一种头孢美唑钠前体脂质体制剂的制作方法

专利名称：：一种头孢美唑钠前体脂质体制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种脂质体制剂，尤其是涉及头孢美唑钠前体脂质体制剂及其制法，属于医药
技术领域：
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背景技术：
：头孢美唑钠，其化学名称为(6R，7R)-7-[2-[(氰甲基)硫]乙酰氨基]-7-甲氧基-3-[[(1-甲基-111-四唑-5-基)硫]甲基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸钠盐，分子式C15H16N7Na05S3，分子量493.52，结构式为头孢美唑钠为第二代头孢菌素，对阴性杆菌产生的广谱/3-内酰胺酶有较好的稳定性，大肠杆菌、克雷伯肺炎杆菌、奇异变形杆菌、志贺菌属、沙门菌属等阴性杆菌对本品有较好的敏感性，金葡菌、A组溶血性链球菌、卡他布拉汉菌对本品高度敏感，对脆弱拟杆菌有较好的抗菌活性，肠杆菌属、假单胞菌属、耐甲氧西林金葡菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌对本品不敏感或耐药。临床上用于敏感菌引起的呼吸系统感染、胆道感染、泌尿系感染、妇产科细菌感染、皮肤软组织感染及手术后预防感染等。目前上市的头孢美唑钠为无菌粉针剂，稳定性差，对温度和光的不稳定，复溶后出现混浊现象，而且需阴凉处保存。中国专利CN101332188A公开了一种采用超微粉碎技术制备头孢美唑钠无菌粉末的方法，将头孢美唑钠经超微粉碎机，通过气流粉碎技术，粉碎成粒径为1250-2500目的超微细粉，再进行无菌分装，制得注射用无菌粉末。该方法只是改变了分装过程中的流动性差和复溶慢的缺点，在水溶液中同样会很快水解氧化，并没有改变稳定性差的问题。脂质体(liposomes)最初是由英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层泡囊，每层均为脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约4nm，后来将这种类似生物膜结构的双分子小囊成为脂质体。
发明内容针对目前的头孢美唑钠溶液稳定性差的问题，本发明的目的在于提供一种头孢美唑钠前体脂质体制剂，其不仅具有良好的制剂稳定性，而且在冻干过程中脂质体不会因脱水、融合、冰晶生成等发生破裂，水化复溶之后，脂质体同样保持良好的包封率。本发明的目的还在于提供一种头孢美唑钠前体脂质体制剂的制备方法，以获得本发明所述的脂质体制剂，优于现有技术的产品。本发明解决的技术方案如下本发明提供一种头孢美唑钠前体脂质体制剂，其特征在于按重量份计算，由如下组分制成头孢美唑钠l份，脂质体载体315份，支持剂210份，其中，所述的脂质体载体为多烯磷脂酰胆碱、胆固醇和油酸，并且多烯磷脂酰胆碱:胆固醇:油酸按重量比为(420):(15):1。进一步地，作为优选，本发明上述所述的头孢美唑钠前体脂质体制剂，其中，多烯磷脂酰胆碱:胆固醇:油酸按重量比为(516):(1.54):1。本发明上述所述的头孢美唑钠前体脂质体制剂，其中，所述的支持剂，可以选自甘露醇、乳糖、葡萄糖、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐、山梨醇、氯化钠、甘氨酸、水解明胶中的一种或多种；作为本发明最优选的，其中所述的支持剂为氯化钠、甘氨酸、甘露醇三者的混合物，三者重量比为l:2:2。作为本发明另一发明目的，还提供一种制备上述所述的头孢美唑钠前体脂质体制剂的方法，其包括如下步骤(1)将多烯磷脂酰胆碱、胆固醇、油酸溶于有机溶剂中，除去有机溶剂，制得磷脂膜；(2)加入缓冲盐溶液使磷脂膜完全水化，制成空白脂质体混悬液；(3)将头孢美唑钠溶于水，加入空白脂质体混悬液中，再加入支持剂，得头孢美唑钠脂质体溶液；(4)将上述溶液冷冻干燥或喷雾干燥，制得头孢美唑钠前体脂质体，在无菌5条件下分装；或将上述溶液灌装于西林瓶中，冷冻干燥，制得头孢美唑钠脂质体制剂。作为优选地，上述所述的制备头孢美唑钠前体脂质体制剂的方法，其包括如下步骤(1)将多烯磷脂酰胆碱、胆固醇、油酸溶于有机溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，制得磷脂膜；(2)加入缓冲盐溶液，振摇，搅拌使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；(3)将头孢美唑钠溶于水，微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，保温50-60'C搅拌30-60分钟，再加入支持剂，搅拌溶解，冷却到室温，得头孢美唑钠脂质体溶液；(4)将上述溶液冷冻千燥或喷雾干燥，制得头孢美唑钠前体脂质体，在无菌条件下分装；或灌装于西林瓶中，冷冻干燥，制得头孢美唑钠脂质体制剂。其中，上述所述的制备头孢美唑钠前体脂质体制剂的方法，其所述的有机溶剂可以为氯仿、二氯甲垸、乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、苯甲醇、正己垸中的一种或几种。作为本发明最优选的，其中的有机溶剂为乙醇、异丙醇、乙醚三者的混合溶剂，三者体积比为2:1:1。本发明上述所述的制备头孢美唑钠前体脂质体制剂的方法，其中所述的缓冲盐溶液，优选其pH值为5.8-6.0;优选所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种或几种。作为本发明具体实施方案之一，优选通过上述任一项所述的方法所制得的头孢美唑钠前体脂质体制剂，其中，所述的支持剂为氯化钠、甘氨酸、甘露醇三者的混合物，三者重量比为l:2:2，所述的有机溶剂为乙醇、异丙醇、乙醚三者的混合溶剂，三者体积比为2:1:1。本发明提供的头孢美唑钠前体脂质体制剂，通过特定的脂质体载体，所制得的头孢美唑钠前体脂质体，是具有良好流动性的颗粒或粉末，贮存稳定，应用前与水水合即可分散或溶解成等涨的脂质体，其进行稳定性试验考察，在高温6(TC、光照4500Lx条件下放置10天，各项检测指标均无明显变化；在高温40°C、相对湿度75%±5%条件下加速试验6个月，各项检测指标没有明显变化；在高温25'C、相对湿度60%±10%条件下长期试验18个月，各项检测指标没有明显变化。而且，本发明所述的头孢美唑钠前体脂质体制剂，还选用特定的支持剂，并在制备过程中使用有效的有机溶剂系统制得磷脂膜，保证产品质量，特别是头孢美唑钠被包裹于脂质体内，不仅大大提高了稳定性，而且在冻干过程中脂质体不会因脱水、融合、冰晶生成等发生破裂，水化复溶之后，脂质体同样保持良好的包封率。本发明提供的头孢美唑钠前体脂质体制剂，进行急性毒性试验、异常毒性试验和热源检査，均符合规定，安全性得到证明。本发明提供的头孢美唑钠前体脂质体制剂，与现有技术相比，具有意想不到的效果，主要优点如下-(1)头孢美唑钠被包裹于脂质体内，大大提高了稳定性，水化复溶之后，脂质体的包封率未曾降低，保证了产品质量；(2)药物载体脂质体体内降解、无毒性和无免疫原性，而且可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用；(3)采用常规的工艺设备，可工业规模、高效率生产，产品质量稳定，是一种独特和普遍适用的，低成本的工业化制备方法。具体实施例方式以下通过实施例进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。实施例1头孢美唑钠前体脂质体的制备处方头孢美唑钠25g多烯磷脂酰胆碱250g胆固醇40g油酸15g氯化钠20g甘氨酸40g甘露醇40g制备工艺(1)将250g多烯磷脂酰胆碱、40g胆固醇和15g油酸溶于1200ml乙醇/异丙醇/乙醚=2:1:1混合溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去混合溶剂，制得磷脂膜；(2)加入pH值5.8磷酸盐缓冲溶液1000ml，振摇，搅拌使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；(3)将25g头孢美唑钠溶于500ml水，微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，保温5(TC搅拌60分钟，再加入20g氯化钠、40g甘氨酸、40g甘露醇，搅拌溶解，冷却到室温，得头孢美唑钠脂质体溶液；(4)将上述溶液喷雾干燥，制得头孢美唑钠前体脂质体，在无菌条件下分装0.05g(头孢美唑计)/瓶，制得头孢美唑钠脂质体制剂。实施例2头孢美唑钠前体脂质体的制备处方头孢美唑钠50g多烯磷脂酰胆碱350g胆固醇100g油酸25g氯化钠30g甘氨酸60g甘露醇60g制备工艺(1)将350g多烯磷脂酰胆碱、100g胆固醇和25g油酸溶于1500ml乙醇/异丙醇/乙醚=2:1:1的混合溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去混和溶剂，制得磷脂膜；(2)加入pH值6.0醋酸盐缓冲溶液1000ml，振摇，搅拌使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；(3)将50g头孢美唑钠溶于800ml水，微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，保温6(TC搅拌30分钟，再加入30g氯化钠、60g甘氨酸、60g甘露醇，搅拌溶解，冷却到室温，得头孢美唑钠脂质体溶液；(4)将上述溶液灌装于西林瓶中，O.lg(头孢美唑计)/瓶，冷冻干燥，制得头孢美唑钠脂质体制剂。实施例3头孢美唑钠前体脂质体的制备8头孢美唑钠100g多烯磷脂酰胆碱300g胆固醇150g油酸60g氯化钠80g甘氨酸160g甘露醇160g制备工艺(1)将300g多烯磷脂酰胆碱、150g胆固醇和60g油酸溶于1500ml乙醇/异丙醇/乙醚=2:1:1的混合溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去混合溶剂，制得磷脂膜；(2)加入pH值6.0枸橼酸盐缓冲溶液1200ml，振摇，搅拌使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；(3)将100g头孢美唑钠溶于1500ml水，微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，保温55'C搅拌40分钟，再加入80g氯化钠、160g甘氨酸、160g甘露醇，搅拌溶解，冷却到室温，得头孢美唑钠脂质体溶液；(4)将上述溶液冷冻干燥，制得头孢美唑钠前体脂质体，在无菌条件下分装0.05g(头孢美唑计)/瓶，制得头孢美唑钠脂质体制剂。实施例4头孢美唑钠前体脂质体的制备处方头孢美唑钠200g多烯磷脂酰胆碱1000g胆固醇300g油酸200g氯化钠280g甘氨酸560g甘露醇560g制备工艺(1)将1000g多烯磷脂酰胆碱、300g胆固醇和200g油酸溶于4000ml乙醇/异丙醇/乙醚=2:1:1的混合溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去混合溶剂，制得磷脂膜；(2)加入pH值6.0磷酸盐缓冲溶液3000ml，振摇，搅拌使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；(3)将200g头孢美唑钠溶于2000ml水，微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，保温50'C搅拌60分钟，再加入280g氯化钠、560g甘氨酸和560g甘露醇，搅拌溶解，冷却到室温，得头孢美唑钠脂质体溶液；(4)将上述溶液冷冻干燥，制得头孢美唑钠前体脂质体，在无菌条件下分装0.2g(头孢美唑计)/瓶，制得头孢美唑钠脂质体制剂。对比例1头孢美唑钠前体脂质体的制备处方头孢美唑钠25g氢化蛋黄卵磷脂250g泊洛沙姆18840g亚油酸15g葡萄糖20g山梨醇40g甘露醇40g制备工艺同实施例l，在无菌条件下分装0.05g(头孢美唑计)/瓶，制得头孢美唑钠脂质体制剂。对比例2头孢美唑钠前体脂质体的制备处方头孢美唑钠50g多烯磷脂酰胆碱40g胆固醇60g油酸40g氯化钠30g甘氨酸30g甘露醇30g制备工艺同实施例2，在无菌条件下分装O.lg(头孢美唑计)/瓶，制得头孢美唑钠脂质体制剂。试验例l包封率的测定取实施例和对比例制备的脂质体制剂，高效液相色谱法检测头孢美唑的总含量为M，选用柱色谱法分离脂质体。取1.5g葡聚糖凝胶G-50，用pH6.8磷酸盐缓冲液浸泡溶胀12h以上，装入层析柱内(200xl0mm)，用上述磷酸盐缓冲液冲洗平衡，分别取实施例1-3和对比例l-2得到的头孢美唑钠脂质体制剂加水溶解，制成每lml含有头孢美唑约22mg的溶液，分别取各溶液1.8ml，加入层析住顶部，用磷酸盐缓冲液50ml洗脱，流速1.6ml/min，收集的洗脱液加入破膜剂(乙醇苯甲醇=6:1)50ml，混匀，高效液相色谱法检测头孢美唑的含量M1。包封率。/^Ml/Mx100%。表l敏,定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>由以上结果可知，实施例1-3制得的脂质体显球状，粒径均匀，范围为100-200nm;对比例1-2制得的脂质体形状不定，杂乱无章，大小不一，粒径不均匀，范围为400-800nm。试验例3稳定性考察将以上各实施例制备的样品与上市的头孢美唑钠粉针剂(四川合信药业有限责任公司生产，批号200801144，规格0.5g/瓶)在高温60。C、光照4500Lx条件下放置10天进行影响因素试验考察，结果见表3;在高温40'C、相对湿度75%±5%条件下6个月，进行加速试验考察，结果见表4;在高温25'C、相对湿度60%±10%条件下18个月，进行长期试验考察，检测各项质量指标的变化，结果见表5。表3影响因素结果时间样品性状酸度澄明度有关物质(%)含量(%)实施例1白色粉末5.8符合规定0.88跳7实施例2白色块状物5.9符合规定0.9099.3o天实施例3白色粉末6.0符合规定0.87101.4实施例4白色粉末6.0符合规定0.9398.9上市制剂白色粉末5.5符合规定1.4499.7实施例1白色粉末5.8符合规定0.90100.710天实施例2白色块状物5.9符合规定0.9099.3咼温实施例3白色粉末5.9符合规定0.88101.360。C实施例4白色粉末6.0符合规定0.9498.9上市制剂白色粉末5.3符合规定1.5599.4实施例1白色粉末5.8符合规定0.91100.7610天实施例2白色块状物5.8符合规定0.9299.3光照实施例3白色粉末6.0符合规定0.87101.44500Lx实施例4白色粉末5.9符合规定0.9398.8上市制剂白色粉末5.3符合规定1.5799.2表4加速试验结果时间样品性状酸度澄明度有关物质(％)含量(%)l月实施例1白色粉末5.8符合规定0.89100.6实施例2白色块状物5.8符合规定0.9099.3实施例3白色粉末6.0符合规定0.87101.3实施例4白色粉末5.9符合规定0.9498.9上市制剂白色粉末5.3符合规定1.4999.5实施例1白色粉末5.8符合规定0.90100.7实施例2白色块状物5.9符合规定0.9199.22月实施例3白色粉末5.9符合规定0.87101.4实施例4白色粉末6.0符合规定0.9498.9上市制剂白色粉末5.0符合规定1.5399.3实施例1白色粉末5.7符合规定0.90100.6实施例2白色块状物5.9符合规定0.9199.33月实施例3白色粉末5.8符合规定0.88101.2实施例4白色粉末5.9符合规定0.9598.8上市制剂白色粉末4.8不符合规定1.5899.0实施例1白色粉末5.8符合规定0.91100.5实施例2白色块状物5.8符合规定0.9299.16月实施例3白色粉末5.9符合规定0.88101.2实施例4白色粉末5.9符合规定0.9598.8上市制剂白色粉末4.3不符合规定1.7398.1表5长期试验结果时间样品性状酸度澄明度有关物质(％)含量(%)实施例1白色粉末5.8符合规定0.89100.6实施例2白色块状物5.8符合规定0.9099.33月实施例3白色粉末6.0符合规定0.87101.4实施例4白色粉末6.0符合规定0.9398.9上市制剂白色粉末5.4符合规定1.4899.56月实施例1白色粉末5.8符合规定0.89100.6实施例2白色块状物5.9符合规定0.9099.3实施例3白色粉末5.9符合规定0.88101.2实施例4白色粉末6.0符合规定0.9398.9<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由以上结果发现加速3月、6月，长期12月、18月时上市的头孢美唑钠粉针澄明度不符合规定，pH值下降较大，含量降低明显，有关物质升高；而本发明制备的样品外观性状没有明显变化，复溶良好，澄明度、pH值、含量和有关物质也没有明显的变化。说明本发明制备的样品长期贮存质量稳定性更好。而且，通过进一步的常规试验获得，本发明的前体脂质体粉针水化复溶之后，包封率没有发生变化，远远优于现有技术的产品。试验例4安全性试验异常毒性检査依据2005年版药典附录XIC异常毒性检査法，将本发明制备的样品用氯化钠溶液稀释成一定浓度的供试品溶液，注入符合试验要求的小鼠体内，结果小鼠在48小时内均没有死亡现象，说明本品异常毒性符合规定。热源检査依据2005版药典附录XID热源法进行检査，结果符合规定。权利要求1、一种头孢美唑钠前体脂质体制剂，其特征在于按重量份计算，由如下组分制成头孢美唑钠1份，脂质体载体3～15份，支持剂2～10份，其中，所述的脂质体载体为多烯磷脂酰胆碱、胆固醇和油酸，并且多烯磷脂酰胆碱∶胆固醇∶油酸按重量比为(4～20)∶(1～5)∶1。2、根据权利要求l所述的头孢美唑钠前体脂质体制剂，其中，多烯磷脂酰胆碱:胆固醇:油酸按重量比为(516):(1.54):1。3、根据权利要求1_2所述的头孢美唑钠前体脂质体制剂，其中，所述的支持剂选自甘露醇、乳糖、葡萄糖、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐、山梨醇、氯化钠、甘氨酸、水解明胶中的一种或多种。4、根据权利要求1-3所述的头孢美唑钠前体脂质体制剂，其特征在于所述的支持剂为氯化钠、甘氨酸、甘露醇三者的混合物，三者重量比为1:2:2。5、一种制备权利要求l一4所述的头孢美唑钠前体脂质体制剂的方法，其包括如下步骤(1)将多烯磷脂酰胆碱、胆固醇、油酸溶于有机溶剂中，除去有机溶剂，制得磷脂膜；(2)加入缓冲盐溶液使磷脂膜完全水化，制成空白脂质体混悬液；(3)将头孢美唑钠溶于水，加入空白脂质体混悬液中，再加入支持剂，得头孢美唑钠脂质体溶液；(4)将上述溶液冷冻干燥或喷雾干燥，制得头孢美唑钠前体脂质体，在无菌条件下分装；或将上述溶液灌装于西林瓶中，冷冻干燥，制得头孢美唑钠脂质体制剂。6、根据权利要求5所述的制备头孢美唑钠前体脂质体制剂的方法，其包括如下步骤(1)将多烯磷脂酰胆碱、胆固醇、油酸溶于有机溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，制得磷脂膜；(2)加入缓冲盐溶液，振摇，搅拌使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；(3)将头孢美唑钠溶于水，微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，保温50-60'C搅拌30-60分钟，再加入支持剂，搅拌溶解，冷却到室温，得头孢美唑钠脂质体溶液；(4)将上述溶液冷冻干燥或喷雾干燥，制得头孢美唑钠前体脂质体，在无菌条件下分装；或灌装于西林瓶中，冷冻干燥，制得头孢美唑钠脂质体制剂。7、根据权利要求5—6所述的制备头孢美唑钠前体脂质体制剂的方法，其特征在于所述的有机溶剂可以为氯仿、二氯甲烷、乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、苯甲醇、正己垸中的一种或几种。8、根据权利要求7所述的制备头孢美唑钠前体脂质体制剂的方法，其特征在于有机溶剂为乙醇、异丙醇、乙醚三者的混合溶剂，三者体积比为2:1:1。9、根据权利要求5-8所述的制备头孢美唑钠前体脂质体制剂的方法，其特征在于所述的缓冲盐溶液的pH值为5.8-6.0;优选所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种或几种。10、由权利要求5—9任一项所述的方法所制得的头孢美唑钠前体脂质体制剂，其中，所述的支持剂为氯化钠、甘氨酸、甘露醇三者的混合物，三者重量比为l:2:2，所述的有机溶剂为乙醇、异丙醇、乙醚三者的混合溶剂，三者体积比为2:1:1。全文摘要本发明提供一种头孢美唑钠前体脂质体制剂。所述的头孢美唑钠前体脂质体制剂，按重量份计算，由如下组分制成头孢美唑钠1份，脂质体载体3～15份，支持剂2～10份，其中，所述的脂质体载体为多烯磷脂酰胆碱、胆固醇和油酸，并且多烯磷脂酰胆碱∶胆固醇∶油酸按重量比为(4～20)∶(1～5)∶1。本发明的头孢美唑钠前体脂质体制剂，不仅具有良好的制剂稳定性，而且在冻干过程中脂质体不会因脱水、融合、冰晶生成等发生破裂，水化复溶之后，脂质体同样保持良好的包封率。文档编号A61K9/127GK101623264SQ20091016923公开日2010年1月13日申请日期2009年8月24日优先权日2009年8月24日发明者民邱申请人:海南美大制药有限公司