一种植物提取物用于制备治疗轻型酒精性肝病药物的新用途的制作方法

专利名称：：一种植物提取物用于制备治疗轻型酒精性肝病药物的新用途的制作方法
技术领域：
：本发明属于药品领域，具体涉及藏茵陈提取物在制备治疗轻型酒精性肝病药物中的新用途。
背景技术：
：藏茵陈为獐牙菜属川西獐牙菜(SwertiamussotiiFranch);抱茎獐牙菜(S.franchetianaH.Smkh);花锚属植物椭圆叶花锚(HaleniaellipticD.Don)的干燥全草。藏茵陈为藏医预防和治疗各种肝炎、肝纤维化、脂肪肝等疾病的名贵药材。植物化学研究，藏茵陈植物中含有裂环烯醚萜苷类，黄酮及其苷类，口山酮及其苷类，三萜类等多种成分。其中裂环烯醚萜苷类成分獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷具有保肝降酶，抗炎，促进肝修复，抗肝纤维化等药理作用；芒果苷具有保肝利胆、抗肿瘤、利尿作用；异荮菜苷具有明显的保肝作用。酒精性肝病(alcoholicliverdisease,ALD)是由于长期大量饮酒(嗜酒)所致的肝脏疾病，包括脂肪肝、酒精性肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌等。由于乙醇进人肝细胞后，经过一系列酶的作用即被氧化为乙醛，因此过量饮酒会使大量乙醛对肝细胞产生明显的毒性作用，从而直接或者间接导致肝细胞变性、坏死、以及纤维化，严重时还可发展为肝硬化。当前因大量饮酒引起的酒精性肝病在逐年增多，据报道，嗜酒者中约2/3可发展为酒精性肝病。但目前临床治疗ALD除戒酒、对症治疗外，尚缺乏有效的药物。
发明内容本发明的目的是提供藏茵陈提取物的一种新用途，特别是在用于制备治疗轻型酒精性肝病药物的新用途。本发明的所述的藏茵陈提取物可分为乙醇提取物、水提取物、碱水提取物，各提取物的具体制备方法分别为1、乙醇提取物取藏茵陈1120g，切碎，以10倍量的85%乙醇回流提取三次，每次3小时，合并提取液，滤过；滤液减压浓縮成相对密度为1.18L20(6(TC)的清膏，即得。2、水提取物取藏茵陈1120g，切碎，以IO倍量的纯化水提取三次，每次3小时，合并提取液，滤过，浓縮到相对密度为1.04~1.06(60°C)，加入乙醇，调节乙醇浓度为85%，静置24小时；上述乙醇溶液，过滤，滤液回收乙醇继续浓縮成清膏，即得。3、碱水提取物取藏茵陈1120g，切碎，以10倍量的0.2%NaOH溶液提取三次，每次3小时，合并提取液，滤过，浓縮到相对密度为1.041.06(60°C)，加入乙醇，调节乙醇浓度为85%，静置24小时；上述乙醇溶液，过滤，滤液回收乙醇继续浓縮成清膏，即得。本发明制得的藏茵陈提取物以藏茵陈质量计，大鼠按4.0g生药/kg给予藏茵陈提取物，试验结果表明藏茵陈对酒精引起的轻型酒精性肝损伤模型有治疗作用，可以促进酒精引起的大鼠轻型酒精性肝损伤的逆转。.:，本发明制得的藏茵陈提取物能够降低轻型酒精性肝损伤大鼠的天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量，改善肝组织病变。本发明的效果是采用提取物对大鼠灌服白酒的方法造成轻型酒精性肝损伤模型来验证的。具体实施例方式实施例l藏茵陈乙醇提取物的制备取藏茵陈1120g，切碎，以10倍量的85%乙醇回流提取三次，每次3小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓縮成相对密度为1.181.20(60°C)的清膏，即得。实施例2藏茵陈水提取物的制备取藏茵陈1120g，切碎，以IO倍量的纯化水提取三次，每次3小时，合并提取液，滤过，浓縮到相对密度为1.04~1.06(60°C),加入乙醇，调节乙醇浓度为85%,静置24小时，上述乙醇溶液，过滤，滤液回收乙醇继续浓缩成清膏，即得。4实施例3藏茵陈碱水提取物的制备取藏茵陈1120g，切碎，以10倍量的0.2。/。NaOH溶液提取三次，每次3小时，合并提取液，滤过，浓缩到相对密度为1.04~1.06(6(TC)，加入乙醇，调节乙醇浓度为85%，静置24小时。上述乙醇溶液，过滤，滤液回收乙醇继续浓縮成清膏，即得。实施例4藏茵陈乙醇提取物治疗大鼠轻型酒精性肝损伤的试验釆用实施例1的提取物进行试验。大鼠正常饲养2d，随机分成正常对照组、酒精模型组(1:1稀释的56。白酒)、联苯双酯阳性对照组(100mg/kg)、川西獐芽菜提取物组(4.0g生药/kg)、抱茎獐芽菜提取物组(4.0g生药/kg)、花锚提取物组(4.0g生药/kg)，每组12只。联苯双酯阳性对照组lg联苯双酯+14ml/kgl:l稀释的56°白酒，各给药组均以1.0ml/100g(体重)灌胃藏茵陈提取物+14ml/kgl:l稀释的56°白酒，正常对照组灌胃给予等容积蒸馏水，酒精模型组ig蒸馏水+14ml/kgl:l稀释的56°白酒，共10d。末次给酒后禁食24h，眼眶取血，分离血清。用ALT/AST测试盒测定ALT、AST，结果详见表1。而后颈椎脱臼处死大鼠，立即破腹取肝脏，用生理盐水冲洗干净，取肝脏左叶相同部位，用10%福尔马林溶液固定，石蜡包埋，HE染色，作病理检查。结果普通光镜检査正常对照组肝细胞切片具有正常的多边形细胞形状和结构，胞浆丰富，细胞核圆形，肝小叶类圆形；酒精组病理切片见肝细胞明显肿胀，细胞内可见数量较多而不等、大小不一的脂肪滴，细胞核由于脂肪滴的挤压而偏向细胞边缘，肝小叶中央呈现片状或点状坏死；酒精加藏茵陈提取物组切片见肝细胞有肿胀现象，亦有脂肪滴，但肿胀程度及脂肪滴空泡程度明显比酒精组轻，肝细胞脂肪变较轻，脂肪滴小，偶然也可见到少量的肝小叶中央点状坏死。电镜检查观察正常对照组切片中，肝细胞胞质内含丰富的细胞器和包含物，核膜清晰而规则，核仁大而明显，电子密度均匀，线粒体形状正常，胞质内无脂肪滴沉积，粗面内质网分布规律；酒精组肝细胞切片，体积肿大，细胞核边缘不规则，核仁不显，线粒体明显肿胀，，其粗面内质网明显扩张，出现断裂，胞质内可见到多量大小不一的脂肪滴沉积；酒精加藏茵陈提取物组肝细胞较规则，细胞核仁清晰，有少量的线粒体出现肿胀变形，粗面内质网未见明显的扩张和断裂，少见细胞质内脂肪滴沉积。表1藏茵陈醇提取物对大鼠56%乙醇诱导大鼠肝损伤血清转氨酶的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>与空白对照组比较*P<0.05，**P<0.01与模型对照组比较AP0.05，AAP〈.0.01实施例5藏茵陈水提取物治疗大鼠轻型酒精性肝损伤的试验采用实施例2的提取物进行试验。大鼠正常饲养2d，随机分成正常对照组、酒精模型组(1:1稀释的56。白酒)、联苯双酯阳性对照组(100mg/kg)、川西獐芽菜提取物组(4.0g生药/kg)、抱茎獐芽菜提取物组(4.0g生药/kg)、花锚提取物组(4.0g生药/kg)，每组12只，联苯双酯阳性对照组ig联苯双酯+14ml/kgl:l稀释的56°白酒，各给药组均以1.0ml/100g(体重)灌胃藏茵陈提取钩+14ml/kgl:l稀释的56°白酒，正常对照组灌胃给予等容积蒸馏水，酒精模型组ig蒸馏水十14ml/kgl:l稀释的56°白酒，共10d。末次给酒后禁食24h，眼眶取血，分离血清。用ALT/AST测试盒测定ALT、AST,结果详见表2。而后颈椎脱臼处死大鼠，立即破腹取肝脏，用生理盐水冲洗干净，取肝脏左叶相同部位，用10%福尔马林溶液固定，石蜡包埋，HE染色，作病理检査。结果普通光镜检査正常对照组肝细胞切片具有正常的多边形细胞形状和结构，胞浆丰富，细胞核圆形，肝小叶类圆形；酒精组病理切片见肝细胞明显肿胀，细胞内可见数量较多而不等、大小不一的脂肪滴,细胞核由于脂肪滴的挤压而偏向细胞边缘，肝小叶中央呈现片状或点状坏死；酒精加藏茵陈提取物组切片见肝细胞有肿胀现象，亦有脂肪滴，但肿胀程度及脂肪滴空泡程度明显比酒精组轻，肝细胞脂肪变较轻，脂肪滴小，偶然也可见到少量的肝小叶中央点状坏死。电镜检查观察正常对照组切片中，肝细胞胞质内含丰富的细胞器和包含物，核膜清晰而规则，核仁大而明显，电子密度均匀，线粒体形状正常，胞质内无脂肪滴沉积，粗面内质网分布规律；酒精组肝细胞切片，体积肿大，细胞核边缘不规则，核仁不显，线粒体明显肿胀，其粗面内质网明显扩张，出现断裂，胞质内可见到多量大小不一的脂肪滴沉积；酒精加藏茵陈提取物组肝细胞较规则，细胞核仁清晰，有少量的线粒体出现肿胀变形，粗面内质网未见明显的扩张和断裂,少见细胞质内脂肪滴沉积。表2藏茵陈水提取物对大鼠56%乙醇诱导大鼠肝损伤血清转氨酶的影响组别动物只数剂量(g生药/kg)ALT(U/L)AST(U/L)空白对照组12-46.0±12.1176.5±33.6模型对照组12-71.8±22.5*'247.8±60.2*花锚组124.051.8±21.3A188.7±66.4A抱茎獐芽菜组124.053.5±13.4A186.8±35.4A川西獰芽菜组124.045.3士11.0"172.3士43.7"联苯双酯组12100mg/kg41.9士13.4"173.5士47,5"与空白对照组比较*P<0.05，**P<0.01与模型对照k比较AP0.05，AAP0.01实施例6藏茵陈碱水提取物治疗大鼠轻型酒精性肝损伤的试验采用实施例3的提取物进行试验。大鼠正常饲养2d，随机分成正常对照组、酒精模型组(1:1稀释的56°白酒)、联苯双酯阳性对照组(100mg/kg)、川西獐芽菜提取物组(4.0g生药/kg)、抱茎獐芽菜提取物组(4.0g生药/kg、花锚提取物组(4.0g生药/kg)，每组12只。联苯双酯阳性对照组ig联苯双酯+14ml/kgl:l稀释的56°白酒，各给药组均以1.0ml/100g(体重)灌胃藏茵陈提取物+14ml/kgl:l稀释的56°白酒，正常对照组灌胃给予等容积蒸馏水，酒精模型组ig蒸馏水十14ml/kgl:l稀释的56°白酒，共10d。末次给酒后禁食24h，眼眶取血，分离血清。用ALT/AST测试盒测定ALT、AST，结果详见3。而后颈椎脱臼处死大鼠，立即破腹取肝脏，用生理盐水冲洗干净，取肝脏左叶相同部位，用10%福尔马林溶液固定，石蜡包埋，HE染色，作病理检查。结果普通光镜检查正常对照组肝细胞切片具有正常的多边形细胞形状和结构，胞浆丰富，细胞核圆形，肝小叶类圆形；酒精组病理切片见肝细胞明显肿胀，细胞内可见数量较多而不等、大小不一的脂肪滴,细胞核由于脂肪滴的挤压而偏向细胞边缘，肝小叶中央呈现片状或点状坏死；酒精加藏茵陈提取物组切片见肝细胞有肿胀现象，亦有脂肪滴，但肿胀程度及脂肪滴空泡程度明显比酒精组轻，肝细胞脂肪变较轻，脂肪滴小；偶然也可见到少量的肝小叶中央点状坏死。电镜检查观察正常对照组切片中，肝细胞胞质内含丰富的细胞器和包含物,核膜清晰而规则，核仁大而明显，电子密度均匀，线粒体形状正常，胞质内无脂肪滴沉积，粗面内质网分布规律；酒精组肝细胞切片，体积肿大，细胞核边缘不7规则，核仁不显，线粒体明显肿胀，其粗面内质网明显扩张，出现断裂，胞质内可见到多量大小不一的脂肪滴沉积；酒精加藏茵陈提取物组肝细胞较规则，细胞核仁清晰，有少量的线粒体出现肿胀变形，粗面内质网未见明显的扩张和断裂，少见细胞质内脂肪滴沉积。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>与空白对照组比较*P<0.05，**P<0.01与模型对照组比较AP0.05,AAP0.01以上试验表明，本发明的藏茵陈(分别为川西獐芽菜、抱茎獐芽菜、花锚)醇提取物、水提取物、碱水提取物均具有确切的治疗轻型酒精性肝损伤的作用，由于目前在临床上还没有明确的治疗轻型酒精性肝病的药品，则开发本品具有一定的临床价值。权利要求1、藏茵陈提取物在制备治疗轻型酒精性肝病药物中的新用途。2、一种如权利要求I所述的藏茵陈提取物在用于制备治疗轻型酒精性肝病药物中的新用途，其特征在于所述藏茵陈提取物包括乙醇提取物、水提取物和碱水提取物。3、如权利要求1或2所述的藏茵陈提取物在用于制备治疗轻型酒精性肝病药物中的新用途，其特征在于所述藏茵陈乙醇提取物是取藏茵陈1120g，切碎，以10倍量的纯化水提取三次，每次3小时，合并提取液，滤过，浓縮到相对密度为1.04~1.06(60°C)，加入乙醇，调节乙醇浓度为85%，静置24小时；上述乙醇溶液，过滤，滤液回收乙醇继续浓縮成清膏，即得。4、如权利要求1或2所述的藏茵陈提取物在用于制备治疗轻型酒精性肝病药物中的新用途，其特征在于所述藏茵陈水提取物是取藏茵陈1120g，切碎，以10倍量的纯化水提取三次，每次3小时，合并提取液，滤过，浓縮到相对密度为1.04~1.06〔6(TC),加入乙醇，调节乙醇浓度为85%，静置24小时；上述乙醇溶液，过滤，滤液回收乙醇继续浓縮成清膏，即得。"5、如权利要求1或2所述的藏茵陈提取物在用于制备治疗轻型酒精性肝病药物中的新用途，其特征在于所述藏茵陈碱水提取物是取藏茵陈1120g，切碎，以10倍量的0.2。/。NaOH溶液提取三次，每次3小时，合并提取液，滤过，浓縮到相对密度为1.04-1.06(6(TC)，加入乙醇，调节乙醇浓度为85%，静置24小时；上述乙醇溶液，过滤，滤液回收乙醇继续浓縮成清膏，即得。全文摘要本发明提供了藏茵陈提取物在制备治疗轻型酒精性肝病药物中的新用途，该提取物包括乙醇提取物、水提取物及碱水提取物；以藏茵陈质量计，大鼠按4.0g生药/kg给予藏茵陈提取物，试验证明藏茵陈对酒精引起的轻型酒精性肝损伤模型有治疗作用，可以促进酒精引起的大鼠轻型酒精性肝损伤的逆转。文档编号A61K36/51GK101653475SQ20091016762公开日2010年2月24日申请日期2009年9月14日优先权日2009年9月14日发明者浩张,黄绍渊申请人:成都力思特制药股份有限公司