乳清蛋白肽作为制备改善学习记忆药物、保健食品或食品的用途的制作方法
专利名称：乳清蛋白肽作为制备改善学习记忆药物、保健食品或食品的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种乳清蛋白肽的一种新用途，具体来说指改善学习记忆的药物、保 健食品或食品的用途。属医药和食品保健领域。
背景技术：
生物活性肽是指具有特殊生理功能的肽类物质。1902年伦敦大学医学院的 Bayliss和Martling从动物的胃肠中发现了一种能引起胰腺分泌活动的物质，称为分泌 素，这是人类第一次发现生物活性肽类物质。此后，伴随着生物化学和分子生物学技术的飞 速发展，肽的研究取得了惊人的进展，已成为目前研究的新热点。
肽与蛋白质都是氨基酸以酰胺键互相连接在一起形成的化合物，不同的是肽的氨 基酸聚合度小，蛋白质的聚合度大。在结构上，肽处于氨基酸和蛋白质的中间位置，但它具 有氨基酸与蛋白质所不能替代的功能。长期以来，人们仅仅把食物蛋白质当作一种营养丰 富的成分，认为蛋白质只有水解成游离氨基酸后才能被吸收。但是近年来的研究发现，蛋白 质经消化道酶促水解后，主要以10个或10个以下氨基酸组成的寡肽形式被吸收。寡肽比单 个氨基酸的吸收更有效，并能直接参与蛋白质的合成，因此提高了机体对蛋白质的利用率。 在氨基酸运输系统功能出现障碍的情况下，摄入寡肽却能获得很好的吸收效果。生物体内 已发现几百种肽，是机体完成各种复杂的生理活性必不可少的参与者。
自然界中存在着大量的生物活性肽，它们在生物活动中起着非常重要的作用，具 有改善和提高矿物质吸收、抗氧化、抗菌、抗肿瘤、保护心血管、免疫调节、抗衰老等作用。应 用这些活性肽可以作为药物、疫苗以及保健品等。大量研究证明，当人体内缺乏一些调节生 理功能的肽时，会导致人体机能的改变。因此从营养学的角度出发，在食物结构调整以满足 人体必需氨基酸需要的同时，适当补充某些生物活性肽对增强防病、抗病能力以及延缓衰 老都具有深远意义。目前，开发和研究生物活性肽类食品在国际保健品行业中已成为一个 焦点。许多天然的生物活性肽具有改善和提高矿物质吸收的特性，它们有特异、安全和较高 的活性，这类生物制剂具有重要的应用价值。
人乳与动物乳被认为是最接近“完善”的食品，所含各种营养素及维生素、微量元 素等，种类齐全、配比合理，其营养价值是其他食品不能相比的。随着经济的发展与人民生 活水平的提高，势必对乳业与乳品业提出更高的要求。我国“八五”期间牛奶产量由原来的 475. 1万吨增至608. 0万吨，平均年递增9. 7% ；乳品由原来的31.21万吨增至42. 45万吨， 平均年递增8.3%。乳蛋白是生产乳制品(特别是奶酪)的重要原料；而蛋白酶是生产乳 品的重要手段。
乳清蛋白被誉为“蛋白之王”，属于干酪生产中的副产品，是利用现代生产工艺去 除酪蛋白(CN)后，分离出来的乳清中所含的蛋白质。其纯度高、消化吸收率高、氨基酸组成 合理、营养价值独特，广泛用于乳产品加工中。其主要包括α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、清 蛋白、免疫球蛋白和乳铁蛋白等，是公认的人体优质蛋白质补充剂之一。近年来，随着乳源性活性肽研究与产品开发的兴起，除酪蛋白外，乳清蛋白中也发现了具有潜在生物活性的 肽段，这为进一步提升乳清蛋白产品的营养功能，提高乳清蛋白产品的利用价值及附加产 值提供了新的思路和方法。许多研究表明，乳清蛋白经酶解等得到了许多具有很高的生物 活性多肽，在体内和体外显示不同的功能，如抗高血压、降血糖、抗氧化、抗血栓、促进矿物 质吸收等。乳清蛋白酶解肽以其安全有效的诸多优点，逐渐得到人们的重视，如今已成为研 究开发的热点。但是，迄今为止，还没有乳清蛋白肽在改善学习记忆药品、保健食品以及食 品中应用的任何报道。发明内容
本发明的目的是，提供一种易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好且成本低的低分子 量乳清蛋白肽在制备改善学习记忆的药物、保健食品或食品中的用途，为通过饮食改善学 习记忆提供一种新途径。
其中所述的药物或保健食品为粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂、口服液。
其中所述的食品为淀粉制品、乳及乳制品、豆制品、烘焙制品。
其中所述的化妆品为乳液、膏霜、油剂、水剂、凝胶、气雾剂、面膜。
本发明是发现了现有物质一乳清蛋白肽具有改善学习记忆的功能，发明了乳清蛋 白肽作为制备改善学习记忆的药物、保健食品或食品的用途。动物实验发现补充乳清蛋白 肽能够改善实验小鼠的被动和主动回避条件反射能力，增强实验小鼠的空间学习和记忆能 力。具体实施方案
下面结合具体实施方案对本发明作进一步的说明，这些实例应被理解为仅是举例 说明，而非以任何方式限制本发明的范围。
实施例1 乳清蛋白肽对实验小鼠学习记忆能力的影响研究
一、材料与方法
1、材料
1. 1乳清蛋白肽(whey protein peptides,WPP)由北京中食海氏生物技术有限公 司提供。淡黄色粉末，分子量集中在ISO-IOOODa范围内的小分子肽混合物，纯度为79%。
1. 2实验动物=SPF级C57BL/6J近交系小鼠60只，雄性，初断乳，体重10 12g。 由北京大学医学部实验动物中心提供，(动物合格证号SCXKll-00-0004，实验动物使用许 可证号SYXK (京)2002-0002，实验动物生产许可证号SYXK (京)2002-0001)。动物饲养条 件SPF级动物室，温度范围22士2°C，相对湿度50% 60%，昼夜12h 1浊。饲料合格 证号京动许字O000)第015号(北京市科奥协力饲料有限公司)。
1. 3仪器DSM_2型Morris水迷宫系统(中国医学科学院药物研究所)、DT_200小 鼠跳台测试仪(成都泰盟科技有限公司)、SCS-2型程控小鼠穿梭箱(中国医学科学院药物 研究所)。
2、方法
2. 1动物分组将60只小鼠随机分为4组，即对照组和3个WPP干预组，每组15 只。在整个实验期间内，对照组给予普通饲料喂养，低、中、高WPP干预组分别给予WPP含量为0. 225%,0. 45%和1. 35%的饲料喂养。动物自由进食、饮水，连续喂养30天，期间记录 动物进食量和体重增长，计算食物利用率。
2. 2行为学实验
2. 2. 1 跳台实验(Step-down test)
动物连续喂养30天后，于第31天开始实验。
小鼠跳台反射箱大小为25cmX25XcmX40cm，由不透明有机玻璃分隔成6间，一 角放置作为动物逃避电击安全区的橡胶平台，箱底为不锈钢铜栅。实验时先将动物放入反 应箱内(台上、台下)适应环境:3min，然后将动物放置反应箱内的铜栅上，立即通以36V的 交流电，观察动物受到电击跳回平台，以及再次跳至铜栅上的情况。如此训练5min，仪器自 动记录每只鼠受电击的次数或称错误次数(EM)，以此作为学习成绩。24h后进行重复测 验，在底部铜栅通电的情况下，直接将动物置于平台上，记录各鼠第一次跳下平台的时间， 即停留潜伏期(st印-down latency, SDL)和各鼠!Bmin内的错误次数(EN2)以此作为记忆 成绩。停止实验5天后再进行一次重复实验，记录上述指标，作为记忆消退阶段的成绩。
2. 2. 2 穿梭箱实验(Shuttle test)
本实验在跳台实验完成后2天开始，整个实验期间动物均正常进食。
穿梭箱大小为30cmX IOcmX 20cm，顶部有蜂鸣音控制器，箱底部为可通电的不锈 钢格栅，间隔0. 5cm，箱底中央部有一高1. 2cm的挡板将箱底部分隔成左右两侧。将小鼠放 入穿梭箱内任何一侧，IOs后开始出现蜂鸣音，持续5s，蜂鸣音后给予电刺激(100v，0. 2mA, 50Hz，AC)，持续10s。小鼠在遭遇电击后即逃避，必须跑到对侧顶端，挡住光电管后才可中 断电击，此为被动回避反应，在每次电击前给予条件刺激(蜂鸣音)，反复强化后，小鼠在接 受条件刺激后即跳向对侧并挡住光电管而逃避电击，此为主动回避反应，连续训练4d，每天 10次。记录以下指标⑴主动回避时间，即试验中出现主动回避时间的总和；(2)电击次 数，即在10个循环中小鼠被电击到的次数；(3)电击时间，即动物被电击的累计时间。
2. 2. 3Morris /K迷宫实验(Morris Water Maze, MWM)
该实验于穿梭箱实验结束后2天开始进行，整个实验期间动物均正常进食。 Morris水迷宫由圆形水池(直径120cm，高50cm)、平台(直径10cm，高20cm)以及图象自 动采集和处理系统(摄像机、录像机、显示器和分析软件等)组成。实验时，人为将水池划 分为四个象限，平台随机置于第一象限并固定于水下1-1. 5cm，水温保持在21 士 1°C。
整个实验过程分为定位航行实验(place navigation test)和空间探索实验 (spatial probe test)两部分。(1)定位航行实验用于测量小鼠在水迷宫中的学习和记 忆能力，实验历时6d，每天训练4次。实验时分别从4个象限任选一入水点将动物面向池 壁放入水中，记录小鼠从入水到找到平台所需的时间(逃避潜伏期，escape latency)、游戏 路程和游泳速度。如果动物在60s内末找到平台，则将由实验者将其引导至平台并在平台 上停留10s，逃避潜伏期记为60s。(2)空间探索实验用于测量小鼠对平台空间位置的记 忆保持能力，方法为第7d撤去平台，将小鼠从平台所在象限的对侧任选一个入水点放入水 中，记录120s内小鼠在目标象限(平台所在象限)的停留时间及准确穿越平台所在位置的 次数。
2. 3统计分析方法
所有数据均用SPSS 16.0 for windows软件包处理。以单因素方差分析进行进行5差异显著性检验，以α =0.05为显著性标准。
二、结果
1.跳台实验结果
统计学检验结果显示，3个乳清肽干预组与对照组相比，训练后24h和第5d的平均 潜伏期和错误次数差异均无显著性。但从潜伏期变化趋势看，0. 45%和1. 35% WPP干预组 潜伏期时间下降幅度较对照组明显减小，且训练后第5天3个WPP干预组的平均潜伏期绝 对值均较对照组长，提示WPP干预组小鼠记忆消退速度较对照组减慢(表1)。
表IWPP对小鼠跳台潜伏期的影响
权利要求
1.乳清蛋白肽作为制备改善学习记忆药物、保健食品或食品的用途。
2.根据权利要求1所述的乳清蛋白肽作为制备改善学习记忆药物、保健食品或食品的 用途，其特征在于所述改善学习记忆药物和保健食品为粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂或 口服液。
3.根据权利要求1所述的乳清蛋白肽作为制备改善学习记忆药物、保健食品或食品的 用途，其特征在于所述改善学习记忆食品为淀粉制品、乳及乳制品、豆制品或烘焙制品。
全文摘要
本发明公开一种乳清蛋白肽作为制备改善学习记忆药物、保健食品或食品的用途。乳清蛋白肽具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特点，能够促进实验小鼠主动回避条件反射的建立，减缓被动回避条件反射记忆消退速度，同时改善实验小鼠的空间学习记忆能力，具有改善学习记忆的功效，将其应用于制备改善学习记忆药物、保健食品和食品，具有一定的科学价值和经济效益，为通过饮食改善学习记忆提供一种新途径。
文档编号A61K38/02GK102028931SQ20091017740
公开日2011年4月27日 申请日期2009年9月29日 优先权日2009年9月29日
发明者李勇, 许雅君 申请人:李勇, 黑龙江省索康营养科技有限公司
技术领域：
本发明涉及一种乳清蛋白肽的一种新用途，具体来说指改善学习记忆的药物、保 健食品或食品的用途。属医药和食品保健领域。
背景技术：
生物活性肽是指具有特殊生理功能的肽类物质。1902年伦敦大学医学院的 Bayliss和Martling从动物的胃肠中发现了一种能引起胰腺分泌活动的物质，称为分泌 素，这是人类第一次发现生物活性肽类物质。此后，伴随着生物化学和分子生物学技术的飞 速发展，肽的研究取得了惊人的进展，已成为目前研究的新热点。
肽与蛋白质都是氨基酸以酰胺键互相连接在一起形成的化合物，不同的是肽的氨 基酸聚合度小，蛋白质的聚合度大。在结构上，肽处于氨基酸和蛋白质的中间位置，但它具 有氨基酸与蛋白质所不能替代的功能。长期以来，人们仅仅把食物蛋白质当作一种营养丰 富的成分，认为蛋白质只有水解成游离氨基酸后才能被吸收。但是近年来的研究发现，蛋白 质经消化道酶促水解后，主要以10个或10个以下氨基酸组成的寡肽形式被吸收。寡肽比单 个氨基酸的吸收更有效，并能直接参与蛋白质的合成，因此提高了机体对蛋白质的利用率。 在氨基酸运输系统功能出现障碍的情况下，摄入寡肽却能获得很好的吸收效果。生物体内 已发现几百种肽，是机体完成各种复杂的生理活性必不可少的参与者。
自然界中存在着大量的生物活性肽，它们在生物活动中起着非常重要的作用，具 有改善和提高矿物质吸收、抗氧化、抗菌、抗肿瘤、保护心血管、免疫调节、抗衰老等作用。应 用这些活性肽可以作为药物、疫苗以及保健品等。大量研究证明，当人体内缺乏一些调节生 理功能的肽时，会导致人体机能的改变。因此从营养学的角度出发，在食物结构调整以满足 人体必需氨基酸需要的同时，适当补充某些生物活性肽对增强防病、抗病能力以及延缓衰 老都具有深远意义。目前，开发和研究生物活性肽类食品在国际保健品行业中已成为一个 焦点。许多天然的生物活性肽具有改善和提高矿物质吸收的特性，它们有特异、安全和较高 的活性，这类生物制剂具有重要的应用价值。
人乳与动物乳被认为是最接近“完善”的食品，所含各种营养素及维生素、微量元 素等，种类齐全、配比合理，其营养价值是其他食品不能相比的。随着经济的发展与人民生 活水平的提高，势必对乳业与乳品业提出更高的要求。我国“八五”期间牛奶产量由原来的 475. 1万吨增至608. 0万吨，平均年递增9. 7% ；乳品由原来的31.21万吨增至42. 45万吨， 平均年递增8.3%。乳蛋白是生产乳制品(特别是奶酪)的重要原料；而蛋白酶是生产乳 品的重要手段。
乳清蛋白被誉为“蛋白之王”，属于干酪生产中的副产品，是利用现代生产工艺去 除酪蛋白(CN)后，分离出来的乳清中所含的蛋白质。其纯度高、消化吸收率高、氨基酸组成 合理、营养价值独特，广泛用于乳产品加工中。其主要包括α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、清 蛋白、免疫球蛋白和乳铁蛋白等，是公认的人体优质蛋白质补充剂之一。近年来，随着乳源性活性肽研究与产品开发的兴起，除酪蛋白外，乳清蛋白中也发现了具有潜在生物活性的 肽段，这为进一步提升乳清蛋白产品的营养功能，提高乳清蛋白产品的利用价值及附加产 值提供了新的思路和方法。许多研究表明，乳清蛋白经酶解等得到了许多具有很高的生物 活性多肽，在体内和体外显示不同的功能，如抗高血压、降血糖、抗氧化、抗血栓、促进矿物 质吸收等。乳清蛋白酶解肽以其安全有效的诸多优点，逐渐得到人们的重视，如今已成为研 究开发的热点。但是，迄今为止，还没有乳清蛋白肽在改善学习记忆药品、保健食品以及食 品中应用的任何报道。发明内容
本发明的目的是，提供一种易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好且成本低的低分子 量乳清蛋白肽在制备改善学习记忆的药物、保健食品或食品中的用途，为通过饮食改善学 习记忆提供一种新途径。
其中所述的药物或保健食品为粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂、口服液。
其中所述的食品为淀粉制品、乳及乳制品、豆制品、烘焙制品。
其中所述的化妆品为乳液、膏霜、油剂、水剂、凝胶、气雾剂、面膜。
本发明是发现了现有物质一乳清蛋白肽具有改善学习记忆的功能，发明了乳清蛋 白肽作为制备改善学习记忆的药物、保健食品或食品的用途。动物实验发现补充乳清蛋白 肽能够改善实验小鼠的被动和主动回避条件反射能力，增强实验小鼠的空间学习和记忆能 力。具体实施方案
下面结合具体实施方案对本发明作进一步的说明，这些实例应被理解为仅是举例 说明，而非以任何方式限制本发明的范围。
实施例1 乳清蛋白肽对实验小鼠学习记忆能力的影响研究
一、材料与方法
1、材料
1. 1乳清蛋白肽(whey protein peptides,WPP)由北京中食海氏生物技术有限公 司提供。淡黄色粉末，分子量集中在ISO-IOOODa范围内的小分子肽混合物，纯度为79%。
1. 2实验动物=SPF级C57BL/6J近交系小鼠60只，雄性，初断乳，体重10 12g。 由北京大学医学部实验动物中心提供，(动物合格证号SCXKll-00-0004，实验动物使用许 可证号SYXK (京)2002-0002，实验动物生产许可证号SYXK (京)2002-0001)。动物饲养条 件SPF级动物室，温度范围22士2°C，相对湿度50% 60%，昼夜12h 1浊。饲料合格 证号京动许字O000)第015号(北京市科奥协力饲料有限公司)。
1. 3仪器DSM_2型Morris水迷宫系统(中国医学科学院药物研究所)、DT_200小 鼠跳台测试仪(成都泰盟科技有限公司)、SCS-2型程控小鼠穿梭箱(中国医学科学院药物 研究所)。
2、方法
2. 1动物分组将60只小鼠随机分为4组，即对照组和3个WPP干预组，每组15 只。在整个实验期间内，对照组给予普通饲料喂养，低、中、高WPP干预组分别给予WPP含量为0. 225%,0. 45%和1. 35%的饲料喂养。动物自由进食、饮水，连续喂养30天，期间记录 动物进食量和体重增长，计算食物利用率。
2. 2行为学实验
2. 2. 1 跳台实验(Step-down test)
动物连续喂养30天后，于第31天开始实验。
小鼠跳台反射箱大小为25cmX25XcmX40cm，由不透明有机玻璃分隔成6间，一 角放置作为动物逃避电击安全区的橡胶平台，箱底为不锈钢铜栅。实验时先将动物放入反 应箱内(台上、台下)适应环境:3min，然后将动物放置反应箱内的铜栅上，立即通以36V的 交流电，观察动物受到电击跳回平台，以及再次跳至铜栅上的情况。如此训练5min，仪器自 动记录每只鼠受电击的次数或称错误次数(EM)，以此作为学习成绩。24h后进行重复测 验，在底部铜栅通电的情况下，直接将动物置于平台上，记录各鼠第一次跳下平台的时间， 即停留潜伏期(st印-down latency, SDL)和各鼠!Bmin内的错误次数(EN2)以此作为记忆 成绩。停止实验5天后再进行一次重复实验，记录上述指标，作为记忆消退阶段的成绩。
2. 2. 2 穿梭箱实验(Shuttle test)
本实验在跳台实验完成后2天开始，整个实验期间动物均正常进食。
穿梭箱大小为30cmX IOcmX 20cm，顶部有蜂鸣音控制器，箱底部为可通电的不锈 钢格栅，间隔0. 5cm，箱底中央部有一高1. 2cm的挡板将箱底部分隔成左右两侧。将小鼠放 入穿梭箱内任何一侧，IOs后开始出现蜂鸣音，持续5s，蜂鸣音后给予电刺激(100v，0. 2mA, 50Hz，AC)，持续10s。小鼠在遭遇电击后即逃避，必须跑到对侧顶端，挡住光电管后才可中 断电击，此为被动回避反应，在每次电击前给予条件刺激(蜂鸣音)，反复强化后，小鼠在接 受条件刺激后即跳向对侧并挡住光电管而逃避电击，此为主动回避反应，连续训练4d，每天 10次。记录以下指标⑴主动回避时间，即试验中出现主动回避时间的总和；(2)电击次 数，即在10个循环中小鼠被电击到的次数；(3)电击时间，即动物被电击的累计时间。
2. 2. 3Morris /K迷宫实验(Morris Water Maze, MWM)
该实验于穿梭箱实验结束后2天开始进行，整个实验期间动物均正常进食。 Morris水迷宫由圆形水池(直径120cm，高50cm)、平台(直径10cm，高20cm)以及图象自 动采集和处理系统(摄像机、录像机、显示器和分析软件等)组成。实验时，人为将水池划 分为四个象限，平台随机置于第一象限并固定于水下1-1. 5cm，水温保持在21 士 1°C。
整个实验过程分为定位航行实验(place navigation test)和空间探索实验 (spatial probe test)两部分。(1)定位航行实验用于测量小鼠在水迷宫中的学习和记 忆能力，实验历时6d，每天训练4次。实验时分别从4个象限任选一入水点将动物面向池 壁放入水中，记录小鼠从入水到找到平台所需的时间(逃避潜伏期，escape latency)、游戏 路程和游泳速度。如果动物在60s内末找到平台，则将由实验者将其引导至平台并在平台 上停留10s，逃避潜伏期记为60s。(2)空间探索实验用于测量小鼠对平台空间位置的记 忆保持能力，方法为第7d撤去平台，将小鼠从平台所在象限的对侧任选一个入水点放入水 中，记录120s内小鼠在目标象限(平台所在象限)的停留时间及准确穿越平台所在位置的 次数。
2. 3统计分析方法
所有数据均用SPSS 16.0 for windows软件包处理。以单因素方差分析进行进行5差异显著性检验，以α =0.05为显著性标准。
二、结果
1.跳台实验结果
统计学检验结果显示，3个乳清肽干预组与对照组相比，训练后24h和第5d的平均 潜伏期和错误次数差异均无显著性。但从潜伏期变化趋势看，0. 45%和1. 35% WPP干预组 潜伏期时间下降幅度较对照组明显减小，且训练后第5天3个WPP干预组的平均潜伏期绝 对值均较对照组长，提示WPP干预组小鼠记忆消退速度较对照组减慢(表1)。
表IWPP对小鼠跳台潜伏期的影响
权利要求
1.乳清蛋白肽作为制备改善学习记忆药物、保健食品或食品的用途。
2.根据权利要求1所述的乳清蛋白肽作为制备改善学习记忆药物、保健食品或食品的 用途，其特征在于所述改善学习记忆药物和保健食品为粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂或 口服液。
3.根据权利要求1所述的乳清蛋白肽作为制备改善学习记忆药物、保健食品或食品的 用途，其特征在于所述改善学习记忆食品为淀粉制品、乳及乳制品、豆制品或烘焙制品。
全文摘要
本发明公开一种乳清蛋白肽作为制备改善学习记忆药物、保健食品或食品的用途。乳清蛋白肽具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特点，能够促进实验小鼠主动回避条件反射的建立，减缓被动回避条件反射记忆消退速度，同时改善实验小鼠的空间学习记忆能力，具有改善学习记忆的功效，将其应用于制备改善学习记忆药物、保健食品和食品，具有一定的科学价值和经济效益，为通过饮食改善学习记忆提供一种新途径。
文档编号A61K38/02GK102028931SQ20091017740
公开日2011年4月27日 申请日期2009年9月29日 优先权日2009年9月29日
发明者李勇, 许雅君 申请人:李勇, 黑龙江省索康营养科技有限公司
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