一种抑制乙酰胆碱酯酶的中华真地鳖提取物及其制备方法
专利名称：一种抑制乙酰胆碱酯酶的中华真地鳖提取物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种具有抑制乙酰胆碱酯酶活性的中华真地鳖提取物的制备方法。
背景技术：
阿尔茨海默病(Alzheimer，s disease，AD)，是最常见的以进行性痴呆为特征的
大脑退行性变性疾病。它严重影响患病者的认知功能、记忆功能、社会生活能力、个人 生活能力等。目前，世界上较为接受的AD病理为“胆碱能缺失学说”。学说认为大脑 内神经递质_乙酰胆碱的缺失是导致AD疾病的关键原因。现今对AD的治疗主要是采用乙酰胆碱酯酶抑制剂(如他克林、加兰他敏、石杉 碱甲等)来抑制乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase，AchE)，提高患者体内的乙酰胆碱水 平，延缓乙酰胆碱的水解速度，从而发挥其对AD的治疗作用。目前，国内研究的乙酰 胆碱酯酶抑制剂大都来源于植物和微生物，如刘嘉林、徐择邻等分别从蛇足石杉和华南 马尾杉中分离得到石杉碱甲；董悦生等从2141株放线菌中筛选到一株具有抑制AchE活 性的阳性菌株N-98-1021A。但对于昆虫的研究甚少，更无从中华真地鳖中提取乙酰胆碱 酯酶抑制剂的相关报道。而中华真地鳖是传统的活血化瘀药，据现代医学证明其具有抗 凝血、抗缺氧、降血脂、抗突变、治疗冠心病、高血压病等作用。本发明以中华真地鳖为原料，采用有机溶剂提取和萃取的手段，制备对AchE 抑制率达20% 70%的中华真地鳖提取物，与阳性对照他克林相比，具有显著的抑制效果。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抑制AchE活性的中华真地鳖提取物及其制备方 法，为预防老年痴呆病生物药品的开发提供理论依据。本发明的特征在于以中华真地鳖为原料，采用有机溶剂提取和萃取的手段，制 备对AchE抑制率达20 70%的中华真地鳖提取物。本发明采用的技术方案是称取一定量的中华真地鳖，在料液比1 10 1 25、浸提温度40 70°C、浸提时间2 7h的条件下进行乙醇提取。将中华真地鳖 乙醇提取液在40°C下真空浓缩至干后，以“酸溶碱沉”法除去其不溶性杂质，再分别用 氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三种有机相进行萃取，其萃取液分别经浓缩至干。经浓缩至干的中华真地鳖乙醇提取物和三种有机相萃取物，分别用DMSO配成 一定浓度的样品液，测其对AchE的抑制率。以他克林作为阳性对照，中华真地鳖其乙醇 提取物与三种有机相萃取物对AchE的抑制率达20 70%。
具体实施例方式1、中华真地鳖乙醇提取最佳工艺条件的确定具有抑制AchE活性的中华真地鳖乙醇提取最佳条件为中华真地鳖与乙醇(95% )的料液比10 1 25 1、温度40 70°C下，提取2 7h。2、乙醇提取样品液的制备及其对AchE的抑制率按具体实施方式
1所得的中华真地鳖乙醇提取液，在40°C下真空浓缩至干，用 DMSO配成一定浓度的乙醇提取样品液，并测得其对AchE的抑制率在20%以上。3、酸溶碱沉按具体实施方式
1所得的中华真地鳖乙醇提取液，在40°C下真空浓缩至干，先 以pH为3的HCl溶液进行溶解，再用浓氨水溶液将其pH调至10后，过滤除去其不溶性 杂质，得到透明的棕红色液体。4、有机相萃取按具体实施方式
3所得到的棕红色透明液体，分别加入氯仿、乙酸乙酯、乙醚 三种有机溶剂，进行萃取。5、有机相萃取液的提取率将氯仿、乙酸乙酯、乙醚三种有机相萃取液，于40°C下真空浓缩至干，并测得 其提取率达10 50%。6、有机相萃取样品液的制备及其对AchE的抑制率按具体实施方式
4所得到的三种有机相萃取液，分别在40°C下真空浓缩至干， 用DMSO配成一定浓度的有机相萃取样品液，并分别测得其对AchE的抑制率在20 70%。7、选取萃取有机相考虑提取率和对AchE的抑制率两个因素，在氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三种萃取 有机相中，本发明选取乙酸乙酯作为萃取特定有机相。8、对AchE抑制率的测定方法本发明采用DTNB法测定中华真地鳖提取样品液对AchE的抑制率。
权利要求
1.一种抑制乙酰胆碱酯酶的中华真地鳖提取物及其制备方法，其特征在于称取一定量的中华真地鳖，在料液比1 10 1 25、浸提温度40 70°C、浸提时间2 7h的条件下进行乙醇提取。将中华真地鳖乙醇提取液在40°C下真空浓缩至干 后，以“酸溶碱沉”法除去其不溶性杂质，再分别用氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三种有机 相进行萃取，其萃取液分别经浓缩至干。经浓缩至于的中华真地鳖乙醇提取物和三种有 机相萃取物，分别用DMSO配成一定浓度的样品液，测其对AchE的抑制率。以他克林 作为阳性对照，中华真地鳖其乙醇提取物与三种有机相萃取物对AchE的抑制率达20 70%。由于考虑提取率和对AchE的抑制率两个因素，在氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三种有 机相中，本发明选取乙酸乙酯作为萃取特定有机相。本发明采用DTNB法测定对中华真 地鳖提取样品液对AchE的抑制率。
2.根据权利要求1所述的具有抑制乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的中华真地鳖提取物及 其制备方法，其特征在于具有抑制AchE活性的中华真地鳖乙醇提取最佳条件为中华真地鳖与乙醇(95% ) 的料液比10 1 25 1、温度40 70°C下，提取2 7h。
3.根据权利要求1所述的具有抑制乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的中华真地鳖提取物及 其制备方法，其特征在于将中华真地鳖乙醇提取液，在40°C下真空浓缩至干后，进行“酸溶碱沉”。先以pH 为3的HCl溶液进行溶解，再用浓氨水溶液将其pH调至10后，过滤除去其不溶性杂质， 得到透明的棕红色液体。
4.根据权利要求1所述的具有抑制乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的中华真地鳖提取物及 其制备方法，其特征在于将中华真地鳖乙醇提取液经浓缩，“酸溶碱沉”后得到的棕红色透明液体，分别以 氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三种有机溶剂，进行萃取。将三种有机相萃取液在40°C下分别 真空浓缩至干，并测得其提取率达10 50%。
5.根据权利要求1所述的具有抑制乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的中华真地鳖提取物及 其制备方法，其特征在于将中华真地鳖乙醇提取液和三种有机相萃取液分别经浓缩至干后，用DMSO配成一 定浓度的样品液，分别测其对AchE的抑制率。以他克林作为阳性对照，中华真地鳖其乙 醇提取物与三种有机相萃取物对AchE的抑制率达20 70%。
6.根据权利要求1所述的具有抑制乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的中华真地鳖提取物及 其制备方法，其特征在于考虑提取率和对AchE的抑制率两个因素，在氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三种萃取有机 相中，本发明选取乙酸乙酯作为萃取特定有机相。
7.根据权利要求1所述的具有抑制乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的中华真地鳖提取物及 其制备方法，其特征在于本发明采用DTNB法测定中华真地鳖提取样品液对AchE的抑 制率。
全文摘要
一种抑制乙酰胆碱酯酶的中华真地鳖提取物及其制备方法，其特征是以中华真地鳖为原料，采用有机溶剂提取和萃取的手段，制备对乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase，AchE)抑制率达20～70％的中华真地鳖提取物。即称取一定量的中华真地鳖，在料液比1∶10～1∶25、浸提温度40～70℃、浸提时间2～7h的条件下进行乙醇提取。将中华真地鳖乙醇提取液在40℃下真空浓缩至干后，以“酸溶碱沉”法过滤除去其不溶性杂质，再分别用氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三种有机相进行萃取，其萃取液分别经浓缩至干。经浓缩至干的中华真地鳖乙醇提取物和三种有机相萃取物，分别用DMSO配成一定浓度的样品液，测其对AchE的抑制率。以他克林作为阳性对照，中华真地鳖其乙醇提取物与三种有机相萃取物对AchE的抑制率达20～70％。
文档编号A61K35/60GK102008508SQ20091017380
公开日2011年4月13日 申请日期2009年9月5日 优先权日2009年9月5日
发明者宁杰, 朴美子, 王凤舞 申请人:朴美子
技术领域：
本发明涉及一种具有抑制乙酰胆碱酯酶活性的中华真地鳖提取物的制备方法。
背景技术：
阿尔茨海默病(Alzheimer，s disease，AD)，是最常见的以进行性痴呆为特征的
大脑退行性变性疾病。它严重影响患病者的认知功能、记忆功能、社会生活能力、个人 生活能力等。目前，世界上较为接受的AD病理为“胆碱能缺失学说”。学说认为大脑 内神经递质_乙酰胆碱的缺失是导致AD疾病的关键原因。现今对AD的治疗主要是采用乙酰胆碱酯酶抑制剂(如他克林、加兰他敏、石杉 碱甲等)来抑制乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase，AchE)，提高患者体内的乙酰胆碱水 平，延缓乙酰胆碱的水解速度，从而发挥其对AD的治疗作用。目前，国内研究的乙酰 胆碱酯酶抑制剂大都来源于植物和微生物，如刘嘉林、徐择邻等分别从蛇足石杉和华南 马尾杉中分离得到石杉碱甲；董悦生等从2141株放线菌中筛选到一株具有抑制AchE活 性的阳性菌株N-98-1021A。但对于昆虫的研究甚少，更无从中华真地鳖中提取乙酰胆碱 酯酶抑制剂的相关报道。而中华真地鳖是传统的活血化瘀药，据现代医学证明其具有抗 凝血、抗缺氧、降血脂、抗突变、治疗冠心病、高血压病等作用。本发明以中华真地鳖为原料，采用有机溶剂提取和萃取的手段，制备对AchE 抑制率达20% 70%的中华真地鳖提取物，与阳性对照他克林相比，具有显著的抑制效果。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抑制AchE活性的中华真地鳖提取物及其制备方 法，为预防老年痴呆病生物药品的开发提供理论依据。本发明的特征在于以中华真地鳖为原料，采用有机溶剂提取和萃取的手段，制 备对AchE抑制率达20 70%的中华真地鳖提取物。本发明采用的技术方案是称取一定量的中华真地鳖，在料液比1 10 1 25、浸提温度40 70°C、浸提时间2 7h的条件下进行乙醇提取。将中华真地鳖 乙醇提取液在40°C下真空浓缩至干后，以“酸溶碱沉”法除去其不溶性杂质，再分别用 氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三种有机相进行萃取，其萃取液分别经浓缩至干。经浓缩至干的中华真地鳖乙醇提取物和三种有机相萃取物，分别用DMSO配成 一定浓度的样品液，测其对AchE的抑制率。以他克林作为阳性对照，中华真地鳖其乙醇 提取物与三种有机相萃取物对AchE的抑制率达20 70%。
具体实施例方式1、中华真地鳖乙醇提取最佳工艺条件的确定具有抑制AchE活性的中华真地鳖乙醇提取最佳条件为中华真地鳖与乙醇(95% )的料液比10 1 25 1、温度40 70°C下，提取2 7h。2、乙醇提取样品液的制备及其对AchE的抑制率按具体实施方式
1所得的中华真地鳖乙醇提取液，在40°C下真空浓缩至干，用 DMSO配成一定浓度的乙醇提取样品液，并测得其对AchE的抑制率在20%以上。3、酸溶碱沉按具体实施方式
1所得的中华真地鳖乙醇提取液，在40°C下真空浓缩至干，先 以pH为3的HCl溶液进行溶解，再用浓氨水溶液将其pH调至10后，过滤除去其不溶性 杂质，得到透明的棕红色液体。4、有机相萃取按具体实施方式
3所得到的棕红色透明液体，分别加入氯仿、乙酸乙酯、乙醚 三种有机溶剂，进行萃取。5、有机相萃取液的提取率将氯仿、乙酸乙酯、乙醚三种有机相萃取液，于40°C下真空浓缩至干，并测得 其提取率达10 50%。6、有机相萃取样品液的制备及其对AchE的抑制率按具体实施方式
4所得到的三种有机相萃取液，分别在40°C下真空浓缩至干， 用DMSO配成一定浓度的有机相萃取样品液，并分别测得其对AchE的抑制率在20 70%。7、选取萃取有机相考虑提取率和对AchE的抑制率两个因素，在氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三种萃取 有机相中，本发明选取乙酸乙酯作为萃取特定有机相。8、对AchE抑制率的测定方法本发明采用DTNB法测定中华真地鳖提取样品液对AchE的抑制率。
权利要求
1.一种抑制乙酰胆碱酯酶的中华真地鳖提取物及其制备方法，其特征在于称取一定量的中华真地鳖，在料液比1 10 1 25、浸提温度40 70°C、浸提时间2 7h的条件下进行乙醇提取。将中华真地鳖乙醇提取液在40°C下真空浓缩至干 后，以“酸溶碱沉”法除去其不溶性杂质，再分别用氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三种有机 相进行萃取，其萃取液分别经浓缩至干。经浓缩至于的中华真地鳖乙醇提取物和三种有 机相萃取物，分别用DMSO配成一定浓度的样品液，测其对AchE的抑制率。以他克林 作为阳性对照，中华真地鳖其乙醇提取物与三种有机相萃取物对AchE的抑制率达20 70%。由于考虑提取率和对AchE的抑制率两个因素，在氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三种有 机相中，本发明选取乙酸乙酯作为萃取特定有机相。本发明采用DTNB法测定对中华真 地鳖提取样品液对AchE的抑制率。
2.根据权利要求1所述的具有抑制乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的中华真地鳖提取物及 其制备方法，其特征在于具有抑制AchE活性的中华真地鳖乙醇提取最佳条件为中华真地鳖与乙醇(95% ) 的料液比10 1 25 1、温度40 70°C下，提取2 7h。
3.根据权利要求1所述的具有抑制乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的中华真地鳖提取物及 其制备方法，其特征在于将中华真地鳖乙醇提取液，在40°C下真空浓缩至干后，进行“酸溶碱沉”。先以pH 为3的HCl溶液进行溶解，再用浓氨水溶液将其pH调至10后，过滤除去其不溶性杂质， 得到透明的棕红色液体。
4.根据权利要求1所述的具有抑制乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的中华真地鳖提取物及 其制备方法，其特征在于将中华真地鳖乙醇提取液经浓缩，“酸溶碱沉”后得到的棕红色透明液体，分别以 氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三种有机溶剂，进行萃取。将三种有机相萃取液在40°C下分别 真空浓缩至干，并测得其提取率达10 50%。
5.根据权利要求1所述的具有抑制乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的中华真地鳖提取物及 其制备方法，其特征在于将中华真地鳖乙醇提取液和三种有机相萃取液分别经浓缩至干后，用DMSO配成一 定浓度的样品液，分别测其对AchE的抑制率。以他克林作为阳性对照，中华真地鳖其乙 醇提取物与三种有机相萃取物对AchE的抑制率达20 70%。
6.根据权利要求1所述的具有抑制乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的中华真地鳖提取物及 其制备方法，其特征在于考虑提取率和对AchE的抑制率两个因素，在氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三种萃取有机 相中，本发明选取乙酸乙酯作为萃取特定有机相。
7.根据权利要求1所述的具有抑制乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的中华真地鳖提取物及 其制备方法，其特征在于本发明采用DTNB法测定中华真地鳖提取样品液对AchE的抑 制率。
全文摘要
一种抑制乙酰胆碱酯酶的中华真地鳖提取物及其制备方法，其特征是以中华真地鳖为原料，采用有机溶剂提取和萃取的手段，制备对乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase，AchE)抑制率达20～70％的中华真地鳖提取物。即称取一定量的中华真地鳖，在料液比1∶10～1∶25、浸提温度40～70℃、浸提时间2～7h的条件下进行乙醇提取。将中华真地鳖乙醇提取液在40℃下真空浓缩至干后，以“酸溶碱沉”法过滤除去其不溶性杂质，再分别用氯仿、乙酸乙酯、乙醚等三种有机相进行萃取，其萃取液分别经浓缩至干。经浓缩至干的中华真地鳖乙醇提取物和三种有机相萃取物，分别用DMSO配成一定浓度的样品液，测其对AchE的抑制率。以他克林作为阳性对照，中华真地鳖其乙醇提取物与三种有机相萃取物对AchE的抑制率达20～70％。
文档编号A61K35/60GK102008508SQ20091017380
公开日2011年4月13日 申请日期2009年9月5日 优先权日2009年9月5日
发明者宁杰, 朴美子, 王凤舞 申请人:朴美子
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