鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂的制作方法

专利名称：：鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种病毒活疫苗的保护剂，尤其涉及鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗的耐热冻干保护剂及其制备方法，属于动物用病毒活疫苗制造领域。
背景技术：
：冻干保护剂及其制备工艺是活疫苗生产中的一项关键技术，对疫苗的保存、运输和使用有很大影响。目前，在我国兽用疫苗中，活的冻干疫苗占相当大的比例，国内常用的保护剂主要为牛奶、蔗糖、明胶等，其组方简单，对疫苗的保护功能差。采用这些传统的保护剂冻干的疫苗，由于需要保存在-15。C以下的低温，这给生产厂家及使用者造成很大不便，使成品疫苗的长期保存和运输受限，且可能由于疫苗保存不当造成疫苗失活，效力降低，达不到防疫目的，造成巨大经济损失。耐热冻干保护剂与常规的冻干保护剂相比，其冻干疫苗具有耐高温保存期长的特点，因而耐热保护剂的性能要比传统保护剂更为优良，使活疫苗可在有效期内保存在28。C条件下，即使在较高的室温下也可以保存几十天，因此使活疫苗的储存、运输和使用都更方便、经济。冻干保护剂的保护功能主要跟两个方面的因素有很大的关系。一是微生物因素，微生物的种类和其本身结构差异(如病毒有无嚢膜)、培养方法以及的组方因素，如保护剂原料及其性质、配比、冻干曲线。耐热冻干保护剂的组方要根据以上二者主要因素，选择组方，合理搭配，并反复验证，制定合理的冻干曲线。产品冻干以后，对其物理性状进行保存期试验，并将样品放置在不同温度下进行保存期长短及效价测定、安全性检验等对比试验。根据试^T结果，不断调整配方及冻干曲线，以达到理想的效果。20世纪80年代，发达国家就已开始进行耐热保护剂的研究，目前他们的冻干活疫苗基本上使用耐热保护剂，但未见详细报道。国内兽用生物制品保护剂的研制相对滞后，近年我国也有一些这方面的研究报道，主要包括新城疫(ND)、IBD、MD、IBV、鸡痘和猪痙冻干活疫苗等的耐热冻干保护剂研究，但仍未达到推广应用的水平，目前国内尚未见鸡新城疫、鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂的报道。总之，现有的耐热冻干保护剂多不同程度地存在着配方复杂，不便于操作，保护性能不理想等问题。研制一种配制方法简单、成本低、能够大规模生产、具有良好保护性能的鸡新城疫、鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干^f呆护剂就显得尤为迫切重要。
发明内容本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种配制方法简单、成本低、能够大规模生产、具有良好保护性能的鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂。本发明所要解决的技术问题是通过以下技术途径来实现的一种鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂，由A液和B液按照1:1的体积配比组成。其中，所述的A液的各组成成分为每100毫升体积中含有蔗糖4-6g,多聚蛋白胨3-5g，D-山梨醇l-3g,其余组分为注射用水；优选的每100毫升体积中含有蔗糖5g，多聚蛋白胨(Polyp印tone)4g,D-山梨醇3g,其余组分为注射用水；所述的B液的各组成成分为每100毫升体积中含有聚乙烯吡咯烷酮(PVPK90)3-5g,L-精氨酸0.5-1.5g，其余组分为注射用水；优选的，各组分的用量为每IOO毫升体积中含有聚乙烯吡咯烷酮(PVPK90)4g,L-精氨酸lg,其余组分为注射用水。本发明所要解决的另一个技术问题是提供上述鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂的制备方法。本发明所要解决的另一个技术问题是通过以下技术方案来实现的一种制备上述鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂的方法，包^":(l)A液的配制按所述质量配比将蔗糖，多聚蛋白胨，D-山梨醇充分溶解在注射用水中后高压灭菌，备用；(2)B液的配制按所述质量配比将聚乙烯吡咯烷酮(PVPK90)和L-精氨酸充分溶解在注射用水中后过滤除菌，备用；(3)将配制好的A液和B液按照1:1的体积比例混合在一起后，即得。其中，步骤l)中所述的高压灭菌优选为在116。C的温度下灭菌20分钟；步骤2)中所述的除菌过滤优选采用^f敖孔滤膜的方式进^f亍除菌过滤；进一步优选的，所述的微孔滤膜优选为孔径0.22Mm的微孔滤膜。本发明耐热冻干保护剂的使用方法将本发明耐热冻干保护剂与鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗以1:l的体积比例进行配苗，即可。本发明最大的优点是解决了现有的耐热冻干保护剂所普遍存在的成分复杂和成本高等缺陷，具有耐热性能好、能有效保护鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗，配方成分及配制方法简单，生产成本低，在任何生物制品厂都完全可以实现大量生产等优点。本发明解决了鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗需要低温冷冻运输、储存的不便以及成本高等一系列问题。本发明耐热冻干保护剂可以使鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗在2~8。C条件下，保存24个月以上。具体实施例方式下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。实施例1耐热冻干保护剂的制备A液的配制蔗糖5g,多聚蛋白胨4g,D-山梨醇3g，加注射用水至100ml;溶液溶解后高压116。C灭菌20分钟；B液的配制PVPK904g，L-精氨酸lg,加注射用水至100ml;溶液溶解后用孔径0.22Mm滤器除菌过滤。将A液与B液按照1:1的体积比混合均匀，即得本发明耐热冻干保护剂。实施例2耐热冻干保护剂的制备A液的配制蔗糖6g，多聚蛋白胨5g,D-山梨醇3g,加注射用水至100ml;溶液溶解后高压116。C灭菌20分钟；B液的配制PVPK905g，L-精氨酸1.5g,加注射用水至100ml;溶液溶解后用孔径0.22Mm滤器除菌过滤。将A液与B液按照1:1的体积比混合均匀，即得本发明耐热冻干保护剂。实施例3耐热冻干保护剂的制备A液的配制蔗糖4g,多聚蛋白胨3g，D-山梨醇lg，加注射用水至100ml;溶液溶解后高压116。C灭菌20分钟；B液的配制PVPK903g,L-精氨酸0.5g,加注射用水至100ml;溶液溶解后用孔径0.22卿滤器除菌过滤。将A液与B液按照1:1的体积比混合均匀，即得本发明耐热冻干保护剂。试验例1本发明耐热冻干保护剂对鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗的保护效力试验1、试验材料(1)、鸡新城疫毒鸡传染性支气管炎毒购自中国兽医药品监察所(2)、SPF鸡胚购自哈尔滨兽医研究所2、试验疫苗的制备试验疫苗分为A、B、C、D、E五个组别。其中各组试验疫苗的制备方法:i口下A、B、C组试验疫苗用本发明实施例1-3所制备的耐热冻干保护剂分别与鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗原液(由哈药集团生物疫苗有限公司动物活疫苗车间按《兽用生物制品规程》制备)按l:1的体积比例配苗，按规程配制试验疫苗，每组分为01、02、03、04四个批次。产品在-30。C入箱，预冻4小时后加温，曲线全过程共计45小时，在升华过程中真空度保持在1OPa,冷凝器温度保持在-60°C以下。D组试验疫苗用常规5%蔗糖脱脂乳配制的保护剂(蔗糖5g,脱脂奶粉llg,加注射用水至100ml)与鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗原液，按规程1.5:1比例配制试验疫苗，分为01、02、03、04四个批次。产品在-30。C入箱，预冻4小时后加温，曲线全过程共计45小时，在升华过程中真空度保持在IOPa，冷凝器温度保持在-6(TC以下。E组试验疫苗购自日本财团法人化学及血清疗法研究所的耐热冻干保护剂与鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗原液按照1:i比例进行配苗，试制1个批次。产品在-30。C入箱，预冻4小时后加温，曲线全过程共计45小时，在升华过程中真空度保持在10Pa,冷凝器温度保持在-6(TC以下。3、试验疫苗的保存及效价测定以上各批试验疫苗分别置于2~8°C、-15。C条件下保存，于不同时间检测试验疫苗效价变化情况。(1)试验疫苗的效价测定本试验以鸡胚半数感染量(EID5Q)作为衡量疫苗效价的标准。(2)效价测定方法根据试验疫苗实含毒量，按照《兽用生物制品规程》9鸡新城疫、鸡传染性支气管炎二联活疫苗效价检测方法进行。(3)效价测定标准以病毒含量即鸡胚半数感染量(EID5。)衡量疫苗的效价，每羽份病毒含量鸡新城疫毒>106°EID5。；鸡传染性支气管炎毒应>1035EID5。。4、试—险结果(1)试验疫苗在2~8'C条件下，保存12个月、24个月效价测定结果，见表1，表2。表l试验疫苗在28'C条件下保存12个月、24个月(鸡新城疫部分)效价测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>(2)试验疫苗在-15。C条件下，保存12个月、24个月效价测定结果，见表3,表4。表3试验疫苗在-15'C条件下保存12个月、24个月(鸡新城疫部分)效价测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表4试验疫苗在-15'C条件下保存12个月、24个月(鸡传染性支气管炎部分)效价测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>从以上试验结果可以看出，在不同温度条件下，本发明耐热冻干保护剂对鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗的保护效果，明显优于常规的5%蔗糖脱脂乳配制的保护剂(蔗糖5g,脱脂奶^分llg,加注射用水至100ml)的保护效果，与进口耐热冻干保护剂疫苗相比，其保护效果与之接近。试验结果说明，采用本发明耐热冻干保护剂所配制的鸡新城疫、鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热性能良好，本发明耐热冻干保护剂对鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗具有良好的保护效果。权利要求1、鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂，其特征在于由A液和B液按照1∶1的体积比组成；其中，所述的A液由以下各组分组成每100毫升体积中含有蔗糖4-6g，多聚蛋白胨3-5g，D-山梨醇1-3g，其余组分为注射用水；所述B液由以下各组分组成每100毫升体积中含有聚乙烯吡咯烷酮3-5g，L-精氨酸0.5-1.5g，其余组分为注射用水。2、按照权利要求1所述的鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂，其特征在于所述的A液由以下各组分组成每100毫升体积中含有蔗糖5g,多聚蛋白胨4g，D-山梨醇3g,其余组分为注射用水。3、按照权利要求1所述的鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂，其特征在于所述的B液由以下各组分组成每100毫升体积中含有聚乙烯吡咯烷酮4g,L-精氨酸l.Og，其余组分为注射用水。4、一种制备权利要求l-3任何一项所述鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂的方法，包括(1)A液的配制按所述质量配比将蔗糖，多聚蛋白胨，D-山梨醇充分溶解在注射用水中后高压灭菌，备用；(2)B液的配制将所述质量配比将聚乙烯吡咯烷酮和L-精氨酸充分溶解在注射用水中后过滤除菌，备用；(3)将配制好的A液和B液按照1:1的体积比例混合在一起后，即得。5、按照权利要求4所述的方法，其特征在于步骤l)中所述的高压灭菌为在116。C的温度下灭菌20分钟。6、按照权利要求4所述的方法，其特征在于步骤2)中所述的除菌过滤采用纟鼓孔滤膜的方式进行除菌过滤。7、按照权利要求6所述的方法，其特征在于所述的微孔滤膜是孔径为0.22Mm的微孔滤膜。8、权利要求1-3任何一项所述鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂在保护鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗中的应用。9、按照权利要求8所述的应用，其特征在于，包括将权利要求l-3任何一项所述鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂与鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗以1:1的体积比例进行配苗。全文摘要本发明公开了鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂及其制备方法。本发明耐热冻干保护剂由A液和B液按照1∶1的体积比组成；其中，所述的A液由以下各组分组成每100毫升体积中含有蔗糖4-6g，多聚蛋白胨3-5g，D-山梨醇1-3g，其余组分为注射用水；所述B液由以下各组分组成每100毫升体积中含有聚乙烯吡咯烷酮3-5g，L-精氨酸0.5-1.5g，其余组分为注射用水。本发明耐热冻干保护剂具有耐热性能好、能有效保护活疫苗，配方成分及配制方法简单，生产成本低，可大量生产等优点。本发明耐热冻干保护剂可以使鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗在2～8℃条件下保存24个月以上。文档编号A61K47/42GK101612404SQ200910160659公开日2009年12月30日申请日期2009年7月29日优先权日2009年7月29日发明者付丽杰,刘洪斌,金吴,张凤强,胡瑛瑛,耘韩申请人:哈药集团生物疫苗有限公司