一种拉坦前列素眼用即型缓释凝胶的制作方法
专利名称：一种拉坦前列素眼用即型缓释凝胶的制作方法
技术领域：
提供一种拉坦前列素眼用即型缓释凝胶；该药物用于开角型青光眼及用其它药 物难以治疗或耐受的眼压过高病人的局部治疗。可解决普通滴眼剂眼内滞留时间短、 生物利用度不高的问题，也克服了普通眼用凝胶缺乏良好的铺展性，剂量不易控制的问 题；将眼用药物的生物利用度从提高到15%-20%，为眼用缓释制剂在临床的推 广提供依据。
背景技术：
我国40岁人口中青光眼患者高达940万其中致盲患者达520万，而且绝大部分 为慢性病程，需要长期使用降眼压药物治疗。前列腺素类滴眼液具有副作用少，高效安 全的特点，降眼压幅度大而稳定，使用方便，几乎无全身副作用，已经成为欧美、日本 的抗青光眼一线用药。因国内尚无本品销售及进口品，其市场前景极为可观。青光眼是由于眼压升高导致视神经损害和视野缺损的一类疾病，是当今最主要 的不可逆性致盲眼病，在我国，原发性青光眼有上千万人之多，药物降眼压是早期青光 眼治疗最有效最重要的手段。降低眼压仍然是唯一有效措施，它可减轻青光眼对视野所 造成的损害，因此研发降眼压药在青光眼的治疗中极为重要。青光眼视神经保护药物的 种类不少，新的药物不断推出，理想的抗青光眼药物应具备以下特点①良好的降眼压 效果；②对夜间眼压和眼压波动的良好控制；③促进生理性房水排出途径排出量增加；
④具有视神经保护作用提高视乳头血流灌注量，阻止并逆转视网膜节细胞调亡过程；
⑤具有药物协同作用；⑥局部和全身副作用轻微，使用方便，患者依从性良好。符合上 述特点的药物应是未来抗青光眼药物开发和研究的方向。前列腺素类滴眼液具有上述的 特点，降眼压幅度大而稳定，使用方便，几乎无全身副作用，已经成为欧美、日本的抗 青光眼一线用药。研制合适的眼部制剂是极富挑战性的领域。眼部的解剖学、生理学、生化学性 质使得眼部外用药物的渗透性很差。如何让更多得药物渗透到眼内、而不造成眼组织的 持久损伤，是当前眼部给药研究的一个热点。为了及时有效的治疗和控制病情，合理的 剂型能保证眼部用药的安全有效，提高药物的生物利用度。因此研制新的眼部给药剂型 始终是非常必要的。拉坦前列素(latanoprost，商品名Xalatan)是1996年开发出的治疗青光眼和高
眼压新药。它是前列腺素(PGF2ci)的类似物，以异丙酯的形式存在。化学名称为 [[lR]12(z), 2i3(R*)，32，52]]-7_[3，5-二羟基-2-(3-羟基-5-苯戊基)环戊基]-5-庚 烯酸-1-甲基乙基酯。理化性质本品为几乎无色的浅黄色粘性油状物，其相对分子质量为432.58， 化学分子式为C26H4005。药理作用拉坦前列素是一种新型苯基替代的丙基酯前列素F2a，为选择性F2a 受体激动剂。它是一种无活性但能迅速渗透到角膜里的物质，在角膜和血浆中可水解为具有活性的游离酸。它能增加房水通过眼角素层的流出量，用药量小，但促进房水充出 量大，药液能渗透到眼球上睫脉络膜上层，具有良好降眼压效果。本品还可将使青光眼 患者通常会堵塞的眼球小梁结构筛网通畅。拉坦前列素有别于迄今为止所有在应用的抗 青光眼药物其独特的降眼压机制是通过增加葡萄膜巩膜外流而降低眼压，不影响房水生 成，临床前资料证实，它通过松弛睫状体的平滑肌，降解细胞外基质，重组细胞外基质 中的胶原，改变细胞形态，开放细胞间隙等促进房水的外流，它不抑制房水的生成，更 有利于眼前段组织的营养和代谢，文献报道，拉坦前列素在日间，夜间均可取得相同良 好的降眼压疗效，可提高夜间眼灌注压，而夜间眼灌注压降低是造成青光眼视乳头改变 的重要因素之一。因此，拉坦前列素也适用于正常眼压性青光眼。拉坦前列素每日仅用 1次，有助于提高患者的用药依从性。研究未发现拉坦前列素在心，肺，血压及其他方 面的全身不良反应，这也是拉坦前列素不同于B-受体阻滞剂和肾上腺素能制剂的优点之 一，国外资料证实，拉坦前列素是在众多前列腺素衍生物中筛选出来的疗效和不良反应 分离最好的衍生物，这是由于其特异性受体药代动力学特点所决定的。局部滴用0.005% 拉坦前列素后3 4时开始生效，8 12小时达高峰，降眼压效果持续约20 23小时， 且存在后续效应，因此一天只需用药一次即可良好维持眼压，局部滴用0.005%拉坦前列 素后的血浆浓度很低，且衰期仅17分钟，故全身副作用少。拉坦前列素滴眼液对于原发 性开角型青光眼和高眼压症的降眼压疗效较015%的噻吗心安滴眼液更强，且局部不良反 应轻微，无全身不良反应，是适合于中国人应用的安全理想的抗青光眼药物。
我国市场上主要的抗青光眼滴眼液有15种，我国40岁人口中青光眼患者绝大 部分为慢性病程，需要长期使用降眼压药物治疗。眼用制剂主要为滴眼剂、眼膏剂、眼 用凝胶。其中滴眼剂大多数是药物的溶液剂，滴入眼内以后，由于眼睑的眨动和泪液的 分泌，数分钟内可被稀释至原来浓度的0.1%，需要增加给药次数来提高生物利用度。眼 膏通常以油脂性材料作为基质，油腻感强、使用后视力模糊。眼用凝胶剂是以亲水性聚 合物为载体，有较好的生物相容性，为半固体状态，可延长药物的作用时间，减小用药 次数；但给药剂量不易控制。因此急需将拉坦前列素研制成为一种可以解决普通滴眼剂 眼内滞留时间短、生物利用度不高的问题，同时可以克服普通眼用凝胶缺乏良好的铺展 性，剂量不易控制的问题的新型眼用制剂。
发明内容
为解决上述现有制剂的各种缺陷，提供一种拉坦前列素眼用即型凝胶，该凝胶 制剂不同于传统的亲水凝胶，滴入形式是液体，进入眼穹隆经过相转变成粘弹性胶体。 它根据体内外不同的生理环境(pH)发生相转化，体外以液体形式存在，滴入眼内立刻转 为凝胶。在pH4低粘度时，是低粘度流体，聚合材料与泪液接触(pH7.2-7.4)聚集，几 秒内形成在位凝胶。在pH4.0时，；在pH7.4时转为凝胶。药物释放度实验表明具有缓 释作用，克服了许多眼用药物吸收差，主要由于眼泪使其消除加快，用卡波姆可制得透 明的眼用凝胶，延长药物在角膜的滞留时间，因而可增加药物的吸收。溶液中加入了卡 波姆，增加了眼药水的粘度，延长药物与眼局部接触时间，且其与碱性药物生成可溶性 凝胶型内盐，使药物缓释而达到延效与增效作用，无刺激性且稳定性好。该剂型具有新颖性，在贮存期呈液态，滴入眼内后呈半固体状态，不仅可解决普通滴眼剂眼内滞留时间短、生物利用度不高的问题，也克服了普通眼用凝胶缺乏良好 的铺展性，剂量不易控制的问题。该剂型具有一定的应用和发展前景，其毒性低，刺激 性小，生物相容性好，可提高患者依从性和耐受性。与滴眼液、眼膏等常用传统剂型 相比有如下优点A.本品室温下为液体状态，剂量容易准确控制、使用方便，且滴入眼 内后易于铺展。B.凝胶为水性基质，粘性适中，润滑性好，对眼部无刺激性，且透明 性好，不影响视线，使用后不留痕迹，因此不会影响美观，使用舒适。C.凝胶滴入眼 后，均勻铺展，粘附在眼球及眼睑表面成凝胶，不会像滴眼液那样大部分流失，从而使 药物在眼部缓慢释放，维持相对长的治疗时间，较滴眼液更能发挥治疗作用，增强治疗 效果。D.本发明的在体凝胶制剂在流变学上呈塑性后假塑性性质，随眨眼而粘度降低， 使用感觉舒适，在不眨眼时，又能恢复粘度。经临床实验证实，其具有显著的抗感染作 用，并由于眼用凝胶缓释作用，药物的使用次数可较同类滴眼液少，这样既保证了治疗 效果，又大 大方便了患者。本申请所述的拉坦前列素眼用即型凝胶滴入形式是液体，进入眼穹隆经过相转 变成粘弹性胶体。在PH 5低粘度时，聚合材料与泪液接触(PH7.2-7.4)聚集，几秒内形成 在位凝胶。载体包括邻苯二甲酸醋酸纤维素乳胶(CAP，30%w/w,粘度50mPa · s)， 交联丙烯酸及其衍生物如卡波普和聚卡波菲，以及肠溶型丙烯酸树脂与聚乙烯吡咯烷酮 合用。此类在位凝胶的形成要求CAP浓度高达50%，溶液pH为5。具有①在水性环境 的高载药量，保护稳定性差不受体液环境破坏；②长时间的药物控制释放；③凝胶的水 性性质使之与机体有良好相容性；④对特定部位的生物粘附性质形成在位形成凝胶。基质材料的选择我们考察不同类型和浓度的高分子溶液的力学性能，为以后 的处方筛选进行预备研究。具有合适的粘度的凝胶剂，将有利于提高药物在眼部的滞留 时间和给药使利性。寻找合适浓度的高分子溶液，作为做凝胶剂的基质。目前制备凝 胶剂的基质材料很多，如纤维素类，聚丙烯酸类，聚乙烯醇< 乂入)，聚乙烯毗咯烷酮 < PVP),海藻酸钠等，它们都有乳附作用。其中，聚丙烯酸类以卡波姆(Carbomer)为 代表。纤维素类中常用的有羟丙基甲基纤维素(HPMC)，梭甲基纤维素(CMC)，甲基 纤维素(MC).等。卡波姆(Carbomer)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)和其它材料相比而 言，在相同的粘度下有较高的滞留时间。因此，我们初步选择运用卡波姆(Carbomer)和 羟丙基甲基纤维素(HPMC)为凝胶剂基质材料。卡波姆是白色疏松的粉末，具有较强的吸湿性。由于其分子结构中含有竣酸基 团，其溶液有一定的酸性，可以被无机或有机碱中和，形成凝胶。卡波姆溶液被中和 后，由于装基负离子的负电荷间的相互排斥作用，使分子链弥散伸展，呈现极大的膨胀 状态，导致分子链之间相互缠绕而使溶液具有粘性。溶液粘度与其pH值有关，通常pH 值在6-11之间时，材料的粘度最大。本发明的目的是这样实现的一种治疗青光眼的拉坦前列素眼用即型凝胶，其特征在于该凝胶剂型的聚合物 载体由浓度为0.1% -1.0%的卡波姆溶液与浓度为-3%的羟丙基甲基纤维素溶液组 成；该凝胶制剂滴入形式是液体，进入眼穹隆经过相转变成粘弹性胶体，并粘附在角 膜表面，可持续释放药物进入角膜和眼内，凝胶逐渐溶蚀并被眨眼动用及泪液从眼内移 除。
该凝胶在pH值为4时，是低粘度流体状态，在pH7.2-7.4时，聚合材料与泪液 接触聚集，几秒内形成在位凝胶。该凝胶所使用的聚合物基质卡波姆的型号为卡波姆C-940。如权利 要求1所述的眼用即型凝胶作为滴眼剂给药。一种拉坦前列素眼用即型凝胶的制备方法，其特征在于分别配制浓度为 0.1-1.0%的卡波姆溶液；浓度为1-3%的羟丙基甲基纤维素溶液，将拉坦前列素溶解在 上述凝胶聚合物载体的溶液中制成。
具体实施例方式实施例1按照上述方法取所需量的卡波姆(C-940)洒在装有适量的去离子水的烧杯中， 静置浸泡直到卡波姆完全溶胀配制得到浓度0.1%的卡波姆溶液。在玻璃棒搅拌下，滴加 10% NaOH溶液至PH为7.0，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可。再取所需量的羟丙基甲基纤维素(HPMCK4M)于烧杯中，加入适量的去离子 水，浸泡至完全溶胀，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可，配制得到浓度为的羟丙 基甲基纤维素溶液。将拉坦前列素溶解在上述凝胶聚合物载体的溶液中制成。实施例2按照上述方法取所需量的卡波姆(C-940)洒在装有适量的去离子水的烧杯中， 静置浸泡直到卡波姆完全溶胀配制得到浓度0.2%的卡波姆溶液。在玻璃棒搅拌下，滴加 10% NaOH溶液至PH为7.0，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可。再取所需量的羟丙基甲基纤维素(HPMCK4M)于烧杯中，加入适量的去离子 水，浸泡至完全溶胀，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可，配制得到浓度为的羟丙 基甲基纤维素溶液。将拉坦前列素溶解在上述凝胶聚合物载体的溶液中制成。实施例3按照上述方法取所需量的卡波姆(C-940)洒在装有适量的去离子水的烧杯中， 静置浸泡直到卡波姆完全溶胀配制得到浓度0.3%的卡波姆溶液。在玻璃棒搅拌下，滴加 10% NaOH溶液至PH为7.0，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可。再取所需量的羟丙基甲基纤维素(HPMCK4M)于烧杯中，加入适量的去离子 水，浸泡至完全溶胀，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可，配制得到浓度为1.5%的羟 丙基甲基纤维素溶液。将拉坦前列素溶解在上述凝胶聚合物载体的溶液中制成。实施例4按照上述方法取所需量的卡波姆(C-940)洒在装有适量的去离子水的烧杯中， 静置浸泡直到卡波姆完全溶胀配制得到浓度0.5%的卡波姆溶液。在玻璃棒搅拌下，滴加 10% NaOH溶液至PH为7.0，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可。再取所需量的羟丙基甲基纤维素(HPMCK4M)于烧杯中，加入适量的去离子 水，浸泡至完全溶胀，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可，配制得到浓度为2%的羟丙基甲基纤维素溶液。将拉坦前列素溶解在上述凝胶聚合物载体的溶液中制成。实施例5按照上述方法取所需量的卡波姆(C-940)洒在装有适量的去离子水的烧杯中， 静置浸泡直到卡波姆完全溶胀配制得到浓度1.0%的卡波姆溶液。在玻璃棒搅拌下，滴加 10% NaOH溶液至PH为7.0，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可。再取所需量的羟丙基甲基纤维素(HPMCK4M)于烧杯中，加入适量的去离子 水，浸泡至完全溶胀，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可，配制得到浓度为3%的羟丙 基甲基纤维素溶液。将拉坦前列素溶解在上述凝胶聚合物载体的溶液中制成。
下面结合上述具体实施方式
，对本发明进行进一步说明，并非对本发明的下限 定，以上述实施例产品作为样品，对拉坦前列素即型凝胶制剂的粘度、在体消除动力学 及生物利用度、质量标准的制定进行了描述。得到结论本发明所制备的拉坦前列素眼用 即型凝胶粘度符合要求，以羟丙基甲基纤维素与卡波姆联合使用，保持了凝胶的流变学 性质具有良好的缓释作用。1制剂处方的工艺研究完善拉坦前列素眼用即型凝胶处方工艺的筛选，获得成熟、稳定的技术，制成 滴眼剂。在处方筛选过程中应根据所用基质的不同，对高分子辅料的不同型号、分子 量、用量对相变温度、粘度的影响；pH对相变温度、粘度的影响；通过详细的筛选制订 合理的胶凝相变温度限度和相变时间时限。1.1 仪器NDJ-I型转子粘度计(上海安德仪器设备公司)酸度计(PHS-25B型上海天普仪器有限公司)1.2凝胶剂基质样品粘度的测定用NDJ-I型转子粘度计测量在10°C和34°C下各样品的粘度。10°C为环境温度， 34 °C为眼部温度。2.拉坦前列素眼用即型凝胶在体消除动力学和生物利用度。2.1研究方法我们采用非损伤性Y -闪烁照相技术评价拉坦前列素眼用即型凝 胶制剂的眼部消除动力学，利用微渗析取样技术、气相色谱法测定家兔房水内的药物浓 度。以拉坦前列素眼用即型凝胶制剂为受试制剂、拉坦前列素滴眼液为参比制剂，研究 受试制剂在兔眼内药动学，观察拉坦前列素眼用即型凝胶在角膜滞留时间；采用微渗析 取样技术连续取样，进行房水内药物浓度的检测。2.2技术路线将凝胶系统引入拉坦前列素，进行拉坦前列素眼用即型凝胶制剂 的研究，以期通过凝胶制剂延长药物与眼部的接触，利于药物透过角膜进入眼内，发挥 治疗作用。2.3选用材料与方法试剂碍标记的二乙撑三胺五醋酸99mTc-DTPA，氯胺酮；肝素；甲基正壬酮 对照品(中国药品生物制品检定所)；正十五烷；乙酸乙酯(分析纯)；甲醇；乙醇(分 析纯)；拉坦前列素滴眼液；拉坦前列素眼用即型凝胶
仪器岛津GC14气相色谱仪动物白色家兔，早$兼用，体重2.0 3.0kg。实验前24h自由进食、饮水，并进行眼部检查，以确保无任何眼病。方法2.4 Y -闪烁照相研究眼部消除动力学方法制剂的标记用于Y-闪烁照相评价的处方制备成浓溶胶，99mTc-DTPA溶液 于实验当天加入到冷的浓溶胶中，涡旋震荡使其充分混合，最终生成21%P407和10% P188的聚合物溶液。所有制剂的放射活性介于2.IMBq至2.7MBq每40 μ 1剂量之间。实验设计取16只家兔随机分为2组，分别给予锝标记的拉坦前列素滴眼液和拉 坦前列素眼用即型凝胶。Y-闪烁照相研究眼部消除动力学将家兔用兔夹固定，使其保持清醒状态卧于 SPECT系统的监测器前，低能高分辨率探头距离兔眼5cm。待测的放射性标记溶液于室 温放置30min，然后滴加40 μ 1至左眼角膜表面12点钟位置。盛有相同剂量待测溶液的 尖底塑料管用胶带固定在左后眼角与左耳之间，作为位置参照物。SPECT系统自动调节 至140KeV测定99mTc的放射线，给药5s后开始连续动态采集。采用128X 128像素矩 阵，IOmin内先后以36X 5s再12X IOs最后15X 20s的顺序采集63帧动态图像口全部图像均划分出5个感兴趣区域(ROI)，分别为1.位置参照，2.角膜表面， 3.内眼角，4.鼻泪管和5.背景，放射性标记物的移动准确地落在这些区域内。记录眼部 应用标记制剂后第0、2、5和IOmin时的Y-闪烁照相结果。2.5微渗析技术研究拉坦前列素眼用即型凝胶剂兔眼内药动学。探针的植入手术前30min和4h后，家兔耳缘静脉注射100u/kg肝素钠，以防止由于炎症 反应引起前房内纤维生成。肌肉注射50mg/kg氯胺酮麻醉家兔，将其侧卧固定于解剖 台上，用开睑器撑开眼睑，实体显微镜观察下开始手术。为了避免对微渗析探针产生压 力，将瞬膜与眼睑缝合。用5#针头在眼角部位距角膜缘约2mm处做贯通性穿刺，将微 渗析探针由针孔导出，抽去针头，调整探针的位置使渗析窗恰好全部浸入房水中，探针 两端分别在鼻颞侧和外眼角固定。创口处滴入氧氟沙星眼药水以防感染，并立即用IOOu/ ml肝素钠生理盐水溶液灌注探针。经过5天恢复期，待创口完全愈合后才开始体内药物 动力学实验。2.6气相色谱法测定家兔房水内的药物浓度色谱条件分流进样，温度250 °C，分流比5 l;OV-17毛细管柱 (30mX0.25mm, 25 μ m)，程序升温 80°C— 150°C— 200°C，速率为 5°C/min，保持时间 分别为2min及5min，流量7.5ml/min ； FID检测器，温度210°C。对照品溶液制备精密称取正十五烷19.990mg置IOml容量瓶中，用乙酸乙酯溶 解并稀释至刻度，摇勻，作为内标溶液；另精密称取甲基正壬酮对照品7.860mg置IOml 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇勻，作为储备液；精密量取储备液6.50ul，精 密量取内标溶液5.0ul，一并置2ml离心管中，用甲醇稀释至IOOOuI摇勻，作为对照品溶 液备用。吸取2ul，注入气相色谱仪，测定，计算校正因子。
2.6.1稳定性试验:按2.2.3方法处理样品后，分别于0、1、12、24、36、48h后 取2 μ 1进样，求供试品溶液中甲基正壬酮与内标峰面积比值的RSD。3.3.6精密度试验:分别配成甲基正壬酮含量为5.109、11.790、27.510ug/ml的 甲醇-眼房水提取液，在同一条件下连续分别进样5次(η = 5)，求得甲基正壬酮浓度 RSD。2.6.2重复性试验分别按照2.2.3项下依法配制同一批号的甲基正壬酮样品6 份，同一条件下分别进针2次，测得6个浓度，计算RSD。
2.6.3回收率试验分别精密量取甲基正壬酮储备液6.5、15.0、35.0ul,及内标 溶液各5.0ul，精密加入甲醇至IOOOul充分摇勻，配成浓度为5.109ug/ml，11.790ug/ml, 27.570ug/ml的甲基正壬 酮甲醇溶液，分别进针(η = 5)，求得峰面积比值。甲醇-眼房 水提取液也分别进针(η = 5)，求得峰面积比值。用甲醇-眼房水提取液的峰面积比比上 甲醇溶液中峰面积比，算得其回收率，求出RSD。2.7实验设计取16只家兔随机分为2组，分别给予拉坦前列素滴眼液和拉坦前 列素眼用即型凝胶。2.8拉坦前列素眼用即型凝胶制剂眼内药物动力学实验体内外PH值的不同使高分子溶液的PH值改变而诱发胶凝。卡波姆在酸性条 件下溶于水而形成低黏度的液体，当PH值增大时，聚合物的黏度急剧增大，发生相变形 成凝胶。丙烯酸类聚合物具有良好的生物黏附及流变学性质，是制备眼用凝胶的良好辅 料。气相色谱法测定不同时间的兔眼结膜囊内泪液和房水中拉坦前列素的浓度，药动学 参数用非线性最小二乘法进行计算机拟和，用药后与普通对照品比较，原位凝胶各时间 点结膜囊内泪液药物浓度均明显高于对照组，房水中药物浓度时间曲线下面积和消除半 衰期明显高于对照组，达峰时间延迟，达峰浓度与对照组有明显差异。以甲基纤维素和 羟丙基甲基纤维素与卡波姆联合使用，保持了凝胶的流变学性质具有缓释作用。方法以生理盐水为灌注液，流速设定为2.0μ1/η ι，冲洗0.5h后，在结膜囊 内滴入40 μ 1拉坦前列素滴眼液和拉坦前列素眼用即型凝胶，同时开始收集样品，在最初 的Ih内每隔IOmin收集样品，然后每隔20min收集样品，所有样品立即进行测定。2.9.数据处理所有药动学参数采用双单侧t检验进行统计学分析。3.质量标准的制定3.1.粘度按中国药典2005年版二部附录VIG第二法，测定在25度时的动力粘度，本品粘 度为 13mPa#s。3.2.含量测定3.2.1.测定波长的选择分别称取拉坦前列素眼用即型凝胶和其眼用胶体溶液适 量，加Ollmol/L盐酸溶液制成20Lg/ml的溶液，同时配制相应的空白辅料溶液，同上 用盐酸溶液稀释，以盐酸溶液为空白对照，进行紫外扫描，溶液的紫外图谱与对照品一 致，而辅料在此几乎无吸收，故选定该波长为其测定波长。3.2.2.标准曲线的绘制精密称取于105e干燥至恒重的拉坦前列素对照品适量， 加O.lmol/L盐酸溶液溶解，并加至刻度，摇勻，精密量取该液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0ml置 于250ml量瓶中，加盐酸溶液至刻度，摇勻，在测定的波长处测定吸收度，以浓 度C对吸收度进行线性回归，得回归方程为C = 35.54A+0.06594, r = 0.9999结果表明，在浓度范围内，其吸收度与浓度之间呈良好的线性关系。3.2.3.回收率试验照处方量称取辅料，加入拉坦前列素低，中，高三种浓度 (0.25%, 0.5%禾口 0.75% )，分别测定回收率。3.2.4.含量测定用移液管精密量取本品1ml，置于250ml量瓶中，用O.lmol/L 盐酸溶液洗涤移液管数次，并加至刻度，摇勻，在295nm的波长处测定吸收度；另取经 105e干燥至恒重的拉坦前列素对照品适量，加盐酸溶液稀释，制成每Iml中含拉坦前列 素20Lg的溶液，同法测定吸收度，计算，即得。3.3.有关物质采用液相色谱法，参照拉坦前列素原料标准中有关物质检查方法。2005版药典对眼用制剂的安全性和质量要求都有了明显提高。主要体现在对眼 用制剂的无菌性定义、渗透压研究及渗透压摩尔浓度测定、沉降体积比、眼用半固体的 装量、使用周期、贮藏条件、可见异物、微生物限度检查方法等方面。特别是对渗透压 和无菌方面的要求。3.4.2005版药典中规定滴眼剂应与泪液等渗，同时要求应进行渗透压摩尔浓度测 定。减少眼用制剂在使用过程中对眼睛的刺激，避免对眼睛的伤害。因此在质量研究和 质量标准中对渗透压进行检查。2005版药典对眼用制剂定义时明确指出各类眼用制剂均应为无菌制剂。这一 规定明确了眼用制剂是按照无菌工艺生产的，且终产品应为无菌产品。3.5.进行卫生学检查选用膜过滤法结果如下细菌总数< 10个/mL，霉菌总 数< 10个/mL ；未检出绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌。4.稳定性实验按上述方法制备缓释滴眼液经低温加速实验，恒温(38士 1)考 察3个月，效价、外观颜色及pH值的变化均在规定的范围之内。光稳定性的考察，给予 规定剂量的光照，各控制指标在合格范围之内。常温留样观察，各项检验指标均合格。 有效期暂定1.5年。
权利要求
1.一种治疗青光眼的拉坦前列素眼用即型凝胶，其特征在于该凝胶剂型的聚合物载 体由浓度为0.1% -1.0%的卡波姆溶液与浓度为-3%的羟丙基甲基纤维素溶液组成； 该凝胶制剂滴入形式是液体，进入眼穹隆经过相转变成粘弹性胶体，并粘附在角膜表 面，可持续释放药物进入角膜和眼内，凝胶逐渐溶蚀并被眨眼动用及泪液从眼内移除。
2.如权利要求1所述的拉坦前列素眼用即型凝胶，其特征在于该凝胶在pH值为4 时，是低粘度流体状态，在pH值为7.2-7.4时，聚合材料与泪液接触聚集，几秒内形成在 位凝胶。
3.如权利要求1所述的眼用即型凝胶，其特征在于该凝胶所使用的聚合物基质卡波姆 的型号为卡波姆C-940。
4.一种如权利要求1所述的拉坦前列素眼用即型凝胶的制备方法，其特征在于分 别配制浓度为0.1-1.0%的卡波姆溶液；浓度为1-3%的羟丙基甲基纤维素溶液，将拉坦 前列素溶解在上述凝胶聚合物载体的溶液中制成。
全文摘要
一种新型的拉坦前列素眼用即型凝胶，其用于开角型青光眼及用其它药物难以治疗或耐受的眼压过高病人的局部治疗。该药物可解决普通滴眼剂眼内滞留时间短、生物利用度不高的问题，也克服了普通眼用凝胶缺乏良好的铺展性，剂量不易控制的问题；将眼用药物的生物利用度从1％-3％提高到15％-20％，制剂在体外以液体形式存在，滴入眼内转为凝胶，具有缓释作用，为眼用缓释制剂在临床的推广提供依据。
文档编号A61K9/00GK102008427SQ20091017020
公开日2011年4月13日 申请日期2009年9月8日 优先权日2009年9月8日
发明者王小倩 申请人:刘剑卿, 王小倩
技术领域：
提供一种拉坦前列素眼用即型缓释凝胶；该药物用于开角型青光眼及用其它药 物难以治疗或耐受的眼压过高病人的局部治疗。可解决普通滴眼剂眼内滞留时间短、 生物利用度不高的问题，也克服了普通眼用凝胶缺乏良好的铺展性，剂量不易控制的问 题；将眼用药物的生物利用度从提高到15%-20%，为眼用缓释制剂在临床的推 广提供依据。
背景技术：
我国40岁人口中青光眼患者高达940万其中致盲患者达520万，而且绝大部分 为慢性病程，需要长期使用降眼压药物治疗。前列腺素类滴眼液具有副作用少，高效安 全的特点，降眼压幅度大而稳定，使用方便，几乎无全身副作用，已经成为欧美、日本 的抗青光眼一线用药。因国内尚无本品销售及进口品，其市场前景极为可观。青光眼是由于眼压升高导致视神经损害和视野缺损的一类疾病，是当今最主要 的不可逆性致盲眼病，在我国，原发性青光眼有上千万人之多，药物降眼压是早期青光 眼治疗最有效最重要的手段。降低眼压仍然是唯一有效措施，它可减轻青光眼对视野所 造成的损害，因此研发降眼压药在青光眼的治疗中极为重要。青光眼视神经保护药物的 种类不少，新的药物不断推出，理想的抗青光眼药物应具备以下特点①良好的降眼压 效果；②对夜间眼压和眼压波动的良好控制；③促进生理性房水排出途径排出量增加；
④具有视神经保护作用提高视乳头血流灌注量，阻止并逆转视网膜节细胞调亡过程；
⑤具有药物协同作用；⑥局部和全身副作用轻微，使用方便，患者依从性良好。符合上 述特点的药物应是未来抗青光眼药物开发和研究的方向。前列腺素类滴眼液具有上述的 特点，降眼压幅度大而稳定，使用方便，几乎无全身副作用，已经成为欧美、日本的抗 青光眼一线用药。研制合适的眼部制剂是极富挑战性的领域。眼部的解剖学、生理学、生化学性 质使得眼部外用药物的渗透性很差。如何让更多得药物渗透到眼内、而不造成眼组织的 持久损伤，是当前眼部给药研究的一个热点。为了及时有效的治疗和控制病情，合理的 剂型能保证眼部用药的安全有效，提高药物的生物利用度。因此研制新的眼部给药剂型 始终是非常必要的。拉坦前列素(latanoprost，商品名Xalatan)是1996年开发出的治疗青光眼和高
眼压新药。它是前列腺素(PGF2ci)的类似物，以异丙酯的形式存在。化学名称为 [[lR]12(z), 2i3(R*)，32，52]]-7_[3，5-二羟基-2-(3-羟基-5-苯戊基)环戊基]-5-庚 烯酸-1-甲基乙基酯。理化性质本品为几乎无色的浅黄色粘性油状物，其相对分子质量为432.58， 化学分子式为C26H4005。药理作用拉坦前列素是一种新型苯基替代的丙基酯前列素F2a，为选择性F2a 受体激动剂。它是一种无活性但能迅速渗透到角膜里的物质，在角膜和血浆中可水解为具有活性的游离酸。它能增加房水通过眼角素层的流出量，用药量小，但促进房水充出 量大，药液能渗透到眼球上睫脉络膜上层，具有良好降眼压效果。本品还可将使青光眼 患者通常会堵塞的眼球小梁结构筛网通畅。拉坦前列素有别于迄今为止所有在应用的抗 青光眼药物其独特的降眼压机制是通过增加葡萄膜巩膜外流而降低眼压，不影响房水生 成，临床前资料证实，它通过松弛睫状体的平滑肌，降解细胞外基质，重组细胞外基质 中的胶原，改变细胞形态，开放细胞间隙等促进房水的外流，它不抑制房水的生成，更 有利于眼前段组织的营养和代谢，文献报道，拉坦前列素在日间，夜间均可取得相同良 好的降眼压疗效，可提高夜间眼灌注压，而夜间眼灌注压降低是造成青光眼视乳头改变 的重要因素之一。因此，拉坦前列素也适用于正常眼压性青光眼。拉坦前列素每日仅用 1次，有助于提高患者的用药依从性。研究未发现拉坦前列素在心，肺，血压及其他方 面的全身不良反应，这也是拉坦前列素不同于B-受体阻滞剂和肾上腺素能制剂的优点之 一，国外资料证实，拉坦前列素是在众多前列腺素衍生物中筛选出来的疗效和不良反应 分离最好的衍生物，这是由于其特异性受体药代动力学特点所决定的。局部滴用0.005% 拉坦前列素后3 4时开始生效，8 12小时达高峰，降眼压效果持续约20 23小时， 且存在后续效应，因此一天只需用药一次即可良好维持眼压，局部滴用0.005%拉坦前列 素后的血浆浓度很低，且衰期仅17分钟，故全身副作用少。拉坦前列素滴眼液对于原发 性开角型青光眼和高眼压症的降眼压疗效较015%的噻吗心安滴眼液更强，且局部不良反 应轻微，无全身不良反应，是适合于中国人应用的安全理想的抗青光眼药物。
我国市场上主要的抗青光眼滴眼液有15种，我国40岁人口中青光眼患者绝大 部分为慢性病程，需要长期使用降眼压药物治疗。眼用制剂主要为滴眼剂、眼膏剂、眼 用凝胶。其中滴眼剂大多数是药物的溶液剂，滴入眼内以后，由于眼睑的眨动和泪液的 分泌，数分钟内可被稀释至原来浓度的0.1%，需要增加给药次数来提高生物利用度。眼 膏通常以油脂性材料作为基质，油腻感强、使用后视力模糊。眼用凝胶剂是以亲水性聚 合物为载体，有较好的生物相容性，为半固体状态，可延长药物的作用时间，减小用药 次数；但给药剂量不易控制。因此急需将拉坦前列素研制成为一种可以解决普通滴眼剂 眼内滞留时间短、生物利用度不高的问题，同时可以克服普通眼用凝胶缺乏良好的铺展 性，剂量不易控制的问题的新型眼用制剂。
发明内容
为解决上述现有制剂的各种缺陷，提供一种拉坦前列素眼用即型凝胶，该凝胶 制剂不同于传统的亲水凝胶，滴入形式是液体，进入眼穹隆经过相转变成粘弹性胶体。 它根据体内外不同的生理环境(pH)发生相转化，体外以液体形式存在，滴入眼内立刻转 为凝胶。在pH4低粘度时，是低粘度流体，聚合材料与泪液接触(pH7.2-7.4)聚集，几 秒内形成在位凝胶。在pH4.0时，；在pH7.4时转为凝胶。药物释放度实验表明具有缓 释作用，克服了许多眼用药物吸收差，主要由于眼泪使其消除加快，用卡波姆可制得透 明的眼用凝胶，延长药物在角膜的滞留时间，因而可增加药物的吸收。溶液中加入了卡 波姆，增加了眼药水的粘度，延长药物与眼局部接触时间，且其与碱性药物生成可溶性 凝胶型内盐，使药物缓释而达到延效与增效作用，无刺激性且稳定性好。该剂型具有新颖性，在贮存期呈液态，滴入眼内后呈半固体状态，不仅可解决普通滴眼剂眼内滞留时间短、生物利用度不高的问题，也克服了普通眼用凝胶缺乏良好 的铺展性，剂量不易控制的问题。该剂型具有一定的应用和发展前景，其毒性低，刺激 性小，生物相容性好，可提高患者依从性和耐受性。与滴眼液、眼膏等常用传统剂型 相比有如下优点A.本品室温下为液体状态，剂量容易准确控制、使用方便，且滴入眼 内后易于铺展。B.凝胶为水性基质，粘性适中，润滑性好，对眼部无刺激性，且透明 性好，不影响视线，使用后不留痕迹，因此不会影响美观，使用舒适。C.凝胶滴入眼 后，均勻铺展，粘附在眼球及眼睑表面成凝胶，不会像滴眼液那样大部分流失，从而使 药物在眼部缓慢释放，维持相对长的治疗时间，较滴眼液更能发挥治疗作用，增强治疗 效果。D.本发明的在体凝胶制剂在流变学上呈塑性后假塑性性质，随眨眼而粘度降低， 使用感觉舒适，在不眨眼时，又能恢复粘度。经临床实验证实，其具有显著的抗感染作 用，并由于眼用凝胶缓释作用，药物的使用次数可较同类滴眼液少，这样既保证了治疗 效果，又大 大方便了患者。本申请所述的拉坦前列素眼用即型凝胶滴入形式是液体，进入眼穹隆经过相转 变成粘弹性胶体。在PH 5低粘度时，聚合材料与泪液接触(PH7.2-7.4)聚集，几秒内形成 在位凝胶。载体包括邻苯二甲酸醋酸纤维素乳胶(CAP，30%w/w,粘度50mPa · s)， 交联丙烯酸及其衍生物如卡波普和聚卡波菲，以及肠溶型丙烯酸树脂与聚乙烯吡咯烷酮 合用。此类在位凝胶的形成要求CAP浓度高达50%，溶液pH为5。具有①在水性环境 的高载药量，保护稳定性差不受体液环境破坏；②长时间的药物控制释放；③凝胶的水 性性质使之与机体有良好相容性；④对特定部位的生物粘附性质形成在位形成凝胶。基质材料的选择我们考察不同类型和浓度的高分子溶液的力学性能，为以后 的处方筛选进行预备研究。具有合适的粘度的凝胶剂，将有利于提高药物在眼部的滞留 时间和给药使利性。寻找合适浓度的高分子溶液，作为做凝胶剂的基质。目前制备凝 胶剂的基质材料很多，如纤维素类，聚丙烯酸类，聚乙烯醇< 乂入)，聚乙烯毗咯烷酮 < PVP),海藻酸钠等，它们都有乳附作用。其中，聚丙烯酸类以卡波姆(Carbomer)为 代表。纤维素类中常用的有羟丙基甲基纤维素(HPMC)，梭甲基纤维素(CMC)，甲基 纤维素(MC).等。卡波姆(Carbomer)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)和其它材料相比而 言，在相同的粘度下有较高的滞留时间。因此，我们初步选择运用卡波姆(Carbomer)和 羟丙基甲基纤维素(HPMC)为凝胶剂基质材料。卡波姆是白色疏松的粉末，具有较强的吸湿性。由于其分子结构中含有竣酸基 团，其溶液有一定的酸性，可以被无机或有机碱中和，形成凝胶。卡波姆溶液被中和 后，由于装基负离子的负电荷间的相互排斥作用，使分子链弥散伸展，呈现极大的膨胀 状态，导致分子链之间相互缠绕而使溶液具有粘性。溶液粘度与其pH值有关，通常pH 值在6-11之间时，材料的粘度最大。本发明的目的是这样实现的一种治疗青光眼的拉坦前列素眼用即型凝胶，其特征在于该凝胶剂型的聚合物 载体由浓度为0.1% -1.0%的卡波姆溶液与浓度为-3%的羟丙基甲基纤维素溶液组 成；该凝胶制剂滴入形式是液体，进入眼穹隆经过相转变成粘弹性胶体，并粘附在角 膜表面，可持续释放药物进入角膜和眼内，凝胶逐渐溶蚀并被眨眼动用及泪液从眼内移 除。
该凝胶在pH值为4时，是低粘度流体状态，在pH7.2-7.4时，聚合材料与泪液 接触聚集，几秒内形成在位凝胶。该凝胶所使用的聚合物基质卡波姆的型号为卡波姆C-940。如权利 要求1所述的眼用即型凝胶作为滴眼剂给药。一种拉坦前列素眼用即型凝胶的制备方法，其特征在于分别配制浓度为 0.1-1.0%的卡波姆溶液；浓度为1-3%的羟丙基甲基纤维素溶液，将拉坦前列素溶解在 上述凝胶聚合物载体的溶液中制成。
具体实施例方式实施例1按照上述方法取所需量的卡波姆(C-940)洒在装有适量的去离子水的烧杯中， 静置浸泡直到卡波姆完全溶胀配制得到浓度0.1%的卡波姆溶液。在玻璃棒搅拌下，滴加 10% NaOH溶液至PH为7.0，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可。再取所需量的羟丙基甲基纤维素(HPMCK4M)于烧杯中，加入适量的去离子 水，浸泡至完全溶胀，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可，配制得到浓度为的羟丙 基甲基纤维素溶液。将拉坦前列素溶解在上述凝胶聚合物载体的溶液中制成。实施例2按照上述方法取所需量的卡波姆(C-940)洒在装有适量的去离子水的烧杯中， 静置浸泡直到卡波姆完全溶胀配制得到浓度0.2%的卡波姆溶液。在玻璃棒搅拌下，滴加 10% NaOH溶液至PH为7.0，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可。再取所需量的羟丙基甲基纤维素(HPMCK4M)于烧杯中，加入适量的去离子 水，浸泡至完全溶胀，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可，配制得到浓度为的羟丙 基甲基纤维素溶液。将拉坦前列素溶解在上述凝胶聚合物载体的溶液中制成。实施例3按照上述方法取所需量的卡波姆(C-940)洒在装有适量的去离子水的烧杯中， 静置浸泡直到卡波姆完全溶胀配制得到浓度0.3%的卡波姆溶液。在玻璃棒搅拌下，滴加 10% NaOH溶液至PH为7.0，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可。再取所需量的羟丙基甲基纤维素(HPMCK4M)于烧杯中，加入适量的去离子 水，浸泡至完全溶胀，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可，配制得到浓度为1.5%的羟 丙基甲基纤维素溶液。将拉坦前列素溶解在上述凝胶聚合物载体的溶液中制成。实施例4按照上述方法取所需量的卡波姆(C-940)洒在装有适量的去离子水的烧杯中， 静置浸泡直到卡波姆完全溶胀配制得到浓度0.5%的卡波姆溶液。在玻璃棒搅拌下，滴加 10% NaOH溶液至PH为7.0，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可。再取所需量的羟丙基甲基纤维素(HPMCK4M)于烧杯中，加入适量的去离子 水，浸泡至完全溶胀，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可，配制得到浓度为2%的羟丙基甲基纤维素溶液。将拉坦前列素溶解在上述凝胶聚合物载体的溶液中制成。实施例5按照上述方法取所需量的卡波姆(C-940)洒在装有适量的去离子水的烧杯中， 静置浸泡直到卡波姆完全溶胀配制得到浓度1.0%的卡波姆溶液。在玻璃棒搅拌下，滴加 10% NaOH溶液至PH为7.0，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可。再取所需量的羟丙基甲基纤维素(HPMCK4M)于烧杯中，加入适量的去离子 水，浸泡至完全溶胀，补加蒸馏水至所需量，搅拌均勻即可，配制得到浓度为3%的羟丙 基甲基纤维素溶液。将拉坦前列素溶解在上述凝胶聚合物载体的溶液中制成。
下面结合上述具体实施方式
，对本发明进行进一步说明，并非对本发明的下限 定，以上述实施例产品作为样品，对拉坦前列素即型凝胶制剂的粘度、在体消除动力学 及生物利用度、质量标准的制定进行了描述。得到结论本发明所制备的拉坦前列素眼用 即型凝胶粘度符合要求，以羟丙基甲基纤维素与卡波姆联合使用，保持了凝胶的流变学 性质具有良好的缓释作用。1制剂处方的工艺研究完善拉坦前列素眼用即型凝胶处方工艺的筛选，获得成熟、稳定的技术，制成 滴眼剂。在处方筛选过程中应根据所用基质的不同，对高分子辅料的不同型号、分子 量、用量对相变温度、粘度的影响；pH对相变温度、粘度的影响；通过详细的筛选制订 合理的胶凝相变温度限度和相变时间时限。1.1 仪器NDJ-I型转子粘度计(上海安德仪器设备公司)酸度计(PHS-25B型上海天普仪器有限公司)1.2凝胶剂基质样品粘度的测定用NDJ-I型转子粘度计测量在10°C和34°C下各样品的粘度。10°C为环境温度， 34 °C为眼部温度。2.拉坦前列素眼用即型凝胶在体消除动力学和生物利用度。2.1研究方法我们采用非损伤性Y -闪烁照相技术评价拉坦前列素眼用即型凝 胶制剂的眼部消除动力学，利用微渗析取样技术、气相色谱法测定家兔房水内的药物浓 度。以拉坦前列素眼用即型凝胶制剂为受试制剂、拉坦前列素滴眼液为参比制剂，研究 受试制剂在兔眼内药动学，观察拉坦前列素眼用即型凝胶在角膜滞留时间；采用微渗析 取样技术连续取样，进行房水内药物浓度的检测。2.2技术路线将凝胶系统引入拉坦前列素，进行拉坦前列素眼用即型凝胶制剂 的研究，以期通过凝胶制剂延长药物与眼部的接触，利于药物透过角膜进入眼内，发挥 治疗作用。2.3选用材料与方法试剂碍标记的二乙撑三胺五醋酸99mTc-DTPA，氯胺酮；肝素；甲基正壬酮 对照品(中国药品生物制品检定所)；正十五烷；乙酸乙酯(分析纯)；甲醇；乙醇(分 析纯)；拉坦前列素滴眼液；拉坦前列素眼用即型凝胶
仪器岛津GC14气相色谱仪动物白色家兔，早$兼用，体重2.0 3.0kg。实验前24h自由进食、饮水，并进行眼部检查，以确保无任何眼病。方法2.4 Y -闪烁照相研究眼部消除动力学方法制剂的标记用于Y-闪烁照相评价的处方制备成浓溶胶，99mTc-DTPA溶液 于实验当天加入到冷的浓溶胶中，涡旋震荡使其充分混合，最终生成21%P407和10% P188的聚合物溶液。所有制剂的放射活性介于2.IMBq至2.7MBq每40 μ 1剂量之间。实验设计取16只家兔随机分为2组，分别给予锝标记的拉坦前列素滴眼液和拉 坦前列素眼用即型凝胶。Y-闪烁照相研究眼部消除动力学将家兔用兔夹固定，使其保持清醒状态卧于 SPECT系统的监测器前，低能高分辨率探头距离兔眼5cm。待测的放射性标记溶液于室 温放置30min，然后滴加40 μ 1至左眼角膜表面12点钟位置。盛有相同剂量待测溶液的 尖底塑料管用胶带固定在左后眼角与左耳之间，作为位置参照物。SPECT系统自动调节 至140KeV测定99mTc的放射线，给药5s后开始连续动态采集。采用128X 128像素矩 阵，IOmin内先后以36X 5s再12X IOs最后15X 20s的顺序采集63帧动态图像口全部图像均划分出5个感兴趣区域(ROI)，分别为1.位置参照，2.角膜表面， 3.内眼角，4.鼻泪管和5.背景，放射性标记物的移动准确地落在这些区域内。记录眼部 应用标记制剂后第0、2、5和IOmin时的Y-闪烁照相结果。2.5微渗析技术研究拉坦前列素眼用即型凝胶剂兔眼内药动学。探针的植入手术前30min和4h后，家兔耳缘静脉注射100u/kg肝素钠，以防止由于炎症 反应引起前房内纤维生成。肌肉注射50mg/kg氯胺酮麻醉家兔，将其侧卧固定于解剖 台上，用开睑器撑开眼睑，实体显微镜观察下开始手术。为了避免对微渗析探针产生压 力，将瞬膜与眼睑缝合。用5#针头在眼角部位距角膜缘约2mm处做贯通性穿刺，将微 渗析探针由针孔导出，抽去针头，调整探针的位置使渗析窗恰好全部浸入房水中，探针 两端分别在鼻颞侧和外眼角固定。创口处滴入氧氟沙星眼药水以防感染，并立即用IOOu/ ml肝素钠生理盐水溶液灌注探针。经过5天恢复期，待创口完全愈合后才开始体内药物 动力学实验。2.6气相色谱法测定家兔房水内的药物浓度色谱条件分流进样，温度250 °C，分流比5 l;OV-17毛细管柱 (30mX0.25mm, 25 μ m)，程序升温 80°C— 150°C— 200°C，速率为 5°C/min，保持时间 分别为2min及5min，流量7.5ml/min ； FID检测器，温度210°C。对照品溶液制备精密称取正十五烷19.990mg置IOml容量瓶中，用乙酸乙酯溶 解并稀释至刻度，摇勻，作为内标溶液；另精密称取甲基正壬酮对照品7.860mg置IOml 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇勻，作为储备液；精密量取储备液6.50ul，精 密量取内标溶液5.0ul，一并置2ml离心管中，用甲醇稀释至IOOOuI摇勻，作为对照品溶 液备用。吸取2ul，注入气相色谱仪，测定，计算校正因子。
2.6.1稳定性试验:按2.2.3方法处理样品后，分别于0、1、12、24、36、48h后 取2 μ 1进样，求供试品溶液中甲基正壬酮与内标峰面积比值的RSD。3.3.6精密度试验:分别配成甲基正壬酮含量为5.109、11.790、27.510ug/ml的 甲醇-眼房水提取液，在同一条件下连续分别进样5次(η = 5)，求得甲基正壬酮浓度 RSD。2.6.2重复性试验分别按照2.2.3项下依法配制同一批号的甲基正壬酮样品6 份，同一条件下分别进针2次，测得6个浓度，计算RSD。
2.6.3回收率试验分别精密量取甲基正壬酮储备液6.5、15.0、35.0ul,及内标 溶液各5.0ul，精密加入甲醇至IOOOul充分摇勻，配成浓度为5.109ug/ml，11.790ug/ml, 27.570ug/ml的甲基正壬 酮甲醇溶液，分别进针(η = 5)，求得峰面积比值。甲醇-眼房 水提取液也分别进针(η = 5)，求得峰面积比值。用甲醇-眼房水提取液的峰面积比比上 甲醇溶液中峰面积比，算得其回收率，求出RSD。2.7实验设计取16只家兔随机分为2组，分别给予拉坦前列素滴眼液和拉坦前 列素眼用即型凝胶。2.8拉坦前列素眼用即型凝胶制剂眼内药物动力学实验体内外PH值的不同使高分子溶液的PH值改变而诱发胶凝。卡波姆在酸性条 件下溶于水而形成低黏度的液体，当PH值增大时，聚合物的黏度急剧增大，发生相变形 成凝胶。丙烯酸类聚合物具有良好的生物黏附及流变学性质，是制备眼用凝胶的良好辅 料。气相色谱法测定不同时间的兔眼结膜囊内泪液和房水中拉坦前列素的浓度，药动学 参数用非线性最小二乘法进行计算机拟和，用药后与普通对照品比较，原位凝胶各时间 点结膜囊内泪液药物浓度均明显高于对照组，房水中药物浓度时间曲线下面积和消除半 衰期明显高于对照组，达峰时间延迟，达峰浓度与对照组有明显差异。以甲基纤维素和 羟丙基甲基纤维素与卡波姆联合使用，保持了凝胶的流变学性质具有缓释作用。方法以生理盐水为灌注液，流速设定为2.0μ1/η ι，冲洗0.5h后，在结膜囊 内滴入40 μ 1拉坦前列素滴眼液和拉坦前列素眼用即型凝胶，同时开始收集样品，在最初 的Ih内每隔IOmin收集样品，然后每隔20min收集样品，所有样品立即进行测定。2.9.数据处理所有药动学参数采用双单侧t检验进行统计学分析。3.质量标准的制定3.1.粘度按中国药典2005年版二部附录VIG第二法，测定在25度时的动力粘度，本品粘 度为 13mPa#s。3.2.含量测定3.2.1.测定波长的选择分别称取拉坦前列素眼用即型凝胶和其眼用胶体溶液适 量，加Ollmol/L盐酸溶液制成20Lg/ml的溶液，同时配制相应的空白辅料溶液，同上 用盐酸溶液稀释，以盐酸溶液为空白对照，进行紫外扫描，溶液的紫外图谱与对照品一 致，而辅料在此几乎无吸收，故选定该波长为其测定波长。3.2.2.标准曲线的绘制精密称取于105e干燥至恒重的拉坦前列素对照品适量， 加O.lmol/L盐酸溶液溶解，并加至刻度，摇勻，精密量取该液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0ml置 于250ml量瓶中，加盐酸溶液至刻度，摇勻，在测定的波长处测定吸收度，以浓 度C对吸收度进行线性回归，得回归方程为C = 35.54A+0.06594, r = 0.9999结果表明，在浓度范围内，其吸收度与浓度之间呈良好的线性关系。3.2.3.回收率试验照处方量称取辅料，加入拉坦前列素低，中，高三种浓度 (0.25%, 0.5%禾口 0.75% )，分别测定回收率。3.2.4.含量测定用移液管精密量取本品1ml，置于250ml量瓶中，用O.lmol/L 盐酸溶液洗涤移液管数次，并加至刻度，摇勻，在295nm的波长处测定吸收度；另取经 105e干燥至恒重的拉坦前列素对照品适量，加盐酸溶液稀释，制成每Iml中含拉坦前列 素20Lg的溶液，同法测定吸收度，计算，即得。3.3.有关物质采用液相色谱法，参照拉坦前列素原料标准中有关物质检查方法。2005版药典对眼用制剂的安全性和质量要求都有了明显提高。主要体现在对眼 用制剂的无菌性定义、渗透压研究及渗透压摩尔浓度测定、沉降体积比、眼用半固体的 装量、使用周期、贮藏条件、可见异物、微生物限度检查方法等方面。特别是对渗透压 和无菌方面的要求。3.4.2005版药典中规定滴眼剂应与泪液等渗，同时要求应进行渗透压摩尔浓度测 定。减少眼用制剂在使用过程中对眼睛的刺激，避免对眼睛的伤害。因此在质量研究和 质量标准中对渗透压进行检查。2005版药典对眼用制剂定义时明确指出各类眼用制剂均应为无菌制剂。这一 规定明确了眼用制剂是按照无菌工艺生产的，且终产品应为无菌产品。3.5.进行卫生学检查选用膜过滤法结果如下细菌总数< 10个/mL，霉菌总 数< 10个/mL ；未检出绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌。4.稳定性实验按上述方法制备缓释滴眼液经低温加速实验，恒温(38士 1)考 察3个月，效价、外观颜色及pH值的变化均在规定的范围之内。光稳定性的考察，给予 规定剂量的光照，各控制指标在合格范围之内。常温留样观察，各项检验指标均合格。 有效期暂定1.5年。
权利要求
1.一种治疗青光眼的拉坦前列素眼用即型凝胶，其特征在于该凝胶剂型的聚合物载 体由浓度为0.1% -1.0%的卡波姆溶液与浓度为-3%的羟丙基甲基纤维素溶液组成； 该凝胶制剂滴入形式是液体，进入眼穹隆经过相转变成粘弹性胶体，并粘附在角膜表 面，可持续释放药物进入角膜和眼内，凝胶逐渐溶蚀并被眨眼动用及泪液从眼内移除。
2.如权利要求1所述的拉坦前列素眼用即型凝胶，其特征在于该凝胶在pH值为4 时，是低粘度流体状态，在pH值为7.2-7.4时，聚合材料与泪液接触聚集，几秒内形成在 位凝胶。
3.如权利要求1所述的眼用即型凝胶，其特征在于该凝胶所使用的聚合物基质卡波姆 的型号为卡波姆C-940。
4.一种如权利要求1所述的拉坦前列素眼用即型凝胶的制备方法，其特征在于分 别配制浓度为0.1-1.0%的卡波姆溶液；浓度为1-3%的羟丙基甲基纤维素溶液，将拉坦 前列素溶解在上述凝胶聚合物载体的溶液中制成。
全文摘要
一种新型的拉坦前列素眼用即型凝胶，其用于开角型青光眼及用其它药物难以治疗或耐受的眼压过高病人的局部治疗。该药物可解决普通滴眼剂眼内滞留时间短、生物利用度不高的问题，也克服了普通眼用凝胶缺乏良好的铺展性，剂量不易控制的问题；将眼用药物的生物利用度从1％-3％提高到15％-20％，制剂在体外以液体形式存在，滴入眼内转为凝胶，具有缓释作用，为眼用缓释制剂在临床的推广提供依据。
文档编号A61K9/00GK102008427SQ20091017020
公开日2011年4月13日 申请日期2009年9月8日 优先权日2009年9月8日
发明者王小倩 申请人:刘剑卿, 王小倩
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