、注射用油5g～99.9g、注射用甘油12g～30g，余量为磷酸盐缓冲液。2.如权利要求1所述的榄香烯注射液，其特征在于所述的注射用大豆卵磷脂中溶血磷脂酰胆碱的重量百分含量小于3.0%。3.如权利要求2所述的榄香烯注射液，其特征在于所述的注射用大豆卵磷脂为德国Lipoid公司生产的大豆卵磷脂系列。4.如权利要求l所述的榄香烯注射液，其特征在于所述的注射用油为注射用大豆油、注射用红花油、注射用紫苏油或注射用棕榈油中的一种。5.如权利要求1所述的榄香烯注射液，其特征在于所述的榄香烯是从由浙江省温州地区温莪术的干燥根茎经水蒸汽蒸馏获得的莪术油中提取的；所述的莪术油的指纹图谱与莪术油标准指纹图谱进行对照，相似度不得低于0.95;所述的莪术油标准指纹图谱采用气相色谱法记录117分钟，标准指纹图谱应有19个特征峰，以e-榄香烯色谱峰的保留时间为1计算相对保留时间，所述19个特征峰的相对保留时间依次为0.2857,0.3011,0.3428,0.4819,0.5649,0.5904,0.6394,0.6745，0.9073,0.9861，1，1.0453，1.0640，1.0723，1.1074，1.1629，1.1726，1.3455，1.5062;以P_榄香烯色谱峰的峰面积为1计算相对峰面积，所述19个特征峰的相对峰面积依次为0.1216±0.OIOO，O.2198±0.0170,0.0572±0.0042,0.2693±0.0240,0.4973±0.0308，0.1953±0.0144,0.0416±0.0031,0.0823±0.0057,0.1545±0.0011,0.0335±0.00005，1.0000，0.1873±0.0060，0.0205±0.0006，0.0653±0.0023，0.1096±0.0051，0.3731±0.0084,0.0905±0.0077,0.5639±0.0216,0.2406±0.0617。6.如权利要求1所述的榄香烯注射液，其特征在于所述的榄香烯的指纹图谱与榄香烯标准指纹图谱进行对照，相似度不得低于0.995;所述的榄香烯标准指纹图谱采用气相色谱法记录47分钟，标准指纹图谱应有6个特征峰，以e-榄香烯色谱峰的保留时间为1计算相对保留时间，所述6个特征峰的相对保留时间依次为0.9061,0.9851，1，1.0439，1.0623，1.0709;以P_榄香烯色谱峰的峰面积为1计算相对峰面积，所述6个特征峰的相对峰面积依次为0.0297±0.0131，0.0392±0.0049，1.OOOO，O.1153±0.0214,0.0155±0.0109,0.0530±0.0320。7.如权利要求1所述的榄香烯注射液，其特征在于所述的榄香烯注射液的指纹图谱与榄香烯注射液标准指纹图谱进行对照，相似度不得低于0.995;所述的榄香烯注射液标准指纹图谱采用气相色谱法记录47分钟，标准指纹图谱应有6个特征峰，以e-榄香烯色谱峰的保留时间为l计算相对保留时间，所述6个特征峰的相对保留时间依次为0.9063,0.9853，1.0000，1.0440，1.0625，1.0710;以P-榄香烯色谱峰的峰面积为1计算相对峰面积，所述6个特征峰的相对峰面积依次为0.0300±0.0134，0.0395±0.0049，1.OOOO，O.1141±0.0208,0.0154±0.0108,0.0493±0.0301。8.如权利要求1至7任一项所述的榄香烯注射液的制备方法，包括步骤(1)取药用磷酸氢二钠和药用磷酸二氢钠，加注射用水溶解后再加入注射用甘油，搅拌均匀，用注射用水定容，配制pH值为6.56.8、磷酸盐浓度为0.01mol/L的磷酸盐缓冲液_甘油溶液，过滤后滤液即为水相；(2)在惰性气体保护下将榄香烯、注射用大豆卵磷脂、注射用油混合均匀，于温度《95t:的夹套水浴中加热至完全熔融，制成油相；(3)在惰性气体保护下，将上述油相乳化后加入占水相总重量50%90%、预热至40°C80°C的水相中，循环乳化10分钟60分钟后，加入余下的40°C80°C的水相定容，在40°C8(TC乳化后于90MPa620MPa的高压中均质直至粒径《1Pm的粒子数目大于90%，经过滤，滤液经湿热灭菌至F。值为8分钟15分钟后即得榄香烯注射液。9.如权利要求8所述的榄香烯注射液的制备方法，其特征在于步骤(3)中，所述的湿热灭菌条件选自114。C湿热灭菌40分钟、116。C湿热灭菌30分钟、117。C湿热灭菌25分钟或12rC湿热灭菌15分钟中的任意一种。全文摘要本发明公开了一种榄香烯注射液，以注射液的总体积1L计，由下列原料组成榄香烯5g～20g、注射用大豆卵磷脂15g～60g、注射用油5g～99.9g、注射用甘油12g～30g，余量为磷酸盐缓冲液。本发明还公开了该榄香烯注射液的制备方法。通过控制辅料大豆卵磷脂中的溶血磷脂含量、关键的制备工艺条件制备一种无溶血作用、无血管刺激性、灭菌后无微生物存活风险、适于静脉注射或动脉介入的载药乳剂剂型的、安全有效的抗癌药榄香烯注射液。文档编号A61K9/107GK101708161SQ20091015501公开日2010年5月19日申请日期2009年12月10日优先权日2009年12月10日发明者李影,谢恬申请人:大连华立金港药业有限公司