芍药苷抗炎新用途的制作方法
专利名称：芍药苷抗炎新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及芍药苷炎性因子的应用，具体涉及芍药苷在核因子NF-K B和细胞粘 附分子ICAM-I表达的抑制作用。
背景技术：
NF-KB是一种核因子，其通过与增强子序列特异性结合进而对多种细胞因子的表 达进行调控，在许多免疫和炎症反应的调节中起重要作用，目前被认为是各种炎症反应的 共同通路之一。各种组织细胞核内均存在不同的NF-K B基因位点，这些基因的异常表达会 介导严重的炎性损伤。TNF- α、LPS等多种因素可使NF- κ B活化，而其激活后可进一步刺激血管内皮细 胞和平滑肌细胞分泌ICAM、VCAM等多种粘附因子。其中，ICAM-I是一种可诱导的细胞表面 球蛋白，正常情况下表达很少或不表达，而激活的NF- κ B与相应的调节元件结合后，可促 使ICAM-I在许多类型细胞上的表达显著增多。大量表达ICAM-1，是白细胞聚集浸润并引起 一定部位组织损伤和炎症反应的关键。因此，NF-κ B及其下游调控基因ICAM-I可作为炎性损伤干预治疗的重要作用靶 点。研究药物对受损细胞中NF-K B及粘附分子表达的影响，对于病理生理过程中存在过度 炎症反应的疾病如关节炎、冠心病、动脉粥样硬化等的防治具有普遍意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是芍药苷对炎症反应过程中造成的炎性损伤的治疗作 用，主要是对核因子NF-κ B和细胞粘附分子ICAM-I的调节方面。所述药物可通过口服、经皮或静脉途径给药；所述药物以口服剂、注射剂及局部给 药制剂形式存在；所述口服剂包括胶囊剂、口服液、片剂、颗粒剂；所述注射剂包括注射液、 注射用冻干粉针剂型；局部给药制剂包括贴剂。为解决上述问题，本发明提供如下技术方案。本发明人通过系列实验证实了芍药苷具有抗炎作用，尤其对炎症反应中的核因子 NF- κ B和细胞粘附分子ICAM-I表达的抑制作用显著。本发明人采用了体外实验证实芍药苷可显著抑制经TNF-α处理的血管内皮细胞 中NF- κ B和ICAM-I的表达。其浓度为0. 5mg/ml时对NF- κ B表达的抑制作用最强，抑制 率平均为64. 5%,0. 25mg/ml时对ICAM-I表达的抑制作用最强，抑制率平均为74. 5%。本发明人采用了体外实验证实芍药苷可显著抑制经TNF-α处理的血管平滑肌细 胞中NF- κ B和ICAM-I的表达。浓度为0. 25mg/ml时对NF- κ B和ICAM-I表达的抑制作用 均最强，抑制率平均分别为69. 5%和Μ%。本发明人采用了体外实验证实芍药苷可显著抑制经LPS处理的单核巨噬细胞中 NF- κ B和ICAM-I的表达。浓度为0. 5mg/ml时对NF- κ B和ICAM-I表达的抑制作用均最 强，平均最大抑制率分别为72. 5%和70.5%。
本实验结果表明芍药苷可以通过抑制血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和单核巨噬 细胞中NF-K B的表达活化以及由NF-K B调控的ICAM-I的表达，进而减少多种炎性因子如 IL-U IL-6、PDGF、TF、Fas等的产生和释放以及炎性细胞的聚集和粘附，该作用可以用于炎 症反应中造成的炎性损伤的防治，尤其对于心血管疾病的防治有重要作用。
具体实施例方式为了便于理解芍药苷的抗炎效果，本发明进行了如下药效学实验实施例1 芍药苷体外对TNF- α诱导的血管内皮细胞ECV-304损伤的保护作用将血管内皮细胞ECV304(购自北京协和细胞资源中心)按常规方法复苏，加适量 含10%胎牛血清的DMEM培养液，于37°C、5% CO2恒温培养箱中常规培养。然后取生长状 态良好的细胞消化并制成单细胞悬液，以5X IO4个/ml的细胞密度接种于2块96孔板中， 每孔200 μ 1，待细胞长满孔底后用于下一步实验。实验共分为8组，分别为细胞对照组、 TNF- α对照组及芍药苷不同浓度组，每组5个复孔。芍药苷浓度从0. 5mg/ml设起，用DMEM 依次2倍比稀释成6个浓度，分别为0. 5,0. 25,0. 125,0. 0625,0. 0313,0. 0156mg/ml。各给药 组细胞先加入相应浓度芍药苷作用池，之后除细胞对照组外，其余各组均分别加入200U/ mL的TNF- α刺激他(两块96孔培养板处理均相同)。作用完毕后，弃各孔培养液并清洗细胞，每孔加入100 μ 1戊二醛溶液固定IOmin ； 清洗细胞并用5%脱脂奶粉封闭池；之后一块96孔板每孔加入一定稀释度的兔抗人 NF-k B抗体50 μ 1，另一块每孔加入一定稀释度的鼠抗人ICAM-I抗体(均为Santa Cruz公 司产品)50μ 1，4°C过夜；次日清洗上述两块96孔板中细胞并于相应培养板的孔中分别加 入50 μ 1辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG和羊抗鼠IgG(均为北京中杉生物技术公司)， 37°C孵育Ih ；后清洗细胞，加入邻苯二胺显色，终止后于酶标仪读取λ 492■处吸光值，计算 不同浓度芍药苷对NF- κ B和ICAM-I表达的抑制率，实验进行两批。具体实验结果见表1、 2 表1.芍药苷对TNF- α诱导损伤的ECV-304细胞中NF- κ B表达的影响
权利要求
1.芍药苷抑制炎症反应的应用，其特征在于对核因子NF-K B和/或细胞粘附分子 ICAM-I表达的调解作用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的调节为对核因子NF-κ B和/或细胞 粘附分子ICAM-I表达的抑制作用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的抑制为调节血管内皮细胞、血管平 滑肌细胞、单核巨噬细胞中NF- κ B的表达活化，和/或由NF- κ B调控的ICAM-I的表达。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的表达为减少IL-1、IL-6、PDGF,TF、 Fas炎性因子中的一种或多种的产生和释放，和/或炎性细胞的聚集和粘附的炎症反应。
5.根据权利要求4述的应用，其特征在于所述的应用为预防和/或治疗上述炎症反应 导致的炎性损伤性疾病。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述的炎性损伤的疾病为类风湿关节炎、 多发性硬化症、哮喘、冠心病、动脉硬化。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物是由有效量的芍药苷和药学上可 接受的载体组成，载体包括口服制剂载体、注射制剂载体、局部给药制剂载体。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述药物以口服剂、注射剂及局部给药制 剂形式存在，口服剂包括胶囊剂、口服液、丸剂、片剂、颗粒剂；所述注射剂包括注射液、注射 用冻干粉针剂；局部给药制剂包括霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂。
全文摘要
本发明涉及一种芍药苷在抑制炎性因子的新应用。本发明的试验证明，该化合物具有显著防治炎性损伤疾病的作用，尤其具有较好的防治炎性损伤导致的疾病，包括关节炎、冠心病、动脉硬化等。
文档编号A61P25/28GK102038699SQ20091018084
公开日2011年5月4日 申请日期2009年10月19日 优先权日2009年10月19日
发明者周亚伟 申请人:周亚伟
技术领域：
本发明涉及芍药苷炎性因子的应用，具体涉及芍药苷在核因子NF-K B和细胞粘 附分子ICAM-I表达的抑制作用。
背景技术：
NF-KB是一种核因子，其通过与增强子序列特异性结合进而对多种细胞因子的表 达进行调控，在许多免疫和炎症反应的调节中起重要作用，目前被认为是各种炎症反应的 共同通路之一。各种组织细胞核内均存在不同的NF-K B基因位点，这些基因的异常表达会 介导严重的炎性损伤。TNF- α、LPS等多种因素可使NF- κ B活化，而其激活后可进一步刺激血管内皮细 胞和平滑肌细胞分泌ICAM、VCAM等多种粘附因子。其中，ICAM-I是一种可诱导的细胞表面 球蛋白，正常情况下表达很少或不表达，而激活的NF- κ B与相应的调节元件结合后，可促 使ICAM-I在许多类型细胞上的表达显著增多。大量表达ICAM-1，是白细胞聚集浸润并引起 一定部位组织损伤和炎症反应的关键。因此，NF-κ B及其下游调控基因ICAM-I可作为炎性损伤干预治疗的重要作用靶 点。研究药物对受损细胞中NF-K B及粘附分子表达的影响，对于病理生理过程中存在过度 炎症反应的疾病如关节炎、冠心病、动脉粥样硬化等的防治具有普遍意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是芍药苷对炎症反应过程中造成的炎性损伤的治疗作 用，主要是对核因子NF-κ B和细胞粘附分子ICAM-I的调节方面。所述药物可通过口服、经皮或静脉途径给药；所述药物以口服剂、注射剂及局部给 药制剂形式存在；所述口服剂包括胶囊剂、口服液、片剂、颗粒剂；所述注射剂包括注射液、 注射用冻干粉针剂型；局部给药制剂包括贴剂。为解决上述问题，本发明提供如下技术方案。本发明人通过系列实验证实了芍药苷具有抗炎作用，尤其对炎症反应中的核因子 NF- κ B和细胞粘附分子ICAM-I表达的抑制作用显著。本发明人采用了体外实验证实芍药苷可显著抑制经TNF-α处理的血管内皮细胞 中NF- κ B和ICAM-I的表达。其浓度为0. 5mg/ml时对NF- κ B表达的抑制作用最强，抑制 率平均为64. 5%,0. 25mg/ml时对ICAM-I表达的抑制作用最强，抑制率平均为74. 5%。本发明人采用了体外实验证实芍药苷可显著抑制经TNF-α处理的血管平滑肌细 胞中NF- κ B和ICAM-I的表达。浓度为0. 25mg/ml时对NF- κ B和ICAM-I表达的抑制作用 均最强，抑制率平均分别为69. 5%和Μ%。本发明人采用了体外实验证实芍药苷可显著抑制经LPS处理的单核巨噬细胞中 NF- κ B和ICAM-I的表达。浓度为0. 5mg/ml时对NF- κ B和ICAM-I表达的抑制作用均最 强，平均最大抑制率分别为72. 5%和70.5%。
本实验结果表明芍药苷可以通过抑制血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和单核巨噬 细胞中NF-K B的表达活化以及由NF-K B调控的ICAM-I的表达，进而减少多种炎性因子如 IL-U IL-6、PDGF、TF、Fas等的产生和释放以及炎性细胞的聚集和粘附，该作用可以用于炎 症反应中造成的炎性损伤的防治，尤其对于心血管疾病的防治有重要作用。
具体实施例方式为了便于理解芍药苷的抗炎效果，本发明进行了如下药效学实验实施例1 芍药苷体外对TNF- α诱导的血管内皮细胞ECV-304损伤的保护作用将血管内皮细胞ECV304(购自北京协和细胞资源中心)按常规方法复苏，加适量 含10%胎牛血清的DMEM培养液，于37°C、5% CO2恒温培养箱中常规培养。然后取生长状 态良好的细胞消化并制成单细胞悬液，以5X IO4个/ml的细胞密度接种于2块96孔板中， 每孔200 μ 1，待细胞长满孔底后用于下一步实验。实验共分为8组，分别为细胞对照组、 TNF- α对照组及芍药苷不同浓度组，每组5个复孔。芍药苷浓度从0. 5mg/ml设起，用DMEM 依次2倍比稀释成6个浓度，分别为0. 5,0. 25,0. 125,0. 0625,0. 0313,0. 0156mg/ml。各给药 组细胞先加入相应浓度芍药苷作用池，之后除细胞对照组外，其余各组均分别加入200U/ mL的TNF- α刺激他(两块96孔培养板处理均相同)。作用完毕后，弃各孔培养液并清洗细胞，每孔加入100 μ 1戊二醛溶液固定IOmin ； 清洗细胞并用5%脱脂奶粉封闭池；之后一块96孔板每孔加入一定稀释度的兔抗人 NF-k B抗体50 μ 1，另一块每孔加入一定稀释度的鼠抗人ICAM-I抗体(均为Santa Cruz公 司产品)50μ 1，4°C过夜；次日清洗上述两块96孔板中细胞并于相应培养板的孔中分别加 入50 μ 1辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG和羊抗鼠IgG(均为北京中杉生物技术公司)， 37°C孵育Ih ；后清洗细胞，加入邻苯二胺显色，终止后于酶标仪读取λ 492■处吸光值，计算 不同浓度芍药苷对NF- κ B和ICAM-I表达的抑制率，实验进行两批。具体实验结果见表1、 2 表1.芍药苷对TNF- α诱导损伤的ECV-304细胞中NF- κ B表达的影响
权利要求
1.芍药苷抑制炎症反应的应用，其特征在于对核因子NF-K B和/或细胞粘附分子 ICAM-I表达的调解作用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的调节为对核因子NF-κ B和/或细胞 粘附分子ICAM-I表达的抑制作用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的抑制为调节血管内皮细胞、血管平 滑肌细胞、单核巨噬细胞中NF- κ B的表达活化，和/或由NF- κ B调控的ICAM-I的表达。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的表达为减少IL-1、IL-6、PDGF,TF、 Fas炎性因子中的一种或多种的产生和释放，和/或炎性细胞的聚集和粘附的炎症反应。
5.根据权利要求4述的应用，其特征在于所述的应用为预防和/或治疗上述炎症反应 导致的炎性损伤性疾病。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述的炎性损伤的疾病为类风湿关节炎、 多发性硬化症、哮喘、冠心病、动脉硬化。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物是由有效量的芍药苷和药学上可 接受的载体组成，载体包括口服制剂载体、注射制剂载体、局部给药制剂载体。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述药物以口服剂、注射剂及局部给药制 剂形式存在，口服剂包括胶囊剂、口服液、丸剂、片剂、颗粒剂；所述注射剂包括注射液、注射 用冻干粉针剂；局部给药制剂包括霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂。
全文摘要
本发明涉及一种芍药苷在抑制炎性因子的新应用。本发明的试验证明，该化合物具有显著防治炎性损伤疾病的作用，尤其具有较好的防治炎性损伤导致的疾病，包括关节炎、冠心病、动脉硬化等。
文档编号A61P25/28GK102038699SQ20091018084
公开日2011年5月4日 申请日期2009年10月19日 优先权日2009年10月19日
发明者周亚伟 申请人:周亚伟
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