哺乳动物细胞因子受体亚单位蛋白、相关试剂及方法

专利名称：哺乳动物细胞因子受体亚单位蛋白、相关试剂及方法
技术领域：
本发明涉及影响哺乳动物生理(包括免疫系统功能)的组合物及 方法。本发明特别涉及调节发育和/或免疫系统的方法。还公开了所 述物质的诊断及治疗用途。
背景技术：
重组DNA技术一般是指将供体来源的遗传信息整合入载体， 然后例如导入宿主，因此所转移的遗传信息在新的环境中拷贝和/ 或表达。 一般来说，遗传信息以编码需要蛋白产物的信使 RNA( mRNA)产生的互补DNA (cDNA)形式存在。载体通常为一种 质粒，能够导入cDNA,然后在宿主中复制，在某些情况下，实际 上是控制cDNA表达，由此控制编码产物在宿主中合成。参见例如 Sambrook等，(1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual,(第二 版)，第l-3巻，CSH Press, NY。
一段时间以来，人们知道，哺乳动物免疫反应的基础是一系列 的复杂细胞相互作用，称之为"免疫网络"。最新研究对该网络的 内部作用机制获得了新的认识。尽管实际上许多免疫反应均涉及淋 巴细胞、巨噬细胞、粒细胞和其它细胞的网络样相互作用，但是免 疫学者目前普遍认为，称为淋巴因子、细胞因子或单核细胞因子的
可溶性蛋白在控制上述细胞相互作用中起重要作用。因此，细胞调 节因子的分离、鉴定和作用机制非常引人注目，对它们的了解可使 得众多医学上的异常例如免疫系统疾病的诊断和治疗获得显著改善。
显而易见的是，淋巴因子以多种方式介导细胞活动。参见例如
liPaul(主编,1996) Fundamental Immunology, 第三版，Raven Press, New York; Thomson(主编，1994) The Cytokine Handbook,第二版， Academic Press, San Diego。已经证实，它们促进多能造血干细胞增 殖、生长和/或分化为数量巨大的祖细胞，包括构成复杂免疫系统的 各种细胞谱系。细胞组分之间的正常平衡的相互作用是健康免疫系 统所必需的。当淋巴因子与其它药物一起给予时，常常不同细胞i普 系的反应不同。
免疫反应特别重要的细胞谱系包括两类淋巴细胞B细月包和各 种亚型的T细胞，B细胞产生和分泌免疫球蛋白(免疫球蛋白能够识 别并结合外源物质，以便消除外源物质)，T细胞分泌淋巴因子并诱 导或抑制B细胞以及构成免疫网络的各种其它细胞(包括其它T细 胞)。所述淋巴细胞与许多其它细胞类型相互作用。
一般不能在体外维持免疫系统细胞，这阻碍了目的在于更好地 了解和治疗各种免疫疾病的研究。免疫学者发现，通过应用包含各 种生长因子(包括许多淋巴因子)的T细胞上清液和其它细胞上清液 可对许多上述细胞进行培养。
存在调节形态发育的各种生长调节因子。已知许多细胞因子受 体。功能受体通常存在至少两个重要亚单位。参见例如Heinrich等， (1998) Biochem. J. 334:297-314; Gonda和D，Andrea (1997) Blood 89:355-369; Presky 等，(1996) Proc. Nat，l Acad. Sci. USA 93:14002-14007; Drachman和Kaushansky (1995) C亂Opin. Hematol. 2:22-28; Theze (1994) Eur. Cytokine Netw. 5:353-368; Lemmon和 Schlessinger (1994) Trends Biochem. Sci. 19:459-463。
如上所述，显而易见的是，对于直4妻或间^接涉及例如免疫系统 和/或造血细胞的发育、分化或功能的各种变性性病症或异常病症而 言，发现和研制新的可溶性蛋白及其受体，包括类似于淋巴因子的 可溶性蛋白及其受体，应该可以获得新的治疗方法。具体来说，发 现和了解增强其它淋巴因子有益作用的淋巴样分子的新型受体，应该是非常有益的。本发明提供与细胞因子样组合物和相关化合物相 似的配体的新型受体及其使用方法。
发明概述
本发明涉及与细胞因子受体有关的新型受体及其生物活性，例
如灵长类细胞因子受体样分子结构，称为DNAX细胞因子受体亚单 位(DCRS)。具体来说，本发明说明称为DCRS5的一种亚单位。本 发明包括编码所述多肽本身的核酸及其生产和使用方法。本发明核 酸的特征部分在于其与本文公开的克隆互补DNA (cDNA)序列同 源。此外，本发明提供匹配的p40/IL-B30配体与受体亚单位DCRS5 和IL-12Rf31,所述受体配体对使得可以了解其直接涉及反应物为基 础的激动剂和拮抗剂的使用适应症。
本发明提供大致纯多肽或重组多肽，该多肽包含SEQ ID NO: 2细胞内部分的至少IO个连续氨基酸。在某些实施方案中，所述多 肽包含SEQIDNO: 2细胞内部分的至少25个连续氨基酸；为重 组多肽，它包含SEQIDNO: 2细胞内部分；还包含SEQIDNO: 2 非细胞内部分的至少10个连续氨基酸；包含SEQ ID NO: 2纟田胞夕卜 部分的至少25个氨基酸；包含成熟SEQIDNO: 2;或者为大致纯 天然多肽。在其它实施方案中，所述重组多肽由表l的成熟序列 组成；为非糖基化多肽；为来自人类的多肽；包含SEQ ID NO: 2 的至少40个连续氨基酸；具有SEQ ID NO: 2的至少3个非重叠区 段，每个区段至少15个连续氨基酸；为SEQ ID NO: 2的天然多态 性变异体；其长度为至少约30个氨基酸；具有至少2个非重叠表位， 其为灵长类DCRS5特异性表位；其分子量至少为30kD，天然糖基 化；为合成多肽；为无菌形式；为水性溶液或緩沖溶液；其附着在 固体支持物上；其与另一个化学部分缀合；或者与IL-12Rpi多肽物 理性締合。
本发明其它实施方案提供包含SEQIDNO: 2细胞内部分至
13少2个不同非重叠区段的大致纯多肽或重组多肽，每个区段至少6 个连续氨基酸；包含SEQIDNO: 2细胞内部分至少12个连续氨基 酸的大致纯多肽或重组多肽；或者包含成熟SEQ ID NO: 2的大致 纯天然序列多肽。在具体形式中，包含SEQ ID NO: 2细胞内部分 至少2个不同非重叠区段(每个区段至少6个连续氨基酸)的多肽中， 所述不同非重叠区段 一个区段包含至少12个氨基酸； 一个包含至 少7个氨基酸的区段，以及第二个至少9个氨基酸的区段；包含第 三个至少6个氨基酸的不同区段；或者包含以下其中之一 R355画L373 、 P378-L405 、 V407-D426 、 K428-D439、 P441-V452、 I454-G460、 I465-T587或N592-606;或者所述多肽还包含SEQ ID NO: 2细胞外部分的至少2个不同非重叠区段，每个区段至少6个 连续氨基酸。或者，包含SEQIDNO: 2细胞内的至少12个连续氨 基酸的多肽中，所述至少12个连续氨基酸区段包含以下其中之一 R355-L373、 P378-L405、 V407-D426、 K428-D439、 P441画V452、 I454-G460、 I465-T587或N592-606;或者所述多肽还包含SEQ ID NO: 2细胞外部分的至少6个连续氨基酸的至少2个不同非重叠区 段。或者，包含成熟SEQIDNO: 2的纯化天然序列多肽还可包含 纯化或4企测表位。所述多肽可以由表1成熟序列组成；为非糖基 化多肽；来自人类；包含SEQIDNO: 2的至少40个连续氨基酸； 具有SEQIDNO: 2的至少3个非重叠区段，每个区段至少15个连 续氨基酸；为SEQIDNO: 2的天然多态性变异体；长度至少约30 个氨基酸；具有至少2个灵长类DCRS5特异性非重叠表位；分子量 至少30kD(天然糖基化)；为合成多肽；为无菌形式；为水性溶液或 緩沖溶液；与固体支持物连接；与另一个化学部分缀合；或者与 IL-12卩1多肽物理性締合。
提供各种其它组合物，例如其包含与IL-12pi蛋白混合的大 致纯多肽；或在载体中包含所述多肽，其中所述载体为水性化合 物，包括水、盐水和/或緩沖剂；和/或配制用于口服、直肠、鼻、局
14部、或胃肠外给药。
提供试剂盒，其包含所述多肽以及包含所述多肽的区室；包 含IL-12pi多肽的区室；包含p40、 IL-B30或p40/IL-B30多肽的区 室；或者试剂盒试剂的使用或处理说明书。
提供特异性结合DCRS5的细胞内部分的抗体和其它结合化合 物，例如包含抗体的抗原结合位点，其中所述结合化合物装在一 个容器中；所述多肽来自人类；所述结合化合物为Fv、 Fab或Fab2 片段；所述结合化合物与另一个化学部分缀合；或者所述抗体针 对表1成熟多肽的肽序列；针对成熟DCRS5;针对纯化的人DCRS5; 为免疫选择性的；为多克隆抗体；结合变性DCRS5;对抗原的Kd 至少为30与固体支持物连接，包括珠子或塑料膜；为无菌组 合物；或进行可检测性标记，包括放射性标记或荧光标记。还提供 包含所述结合化合物的试剂盒包含所述结合化合物的区室；包含 p40多肽、IL-B30多肽、DCRS5多肽和/或IL-12R(31多肽的区室； 包含选择性结合以下物质的抗体的区室p40多肽、IL-B30多肽、 DCRS5多肽和/或IL-12Rpl多肽；或者试剂盒试剂的使用或处理说 明书。
还提供生产抗原抗体复合物的方法，该方法包括在合适条件 下使灵长类DCRS5多肽与抗体接触，由此形成所述复合物。所述方 法可以从其它细胞因子受体纯化所述复合物；从其它抗体纯化所 述复合物；所述接触为与包含干扰素的样品接触；所述接触允许定 量^r测所述抗原；所述接触与包含所述抗体的样品接触；或者所述 接触允许定量检测所述抗体。提供其它组合物，例如包含以下组分 的组合物无菌结合化合物或所述结合化合物和载体，其中所述载 体为水性化合物，包括水、盐水和/或缓沖液；和/或配制用于口服、 直肠、鼻、局部或胃肠外给药。
本发明还提供编码DCRS5多肽的分离或重组核酸，其中 DCRS5来自人类；或者所述核酸编码表l的抗原肽序列；编码表1的多个抗原肽序列；至少有13个核苷酸与编码所述区段的天然 cDNA相同；为表达载体；还包含复制起点；来自天然来源；包含 可检测标记；包含合成核苷酸序列；小于6kb,优选小于3 kb;来 自灵长类；包含天然全长编码序列；为编码DCRS5的基因的杂交探 针；或者为PCR引物、PCR产物或突变引物。提供包含所述重组核 酸的细胞，包括其中所述细胞为原核细胞；真核细胞；细菌细胞； 酵母细胞；昆虫细胞；哺乳动物细胞；小鼠细胞；灵长类细胞；或 人类细月包。
试剂盒实施方案包括所述核酸和包含所述核酸的区室；包含 编码以下组分的核酸的区室p40多肽、IL-B30多肽、DCRS5多肽、 和/或IL-12Rpi多肽；包含以下组分的区室p40多肽、IL-B30多 肽、DCRS5多肽、和/或IL-12R(31多肽；包含选择性结合以下组分 的抗体的区室p40多肽、IL-B30多肽、DCRS5多肽、和/或IL-12R卩1 多肽；试剂盒试剂使用或处理的说明书。
其它核酸实施方案包括在30分钟、30。C和2M以下盐的洗 涤条件下与SEQ ID NO: 1编码细胞内部分的部分杂交；在至少约 30个核苷酸区段上与灵长类DCRS5的细胞内部分相同。优选所述 核酸为这样的核酸，其中所述洗涤条件为45"和/或500 mM盐； 或55。C和/或150mM盐；或者所述区^R为至少55个或75个核苷酸。
治疗应用包括调节细胞生理或发育的方法，该方法包括使所述 细胞接触p40/IL-B30的拮抗剂，所述拮抗剂是包含以下组份的复 合物灵长类DCRS5的细胞外部分和/或灵长类IL-12Rpi细胞外部 分；p40/IL-B30的拮抗剂，为结合包含灵长类DCRS5和/或灵长类 IL-12Rpi的复合物的抗体；p40/IL-B30的拮抗剂，为结合DCRS5 的抗体；p40/IL-B30的拮抗剂，为抗IL-12Rf31的抗体；p40/IL-B30 的拮抗剂，为DCRS5或IL-4R(31的反义核酸；或p40/IL-B30的激 动剂，为结合包含灵长类DCRS5和/或灵长类IL-12Rpl的复合物的 抗体。在一种类型的方法中，所述接触为与拮抗剂接触，而且所述接触为与IL-12、 IL-18、 TNF和/或IFNy的拮抗剂混合；或者所述细 胞来自这样的宿主，所述宿主表现出慢性TH1介导性疾病的体征 或症状；表现出多发性硬化、类风湿性关节炎、骨关节炎、炎症性 肠病、糖尿病、牛皮癣或脓毒病的症状或体征；或者接受同种异体 移植。相反，所述方法可与激动剂接触，而且所述接触与IL-12、 IL-18、 TNF或IFNy混合；或者所述细胞来自这样的宿主表现出 慢性Th2型反应的体征或症状；存在胂瘤、病毒生长或真菌生长； 接受疫苗；存在变态反应。
优选实施方案详述
大纲
I. 总论
II. 活性
III. 核酸
A. 编码片段、序列、探针
B. 突变、嵌合体、融合体
C. 制备核酸
D. 细胞包含的载体
IV. 蛋白质、肽
A. 片段、序列、免疫原、抗原
B. 突变蛋白
C. 激动剂/拮抗剂、功能等同物
D. 制备蛋白
V. 制备核酸、蛋白
A. 合成
B. 重组
C. 天然来源
VI. 抗体
17A. 多克隆抗体
B. 单克隆抗体
C. 片段；Kd
D. 抗同种型抗体
E. 杂交瘤细月包系
VII. 试剂盒、诊断及定量检测
A. ELISA
B. 检测编码的mRNA
C. 定量/定性
D. 试剂盒
VIII. 治疗组合物、方法
A. 组合组合物
B. 单位剂量
C. 使用方法
IX. 筛选
I.总论
本发明提供哺乳动物(本文为灵长类)细胞因子受体样亚单位分 子的氨基酸序列和DNA序列，所述细胞因子受体样亚单位分子称 为DNAX细胞因子受体亚单位5(DCRS5)，其具有特别定义的结构 及生物特性。编码上述分子的各种cDNA得自灵长类(例如人 类)cDNA序列文库。其它灵长类或其它哺乳动物的相应物质也是所 要求的。
此外，本发明提供匹配的p40/IL-B30和受体亚单位DCRS5和 IL-12RP1,所述配对可了解基于其涉及试剂的激动剂和拮抗剂的应 用适应症。
某些适用的标准方法可参见例如Maniatis等(1982) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Press; Sambrook 等(1989) Molecular Cloning: ALaboratory Manual,(第二版)，第13巻，CSH Press, NY; Ausubel等， Biology, Greene Publishing Associates, Brooklyn, NY; 或Ausubel等 (1987 和定期增刊)Current Protocols in Molecular Biology, Greene/Wiley, New York;各参考文献通过引用结合到本文中。
灵长类(例如人类)的DCRS5的编码区段的核苷酸序列(SEQ ID NO: l)及相应氨基酸序列(SEQIDNO: 2)见表1。标示出了预期的 信号序列，但是所述信号序列可能取决于细胞类型，或者可能为任 一方向的数个残基。潜在的N糖基化位点为天冬酰胺残基6、 24、 58、 118、 157、 209和250。 二石》建可能存在于位置29和78的半胱 氨酸之间；保守的C—CXW基元存在于位置110/121/123。位置219 的色氨酸以及281-285的WxxWS基元是值得注意的。约1-101区段 为Ig结构域；约102-195为细胞因子结合结构域1;约196-297为 细胞因子结合结构域2;约298-330为接头；约329-354为跨膜区段； 约356-606为细胞内结构域。细胞内特征包括Y374-1377、Y461-Q464 和Y588-Q591的推定SH2结合位点；潜在重要的406、 427、 440 和453酪氨酸残基。这些位点和边界是值得注意的。
ORF包含推定的信号序列，如上所述，预期信号序列 于...(3 10/01丁...切割。预期的328个氨基酸的细胞外结构域之后为 推定的跨膜区段，最后为约252个氨基酸的胞质结构域。
表2提供反向翻译的核酸序列。表1: DNAX细胞因子受体亚单位样实施方案(DCRS5)的核苷 酸及多肽序列。灵长类，例如人类实施方案(见SEQ ID NO: 1和 2)。标示出了预期的信号序列，但是可能在几个位置有变化而且取 决于细胞类型。鉴定的变异位置变异为核苷酸127和563;为配对 的G和C(翻译为Q和G组合)或者T和A(翻译为H和R)。
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MN (p/H) VTIOWDAVIALYIIjFSWCHGGITNINCSGHIWVEPATIFKMGMNISIYCOAAIKMCOPRKLHF YKNGIKERFQITRINKTTARLWYKNFIjEPHASMyCTAECPKHFQETLICGKDISSGYPPDIPDEVTCVIY EYSGNMTCTWNA (G/R) KLTYIDTKYWHVKSLETEEEQQYLTSSYINISTDSLQGGKKyLVWVQAANAL G旭ESKQIiQIHriDDIV工PSAAVTSRAET工NATVPKT工I飾SQTTIEKVSCEMRYKATTNfQTWNVKEPDT NFTYVQQSEFYLEPN工lOfVFQVRCQETGKRYWQPWSSPFFHKrPETVPQVTSKAFQHDTWNSGI/rVASIS TOHLTSDMRGDIGLIiLGMIVFAVMLSIIiSLIGIFmSFRTGIKRRILLLIPKWLygPJPMMKNSNVVKML QENSELMNNNSSEQVLYVDPMITEIKBIFIPEHKPTDYKKBNTGPLETRDYPQUSIiFDNTTVVYIPDLNT GjrXPOISNPLPEGfSHLSNNNEITSLTLKPPVDSLDSGNNPRLQKHPNPAFSVSSVNSIjSNTIFLGELSIiI IiNQGECSSPDIQNSVEEETTMLLKNDSPSETIPEQTLLPDEFVSCIiGIVNEEliPSINTyFPCNILESHFN RISIiIjEK表2:反向翻译的灵长类(例如人类)DCRS5(SEQIDNO: 3):
ATC3AAYCAYGTNACNATHCARTGC3GAYGaroTNATHGCNYTNTAYATHYTNTTyWSNTGGTGYCAYGGNGGNAT HACNAAYATHAAYT(3YWSNGGlTCAYATHTGGGTNGARCCHGCNACNATHTTYAAIiATCGGNATOAAYATHWSlIA THTAYTGYCAR(3CN(3CNATHAARAAYTGYCARCCNM咖AARYTNCAYTTyTAYAABAAYGGNATHAARGARM(aJ TxyCARAXHACHMGNATHftAYAARACNACNGCHMGKYTHTGGTAyAARAAYTTyYTNGAECCNCAYGCNWSNAT GTAyTGYACNGCNGARTGYCCNAARCAYTTYCARGARACNYTNATHTGyGGNAAR(3AYATHWSNWSira(3NTAYC
MQHAARYTNACNTAYATHGAYACNAARTAYGTKGTNCMfGTNAARWSNYTKGARACNGARGARGARCARCARTA YYTKAQIWSNWSNTMATHRAYATHWSNACNGAYWSNyTNCARGGNGGNAARAARTAYYTNGTNTOGGTNCARG CNGCNAAYGCNYrM加KATGGARGARWSNAARCARYTNCARATHCAYyTKGAYGAYATHGTNATHCCNWSNGCN GCNGTNATHWS鹏OI(3CNaASACNATHAATOCNACNGTNCCNAARAaiATHATHTAYTGGGAyWSWCARACNAC NATHOARAARGTNWSNTOyOARATOMCaiTAYAARGCNACNACKAAYCARACNTGGAAYGTNAARGARTTYGAYA CKAAYTTYACNTAYGTNCARCARWSiraARTTYTAYYTNGARCaiAAYATHAARTAYGTNTTYCARGTNMGKTGy CARGARACNGONAARMGNTAYIGGCARCCNTGGWS丽SNCCNrmTYCAYAARACNCCNGARACNGTNCCKCA RGTNACNWSlTAARGCNTTyCARCAYGAYACNTGGAAYWSNGGNyTNACNGTNGCNWSNATHWSNACNGCarcAYy TKAC丽SNQAyAAYMGNC3QN(3AyATHGGNYTNYTNYTNGGNATGATHGTNTTYGCNGTNATGYTNWSUATHyTN WSNYTNAraGGKATHTTYAAyMGNWSWTTYMGNACiraGNATHAARMGNMGNATHYTNYTNYTNATHCCNAARTG GyTNTAYGARQAYATHCCNAAYATOAARAAyWSNAAYGT加THAARATGYTNCARGARAAYWSNGARYTNATGA AYAAYAAYWSNWSNGARCAR(3XNYTN'TAYGTNGAYCCNATGATHACNGARATHAARGARATHTTYATHCCNGAR CAYAARCCNACKGAyTAYAARAARCJARAAYACNGGNCCNyTNGARACNMGKrGAYTAYCCNCARAAYWSNyTNTT YGAYAAYACMACNGTNGTNTAYATHCCNGAWTNAAYACNGGNTAYAARCCNCARATHWSNAAnTyyTMCCNG ARGG丽SUCAYYTNWSHAAYAAYAAYGARATHAOIWSNYTNACKYTNAARCCNCCNGTHGAYWSNyTiraAYWSN Q咖AAYAAYCCNMaNrraCARAARCAYCCNAAYm"GCNTryWSNGTHWSNWSNGTNAAYWSNYTNWSNAAyAC NATHTTYYTNGI咖GARyTNWSNYTNMHyTNAAyCARGGNGARTGYWSNWSlICCNGAYATHCARAAYWSlIGTira ARGARGARACNACNATGYT TYTNGARAAYGAyWSNCCNWSNGARACNATHCCNGRRCASACNYTNYTNCCNGAY. GARTTY(3TNWSNT(3YYTNGGNATHGTNAAYGARGARYTNCCNWSNATBaAYACNTArrTYCCNCAKAAyATHyT NGARWSNCAYTTYAAYMGNATHWSNYTNYTNGARAAR
24表3:各种细胞因子受体亚单位对比。人IL-6受体蛋白gpl30 为SEQ ID NO: 4(GenBank M57230);人IL-12受体|32亚单位为 SEQ ID NO: 5(GenBank U64198)。
imllj-12R 2 1 MAHTFRGCSIiAFMF工ITWLLIKAKIDACKRGDVTVKPSHV工LLGS， 48 hugpl3 0 1 MLTIiQTWWQALFIFIiTTESTGEIiliDPCG—YISPESPWQLHSNFT 45
huDCRS5 1 MNHVTIQWDAVIALYILFSWCHGGITlTINCS-GHIWVEPATrFKMGMN工S 49
huIIi-12R 2 43 ITCSIiKPRQGCFHYS，KLIIiYKFDRRINFHHGHSLNSQVTGIj] IjG—— 35 hugpl30 46 AVCVLKEKCMDYFHVNAKYIVWKTNHETIPKEQYTI工NRTASSVTFTDIA 35
huDCRS5 50 IYCQAAIKN-國CQP…RKLHFYKNGIKER-FQITRINKTTARLWYKNFIi' 93
huIL-12R 2 36 —TTLFVCKLAC工WSD-E工QICGAE工FVGVAPEQPQNLSC;rQKGEQGTVA 142 hugpl30 96 SLNIQLTCNIIaTPGQIi-EQNVYG工TIISGIiPPEKl KNLSC工VN-EGKKMR 143
lluDCRSS S4 'EPHASMYCTAECPKHF(3ETLICGKDISSGYPPD工PDEVTCVIYEYSGNMT 143
hU工L-12R 2 143 CrWERGRDTHLYT^!YTIjQIiSGPKNLTWQKQCKD工YCDYriDFGINLTPESP 132
hugpl30 144 CEWDGGRETHLETNFTLKS—BWATHKPADCKMCRDTPTSCTVDYS-TVY 190
huDCRS5 144 CTWNARKLTYIDTIOrVVHVKSLETEEEQQyLTSSYINISTDSLQGG----189
hU工L-12R 2 193 ESUFTAKVTAVNSIi(3SSSSliPSTn;FLDIVRPLPPTOD工R工KFQKASVSRC 242
hugpl30 191 FVNIBVWVBAENALGKVTSDHINFDPVYKVKPNPPHNIiSVIKTSEEIiSSIIi 240
25huDCRS5
190 -KKYJjVWVQAANALGMEESKQIiQIHLDD工VIPSAAV工SRAET工NATVPKT 238
huIIi-12R 2 243 TLiYWRD----即IjVLIiNRLRYRPSNSRIjWNMVN---VTKAKGRHDLIjDLK 2 85
hugpl30 241 KLTWTNPS工KSVI工LKYN工C3YRTKDASTWSQ工PPEDTASTRSSFrVQDLK 290 huDCRS523S工工YWDS--QTT工EK7SCEMKYKATTNQTWNVKEFD—TNFTYVQQSEFYIj2 285
hu工:L-:L2R 2 28S PFTEYEFQISSKLHLYKGSWSrJWSESLRAQTPEEEPTGMLDVWYMKRinD 335 hugpl3 0 291 PFTEYVFRIRCMKEDGKGYWSDWSEEASGITYEDRPSKAPSFWYKIDPSH 34 0 286 PN工KYVFQWCQ-ETGKRYWQPWSSPFFHKTPETVP--------------32 0
huDCRS5
hu工Ij-12R 2 33 6 YS-RQQISIiFWKNLSVSEARGIQIjHYQVTIiQEIiTGGKAMTQNITGHTSWT 3 84 hugpl30 341 TQGyRTVQIiVWKTLPPFEANGKILDYEVT…LTRWICSHIiQNYTVNATKIi 387 huDCRS5321-----QVTSKAFQHDTWNSGLTVASISTG------HLTSDN--RGD工GLIj 357
huIL-12R 2 385 TVIPRTGNWAVAVSAANSKGSSLPTRINIMNLCEAGIiLAPRQVSANSEGM 434 hugpl3 0 388 TVNtiTNDRYIATLTVRNIiVGKSDAAVIiTIP-ACDFQATHPVMDIjKAFPKD 43 6 huDCRS5358 LGMIVFAVMIjSIIjSIj工G工FNRSFRTGIKRR-------------.....— 387
hu工L-12R 2 435 DNILVTWQPPRKDPSAVQEYWEWRELHPG-GDTQVPLNWIjRSRPYNVSA 483
hugpl30437 MMIjWVEWTTPRE---SVKKYILEWCVLS——DKAPCITDWQQEDGTVHRT 480
huDCRS5388 --......--------IIjIjIjIPKWIjYEDIPNMKNSNVVKMIjQEN----se 417
hu工L-12R 2 4 84 L工SENIKSY工CYE工RVYALSGDQ-GGCSSILGNSKHKAPLSGPHINAITE 532 hugpl30 481 YIiRGNIiAESKCYLITVTPVYADGPGSPESIKAYIjKQAPPSKGPTVRTKKV 530 huDCRS5418 LMKTNWSSE---.....QVLYVDP.....MITE工KE工FIPEHKPTDYKKE- 453
hu工L-12R 2 533 EKGSIJJlSWKTSIPVQEQM(3CI/IiHra工YWKERr SNSQPQIiCE工PYRVSQNS 582
hugpl30 531 GKNEAVLEWDQLPVDVQNGFIRNYTIFYRTIIGN----ETAVNVDSSHTE 576
huDCRS5 454 —NTGPtiETRDYP---QNSIjFDUTTWyiPDLNTG------YKPQISN-- 490
, , * ★ ， ， ， *
hu工L-12R 2 583 HPINSIiQPRVTYVLWMTALTAAGESSSGNEREFCIjQGKAN-WMAFVAPSI 531
hu卯130 577 YTIiSSI/TSDTIjyMVRMAAYTDEG-GKDGPEFTFTTPK:FAQG迈工EAIWPV 625
huDCRS5 491----.....——.....一FLPEG---------------------------495
hu工Ij-12R 2 632 CIA工工MVGIFSTHYFQQKVFVLLAALRP------.....QWCSRE工PDPA 670
hugpl30 626 CL^FIiljTTIiIiGVLFCFNKRDIjIKKHIWPNVPDPSKSHIAQWSPHTPPRHN 675
huDCRS5 496----.....—SHLSNNN-EITSLTLKP--------------PVDSIjDSG 519
huIL-12R 2 671 NSTCAKKyP工AEEKTQLPLDRLLID-WPTP笠DPEPLV工S--EVLHQVTPV 717
hugpl3 0 676 FNSKDQMYSDGNFTDVSWEIEANDKKPFPEDLKSLDLFKKEKINTEGHS 725
huDCRS5 520 NNPRLQKHPN-FAFSVSSVNSLSNT--........---工---FLGEIjSIi工552
huIIj-12R 2 718 FRHPPCSNWPQREKGIQGHQASEKDMMHSASSPPPPRALQAESRQLjVDIjY 767 hugpl3 0 726 SG工GGSSCMSSSRPS工SSSDENESSQNTSSTVQYSTWHSGYRHQVPSVQ 775 huDCRS5 553 LNQGECS——S--PDIQNSVEEETTMLIiENDSP----------.......580huIL-12R 2 768 KVLESRGSDPKPENPACPWTVLPAGDIiPTHDGYIjPS1T…IDDI^SHEAP 814 hugpl30 775 VPSRSESTQIPIjLDSEERPEDIjQIjVDHVDGGDGIIjPRQQYFKQNCSQHESS 825 huDCRS5 581 —SET工PEQT:L:LPDEFVSCI)G:i:VNEEKPS面YFPQN…IIjESHFNR— 623
huIIj-12R 2 S15 LADSIjEELEPQH工SIjS.....VFPSSSLHPIiTFSCG…一一.......845
hugpl30 826 PDISHFERSKQVSSVNEEDFVRLKQQISDHISQSCGSGQMKMFQEVSAAD 875 huDCRS5 S24 --ISLLEK 623
huIL-12R 2 846----------DKLTLDQLKMRCDSLML 8S2
hugp 130 8 7 S. AFOPGTEGQVERFBTVGMEAATDEGMPKSYLPQTVRQGG预PQ 918 huDCRS5 530 ■ 62 9
"IL-30R"细胞外结构域最相关的是IL-6信号转导物gpl30和 IL-12RP2。略微相关的是GCSF受体、苗条蛋白受体、白血病抑制 因子受体和CNTF受体。因此，"IL-30R"是I类细胞因子受体超 家族成员，与IL-6R/IL-12R家族密切相关。
表3比较了现有的灵长类受体亚单位序列和灵长类例如人类 DCRS5(IL-30R)。 DCRS5与IL-6受体亚单位gpl30(例如IL-6R亚单 位)和IL12-R(32亚单位相似。DCRS5具有P亚单位特征，但是蛋白 互作及信号转导的真正序列仍然不清楚。
本文使用的术语DCRS5用以描述包含表1所示氨基酸序列的 蛋白。大多数情况下，其主要片段在功能或结构上相同，包括例如 额外细胞外结构域区段。本发明还包括相应DCRS5等位基因的序列 已知的蛋白变异体，例如突变蛋白或其它结构物。通常，所述变异 体与目标区段的序列差异约10%以下，通常具有1-11倍取代，例如 2、 3、 5、 7倍取代等。还包括所述蛋白的等位基因变异体和其它变 异体，例如天然多态性。 一般它结合其相应生物配体，其可能为具 有a受体亚单位的二聚体状态，其结合亲和力高，例如至少约100 nM,通常约30 nM以上，优选约10 nM以上，更优选约3 nM以上。 所述术语在本文还用来指相关天然形式，例如等位基因、多态性变 异体，以及哺乳动物蛋白代谢变异体。所述受体复合物的优选形式 以适合配体-受体相互作用的亲和选4奪性结合适当的配体。
本发明还包括与表1氨基酸序列具有显著氨基酸序列同一性的
27各种蛋白或肽的组合。包括具有较少取代(例如最好约3-5个以下取 代)的序列变异体。
主要多肽"片段"或"区段"为一个氨基酸残基节段，其具有
约8个氨基酸， 一般至少10个氨基酸，更通常至少12个氨基酸， 通常至少14个氨基酸，更常见至少16个氨基酸，通常至少18个氨 基酸，更通常至少20个氨基酸，通常至少22个氨基酸，更常见至 少24个氨基酸，优选至少26个氨基酸，更优选至少28个氨基酸， 特别优选的实施方案中，至少约30个或30个以上的氨基酸。不同 蛋白区段序列在合适长度节段上可彼此比较。多数情况下，各种片 段可能具有完整亚单位的功能特性，例如跨膜受体的细胞外结构域 可保持所述配体的结合特性，可用以制备可溶性受体样复合物。
通过优化残基匹配测定氨基酸序列同源性或序列同一性。在某 些比较中，可以根据需要引入空隙。参见例如Needleham等，(1970) J, Mol. Biol. 48:443-453; Sankoff等，(1983) Time Warps， String Edits, and Macromolecules: The Theory and Practice of Sequence Comparison, 第 一章,Addison-Wesley, Reading, MA; IntelliGenetics 的软件包,Mountain View, CA; the University of Wisconsin Genetics Computer Group (GCG), Madison, WI;各文献通过引用结合到本文 中。当把保守取代当成匹配时，序列同源性改变。保守取代通常包 括以下类别中的取代甘氨酸，丙氨酸；缬氨酸，异亮氨酸，亮氨 酸；天冬氨酸，谷氨酸；天冬酰胺，谷氨酰胺；丝氨酸，苏氨酸； 赖氨酸，精氨酸；苯丙氨酸，酪氨酸。同源氨基酸序列包括细胞因 子序列的天然等位基因变异体和种间变异体。通常同源蛋白或肽与 表1氨基酸区段的同源性为50-100%(如果可以引入空隙的话)、 60-100%(如果包括保守取代)。同源性检测至少约70%, —般至少 76%,更通常至少81%,常常至少85%,更常见至少88%, —般至 少90%，更一4殳至少92%,通常至少94%,更通常至少95%,优选 至少96%，更优选至少97%，在特别优选的实施方案中，至少98%或98°/。以上。同源性程度因所比较区段的长度不同而不同。同源蛋 白或肽，例如等位基因变异体，具有表1所述实施方案的最大生物 活性，特别是细胞内部分。
本文使用的术语"生物活性，，用以描述(但不限于)细胞因子样 配体对信号转导、炎症反应、天然免疫和/或形态发育的影响。例如 上述受体应该介导磷酸酶或磷酸化酶活性，所述酶活性容易用标准
方法测定。参见例如Hardie等(主编，1995) The Protein Kinase FactBook,第I和II巻，Academic Press, San Diego， CA; Hanks等 (1991) Meth. Enzymol. 200:38-62; Hunter等(1992) Cell 70:375-388; Lewin (1990) Cell 61:743-752; Pines等(1991) Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 56:449-463; Parker等(1993) Nature 363:736-738。 所述受体或其部分可用作磷酸标记酶，标记普通或特异性底物。所 述亚单位也可以为激发识别抗体的功能免疫原，或者为能够结合抗 体的抗原。
术语例如DCRS5的配体、激动剂、拮抗剂和类似物呈现配体-受体相互作用的特性，例如其中所述受体为天然受体或抗体。细胞 反应可能通常通过受体酪氨酸激酶途径介导。
此外，配体为所述受体或其类似物结合的天然配体分子，或者 为天然配体的功能类似物分子。功能类似物可以为结构修饰的配体， 或者可为完全不相关分子，所述分子具有作用于合适配体结合决定 簇的分子形状。配体可用作激动剂或拮抗剂，参见例如Goodman等 (主编,1990) Goodman & Gilman，s: The Pharmacological Bases of Therapeutics, Pergamon Press, New York。
也可以#4居受体或抗体以及其它效应物或配体的分子形状的结 构研究进行合理药物设计。参见例如Herz等(1997) J. Recept. Signal Transduct. Res. 17:671-776; Chaiken等(1996) Trends Biotechnol. 14:369-375。效应物可以为在配体结合作用时介导其它功能的其它蛋 白，或者为通常与所述受体相互作用的其它蛋白。 一种测定什么位点与特异性其它蛋白相互作用的方法是物理结构测定法，例如x-射
线晶体照相术或二维NMR技术。它们可指示什么氨基酸残基构成 分子接触区。关于蛋白结构测定的详述介绍参见例如Blundell和 Johnson (1976) Protein Crystallography, Academic Press, New York, 其通过引用结合到本文中。 II.活性
细胞因子受体样蛋白具有许多不同生物活性，例如细胞内信号 转导(例如通过STAT4的细胞内信号转导)、调节细胞增殖或者磷酸 代谢(在通常为蛋白质的特异性底物上添加磷酸根或从其去除磷酸 根)。所述作用的结果通常是调节炎症功能、其它天然免疫反应或形 态效应。所述亚单位可能对所述配体具有特异性低亲和结合。
DCRS5具有通过JAK途径转导信号的受体的特征基元。参见 例如Ihle等(1997) Stem Cells 15(增刊1):105-111; Silvennoi廳等 (1997) APMIS 105:497-509; Levy (1997) Cytokine Growth Factor Review 8:81-90; Winston和Hunter (1996) Current Biol. 6:668-671; Barrett (1996) Baillieres Clin. Gastroenterol. 10:1-15; Briscoe等(1996) Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 351:167-171。特别引人注目 的是上述SH2结合基元。
细胞因子受体亚单位的生物活性与在底物上添加或去除磷酸根 有关，通常为特异性方式，但是偶尔为非特异性方式。可以用例如 以下文献所述的标准方法鉴定底物，或者分析酶活性条件Hardie 等(主编，1995) The Protein Kinase FactBook，第I和II巻，Academic Press, San Diego, CA; Hanks等(1991) Meth. Enzymol. 200:38-62; Hunter等(1992) Cell 70:375-388; Lewin (1990) Cell 61:743-752; Pines 等(1991) Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 56:449-463; Parker等 (1993) Nature 363:736-738。
受体亚单位可以締合形成功能复合物，例如其可用于结合配体 或制备抗体。它们具有显著诊断用途，包括检测或定量测定。所述受体与p40/IL-B30配体的功能性连接对于了解所述受体可应用的适 应症具有重要作用。因此，拮抗剂和激动剂将具有预测作用。
III.核酸
本发明设想应用例如编码上述蛋白或密切相关蛋白或其片段的 分离核酸或片段用于例如编码相应多肽，优选所述多肽具有生物活 性。此外，本发明包括分离或重组的DNA,所述DNA编码具有特 征序列的所述蛋白或多肽的组合，所述特征序列是单独DCRS5的特 征序列、或者是DCRS5特征序列与其它例如IL-12Rpi亚单位特征 序列的组合(参见Showe等(1996) Ann. N.Y. Acad. Sci. 795:413-425; Gately等(1998) Ann. Rev. Immunol. 16:495-521; GenBank U03187, NM—005535)。通常，所述核酸在合适条件下与表1所示的核酸序列 区段杂交，但是优选不与表3所示其它受体的相应区段杂交。所述 生物活性蛋白多肽可以是全长蛋白或片段，而且具有与表1所示序 列具有高度同源性的氨基酸序列区段，例如相同的重要区段。此外， 本发明还包括分离核酸或重组核酸或其片段的应用，所述核酸或其 片段编码具有DCRS5蛋白等同片段(例如细胞内部分)的蛋白。所述 分离核酸可在5'和3，侧具有相应的调节序列，例如启动子、增强子、 poly-A添加信号和来自天然基因的其它调节序列。还提供如上所述 的组合物(如DCRS5与IL-12Rpi)或它们的细胞外配体结合部分(酉己 体拮抗剂)。此外，显然多态性或其它变异体的诊断应用也是重要的。 "分离的"核酸是指大致纯的例如RNA、 DNA或混合型聚合 物的核酸，例如它与天然伴随的天然序列的其它组分(例如核糖体、 聚合酶和原物种的侧翼基因组序列)分离开。该术语包括从其天然环 境取出的核酸序列，而且包括重组或克隆DNA分离物C因此与天然 存在组分不同)，以及包括化学合成的类似物或异源系统生物合成的 类似物。大致纯分子包括完全纯或大致纯的分离型分子。
分离核酸通常为均质组分分子，但是在某些实施方案中，包含不同组分、优选微小差异的不同组分。这种差异通常见于聚合物末 端或对需要生物功能或活性不重要的部分。
"重组"核酸通常用其制备方法或其结构定义。涉及其制备方 法时，例如一种方法制备的产品，所述方法应用重组核酸技术，例 如涉及人为干预核苷酸序列。通常这种干预涉及体外操作，然而在 某些条件下可能涉及更经典的动物繁殖技术。另一方面，它可以是
如下制备的核酸产生包含非天然彼此邻接的两种片段的融合物的
序列，但是它不包括天然产物，例如天然状态存在的天然突变体。 因此，包括通过用非天然载体转化细胞制备的产物，同样包括用任 何合成寡核苷酸的方法获得的序列的核酸。这种方法通常用于例如 用编码相同氨基酸或保守氨基酸的丰余密码子取代另一种密码子， 而通常引入或去除限制酶序列识别位点，或者用于某种结构功能分 析。或者，所述方法用于将所需功能的核酸区段连接在一起，产生 通常天然形式不存在的具有所需功能组合的单一遗传实体，例如编 码融合蛋白。限制酶识别位点通常为所述人工操作的目标，但是可
以设计引入其它位点特异性靶，例如启动子、DNA复制位点、调节 序列、控制序列或其它有用的特征。相同的原理用于重组多肽，例 如融合多肽。这包括DCRS5和IL-12Rpl亚单位的二聚体重复物或 融合物。具体来说包括合成核酸，所述合成核酸因为遗传密码丰余 性而编码DCRS5片段的等同多肽以及各种不同相关分子(例如其它 细胞因子受体家族成员)的序列融合物。
核酸的"片段"为核香酸连续节段，它包含至少约17个核苷酸， 一般至少约21个核苷酸，更一般至少25个核苷酸，通常至少30个 核苷酸，更一般至少35个核苷酸，通常至少39个核苷酸，更通常 至少45个核苷酸，通常至少50个核苷酸，更常见至少55个核苷酸， 常常至少60个核苷酸，更通常至少66个核苷酸，优选至少72个核 普酸，更优选至少79个核苷酸，特别优选实施方案为至少85个核 苷酸或更多核苷酸，包括卯、100、 120、 140、 160、 180、 200个核段，例如下述结构域)上彼此比较。
编码DCRS5的核酸特别用于鉴定编码DCRS5本身或密切相关 蛋白的各种基因、mRNA和cDNA，以及用于鉴定编码例如不同个 体或相关物种的多态性、等位基因或其它遗传变异体的DNA。这种 筛选的优选探针为不同多态性变异体之间保守的受体区段，或者所 述区段包含非特异性核香酸，优选它为全长序列或几乎为全长序列。 在其它情况下，多态性变异体特异性序列更有用。也可以诊断组合 的DCRS5多态性变异体和IL-12R(31变异体。
本发明还包括具有与本文所述分离DNA相同或高度同源的核 酸序列的重组核酸分子和片段。具体来说，所述序列通常与控制转 录、翻译和DNA复制的DNA节段有效连接。这些额外区段通常有 助于表达目的核酸区段。
同源或高度相同的核酸序列在相互比较时，例如与DCRS5序 列比较时，表现出显著相似性。核酸同源性标准为本领域一般使用 的序列比较或根据杂交条件的同源性测量结果。下面更详细地描述 比较杂交条件。
核酸序列比较的大致同一性是指在引入适当核苷酸插入或缺失 的情况下优化排列对比时，所比较的区段或其互补链相同核苦酸至 少约60%， 一4殳至少66%,普通至少71%，通常至少76%，更常见 至少80%,通常至少84%,更常见至少88%,常常至少91%,更常 见至少93%,优选至少约95%,更优选至少约96-98%或更高，在具 体实施方案中，高达约99%或更高的相同核香酸，包括例如编码结 构域的区段或其它所述区段。或者，当通常使用表1衍生序列在选 择性杂交条件下所述区段与另 一条链或其互补链杂交，则所比较的 区段大致相同。通常，当在至少约14个核苷酸的节段上至少约55% 同源，更常见至少约65%同源，优选至少约75%同源，更优选至少 约90%同源时，则发生选择性杂交。参见Kanehisa (1984) Nucl. Acids
33Res. 12:203-213，其通过引用结合到本文中。上述同源性比较的长 度可以为更长的节段，在某些实施方案中，比较节段长度为至少约 17个核香酸，一^:至少约20个核苷酸，通常至少约24个核苷酸， 常见约28个核苷酸，通常至少约32个核苷酸，更常见至少约40个 核苷酸，优选至少约50个核苷酸，更优选至少约75-100个核苷酸 或更多核苷酸。包括125、 150、 175、 200、 225、 250、 275、 300、 325、 350个核普酸等以及其它长度。
杂交同源性有关的严格条件是盐、温度、有机溶剂和杂交反应 中通常控制的其它参数的严格综合条件。严格温度条件通常包括超 过约3(TC温度，更常见超过约37。C，通常超过约45。C，更常见超 过55°C，优选超过约65°C,更优选超过约70°C。严格盐条件一般 低于约500 mM，通常低于约400 mM,更常见低于约300 mM，常 见低于约200mM,优选低于约100mM,更优选低于约80mM，甚 至低于约50或20 mM。然而，参数综合比任何单一参数量值重要 得多。参见例如Wetmur和Davidson (1968) J. Mol. Biol. 31:349-370, 其通过引用结合到本文中。
分离DNA可容易地通过核苷酸取代、核苷酸缺失、核苷酸插 入和核香酸节段倒置进行修饰。修饰产生编码该蛋白或其衍生物的 新的DNA序列。修饰序列可用于产生突变蛋白或增强变异体表达。 表达增强可能涉及基因扩增、转录增强、翻译增强和其它机制。 DCRS5可如上所述产生这样的突变DCRS5,但是无论是因为缺失、 取代还是插入，其氨基酸序列不同于天然存在的其它细胞因子受体 蛋白。具体来说，"位点特异性突变DCRS5"包括与表l蛋白具有 大致序列同 一性的蛋白，而且通常具有本文公开形式的大多数生物 活性或作用。还鉴定了各种天然多态性变异体序列。
尽管预定了位点特异性突变位点，但是突变不一定是位点特异 性的。在表达偶联的基因中产生氨基酸插入或缺失可实现哺乳动物 DCRS5突变。可产生取代、缺失、插入或许多组合以获得最终构建物。插入包括氨基或羧基末端融合。可对目标密码子进行随机诱变，
然后可对表达的哺乳动物DCRS5突变体筛选目的活性，获得某一方 面的结构活性关系。在已知序列DNA的预定位点产生取代突变的 方法，例如应用M13引物突变，是本领域众所周知的。另见Sambrook 等(1989)和Ausubd等(1987和定期出版的增刊)。特别有用的构建物 为与IL-12RJ31节段有关的DCRS5细胞外部分。
DNA突变通常不使编码序列置于读框外，优选不产生能够杂交 产生二级mRNA结构如环或发夹结构的互补区。
Beaucage和Carruthers (1981) Tetra. Letts. 22:1859-1862介绍的 氨基磷酸酯法可产生合适合成DNA片段。通常通过合成互补链和 在合适条件下使所述链退火在一起，或者通过使用DNA聚合酶和 合适引物序列加上互补链，获得双链DNA片段。
聚合酶链式反应(PCR)技术常常用于诱变。或者，诱变引物是常 用的在预定位点产生规定突变的方法。参见例如Innis等(主编，1990) PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academic Press, San Diego， CA; Dieffenbach和Dveksler (1995;主编)PCR Primer: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Press, CSH， NY。
本发明某些实施方案涉及包含所述受体序列的组合组分。在其 它实施方案中，所述序列的功能部分连接在一起编码融合蛋白。在 其它形式中，所述序列的变异体可以被取代。
IV.蛋白质、肽
如上所述，本发明还包括灵长类DCRS5,例如其序列公开于表 ，而且见上文介绍。也设想了等位基因变异体和其它变异体，包括 例如综合所述序列的各部分和其它序列(包括例如IL-12R(31 、表位标 记和功能结构域)的融合蛋白。
本发明还提供重组蛋白，例如使用上述灵长类或啮齿类蛋白的 区段的异源融合蛋白。异源融合蛋白是天然情况下通常不以相同方 式融合在一起的蛋白或区段融合物。因此，DCRS5和其它细胞因子
35受体的融合产物通常为连续蛋白分子，其序列以典型肽键融合在 一起，通常制成单一翻译产物而且表现各个来源肽的各种特性，例 如序列或抗原性。相似原理可用于异源核酸序列。还提供各种设计 蛋白组合成的复合物。
另外，通过组合其它相关蛋白(例如细胞因子受体或Toll样受 体，包括种变异体)的相似功能结构域或结构结构域可制备新的构建 物。例如，配体结合或其它区段可在不同新的融合多肽或片段之间
"互换，，。参见例如Cunningham等(1989) Science 243:1330-1336; 0，Dowd等(1988) J. Biol. Chem. 263:15985-15992，各文献通过引用 结合到本文中。所以，具有新的综合特异性的新型嵌合多肽可得自 受体结合特异性的功能结合。例如，可将其它相关受体分子的配体 结合结构域加入这种蛋白或相关蛋白中或取代这种蛋白或相关蛋白 的其它结构域。获得的蛋白通常具有杂合功能和特性。例如，融合 蛋白可包含靶向结构域，靶向结构域的作用是使所述融合蛋白限定 于特定亚细胞器。
可从各种序列数据库选择候选融合配偶体和序列，例如 GenBank, c/o IntelliGenetics, Mountain View, CA; BCG, University of Wisconsin Biotechnology Computing Group, Madison, WI， 其均通过 引用结合到本文中。具体来说，特别优选表1和3中提供的多肽序 列的组合物。上述组合物可代替变异体型所述蛋白。
本发明特别提供结合细胞因子样配体和/或信号转导涉及的突 变蛋白。DCRS5与所述细胞因子受体家族的其它成员的结构排列对 比显示出保守特征/残基。见表3。人DCRS5序列与所述细胞因子受 体家族其它成员的排列对比表明各种结构和功能共同特征。另见 Bazan等(1996) Nature 379:591; Lodi等(1994) Science 263:1762-1766; Sayle和Milner-White (1995) TIBS 20:374-376; G颜enberg等(1991) Protein Engineering 4:263-269。
特别优选以小鼠或人序列的取代。相反，远离配体结合互作区的保守取代可能保存大多数信号转导活性；远离细胞内结构域的保守取代可能保存大多数配体结合特性。
灵长类DCRS5的"衍生物"包括氨基酸序列突变体、糖基化变异体、代谢衍生物和与其它化学部分的共价或聚集缀合物。例如应用本领域众所周知的方法使官能团与DCRS5氨基酸侧链或N末端存在的基团键合可制备共价衍生物。这些衍生物包括但不限于羧基末端的脂族酯或酰胺、或者包含羧基侧链的残基的脂族酯或酰胺、含羟基残基的O酰基衍生物、氨基末端氨基酸或含氨基残基(例如赖氨酸或精氨酸)的N酰基衍生物。酰基选自烷基部分基团，包括C3-C18常见烷基，因此形成烷酰基芳酰基物质。
具体来说，包括糖基化改变，例如在其合成和加工过程中或在进一步的加工步骤中改进多肽的糖基化类型。特别优选的改变糖基化方法是使所述多肽暴露于得自通常进行所述加工的细胞的糖基化酶，例如哺乳动物糖基化酶。也设想了去糖基化酶。还包括各种形式具有其它微小修饰的相同一级氨基酸序列，包括磷酸化氨基酸残基，例如磷酸酪氨酸、磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸。
主要的一组衍生物为所述受体或其片段与其它多肽蛋白的共价缀合物。这些衍生物可在诸如N末端融合的重组物培养中合成，或者利用本领域已知的、其作用是通过活性侧基交联蛋白的物质合成。交联剂的优选衍化位点为游离氨基、糖部分和半胱氨酸。
还提供所述受体与其它同源或异源蛋白的融合多肽。同源多肽可以为不同受体的融合物，获得例如对多个不同细胞因子配体具有结合特异性的杂合蛋白或底物作用特异性增强或减弱的受体。同样，
可构建具有所述衍生蛋白综合特性或活性的异源融合物。典型实例有报道多肽(例如荧光素酶)与一种受体的一个区4爻或结构域(例如配体结合区段)融合，使得可以容易地测定目的配体的存在或位置。参见例如Dull等的美国专利号4,859,609,其通过引用结合到本文中。其它基因融合配偶体包括谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、细菌P-半乳糖苷酶、trpE、 A蛋白、(3-内酰胺酶、ot-淀粉酶、乙醇脱氢酶和酵母oc接合因子。参见例如Godowski等(1988) Science 241:812-816。所述组合蛋白常常可代替标记蛋白。如上所述，DCRS5与IL-12R(31締合特別有意义。
Beaucage和Carruthers (1981) Tetra. Letts. 22:1859-1862介绍的
氨基磷酸酯法可产生合适合成DNA片段。通常通过合成互补链并在合适条件下使所述链退火在一起，或者通过使用DNA聚合酶和合适引物序列加上互补链，获得双链片段。
所述多肽也可以含有通过磷酸化、石黄化、生物素化或添加或去除其它部分而化学修饰的氨基酸残基，尤其是含有与磷酸根基团类似的分子形状的氨基酸残基。在某些实施方案中，所述修饰为有用的标记试剂或者用作纯化靶例如亲和配体。
融合蛋白通常用重组核酸法或合成多肽法制备。核酸操作表达的技术在例如以下文献中有全面介绍Sambrook等(1989) MolecularCloning: A Laboratory Manual (第二版),第13巻,Cold Spring HarborLaboratory,以及Ausubel等(主编，1987和定期出版的增刊)CurrentProtocols in Molecular Biology, Greene/Wiley, New York, 均通过引用结合到本文中。多肽合成4支术在例如以下文献中有介绍Merrifield(1963) J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-2156; Merrifield (1986) Science232:341-347; Atherton等(1989) Soid Phase P印tide Synthesis: APractical Approach, IRL Press, Oxford;均通过引用结合到本文中。关于制备更大的肽另见Dawson等(1994) Science 266: 776-779。
本发明还设想了氨基酸序列变化或糖基化以外的DCRS5衍生物的应用。这种衍生物包括与化学部分共价或聚合締合。这样的衍生物一般分为三类(1)盐类，(2)侧链和末端残基共价修饰，(3)吸附复合物，例如吸附于细胞膜。这种共价或聚合衍生物可用作免疫原、免疫测定试剂，或者用于纯化方法，例如受体或其它结合分子(例如抗体)的亲和纯化方法。例如，为了检测或纯化细胞因子受体、抗体或其它类似分子，细胞因子配体可应用本领域众所周知的方法通
过共价键合固定在固体支持物上，例如溴化氰活化Sepharose,或者使用或不使用戊二醛交联结合吸附到聚烯烃表面上。为了用于诊断测定，也可用可4企测基团标记所述配体，例如用氯胺T方法进行放射性碘化标记、与稀土螯合剂共价结合或与另 一种荧光部分缀合。
本发明的组合物，例如包含DCRS5的组合物，可用作产生特异性针对所述组合物的抗血清或抗体，所述抗血清或抗体例如能够区分其它细胞因子受体家族成员。所述复合物用于筛选通过用各种含所述蛋白的不纯制品免疫制备的单克隆抗体或抗原结合片段。术语"抗体"还特别包括天然抗体的抗原结合片段，例如Fab、 Fab2、Fv等。纯化DCRS5也可用作检测试剂，检测在DCRS5表达升高作用下产生的抗体，或检测导致产生抗内源性受体抗体的免疫疾病。另外，DCRS5片段也可用作免疫原产生本发明抗体，见紧接着的下文介绍。例如本发明设想了对表1所示的氨基酸序列、其片段或各种同源肽具有结合亲和力的抗体或者针对它们产生的抗体。具体来说，本发明设想了预期或实际对暴露在天然DCRS5蛋白外的特异性
组合蛋白的复合物也是有用的，而且可制备其抗体制剂。
在某些实施方案中，例如DCRS5细胞外配体结合区段与IL-12RP1的可溶性构建物可以是所述配体的结合组合物，其可用作配体拮抗剂或者抗原以阻断配体介导的信号转导。所述构建物在诊断或治疗上有用，例如对配体的i貪断性组织学标记，或者治疗性用作配体拮抗剂。
对所述受体配体生理反应的阻断可能原因是对抑制所述配体与所述受体的结合，可能是通过竟争性抑制。因此，在本发明体外测
建物或与固相支持物结合的片段。这些检测也可诊断性确定配体结合区突变和修饰或者例如影响信号转导或酶功能的其它突变和修饰
39的作用。
本发明还设想了竟争性药物筛选测定的应用，例如其中抗所述 受体复合物或片段的中和抗体与受试化合物竟争性结合配体或其它 抗体。这样，中和抗体或片段可用于检测对受体具有一个或多个结 合位点的多肽的存在，也可用于占据受体上可能另外结合配体的结
合位点。DCRS5细胞外结构域或配体结合结构域与IL-12Rpl组合 的可溶性受体构建物可能是竟争性结合p40/IL-B30配体的有用拮抗剂。
V.制备核酸和蛋白质
编码所述蛋白或其片段的DNA可以通过化学合成、筛选cDNA 文库或者筛选用各种细胞系或组织样品制备的基因组文库而获得。 可使用标准方法和本文例如表1提供的序列分离天然序列。可以用 杂交技术或各种PCR技术、联合应用或者单独应用筛选序列文库(例 如GenBank)或者通过筛选序列文库(例如GenBank)，鉴定其它类型 的相应物。
这种DNA可以在各种宿主细胞中表达，以便合成全长受体或 片段，它们再用于例如制备多克隆抗体或单克隆抗体；用于结合研 究；用于构建和表达修饰配体结合结构域或激酶/磷酸酶结构域；用 于结构/融合研究。变异体或片段可在用合适载体转化或转染的宿主 细胞中表达。除了来自重组宿主的蛋白或细胞杂质之外，上述分子 基本上不含蛋白或细胞污染物，因此，特别可用于与药学上可接受 的载体和/或稀释剂组合的药用组合物。所述蛋白或其部分可表达为
其它蛋白的融合蛋白。所述蛋白或其编码核酸的组合物特别引人注 目。
表达载体通常为含有目的受体基因、其片段或组合基因的自我 复制的DNA或RNA构建物，所述目的受体基因、其片段或组合基 因通常与在合适宿主细胞中被识别的合适遗传控制元件有效连接。 所述控制元件能够在合适宿主中实现表达。多个基因可协调表达，而且可位于多顺反子信使上。实现表达所必需的特异型控制元件取 决于所用的最终宿主细胞。 一般来说，所述基因控制元件包括原核 启动子系统或真核启动子表达控制系统，通常包含转录启动子、控
制转录发生的选择操纵子、升高mRNA表达水平的转录增强子、编
码合适核糖体结合位点的序列和终止转录和翻译的序列。此外，表 达载体常常含有使载体独立于所述宿主细胞复制的复制起点。 本发明载体包含编码所述多种蛋白组合物或者生物活性等同多
肽的组合物的DNA。所述DNA处于病毒启动子控制之下，而且它 可编码选择标记。本发明还设想了能够在原核或真核宿主中表达编 码所述蛋白的真核cDNA的所述表达载体的应用，其中所述载体与 所述宿主匹配，而且所述真核cDNA插入所述载体，使得包含所述 载体的宿主生长表达所述cDNA。通常，设计表达载体在其宿主细 胞中稳定复制或者在其宿主细胞中扩增而显著增加每个细胞的目的 基因总拷贝数。并不总是需要表达载体在宿主细胞中复制，例如可 能使用不含所述宿主细胞识别的复制起点的载体在各种宿主中瞬时 表达所述蛋白或其片段。也可使用使所述蛋白的编码部分重组整合 入所述宿主DNA的载体。
本文使用的载体包括质粒、病毒、噬菌体、整合型DNA片段 以及其它能够使DNA片段整合入宿主基因组的载体。表达载体是 含有实现有效连接基因表达的基因控制元件的特化载体。质粒为最 常用形式的载体，但是在功能上等同而且本领域已知或者将为本领 域所知的所有其它形式载体也适用本发明。参见例如Pouwels等 (1985和增刊)Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, N.Y., Rodriguez等(主编，1988) Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, Buttersworth, Boston,它们的内容通过引用 结合到本文中。
转化细胞为用重组DNA技术构建的载体转化或转染的细胞(最 好是哺乳动物细胞)。转化宿主细胞通常表达目的蛋白，但是对于克
41隆、扩增和操作其DNA的目的，不需要表达所述目的蛋白。本发 明还设想了在营养培养基中培养转化细胞，因此允许累积所述蛋白。 可从培养物回收所述蛋白，或者在某些情况下，从培养基中回收所
述蛋白。
对于本发明目的而言，当核酸序列在功能上彼此相关时，它们
有效连接。例如，如果前序列或分泌前导序列的DNA表达为前蛋 白或它参与引导所述多肽至细胞膜或参与所述多肽的分泌时，则它 与多肽有效连接。如果启动子控制所述多肽的转录，则启动子与编 码序列有效连接；如果核糖体结合位点的位置使得可以进行翻译， 则它与编码序列有效连接。通常，有效连接是指连续而且符合读框 的连接，但是，某些遗传元件如阻抑基因不是连续连接，但是仍然 约束操纵基因序列，操纵基因序列再控制表达。
合适宿主细胞包括原核细胞、低等真核细胞和高等真核细胞。 原核细胞包括革兰氏阴性和阳性生物，例如大肠杆菌和枯草杆菌(B. subtilis)。低等真核细胞包括酵母，例如酿酒酵母(S. cerevisiae)和毕 赤酵母属(Pichia),以及网柄菌属(Dictyostelium)物种。高等真核细胞 包括用动物细胞建立的组织培养细胞系，所述动物细胞为非哺乳动 物来源，例如昆虫细胞和鸟类细胞，以及哺乳动物来源，例如人类、 灵长类和啮齿类。
原核宿主载体系统包括用于许多不同物种的各种载体。本文使 用的大肠杆菌及其载体一般包括在其它原核细胞中使用的等同载 体。用于扩增DNA的典型载体为pBR322或其许多书t生物。可以用
体lac启动子(pUC系列)；trp启动子(pBR322 trp); Ipp启动子(pIN 系列)；人pP或pR启动子(pOTS);或者杂合型启动子如ptac (pDR540)。参见Brosius等(19S8)"应用X及Ipp衍生启动子的表达 载体'，，载于Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, (Rodriguez和Denhardt主编)，Buttersworth， Boston,第IO章,pp. 205-236，其内容通过引用结合到本文中。
低等真核细胞，例如酵母和网柄菌属，可用包含DCRS5序列 的载体转化。对于本发明目的，最常用低等真核宿主为面包酵母， 即酿酒酵母。 一般用其代表低等真核细胞，但是也可用许多其它菌 抹和种类。酵母载体的典型组成如下复制起点(整合型例外)、选 择基因、启动子、编码所述受体或其片段的DNA、以及翻译终止序 列、聚腺苷酸序列和转录终止序列。用于酵母的合适表达载体包括 组成型启动子，例如3-磷酸甘油酸激酶和各种其它糖酵解酶基因启 动子，或者诱导型启动子，例如醇脱氢酶2启动子或金属硫蛋白启 动子。合适载体包括以下类型的衍生物自主复制低拷贝数载体(例 如YRp系列)，自主复制高拷贝数载体(例如YEp系列)；整合型载 体(例如YIp系列)，或者^H、染色体(例如YCp系列)。
高等真核组织培养细胞通常是用于表达功能活性白介素或受体 蛋白优选宿主细胞。原则上，许多高等真核组织培养细胞系无论是 来自无脊推动物还是脊推动物，均可使用，例如昆虫杆状病毒表达 系统。然而，优选哺乳动物细胞。所述细胞的转化或转染以及繁殖 已成为常规方法。有用的细胞系实例包括HeLa细胞、中国苍鼠卵 巢(CHO)细胞系、幼龄大鼠肾脏(BRK)细胞系、昆虫细胞系、鸟细胞 系和猴(COS)细胞系。用于所述细胞系的表达载体通常包括复制原 点、启动子、翻译起始位点、RNA剪接位点(如果使用基因组DNA)、 聚腺苷酸位点和转录终止位点。这些载体还常常含有选择基因或扩 增基因。合适表达载体可以是质粒、病毒或反转录病毒，它们含有 例如衍生自腺病毒、SV40、细小病毒、痘苗病毒或巨细胞病毒的启 动子。合适表达载体的典型实例包括pCDNAl; pCD,参见Okayama 等(19S5) Mol. Cell Biol. 5:1136-1142; pMClneo PolyA，参见Thomas 等(1987) Cell 51:503-512;杆状病毒载体，例如pAC 373或pAC 610。
对于分泌蛋白和某些膜蛋白，读框通常编码由其N-末端共价连 接信号肽的成熟或分泌产物组成的多肽。所述信号肽在所述成熟或活性多肽分泌之前切除。根据经验法则可非常准确地预测切割位点，
例如窗-Heijne (1986) Nucleic Acids Research 14:4683-4690和 Nielsen等(1997) Protein Eng. 10:1-12;信号肽的确切氨基酸组成对 其功能似乎不重要，例如Randall等(1989) Science 243:1156-1159; Kaiser等(1987) Science 235: 312-317。 4吏用标准方法可容易地确定 本发明的成熟蛋白。
常常需要在提供特异性或规定糖基化类型的系统中表达上述多 肽。在这种情况下， 一般糖基化类型为表达系统天然提供的糖基化 类型。然而，所述糖基化类型可如下修饰使所述多肽(例如非糖基 化型)暴露于已经引入异源表达系统的合适糖基化蛋白。例如，所述 受体基因可以与 一种或多种编码哺乳动物糖基化酶或其它糖基化酶 的基因共转化。使用这种方法，某些哺乳动物糖基化类型可在原核 细胞或其它细胞中实现。原核细胞表达通常产生非糖基化型蛋白。
如上所述，DCRS5的来源可以为表达重组DCRS5的真核宿主 或原核宿主。所述来源也可以是细胞系，但是本发明也设想了其它 哺乳动物细胞系，优选细胞系来自人类。
既然已知所述序列，可用合成肽的常规方法制备灵长类 DCRS5、其片段或衍生物。包括下列文献介绍的方法Stewart和 Young (1984) Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, IL; Bodanszky和Bodanszky (1984) The Practice of Peptide Synthesis, Springer Verlag, New York; Bodanszky (1984) The Principles of Peptide Synthesis, Springer Verlag, New York; 所有文南大 均通过引用结合到本文中。例如，可以使用叠氮化物法、酰基氯法、 酸酐法、混合酐法、活性酯法(例如对硝基苯基酯、N-羟基琥珀酰亚 胺酯或氰基曱基酯)、碳二咪唑法、氧化还原法或二环己基碳二亚胺 (DCCD)加成法。前面方法可以使用固相合成以及液相合成。可以将 相似4支术用于部分DCRS5序列。
44段或衍生物，通常是利用包括使氨基酸逐个按顺序与末端氨基酸缩 合的所谓的逐步法，或者使肽片段与末端氨基酸偶合。在偶合反应 中不使用的氨基通常必须进行保护，以便防止在不正确的位置进行 偶合。
如果使用固相合成，则使C末端氨基酸通过其羧基与不溶性载 体或支持物结合。不溶性载体没有特别限制，只要它能与反应性羧 基结合则可。这样的不溶性载体实例包括卣代曱基树脂(例如氯曱基 树脂或溴曱基树脂)、羟基曱基树脂、苯酚树脂、叔烷氧基羰基肼化 树脂等。
氨基保护的氨基酸按顺序通过其活化羧基与预先形成肽或链的 反应氨基缩合结合，从而逐步合成所述肽。合成完整序列后，从不 溶性载体分离出所述肽，从而生产出所述肽。这种固相法在
Merrifield等(1963), J. Am. Chem. Soc. 85:2149-2156中有全面介绍， 其通过引用结合到本文中。
制备的蛋白及其片段可通过肽分离(例如萃取、沉淀、电泳、各 种形式的层析、免疫亲和等)从反应混合物中分离纯化。根据所需要 的用途，可获得不同程度纯度的本发明受体。可应用本文公开的(见 下文)蛋白纯化技术或者应用本文在免疫吸收亲和层析法中描述的 抗体完成纯化。这种免疫吸收亲和层析如下进行首先，使所述抗 体结合到固体支持物上，然后所连接的抗体与合适细胞的溶解裂解 物、表达所述受体的其它细胞裂解物或因为DNA技术而产生所述 蛋白的细胞裂解物或上清液接触，参见下文。
一般来说，纯化蛋白的纯度至少约40%, —般至少约50%，通 常至少约60%，常见至少约70%，更常见至少约80。/。，优选至少约 90%，更优选至少约95%，在特别实施方案中，为97%-99%或更高。 纯化通常为重量纯度，但是也可以为摩尔纯度。可适当应用不同测 定。可纯化各种蛋白，然后将其混合。VI.抗体
可制备针对各种哺乳动物例如灵长类DCRS5蛋白及其片段的 抗体，所述蛋白及其片段可以为天然原型和其重组形式，差别在于 针对所述活性受体的抗体更可能识别仅在天然构象中存在的表位。 还设想了识别DCRS5与IL-12R(31的组合物(例如官能团组合)呈现 的表位的抗体。变性抗原检测例如在蛋白质印迹中也是有用的。也 设想了抗独特型抗体，其可用作天然受体或抗体的激动剂或拮抗剂。
可通过用所述片段与免疫原性蛋白的缀合物免疫动物，制备抗 所述蛋白预定片段的抗体，包括结合片段和单链型抗体。用分泌目 的抗体的细胞制备单克隆抗体。筛选其中结合正常蛋白或缺陷蛋白 的抗体，或者筛选激动剂活性或拮抗剂活性的抗体。单克隆抗体结 合的KD通常约1 mM,更常见至少约300 |uM,常常至少约100 nM， 更常见至少约30 ^M，优选至少约10 ^M，更优选至少约3 pM或更 低。
本发明的抗体，包括抗原结合片段，具有重要诊断或治疗价值。 它们可为结合所述受体并抑制与配体结合或抑制所述受体引发生物 反应(例如作用于其底物)的能力的有效拮抗剂。它们也可用作非中 和抗体，它们可与毒素或放射性核素偶合，所述毒素或放射性核素 结合生产细胞或局限于白介素来源的细胞。此外，上述抗体可与药 物或其它治疗药物直接缀合或通过接头间接缀合。
本发明抗体在诊断应用中也是有用的。作为捕获抗体或非中和 抗体，它们可结合所述受体而不抑制配体或底物结合。作为中和抗 体，它们可用于竟争性结合测定。它们还可用于检测或定量配体。 它们可用作蛋白质印迹分析、或者免疫沉淀或免疫纯化相应蛋白的 试剂。同样，核酸和蛋白质可固定在固体支持物上，以进行亲和纯 化或检测方法。所述支持物可以是例如固体树脂珠或塑料片。
蛋白片段可与其它物质、尤其是多肽结合，作为用作免疫原的 融合或共价结合多肽。哺乳动物细胞因子受体和片段可与各种免疫原融合或共价结合，所述免疫原例如钥孔蜮血蓝蛋白、牛血清白蛋 白、破伤风类毒素等。关于制备多克隆抗血清方法的介绍参见
Microbiology, Hoeber Medical Division, Harper 和 Row 1969; Landsteiner (1962) Specificity of Serological Reactions, Dover Publications, New York; Williams等(1967) Methods in Immunology and Immunochemistry,第1巻,Academic Press, New York;所述文 献均通过引用结合到本文中。典型方法包括用抗原超免疫动物。然 后在重复免疫后立即收集动物血液，分离Y球蛋白。
在某些情况下，需要从各种哺乳动物宿主例如小鼠、啮齿类、 灵长类、人类等制备单克隆抗体。制备所述单克隆抗体的方法介绍 见例如Stites等(主编)Basic and Clinical Immunology (第四版)， Lange Medical Publications, Los Altos, CA,以及其中的参考文献； Harlow和Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, CHS Press; Goding (1986) Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (第二版) Academic Press, New York;尤其是Kohler和Milstein (1975), Nature 256:495-497，它论述了 一种制备单克隆抗体的方法。所有这些参考 文献均通过引用结合到本文中。简而言之，这种方法包括用一种免 疫原注射免疫动物。然后处死动物，从其脾脏取出细胞，然后将其 与杂交瘤细胞融合。获得能够体外增殖的杂交细胞或"杂交瘤"。 之后，筛选杂交瘤细胞以分离单个克隆，每种克隆分泌一种抗所述 免疫原的抗体。这样，获得的各种抗体为在免疫原物质上的被识别 的特异性位点作用下产生的免疫动物的永生化单个克隆B细胞的产 物。
其它合适技术包括使淋巴细胞暴露于抗原性多肽或者选择噬菌 体或相似载体的抗体文库。参见Huse等(1989) "Generation of a Large Combinatorial Library of the Immunoglobulin Repertoire in Phage Lambda," Science 246:1275-1281; Ward 等(1989) Nature 341:544-546，均通过引用结合到本文中。本发明多肽和抗体可以修 饰后使用或者不经修饰即使用，包括嵌合抗体或人源化抗体。所述
47多肽和抗体常常通过共价或非共价与提供可检测信号的物质结合而 标记。各种各样的标记及结合技术是已知的，而且在科学及专利文 献中有广泛报道。合适标记物包括放射性核素、酶、底物、辅助因 子、抑制剂、荧光部分、化学发光部分、磁粒等。指出所述标记物
的应用的专利包括美国专利号3,817,837、 3,850,752、 3,939,350、 3,996,345、 4,277,437、 4,275,149和4,366,241。此外，可生产重组或 嵌合免疫球蛋白，参见Caliblly，美国专利号4,816,567;或者应用 转基因小鼠制备，参见Mendez等(1997) Nature Genetics 15:146-156。 这些文献通过引用结合到本文中。
本发明抗体还可用于分离DCRS5蛋白或肽的亲和层析。制备 层析柱，其中所述抗体与固体支持物结合，例如颗粒(例如琼脂糖、 Sephadex等)，其中使细胞裂解物通过层析柱，洗柱，然后增加温和 变性剂浓度，因此释放出纯化蛋白。或者，所述蛋白可用于纯化抗 体。可使用合适交叉吸收或去除。
所述方法的抗体进行标记，标记部分使得通过抗体结合可以容易地 才全测抗原的存在。
们用于检测或诊断与所述蛋白表达或表达所述蛋白的细胞有关的各 种病症。它们还可用作所述配体的激动剂或拮抗剂，其为竟争性受 体抑制剂或代替天然配体。某些受体亚单位或组合物的抗体可用作 激活抗体，它可影响信号转导，因此用作例如配体激动剂。
特异性结合针对特定免疫原(例如由SEQIDNO: 2的氨基酸序
细胞因子受体蛋白通常以免疫测定进行测定。免疫测定通常采用例 如针对例如SEQ ID NO: 2蛋白产生的多克隆抗血清。选择对其它 细胞因子受体家族成员(例如IL-12RP2受体亚单位或IL-6受体亚单 位gpl30,优选来自相同物种)交叉反应性低的抗血清，在用于免疫为了制备用于免疫测定的抗血清，如本文所述分离例如SEQ ID NO: 2的蛋白。例如可在哺乳动物细胞系中产生重组蛋白。通常使 用标准佐剂例如弗氏佐剂以及标准小鼠免疫接种方案(参见Harlow 和Lane,同上)，用选定蛋白免疫合适宿主，例如小鼠近交系(如 Balb/c)。或者，得自本文公开序列而且与载体蛋白缀合的合成肽可 用作免疫原。收集多克隆抗血清，用免疫测定(例如免疫原固定在固 体支持物上的固相免疫测定)对免疫原蛋白进行滴定。选择滴度104 或更高的多克隆抗血清，使用竟争性结合免疫测定，例如Harlow和 Lane,同上，第570-573页介绍的一种方法，测试其对其它细胞因子 受体家力矣成员如gpl30或IL-12Rpi的交叉反应性。优选在该测定中 使用至少两种细胞因子受体家族成员。这些细胞因子受体家族成员 可生产为重组蛋白，使用本文介绍的标准分子生物学及蛋白质化学 技术进行分离。
竟争性结合形式的免疫测定可用于测定交叉反应性。例如，SEQ ID NO: 2蛋白可固定在固体支持物上。加入所述测定中蛋白与抗血 清竟争性结合固定抗原。上述蛋白与抗血清竟争性结合固定蛋白的 能力与例如gpl30或IL-12RP2蛋白进行比4交。^吏用标准计算方法计 算上述蛋白的交叉反应百分率。选择并合并与以上所列各蛋白的交 叉反应性百分率低于10%的抗血清。然后用上述蛋白通过免疫吸收 ,人合并抗血清中去除交叉反应抗体。
然后免疫吸收的合并抗血清用于上述竟争性结合免疫测定，以 比较第二种蛋白与所述免疫原蛋白(例如SEQ ID NO: 2的DCRS5 样蛋白)。为了进行这种比较，分别分析广泛浓度的两种蛋白，确定 抑制50%抗血清与固定蛋白结合需要的各蛋白量。如果第二种蛋白 的需要量是选定蛋白需要量的三分之一以下，则认为第二种蛋白特 异性结合针对所述免疫原产生的抗体。
当然，这些细胞因子受体蛋白是包括许多鉴定基因的同源蛋白 家族成员。对于特定基因产物来说，例如DCRS5，该术语不仅指本文公开的氨基酸序列，而且指为等位基因、非等位基因或种变异体 的其它蛋白。还应该理解的是，该术语包括使用常规重组技术如单 一位点突变的精细突变引入的非天然突变，或者通过切除编码相应
蛋白的DNA的纟艮短部分、或取代新的氨基酸、或加入新的氨基酸
而引入的非天然突变。所述细微改变通常基本上保持原分子的免疫
特性和/或其生物活性。因此，这些改变包括与指定天然DCRS5蛋 白特异性免疫反应的蛋白。改变蛋白的生物特性可如下测定在合 适细胞系中表达所述蛋白，然后检测对例如转染淋巴细胞的合适作 用。被认为是微小改变的特定蛋白修饰包括相似化学性质氨基酸的 保守取代，见以上对整个细胞因子受体家族的论述。通过使一种蛋 白与所述细胞因子受体蛋白优化排列对比，以及使用本文介绍的常 规免疫测定测定免疫特性，人们可确定本发明的蛋白质组成。
而且，抗受体亚单位的抗体可用以空间性阻断配体结合功能受 体。所述抗体可只针对其中任何一个亚单位或针对DCRS5和 IL-12Rpi组合结构而产生。可得到抗体拮抗剂。
VII.试剂盒、诊断及定量
本发明的天然和重组形式的细胞因子受体样分子特别可用于试 剂盒和4佥测方法。例如，这些方法还可用于筛选例如配体对这些蛋 白的结合活性。近年来开发了若干自动检测方法，以便每年可筛选 成千上万的化合物。参见例如BIOMEK自动工作站，Beckman Instruments, Palo Alto, California, 以、及 Fodor 等(1991) Science 251:767-773,它们均通过引用结合到本文中。后者介绍了通过在固 体支持物上合成的多个规定聚合物的结合测试方法。提供大量纯化 活性可溶性细胞因子受体(例如本发明提供的细胞因子受体)可大大 促进开发筛选配体或激动剂/拮抗剂同源蛋白的合适方法。
纯化DCRS5可直4妻包被在板上，以用于上述配体筛选技术。 然而，上述蛋白的非中和抗体可用作捕获抗体，以使相应的受体固
50定在用于例如it断用途的固体相上。本发明还设想了 DCRS5、其片段、肽及其融合产物在检测所述蛋白或其配体的存在的各种诊断试剂盒以及方法中的应用。或者， 抗所述分子的抗体可加入所述试剂盒和方法中。通常试剂盒具有含DCRS5肽或基因节段或者识别一种或另一种物质的试剂的区室。如 果为肽，识别试剂通常为受体或抗体，如果为基因节段，则识别试 剂通常为杂交探针。其它试剂盒组分可包括与配体/受体对的p40、 IL-B30或IL-12Rpl相关的其它蛋白或试剂。测定样品的DCRS5浓度的优选试剂盒通常包括对DCRS5具有 已知结合亲和性的标记化合物如配体或抗体、作为阳性对照的 DCRS5源(天然或重组DCRS5)和分离结合标记化合物与游离标记化 合物的手段，例如固定试样中的DCRS5的固相体。通常提供包含试 剂的区室和说明书。还提供包含合适核酸或蛋白的试剂盒。哺乳动物DCRS5或肽片段或者受体片段特异性抗体(包括抗原 结合片段)可用于诊断用途，以便检测升高水平的配体和/或其片段的 存在。诊断检测可以是均相检测(没有游离试剂和抗体抗原复合物的 分离步骤)或非均相(具有分离步骤)。存在各种商业测定法，例如放 射免疫测定(RIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶免疫测定(EIA)、 酶方丈大免疫分析纟支术(EMIT)、底物标记的荧光免疫测定(SLFIA)等。 例如，可以如下^吏用未标记抗体使用标记而且识别所述抗体的第 二种抗体，前一种抗体针对细胞因子受体或其特定片段。这些检测 还在文献中有深入的i仑述。参见例如Harlow和Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, CSH.,以及Coligan (主编，1991和 定期增刊)Current Protocols In Immunology Greene/Wiley, New York。抗独特型抗体具有用作细胞因子受体的激动剂或拮抗剂的相似 用途。它们在合适条件下可用作治疗药物。一般来说，用于诊断测定的试剂以试剂盒供应，以便优化所述测定的敏感性。对于本发明目的，根据测定、方法和标记物的性质， 提供标记或未标记抗体、或者提供标记配体。通常结合提供其它添 加剂，例如緩沖剂、稳定剂、信号产生必需的物质如酶的底物等。试剂盒具有各有用试剂的区室，而且包含正确使用以及试剂处理的 说明书。最好，所述试剂以干燥冻干粉提供，其中试剂可重新配制 为含有合适浓度的水性溶液，从而进行测定。可以勿须改进直接使用所述诊断测定的上述组分，或者可以以 多种方式进行改进。例如，可通过共价或非共价连接直接或间接提 供检测信号的部分而完成标记。在其中许多测定中，可直接或间接 标记受试化合物、细胞因子受体或其抗体。可用于直接标记的标记物包括》文射性标记物如1251、酶(美国专利号3,645,090)如过氧化物 酶和碱性磷酸酶、以及能够监测荧光强度、波长位移或荧光极化变 化的荧光标记物(美国专利号3,940,475)。两个专利均通过引用结合 到本文中。可间接标记的标记物包4舌一种组分的生物素化，然后结 合与一种上述标记物偶合的抗生物素蛋白。此外，有许多分离结合配体与游离配体、或者分离结合受试化 合物或游离受试化合物的方法。细胞因子受体可固定在各种基体， 然后洗涤。合适基体包括塑料如ELISA板、滤膜和珠。使受体固定 在基体上的方法包括但不限于直接粘附到塑料上、应用捕获抗体、 化学偶合和生物素抗生物素蛋白。这种方法的最后一步包括通过若干方法中的任何一种方法沉淀抗体/抗原复合物，包括应用例如有机 溶剂如聚乙二醇或者盐如硫酸铵。其它合适的分离技术包括但不限 于Rattle等(1984) Clin. Chem. 30(9):1457-1461介绍的荧光素抗体磁 粒方法和美国专利号4,659,678介绍的双抗》兹粒分离法，它们均通过 引用结合到本文中。连接蛋白或片段与各种标记物的方法在文献中有广泛报道，在 此不需要详细论述。其中许多技术涉及应用活化羧基通过碳二亚胺52或活性酯形成肽45t、疏基与活化卣素(如氯乙酰基)反应形成碌^醚、 或者活化烯烃如马来酰亚胺，以进行连接等。融合蛋白也具有这些 用途。本发明的另 一个诊断方面涉及取自细胞因子受体序列的寡核苷 酸或多核苷酸序列的应用。这些序列可用作检测怀疑患有免疫疾病的患者的相应细胞因子受体水平的探针。制备RNA和DNA核苷酸 序列，对其进行标记，所述的序列的优选大小均在文献中有大量介 绍和论述。通常寡核苷酸具有至少约14个核苷酸，常常至少约18 个核苷酸，多核普酸探针可多至数千个碱基。可使用各种标记物， 最常用放射性核素，特别是"P。然而，也可使用其它技术，例如生 物素修饰的核苷酸引入多核苷酸。然后，生物素用作结合抗生物素 蛋白或抗体的位点，所述抗生物素蛋白或抗体可用各种标记物标记， 例如放射性核素、荧光、酶等。或者，可使用能够识別特异性双链 体(包括DNA双链体、RNA双链体、DNA RNA杂合双链体或DNA 蛋白质双链体)的抗体。然后，再标记所述抗体，进行;险测，其中所 述双链体结合在表面上，这样当在表面形成双链体时，可4全测结合 所述双链体的抗体的存在。可以用常规技术对新的反义RNA进行探 针，例如核酸杂交，加上或减去筛选，重组探测，杂交体释放的翻 译(HRT)和杂交体中止的翻译(HART)。还包括扩增技术，例如聚合 酶链式反应(PCR)。还设想了也测试其它标记的定性或定量存在的诊断试剂盒。诊 断或预后可能取决于用作标记的多个指标的综合考虑。因此，试剂 盒可测试综合标记。见，如Viallet等(1989) Progress in Growth Factor Res. 1:89-97。检测可能反映功能受体信号转导差异的多态性可用于 决定治疗策略。反映对配体的更强或更弱反应的差异可进一步区分 反应/非反应患者亚群。VIII.治疗应用本发明提供具有重要治疗价值的试剂。参见例如Levitzki (1996) Curr. Opin. Cell Biol. 8:239-244。细胞因子受体(天然或重组)、其片 段、突变蛋白受体和抗体以及经鉴定对所述受体或抗体具有结合亲 和力的化合物均可用于治疗所述受体或其配体表达异常的病症。所 述异常通常表现为免疫紊乱。参见WO 01/18051,其通过引用结合 到本文中。另外，本发明在各种与异常表达或异常引发对所述配体 的反应有关的疾病或病症方面具有治疗价值。例如，已经提出p40/IL B30配体参与细胞介导免疫的产生，例如抗肿瘤活性，建立体液和 细胞免疫以及抗病毒作用。所述配体似乎特别激活NK细胞和T细 胞。治疗可与IL-18、 IL-12、 TNF、 IFNy、放射/化疗、辅助治疗或 抗肿瘤、抗病毒、或抗真菌化合物联合应用。相反，可与TNF、 IFNy、 IL-18或IL-12拮抗剂、或与IL-IO、 或与类固醇联合应用的拮抗剂适用于慢性Thl介导性疾病、自身免 疫性疾病、或移植和/或排斥、多发性硬化、牛皮癣、慢性炎症性病 症、类风湿性关节炎、骨关节炎、或炎症性肠病。拮抗剂可以为抗 所述受体亚单位、可溶性受体结构的抗体形式，或者是一种或多种 所述受体亚单位的反义核酸。p40/IL-B30配体与受体亚单位DCRS5 和IL-12Rpi的配对对激动剂和拮抗剂的应用提供了 了解。根据所述p40/IL-B30活性，在治疗上，可溶性DCRS5(同时存 在或不存在可溶性IL-12R(31)或任一受体亚单位的抗体可实现所述 细胞因子的拮抗剂作用。拮抗剂可用作不需要免疫反应或炎症反应 的拮抗剂、用以4十对记忆T细胞，或者与IL-12/IL-12R拮抗剂或其 它抗炎剂或免疫抑制剂联合应用。临床适应症可以为慢性炎症或移 植。各种多态性可增强或降低受体功能，如果作用明显的话，可用 作治疗药物。所述变异的鉴定可进一步区分反应或非反应患者亚群。 所述试剂可用作记忆T细胞和/或NK细胞的纟全测或标记试剂或烧蚀 ^i式剂。基因治疗可使目的细胞群对p40/IL-B30配体产生反应，例如用作肿瘤免疫治疗的辅助治疗，以便促进活化肿瘤浸润淋巴细胞、T 细胞或NK细胞。反义策略可用于例如阻止受体反应。已知RNA印迹分析显示产生IL-12 p40和/或IL-B30 mRNA的 细胞类型的各种异常病症。参见Berkow(主编)The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Merck & Co., Rahway, N丄；Thorn 等， Harrison's Principles of Internal Medicine, McGraw-Hill, N.Y.; Weatherall等(主编)Oxford Textbook of Medicine, Oxford University Press, Oxford。许多其它医学病症对本发明提供的激动剂或拮抗剂治 疗有效。参见例如Stites和Terr (主编；1991) Basic and Clinical Immunology Appleton and Lange, Norwalk， Connecticut; Samter等(主 编)Immunological Diseases Little, Brown and Co.。其它可能的治疗适 应症包括骨重建、性功能异常、预防神经变性性疾病、痴呆、应激 等。这些病症易于应用本发明提供的组合物预防或治疗。可以纯化重组细胞因子受体、突变蛋白、激动剂或其拮抗剂抗 体、或抗体，然后给予患者。这些药物可与其它活性成分联合治疗 应用，例如利用常规药学上可接受的载体或稀释剂以及生理学上没 有副作用的稳定剂和赋形剂。这些组合物可以无菌(例如过滤)，用 剂量小瓶冻干，或者以稳定水性制剂保藏。本发明还设想了抗体或 其非补体结合性的结合片段的应用。利用细胞因子受体或其片段筛选配体，以鉴定对所述受体具有 结合亲和性的分子。然后利用生物学测定确定推定配体能否可阻断 固有刺激活性的竟争性结合。受体片段可用作阻滞剂或拮抗剂，因 为它阻断配体的活性。同样，具有固有刺激活性的化合物可激活所 述受体，因此为激动剂，因为它刺激配体活性，例如诱导信号转导。 本发明还设想了细胞因子受体抗体用作拮抗剂的治疗用途。有效治疗必需的试剂量取决于许多不同因素，包括给药方法、 目标部位、试剂的生理周期、药理周期、患者的生理状态和给予的 其它药物。因此，应该逐渐增加治疗剂量以达到最佳安全性和疗效。55通常体外使用剂量对于原位给予所述试剂所用的量提供有用的指 导。对特定疾病的有效治疗剂量的动物试验可进一步预示人类剂量。
在例如以下文献中介绍了对各种因素的考虑Gilman等(主编，1990) Goodman and Gilman，s: The Pharmacological Bases of Therapeutics, 第八版,Pergamon Press; Remington's Pharmaceutical Sciences,第17 片反(1990)， Mack Publishing Co., Easton， Penn.;各文献均通过引用结 合到本文中。其中以及下文讨i仑了给药方法，例如口服、静脉内、 腹膜内或肌肉内给药、透皮扩散等。药学上可接受的载体包括水、 盐7K、纟爰冲剂和例如Merck Index, Merck & Co., Rahway, New Jersey 中介绍的其它化合物。因为推定配体和其受体之间的可能的高亲和 性结合或者转换数，预期开始的低剂量的所述试剂应该有效。而且 信号转导途径提示，极低剂量的配体可能有效。因此，预期采用合 适载体时，剂量范围为低于1 mM浓度，通常低于约lOiuM浓度， 常常低于约100 nM,优选低于约10 pM(皮摩尔)，最优选低于约1 舰(费摩尔)。緩释制剂或緩释装置常常用来连续给药。
细胞因子受体、其片段、及抗体或其片段、拮抗剂、以及激动 剂可直接给予要治疗的宿主，或者根据所述化合物的大小，最好在 其给药前将其与载体蛋白如卵清蛋白或血清白蛋白缀合。治疗制剂 可以按照许多常规剂型给药。尽管所述活性成分可以单独给药，但 是优选以药用制剂给药。制剂包含至少一种以上定义的活性成分和 其一种或多种合格的载体。每种载体必须在与所述其它成分匹配和 对患者无害的意义上在药学和生理学上可接受。制剂包含适合口服、 直肠、鼻或胃肠外(包括皮下、肌肉内、静脉内和皮肉)给药的载体。 制剂可以常规以单位剂型提供，而且可用药学领域周知的方法制备。 参见例如Gilman等(主编，1990) Goodman and Gilman，s: The Pharmacological Bases of Therapeutics, 第 8版，Pergamon Press; Remington's Pharmaceutical Sciences, 第 17 版(1990)， Mack Publishing Co.， Easton, Penn.; Avis等(主编,1993) PharmaceuticalDosage Forms: Parenteral Medications Dekker， NY; Lieberman等(主 编，1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets Dekker, NY; Lieberman等(主编,1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems Dekker, NY。本发明疗法可与其它治疗药物、尤其是其它细 胞因子受体家族成员的激动剂或拮抗剂联合应用或结合使用。
IX.筛选
可用DCRS5或其片段进行药物筛选，以鉴定对所述受体单位 具有结合亲和力的化合物，包括分离结合组分。然后，可应用后续
剂或拮抗剂，因为它阻断配体的活性。
p40/IL-B30配体与功能受体DCRS3和IL-12R卩1的匹配使得可 筛选拮抗剂和具有正信号转导控制的激动剂。可进行小分子或抗体筛选。
一种药物筛选方法利用表达DCRS5和另一种细胞因子受体亚单 位例如IL-12Rpl的重组DNA分子稳定转化的真核宿主细胞或原核 宿主细胞。据认为信号转导利用STAT4。分离表达独立于其它功能 受体的受体的细胞。可将活的或固定的所述细胞用于标准抗体/抗原 或配体/受体结合测定。参见例如Parce等(1989) Science 246:243-247; Owicki等(19卯)Proc. Nat，l Acad. Sci. USA 87:4007-4011 ，该文献了检 测细胞反应的敏感方法。竟争性结合测定特别有用，其中使细胞与对 所述配体具有已知结合亲和性的标记受体或抗体接触温育，例如'251-抗体，然后测定试样对结合组合物的结合亲和性。之后分离结合与游 离标记结合组合物，以评价配体结合程度。结合的受试化合物量与标 记受体对已知来源的结合量成反比。许多技术可用来分离结合与游离 配体以评价配体结合程度。分离步骤通常包括的程序例如为粘附至 滤膜上然后洗涤，粘附至塑料上然后洗涤，或离心细胞膜。活细胞也 可用来筛选药物对细胞因子介导功能的影响，例如STAT4信号转导等。某些检测方法可以消除分离步骤，例如近接敏感检测系统。
参考以下实施例可深入理解本发明的广泛范围，而下列实施例 不是用来将本发明限制于具体实施方案。
实施例
I.通用方法
标准方法在例如以下文献中有介绍或涉及Maniatis等(1982) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory: Cold Spring Harbor Press; Sambrook等(1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual,(第2版)，第1-3巻，CSH Press, NY;或者Ausubel 等(1987和增刊)Current Protocols in Molecular Biology, Greene/Wiley, NewYork。蛋白纯化方法包括例如硫酸铵沉淀、柱层析、电泳、离心、 结晶等。参见例如Ausubel等(1987和定期出版的增刊)；Coligan等(主 编，1996)和定期出； 反的增刊，Current Protocols In Protein Science Greene/Wiley, New York; Deutscher (1990) "Guide to Protein Purification" , Methods in Enzymology,第82巻，以及该系歹'J的其它 巻号；以及生产商关于蛋白纯化产物的应用的文献，例如Pharmacia, Piscataway, N.J.，或Bio-Rad， Richmond, CA。与重组技术联合应用寸吏 得可融合至合适节段，例如通过蛋白酶取出序列融合的FLAG序列或 等同4勿。参见例唢口 Hochuli (1990) "Purification of Recombinant Proteins with Metal Chelate Absorbent",载于Setlow(主编)Genetic Engineering, Principle and Methods 12:87-98， Plenum Press, N.Y.; Crowe等(1992) QIAexpress: The High Level Expression & Protein Purification System QUIAGEN， Inc., Chatsworth, CA。
例如使用计算机软件程序进行计算机序列分析，例如GCG( U. Wisconsin)和GenBank来源的程序。公共序列数据库也可使用，例如 GenBank等数据库。
适用于IL-10受体的许多方法可用于DCRS5，例如美国专利号 5,789,192(IL-10受体)所述，其通过引用结合到本文中。II. 功能克隆
观测到抗hIL-12R(31抗体阻断人T细胞对p40/IL-B30的反应，以 及阻断p40/IL-30B结合IL-12R(31。提示IL-12R(31是p40/IL-B30的受
体复合物的一个亚单位。
鉴定了对p40/IL-B30反应但是对IL-12不反应的小鼠T细胞群， 以及对IL-12反应但是对p40/IL-B30不反应的另 一种T细胞群。此外， 观测到表达重组mlL-12R卩l和mlL-12R卩2的Ba/F3细胞对IL-12反应， 但是对p40/IL-B30不反应。综合上述结果表明，p40/IL-B30的受体复 合物包含IL-12RP1和至少一种非IL-12RP2的其它亚单位。因此，设 计表达克隆策略，以分离所述第二种受体组分。
用从Kit225细胞(对IL-12和p40/IL-B30均反应的IL-2依赖性人 T细胞系)分离的mRNA制备cDNA文库。用反转录病毒表达载体pMX 制备cDNA文库。用该cDNA文库感染表达重组hIL-12R|31的Ba/F3 细胞，使其在IL-3中恢复3-4天，然后用含50 ng/ml hyper-hp40/hIL-B30 的培养基洗涤并以约15,000细月包/孔4妄种在96孔板中。见WO 01/18051。培养物每约5天补充额外的hyper-hp40/hIL-B30。约2周后， 5-10%孔细胞生长。从各孔收集细胞，用hyper-hp40/hIL_B30分别进 一步扩大培养，测试对hyper-hp40/hlL-B3 0的生长依赖性。
通过PCR分析p40/IL-B30依赖性生长细胞的反转录病毒cDNA 插入片段。分析了其中40个以上的分离物，所有分离物(除1个夕卜) 包含编码新的受体DCRS5的cDNA。将该候选人cDNA克隆入表达 载体，并转染入表达hlL-12R(M的Ba/F3纟田月包。这些细胞成为对 p40/IL-B30反应的细胞；因此，我们的结i仑是，新的cDNA编码目的 DCRS5,它为功能性IL-B30受体亚单位。
III. 全长DCRS5的特征；染色体定位
DCRS5的胞质结构域整体上不与其它细胞因子受体胞质结构域 (在该家族分子中X!i测到的共有结构域)密切相关。所述胞质结构域包
59含7个tyr残基，至少其中3个构成可识别的SH2-结合基元YEDI、 YKPQ和YFPQ的组成部分。YEDI基元类似于鉴定的酪氨酸》粦酸 酶shp2的结合位点。后两个基元分别非常类似于已知结合Statl/Stat3 或Stat3的序列。YKPQ基元与邻近侧翼序列在一定程度上类似于已 知结合Statl-3的Stat4和IL-12Rp2中的基元。这与初步的数据一致， 说明p40/IL-B30如IL-12激活Stat4。
得自DCRS5序列的PCR引物用来探测人cDNA文库。序列可得 自例如表1 ，优选邻近序列末端的序列。例如通过XgtlO噬菌体的DNA 杂交筛选克隆灵长类、啮齿类或其它物种DCRS5的全长cDNA。使 用T. aquaticus Taqplus DNA聚合酶(Stratagene)在合适条件下进行PCR 反应。
比较染色体分布制品。对用培养72小时的植物凝集素刺激的人 淋巴细胞获得的染色体制品进行原位杂交。在培养的最后7小时加入 5-溴脱氧尿苷(60 pg/ml培养基)，保证杂交后染色体形成良好的带。
将借助于引物扩增的PCR片段克隆入合适载体。用SH通过缺口 翻译标记载体。如Mattei等(1985) Hum. Genet. 69:327-331所述，以 200 ng/ml终浓度的杂交溶液使放射性标记的探针与分开的中期染色 体杂交。
用核示踪乳液(KODAKNTB2)包被后，使载玻片曝光。为了避免 形成带方法中的任何银颗粒滑动，首先用緩冲的姬姆沙溶液将分开的 中期染色体染色，并照相。然后通过荧光染料-光解-姬姆沙(FPG)方法 形成R带，再照相，然后分析。
相似的合适方法用于其它物种。
IV. DCRS5 mRNA的定位
包含约2吗poly(A)+RNA/道的人多组织(Cat弁1, 2)和癌细胞系印 迹(Ca说7757-l)购自Clontech (Palo Alto， CA)。例如4吏用Amersham Rediprime随机引物标记试剂盒(RPN1633)用[oc-32P] dATP放射性标记探针。例如于65。C在0.5 M Na2HP04, 7% SDS， 0.5 M EDTA (pH 8.0) 中进行预杂交和杂交。例如开始于65。C在2 x SSC, 0.1% SDS中洗涤 40分钟，然后在0.1 x SSC， 0.1% SDS中洗涤20分钟，从而进行严格 洗涤。之后将膜于-70。C对X光胶片(Kodak)在存在增感屏下曝光。用 选定的合适人DCRS5克隆通过cDNA文库的DNA印迹进4于更详细的 研究，以;险测其在造血细胞或其它细胞亚群中的表达。
或者，从表1选择2个合适引物。对根据存在信使RNA选择的 合适mRNA样品(例如表达所述基因的样品)使用RT-PCR以获得 cDNA。
通过PCR信号预选择的合适组织的cDNA文库的杂交分离全长 克隆。可进^f亍RNA印迹。
利用合适技术如PCR、免疫测定、杂交等分析编码DCRS5的基 因的信息。组织和器官cDNA制品可得自例如Clontech, Mountain View， CA。如上所述，鉴定天然表达的来源是有用的。而鉴定功能受体亚单
体亚单位。
对于小鼠分布，例如可进行DNA印迹分析用合适限制酶消化 第一次扩增的cDNA文库的DNA (5 )ig)，释放插入片段，在1%琼脂 糖凝胶上电泳，然后转移到尼龙膜上(Schleicher和Schuell, Keene， NY)。
小鼠mRNA分离样品包括静止的小鼠成纤维L细胞系(C200); Braf:ER(雌激素受体的Braf融合物)转染细胞，对照(C201》T细胞， TH1型极化(脾细胞的Mel14亮、CD4+细胞，用IFN-y和抗IL-4极化7 天；T200); T细胞，TH2型极化(脾细胞的Mell亮、CD4+细胞，用 IL-4和抗IFN-y极化7天；T201); T细胞，高度TH1型极化(参见 Openshaw等(1995) J. Exp. Med. 182:1357-1367;用抗CD3活化2、 6、 16小时，合并物；T202); T细胞，高度TH2型极化(参见Openshaw 等(1995)J.Exp. Med. 182:1357-1367;用抗CD3活化2、 6、 16小时，合并物；T203); CD44-CD25+pre T细胞，从胸腺分选出(T204); TH1T细胞克隆Dl.l，最后一次抗原刺激后静息3周(T205); TH1 T纟田月包克隆Dl,l， 10吗/ml ConA刺激15小时(T206);TH2T细胞克隆CDC35,最后一次抗原刺激后静息3周(T207); TH2 T细胞克隆CDC35, 10|ag/ml ConA刺激15小时(T208);脾的Mdl4+原初T细胞，静息(T209);Mell4+T细胞，用IFN-y/IL-12/抗IL-4极化为Thl 6、 12、 24小时，合并物(T210); Mell4+T细胞，用IL-4/抗IFN-Y极化为Th2 6、 13、 24小时，合并物(T211);未刺激的成熟B细胞白血病细胞系A20(B200);未刺激的B细胞系CH12 (B201);未刺激的脾大B细胞(B202);整个脾的B细胞，LPS活化(B203);曱泛影酰胺富集的脾树突细胞，静息(D200);骨髓树突细胞，静息(D201);用LPS活化4小时的单核细胞系RAW 264.7(M200);用GM和M-CSF衍生的骨髓巨噬细胞(M201);巨噬细胞系J774，静息(M202);巨嗟细胞系J774 + LPS +抗IL-10,0.5、 1、 3、 6、 12小时，合并物(M203);巨噬细胞系J774 + LPS + IL-10，0.5、 1、 3、 5、 12小时，合并物(M204);气雾剂刺激的小鼠肺组织，Th2型激发，气雾剂OVA刺激7、 14、 23小时，合并物(参见Gariisi等(1995) Clinical Immunology and Immunopathology 75:75-83, X206);曰圆线虫感染的肺组织(参见Co伤舰等(1989) Science 245:308-310;X200);完整成年肺，正常(O200);完整肺，rag-l (参见Schwarz等(1993)Immunodeficiency 4:249-252; O205); IL-10 K.O.脾(参见Kuhn等(1991)Cell 75:263-274; X201);完整成年脾，正常(O201);完整脾，rag-l(O207); IL-10K.O.集合淋巴结(O202);完整,正常(O210); IL-10K.O.肠系膜淋巴结(X203);完整肠系膜淋巴结，正常(0211); IL-10 K.O.结肠(X203);完整结肠，正常(0212); NOD小鼠胰腺(参见Makino等(1980) JikkenDobutsu 29:1-13; X205);完整胸腺，rag-l (O208);完整肾脏，rag-l (O209);完整心脏，rag-l (O202);完整大脑，rag-l (O203);完整睾丸，rag-l (〇204);完整肝脏，rag-l (〇206);大鼠正常关节组织(O300);大鼠关节炎性关节组织(X300人mRNA分离样品包括外周血单核细胞(单核细胞、T细胞、NK细胞、粒细胞、B细胞)，静息(T100);外周血单核细胞，用抗CD3活化2、 6、 12小时，合并物(T101); T细胞，TH0克隆Mot72,静息(T102); T细胞，TH0克隆Mot 72，用抗CD28和抗CD3活化3、 6、12小时，合并物(T103); T细胞，TH0克隆Mot72,用特异性肽无变应性处理7、 12小时，合并物(T104); T细胞，TH1克隆HY06，静息(T107); T细月包，TH1克隆HY06,用抗CD28和抗CD3活化3、 6、12小时，合并物(T108); T细胞，TH1克隆HY06,用特异性肽无变应性处理2、 6、 12小时，合并物(T109); T细胞，TH2克隆HY935,静息(T110); T细胞，TH2克隆HY935,用抗CD28和抗CD3活化2、7、 12小时，合并物(T111); T纟田胞CD4+CD45RO:用抗CD28、 IL-4和抗IFNy极化27天的T细胞，TH2型极化，用抗CD3和抗CD28活化4小时(T116); T细胞肿瘤系Jurkat和Hut78，静息(T117); T细胞克隆，合并物的AD130.2、 Tc783.12、 Tc783.13、 Tc783.58、 Tc782.69,静息(T118); T细胞随机y5 T细胞克隆，静息(T119);脾细胞，静息(B100);脾细月包，用抗CD40和IL-4活化(B101); B细胞EBV系，合并的WT49、 RSB、 JY、 CVIR、 721.221、 RM3、 HSY，静息(B102);B细胞系JY,用PMA和离子霉素活化1、 6小时，合并物(B103);合并的NK20克隆，静息(K100);合并的NK20克隆，用PMA和离子霉素活化6小时(K101); NKL克隆，得自LGL白血病患者的外周血，IL-2处理(K106); NK细胞毒性克隆640-A30-1 ，静息(K107);造血前体细胞系TF1，用PMA和离子霉素活化1、 6小时，合并物(C100);U937前单核细胞系，静息(M100); U937前单核细胞系，用PMA和离子霉素活化l、 6小时，合并物(M101);淘洗的单核细胞，用LPS、IFNy、抗IL-10活化1、 2、 6、 12、 24小时，合并物(M102);淘洗的单核细胞，用LPS、 IFNy、 IL-10活化1、 2、 6、 12、 24小时，合并物(M103);淘洗的单核细胞，用LPS、 IFNy、抗IL-10活化4、 16小时，合并物(M106);淘洗的单核细胞，用LPS、 IFNy、 IL-10活化4、
6316小时，合并物(M107);淘洗的单核细胞，用LPS活化1小时(M108);淘洗的单核细胞，LPS活化6小时(M109); DC70% CDla+，得自CD34+GM-CSF 、 TNFa 12天，静息(D101); DC70% CDla十，得自CD34+GM-CSF、 TNFa 12天，用PMA和离子霉素活化1小时(D102);DC70%CDla+，得自CD34+GM-CSF、 TNFa 12天，用PMA和离子霉素活化6小时(D103); DC95%CDla+,得自CD34+GM-CSF、 TNFot12天，FACS分选，用PMA和离子霉素活化1、6小时，合并物(D104);DC95%CDla+,没有CD34+GM-CSF、 TNFa 12天，FACS分选，用PMA和离子霉素活化1、 6小时，合并物(D105); DC CDla+CD86+,得自CD34+GM-CSF、 TNFa 12天，FACS分选，用PMA和离子霉素活化l、 6小时，合并物(K106); DC，得自单核细胞GM-CSF、 IL-4 5天，静息(D107); DC，得自单核细胞GM-CSF、 IL-4 5天，静息(D108);DC,得自单核细胞GM-CSF、 IL-4 5天，用LPS活化4、 16小时，合并物(D109); DC，得自单核细胞GM-CSF、 IL-4 5天，用TNFa、单核细胞上清液(supe)活化4、 16小时，合并物(D110);平滑肌瘤Lll良性肿瘤(X101);正常子宫肌层M5(0115);恶性平滑肌瘤GS1 (X103);肺成纤维细胞肉瘤系MRC5，用PMA和离子霉素活化1、 6小时，合并物(C101);肾上皮癌细^^系CHA，用PMA和离子霉素活化1、 6小时，合并物(C102);雄性28周胚胎肾(O100);雄性20周胚胎肺(O101);雄性28周胚胎肝脏(O102);雄性28周胚胎心脏(O103);雄性28周胚胎大脑(O104);雄性28周胚胎膀胱(O106);雄性28周胚胎小肠(O107);雄性28周胚胎脂肪组织(O108);雌性28周胚胎卵巢(O109);雌性28周胚胎子宫(O110);雄性28周胚胎睾丸(Ol 11);雄性28周胚胎脾(0112);成熟28周胎盘(〇113); 12岁龄发炎的扁桃体(XI00)。
可分离其它物种的相似样品进行评价。V. 克隆DCRS5的物种相应物
各种策略用来获得DCRS5的种相应物，优选其它灵长类或啮齿类。 一种方法是使用密切相关的种DNA探针的交叉杂交。该方法可用来作为中间步骤研究进化相似的物种。另 一种方法是使用基于鉴定基因之间的相似或不同区段的特异性PCR引物，例如高度保守或非保守多肽或核苷酸序列区段。
数据库检索可鉴定相似序列，可获得合适探针。
VI. 产生哺乳动物DCRS5蛋白
工程合适的融合构建物(如GST)用于在例如大肠杆菌中表达。例如构建小鼠IGIF pGex质粒，转化入大肠杆菌。例如在包含50 |ug/ml氨节青霉素的LB培养基中培养新转化的细胞，用IPTG(Sigma， St.Louis， MO)诱导。诱导过夜后，收获细菌，分离含DCRS5蛋白的沉淀。例如用2 L TE缓沖液(50 mM Tris-石威pH 8.0， 10 mM EDTA和2 mMpefabloc)匀化沉淀。使其通过微型流化仪(Microfluidics， Newton， MA)3次。液化上清液用Sorvall GS-3转子以13,000 rpm离心1小时。过滤所得的包含所述细胞因子受体蛋白的上清液，通过用50 mM Tris-石咸pH 8.0平衡的谷胱甘肽-SEPHAROSE柱。合并含DCRS5-GST融合蛋白的流分，例如用;疑血酶(Enzy me Research Laboratories, Inc., SouthBend， IN)切割。切割的合并物然后通过用50 mM Tris-碱平衡的Q-SEPHAROSE柱。合并含DCRS5的流分，用冷的蒸馏水稀释，以降低导电性，再次通过新的Q-Sepharose柱，或者4妻着再通过免疫亲和抗体柱。合并含DCRS5蛋白的流分，等分，贮藏于-70。C冷藏机。
比较细胞因子受体蛋白的CD语提示，所述蛋白正确折叠。参见Hazuda等(1969) J. Biol. Chem. 264:1689-1693。
VII. 制备DCRS5特异性抗体
用重组型所述蛋白，例如纯化DCRS5或稳定转染的NIH-3T3细胞，腹膜内免疫近交Balb/c小鼠。用蛋白在合适时间点加强免疫小鼠，用额外的佐剂或不用额外的佐剂，以便进一步刺激产生抗体。收集血 清，或者用收获的脾细胞制备杂交瘤。
Balb/c小鼠，或者用富集表达所述抗原的分离膜免疫小鼠。适当时， 通常在进一步给予数次后，收集血清。各种基因治疗技术可用于例如 原位产生蛋白，以便产生免疫反应。可交叉吸收或免疫选择血清或抗 体制品，从而制备特定特异性和高度亲和性的大致纯抗体。
可制备单克隆抗体。例如使脾细胞与合适融合伴侣融合，在生长 培养基中通过标准方法选择杂交瘤。通过ELISA或其它测定筛选杂交 瘤上清液中的结合DCRS5的抗体的存在。还选择或制备特异性识别 具体DCRS5的抗体。
另一种方法中，将合成肽或纯化蛋白提呈给免疫系统，以产生单 克隆抗体或多克隆抗体。参见例如Coligan (主编，l"l) Current Protocols in Immunology Wiley/Greene; Harlow 和 Lane (1989) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press。 适当的'l"青 况下，结合试剂或者如上所述用例如荧光或其它方法标记，或者固定 在用于淘选方法的支持物上。核酸也可导入动物细胞产生抗原，抗原 再刺激免疫反应。参见例如Wang等(1993) Poc. Nat，l. Acad. Sci. 90:4156-4160; Barry等(1994) BioTechniques 16:616-619; Xiang等(1995) Immunity 2:129-135。
VIII.产生DCRS5的融合蛋白
用DCRS5制备各种融合构建物，包括组合它与IL-12Rpl序列的 实施方案。将合适基因的一部分与表位标记融合，例如FLAG标记， 或者构建双杂交系统。参见例如Fields和Song (1989) Nature 340:245-246。
表位标记可用于用抗FLAG抗体检测的表达克隆方法，以检测结 合配偶体，例如相应细胞因子受体的配体。双杂交系统也可用来分离特异性结合DCRS5的蛋白。
IX. 结构活性关系
采用标准方法和分析确定特定残基的重要信息。例如通过在确定 位点(例如在以上鉴定的位点)产生许多不同变异，评价所述变异体的 生物活性，从而进行标准突变分析。可进行到确定改进活性的位点的 程度，或者集中在特定位点以确定保留、阻断或改进生物活性的可取 代残基。
或者，天然变异体分析可揭示什么位点耐受天然突变。这种结果 得自个体变异的群体分析或跨品系或物种的变异群体分析。分析选定 个体的样品，例如应用PCR分析和测序。这可评价群体多态性。
X. DCRS5和IL-12RP1的共表达
编码相应基因的载体可转染入细胞。优选所述载体含有选择标 记，以鉴定哪些细胞成功转化。两种基因的共表达使两种基因产物正 确締合形成活性受体复合物。
或者，可用使功能二聚体締合的方法。参见例如0，Shea等(1989) Science 245:646-648; Kostelny等(1992) J. Immunol. 148:1547-1553; Patel等(1996) J. Biol. Chem. 271: 30386-30391。胞外结构域表达和物 理締合，例如Fos/Jun亮氨酸拉链式亲和力驱动的物理締合，产生配 体结合结构，该结构用作诊断作用或治疗作用的结合化合物。
本文中引用的所有参考文献通过引用结合到本文中，其引用程度 如同各个出版物或专利申请特别具体指出的引用结合。
可在不偏离本发明精神和范围的情况下对本发明进行许多改进 和改变，这对本发明技术人员而言是显而易见的。本文所述具体实施 方案仅仅是举例性提供，本发明由所附权利要求书和所述权利要求主 题的完全等同范围限定；而本发明不受本文举例性提供的具体实施方 案限制。
67序列表
<110>先灵公司
〈120>哺乳动物受体蛋白、相关试剂及方法
〈130〉 DX01074
<140> PCT/US01/15057
<150> US 60/203,426 <151> 2000-05-10
<160> 5
<170〉 Patentln Ver. 2. 0
<210〉 1 <211〉 2859 <212> DNA <213〉未知
<220>
<223>未知生物描述:灵长类；推测为人类
<220〉
<221〉 CDS
<222> (119). . (2005) 〈220〉
<221〉成熟肽
<222> (188). . (2005)
<220〉
<221> misc一feature
<222> (1).. (2859)
<223> Xaa根据遗传密码翻译
<400〉 1
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aat act tat ttt cca caa aat att ttg gaa age cac ttc aat agg att 1990 Asn Thr Tyr Phe Pro Gin Asn lie Leu Glu Ser His Phe Asn Arg lie 590 595 600
tea etc ttg gaa aag tagagctgtg tggtcaaaat caatatgaga aagctgeett 2045 Ser Leu Leu Glu Lys 605
gcaatctgaa cttgggtttt ccctgcaata gaaattgaat tctgcctctt tttgaaaaaa 2105 atgtattcac atacaaatct tcacatggac acatgttttc atttcccttg gataaatacc 2165 taggtagggg attgetggge catatgataa gcatatgttt cagttctacc aatcttgttt 2225 ccagagtagt gacatttctg tgctcctacc atcaccatgt aagaattccc gggagctcca 2285 tgecttttta attttageca ttcttctgcc tmatttctta aaattagaga attaaggtcc 2345
tggtcacaca tacaggcaca aaaacagcat gtc肌ctatt tcctctttat tttccctcat aaaacagctc tctattgtgt acagaaaggg taaat認tgc aaaatacctg gtagtaaaat 2525 aaatgctgaa aattttcctt taaaatagaa teattaggee aggcgtggtg getcatgett 2585 gtaatcccag cactttggta ggctgaggtr ggtggatcd ctgaggtcag gagttcgagt 2645 ccagcctggc caatatgetg aaaccctgtc tcUictaa肌ttac肌aaat tagccggcca 2705 tgg'tggcagg tgcttgtaat cccagctact tgggaggctg aggcaggaga atcacttgaa 2765 ccaggaaggc agag-gttgea ctgagctgag attgtgccac tgcactccag cct,gggcaac 2825 aagfigc犯agi ctct.gtctgg犯犯33冊aa 2859
〈210〉 2 〈211〉 629 <212〉 PRT 〈213〉末知
〈400〉 2
Met八sn Xaa Val Thr lie Gin Trp Asp Ala Val -20 -15
lie Ala Leu Tyr工le —10
Leu Phe Ser Trp Cys His Gly Gly lie Thr Asn lie Asn Cys Ser Gly
-5 -l 1
5His lie Trp Val Glu Pro Ala Thr lie Phe Lys Met Gly Met Asn lie 10 15 20 25
Ser lie Tyr Cys Gin Ala Ala lie Lys Asn Cys Gin Pro Arg Lys Leu 30 35 40
His Phe Tyr Lys Asn Gly lie Lys Glu Arg Phe Gin lie Thr Arg lie 45 50 55
Asn Lys Thr Thr Ala Arg Leu Trp Tyr Lys Asn Phe Leu Glu Pro His 60 65 70
Ala Ser Met Tyr Cys Thr Ala Glu Cys Pro Lys His Phe Gin Glu Thr 75 80 85
Leu lie Cys Gly Lys Asp lie Ser Ser Gly Tyr Pro Pro Asp lie Pro 90 95 100 105
Asp Glu Val Thr Cys Val lie Tyr Glu Tyr Ser Gly Asn Met Thr Cys 110 115 120
Thr Trp Asn Ala Xaa Lys Leu Thr Tyr lie Asp Thr Lys Tyr Val Val 125 130 135
His Val Lys Ser Leu Glu Thr Glu Glu G丄u Gin Gin Tyr Leu Thr Ser 140 145 150
Ser Tyr lie Asn lie Ser Thr Asp Ser Leu Gin Gly Gly l'ys Lys Tyr 155 160 165
Leu Val Trp Val Gin Ala Ala Asn Ala Leu Gly Met Glu Glu Ser Lys 170 175 180 185
Gin Leu Gin lie His Leu Asp Asp lie Val lie Pro Ser Ala Ala Val 190 195 200
工le Ser Arg Ala Glu Thr lie Asn Ala Thr Veil Pro Lys Thr lie lie 205 210 215
Tyr Trp Asp Ser Gin Thr Thr lie Glu Lys Val Ser Cys Glu Met Arg 220 225 230
Tyr Lys Ala Thr Thr Asn G]n Thr Trp Asn Val Lys (;lu Phe Asp Thr 235 240 245
Asn Phe Thr Tyr Val Gin Gin Ser Glu Phe Tyr Leu Glu Pro Asn工]e 250 255 260 265
73Lys Tyr Val Phe Gin Val Arg Cys Gin Glu Thr Gly Lys Arg Tyr Trp 270 275 280
Gin Pro Trp Ser Ser Pro Phe Phe His Lys Thr Pro Glu Thr Val Pro 285 290 295
Gin Val Thr Ser Lys Ala Phe Gin His Asp Thr Trp Asn Ser Gly Leu 300 305 310
Thr Val Ala Ser lie Ser Thr Gly His Leu Thr Ser Asp Asn Arg Gly 315 320 325
Asp lie Gly Leu Leu Leu Gly Met lie Val Phe Ala Val Met Leu Ser 330 335 340 345
lie Leu Ser Leu lie Gly lie Phe Asn Arg Ser Phe Arg Thr Gly lie 350 355 360
Lys Arg Arg lie Leu Leu Leu lie Pro Lys Trp Leu Tyr Glu Asp lie 365 370 375
Pro Asn Met Lys Asn Ser Asn Val Val Lys Met Leu Gin Glu Asn Ser 380 385 390
Glu Leu Met Asn Asn Asn Ser Ser Glu Gin Val Leu Tyr Val Asp Pro 395 400 405
Met lie Thr Glu lie Lys Glu lie Phe lie Pro Glu His Lys Pro Thr 410 415 420 425
Asp Tyr Lys Lys Glu Asn Thr Gly Pro Leu Glu Thr Arg Asp Tyr Pro 430 435 440
Gin Asn Ser Leu Phe Asp Asn Thr Thr Val Val Tyr Tie Pro Asp Leu 445 450 455
Asn Thr Gly Tyr Lys Pro Gin lie Ser Asn Phe Leu Pro Glu Gly Ser 460 465 470
His Leu Ser Asn Asn Asn Glu lie Thr Ser Leu Thr Leu Lys Pro Pro 475 480 485
Val Asp Ser Leu Asp Ser Gly Asn Asn Pro Arg Leu Gin Lys His Pro 490 495 500 505
Asn Phe Ala Phe Ser Vsl Ser Ser Val Asn Ser Leu Ser Asn Thr Tie 510 515 520
Phe Leu Gly Glu Leu Ser Leu lie Leu Asn Gin Gly Glu Cys Ser Ser525 530 535
Pro Asp lie Gin Asn Ser Val Glu Glu Glu Thr Thr Met Leu Leu Glu 540 545 550
Asn Asp Ser Pro Ser Glu Thr lie Pro Glu Gin Thr Leu Leu Pro Asp 555 560 565
Glu Phe Val Ser Cys Leu Gly lie Val Asn Glu Glu Leu Pro Ser lie 570 575 580 585
Asn Thr Tyr Phe Pro Gin Asn lie Leu Glu Ser His Phe Asn Arg lie 590 595 600
Ser Leu Leu Glu Lys 605
<210> 3 <211> 1887 <212> DNA 〈213〉反向翻译
<220>
<221〉 misc一feature
<222> (1).. (1887)
<223> n可为a， c， g成t
<400> 3
Eitg肌ycayg tn;acn3thc3 rtgggaygcn gtnathgcny tntayathyt nttywsntgg 60
tgycsyggng grmthacnaa yath肌ytgy wsnggncayei thtgggtnga rccngcnacn 120
athttyaara tgggnatgaa yathwsnath taytgycarg cngcnathfia raaytgycar 180
ccnmgnaary tncayttyta yaaraayggn athaargarm gnttycarat hacnmgnath 240
aayaaracna cngcnmgnyt ntggtayaar aayttyytng arccncaygc nwsnatgtay 300
tgyacngcng artgyccnaa rcayttycar gaxacnytna thtgyggnaa rgayathwsn 360
wsnggnta,yc cnccngayat hccngaygar gtnacntgyg tnathtayga rtaywsnggn 420
aayatgacnt gyacntggaa ygcrmignaar ytnacntaya "thgayacnaa rtaygtngtn 480
caygtrmarw snytngarac ngargargar carceirtsyy tneicnwsnws ntayathaay 540
athwsnacng aywsnytnca rggnggnaar aartayytng tntgggtnca rgcngcnaay 600gcnytnggna tggargarws naarcarytn wsngcngcng tnathwsnmg ngcngaracn taytgggayw sncaxacrmc nathgaraax acnsaycara cntgg犯ygt naargartty garttyt3yy tngarccn朋y3th犯rt3y aarmgntayt ggcarccntg gwsnwsnccn cargtnac丽snaargcntt ycarcaygay athwsnacng gncayytnac nwsngayaay athgtnttyg cngtnatgyt nwsnathytn mgnacnggna thaarmg围g rmthytnytn ccrmay3tga axaaywsn犯ygtngtrmar aayaaywsnw sngarcargt nytnteygtn ttyathccng arcay犯rcc nacngaytay mgngaytayc cncaraayws nytnttygay aayacnggnt ayaarccnca rathwsnaay aayaaygara thacnwsnyt rmcnytnaar aayccnmgny tncaraarca yccrmaytty wsnaayacna thttyytngg ngaxytnwsn ccngayathc araaywsngt: ngargaxgar wsngaracna thccngarca racnytnytn gtnaaygarg arytnccnws nathaayacn ttyaaymgna thwsnytnyt ngaraar
〈210〉 4 〈211〉 918 〈212〉 PRT <213〉未知
carathcayy tngaygayat hgtnathccn 660 3thaaygcna cngtnccrma racimthath 720 gtnwsntgyg aratgmgnta yaargcnacn 780 gayacnaayt tyacntaygt ncaxcarwsn 840 gtnttycarg tnmgntgyc3 rgaracnggn 900 ttyttycaya aracnccnga racngtnccn 960 acntggaayw snggnytnac ngtngcnwsn 1020 mgnggngaya thggnytnyt nytnggnatg 1080 wsnytnathg gnathttyaa ymgnwsntty 1140 ytnathccna artggytnta ygaxgayath 1200 atgytncarg araaywsnga rytnatgaay 1260 gayccrmtga thacngarat haargarath 1320 肪raargara ayacnggncc nytnga_racn 1380 aayacrmcng tngtntayal: hccngayytn 1440 ttyytnccng arggnwsnca yytnwsnaay 1500 ccnccngtng aywsnytnga ywsnggnaay 1560 gcnttywsng tnwsnwsngt naaywsnytn 1620 ytnathytna aycaxggnga rtgywsnwsn 1680 acnacnatgy tnytngaraa ygaywsnccn 1740 ccngaygart tygtnwsntg yytnggrmth 1800 tayttyccnc araayathyt ngarwsncay 1860
1887
76<220>
<223〉未知生物描述:灵长类；推测为人类 <400> 4
Met Leu Thr Leu Gin Thr Trp Val Val Gin Ala Leu Phe lie Phe Leu 5 10
1
15
Thr Thr Glu Ser Thr Gly Glu Leu Leu Asp Pro Cys Gly Tyr lie Ser
20 25
30
Pro Glu Ser Pro Val Val Gin Leu His Ser Asn Phe Thr Ala Val Cys
35 40 45
Val Leu Lys Glu Lys Cys Met Asp Tyr Phe His Val Asn Ala Asn Tyr
50 55 60
lie Val Trp Lys Thr Asn His Phe Thr lie Pro Lys Glu Gin Tyr Thr
65
70
75 80
lie lie Asn Arg Thr Ala Ser Ser Val Thr Phe Thr Asp lie Ala Ser
85 90
95
Leu Asn lie Gin Leu Thr Cys Asn lie Leu Thr Phe Gly Gin Leu Glu
100 105
110
G丄n Asn Val Tyr Gly lie Thr lie lie Ser Gly Leu Pro Pro Glu Lys
115
120
125
Pro Lys Asn Leu Ser Cys Tie Val Asn Glu Gly Lys Lys Met Arg Cys
130
135
140
Glu Trp Asp Gly Gly Arg Glu Thr llis Leu Glu Thr Asn Phe Thr Leu
145
150
155 160
Lys Ser Glu Trp Ala Thr His Lys Phe Ala Asp Cys Lys Ala Lys Arg'
165 170
175
Asp Thr Pro Thr Ser Cys Thr Val Asp Tyr Ser Thr Val Tyr Phe Val
180 185
190
Asn lie G]u Val Trp Val Glu Ala Glu Asn Ala Leu Gly Lys Val Thr
195
200
205
Ser Asp His lie Asn Phe Asp Pro Val Tyr Lys Val Lys Pro Asn Pro
210
215
220
Pro His Asn匕eu Ser Val lie Asn Ser Glu G]u Leu Ser Ser I]e Leu
225 230
235 240Lys Leu Thr Trp Thr Asn Pro Ser lie Lys Ser Val lie lie Leu Lys 245 250 255
Tyr Asn lie Gin Tyr Arg Thr Lys Asp Ala Ser Thr Trp Ser Gin lie 260 265 270
Pro Pro Glu Asp Thr Als Ser Thr Arg Ser Ser Phe Thr Vsl Gin Asp 275 280 285
Leu Lys Pro Phe Thr Glu Tyr Val Phe Arg lie Arg Cys Met Lys Glu 290 295 300
Asp Gly Lys Gly Tyr Trp Ser Asp Trp Ser Glu Glu Ala Ser Gly lie 305 310 315 320
Thr Tyr Glu Asp Arg Pro Ser Lys Ala Pro Ser Phe Trp Tyr Lys lie 325 330 335
Asp Pro Ser His Thr Gin Gly Tyr Arg Thr Val Gin Leu Val Trp Lys 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Phe Glu Ala Asn Gly Lys lie Leu Asp Tyr Glu Val 355 360 365
Thr Leu Thr Arg Trp I,ys Ser His l,eu Gin Asn Tyr Thr Val Asn Ala 370 375 380
Thr Lys Leu Thr Val Asn Leu Thr Asn Asp Arg Tyr Leu Ala Thr Leu 385 390 395 400
Thr Val Arg Asn Leu Val Gly Lys Ser Asp Ala Ala Val Leu Thr lie 405 410 415
Pro Ala Cys Asp Phe Gin Ala Thr His Pro Val Met Asp Leu Lys Ala 420 425 430
Phe Pro Lys Asp Asn Met Leu Trp Val Glu Trp Thr Thr Pro Arg Glu 435 440 445
Ser Val L,ys Lys Tyr lie Leu Glu Trp Cys Val Leu Ser Asp Lys Ala. 450 455 460
Pro Cys lie Thr Asp Trp Gin Gin Glu Asp Gly Thr Val His Arg Thr 465 470 475 480
Tyr Leu Arg Gly Asn Leu Ala Glu Ser Lys Cys Tyr Leu lie Thr Val 485 490 495Thr Pro Val Tyr Ala Asp Gly Pro Gly Ser Pro Glu Ser lie Lys Ala 500 505 510
Tyr Leu Lys Gin Ala Pro Pro Ser Lys Gly Pro Thr Val Arg Thr Lys 515 520 525
Lys Val Gly Lys Asn Glu Ala Val Leu Glu Trp Asp Gin Leu Pro Val 530 535 540
Asp Val Gin Asn Gly Phe lie Arg Asn Tyr Thr lie Phe Tyr Arg Thr 545 550 555 560
lie lie Gly Asn Glu Thr Ala Val Asn Val Asp Ser Ser His Thr Glu 565 570 575
Tyr Thr Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Thr Leu Tyr Met Val Arg Met 580 585 590
Ala Ala Tyr Thr Asp Glu Gly Gly Lys Asp Gly Pro Glu Phe Thr Phe 595 600 605
Thr Thr Pro Lys Phe Ala Gin Gly Glu lie Glu Ala lie Val Val Pro 610 615 620
Val Cys Leu Ala Phe L.eu Leu Thr Thr Leu Leu Gly Val L.eu Phe Cys 625 630 635 640
Phe Asn Lys Arg Asp Leu lie Lys Lys His lie Trp Pro Asn Val Pro 645 650 655
Asp Pro Ser Lys Ser His lie Ala Gin Trp Ser Pro His Thr Pro Pro 660 665 670
Arg His Asn Phe Asn Ser Lys Asp Gin Met Tyr Ser Asp Gly Asn Phe 675 680 685
Thr Asp Val Ser Val Val Glu lie Glu Ala Asn Asp Lys Lys Pro Phe 690 695 700
Pro Glu Asp Leu Lys Ser Leu Asp Leu Phe Lys Lys Glu Lys l丄e Asn 705 710 715 720
Thr Glu Gly His Ser Ser Gly ].]e Gly Gly Ser Ser Cys Met Ser Ser 725 730 735
Ser Arg Pro Ser lie Ser Ser Ser Asp Glu Asn Glu Ser Ser Gin Asn 740 745 750Thr Ser Ser Thr Val Gin Tyr Ser Thr Val Val His Ser Gly Tyr Arg 755 760 765
His Gin Val Pro Ser Val Gin Val Phe Ser Arg Ser Glu Ser Thr Gin
770 775 780
Pro Leu Leu Asp Ser Glu Glu Arg Pro Glu Asp Leu Gin Leu Val Asp 785 790 795 800
His Val Asp Gly Gly Asp Gly lie Leu Pro Arg Gin Gin Tyr Phe Lys 805 810 815
Gin Asn Cys Ser Gin His Glu Ser Ser Pro Asp lie Ser His Phe Glu 820 825 830
Arg Ser Lys Gin Val Ser Ser Val Asn Glu Glu Asp Phe Val Arg Leu 835 840 845
Lys Gin Gin lie Ser Asp His lie Ser Gin Ser Cys Gly Ser Gly Gin 850 855 860
Met Lys Met Phe Gin Glu Val Ser Ala Ala Asp Ala Phe Gly Pro Gly 865 870 875 880
Thr Glu Gly Gin Val Glu Arg Phe Glu Thr Val Gly Met Glu Ala Ala 885 890 895
Thr Asp Glu Gly Met Pro Lys Ser Tyr Leu Pro Gin Thr Val Arg Gin 900 905 910
G]y Gly Tyr Met Pro Gin 915
<210〉 5 <211〉 862 〈212〉 PRT <213>未知
<220>
<223〉未知生物描述:灵长类；推测为人类 <400> 5
Met Ala His Thr Phe Arg Gly Cys Ser Leu Ala Phe Met Phe l丄e lie 15 10 15
Thr Trp Leu Leu lie Lys Ala Lys lie Asp Ala Cys Lys Arg Gly Asp 20 25 30Val Thr Val Lys Pro Ser His Val lie Leu Leu Gly Ser Thr Val Asn 35 40 45
lie Thr Cys Ser Leu Lys Pro Arg Gin Gly Cys Phe His Tyr Ser Arg 50 55 60
Arg Asn Lys Leu lie Leu Tyr Lys Phe Asp Arg Arg lie Asn Phe His 65 70 75 80
His Gly His Ser Leu Asn Ser Gin Val Thr Gly Leu Pro Leu Gly Thr 85 90 95
Thr Leu Phe Val Cys Lys Leu Ala Cys lie Asn Ser Asp Glu lie Gin 100 105 110
lie Cys Gly Ala Glu lie Phe Val Gly Val Ala Pro Glu Gin Pro Gin 115 120 125
Asn Leu Ser Cys lie Gin Lys Gly Glu Gin Gly Thr Val Ala Cys Thr 130 135 140
Trp Glu Arg Gly Arg Asp Thr His Leu Tyr Thr Glu Tyr Thr Leu Gin 145 150 155 160
Leu Ser Gly Pro Lys Asn Leu Thr Trp Gin Lys Gin Cys Lys Asp丄le 服 170 175
Tyr Cys Asp Tyr Leu Asp Phe Gly lie Asn Leu Thr Pro Glu Se:r Pro 180 185 190
Glu Ser Asn Phe Thr Ala Lys Val Thr Ala Val Asn Ser Leu Gly Ser 195 200 205
Ser Ser Ser Leu Pro Ser Thr Phe Thr Phe Leu Asp lie Val Arg Pro 210 215 220
Leu Pro Pro Trp Asp lie Arg lie Lys Phe Gin Lys Ala Ser Val Ser 225 230 235 240
Arg Cys Thr Leu Tyr 丁rp Arg Asp G]u Gly Leu Val l.eu I,eu Asn Arg 245 250 255
Leu Arg Tyr Arg Pro Ser Asn Ser Arg Leu Trp Asn Met Val Asn Val 260 265 270
Thr Lys Ala Lys Gly Arg His Asp Leu Leu Asp Leu Lys Pro Phe Thr 275 280 285
81Glu Tyr Glu Phe Gin lie Ser Ser Lys Leu His Leu Tyr Lys Gly Ser 290 295 300
Trp Ser Asp Trp Ser Glu Ser Leu Arg Ala Gin Thr Pro Glu Glu Glu 305 310 315 320
Pro Thr Gly Met Leu Asp Val Trp Tyr Met Lys Arg His lie Asp Tyr 325 330 335
Ser Arg Gin Gin lie Ser Leu Phe Trp Lys Asn匸eu Ser Val Ser Glu 340 345 350
Ala Arg Gly Lys lie Leu His Tyr Gin Val Thr Leu Gin Glu Leu Thr 355 360 365
Gly Gly Lys Ala Met Thr Gin Asn lie Thr Gly His Thr Ser Trp Thr 370 375 380
Thr Val lie Pro Arg Thr Gly Asn Trp Ala Val Ala Val Ser Ala Ala 385 390 395 400
Asn Ser Lys Gly Ser Ser Leu Pro Thr Arg lie Asn lie Met Asn Leu 405 410 415
Cys Glu Ala Gly Leu Leu Ala Pro Arg G丄n Val Ser Ala Asn Ser Glu 420 425 430
Gly Met Asp Asn lie Leu Val Thr Trp Gin Pro Pro Arg Lys Asp Pro 435 440 445
St'r A丄a Val Gin Glu Tyr Val Val Glu Trp Arg Glu Leu His Pro Gly 450 455 460
Gly Asp Thr Gin Va.l Pro Leu Asn Trp Leu Arg Ser Arg Pro Tyr Asn 465 470 475 480
Val Ser Ala Leu lie Ser Glu Asn lie Lys Ser Tyr lie Cys Tyr Glu 485 490 495
lie Arg Val Tyr Ala Leu Ser Gly Asp Gin Gly Gly Cys Ser Ser lie 500 505 510
Leu G]y Asn Ser Lys His Lys Ala Pro !」eu Ser Gly Pro His lie Asn 515 520 525
Ala lie Thr Glu Glu乙ys Gly Ser lie Leu lie Ser Trp Asn Ser lie 530 535 540
Pro Val Gin Glu Gin Met Gly Cys Leu Leu His Tyr Arg lie Tyr Trp545
550
555
560
Lys Glu Arg Asp Ser Asn Ser Gin Pro Gin Leu Cys Glu lie Pro Tyr 565 570 575
Arg Val Ser Gin Asn Ser His Pro I'le Asn Ser Leu Gin Pro Arg Val 580 585 590
Thr Tyr Val Leu Trp Met Thr Ala Leu Thr Ala Ala Gly Glu Ser Ser 595 600 605
His Gly Asn Glu Arg Glu Phe Cys Leu Gin Gly Lys Ala Asn Trp Met 610 615 620
Ala Phe Val Ala Pro Ser lie Cys lie Ala lie lie Met Val Gly lie 625 630 635 640
Phe Ser Thr His Tyr Phe Gin Gin Lys Val Phe Val Leu Leu Ala Ala 645 650 655
Leu Arg Pro Gin Trp Cys Ser Arg Glu lie Pro Asp Pro Ala Asn Ser 660 665 670
Thr Cys Ala Lys Lys Tyr Pro lie Ala Glu Glu乙ys Thr Gin Leu Pro 675 680 685
Leu Asp Arg Leu Leu I丄e Asp Trp Pro Thr Pro Glu Asp Pro Glu Pro 690 695 700
Leu Val lie Ser Glu Val Leu His Gin Val Thr Rro Val Phe Arg His 705 710 715 720
Pro Pro Cys Ser Asn Trp Pro Gin Arg Glu Lys Gly lie Gin Gly His 725 730 735
Gin Ala Ser Glu Lys Asp Met Met His Ser Ala Ser Ser Pro Pro Pro 740 745 750
Pro Arg Ala Leu Gin Ala Glu Ser Arg Gin Leu Val Asp l」eu Tyr Lys 755 760 765
Val Leu Glu Ser Arg Gly Ser Asp Pro Lys Pro Glu Asn Pro Ala Cys 770 775 780
Pro Trp Thr Val Leu Pro Ala Gly Asp Leu Pro Thr His Asp Gly Tyr 785 790 795 800
Leu Pro Ser Asn lie Asp Asp Leu Pro Ser His Glu Ala Pro Leu Ala 805 810 815Asp Ser Leu Glu Glu Leu Glu Pro Gin His lie Ser Leu Ser Val Phe 820 825 830
Pro Ser Ser Ser Leu His Pro Leu Thr Phe Ser Cys Gly Asp Lys Leu 835 840 845
Thr Leu Asp Gin Leu Lys Met Arg Cys Asp Ser Leu Met Leu 850 855 860
8权利要求
1.一种大致纯或重组多肽，它包含SEQ ID NO2胞内部分的至少10个连续氨基酸。
2. 权利要求1的多肽，其中a) 所述多肽包含SEQIDNO: 2胞内部分的至少25个连续氨 基酸；b) 所述多肽为重组多肽，它包含SEQIDNO: 2的胞内部分；c) 所述多肽还包含SEQIDNO: 2非胞内部分的至少10个连 续氨基酸；d) 所述多肽包含SEQ ID NO: 2胞外部分的至少25个氨基酸；e) 所述多肽包含成熟SEQIDNO: 2，或者f) 所述多肽为大致纯天然多肽。
3. 权利要求1的重组多肽，它a) 由表1的成熟序列组成；b) 为非糖基化多肽；c) 来自人类；d) 包含SEQ ID NO: 2的至少40个连续氨基酸；e) 具有SEQIDNO: 2的至少3个非重叠区段，每个区段至 少15个连续氨基酸；f) 为SEQ ID NO: 2的天然多态性变异体；g) 具有至少约30个氨基酸的长度；h) 具有至少2个灵长类DCRS5特异性非重叠表位；i) 其分子量至少30kD的天然糖基化多肽； j)为合成多肽；k)为无菌形式；1)为水性溶液或緩冲溶液；m)与固体支持物结合；n)与另一种化学部分缀合；或者0) 与IL-12R(31多肽物理締合。
4. 一种《且合物，它包含的物质选自a) 包含SEQIDNO: 2胞内部分的至少2个不同的非重叠区 段、每个区段至少6个连续氨基酸的大致纯或重组多肽；b) 包含SEQIDNO: 2胞内部分的至少12个连续氨基酸的大 致纯或重组多肽；或者c) 包含成熟SEQ ID NO: 2的大致纯天然序列多肽。
5. 权利要求4的多肽，其中1) 权利要求4a多肽，其中a) 所述不同的非重叠区段i) 包括至少12个氨基酸的一种区段；ii) 包括至少7个氨基酸的一种区段和至少9个氨基酸的 第二种区段；iii) 包括至少6个氨基酸的第三种不同区段；或iv) 包含以下之一R355-L373、 P378-L405、 V407-D426、 K428誦D439、 P441画V452、 I454-G460、 I465-T587或 N592掘；或b) 所述多肽还包含SEQIDNO: 2胞外部分的至少2个不 同的非重叠区段，每个区段至少6个连续氨基酸；2) 权利要求4b的多肽，其中a) 所述至少12个连续氨基酸区段包含以下之一 R355-L373、 P378-L405、 V407-D426、 K428-D439、 P441-V452、 I454-G460、 I465-T587或N592-606;或b) 所述多肽还包含SEQIDNO: ^9包外部分的至少2个不同 的非重叠区段，每个区段至少6个连续氨基酸；3) 权利要求4c的多肽，它还包含纯化或检测表位。
6. 权利要求4的多肽，它a) 由表1的成熟序列组成；b) 为非糖基化多肽；c) 来自人类；d) 包含SEQ ID NO: 2的至少40个连续氨基酸；e) 具有SEQ ID NO: 2的至少3个非重叠区段，每个区段至 少15个连续氨基酸；f) 为SEQIDNO: 2的天然多态性变异体；g) 具有至少约30个氨基酸的长度；h) 具有至少2个灵长类DCRS5特异性非重叠表位；i) 其分子量至少30kD的天然糖基化多肽； j)为合成多肽；k)为无菌形式；1)为水性溶液或緩冲溶液；m)与固体支持物结合；n)与另一种化学部分缀合；或者o)与IL-12R)M多肽物理締合。
7. —种《且合物，它包含a) 与IL-12R(31组合的大致纯的权利要求4多肽；或b) 权利要求4的所述多肽和载体，其中所述载体为i) 水性化合物，包括水、盐水和/或緩沖液；和/或ii) 配制用于口服、直肠、鼻、局部或胃肠外给药。
8. —种试剂盒，它包含^5l利要求4的多肽和a) 包含所述多肽的区室；b) 包含IL-12RP1多肽的区室；c) 包含p40、 IL-B30或p40/IL-B30多肽的区室;或者d) 所述试剂盒试剂的使用或处理说明书。
9. 一种包含抗体抗原结合位点的结合化合物，它特异性结合权利 要求1所述多肽的所述胞内部分，其中a) 所述结合化合物装在一个容器中；b) 所述多肽来自人类；c) 所述结合化合物是Fv、 Fab或Fab2片段；d) 所述结合化合物与另一种化学部分缀合；或者e) 所述抗体i) 是针对表1成熟多肽的肽序列产生的抗体；ii) 是针对成熟DCRS5产生的抗体；iii) 是针对纯化的人DCRS5产生的抗体；iv) 为免疫选择性抗体；v) 为多克隆抗体；荧光标记；vi) 结合变性DCRS5;vii) 对抗原的Kd至少30 juM;viii) 与固体支持物结合，包括珠子或塑料膜；ix) 为无菌组合物；或者x) 为检测性标记的抗体，包括放射性标记或荧光标记。
10. —种试剂盒，包含权利要求9所述结合化合物和a) 包含所述结合化合物的区室；b) 包含以下组分的区室i) p40多肽ii) IL-B30多肽；iii) DCRS5多肽；和/或iv) IL画12Rpi多肽；c) 包含选择性结合以下组分的抗体的区室i) p40多肽ii) IL-B30多肽；iii) DCRS5多肽；和/或iv) IL-12Rpi多肽；或者d) 所述试剂盒试剂使用或处理的说明书。
11. 一种生产抗原抗体复合物的方法，该方法包括在合适条件 下使灵长类DCRS5多肽与权利要求9的抗体接触，由此形成所述复 合物。
12. ;f又利要求11的方法，其中a) 所述复合物纯化自其它细胞因子受体；b) 所述复合物纯化自其它抗体；c) 所述接触是与包含干扰素的样品接触；d) 所述接触使得可定量检测所述抗原；e) 所述接触是与包含所述抗体的样品接触；或者f) 所述接触使得可定量检测所述抗体。
13. —种组合物，它包含a) 权利要求9的无菌结合化合物，或b) 权利要求9的所述结合化合物和载体，其中所述载体为i) 水性化合物，包括水、盐水和或緩沖液；和/或ii) 配制用于口服、直肠、鼻、局部或胃肠外给药。
14. 一种分离或重组核酸，它编码包含SEQIDNO: 2的氨基酸 1-606的多肽。
15. —种细胞或组织，它包含权利要求14的所述重组核酸。
16. 权利要求15的细胞，其中所述细胞是a) 原核细胞；b) 真核细月包；c) 细菌细月包；d) 酵母细胞；e) 昆虫细胞；f) 哺乳动物细月包；g) 小鼠细胞；h) 灵长类细胞；或者i) 人类细月包。
17. —种试剂盒，它包含权利要求14的所述核酸和a) 包含所述核酸的区室；b) 包含编码以下组分的核酸的区室i) p40多肽ii) IL-B30多肽；iii) DCRS5多肽；和/或iv) IL-12Rpi多肽;c) 包含以下组分的区室i) p40多肽ii) IL-B30多肽；iii) DCRS5多肽；和/或iv) IL-12R(31多肽；d) 包含选择性结合以下组分的抗体的区室i) p40多肽ii) IL-B30多肽；iii) DCRS5多肽；和/或iv) IL-12R(31多肽；或者f)所述试剂盒试剂使用或处理的说明书。
18. —种调节细胞生理或发育的方法，该方法包括所述细胞与以 下组分接触a) p40/IL-B30的拮抗剂，该拮抗剂为包含以下组分的复合物:i) 灵长类DCRS5胞外部分；和/或ii) 灵长类IL-12R(31胞外部分；b) p40/IL-B30的拮抗剂，它为结合包含以下组分的复合物的 抗体i) 灵长类DCRS5;和/或ii) 灵长类IL-12R(31;c) p40/IL-B30的拮抗剂，它为结合DCRS5的抗体；d) p40/IL-B30的拮抗剂，它为抗IL-12Rpi的抗体；e) p40/IL-B30的拮抗剂，它为DCRS5或IL-12Rpi的反义核 酸；或者f) p40/IL-B30的激动剂，它为结合包含以下组分的复合物的抗体i) 灵长类DCRS5;和/或ii) 灵长类IL-12R(31。
19. 权利要求18的方法，其中所述接触为与拮抗剂接触，而且a) 所述接触与以下组分的拮抗剂混合i) IL-12;ii) IL-18;iii) TNF;或iv) IFNy;或者b) 所述细胞来自宿主，所述宿主i) 表现出慢性Thl介导性疾病的体征或症状；ii) 表现出多发性硬化、类风湿性关节炎、骨关节炎、炎 症性肠病、4唐尿病、牛皮瘈或脓毒病的症状或体征；或 者iii) 接受同种异体移植。
20. 权利要求18的方法，其中所述接触是与激动剂接触，而且a) 所述接触与以下组分混合i) IL-12;ii) IL-18;iii) TNF;或iv) IFNy;或者b) 所述细胞来自宿主，所述宿主i) 表现出慢性TH2反应的体征或症状；ii) 罹患胂瘤或存在病毒或真菌生长；iii) 接受疫苗；或者iv) 存在变态反应。
21. 权利要求14的核酸，它包含SEQIDNO: 1的核普酸188-2005。
22. —种大致纯或重组SEQIDNO: 2抗原性多肽。
23. 权利要求22的多肽，其中所述多肽包含a) SEQIDNO: 2的残基1-101;b) SEQ ID NO: 2的残基102-195c) SEQ ID NO: 2的残基196-297;d) SEQ ID NO: 2的残基l-328;或e) SEQ ID NO: 2的残基1-606。
24. —种异源二聚体组合物，它包含权利要求22的多肽和IL誦12Rf31。
25. 权利要求24的組合物，它能够结合IL-B30/p40。
26. —种试剂盒，它包括权利要求22的多肽和使用说明书。
27. 权利要求26的试剂盒，其中所述试剂盒还包括a) IL-12(31多肽；b) p40、 IL-B30或IL-B30/p40多肽。
28. —种结合组合物，它特异性结合权利要求22的多肽。
29. 权利要求28的结合组合物，其中所述结合組合物为a) 多克隆抗体；b) 单克隆抗体；或c) Fab、 Fab2或Fv片段。
30. 权利要求28的结合组合物，它特异性结合权利要求23的多肽。
31. 权利要求30的结合组合物，其中所述结合组合物为a) 多克隆抗体；b) 单克隆抗体；或c)Fab、 Fab2或Fv片段。
32. —种试剂盒，它包括权利要求28的结合组合物和使用说明书。
33. —种生产抗原抗体复合物的方法，该方法包括在适合形成所述复合物的条件下接触权利要求29的抗体。
34. —种分离或重组多核香酸，它编码权利要求22的多肽。
35. 权利要求34的多核苷酸，它编码权利要求23的多肽。
36. 权利要求34的多核苷酸，它包含SEQIDNO: 1。
37. —种表达载体，它包含权利要求34的多核苷酸。'
38. —种宿主细胞，它包含权利要求37的表达载体。
39. 权利要求38的宿主细胞，其中所述宿主细胞为a) 哺乳动物细月包；b) 昆虫细月包；c) 细菌细胞；或d) 酵母细胞。
40. —种生产SEQIDNO: 2抗原性多肽的方法，该方法包括a) 在适合表达所述多肽的条件下培养权利要求38的宿主细胞；b) 分离或纯化所述多肽。
41. 一种调节细胞生理或发育的方法，该方法包括使所述细胞与SEQ ID NO: 2的激动剂或拮抗剂接触。
全文摘要
本发明提供编码哺乳动物(例如灵长类)受体的核酸、纯化受体蛋白及其片段。还提供多克隆抗体和单克隆抗体。描述了使用所述组合物进行诊断及治疗的方法。
文档编号A61K45/06GK101654479SQ200910159449
公开日2010年2月24日 申请日期2001年5月10日 优先权日2000年5月10日
发明者C·L·帕哈姆, K·W·穆尔, M·基里卡, R·A·卡斯特莱恩 申请人:先灵公司