脱乙酰酶抑制剂的制作方法
专利名称：脱乙酰酶抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的异羟肟酸化合物。本发明的化合物可用作用于治疗增殖性疾病的药物。
背景技术：
组蛋白的可逆性乙酰化反应是通过改变转录因子对DNA的可及性而发生作用的基因表达的主要调节器。在正常细胞中，组蛋白脱乙酰酶(HDA)和组蛋白乙酰基转移酶一起控制组蛋白的乙酰化程度以保持平衡。对HAD的抑制会导致高度乙酰化的组蛋白的积聚，从而导致各种细胞应答。
已对HDA抑制剂对癌细胞的治疗作用进行了研究。例如，据报导，丁酸和其衍生物(包括苯基丁酸钠)可在体外诱导人体结肠癌、白血病和成视网膜细胞瘤细胞系的细胞凋亡。但是，丁酸和其衍生物并不能用作药物，这是因为它们代谢迅速，体内的半衰期非常短。其它对其抗癌活性进行了广泛研究的HDA抑制剂是制滴菌素A和trapoxin。制滴菌素A是一种抗真菌剂和抗生素，它是哺乳动物HDA的可逆抑制剂。Trapoxin是一种环状的四肽，它是哺乳动物HDA的不可逆抑制剂。虽然对制滴菌素A和trapoxin的抗癌活性已有研究，但这些化合物的体内不稳定性使其不太适宜作为抗癌药物。因此，仍然存在着对高效且稳定的、适于治疗肿瘤，包括癌性肿瘤的活性化合物的需要。
发明概述本发明提供可用作药物的有效的脱乙酰酶抑制剂化合物或其可药用盐，其具有下式I 其中R1为H、卤素或直链C1-C6烷基(特别是甲基、乙基或正丙基，该甲基、乙基和正丙基取代基是未取代的或被一个或多个如下对烷基取代基所描述的取代基取代；R2选自H、C1-C10烷基(例如甲基、乙基或-CH2CH2-OH)、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如苄基)、杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)、-(CH2)nC(O)R6、-(CH2)nOC(O)R6、氨基酰基、HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；R3和R4相同或不同并且彼此独立地为H、C1-C6烷基、酰基或酰基氨基，或者R3和R4与和其相连的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8，或者R2与和其相连的氮一起以及R3与和其相连的碳一起可形成C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环，或者混合的芳基和非芳基多环杂环；R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、酰基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如苄基)、杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基、非芳族多环杂环和混合的芳基和非芳基多环杂环；n、n1、n2和n3相同或不同并且彼此独立地选自0-6，当n1为1-6时，每一个碳原子可选择性地且彼此独立地被R3和/或R4取代；X和Y相同或不同并且彼此独立地选自H、卤素、C1-C4烷基，例如CH3和CF3、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基、2-苯基乙烯基)、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、OR12和NR13R14；R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)和杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)；R9选自C1-C4烷基，例如，CH3和CF3，C(O)-烷基，例如，C(O)CH3和C(O)CF3；R10和R11相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、芳基、混合的芳基和非芳基多环、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)和杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)；R13和R14相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、氨基酰基，或者R13和R14与和其相连的氮合在一起为C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多杂环；R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、多环杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、芳族多环、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、多环杂芳基和NR13R14；m为选自0-6的整数；且Z选自O、NR13、S和S(O)。
本发明的化合物适于在药物组合物中用作活性成分，该药物组合物对于治疗细胞增殖性疾病特别有效。所述药物组合物含有药物有效量的本发明的活性成分，以及其它可药用的赋形剂、载体、填料、稀释剂等。本文中所用的术语“药物有效量”是指为了达到治疗效果、特别是抗肿瘤效果(例如抑制恶性癌细胞、良性肿瘤细胞或其它增殖性细胞的增殖)而需要给予患者的量。发明详述本发明提供了异羟肟酸化合物(例如异羟肟酸)，该化合物是脱乙酰酶的抑制剂，优选组蛋白脱乙酰酶的抑制剂。该异羟肟酸化合物特别适宜用来治疗肿瘤，包括癌性肿瘤。本发明的异羟肟酸化合物具有以下结构式I 其中R1为H、卤素或直链C1-C6烷基(特别是甲基、乙基或正丙基，该甲基、乙基和正丙基取代基是未取代的或被一个或多个如下对烷基取代基所描述的取代基取代)；R2选自H、C1-C10烷基(优选C1-C6烷基，例如甲基、乙基或-CH2CH2-OH)、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如苄基)、杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)、-(CH2)nC(O)R6、-(CH2)nOC(O)R6、氨基酰基、HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；R3和R4相同或不同并且彼此独立地为H、C1-C6烷基、酰基或酰基氨基，或者R3和R4与和其相连的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8，或者R2与和其相连的氮一起以及R3与和其相连的碳一起可形成C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、酰基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如苄基)、杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基、非芳族多环杂环和混合的芳基和非芳基多环杂环；n、n1、n2和n3相同或不同并且彼此独立地选自0-6时，当n1为1-6，每一个碳原子可选择性地且彼此独立地被R3和/或R4取代；X和Y相同或不同并且彼此独立地选自H、卤素、C1-C4烷基，例如CH3和CF3、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基、2-苯基乙烯基)、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、OR12和NR13R14；R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)和杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)；R9选自C1-C4烷基，例如，CH3和CF3，C(O)-烷基，例如C(O)CH3和C(O)CF3；R10和R11相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、芳基、混合的芳基和非芳基多环、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)和杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)；R13和R14相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、氨基酰基，或者R13和R14与和其相连的氮一起为C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、
多环杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、芳族多环、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、多环杂芳基和NR13R14；m为选自0-6的数；且Z选自O、NR13、S和S(O)，或其可药用盐。
可以理解，未取代的含义是指不存在取代基，或者取代基仅为氢。
卤素取代基选自氟、氯、溴和碘，优选氟或氯。
烷基取代基包括直链和支链的C1-C6烷基，除非另有说明。适宜的直链和支链的C1-C6烷基取代基的例子包括甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基等。除非另有说明，烷基取代基包括未取代的烷基和被一个或多个适宜的取代基取代的烷基，所述的取代基包括不饱和键(即存在一个或多个C-C双键或叁键)、酰基、环烷基、卤素、氧基烷基、烷基氨基、氨基烷基、酰基氨基和OR15，例如烷氧基。优选的烷基的取代基包括卤素、羟基、烷氧基、氧基烷基、烷基氨基和氨基烷基。
环烷基取代基包括C3-C9环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基等，除非另有说明。除非另有说明，环烷基取代基包括未取代的环烷基和被一个或多个适宜的取代基取代的环烷基，所述取代基包括C1-C6烷基、卤素、羟基、氨基烷基、氧基烷基、烷基氨基和OR15，例如烷氧基。优选的环烷基的取代基包括卤素、羟基、烷氧基、氧基烷基、烷基氨基和氨基烷基。
上述对烷基和环烷基取代基的讨论也适用于其它取代基的烷基部分，例如(但不仅限于)，烷氧基、烷基胺、烷基酮、芳基烷基、杂芳基烷基、烷基磺酰基和烷基酯取代基等。
杂环烷基取代基包括包含1至3个选自氮、硫和氧的杂原子的3-9元脂族环，例如4-7元脂族环。适宜的杂环烷基取代基的实例包括吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、吗啉基、1，3-二氮杂环庚烷、1，4-二氮杂环庚烷、1，4-氧氮杂环庚烷和1，4-氧硫杂环庚烷。除非另有说明，该环是未取代的或在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述取代基包括C1-C6烷基、C4-C9环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)和杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、卤素、氨基、烷基氨基和OR15，例如烷氧基。除非另有说明，氮杂原子为未取代的或被下述基团取代H、C1-C4烷基、芳基烷基(例如，苄基)和杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、酰基、氨基酰基、烷基磺酰基和芳基磺酰基。
环烷基烷基取代基包括式-(CH2)n5-环烷基的化合物，其中，n5为1-6。适宜的环烷基烷基取代基包括环戊基甲基、环戊基乙基、环己基甲基等。该取代基为未取代的或在烷基部分或环烷基部分被适宜的取代基取代，所述取代基包括以上关于烷基和环烷基所列的取代基。
芳基取代基包括未取代的苯基和被一个或多个适宜的取代基取代的苯基，所述取代基包括C1-C6烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、O(CO)烷基、氧基烷基、卤素、硝基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基酮、腈、羧基烷基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、芳基磺酰基和OR15，例如烷氧基。优选的取代基包括C1-C6烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、烷氧基、氧基烷基、卤素、硝基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基酮、腈、羧基烷基、烷基磺酰基、芳基磺酰基和氨基磺酰基。适宜的芳基的实例包括C1-C4烷基苯基、C1-C4烷氧基苯基、三氟甲基苯基、甲氧基苯基、羟基乙基苯基、二甲基氨基苯基、氨基丙基苯基、乙氧羰基苯基、甲磺酰基苯基和甲苯磺酰基苯基。
芳族多环包括萘基和被一个或多个适宜的取代基取代的萘基，所述取代基包括C1-C6烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、氧基烷基、卤素、硝基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基酮、腈、羧基烷基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基磺酰基和OR15，例如烷氧基。
杂芳基取代基包括具有含一个或多个杂原子、例如1-4个选自N、O和S的杂原子的5-7元芳环的化合物。典型的杂芳基取代基包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、三唑基、噻唑基、噁唑基、吡啶基、嘧啶基、异噁唑基、吡嗪基等。除非另有说明，杂芳基取代基是未取代的或在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述取代基包括烷基、如上所述的烷基取代基和另一个杂芳基取代基。氮原子是未取代的或例如被R13取代；特别有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
芳基烷基取代基包括下式的基团-(CH2)n5-芳基、-(CH2)n5-1-(CH芳基)-(CH2)n5-芳基或-(CH2)n5-1CH(芳基)(芳基)，其中，芳基和n5如前所定义。这种芳基烷基取代基包括苄基、2-苯基乙基、1-苯基乙基、甲苯基-3-丙基、2-苯基丙基、二苯基甲基、2-二苯基乙基、5，5-二甲基-3-苯基戊基等。芳基烷基取代基是未取代的或如前对烷基和芳基取代基所述在烷基部分或芳基部分或同时在两个部分被取代。
杂芳基烷基取代基包括式-(CH2)n5-杂芳基的基团，其中，杂芳基和n5如前所定义，并且桥连基团连接在杂芳基部分的碳或氮上，例如2-、3-或4-吡啶基甲基、咪唑基甲基、喹啉基乙基和吡咯基丁基。杂芳基烷基取代基是未取代的或如前对杂芳基和烷基取代基所述被取代。
氨基酰基取代基包括式-C(O)-(CH2)n-C(H)(NR13R14)-(CH2)n-R5的基团，其中，n、R13、R14和R5如前所定义。适宜的氨基酰基取代基包括天然和非天然氨基酸例如甘氨酰基、D-色氨酰基、L-赖氨酰基、D-或L-高丝氨酰基、4-氨基丁酰基、±-3-氨基-4-己烯酰基。
非芳族多环取代基包括双环和三环稠合环系，其中，每一个环可为4-9元环，并且每个环可包含0、1或多个双键和/或叁键。适宜的非芳族多环的实例包括十氢萘、八氢茚、全氢苯并环庚烯、全氢苯并-[f]-薁。该取代基是未取代的或如前对环烷基所述被取代。
混合的芳基和非芳基多环取代基包括双环和三环稠合环系，其中，每一个环可为4-9元环，并且至少一个环是芳环。适宜的混合的芳基和非芳基多环的实例包括亚甲二氧基苯基、二-亚甲二氧基苯基、1，2，3，4-四氢萘、二苯并环庚烷、二氢蒽、9H-芴。该取代基是未取代的或如前对环烷基所述被取代。
多环杂芳基取代基包括双环和三环稠合环系，其中，每一个环可以彼此独立地为5或6元环并且包含一个或多个，例如1、2、3或4个选自O、N或S的杂原子，并且该稠合的环系为芳香族的。适宜的多环杂芳基环系的实例包括喹啉、异喹啉、吡啶并吡嗪、吡咯并吡啶、呋喃并吡啶、吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并吲哚、苯并噁唑、吡咯并喹啉等。除非另有说明，多环杂芳基取代基是未取代的或在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述取代基包括烷基、如前所述的烷基取代基和式-O-(CH2CH＝CH(CH3)(CH2))1-3H的取代基。氮原子是未取代的或例如被R13取代；特别有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
非芳族多环杂环取代基包括双环和三环稠合环系，其中，每一个环可为4-9元环，包含一个或多个杂原子，例如1、2、3或4个选自O、N或S的杂原子，并且包含0个或一个或多个C-C双键或叁键。适宜的非芳族多环杂环的实例包括己糖醇、顺-全氢-环庚三烯并[b]吡啶基、十氢-苯并[f][1，4]氧氮杂环庚三烯基、2，8-二氧杂二环[3.3.0]辛烷、六氢-噻吩并[3，2-b]噻吩、全氢吡咯并[3，2-b]吡咯、全氢萘啶、全氢-1H-二环戊二烯并[b，e]吡喃。除非另有说明，非芳族多环杂环取代基是未取代的或在碳原子上被一个或多个取代基取代，所述取代基包括如前所述的烷基和烷基取代基。氮原子是未取代的或例如被R13取代；特别有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
混合的芳基和非芳基多环杂环取代基包括双环和三环稠合环系，其中，每一个环可为4-9元环，包含一个或多个选自O、N或S的杂原子，并且这些环中至少有一个必须为芳环。适宜的混合的芳基和非芳基多环杂环的实例包括2，3-二氢吲哚、1，2，3，4-四氢喹啉、5，11-二氢-10H-二苯并[b，e][1，4]二氮杂环庚三烯、5H-二苯并[b，e][1，4]二氮杂环庚三烯、1，2-二氢吡咯并[3，4-b][1，5]苯并二氮杂环庚三烯、1，5-二氢-吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-4-酮、1，2，3，4，6，11-六氢-苯并[b]吡啶并[2，3-e][1，4]二氮杂环庚三烯-5-酮。除非另有说明，混合的芳基和非芳基多环杂环取代基是未取代的或在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述的取代基包括-N-OH、＝N-OH、烷基和如前所述的烷基取代基。氮原子是未取代的或例如被R13取代；特别有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
氨基取代基包括伯、仲和叔胺和其盐形式，季胺。氨基取代基的实例包括单和二烷基氨基、单和二芳基氨基、单和二芳基烷基氨基、芳基-芳基烷基氨基、烷基-芳基氨基、烷基-芳基烷基氨基等。
磺酰基取代基包括烷基磺酰基和芳基磺酰基，例如甲磺酰基、苯磺酰基、甲苯磺酰基等。
酰基取代基包括下式的基团-C(O)-W、-OC(O)-W、-C(O)-O-W和-C(O)NR13R14，其中，W为R16、H或环烷基烷基。
酰基氨基取代基包括下式的基团-N(R12)C(O)-W、-N(R12)C(O)-O-W和-N(R12)C(O)-NHOH，其中R12和W如前所定义。
R2取代基HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-为下式的基团 其中n4为0-3且X和Y如前所定义。
各取代基的优选值如下R1为H、卤素或直链C1-C4烷基；R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；R3和R4相同或不同并且彼此独立地选自H和C1-C6烷基，或者R3和R4与和其相连的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8；R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基、非芳族多环杂环和混合的芳基和非芳基多环杂环；n、n1、n2和n3相同或不同并且彼此独立地选自0-6，当n1为1-6时，每一个碳原子为未取代的或彼此独立地被R3和/或R4取代；X和Y相同或不同并且彼此独立地选自H、卤素、C1-C4烷基、CF3、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、OR12和NR13R14；R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R9选自C1-C4烷基和C(O)-烷基；R10和R11相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R13和R14相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和氨基酰基；R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和NR13R14；m为选自0-6的整数；和Z选自O、NR13、S、S(O)。
有用的式I化合物包括以下的化合物，其中，R1、X、Y、R3和R4中的每一个均为H，包括那些n2和n3之一为0而另一个为1的化合物，特别是其中R2为H或-CH2-CH2-OH的化合物。
一种适宜的异羟肟酸类化合物为式Ia的化合物或其可药用盐 其中n4为0-3，R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；R5’为杂芳基、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基或混合的芳基和非芳基多环杂环。
另一种适宜的异羟肟酸类化合物为下式Ia的化合物或其可药用盐 其中n4为0-3，R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；R5’为芳基、芳基烷基、芳族多环、非芳族多环和混合的芳基和非芳基多环；特别是芳基，例如对氟苯基、对氯苯基、对-O-C1-C4-烷基苯基，例如对甲氧基苯基和对-C1-C4-烷基苯基；和芳基烷基，例如苄基、邻、间或对氟苄基、邻、间或对氯苄基、邻、间或对-单、二或三-O-C1-C4-烷基苄基，例如邻、间或对-甲氧基苄基、间，对二乙氧基苄基、邻、间、对三甲氧基苄基和邻、间或对-单、二或三C1-C4-烷基苯基，例如对-甲基，间间-二乙基苯基。另一类令人感兴趣的是式Ib的化合物或其可药用盐 其中R2’选自H、C1-C6烷基、C4-C6环烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、-(CH2)2-4OR21，其中，R21为H、甲基、乙基、丙基和异丙基，且R5”为未取代的1H-吲哚-3-基、苯并呋喃-3-基或喹啉-3-基或取代的1H-吲哚-3-基，例如5-氟-1H-吲哚-3-基或5-甲氧基-1H-吲哚-3-基、苯并呋喃-3-基或喹啉-3-基。
另一类令人感兴趣的异羟肟酸类化合物为下式Ic的化合物或其可药用盐 其中含Z1的环为芳族或非芳族环，所述非芳族环为饱和或不饱和的，Z1为O、S或N-R20，R18为H、卤素、C1-C6烷基(甲基、乙基、叔丁基)、C3-C7环烷基、芳基，例如未取代的苯基或被4-OCH3或4-CF3取代的苯基，或杂芳基，例如2-呋喃基、2-噻吩基或2-、3-或4-吡啶基；R20为H、C1-C6烷基、C1-C6烷基-C3-C9环烷基(例如，环丙基甲基)、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、酰基(乙酰基、丙酰基、苯甲酰基)或磺酰基(甲磺酰基、乙磺酰基、苯磺酰基、甲苯磺酰基)；A1为1、2或3个取代基，其彼此独立地为H、C1-C6烷基、-OR19、卤素、烷基氨基、氨基烷基、卤素或杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)，R19选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)和-(CH2CH＝CH(CH3)(CH2))1-3H；R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；v为0、1或2，p为0-3，并且q为1-5且r为0或者q为0且r为1-5，其它可变取代基如前所定义。
特别有用的式Ic化合物为以下的化合物，其中，R2为H或-(CH2)pCH2OH，其中p为1-3，特别是其中R1为H的化合物；例如其中R1为H且X和Y均为H的化合物，和其中q为1-3且r为0的化合物，或其中q为0且r为1-3的化合物，特别是其中Z1为N-R20的化合物。在这些化合物中，优选R2为H或-CH2-CH2-OH，并且q和r之和优选为1。另一类令人感兴趣的异羟肟酸化合物为式Id的化合物或其可药用盐 其中Z1为O、S或N-R20，R18为H、卤素、C1-C6烷基(甲基、乙基、叔丁基)、C3-C7环烷基、芳基，例如，未取代的苯基或被4-OCH3或4-CF3取代的苯基，或杂芳基，R20为H、C1-C6烷基、C1-C6烷基-C3-C9环烷基(例如，环丙基甲基)、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、酰基(乙酰基、丙酰基、苯甲酰基)或磺酰基(甲磺酰基、乙磺酰基、苯磺酰基、甲苯磺酰基)；A1为1、2或3个取代基，其彼此独立地为H、C1-C6烷基、-OR19或卤素，R19选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)和杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)；p为0-3，并且q为1-5且r为0或者q为0且r为1-5，其它可变取代基如前所定义。
特别有用的式Id化合物为以下的化合物，其中，R2为H或-(CH2)pCH2OH，其中p为1-3，特别是其中R1为H的化合物；例如其中R1为H且X和Y均为H的化合物，和其中q为1-3且r为0的化合物，或其中q为0且r为1-3的化合物。在这些化合物中，R2优选为H或-CH2-CH2-OH且q和r之和优选为1。本发明进一步涉及式Ie的化合物或其可药用盐 可变化的取代基如前所定义。
特别有用的式Ie化合物为以下的化合物，其中，R18为H、氟、氯、溴、C1-C4烷基、取代的C1-C4烷基、C3-C7环烷基、未取代的苯基、在对位上取代的苯基或杂芳基(例如，吡啶基)环。
另一组有用的式Ie化合物为以下的化合物，其中，R2为H或-(CH2)pCH2OH，其中p为1-3，特别是其中R1为H的化合物；例如其中R1为H且X和Y均为H的化合物和其中q为1-3且r为0的化合物，或者其中q为0且r为1-3的化合物。在这些化合物中，R2优选为H或-CH2-CH2-OH且q和r之和优选为1。
另一组有用的式Ie化合物为以下的化合物，其中，R18为H、甲基、乙基、叔丁基、三氟甲基、环己基、苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲基苯基、2-呋喃基、2-噻吩基或2-、3-或4-吡啶基，其中2-呋喃基、2-噻吩基和2-、3-或4-吡啶基取代基是未取代的或如前对杂芳基环所述被取代；R2为H或-(CH2)pCH2OH，其中，p为1-3；特别是其中R1为H且X和Y均为H的化合物，和其中q为1-3且r为0的化合物或其中q为0且r为1-3的化合物。在这些化合物中，R2优选为H或-CH2-CH2-OH和q且r之和优选为1。
其中R20为H或C1-C6烷基、特别是H的式Ie化合物是上述式Ie化合物各亚族中的重要化合物。
以下的化合物或其可药用盐是重要的式Ie化合物
N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺。
本发明进一步涉及式If的化合物或其可药用盐 可变取代基如前所定义。
有用的式If化合物为以下的化合物，其中，R2为H或-(CH2)pCH2OH，其中p为1-3，特别是其中R1为H的化合物；例如其中R1为H且X和Y均为H的化合物，和其中q为1-3且r为0的化合物，或者其中q为0且r为1-3的化合物。在这些化合物中，R2优选为H或-CH2-CH2-OH且q和r之和优选为1。
以下的化合物或其可药用盐是重要的式If化合物N-羟基-3-[4-[[[2-(苯并呋喃-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺。
上述化合物通常以其可药用盐的形式使用。可药用盐包括其可药用碱加成盐和酸加成盐，例如，金属盐，例如碱金属和碱土金属盐、铵盐、有机胺加成盐以及氨基酸加成盐和磺酸盐。酸加成盐包括无机酸加成盐，如盐酸盐、硫酸盐和磷酸盐；有机酸加成盐，如烷基磺酸盐、芳基磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐和乳酸盐。金属盐的实例为碱金属盐，如锂盐、钠盐和钾盐；碱土金属盐，如镁盐和钙盐；铝盐和锌盐。铵盐的实例为铵盐和四甲基铵盐。有机胺加成盐的实例为与吗啉和哌啶的盐。氨基酸加成盐的实例为与甘氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸和赖氨酸的盐。磺酸盐包括甲磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐。
正如本领域技术人员显而易见的，本发明的许多脱乙酰酶抑制剂化合物均包含不对称碳原子。因此，应当理解，本发明的范围包括这些单独的立体异构体。
本发明的异羟肟酸化合物可通过已知的有机合成方法制备。例如，异羟肟酸化合物可通过如下方法制备使4-甲酰基肉桂酸甲酯与色胺反应，然后将反应物转化成异羟肟酸化合物。举例来说，4-甲酰基肉桂酸甲酯2是通过使4-甲酰基肉桂酸3进行酸催化的酯化反应制备的(Bull.Chem.Soc.Jpn.1995；682355-2362)。4-甲酰基肉桂酸甲酯2的另一种制备方法是使丙烯酸甲酯4与4-溴苯甲醛5进行Pd催化的偶联反应。 其它原料可由4-羰基苯甲醛6制备，制备醛9的例举性方法如下所示。4-羰基苯甲醛6中的羧酸可通过用甲硅烷基氯(例如，叔丁基二甲基氯硅烷)和碱(例如三乙胺)在适宜的溶剂(例如，二氯甲烷)中处理以甲硅烷基酯(例如，叔丁基二甲基甲硅烷基酯)的形式进行保护。将形成的甲硅烷基酯7在碱(例如，氢化钠)的存在下，在适宜的溶剂(例如，四氢呋喃(THF))中，用膦酸酯(例如，2-膦酰基丙酸三乙酯)进行烯化反应(例如，Horner-Emmons烯化反应)。将形成的二酯用酸(例如，盐酸水溶液)处理，使甲硅烷基酯水解而得到酸8。在溶剂(例如，THF)中用例如硼烷-二甲基硫配合物选择性地还原羧酸8，得到中间体醇。可通过各种公知的方法将中间体醇氧化成醛9，所述方法包括但不限于Swern氧化、Dess-Martin periodinane氧化、Moffatt氧化等。 可将醛原料2或9还原胺化而得到仲胺或叔胺。例如，使4-甲酰基肉桂酸甲酯2与色胺10反应，用三乙酰氧基硼氢化钠(NaBH(OAc)3)作为还原剂，反应在作为溶剂的二氯乙烷(DCE)中进行，得到胺11。可采用其它还原剂，如硼氢化钠(NaBH4)和氰基硼氢化钠(NaBH3CN)，在其它溶剂或溶剂混合物中、在存在或不存在酸催化剂(例如，乙酸和三氟乙酸)的条件下进行。胺11可以通过用50％羟基胺水溶液在适宜的溶剂(例如，THF，在碱如NaOH的存在下)中进行处理直接转化成异羟肟酸12。其它形成异羟肟酸酯的方法是公知的，包括使酯与羟基胺盐酸盐及一种碱(例如，氢氧化钠或甲醇钠)在适宜的溶剂或溶剂混合物(例如，甲醇、乙醇或甲醇/THF)中进行反应。 醛2可用各种胺进行还原胺化，例如但不限于表1所示的那些。形成的酯可通过列出的方法转化成目的物异羟肟酸化合物。表1 本发明化合物的另一种合成方法是将4-甲酰基肉桂酸3进行还原胺化，例如，按照以下所示用3-苯基丙基胺13进行还原胺化，采用例如NaBH3CN作为还原剂在MeOH中进行，用HOAc作为催化剂。形成的氨基酸14的碱性氮可通过例如与二碳酸二叔丁基酯反应以叔丁氧基氨基甲酸酯(BOC)的形式保护而得到15。
可将羧酸与保护的羟基胺(例如，O-三苯甲基羟基胺)进行偶联反应得到16，反应采用脱水剂(例如，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCD)和催化剂(例如，1-羟基苯并三唑水合物(HOBT))在适宜的溶剂(例如DMF)中进行。用强酸(例如，三氟乙酸(TFA))处理16得到本发明的异羟肟酸17。可通过该方法制备的化合物的其它实例是 叔胺化合物可通过许多方法制备。将30用烟醛32还原胺化得到酯34，反应采用NaBH3CN作为还原剂在二氯乙烷中进行，用HOAc作为催化剂。也可采用其它还原剂(例如NaBH4和NaBH(OAc)3)在其它溶剂或溶剂混合物中、在存在或不存在酸性催化剂(例如，乙酸、三氟乙酸等)的条件下进行反应。将酯34与HONH2·HCl、NaOH在甲醇中反应得到异羟肟酸36。 由该方法制备的叔胺化合物的例子包括但不限于表2所列的那些。表2 制备叔胺的另一种方法是在适宜的溶剂中，在碱的存在下，使仲胺与烷基化试剂反应。例如，在(i-Pr)2NEt的存在下加热胺11和溴化物40的二甲亚砜(DMSO)溶液得到叔胺42。将叔胺42与HONH2·HCl、NaOH在MeOH中反应得到异羟肟酸43。可通过本领域技术人员公知的方法除去甲硅烷基。例如，可将异羟肟酸43用酸如三氟乙酸或氟化物处理，生成羟基乙基化合物44。 异羟肟酸化合物或其盐适用于制备药物组合物，特别是具有脱乙酰酶、尤其是组蛋白脱乙酰酶抑制特性的药物组合物。采用无胸腺小鼠进行的研究表明，异羟肟酸化合物会造成HDA抑制作用并增加体内的组蛋白乙酰化作用，其可触发与肿瘤生长抑制相关的基因表达的变化。
本发明进一步包括含有药理学有效量的一种或多种上述化合物作为活性成分的药物组合物。本发明的药物组合物适于通过肠内(如口服或直肠)和非肠道给药的方式给药于包括人在内的哺乳动物，以用于治疗肿瘤，其可单独给药或与一种或多种可药用载体组合使用。
异羟肟酸化合物可用于与适于经肠给药或非肠道给药的赋形剂或载体组合或混合而生产具有有效量化合物的药物组合物。优选片剂和明胶胶囊，其包含活性成分和(a)稀释剂；(b)润滑剂，(c)粘合剂(片剂)；如果需要的话，(d)崩解剂；和/或(e)吸附剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。可注射的组合物优选为等渗水溶液或水混悬液，栓剂优选由脂肪乳液或悬浮液制备。组合物可进行灭菌和/或包含辅剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，组合物也可包含其它治疗上有价值的物质。组合物可分别按照常规的混合、制粒或包衣方法来制备，并包含优选约1-50％的活性成分。
适宜的制剂还包括非肠道给药制剂，包括含水和非水无菌注射溶液，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与目的接受者的血液等渗的溶质；和含水和非水无菌混悬液，其可包含助悬剂和增稠剂。该制剂可以存在于单剂量或多剂量容器中，例如，密封的安瓿和小瓶，并可贮存于冷冻干燥(冻干)条件下，在临使用前，仅需要加入无菌液体载体，例如注射用水。现场制备的注射溶液和混悬液可由前面描述的无菌粉末、颗粒和片剂制备。
如前所述，本发明的化合物可用于治疗增殖性疾病。增殖性疾病主要是肿瘤疾病(或癌)(和/或各种转移瘤)。本发明的化合物特别适用于治疗如下肿瘤乳癌、泌尿生殖器癌、肺癌、胃肠癌、表皮样癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、成神经细胞瘤、头和/或颈部的癌症或膀胱癌或，或更广义的肾、脑或胃癌；特别是(i)乳腺肿瘤；表皮样肿瘤，例如表皮样头和/或颈部肿瘤或口腔肿瘤；肺肿瘤，例如小细胞或非小细胞肺肿瘤；胃肠肿瘤，例如，结肠直肠肿瘤；或泌尿生殖器肿瘤，例如，前列腺肿瘤(特别是激素-顽固性前列腺肿瘤)；或(ii)采用其它化学治疗剂难以治疗的增殖性疾病；或(iii)由于多药耐受性造成的用其它化学治疗剂难以治疗的肿瘤。
本发明从广义上说，增殖性疾病还可以是过度增殖性疾病，例如，白血病、增生、纤维变性(特别是肺纤维变性，但也可以是其它类型的纤维变性，例如肾纤维变性)、血管生成、牛皮癣、动脉粥样硬化和血管内平滑肌增殖，例如狭窄或血管成形术后的再狭窄。
在提及肿瘤、肿瘤性疾病、癌或恶性肿瘤时，也暗指在原始器官或组织和/或在任何其它位置的转移瘤，而不论肿瘤和/或转移瘤的位置。
本发明的化合物对增殖性细胞比起对正常细胞来具有选择性的毒性或更大的毒性，特别是对人体的癌细胞如癌性肿瘤，该化合物具有显著的抗增殖作用并能促进分化，例如细胞周期的停滞和细胞凋亡。此外，异羟肟酸化合物还可诱导p21，细胞周期蛋白-CDK相互作用蛋白，其可在各种细胞系中诱导细胞凋亡或G1的停滞。
下述实施例用于说明本发明，不应看作是对本发明的限制。实施例P1N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺的制备通过添加4-甲酰基肉桂酸(25g，0.143mol)的MeOH溶液和HCl(6.7g，0.18mol)生成4-甲酰基肉桂酸甲酯。将形成的悬浮液加热回流3小时，冷却然后蒸发至干。将得到的黄色固体溶解于EtOAc中，溶液用饱和NaHCO3洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发得到一种浅黄色固体，其不经纯化直接使用(25.0g，92％)。向色胺(16.3g，100mmol)和4-甲酰基肉桂酸甲酯(19g，100mmol)的二氯乙烷溶液中加入NaBH(OAc)3(21g，100mmol)。4小时后，将混合物用10％K2CO3溶液稀释，分离出有机相，用CH2Cl2萃取水溶液。将合并后的有机萃取液干燥(Na2SO4)，蒸发，将残余物进行快速色谱纯化，得到3-(4-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基]-甲基}-苯基)-(2E)-2-丙烯酸甲酯(29g)。将KOH(12.9g 87％，0.2m0l)的MeOH溶液(100mL)加至HONH2·HCl(13.9g，0.2mol)的MeOH溶液(200mL)中，有沉淀生成。15分钟后，将混合物过滤，滤饼用MeOH洗涤，将滤液真空蒸发至大约75mL。将混合物过滤，用MeOH将体积调节至100mL。将形成的2M HONH2溶液在N2气氛下于-20℃贮藏2周。然后将3-(4-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基]-甲基}-苯基)-(2E)-2-丙烯酸甲酯(2.20g，6.50mmol)加至2M HONH2的MeOH溶液(30mL，60mmol)中，然后加入KOH(420mg，6.5mmol)的MeOH溶液(5mL)。2小时后，向反应液中加入干冰，然后将混合物蒸发至干。将残余物溶解于热MeOH(20mL)中，冷却并在-20℃下贮藏过夜。将形成的悬浮液过滤，将固体用冰冷的MeOH洗涤然后真空干燥，得到N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(m/z 336[MH+])。实施例P2N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺的制备将3-(4-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基]-甲基}-苯基)-(2E)-2-丙烯酸甲酯(12.6g，37.7mmol)、(2-溴乙氧基)-叔丁基二甲基硅烷(12.8g，53.6mmol)、(i-Pr)2NEt(7.42g，57.4mmol)的DMSO(100mL)溶液加热至50℃。8小时后，将混合物在CH2Cl2/H2O间分配。将有机层干燥(Na2SO4)并蒸发。将残余物进行硅胶色谱处理，得到3-[4-({[2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-乙基]-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基}-甲基)-苯基]-(2E)-2-丙烯酸甲酯(13.1g)。随后进行实施例P1中制备异羟肟酸化合物所描述的过程，将3-[4-({[2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-乙基]-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基}-甲基)-苯基]-(2E)-2-丙烯酸甲酯(5.4g，11mmol)转化成N-羟基-3-[4-({[2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-乙基]-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基}-甲基)-苯基]-(2E)-2-丙烯酰胺(5.1g)并将其不经纯化直接使用。然后，将异羟肟酸(5.0g，13.3mmol)溶解于95％TFA/H2O(59mL)中，加热至40-50℃加热4小时。将混合物蒸发，将残余物用反相HPLC进行纯化，得到三氟乙酸盐形式的N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(m/z 380[MH+])。实施例P3N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺的制备将LiAlH4(17g，445mmol)在无水THF(1000mL)中的悬浮液冷却至0℃，在30分钟内，分批加入2-甲基吲哚-3-乙醛酰胺(30g，148mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟，然后保持在回流下3小时。将反应混合物冷却至0℃，并用H2O(17ml)、15％NaOH(水溶液，17ml)和H2O(51ml)处理。将混合物用MgSO4处理，过滤，将滤液蒸发得到2-甲基色胺，将其溶解于MeOH中。向溶液中加入4-甲酰基肉桂酸甲酯(16.9g，88.8mmol)，然后加入NaBH3CN(8.4g)和AcOH(1当量)。1小时后，将反应混合物用NaHCO3(水溶液)稀释并用EtOAc萃取。将有机萃取液干燥(MgSO4)，过滤和蒸发。将残余物用色谱法纯化，得到3-(4-{[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基氨基]-甲基}-苯基)-(2E)-2-丙烯酸甲酯。将该酯溶解于MeOH中，加入1.0M HCl/二噁烷(1-1.5当量)，然后加入Et2O。将形成的沉淀过滤，固体用Et2O洗涤，充分干燥后得到3-(4-{[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基氨基]-甲基}-苯基)-(2E)-2-丙烯酸甲酯盐酸盐。将1.0M NaOH(水溶液，85mL)加至冰冷的甲酯盐酸盐(14.9g，38.6mmol)和HONH2(50％水溶液，24.0mL，约391.2mmol)的溶液中。6小时后，将冰冷的溶液用H2O和NH4Cl(水溶液，0.86M，100mL)稀释。将形成的沉淀过滤，用H2O洗涤并干燥得到N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(m/z 350[MH+])。实施例1-265下述化合物可按照与实施例P1、P2和P3所述类似的方法制备。 实施例1-265的化合物显示出HDA酶IC50值为约0.005-约0.5μM。实施例B1细胞系H1299(人肺癌细胞)和HCT116(结肠肿瘤细胞)从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)，Rockville，MD获得。该细胞系不受支原体污染(Gen-Probe，Inc.的快速检测系统，San Diego，CA)和病毒污染(MA BioServices，Inc.的MAP检测，Rockville，MD)。使细胞系在含有10％热失活的FBS(Life Technologies，Grand Island，NY)的RPMI1640培养基中繁殖和扩展。在细胞工厂(NUNC，购自Fisher Scientific，Springfield，NJ)进行用于移植的细胞扩展。在50-90％汇合时收获细胞，用含10％FBS的HBSS(Hank’s平衡盐溶液)洗涤一次，然后悬浮在100％HBSS中。
采用市售的MTS试剂盒(Promega，Madision，Wis.)试验来测量细胞增殖，该试验使用公开方法的改变形式来进行，所述方法记载于例如下述文献中采用微量培养四氮唑试验用一系列人肿瘤细胞系进行药物筛选的可行性(Feasibility of drug screening with panels of human tumor cell linesusing a microculture tetrazolium assay)，Alley MC，等，Cancer Res.1988；48589-601。将细胞铺在96-孔组织培养皿中，空出顶排和底排。将H1299和HCT116细胞悬浮于完全培养基中，密度分别为5.3×103和3.6×103细胞/mL，每孔加入190μl。将每种细胞系加入平板的一半中。将完全培养基(200μL)加至顶排和底排。24小时后，将10μl MTS溶液加至其中的一个平板中以测定在化合物加入时(T0)的活性。将板在37℃下保温4小时，然后用Softmax程序于490nm下在Molecular Devices Thermomax上测量OD490值。T0板用作在实验开始时的初始活性的参照值。
在96-孔深孔平板中制备各化合物的五个系列稀释液(1∶4)，最高浓度在板的边缘。在每个平板上用两种化合物对两个细胞系进行试验。将五种稀释液各10μL一式三份地加入，并将单独的完全培养基加至第6列和7列。将平板在37℃下保温72小时。加入MTS溶液(与T0板一样)，4个小时后读取读数。
为了分析数据，从各实验孔中减去平均本底值(只含培养基)；对于各化合物稀释液，将其三份数值平均。用下式计算生长百分率。
如果X＞T0，％生长＝((X-T0)/(GC-T0))×100如果X＜T0，％生长＝((X-T0)/T0)×100其中，T0＝(在时间0时细胞活力的平均值)-本底GC＝未处理的细胞的平均值(一式三份)-本底X＝用化合物处理的细胞的平均值(一式三份)-本底用“％生长”对化合物的浓度作图，并利用数据点间的线性回归技术预测50％抑制时的化合物浓度，由此计算出IC50值。
将纯度高于95％的下述化合物的乳酸盐溶解于纯净的二甲亚砜(DMSO)中得到储备液N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(CMD1)、N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(CMD2)、N-羟基-3-[4-[[[2-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(CMD3)、N-羟基-3-[4-[[[2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(CMD4)、N-羟基-3-[4-[[[2-(苯并呋喃-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(CMD5)。在临给药之前，将储备液用5％葡萄糖注射液(USP)稀释。此外，按照EP 0847992的实施例48合成N-(2-氨基苯基)-4-[N-(吡啶-3-基)甲氧基羰基氨基甲基]苯甲酰胺并用作对照化合物(CMDC)。通过MTS试验在一式三份的实验中测量在用化合物处理72小时的单层中细胞生长的抑制并用其推导出IC50值。结果示于表B1。表B1单层生长IC50(μM)化合物H1299HCT116CMD1 0.40 0.03CMD2 0.15 0.01CMD3 0.58 0.03CMD4 0.28 0.03CMD5 0.18 0.03CMDC 6.8 0.67结果表明，本发明的异羟肟酸化合物在抑制肿瘤细胞生长中具有很高的活性。除上述结果外，还观察到本发明的化合物可选择性地抑制肿瘤细胞并对非肿瘤细胞显示出最低的抑制活性。
对用异羟肟酸化合物处理的细胞还进行了诱导p21启动子的实验，该启动子是G1停滞和分化的关键介质。在H1299中，在单层细胞生长抑制IC50值的两倍浓度范围内，异羟肟酸化合物可以激活p21启动子至易于检测的程度。不受任何具体理论的限制，该相互关系表明HDA抑制导致了抑制肿瘤细胞增殖的基因的转录激活。实施例B2HAD部分纯化自H1299--人非小细胞肺癌细胞(获自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)，12301 Parklawn Drive，Rockville，MD 20852，USA)。在10％FCS存在下，使细胞于RPMI培养基中生长至70-80％汇合，收获细胞并通过超声处理溶解。将溶解产物在23,420g下离心10-15分钟，将上清液上样到Hiload 26/10高效Q-琼脂糖柱(Amersham Pharmacia Biotech)上，并用含有20mM Tris pH 8.0、1mMEDTA、10mM NH4Cl2、1mM β-巯基乙醇、5％甘油、2μg/mL抑肽酶、1μg/mL亮抑蛋白酶肽和400mM PMSF的缓冲液平衡。将蛋白质用在上述缓冲液中的0-500mM NaCl的线性梯度以2.5mL/分钟的流速洗脱，以每份4mL收集洗脱液。用每一种部分纯化的HDA酶的制剂进行滴定以测定获得至少为5比1的信噪比所需的最佳量。通常，将20-30μl部分纯化的HDA(5-10mg蛋白质/mL)与2μL化合物的DMSO溶液在深孔滴定管板(Beckman)中混合。将化合物在DMSO中系列稀释以产生20倍实验浓度的储备液。试验中化合物的最后浓度为10μM、2μM、400nM、80nM和16nM，DMSO在各酶反应中的最终百分比等于0.1％。每种浓度的化合物一式两份地进行试验。用于反应中的底物是如下氨基酸序列的肽SGRGKGGKGLGKGGAKRHRKVLRD，相应于人组蛋白H4的24个N-末端氨基酸，在N末端生物素化并在每一赖氨酸残基处用3H-乙酸酯五乙酰化。为了开始反应，将底物在10μL缓冲液A(100mM Tris pH 8.0，2mMEDTA)中稀释，加至酶混合物中，通过在1500rpm下离心5分钟在深孔板的底部收集。离心后，将混合物在37℃下保温1.5小时。加入20μL停止缓冲液(0.5N HCl，0.08M乙酸)停止反应。此时，将试验进行自动提取阶段，或者在-80℃下冷冻数天。
用Tomtec Quadra 96工作站采用溶剂TBME(叔丁基甲基醚)完成从反应混合物中提取酶裂解的3H-乙酸酯基团。编写程序以将200μL TBME加至96孔“深孔”板中。将工作站编程以抽吸50μL空气，随后抽吸200μLTBME，最后是另外25μL空气，其分配于平板的各孔中。通过用吸移管吸取160μL上下10次使深孔内的物质充分混合。在向反应混合物中加入TBME之前，需要先用TBME“预湿润”吸移管尖端，以防止溶剂在转移至深孔板期间滴下。通过在1500rpm下离心5分钟分离出深孔中的有机相和水相。将Opti-Phase Supermix液体闪烁合剂(200μL)(Wallac)加至96-孔Trilux板(Wallac)的各孔中。将深孔板和Trilux板放回至编程的工作站上，以抽吸25μL空气进入吸移管尖端，随后是100μL的上层TBME相，并将其转移至Trilux板中。在相同的孔中，通过吸取和排出50μL五次将溶液混合。将Trilux板用透明的膜覆盖，并用彩色/化学猝灭和dpm校正法在1450 MicroBeta Trilux液体闪烁和发光计数器(Wallac)上计数。
为了测定IC50值，在电子表格上对数据进行分析。分析需要校正本底发光，即从实验孔中减去无3H底物的孔的dpm值。采用用户定义的样条函数，用校正的dpm值连同化合物的浓度计算IC50值。该函数利用数据点间的线性回归技术计算产生50％抑制时的化合物浓度。结果示于表B2中。表B2化合物HDA酶活性IC50(μM)CMD1 0.032CMD2 0.063CMD3 0.014CMD4 0.014CMD5 0.016CMDC ＞10实施例B3A549人体非小细胞肺肿瘤细胞系购自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)，Rockville，MD。该细胞系不受支原体污染(Gen-Probe，Inc.的快速检测系统，San Diego，CA)和病毒污染(MABioServices，Inc.的MAP检测，Rockville，MD)。使细胞系在含有10％热失活的FBS(Life Technologies，Grand Island，NY)的RPMI 1640培养基中繁殖和扩展。在细胞工厂(NUNC，购自Fisher Scientific，Springfield，NJ)进行用于移植的细胞扩展。在50-90％汇合时收获细胞，用含10％FBS的HBSS洗涤一次，然后悬浮在100％HBSS中。
将杂交繁殖的无胸腺(nu/nu)雌性小鼠(来自Harlan Sprague Dawley的“Hsd无胞腺裸鼠-nu”，Indianapolis，IN)用甲氧氟氯乙烷(MallinckrodtVeterinary，Inc.，Mundelein，IL)麻醉，将100μL包含1×107细胞的细胞悬浮液皮下注射到各小鼠的右腋窝(侧部)区域。使肿瘤生长约20天，直至其体积达到约100mm3。此时，将长有可接受的形态和大小的肿瘤的小鼠分组进行研究，每组8只小鼠。分组方法产生具有平衡的肿瘤大小均值和范围的各个组。抗肿瘤活性以％T/C表示，比较治疗组(T)与载体对照组(C)在肿瘤体积方面的差异。采用下式计算肿瘤的消退(1-T/T0)×100％，其中，T为实验结束时治疗组的肿瘤体积，T0为实验开始时的肿瘤体积。
CMD1经静脉内给药，一天一次，一周五次，共三周，剂量为10、25、50或100mg/kg。最终的DMSO浓度为10％。每一实验组有八只小鼠。测量肿瘤并记录各个小鼠的体重。表B3示出了在第41天时的结果。表B3Δ平均Δ％剂量 肿瘤体积*1体重*2化合物(mg/kg)(mm3±SEM*3)％T/C(％±SEM*3)10％DMSO/D5W*4-376±55 -+11.9±0.2CMD1 10 121±27 32 +1.3±0.3CMD1 25 77±3220 -0.9±0.3CMD1 50 57±1015 -0.4±0.3CMD1 100 28±257+0.4±0.3注释*1.一组小鼠在实验结束时的平均肿瘤体积减去在开始时的平均肿瘤体积的差值。
*2.一组小鼠在实验结束时的平均体重减去在开始时的平均体重的差值。
*3.平均值的标准误差。
*4.5％葡萄糖注射液，USP。实施例B4重复实施例B3，所不同的是采用CMD2。结果如表4所示。表B4Δ平均Δ％剂量 肿瘤体积 体重化合物(mg/kg)(mm3±SEM)％T/C(％±SEM)10％DMSO/D5W - 135±43 - +6.7±1.1CMD2 25 37±1627 -4.2±2.5CMD2 50 29±1521 -2.9±1.5实施例B5重复实施例B3，所不同的是采用HCT116结肠肿瘤细胞系代替A549细胞系。HCT116细胞系也来自美国典型培养物保藏中心(American TypeCulture Collection)，Rockville，MD，该细胞系不受支原体污染和病毒污染。记录在第34天时的结果，并示于表B5中。
表B5Δ平均 Δ％剂量 肿瘤体积体重化合物(mg/kg)(mm3±SEM)％T/C(％±SEM)10％DMSO/D5W -759±108 - -0.4±0.4CMD1 50*10 186±40 25 -7.4±0.8CMD1 100 140±38 18 -3.2±0.4注释*10.在组中用七只小鼠进行实验。实施例B6重复实施例B4，所不同的是采用HCT116结肠肿瘤细胞系代替A549细胞系。HCT116也来自美国典型培养物保藏中心(American Type CultureCollection)，Rockvlle，MD，该细胞系不受支原体污染和病毒污染。记录在第34天时的结果，并示于表B6中。表B6Δ平均 Δ％剂量肿瘤体积 体重化合物(mg/kg)(mm3±SEM)％T/C(％±SEM)10％DMSO/D5W - 759±108- -0.4±0.4CMD2 10 422±75 56 -10.2±0.5CMD2 25 305±47 40 -7.0±0.2CMD2 50 97±30 13 -7.3±0.3CMD2 100 132±30 17 -9.4±0.4实施例B7用膜连蛋白V结合作为细胞凋亡早期的标志物。将A549、HCT116和正常人体皮肤成纤维细胞(NDHF)分别用四种化合物(CMD1、CMD2、CMD3和CMD4)处理24或48小时，用膜连蛋白V染色，并与用赋形剂(DMSO)进行类似处理的细胞进行比较。采用荧光显微镜对细胞进行检验。那些正经历细胞凋亡的细胞显示出绿色荧光膜染色。通过复染剂碘化丙锭评价生存力。通过红色荧光检测到的细胞是没有活力的。在接触四种化合物24小时后，低百分比的A549和大部分的HCT116细胞显示出细胞表面被膜连蛋白V染色。处理48小时后，大部分的A549和HCT116被膜连蛋白V和/或碘化丙锭染色，表明化合物诱导了凋亡性的细胞死亡。与此相反，接触24小时后，NDHF细胞并未显示出明显的膜连蛋白V染色，在48小时后，CMD3显示出有限的膜连蛋白V染色。这些数据表明，在化学处理后，NDHF细胞主要经历非致死性的生长停滞，这与细胞周期分布是一致的。
染色结果表明，本发明的异羟肟酸化合物可以通过凋亡而使肿瘤细胞死亡，而正常的成纤维细胞主要经历细胞周期停滞，这清楚地表明了本发明化合物有选择性的有效性。
权利要求
1.式I化合物或其可药用盐 其中R1为H、卤素或直链C1-C6烷基；R2选自H、C1-C10烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、-(CH2)nOC(O)R6、氨基酰基、HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；R3和R4相同或不同并且彼此独立地为H、C1-C6烷基、酰基或酰基氨基，或者R3和R4与和其相连的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8，或者R2与和其相连的氮一起以及R3与和其相连的碳一起可形成C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、酰基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基、非芳族多环杂环和混合的芳基和非芳基多环杂环；n、n1、n2和n3相同或不同并且彼此独立地选自0-6，当n1为1-6时，每一个碳原子可选择性地且彼此独立地被R3和/或R4取代；X和Y相同或不同并且彼此独立地选自H、卤素、C1-C4烷基、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、OR12和NR13R14；R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R9选自C1-C4烷基和C(O)-烷基；R10和R11相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、芳基、混合的芳基和非芳基多环、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R13和R14相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、氨基酰基，或者R13和R14与和其相连的氮合在一起为C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、多环杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、芳族多环、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、多环杂芳基和NR13R14；m为选自0-6的整数；且Z选自O、NR13、S和S(O)。
2.权利要求1的化合物，其中，R1、X、Y、R3和R4均为H。
3.权利要求2的化合物，其中n2和n3之一为0，另一个为1。
4.权利要求3的化合物，其中，R2为H或-CH2-CH2-OH。
5.权利要求1的式Ia化合物或其可药用盐 其中n4为0-3，R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；R5’为杂芳基、杂芳基烷基、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基或混合的芳基和非芳基多环杂环。
6.权利要求1的式Ia化合物或其可药用盐 其中n4为0-3，R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；R5’是芳基、芳基烷基、芳族多环、非芳族多环或混合的芳基和非芳基多环。
7.权利要求6的化合物，其中，R5’为芳基或芳基烷基。
8.权利要求7的化合物，其中，R5’为对氟苯基、对氯苯基、对-O-C1-C4-烷基苯基、对-C1-C4-烷基苯基、苄基、邻、间或对氟苄基、邻、间或对氯苄基或邻、间或对-单、二或三-O-C1-C4-烷基苄基。
9.权利要求1的式Ib化合物或其可药用盐 其中R2’选自H、C1-C6烷基、C4-C6环烷基、环烷基烷基、-(CH2)2-4OR21，其中R21为H、甲基、乙基、丙基或异丙基，且R5”为未取代的或取代的1H-吲哚-3-基、苯并呋喃-3-基或喹啉-3-基。
10.权利要求9的化合物，其中，R5”为取代的1H-吲哚-3-基或取代的苯并呋喃-3-基。
11.权利要求1的式Ic化合物或其可药用盐 其中含Z1的环为芳族或非芳族环，所述非芳族环为饱和或不饱和的，Z1为O、S或N-R20；R18为H、卤素、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、芳基或杂芳基；R20为H、C1-C6烷基、C1-C6烷基-C3-C9环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、酰基或磺酰基；A1为1、2或3个取代基，该取代基彼此独立地为H、C1-C6烷基、-OR19、卤素、烷基氨基、氨基烷基、卤素或杂芳基烷基；R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；R19选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；v为0、1或2，p为0-3，并且q为1-5且r为0，或者q为0且r为1-5。
12.权利要求11的化合物，其中，Z1为N-R20。
13.权利要求11的化合物，其中，R2为H或-CH2-CH2-OH且q和r之和为1。
14.权利要求1的式Id化合物或其可药用盐 其中Z1为O、S或N-R20，R18为H、卤素、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、未取代的苯基、取代的苯基、或杂芳基，R20为H、C1-C6烷基、C1-C6烷基-C3-C9环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、酰基或磺酰基；A1为1、2或3个取代基，其彼此独立地为H、C1-C6烷基、-OR19或卤素，R19选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和-(CH2CH＝CH(CH3)(CH2))1-3H；p为0-3，并且q为1-5且r为0，或者q为0且r为1-5。
15.权利要求14的化合物，其中，R2为H或-CH2-CH2-OH且q和r之和为1。
16.权利要求11的式Ie化合物 或其可药用盐。
17.权利要求16的化合物，其中，R18为H、氟、氯、溴、C1-C4烷基、C3-C7环烷基、苯基或杂芳基。
18.权利要求16的化合物，其中，R2为H或-(CH2)pCH2OH且其中的p为1-3。
19.权利要求18的化合物，其中，R1为H，X和Y均为H，并且其中的q为1-3且r为0，或者其中的q为0且r为1-3。
20.权利要求16的化合物，其中，R18为H、甲基、乙基、叔丁基、三氟甲基、环己基、苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲基苯基、2-呋喃基、2-噻吩基或2-、3-或4-吡啶基。
21.权利要求20的化合物，其中，R2为H或-(CH2)pCH2OH。
22.权利要求21的化合物，其中，p为1-3。
23.权利要求22的化合物，其中，R1为H，X和Y均为H，并且其中的q为1-3且r为0，或者其中的q为0且r为1-3。
24.权利要求23的化合物，其中，R2为H或-CH2-CH2-OH且q和r之和为1。
25.权利要求16的化合物，其中，R20为H或C1-C6烷基。
26.权利要求16的化合物，其选自N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
27.权利要求26的化合物，该化合物为N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
28.权利要求1的式If化合物 或其可药用盐。
29.权利要求28的化合物，其中，R2为H或-(CH2)pCH2OH且p为1-3。
30.权利要求29的化合物，其中，R1为H，X和Y均为H，并且其中的q为1-3且r为0，或者其中的q为0且r为1-3。
31.权利要求30的化合物，其中，R2为H或-CH2-CH2-OH且q和r之和为1。
32.权利要求28的化合物，该化合物为N-羟基-3-[4-[[[2-(苯并呋喃-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
33.一种药物组合物，其包含药物有效量的式I化合物或其可药用盐 其中R1为H、卤素或直链C1-C6烷基；R2选自H、C1-C10烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、-(CH2)nOC(O)R6、氨基酰基、HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；R3和R4相同或不同并且彼此独立地为H、C1-C6烷基、酰基或酰基氨基，或者R3和R4与和其相连的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8，或者R2与和其相连的氮一起以及R3与和其相连的碳一起可形成C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、酰基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基、非芳族多环杂环和混合的芳基和非芳基多环杂环；n、n1、n2和n3相同或不同并且彼此独立地选自0-6，当n1为1-6时，每一个碳原子可选择性地且彼此独立地被R3和/或R4取代；X和Y相同或不同并且彼此独立地选自H、卤素、C1-C4烷基、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、OR12和NR13R14；R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R9选自C1-C4烷基和C(O)-烷基；R10和R11相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、芳基、混合的芳基和非芳基多环、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R13和R14相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、氨基酰基，或者R13和R14与和其相连的氮合在一起为C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、多环杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、芳族多环、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、多环杂芳基和NR13R14；m为选自0-6的整数；且Z选自O、NR13、S和S(O)。
34.权利要求33的药物组合物，其中的式I化合物选自N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
35.权利要求34的药物组合物，其中的式I化合物为N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
36.权利要求33的药物组合物，其中的式I化合物为N-羟基-3-[4-[[[2-(苯并呋喃-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
37.一种治疗哺乳动物增殖性疾病的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用式I的化合物或其可药用盐 其中R1为H、卤素或直链C1-C6烷基；R2选自H、C1-C10烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、-(CH2)nOC(O)R6、氨基酰基、HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；R3和R4相同或不同并且彼此独立地为H、C1-C6烷基、酰基或酰基氨基，或者R3和R4与和其相连的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8，或者R2与和其相连的氮一起以及R3与和其相连的碳一起可形成C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、酰基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基、非芳族多环杂环和混合的芳基和非芳基多环杂环；n、n1、n2和n3相同或不同并且彼此独立地选自0-6，当n1为1-6时，每一个碳原子可选择性地且彼此独立地被R3和/或R4取代；X和Y相同或不同并且彼此独立地选自H、卤素、C1-C4烷基、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、OR12和NR13R14；R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R9选自C1-C4烷基和C(O)-烷基；R10和R11相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、芳基、混合的芳基和非芳基多环、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R13和R14相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、氨基酰基，或者R13和R14与和其相连的氮合在一起为C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、多环杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、芳族多环、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、多环杂芳基和NR13R14；m为选自0-6的整数；且Z选自O、NR13、S和S(O)。
38.权利要求37的方法，其中的式I化合物选自N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
39.一种调节p21启动子的方法，该方法包括向哺乳动物的细胞环境中引入式I化合物或其可药用盐 其中R1为H、卤素或直链C1-C6烷基；R2选自H、C1-C10烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、-(CH2)nOC(O)R6、氨基酰基、HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；R3和R4相同或不同并且彼此独立地为H、C1-C6烷基、酰基或酰基氨基，或者R3和R4与和其相连的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8，或者R2与和其相连的氮一起以及R3与和其相连的碳一起可形成C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、酰基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基、非芳族多环杂环和混合的芳基和非芳基多环杂环；n、n1、n2和n3相同或不同并且彼此独立地选自0-6，当n1为1-6时，每一个碳原子可选择性地且彼此独立地被R3和/或R4取代；X和Y相同或不同并且彼此独立地选自H、卤素、C1-C4烷基、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、OR12和NR13R14；R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R9选自C1-C4烷基和C(O)-烷基；R10和R11相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、芳基、混合的芳基和非芳基多环、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R13和R14相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、氨基酰基，或者R13和R14与和其相连的氮合在一起为C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、多环杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、芳族多环、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、多环杂芳基和NR13R14；m为选自0-6的整数；且Z选自O、NR13、S和S(O)。
40.权利要求39的方法，其中的式I化合物选自N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
全文摘要
本发明提供了式(I)的异羟肟酸化合物，该化合物是脱乙酰酶抑制剂。该化合物适用于具有抗增殖特性的药物组合物。
文档编号A61K31/496GK1450991SQ01815067
公开日2003年10月22日 申请日期2001年8月30日 优先权日2000年9月1日
发明者K·W·贝尔, M·A·格林, L·B·佩雷斯, S·W·雷米斯未斯基, L·桑布切蒂, R·W·弗塞斯, S·K·夏尔马 申请人:诺瓦提斯公司
技术领域：
本发明涉及作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的异羟肟酸化合物。本发明的化合物可用作用于治疗增殖性疾病的药物。
背景技术：
组蛋白的可逆性乙酰化反应是通过改变转录因子对DNA的可及性而发生作用的基因表达的主要调节器。在正常细胞中，组蛋白脱乙酰酶(HDA)和组蛋白乙酰基转移酶一起控制组蛋白的乙酰化程度以保持平衡。对HAD的抑制会导致高度乙酰化的组蛋白的积聚，从而导致各种细胞应答。
已对HDA抑制剂对癌细胞的治疗作用进行了研究。例如，据报导，丁酸和其衍生物(包括苯基丁酸钠)可在体外诱导人体结肠癌、白血病和成视网膜细胞瘤细胞系的细胞凋亡。但是，丁酸和其衍生物并不能用作药物，这是因为它们代谢迅速，体内的半衰期非常短。其它对其抗癌活性进行了广泛研究的HDA抑制剂是制滴菌素A和trapoxin。制滴菌素A是一种抗真菌剂和抗生素，它是哺乳动物HDA的可逆抑制剂。Trapoxin是一种环状的四肽，它是哺乳动物HDA的不可逆抑制剂。虽然对制滴菌素A和trapoxin的抗癌活性已有研究，但这些化合物的体内不稳定性使其不太适宜作为抗癌药物。因此，仍然存在着对高效且稳定的、适于治疗肿瘤，包括癌性肿瘤的活性化合物的需要。
发明概述本发明提供可用作药物的有效的脱乙酰酶抑制剂化合物或其可药用盐，其具有下式I 其中R1为H、卤素或直链C1-C6烷基(特别是甲基、乙基或正丙基，该甲基、乙基和正丙基取代基是未取代的或被一个或多个如下对烷基取代基所描述的取代基取代；R2选自H、C1-C10烷基(例如甲基、乙基或-CH2CH2-OH)、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如苄基)、杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)、-(CH2)nC(O)R6、-(CH2)nOC(O)R6、氨基酰基、HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；R3和R4相同或不同并且彼此独立地为H、C1-C6烷基、酰基或酰基氨基，或者R3和R4与和其相连的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8，或者R2与和其相连的氮一起以及R3与和其相连的碳一起可形成C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环，或者混合的芳基和非芳基多环杂环；R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、酰基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如苄基)、杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基、非芳族多环杂环和混合的芳基和非芳基多环杂环；n、n1、n2和n3相同或不同并且彼此独立地选自0-6，当n1为1-6时，每一个碳原子可选择性地且彼此独立地被R3和/或R4取代；X和Y相同或不同并且彼此独立地选自H、卤素、C1-C4烷基，例如CH3和CF3、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基、2-苯基乙烯基)、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、OR12和NR13R14；R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)和杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)；R9选自C1-C4烷基，例如，CH3和CF3，C(O)-烷基，例如，C(O)CH3和C(O)CF3；R10和R11相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、芳基、混合的芳基和非芳基多环、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)和杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)；R13和R14相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、氨基酰基，或者R13和R14与和其相连的氮合在一起为C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多杂环；R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、多环杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、芳族多环、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、多环杂芳基和NR13R14；m为选自0-6的整数；且Z选自O、NR13、S和S(O)。
本发明的化合物适于在药物组合物中用作活性成分，该药物组合物对于治疗细胞增殖性疾病特别有效。所述药物组合物含有药物有效量的本发明的活性成分，以及其它可药用的赋形剂、载体、填料、稀释剂等。本文中所用的术语“药物有效量”是指为了达到治疗效果、特别是抗肿瘤效果(例如抑制恶性癌细胞、良性肿瘤细胞或其它增殖性细胞的增殖)而需要给予患者的量。发明详述本发明提供了异羟肟酸化合物(例如异羟肟酸)，该化合物是脱乙酰酶的抑制剂，优选组蛋白脱乙酰酶的抑制剂。该异羟肟酸化合物特别适宜用来治疗肿瘤，包括癌性肿瘤。本发明的异羟肟酸化合物具有以下结构式I 其中R1为H、卤素或直链C1-C6烷基(特别是甲基、乙基或正丙基，该甲基、乙基和正丙基取代基是未取代的或被一个或多个如下对烷基取代基所描述的取代基取代)；R2选自H、C1-C10烷基(优选C1-C6烷基，例如甲基、乙基或-CH2CH2-OH)、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如苄基)、杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)、-(CH2)nC(O)R6、-(CH2)nOC(O)R6、氨基酰基、HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；R3和R4相同或不同并且彼此独立地为H、C1-C6烷基、酰基或酰基氨基，或者R3和R4与和其相连的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8，或者R2与和其相连的氮一起以及R3与和其相连的碳一起可形成C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、酰基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如苄基)、杂芳基烷基(例如吡啶基甲基)、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基、非芳族多环杂环和混合的芳基和非芳基多环杂环；n、n1、n2和n3相同或不同并且彼此独立地选自0-6时，当n1为1-6，每一个碳原子可选择性地且彼此独立地被R3和/或R4取代；X和Y相同或不同并且彼此独立地选自H、卤素、C1-C4烷基，例如CH3和CF3、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基、2-苯基乙烯基)、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、OR12和NR13R14；R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)和杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)；R9选自C1-C4烷基，例如，CH3和CF3，C(O)-烷基，例如C(O)CH3和C(O)CF3；R10和R11相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、芳基、混合的芳基和非芳基多环、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)和杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)；R13和R14相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、氨基酰基，或者R13和R14与和其相连的氮一起为C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、
多环杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、芳族多环、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、多环杂芳基和NR13R14；m为选自0-6的数；且Z选自O、NR13、S和S(O)，或其可药用盐。
可以理解，未取代的含义是指不存在取代基，或者取代基仅为氢。
卤素取代基选自氟、氯、溴和碘，优选氟或氯。
烷基取代基包括直链和支链的C1-C6烷基，除非另有说明。适宜的直链和支链的C1-C6烷基取代基的例子包括甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基等。除非另有说明，烷基取代基包括未取代的烷基和被一个或多个适宜的取代基取代的烷基，所述的取代基包括不饱和键(即存在一个或多个C-C双键或叁键)、酰基、环烷基、卤素、氧基烷基、烷基氨基、氨基烷基、酰基氨基和OR15，例如烷氧基。优选的烷基的取代基包括卤素、羟基、烷氧基、氧基烷基、烷基氨基和氨基烷基。
环烷基取代基包括C3-C9环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基等，除非另有说明。除非另有说明，环烷基取代基包括未取代的环烷基和被一个或多个适宜的取代基取代的环烷基，所述取代基包括C1-C6烷基、卤素、羟基、氨基烷基、氧基烷基、烷基氨基和OR15，例如烷氧基。优选的环烷基的取代基包括卤素、羟基、烷氧基、氧基烷基、烷基氨基和氨基烷基。
上述对烷基和环烷基取代基的讨论也适用于其它取代基的烷基部分，例如(但不仅限于)，烷氧基、烷基胺、烷基酮、芳基烷基、杂芳基烷基、烷基磺酰基和烷基酯取代基等。
杂环烷基取代基包括包含1至3个选自氮、硫和氧的杂原子的3-9元脂族环，例如4-7元脂族环。适宜的杂环烷基取代基的实例包括吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、吗啉基、1，3-二氮杂环庚烷、1，4-二氮杂环庚烷、1，4-氧氮杂环庚烷和1，4-氧硫杂环庚烷。除非另有说明，该环是未取代的或在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述取代基包括C1-C6烷基、C4-C9环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)和杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、卤素、氨基、烷基氨基和OR15，例如烷氧基。除非另有说明，氮杂原子为未取代的或被下述基团取代H、C1-C4烷基、芳基烷基(例如，苄基)和杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、酰基、氨基酰基、烷基磺酰基和芳基磺酰基。
环烷基烷基取代基包括式-(CH2)n5-环烷基的化合物，其中，n5为1-6。适宜的环烷基烷基取代基包括环戊基甲基、环戊基乙基、环己基甲基等。该取代基为未取代的或在烷基部分或环烷基部分被适宜的取代基取代，所述取代基包括以上关于烷基和环烷基所列的取代基。
芳基取代基包括未取代的苯基和被一个或多个适宜的取代基取代的苯基，所述取代基包括C1-C6烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、O(CO)烷基、氧基烷基、卤素、硝基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基酮、腈、羧基烷基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、芳基磺酰基和OR15，例如烷氧基。优选的取代基包括C1-C6烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、烷氧基、氧基烷基、卤素、硝基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基酮、腈、羧基烷基、烷基磺酰基、芳基磺酰基和氨基磺酰基。适宜的芳基的实例包括C1-C4烷基苯基、C1-C4烷氧基苯基、三氟甲基苯基、甲氧基苯基、羟基乙基苯基、二甲基氨基苯基、氨基丙基苯基、乙氧羰基苯基、甲磺酰基苯基和甲苯磺酰基苯基。
芳族多环包括萘基和被一个或多个适宜的取代基取代的萘基，所述取代基包括C1-C6烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、氧基烷基、卤素、硝基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基酮、腈、羧基烷基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基磺酰基和OR15，例如烷氧基。
杂芳基取代基包括具有含一个或多个杂原子、例如1-4个选自N、O和S的杂原子的5-7元芳环的化合物。典型的杂芳基取代基包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、三唑基、噻唑基、噁唑基、吡啶基、嘧啶基、异噁唑基、吡嗪基等。除非另有说明，杂芳基取代基是未取代的或在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述取代基包括烷基、如上所述的烷基取代基和另一个杂芳基取代基。氮原子是未取代的或例如被R13取代；特别有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
芳基烷基取代基包括下式的基团-(CH2)n5-芳基、-(CH2)n5-1-(CH芳基)-(CH2)n5-芳基或-(CH2)n5-1CH(芳基)(芳基)，其中，芳基和n5如前所定义。这种芳基烷基取代基包括苄基、2-苯基乙基、1-苯基乙基、甲苯基-3-丙基、2-苯基丙基、二苯基甲基、2-二苯基乙基、5，5-二甲基-3-苯基戊基等。芳基烷基取代基是未取代的或如前对烷基和芳基取代基所述在烷基部分或芳基部分或同时在两个部分被取代。
杂芳基烷基取代基包括式-(CH2)n5-杂芳基的基团，其中，杂芳基和n5如前所定义，并且桥连基团连接在杂芳基部分的碳或氮上，例如2-、3-或4-吡啶基甲基、咪唑基甲基、喹啉基乙基和吡咯基丁基。杂芳基烷基取代基是未取代的或如前对杂芳基和烷基取代基所述被取代。
氨基酰基取代基包括式-C(O)-(CH2)n-C(H)(NR13R14)-(CH2)n-R5的基团，其中，n、R13、R14和R5如前所定义。适宜的氨基酰基取代基包括天然和非天然氨基酸例如甘氨酰基、D-色氨酰基、L-赖氨酰基、D-或L-高丝氨酰基、4-氨基丁酰基、±-3-氨基-4-己烯酰基。
非芳族多环取代基包括双环和三环稠合环系，其中，每一个环可为4-9元环，并且每个环可包含0、1或多个双键和/或叁键。适宜的非芳族多环的实例包括十氢萘、八氢茚、全氢苯并环庚烯、全氢苯并-[f]-薁。该取代基是未取代的或如前对环烷基所述被取代。
混合的芳基和非芳基多环取代基包括双环和三环稠合环系，其中，每一个环可为4-9元环，并且至少一个环是芳环。适宜的混合的芳基和非芳基多环的实例包括亚甲二氧基苯基、二-亚甲二氧基苯基、1，2，3，4-四氢萘、二苯并环庚烷、二氢蒽、9H-芴。该取代基是未取代的或如前对环烷基所述被取代。
多环杂芳基取代基包括双环和三环稠合环系，其中，每一个环可以彼此独立地为5或6元环并且包含一个或多个，例如1、2、3或4个选自O、N或S的杂原子，并且该稠合的环系为芳香族的。适宜的多环杂芳基环系的实例包括喹啉、异喹啉、吡啶并吡嗪、吡咯并吡啶、呋喃并吡啶、吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并吲哚、苯并噁唑、吡咯并喹啉等。除非另有说明，多环杂芳基取代基是未取代的或在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述取代基包括烷基、如前所述的烷基取代基和式-O-(CH2CH＝CH(CH3)(CH2))1-3H的取代基。氮原子是未取代的或例如被R13取代；特别有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
非芳族多环杂环取代基包括双环和三环稠合环系，其中，每一个环可为4-9元环，包含一个或多个杂原子，例如1、2、3或4个选自O、N或S的杂原子，并且包含0个或一个或多个C-C双键或叁键。适宜的非芳族多环杂环的实例包括己糖醇、顺-全氢-环庚三烯并[b]吡啶基、十氢-苯并[f][1，4]氧氮杂环庚三烯基、2，8-二氧杂二环[3.3.0]辛烷、六氢-噻吩并[3，2-b]噻吩、全氢吡咯并[3，2-b]吡咯、全氢萘啶、全氢-1H-二环戊二烯并[b，e]吡喃。除非另有说明，非芳族多环杂环取代基是未取代的或在碳原子上被一个或多个取代基取代，所述取代基包括如前所述的烷基和烷基取代基。氮原子是未取代的或例如被R13取代；特别有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
混合的芳基和非芳基多环杂环取代基包括双环和三环稠合环系，其中，每一个环可为4-9元环，包含一个或多个选自O、N或S的杂原子，并且这些环中至少有一个必须为芳环。适宜的混合的芳基和非芳基多环杂环的实例包括2，3-二氢吲哚、1，2，3，4-四氢喹啉、5，11-二氢-10H-二苯并[b，e][1，4]二氮杂环庚三烯、5H-二苯并[b，e][1，4]二氮杂环庚三烯、1，2-二氢吡咯并[3，4-b][1，5]苯并二氮杂环庚三烯、1，5-二氢-吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-4-酮、1，2，3，4，6，11-六氢-苯并[b]吡啶并[2，3-e][1，4]二氮杂环庚三烯-5-酮。除非另有说明，混合的芳基和非芳基多环杂环取代基是未取代的或在碳原子上被一个或多个适宜的取代基取代，所述的取代基包括-N-OH、＝N-OH、烷基和如前所述的烷基取代基。氮原子是未取代的或例如被R13取代；特别有用的N取代基包括H、C1-C4烷基、酰基、氨基酰基和磺酰基。
氨基取代基包括伯、仲和叔胺和其盐形式，季胺。氨基取代基的实例包括单和二烷基氨基、单和二芳基氨基、单和二芳基烷基氨基、芳基-芳基烷基氨基、烷基-芳基氨基、烷基-芳基烷基氨基等。
磺酰基取代基包括烷基磺酰基和芳基磺酰基，例如甲磺酰基、苯磺酰基、甲苯磺酰基等。
酰基取代基包括下式的基团-C(O)-W、-OC(O)-W、-C(O)-O-W和-C(O)NR13R14，其中，W为R16、H或环烷基烷基。
酰基氨基取代基包括下式的基团-N(R12)C(O)-W、-N(R12)C(O)-O-W和-N(R12)C(O)-NHOH，其中R12和W如前所定义。
R2取代基HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-为下式的基团 其中n4为0-3且X和Y如前所定义。
各取代基的优选值如下R1为H、卤素或直链C1-C4烷基；R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；R3和R4相同或不同并且彼此独立地选自H和C1-C6烷基，或者R3和R4与和其相连的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8；R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基、非芳族多环杂环和混合的芳基和非芳基多环杂环；n、n1、n2和n3相同或不同并且彼此独立地选自0-6，当n1为1-6时，每一个碳原子为未取代的或彼此独立地被R3和/或R4取代；X和Y相同或不同并且彼此独立地选自H、卤素、C1-C4烷基、CF3、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、OR12和NR13R14；R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R9选自C1-C4烷基和C(O)-烷基；R10和R11相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R13和R14相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和氨基酰基；R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和NR13R14；m为选自0-6的整数；和Z选自O、NR13、S、S(O)。
有用的式I化合物包括以下的化合物，其中，R1、X、Y、R3和R4中的每一个均为H，包括那些n2和n3之一为0而另一个为1的化合物，特别是其中R2为H或-CH2-CH2-OH的化合物。
一种适宜的异羟肟酸类化合物为式Ia的化合物或其可药用盐 其中n4为0-3，R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；R5’为杂芳基、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基或混合的芳基和非芳基多环杂环。
另一种适宜的异羟肟酸类化合物为下式Ia的化合物或其可药用盐 其中n4为0-3，R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；R5’为芳基、芳基烷基、芳族多环、非芳族多环和混合的芳基和非芳基多环；特别是芳基，例如对氟苯基、对氯苯基、对-O-C1-C4-烷基苯基，例如对甲氧基苯基和对-C1-C4-烷基苯基；和芳基烷基，例如苄基、邻、间或对氟苄基、邻、间或对氯苄基、邻、间或对-单、二或三-O-C1-C4-烷基苄基，例如邻、间或对-甲氧基苄基、间，对二乙氧基苄基、邻、间、对三甲氧基苄基和邻、间或对-单、二或三C1-C4-烷基苯基，例如对-甲基，间间-二乙基苯基。另一类令人感兴趣的是式Ib的化合物或其可药用盐 其中R2’选自H、C1-C6烷基、C4-C6环烷基、环烷基烷基(例如，环丙基甲基)、-(CH2)2-4OR21，其中，R21为H、甲基、乙基、丙基和异丙基，且R5”为未取代的1H-吲哚-3-基、苯并呋喃-3-基或喹啉-3-基或取代的1H-吲哚-3-基，例如5-氟-1H-吲哚-3-基或5-甲氧基-1H-吲哚-3-基、苯并呋喃-3-基或喹啉-3-基。
另一类令人感兴趣的异羟肟酸类化合物为下式Ic的化合物或其可药用盐 其中含Z1的环为芳族或非芳族环，所述非芳族环为饱和或不饱和的，Z1为O、S或N-R20，R18为H、卤素、C1-C6烷基(甲基、乙基、叔丁基)、C3-C7环烷基、芳基，例如未取代的苯基或被4-OCH3或4-CF3取代的苯基，或杂芳基，例如2-呋喃基、2-噻吩基或2-、3-或4-吡啶基；R20为H、C1-C6烷基、C1-C6烷基-C3-C9环烷基(例如，环丙基甲基)、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、酰基(乙酰基、丙酰基、苯甲酰基)或磺酰基(甲磺酰基、乙磺酰基、苯磺酰基、甲苯磺酰基)；A1为1、2或3个取代基，其彼此独立地为H、C1-C6烷基、-OR19、卤素、烷基氨基、氨基烷基、卤素或杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)，R19选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)和-(CH2CH＝CH(CH3)(CH2))1-3H；R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；v为0、1或2，p为0-3，并且q为1-5且r为0或者q为0且r为1-5，其它可变取代基如前所定义。
特别有用的式Ic化合物为以下的化合物，其中，R2为H或-(CH2)pCH2OH，其中p为1-3，特别是其中R1为H的化合物；例如其中R1为H且X和Y均为H的化合物，和其中q为1-3且r为0的化合物，或其中q为0且r为1-3的化合物，特别是其中Z1为N-R20的化合物。在这些化合物中，优选R2为H或-CH2-CH2-OH，并且q和r之和优选为1。另一类令人感兴趣的异羟肟酸化合物为式Id的化合物或其可药用盐 其中Z1为O、S或N-R20，R18为H、卤素、C1-C6烷基(甲基、乙基、叔丁基)、C3-C7环烷基、芳基，例如，未取代的苯基或被4-OCH3或4-CF3取代的苯基，或杂芳基，R20为H、C1-C6烷基、C1-C6烷基-C3-C9环烷基(例如，环丙基甲基)、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)、杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)、酰基(乙酰基、丙酰基、苯甲酰基)或磺酰基(甲磺酰基、乙磺酰基、苯磺酰基、甲苯磺酰基)；A1为1、2或3个取代基，其彼此独立地为H、C1-C6烷基、-OR19或卤素，R19选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基(例如，苄基)和杂芳基烷基(例如，吡啶基甲基)；p为0-3，并且q为1-5且r为0或者q为0且r为1-5，其它可变取代基如前所定义。
特别有用的式Id化合物为以下的化合物，其中，R2为H或-(CH2)pCH2OH，其中p为1-3，特别是其中R1为H的化合物；例如其中R1为H且X和Y均为H的化合物，和其中q为1-3且r为0的化合物，或其中q为0且r为1-3的化合物。在这些化合物中，R2优选为H或-CH2-CH2-OH且q和r之和优选为1。本发明进一步涉及式Ie的化合物或其可药用盐 可变化的取代基如前所定义。
特别有用的式Ie化合物为以下的化合物，其中，R18为H、氟、氯、溴、C1-C4烷基、取代的C1-C4烷基、C3-C7环烷基、未取代的苯基、在对位上取代的苯基或杂芳基(例如，吡啶基)环。
另一组有用的式Ie化合物为以下的化合物，其中，R2为H或-(CH2)pCH2OH，其中p为1-3，特别是其中R1为H的化合物；例如其中R1为H且X和Y均为H的化合物和其中q为1-3且r为0的化合物，或者其中q为0且r为1-3的化合物。在这些化合物中，R2优选为H或-CH2-CH2-OH且q和r之和优选为1。
另一组有用的式Ie化合物为以下的化合物，其中，R18为H、甲基、乙基、叔丁基、三氟甲基、环己基、苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲基苯基、2-呋喃基、2-噻吩基或2-、3-或4-吡啶基，其中2-呋喃基、2-噻吩基和2-、3-或4-吡啶基取代基是未取代的或如前对杂芳基环所述被取代；R2为H或-(CH2)pCH2OH，其中，p为1-3；特别是其中R1为H且X和Y均为H的化合物，和其中q为1-3且r为0的化合物或其中q为0且r为1-3的化合物。在这些化合物中，R2优选为H或-CH2-CH2-OH和q且r之和优选为1。
其中R20为H或C1-C6烷基、特别是H的式Ie化合物是上述式Ie化合物各亚族中的重要化合物。
以下的化合物或其可药用盐是重要的式Ie化合物
N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺。
本发明进一步涉及式If的化合物或其可药用盐 可变取代基如前所定义。
有用的式If化合物为以下的化合物，其中，R2为H或-(CH2)pCH2OH，其中p为1-3，特别是其中R1为H的化合物；例如其中R1为H且X和Y均为H的化合物，和其中q为1-3且r为0的化合物，或者其中q为0且r为1-3的化合物。在这些化合物中，R2优选为H或-CH2-CH2-OH且q和r之和优选为1。
以下的化合物或其可药用盐是重要的式If化合物N-羟基-3-[4-[[[2-(苯并呋喃-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺。
上述化合物通常以其可药用盐的形式使用。可药用盐包括其可药用碱加成盐和酸加成盐，例如，金属盐，例如碱金属和碱土金属盐、铵盐、有机胺加成盐以及氨基酸加成盐和磺酸盐。酸加成盐包括无机酸加成盐，如盐酸盐、硫酸盐和磷酸盐；有机酸加成盐，如烷基磺酸盐、芳基磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐和乳酸盐。金属盐的实例为碱金属盐，如锂盐、钠盐和钾盐；碱土金属盐，如镁盐和钙盐；铝盐和锌盐。铵盐的实例为铵盐和四甲基铵盐。有机胺加成盐的实例为与吗啉和哌啶的盐。氨基酸加成盐的实例为与甘氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸和赖氨酸的盐。磺酸盐包括甲磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐。
正如本领域技术人员显而易见的，本发明的许多脱乙酰酶抑制剂化合物均包含不对称碳原子。因此，应当理解，本发明的范围包括这些单独的立体异构体。
本发明的异羟肟酸化合物可通过已知的有机合成方法制备。例如，异羟肟酸化合物可通过如下方法制备使4-甲酰基肉桂酸甲酯与色胺反应，然后将反应物转化成异羟肟酸化合物。举例来说，4-甲酰基肉桂酸甲酯2是通过使4-甲酰基肉桂酸3进行酸催化的酯化反应制备的(Bull.Chem.Soc.Jpn.1995；682355-2362)。4-甲酰基肉桂酸甲酯2的另一种制备方法是使丙烯酸甲酯4与4-溴苯甲醛5进行Pd催化的偶联反应。 其它原料可由4-羰基苯甲醛6制备，制备醛9的例举性方法如下所示。4-羰基苯甲醛6中的羧酸可通过用甲硅烷基氯(例如，叔丁基二甲基氯硅烷)和碱(例如三乙胺)在适宜的溶剂(例如，二氯甲烷)中处理以甲硅烷基酯(例如，叔丁基二甲基甲硅烷基酯)的形式进行保护。将形成的甲硅烷基酯7在碱(例如，氢化钠)的存在下，在适宜的溶剂(例如，四氢呋喃(THF))中，用膦酸酯(例如，2-膦酰基丙酸三乙酯)进行烯化反应(例如，Horner-Emmons烯化反应)。将形成的二酯用酸(例如，盐酸水溶液)处理，使甲硅烷基酯水解而得到酸8。在溶剂(例如，THF)中用例如硼烷-二甲基硫配合物选择性地还原羧酸8，得到中间体醇。可通过各种公知的方法将中间体醇氧化成醛9，所述方法包括但不限于Swern氧化、Dess-Martin periodinane氧化、Moffatt氧化等。 可将醛原料2或9还原胺化而得到仲胺或叔胺。例如，使4-甲酰基肉桂酸甲酯2与色胺10反应，用三乙酰氧基硼氢化钠(NaBH(OAc)3)作为还原剂，反应在作为溶剂的二氯乙烷(DCE)中进行，得到胺11。可采用其它还原剂，如硼氢化钠(NaBH4)和氰基硼氢化钠(NaBH3CN)，在其它溶剂或溶剂混合物中、在存在或不存在酸催化剂(例如，乙酸和三氟乙酸)的条件下进行。胺11可以通过用50％羟基胺水溶液在适宜的溶剂(例如，THF，在碱如NaOH的存在下)中进行处理直接转化成异羟肟酸12。其它形成异羟肟酸酯的方法是公知的，包括使酯与羟基胺盐酸盐及一种碱(例如，氢氧化钠或甲醇钠)在适宜的溶剂或溶剂混合物(例如，甲醇、乙醇或甲醇/THF)中进行反应。 醛2可用各种胺进行还原胺化，例如但不限于表1所示的那些。形成的酯可通过列出的方法转化成目的物异羟肟酸化合物。表1 本发明化合物的另一种合成方法是将4-甲酰基肉桂酸3进行还原胺化，例如，按照以下所示用3-苯基丙基胺13进行还原胺化，采用例如NaBH3CN作为还原剂在MeOH中进行，用HOAc作为催化剂。形成的氨基酸14的碱性氮可通过例如与二碳酸二叔丁基酯反应以叔丁氧基氨基甲酸酯(BOC)的形式保护而得到15。
可将羧酸与保护的羟基胺(例如，O-三苯甲基羟基胺)进行偶联反应得到16，反应采用脱水剂(例如，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCD)和催化剂(例如，1-羟基苯并三唑水合物(HOBT))在适宜的溶剂(例如DMF)中进行。用强酸(例如，三氟乙酸(TFA))处理16得到本发明的异羟肟酸17。可通过该方法制备的化合物的其它实例是 叔胺化合物可通过许多方法制备。将30用烟醛32还原胺化得到酯34，反应采用NaBH3CN作为还原剂在二氯乙烷中进行，用HOAc作为催化剂。也可采用其它还原剂(例如NaBH4和NaBH(OAc)3)在其它溶剂或溶剂混合物中、在存在或不存在酸性催化剂(例如，乙酸、三氟乙酸等)的条件下进行反应。将酯34与HONH2·HCl、NaOH在甲醇中反应得到异羟肟酸36。 由该方法制备的叔胺化合物的例子包括但不限于表2所列的那些。表2 制备叔胺的另一种方法是在适宜的溶剂中，在碱的存在下，使仲胺与烷基化试剂反应。例如，在(i-Pr)2NEt的存在下加热胺11和溴化物40的二甲亚砜(DMSO)溶液得到叔胺42。将叔胺42与HONH2·HCl、NaOH在MeOH中反应得到异羟肟酸43。可通过本领域技术人员公知的方法除去甲硅烷基。例如，可将异羟肟酸43用酸如三氟乙酸或氟化物处理，生成羟基乙基化合物44。 异羟肟酸化合物或其盐适用于制备药物组合物，特别是具有脱乙酰酶、尤其是组蛋白脱乙酰酶抑制特性的药物组合物。采用无胸腺小鼠进行的研究表明，异羟肟酸化合物会造成HDA抑制作用并增加体内的组蛋白乙酰化作用，其可触发与肿瘤生长抑制相关的基因表达的变化。
本发明进一步包括含有药理学有效量的一种或多种上述化合物作为活性成分的药物组合物。本发明的药物组合物适于通过肠内(如口服或直肠)和非肠道给药的方式给药于包括人在内的哺乳动物，以用于治疗肿瘤，其可单独给药或与一种或多种可药用载体组合使用。
异羟肟酸化合物可用于与适于经肠给药或非肠道给药的赋形剂或载体组合或混合而生产具有有效量化合物的药物组合物。优选片剂和明胶胶囊，其包含活性成分和(a)稀释剂；(b)润滑剂，(c)粘合剂(片剂)；如果需要的话，(d)崩解剂；和/或(e)吸附剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。可注射的组合物优选为等渗水溶液或水混悬液，栓剂优选由脂肪乳液或悬浮液制备。组合物可进行灭菌和/或包含辅剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，组合物也可包含其它治疗上有价值的物质。组合物可分别按照常规的混合、制粒或包衣方法来制备，并包含优选约1-50％的活性成分。
适宜的制剂还包括非肠道给药制剂，包括含水和非水无菌注射溶液，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与目的接受者的血液等渗的溶质；和含水和非水无菌混悬液，其可包含助悬剂和增稠剂。该制剂可以存在于单剂量或多剂量容器中，例如，密封的安瓿和小瓶，并可贮存于冷冻干燥(冻干)条件下，在临使用前，仅需要加入无菌液体载体，例如注射用水。现场制备的注射溶液和混悬液可由前面描述的无菌粉末、颗粒和片剂制备。
如前所述，本发明的化合物可用于治疗增殖性疾病。增殖性疾病主要是肿瘤疾病(或癌)(和/或各种转移瘤)。本发明的化合物特别适用于治疗如下肿瘤乳癌、泌尿生殖器癌、肺癌、胃肠癌、表皮样癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、成神经细胞瘤、头和/或颈部的癌症或膀胱癌或，或更广义的肾、脑或胃癌；特别是(i)乳腺肿瘤；表皮样肿瘤，例如表皮样头和/或颈部肿瘤或口腔肿瘤；肺肿瘤，例如小细胞或非小细胞肺肿瘤；胃肠肿瘤，例如，结肠直肠肿瘤；或泌尿生殖器肿瘤，例如，前列腺肿瘤(特别是激素-顽固性前列腺肿瘤)；或(ii)采用其它化学治疗剂难以治疗的增殖性疾病；或(iii)由于多药耐受性造成的用其它化学治疗剂难以治疗的肿瘤。
本发明从广义上说，增殖性疾病还可以是过度增殖性疾病，例如，白血病、增生、纤维变性(特别是肺纤维变性，但也可以是其它类型的纤维变性，例如肾纤维变性)、血管生成、牛皮癣、动脉粥样硬化和血管内平滑肌增殖，例如狭窄或血管成形术后的再狭窄。
在提及肿瘤、肿瘤性疾病、癌或恶性肿瘤时，也暗指在原始器官或组织和/或在任何其它位置的转移瘤，而不论肿瘤和/或转移瘤的位置。
本发明的化合物对增殖性细胞比起对正常细胞来具有选择性的毒性或更大的毒性，特别是对人体的癌细胞如癌性肿瘤，该化合物具有显著的抗增殖作用并能促进分化，例如细胞周期的停滞和细胞凋亡。此外，异羟肟酸化合物还可诱导p21，细胞周期蛋白-CDK相互作用蛋白，其可在各种细胞系中诱导细胞凋亡或G1的停滞。
下述实施例用于说明本发明，不应看作是对本发明的限制。实施例P1N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺的制备通过添加4-甲酰基肉桂酸(25g，0.143mol)的MeOH溶液和HCl(6.7g，0.18mol)生成4-甲酰基肉桂酸甲酯。将形成的悬浮液加热回流3小时，冷却然后蒸发至干。将得到的黄色固体溶解于EtOAc中，溶液用饱和NaHCO3洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发得到一种浅黄色固体，其不经纯化直接使用(25.0g，92％)。向色胺(16.3g，100mmol)和4-甲酰基肉桂酸甲酯(19g，100mmol)的二氯乙烷溶液中加入NaBH(OAc)3(21g，100mmol)。4小时后，将混合物用10％K2CO3溶液稀释，分离出有机相，用CH2Cl2萃取水溶液。将合并后的有机萃取液干燥(Na2SO4)，蒸发，将残余物进行快速色谱纯化，得到3-(4-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基]-甲基}-苯基)-(2E)-2-丙烯酸甲酯(29g)。将KOH(12.9g 87％，0.2m0l)的MeOH溶液(100mL)加至HONH2·HCl(13.9g，0.2mol)的MeOH溶液(200mL)中，有沉淀生成。15分钟后，将混合物过滤，滤饼用MeOH洗涤，将滤液真空蒸发至大约75mL。将混合物过滤，用MeOH将体积调节至100mL。将形成的2M HONH2溶液在N2气氛下于-20℃贮藏2周。然后将3-(4-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基]-甲基}-苯基)-(2E)-2-丙烯酸甲酯(2.20g，6.50mmol)加至2M HONH2的MeOH溶液(30mL，60mmol)中，然后加入KOH(420mg，6.5mmol)的MeOH溶液(5mL)。2小时后，向反应液中加入干冰，然后将混合物蒸发至干。将残余物溶解于热MeOH(20mL)中，冷却并在-20℃下贮藏过夜。将形成的悬浮液过滤，将固体用冰冷的MeOH洗涤然后真空干燥，得到N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(m/z 336[MH+])。实施例P2N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺的制备将3-(4-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基]-甲基}-苯基)-(2E)-2-丙烯酸甲酯(12.6g，37.7mmol)、(2-溴乙氧基)-叔丁基二甲基硅烷(12.8g，53.6mmol)、(i-Pr)2NEt(7.42g，57.4mmol)的DMSO(100mL)溶液加热至50℃。8小时后，将混合物在CH2Cl2/H2O间分配。将有机层干燥(Na2SO4)并蒸发。将残余物进行硅胶色谱处理，得到3-[4-({[2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-乙基]-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基}-甲基)-苯基]-(2E)-2-丙烯酸甲酯(13.1g)。随后进行实施例P1中制备异羟肟酸化合物所描述的过程，将3-[4-({[2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-乙基]-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基}-甲基)-苯基]-(2E)-2-丙烯酸甲酯(5.4g，11mmol)转化成N-羟基-3-[4-({[2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-乙基]-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基}-甲基)-苯基]-(2E)-2-丙烯酰胺(5.1g)并将其不经纯化直接使用。然后，将异羟肟酸(5.0g，13.3mmol)溶解于95％TFA/H2O(59mL)中，加热至40-50℃加热4小时。将混合物蒸发，将残余物用反相HPLC进行纯化，得到三氟乙酸盐形式的N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(m/z 380[MH+])。实施例P3N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺的制备将LiAlH4(17g，445mmol)在无水THF(1000mL)中的悬浮液冷却至0℃，在30分钟内，分批加入2-甲基吲哚-3-乙醛酰胺(30g，148mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟，然后保持在回流下3小时。将反应混合物冷却至0℃，并用H2O(17ml)、15％NaOH(水溶液，17ml)和H2O(51ml)处理。将混合物用MgSO4处理，过滤，将滤液蒸发得到2-甲基色胺，将其溶解于MeOH中。向溶液中加入4-甲酰基肉桂酸甲酯(16.9g，88.8mmol)，然后加入NaBH3CN(8.4g)和AcOH(1当量)。1小时后，将反应混合物用NaHCO3(水溶液)稀释并用EtOAc萃取。将有机萃取液干燥(MgSO4)，过滤和蒸发。将残余物用色谱法纯化，得到3-(4-{[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基氨基]-甲基}-苯基)-(2E)-2-丙烯酸甲酯。将该酯溶解于MeOH中，加入1.0M HCl/二噁烷(1-1.5当量)，然后加入Et2O。将形成的沉淀过滤，固体用Et2O洗涤，充分干燥后得到3-(4-{[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基氨基]-甲基}-苯基)-(2E)-2-丙烯酸甲酯盐酸盐。将1.0M NaOH(水溶液，85mL)加至冰冷的甲酯盐酸盐(14.9g，38.6mmol)和HONH2(50％水溶液，24.0mL，约391.2mmol)的溶液中。6小时后，将冰冷的溶液用H2O和NH4Cl(水溶液，0.86M，100mL)稀释。将形成的沉淀过滤，用H2O洗涤并干燥得到N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(m/z 350[MH+])。实施例1-265下述化合物可按照与实施例P1、P2和P3所述类似的方法制备。 实施例1-265的化合物显示出HDA酶IC50值为约0.005-约0.5μM。实施例B1细胞系H1299(人肺癌细胞)和HCT116(结肠肿瘤细胞)从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)，Rockville，MD获得。该细胞系不受支原体污染(Gen-Probe，Inc.的快速检测系统，San Diego，CA)和病毒污染(MA BioServices，Inc.的MAP检测，Rockville，MD)。使细胞系在含有10％热失活的FBS(Life Technologies，Grand Island，NY)的RPMI1640培养基中繁殖和扩展。在细胞工厂(NUNC，购自Fisher Scientific，Springfield，NJ)进行用于移植的细胞扩展。在50-90％汇合时收获细胞，用含10％FBS的HBSS(Hank’s平衡盐溶液)洗涤一次，然后悬浮在100％HBSS中。
采用市售的MTS试剂盒(Promega，Madision，Wis.)试验来测量细胞增殖，该试验使用公开方法的改变形式来进行，所述方法记载于例如下述文献中采用微量培养四氮唑试验用一系列人肿瘤细胞系进行药物筛选的可行性(Feasibility of drug screening with panels of human tumor cell linesusing a microculture tetrazolium assay)，Alley MC，等，Cancer Res.1988；48589-601。将细胞铺在96-孔组织培养皿中，空出顶排和底排。将H1299和HCT116细胞悬浮于完全培养基中，密度分别为5.3×103和3.6×103细胞/mL，每孔加入190μl。将每种细胞系加入平板的一半中。将完全培养基(200μL)加至顶排和底排。24小时后，将10μl MTS溶液加至其中的一个平板中以测定在化合物加入时(T0)的活性。将板在37℃下保温4小时，然后用Softmax程序于490nm下在Molecular Devices Thermomax上测量OD490值。T0板用作在实验开始时的初始活性的参照值。
在96-孔深孔平板中制备各化合物的五个系列稀释液(1∶4)，最高浓度在板的边缘。在每个平板上用两种化合物对两个细胞系进行试验。将五种稀释液各10μL一式三份地加入，并将单独的完全培养基加至第6列和7列。将平板在37℃下保温72小时。加入MTS溶液(与T0板一样)，4个小时后读取读数。
为了分析数据，从各实验孔中减去平均本底值(只含培养基)；对于各化合物稀释液，将其三份数值平均。用下式计算生长百分率。
如果X＞T0，％生长＝((X-T0)/(GC-T0))×100如果X＜T0，％生长＝((X-T0)/T0)×100其中，T0＝(在时间0时细胞活力的平均值)-本底GC＝未处理的细胞的平均值(一式三份)-本底X＝用化合物处理的细胞的平均值(一式三份)-本底用“％生长”对化合物的浓度作图，并利用数据点间的线性回归技术预测50％抑制时的化合物浓度，由此计算出IC50值。
将纯度高于95％的下述化合物的乳酸盐溶解于纯净的二甲亚砜(DMSO)中得到储备液N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(CMD1)、N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(CMD2)、N-羟基-3-[4-[[[2-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(CMD3)、N-羟基-3-[4-[[[2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(CMD4)、N-羟基-3-[4-[[[2-(苯并呋喃-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺(CMD5)。在临给药之前，将储备液用5％葡萄糖注射液(USP)稀释。此外，按照EP 0847992的实施例48合成N-(2-氨基苯基)-4-[N-(吡啶-3-基)甲氧基羰基氨基甲基]苯甲酰胺并用作对照化合物(CMDC)。通过MTS试验在一式三份的实验中测量在用化合物处理72小时的单层中细胞生长的抑制并用其推导出IC50值。结果示于表B1。表B1单层生长IC50(μM)化合物H1299HCT116CMD1 0.40 0.03CMD2 0.15 0.01CMD3 0.58 0.03CMD4 0.28 0.03CMD5 0.18 0.03CMDC 6.8 0.67结果表明，本发明的异羟肟酸化合物在抑制肿瘤细胞生长中具有很高的活性。除上述结果外，还观察到本发明的化合物可选择性地抑制肿瘤细胞并对非肿瘤细胞显示出最低的抑制活性。
对用异羟肟酸化合物处理的细胞还进行了诱导p21启动子的实验，该启动子是G1停滞和分化的关键介质。在H1299中，在单层细胞生长抑制IC50值的两倍浓度范围内，异羟肟酸化合物可以激活p21启动子至易于检测的程度。不受任何具体理论的限制，该相互关系表明HDA抑制导致了抑制肿瘤细胞增殖的基因的转录激活。实施例B2HAD部分纯化自H1299--人非小细胞肺癌细胞(获自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)，12301 Parklawn Drive，Rockville，MD 20852，USA)。在10％FCS存在下，使细胞于RPMI培养基中生长至70-80％汇合，收获细胞并通过超声处理溶解。将溶解产物在23,420g下离心10-15分钟，将上清液上样到Hiload 26/10高效Q-琼脂糖柱(Amersham Pharmacia Biotech)上，并用含有20mM Tris pH 8.0、1mMEDTA、10mM NH4Cl2、1mM β-巯基乙醇、5％甘油、2μg/mL抑肽酶、1μg/mL亮抑蛋白酶肽和400mM PMSF的缓冲液平衡。将蛋白质用在上述缓冲液中的0-500mM NaCl的线性梯度以2.5mL/分钟的流速洗脱，以每份4mL收集洗脱液。用每一种部分纯化的HDA酶的制剂进行滴定以测定获得至少为5比1的信噪比所需的最佳量。通常，将20-30μl部分纯化的HDA(5-10mg蛋白质/mL)与2μL化合物的DMSO溶液在深孔滴定管板(Beckman)中混合。将化合物在DMSO中系列稀释以产生20倍实验浓度的储备液。试验中化合物的最后浓度为10μM、2μM、400nM、80nM和16nM，DMSO在各酶反应中的最终百分比等于0.1％。每种浓度的化合物一式两份地进行试验。用于反应中的底物是如下氨基酸序列的肽SGRGKGGKGLGKGGAKRHRKVLRD，相应于人组蛋白H4的24个N-末端氨基酸，在N末端生物素化并在每一赖氨酸残基处用3H-乙酸酯五乙酰化。为了开始反应，将底物在10μL缓冲液A(100mM Tris pH 8.0，2mMEDTA)中稀释，加至酶混合物中，通过在1500rpm下离心5分钟在深孔板的底部收集。离心后，将混合物在37℃下保温1.5小时。加入20μL停止缓冲液(0.5N HCl，0.08M乙酸)停止反应。此时，将试验进行自动提取阶段，或者在-80℃下冷冻数天。
用Tomtec Quadra 96工作站采用溶剂TBME(叔丁基甲基醚)完成从反应混合物中提取酶裂解的3H-乙酸酯基团。编写程序以将200μL TBME加至96孔“深孔”板中。将工作站编程以抽吸50μL空气，随后抽吸200μLTBME，最后是另外25μL空气，其分配于平板的各孔中。通过用吸移管吸取160μL上下10次使深孔内的物质充分混合。在向反应混合物中加入TBME之前，需要先用TBME“预湿润”吸移管尖端，以防止溶剂在转移至深孔板期间滴下。通过在1500rpm下离心5分钟分离出深孔中的有机相和水相。将Opti-Phase Supermix液体闪烁合剂(200μL)(Wallac)加至96-孔Trilux板(Wallac)的各孔中。将深孔板和Trilux板放回至编程的工作站上，以抽吸25μL空气进入吸移管尖端，随后是100μL的上层TBME相，并将其转移至Trilux板中。在相同的孔中，通过吸取和排出50μL五次将溶液混合。将Trilux板用透明的膜覆盖，并用彩色/化学猝灭和dpm校正法在1450 MicroBeta Trilux液体闪烁和发光计数器(Wallac)上计数。
为了测定IC50值，在电子表格上对数据进行分析。分析需要校正本底发光，即从实验孔中减去无3H底物的孔的dpm值。采用用户定义的样条函数，用校正的dpm值连同化合物的浓度计算IC50值。该函数利用数据点间的线性回归技术计算产生50％抑制时的化合物浓度。结果示于表B2中。表B2化合物HDA酶活性IC50(μM)CMD1 0.032CMD2 0.063CMD3 0.014CMD4 0.014CMD5 0.016CMDC ＞10实施例B3A549人体非小细胞肺肿瘤细胞系购自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)，Rockville，MD。该细胞系不受支原体污染(Gen-Probe，Inc.的快速检测系统，San Diego，CA)和病毒污染(MABioServices，Inc.的MAP检测，Rockville，MD)。使细胞系在含有10％热失活的FBS(Life Technologies，Grand Island，NY)的RPMI 1640培养基中繁殖和扩展。在细胞工厂(NUNC，购自Fisher Scientific，Springfield，NJ)进行用于移植的细胞扩展。在50-90％汇合时收获细胞，用含10％FBS的HBSS洗涤一次，然后悬浮在100％HBSS中。
将杂交繁殖的无胸腺(nu/nu)雌性小鼠(来自Harlan Sprague Dawley的“Hsd无胞腺裸鼠-nu”，Indianapolis，IN)用甲氧氟氯乙烷(MallinckrodtVeterinary，Inc.，Mundelein，IL)麻醉，将100μL包含1×107细胞的细胞悬浮液皮下注射到各小鼠的右腋窝(侧部)区域。使肿瘤生长约20天，直至其体积达到约100mm3。此时，将长有可接受的形态和大小的肿瘤的小鼠分组进行研究，每组8只小鼠。分组方法产生具有平衡的肿瘤大小均值和范围的各个组。抗肿瘤活性以％T/C表示，比较治疗组(T)与载体对照组(C)在肿瘤体积方面的差异。采用下式计算肿瘤的消退(1-T/T0)×100％，其中，T为实验结束时治疗组的肿瘤体积，T0为实验开始时的肿瘤体积。
CMD1经静脉内给药，一天一次，一周五次，共三周，剂量为10、25、50或100mg/kg。最终的DMSO浓度为10％。每一实验组有八只小鼠。测量肿瘤并记录各个小鼠的体重。表B3示出了在第41天时的结果。表B3Δ平均Δ％剂量 肿瘤体积*1体重*2化合物(mg/kg)(mm3±SEM*3)％T/C(％±SEM*3)10％DMSO/D5W*4-376±55 -+11.9±0.2CMD1 10 121±27 32 +1.3±0.3CMD1 25 77±3220 -0.9±0.3CMD1 50 57±1015 -0.4±0.3CMD1 100 28±257+0.4±0.3注释*1.一组小鼠在实验结束时的平均肿瘤体积减去在开始时的平均肿瘤体积的差值。
*2.一组小鼠在实验结束时的平均体重减去在开始时的平均体重的差值。
*3.平均值的标准误差。
*4.5％葡萄糖注射液，USP。实施例B4重复实施例B3，所不同的是采用CMD2。结果如表4所示。表B4Δ平均Δ％剂量 肿瘤体积 体重化合物(mg/kg)(mm3±SEM)％T/C(％±SEM)10％DMSO/D5W - 135±43 - +6.7±1.1CMD2 25 37±1627 -4.2±2.5CMD2 50 29±1521 -2.9±1.5实施例B5重复实施例B3，所不同的是采用HCT116结肠肿瘤细胞系代替A549细胞系。HCT116细胞系也来自美国典型培养物保藏中心(American TypeCulture Collection)，Rockville，MD，该细胞系不受支原体污染和病毒污染。记录在第34天时的结果，并示于表B5中。
表B5Δ平均 Δ％剂量 肿瘤体积体重化合物(mg/kg)(mm3±SEM)％T/C(％±SEM)10％DMSO/D5W -759±108 - -0.4±0.4CMD1 50*10 186±40 25 -7.4±0.8CMD1 100 140±38 18 -3.2±0.4注释*10.在组中用七只小鼠进行实验。实施例B6重复实施例B4，所不同的是采用HCT116结肠肿瘤细胞系代替A549细胞系。HCT116也来自美国典型培养物保藏中心(American Type CultureCollection)，Rockvlle，MD，该细胞系不受支原体污染和病毒污染。记录在第34天时的结果，并示于表B6中。表B6Δ平均 Δ％剂量肿瘤体积 体重化合物(mg/kg)(mm3±SEM)％T/C(％±SEM)10％DMSO/D5W - 759±108- -0.4±0.4CMD2 10 422±75 56 -10.2±0.5CMD2 25 305±47 40 -7.0±0.2CMD2 50 97±30 13 -7.3±0.3CMD2 100 132±30 17 -9.4±0.4实施例B7用膜连蛋白V结合作为细胞凋亡早期的标志物。将A549、HCT116和正常人体皮肤成纤维细胞(NDHF)分别用四种化合物(CMD1、CMD2、CMD3和CMD4)处理24或48小时，用膜连蛋白V染色，并与用赋形剂(DMSO)进行类似处理的细胞进行比较。采用荧光显微镜对细胞进行检验。那些正经历细胞凋亡的细胞显示出绿色荧光膜染色。通过复染剂碘化丙锭评价生存力。通过红色荧光检测到的细胞是没有活力的。在接触四种化合物24小时后，低百分比的A549和大部分的HCT116细胞显示出细胞表面被膜连蛋白V染色。处理48小时后，大部分的A549和HCT116被膜连蛋白V和/或碘化丙锭染色，表明化合物诱导了凋亡性的细胞死亡。与此相反，接触24小时后，NDHF细胞并未显示出明显的膜连蛋白V染色，在48小时后，CMD3显示出有限的膜连蛋白V染色。这些数据表明，在化学处理后，NDHF细胞主要经历非致死性的生长停滞，这与细胞周期分布是一致的。
染色结果表明，本发明的异羟肟酸化合物可以通过凋亡而使肿瘤细胞死亡，而正常的成纤维细胞主要经历细胞周期停滞，这清楚地表明了本发明化合物有选择性的有效性。
权利要求
1.式I化合物或其可药用盐 其中R1为H、卤素或直链C1-C6烷基；R2选自H、C1-C10烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、-(CH2)nOC(O)R6、氨基酰基、HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；R3和R4相同或不同并且彼此独立地为H、C1-C6烷基、酰基或酰基氨基，或者R3和R4与和其相连的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8，或者R2与和其相连的氮一起以及R3与和其相连的碳一起可形成C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、酰基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基、非芳族多环杂环和混合的芳基和非芳基多环杂环；n、n1、n2和n3相同或不同并且彼此独立地选自0-6，当n1为1-6时，每一个碳原子可选择性地且彼此独立地被R3和/或R4取代；X和Y相同或不同并且彼此独立地选自H、卤素、C1-C4烷基、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、OR12和NR13R14；R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R9选自C1-C4烷基和C(O)-烷基；R10和R11相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、芳基、混合的芳基和非芳基多环、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R13和R14相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、氨基酰基，或者R13和R14与和其相连的氮合在一起为C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、多环杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、芳族多环、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、多环杂芳基和NR13R14；m为选自0-6的整数；且Z选自O、NR13、S和S(O)。
2.权利要求1的化合物，其中，R1、X、Y、R3和R4均为H。
3.权利要求2的化合物，其中n2和n3之一为0，另一个为1。
4.权利要求3的化合物，其中，R2为H或-CH2-CH2-OH。
5.权利要求1的式Ia化合物或其可药用盐 其中n4为0-3，R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；R5’为杂芳基、杂芳基烷基、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基或混合的芳基和非芳基多环杂环。
6.权利要求1的式Ia化合物或其可药用盐 其中n4为0-3，R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；R5’是芳基、芳基烷基、芳族多环、非芳族多环或混合的芳基和非芳基多环。
7.权利要求6的化合物，其中，R5’为芳基或芳基烷基。
8.权利要求7的化合物，其中，R5’为对氟苯基、对氯苯基、对-O-C1-C4-烷基苯基、对-C1-C4-烷基苯基、苄基、邻、间或对氟苄基、邻、间或对氯苄基或邻、间或对-单、二或三-O-C1-C4-烷基苄基。
9.权利要求1的式Ib化合物或其可药用盐 其中R2’选自H、C1-C6烷基、C4-C6环烷基、环烷基烷基、-(CH2)2-4OR21，其中R21为H、甲基、乙基、丙基或异丙基，且R5”为未取代的或取代的1H-吲哚-3-基、苯并呋喃-3-基或喹啉-3-基。
10.权利要求9的化合物，其中，R5”为取代的1H-吲哚-3-基或取代的苯并呋喃-3-基。
11.权利要求1的式Ic化合物或其可药用盐 其中含Z1的环为芳族或非芳族环，所述非芳族环为饱和或不饱和的，Z1为O、S或N-R20；R18为H、卤素、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、芳基或杂芳基；R20为H、C1-C6烷基、C1-C6烷基-C3-C9环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、酰基或磺酰基；A1为1、2或3个取代基，该取代基彼此独立地为H、C1-C6烷基、-OR19、卤素、烷基氨基、氨基烷基、卤素或杂芳基烷基；R2选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、氨基酰基和-(CH2)nR7；R19选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；v为0、1或2，p为0-3，并且q为1-5且r为0，或者q为0且r为1-5。
12.权利要求11的化合物，其中，Z1为N-R20。
13.权利要求11的化合物，其中，R2为H或-CH2-CH2-OH且q和r之和为1。
14.权利要求1的式Id化合物或其可药用盐 其中Z1为O、S或N-R20，R18为H、卤素、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、未取代的苯基、取代的苯基、或杂芳基，R20为H、C1-C6烷基、C1-C6烷基-C3-C9环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、酰基或磺酰基；A1为1、2或3个取代基，其彼此独立地为H、C1-C6烷基、-OR19或卤素，R19选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和-(CH2CH＝CH(CH3)(CH2))1-3H；p为0-3，并且q为1-5且r为0，或者q为0且r为1-5。
15.权利要求14的化合物，其中，R2为H或-CH2-CH2-OH且q和r之和为1。
16.权利要求11的式Ie化合物 或其可药用盐。
17.权利要求16的化合物，其中，R18为H、氟、氯、溴、C1-C4烷基、C3-C7环烷基、苯基或杂芳基。
18.权利要求16的化合物，其中，R2为H或-(CH2)pCH2OH且其中的p为1-3。
19.权利要求18的化合物，其中，R1为H，X和Y均为H，并且其中的q为1-3且r为0，或者其中的q为0且r为1-3。
20.权利要求16的化合物，其中，R18为H、甲基、乙基、叔丁基、三氟甲基、环己基、苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲基苯基、2-呋喃基、2-噻吩基或2-、3-或4-吡啶基。
21.权利要求20的化合物，其中，R2为H或-(CH2)pCH2OH。
22.权利要求21的化合物，其中，p为1-3。
23.权利要求22的化合物，其中，R1为H，X和Y均为H，并且其中的q为1-3且r为0，或者其中的q为0且r为1-3。
24.权利要求23的化合物，其中，R2为H或-CH2-CH2-OH且q和r之和为1。
25.权利要求16的化合物，其中，R20为H或C1-C6烷基。
26.权利要求16的化合物，其选自N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
27.权利要求26的化合物，该化合物为N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
28.权利要求1的式If化合物 或其可药用盐。
29.权利要求28的化合物，其中，R2为H或-(CH2)pCH2OH且p为1-3。
30.权利要求29的化合物，其中，R1为H，X和Y均为H，并且其中的q为1-3且r为0，或者其中的q为0且r为1-3。
31.权利要求30的化合物，其中，R2为H或-CH2-CH2-OH且q和r之和为1。
32.权利要求28的化合物，该化合物为N-羟基-3-[4-[[[2-(苯并呋喃-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
33.一种药物组合物，其包含药物有效量的式I化合物或其可药用盐 其中R1为H、卤素或直链C1-C6烷基；R2选自H、C1-C10烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、-(CH2)nOC(O)R6、氨基酰基、HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；R3和R4相同或不同并且彼此独立地为H、C1-C6烷基、酰基或酰基氨基，或者R3和R4与和其相连的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8，或者R2与和其相连的氮一起以及R3与和其相连的碳一起可形成C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、酰基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基、非芳族多环杂环和混合的芳基和非芳基多环杂环；n、n1、n2和n3相同或不同并且彼此独立地选自0-6，当n1为1-6时，每一个碳原子可选择性地且彼此独立地被R3和/或R4取代；X和Y相同或不同并且彼此独立地选自H、卤素、C1-C4烷基、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、OR12和NR13R14；R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R9选自C1-C4烷基和C(O)-烷基；R10和R11相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、芳基、混合的芳基和非芳基多环、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R13和R14相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、氨基酰基，或者R13和R14与和其相连的氮合在一起为C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、多环杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、芳族多环、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、多环杂芳基和NR13R14；m为选自0-6的整数；且Z选自O、NR13、S和S(O)。
34.权利要求33的药物组合物，其中的式I化合物选自N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
35.权利要求34的药物组合物，其中的式I化合物为N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
36.权利要求33的药物组合物，其中的式I化合物为N-羟基-3-[4-[[[2-(苯并呋喃-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
37.一种治疗哺乳动物增殖性疾病的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用式I的化合物或其可药用盐 其中R1为H、卤素或直链C1-C6烷基；R2选自H、C1-C10烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、-(CH2)nOC(O)R6、氨基酰基、HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；R3和R4相同或不同并且彼此独立地为H、C1-C6烷基、酰基或酰基氨基，或者R3和R4与和其相连的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8，或者R2与和其相连的氮一起以及R3与和其相连的碳一起可形成C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、酰基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基、非芳族多环杂环和混合的芳基和非芳基多环杂环；n、n1、n2和n3相同或不同并且彼此独立地选自0-6，当n1为1-6时，每一个碳原子可选择性地且彼此独立地被R3和/或R4取代；X和Y相同或不同并且彼此独立地选自H、卤素、C1-C4烷基、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、OR12和NR13R14；R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R9选自C1-C4烷基和C(O)-烷基；R10和R11相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、芳基、混合的芳基和非芳基多环、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R13和R14相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、氨基酰基，或者R13和R14与和其相连的氮合在一起为C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、多环杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、芳族多环、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、多环杂芳基和NR13R14；m为选自0-6的整数；且Z选自O、NR13、S和S(O)。
38.权利要求37的方法，其中的式I化合物选自N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
39.一种调节p21启动子的方法，该方法包括向哺乳动物的细胞环境中引入式I化合物或其可药用盐 其中R1为H、卤素或直链C1-C6烷基；R2选自H、C1-C10烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、-(CH2)nC(O)R6、-(CH2)nOC(O)R6、氨基酰基、HON-C(O)-CH＝C(R1)-芳基-烷基-和-(CH2)nR7；R3和R4相同或不同并且彼此独立地为H、C1-C6烷基、酰基或酰基氨基，或者R3和R4与和其相连的碳一起表示C＝O、C＝S或C＝NR8，或者R2与和其相连的氮一起以及R3与和其相连的碳一起可形成C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R5选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、酰基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳族多环、非芳族多环、混合的芳基和非芳基多环、多环杂芳基、非芳族多环杂环和混合的芳基和非芳基多环杂环；n、n1、n2和n3相同或不同并且彼此独立地选自0-6，当n1为1-6时，每一个碳原子可选择性地且彼此独立地被R3和/或R4取代；X和Y相同或不同并且彼此独立地选自H、卤素、C1-C4烷基、NO2、C(O)R1、OR9、SR9、CN和NR10R11；R6选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、OR12和NR13R14；R7选自OR15、SR15、S(O)R16、SO2R17、NR13R14和NR12SO2R6；R8选自H、OR15、NR13R14、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R9选自C1-C4烷基和C(O)-烷基；R10和R11相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C4烷基和-C(O)-烷基；R12选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、C4-C9杂环烷基烷基、芳基、混合的芳基和非芳基多环、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基；R13和R14相同或不同并且彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、氨基酰基，或者R13和R14与和其相连的氮合在一起为C4-C9杂环烷基、杂芳基、多环杂芳基、非芳族多环杂环或混合的芳基和非芳基多环杂环；R15选自H、C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R16选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、杂芳基、多环杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基和(CH2)mZR12；R17选自C1-C6烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、芳基、芳族多环、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、多环杂芳基和NR13R14；m为选自0-6的整数；且Z选自O、NR13、S和S(O)。
40.权利要求39的方法，其中的式I化合物选自N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，N-羟基-3-[4-[[[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺，和N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
全文摘要
本发明提供了式(I)的异羟肟酸化合物，该化合物是脱乙酰酶抑制剂。该化合物适用于具有抗增殖特性的药物组合物。
文档编号A61K31/496GK1450991SQ01815067
公开日2003年10月22日 申请日期2001年8月30日 优先权日2000年9月1日
发明者K·W·贝尔, M·A·格林, L·B·佩雷斯, S·W·雷米斯未斯基, L·桑布切蒂, R·W·弗塞斯, S·K·夏尔马 申请人:诺瓦提斯公司
最新回复(0)