一种鸡新城疫-传染性法氏囊病浓缩冻干卵黄抗体复合制剂及其制备工艺的制作方法

专利名称：：一种鸡新城疫-传染性法氏囊病浓缩冻干卵黄抗体复合制剂及其制备工艺的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种抗体复合制剂，具体涉及一种鸡新城疫-传染性法氏囊病浓縮冻干卵黄抗体复合制剂，及其制备方法。
背景技术：
：鸡新城疫-传染性法氏囊病是养鸡业的大敌。目前应用于防治鸡新城疫-传染性法氏囊病的抗感染药品有抗生素、化学合成药品、中药及其制剂、高免卵黄抗体和其他抗感染生物制剂。(—)抗生素这类抗感染药物主要是由细菌、真菌、放线菌等微生物所产生的代谢物，以及人工仿制合成或半合成的抗生物质。它们对病原微生物的抑制或杀灭作用强，抗菌谱广，疗效好，主要是辅助治疗鸡新城疫-传染性法氏囊病的细菌性继发感染。但是，它们药残大，可以通过食源性污染，引起人类疾病。[OOOS](二)化学合成药品这类抗感染药物主要包括磺胺类、喹诺酮类、呋喃类等。它们抗菌谱广，性质稳定，疗效确切，使用简便，也是用于辅助治疗鸡新城疫-传染性法氏囊病的细菌性继发感染，但是具有毒副作用大，易残留于体内，造成肝、肾等组织不可逆的损害(见中国药典)；还有病毒灵、金刚烷胺等，虽然可以治疗鸡新城疫-传染性法氏囊病，但是造成了食源性药残，影响了此类药物在人医中的应用。以上两类药物除了上述缺点外，它们共同的弊端还有干扰机体正常菌群，破坏机体微生态平衡，导致微生物菌群失调移位，造成二重感染和其它病变；再者，大剂量反复使用都可以导致耐药性，降低治疗效果，使其抗感染的敏感率下降至10-15%，并诱生出高致病性菌株。(三)中药及其制剂中药属天然药物，具有无害优势的特点，扶正祛邪、整体调整和无耐药性，是抗菌素和化学合成药品无法比拟的，可以有效地治疗鸡新城疫-传染性法氏囊病。但是，目前市场上有许多抗感染的中药制剂如板兰根冲剂、穿心莲注射液等。虽然这些药物抗菌谱广，但存在药效慢、作用弱、用量大、质量难以稳定以至使用不方便等因素。(四)疫苗预防鸡新城疫、传染性法氏囊病虽然可以进行疫苗预防，但是在紧急感染的情况下疫苗就显得无济于事了。(五)高免卵黄抗体制剂这类抗感染药物来自特制的鸡卵黄抗体。它们作用速度快，疗效准确，特异性强，但由于只针对鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒，对混合感染和继发感染无效，有时不得不用上述三类药物辅助治疗；其次，目前多数卵黄抗体是直接制品即原始高免卵黄制品也称粗制卵黄抗体(比如养殖企业自己按姜艳芬，王亚萍，潘瑞等抗禽流感、新城疫、法氏囊三联高免卵黄抗体的研制及应用，甘肃农业大学学报，2004，39<1>，p57，方法制备)，内含许多非药物成分比如卵黄中的脂肪和微粒蛋白，它们影响卵黄抗体的吸收，有的还带有别的疾病传染源；再者，目前有个别卵黄抗体制剂即使采用了提取冻干工艺，精制成了卵黄抗体提取冻干制品(比如养殖企业自己按汪丽、周云录、胡晓苗、周学利等传染性法氏囊病，新城疫双联卵黄抗体冻干制剂的初步研制及应用效果，安微农业科学，1999，27<5>:p509，方法制备)，它们必须低温保存，在贮运和使用过程中很容易变性失活，失去医疗价值。因此，这些抗感染制剂在药品市场上难以操作而失去了商品价值的意义。(六)其他抗感染的生物因子制剂比如干扰素、细胞因子等，由于价格昂贵，很难被临床广泛接受，至于在鸡新城疫-传染性法氏囊病中更难推行。基于上述技术背景，本发明针对鸡新城疫-传染性法氏囊病提出一种卵黄抗体复合制剂，克服了现有技术中抗感染药品存在的诸多缺陷。
发明内容本发明的目的在于提出一种鸡新城疫-传染性法氏囊病卵黄抗体复合制剂，克服已有技术中的缺点，在降低成本和耐药性的前提下，有效提高了疫病的防治效果，而且不会对人产生食源性污染和药物残留。本发明的另一个目的还在于提供一种所述复合制剂的制备方法，进一步降低生产成本、提高生产效率。本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的提供一种鸡新城疫-传染性法氏囊病浓縮冻干卵黄抗体复合制剂，它含有以下重量份数的组分(1)抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体10.0-99.5;(2)中药多糖0.5-20.0;所述的中药多糖提取自下列重量份的中药中的一种或两种以上的组合物板蓝根10-50、生地黄50-100、丹参50-80、甘草30-50。所述复合制剂还可以进一步包含常规蛋白保护剂1.0-10.0重量份。所述的蛋白保护剂，按重量份计，优选白蛋白1.0-6.0或蔗糖1.0-3.0中的一种或两种的混合物。所述的抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体可以是现有技术中经过鸡新城疫-传染性法氏囊病疫苗多次强化免疫的蛋鸡生产的高免鸡蛋中提纯制备的现有产品，提纯制备方法可以是现有技术中任何可实现提纯目的的方法。为了进一步提高卵黄抗体的收率、降低生产成本，本发明的抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体优选按照以下方法制得(l)按照常规方法制取抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒高免鸡蛋，可以包括以下步骤(l.l)无特定病原体蛋鸡在洁净养殖场隔离饲养；(1.2)对蛋鸡进行3次免疫，每次给每只鸡注射鸡新城疫-传染性法氏囊病疫苗，注射量分别为0.5ml、1.5ml禾P2.0ml，每次间隔一周时间；(1.3)完成第3次免疫21天后，收集鸡蛋，对卵黄中的卵黄抗体进行免疫学检测，鸡新城疫的卵黄抗体血凝抑制效价达到1:512以上、同时传染性法氏囊病病毒的卵黄抗体琼脂扩散效价达到1:32以上的鸡蛋为鸡新城疫、传染性法氏囊病病毒高免鸡蛋，收集贮存在16t:条件下备用；如果检测上述指标不达标，可以重新进行第3次免疫，直至检测合格。(2)抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体的提纯(2.1)将步骤(1)得到的抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒的高免鸡蛋进行消毒，打碎鸡蛋并分离出卵黄；(2.2)在(2.1)步分离出的卵黄中加入卵黄重量11倍的无菌去离子水，并调整pH值至6.00，然后搅拌5分钟，在4t:的条件下静置48小时之后，通过虹吸抽取一次上清；后再将沉淀物用无菌去离子水稀释8倍，并调整pH值至6.0，然后搅拌5分钟，在fC的条件下静置24小时之后，通过虹吸抽取二次上清；合并两次上清，经吸附过滤除去内毒素，获得除毒上清液备用；其中，所述pH值的调整可以使用0.1NHCl或0.1NNaOH完成；所述吸附过滤可以使用活性炭完成，也可以用已知的任何方法完成；(2.3)将(2.2)步得到的除毒上清液除去上清中的卵黄微粒等杂质；再将滤过液除去低分子杂质，并将截留物浓縮为稠液，即为抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体；其中，所述除去上清中的卵黄微粒等杂质可以通过经1000KD滤膜过滤或经10000转/分离心10分钟完成；所述滤过液除去低分子杂质可以通过经30100KD滤膜过滤完成。所述的多糖的提取方法可以是任意现有方法，优选按照以下方法提取得到a.将所述的中药原料切碎、洗净后，用冷水浸泡2小时至药心充分浸透，再加入原料重量12倍的水，加热至沸腾后在9(TC的情况下，通过热回流浓縮工艺煎煮180分钟同时浓縮得到浓縮药液；b.将步骤a制备的浓縮药液通过10000转/分离心20分钟，弃去沉淀物，获得上清液并经负压浓縮，使其形成干物质为25%的浓縮药液；c.将步骤b得到的浓縮药液加4-8倍体积量95X的乙醇，静置过夜，弃去乙醇上清液，沉淀物除去乙醇，然后加水溶解并通过100KD滤膜过滤，除去杂蛋白、内毒素等大分子杂质，收集滤过液再通过1KD纳滤膜过滤，除去有机小分子和无机分子及离子等杂质，被截留的物质稀释后逆向水流透析24小时；取出浓縮液，加5倍体积量99%乙醇沉淀，搅拌，静置过夜，3000-5000转/分离心20分钟；沉淀物除去乙醇并经过喷雾干燥，即得到本发明所使用的中药多糖。本发明还提供一种所述的复合制剂的制备方法，包括以下步骤1)按照常规方法制取抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒高免鸡蛋；2)将步骤1)得到的抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒的高免鸡蛋进行消毒，打碎鸡蛋并分离出卵黄，然后在其中加入卵黄重量ll倍的无菌去离子水，并调整pH值至6.00，然后搅拌5分钟，在4t:的条件下静置48小时之后，通过虹吸抽取一次上清；后再将沉淀物用无菌去离子水稀释8倍，并调整pH值至6.0，然后搅拌5分钟，在fC的条件下静置24小时之后，通过虹吸抽取二次上清；合并两次上清，经吸附过滤除去内毒素，获得除毒上清液，过滤除去上清中的卵黄微粒等杂质，再将滤过液除去低分子杂质，并将截留物通过超滤浓縮为稠液，获得抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体；3)将步骤2)得到的抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体、提取自所述中药的中药多糖按照所述的重量份比例混合溶于无菌去离子水中，使每毫升溶液中鸡新城疫的卵黄抗体血凝抑制效价21:2048，传染性法氏囊病病毒的卵黄抗体琼脂扩散效价21:512;4)将步骤3)得到的溶液分装于西林瓶进行常规冷冻干燥，并通过Co6°照射杀灭微生物，即得到本发明所述的鸡新城疫-传染性法氏囊病浓縮冻干卵黄抗体复合制剂。其中，步骤2)所述的pH值的调整优选使用0.1NHC1或O.lNNaOH完成。步骤2)所述的吸附过滤优选使用活性炭完成。步骤2)所述的除去上清中的卵黄微粒等杂质优选经1000KD滤膜过滤或经10000转/分离心10分钟完成；所述滤过液除去低分子杂质优选经30100KD滤膜过滤完成。步骤4)所述的冷冻干燥优选将溶液分装于西林瓶后置于真空冷冻干燥机中，预冷至-4(TC，然后在-4(TC下冷冻干燥2-8小时，而后每小时升温3t:左右，经12-18小时的真空干燥升温至25t:，然后加盖、密封，在25t:环境中保持3-5小时。现有技术在卵黄抗体提纯方面，分为卵黄抗体的分离纯化、提取纯化两个步骤。第一步卵黄抗体分离纯化上，有聚乙二醇(PEG)法、硫酸葡聚糖(DS)法、氯仿提法、天然胶如卡拉胶(CAR)和黄原胶(XAN)法、辛酸(CA)法、水稀释(WD)法、超临界气体提取(SFE)法等；第二步卵黄抗体提取纯化上，有超滤法、硫酸铵沉淀法、硫酸钠沉淀法、聚乙二醇(PEG)沉淀法、冷乙醇两步沉淀法、联合沉淀法等。综合上述两步作为生产绿色食品的药品来看，水稀释(WD)法联合超滤法是最有价值卵黄抗体提纯方法，因为该联合方法不存在任何外源污染。但是，由于在大批量生产中，需要靠重力自然沉淀卵黄微粒达到回收抗体上清目的，而现有技术的水稀释(WD)法在短时间内得不到足量的抗体上清液，因此影响了抗体的回收率。本发明从生产实际出发，对现有的水稀释(WD)法联合超滤法的卵黄抗体提纯技术做了进一步改进，提高了卵黄抗体回收率，进而提出了上述复合制剂的制备方法，在保证药品疗效的基础上达到了进一步提高生产率、降低成本的目的。与现有技术相比，本发明的复合制剂具有以下有益效果l)具有更为全面、有效的防治效果在中医免疫工程学的指导下，本发明采用现代免疫工程技术和现代中药制剂的顶尖理化工艺，将抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体的特异免疫性和多糖的非特异免疫性以及它们对机体自身抗病能力的调理作用相结合，复合制成冻干剂型。因此，本发明的复合制剂既可以抵抗原发病原——鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒感染，又可以激发自身免疫力和整体抗病的功能；既标本兼治，又快速持久。因此本发明的复合制剂相对现有技术中的单纯的抗体制剂和中药制剂，具有更全面、更有效、更迅速的防治效果，具体的防治效果可参见以下临床试验实验1.本发明鸡新城疫-传染性法氏囊病浓縮冻干卵黄抗体复合制剂的临床应用效果实验[OO54]受试病鸡情况受试病鸡是确诊患有新城疫-传染性法氏囊病病毒感染的14-84日龄的雏鸡和育成鸡，没有品种限制。疾病诊断标准以病鸡腺胃乳头出血、肌胃角质膜下出血、小肠有岛屿状出血坏死及法氏囊肿大、出血为主要特征，兼下列任意两项或多项症状1、病鸡鸡冠紫红发黑，体温升高，呼吸困难，甩头流鼻涕，精神不振，厌食，震颤，脱水，高度虚脱；2、歪脖点头，翅下垂腿麻痹，间歇性腹泻拉水状白色粪便或拉黄绿色稀便；3、全身浆膜出血，皮下及胸肌和腿肌出血，盲肠淋巴结出血，直肠出血，肾小管尿酸盐沉积。实验观察方法将11825只确诊鸡新城疫和鸡传染性法氏囊病混合感染的育雏鸡分为四组A组——本发明复合制剂治疗组，按本发明实施例1提供的方法制备抗体制剂；B组——卵黄抗体提取冻干制品治疗组，抗体制剂制备方法参见"汪丽、周云录、胡晓苗、周学利等传染性法氏囊病，新城疫双联卵黄抗体冻干制剂的初步研制及应用效果，安微农业科学，1999，27<5>:p509";C组——粗制卵黄抗体治疗组；抗体制剂制备方法参见"姜艳芬，王亚萍，潘瑞等抗禽流感、新城疫、法氏囊三联高免卵黄抗体的研制及应用，甘肃农业大学学报，2004，39<1>，p57";D组——未治疗组，不做任何处理。然后，A-C组分别使用相应制剂进行治疗，方法是每只病鸡每日肌注l羽份，连续用药3日。每羽份的鸡新城疫(ND)的卵黄抗体血凝抑制(HI)效价1:512、传染性法氏囊病病毒(IBDV)的卵黄抗体琼脂扩散(AGP)效价1:16。[OOSS]治愈评价标准1、发病雏鸡的法氏囊肿大出血病变消失、呈粉白色；2、腺胃乳头出血、肌胃角质膜下出血、小肠有岛屿状出血坏死、全身浆膜出血、盲肠淋巴结出血、直肠出血等出血病变消失；3、皮下及胸肌和腿肌出血，肾小管尿酸盐沉积病变消失；4、鸡冠光泽红亮，没有呼吸困难和甩头流鼻涕等症状，歪脖点头和翅下垂腿麻痹的神经症状消失，精神不振、厌食、间歇性腹泻、震颤、脱水症状消失。实验观察结果治疗结果显示，使用本发明制剂后对病鸡的治愈率为94.3%，而使用现有技术的卵黄抗体提取冻干制品对病鸡的治愈率为86.6%，现有技术的粗制卵黄抗体对病鸡的治愈率仅80.9%。通过应用生物统计学分别对三个实验组治愈率进行两两t检验，充分表明它们相互之间都存在极显著差异(u>2.58，p<0.01)，因此证明了本发明复合制剂的治疗效果优于现有的其它制剂。实验结果见表l。表1.本发明的复合制剂与现有技术相比的临床应用效果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注表中"""均表示与同指标的其他组数据比较具有高度显著性差异。2)抗体得到有效保护，促进药效稳定发挥在现代分子生物学、现代分子免疫学和中医学相结合的基础上，利用分子间氢键结构理论，把抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体和多糖等成分混合后经过真空冷冻干燥，使多糖等成分通过氢键在抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体外围形成多维网络空间氢键结构假性水化膜，从而研制成了一种鸡新城疫-传染性法氏囊病浓縮冻干卵黄抗体复合制剂。多糖等成分是富含羟基的一类物质，它们相互间可以构建多维网络空间氢键结构，在抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体表面形成假性水化膜。它的存在提高了抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体抵抗高温、紫外线等诱导变性，直接保护了抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体分子的外表结构、构象与功能，因此本发明的复合制剂中的卵黄抗体不易失活，能够更加充分有效地发挥抗感染功效。具体效果参见以下实验实验2.本发明鸡新城疫-传染性法氏囊病浓縮冻干卵黄抗体复合制剂的耐热存储效果实验为了鉴定本发明制剂的耐热特性我们做了本实验。将本发明实施例1的制剂(A)和现有技术中的卵黄抗体提取冻干制品(B)、粗制卵黄抗体(C)，置于37t:环境中，分别保存1周、2周、3周、l月、12月、24月、36月、48月后，用ND-HI和IBDV-AGP测定法，分别测定鸡新城疫(ND)的卵黄抗体血凝抑制(HI)效价、传染性法氏囊病病毒(IBDV)的卵黄抗体琼脂扩散(AGP)效价，结果见表2、3。表2.每羽份不同制剂的鸡新城疫的卵黄抗体血凝抑制(HI)效价的变化<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表3.每羽份不同制剂的传染性法氏囊病病毒的卵黄抗体琼脂扩散(AGP)效价的变化<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由上两表得知，本发明制剂有很强的抗热性能，在37t:的环境中保存36个月时本类产品每羽份的鸡新城疫(ND)的卵黄抗体血凝抑制(HI)效价仍为1:512、传染性法氏囊病病毒(IBDV)的卵黄抗体琼脂扩散(AGP)效价仍为1:16，为合格产品，而实验中使用的现有技术中的卵黄抗体提取冻干制品在此环境中只能存储12个月，粗制卵黄抗体也只能存储3周。所以，本发明的制剂具有抗热存储、方便运输和使用的优点，克服了目前别的同类产品在的存储、运输和使用方面的不足。3)不产生耐药、不会造成污染、使用成本低由于本发明的复合制剂中不含有抗生素或化学合成药物，因此不会使鸡产生耐药性，也不会对人产生药残污染；而相对于细胞因子、干扰素等制剂，本发明的复合制剂具有成本低、使用方便等多种优势。4)本发明的制备方法在保证复合制剂的治疗效果的前提下，能够进一步降低生产成本、提高生产效率。本发明的制备方法中，采用了新的卵黄抗体提纯工艺，即改进了现有技术中的水稀释(WD)法联合超滤法。现有技术用无菌去离子水将高免卵黄液稀释710倍，并用0.1NHCl或0.1NNaOH溶液调整pH值至5.2，在4°C的条件下静置6小时；而本发明方法用无菌去离子水将高免卵黄液稀释11倍，并用O.lNHCl或O.INNaOH溶液调整pH值至6.00，在4t:的条件下静置48小时。实践证明，在大批量生产中靠重力自然沉淀情况下，同一环境里前者抗体得率比后者少25-35%。因此，本发明的制备方法能够在保证复合制剂的治疗效果的前提下，能够进一步降低生产成本、提高生产效率。具体实施例方式下面通过具体实施例来进一步说明本发明的内容。实施例1.多味中药多糖型鸡新城疫-传染性法氏囊病浓縮冻干卵黄抗体复合制剂1.成分抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体99.5公斤；中药多糖0.5公斤；所述中药多糖提取自以下重量份的中药材组合物板蓝根10、生地黄50、丹参50、甘草30。2.制备(1)、制备抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒的高免鸡蛋。(l.l)无特定病原体蛋鸡在洁净养殖场隔离饲养；(1.2)对蛋鸡进行3次免疫，每次给每只鸡注射鸡新城疫-传染性法氏囊病疫苗，注射量分别为0.5ml、1.5ml禾P2.0ml，每次间隔一周时间；(1.3)完成第3次免疫21天后，收集鸡蛋，对卵黄中的卵黄抗体进行免疫学检测，鸡新城疫的卵黄抗体血凝抑制效价达到1:512以上、同时传染性法氏囊病病毒的卵黄抗体琼脂扩散效价达到1:32以上的鸡蛋为鸡新城疫、传染性法氏囊病病毒高免鸡蛋，收集贮存在16t:条件下备用；如果检测上述指标不达标，可以重新进行第3次免疫，直至检测合格。(2)抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体的提纯(2.1)将步骤(1)得到的抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒的高免鸡蛋进行消毒，打碎鸡蛋并分离出卵黄；(2.2)在(2.1)步分离出的卵黄中加入卵黄重量11倍的无菌去离子水，并使用0.1NHCl或0.1NNaOH调整pH值至6.00，然后搅拌5分钟，在4°C的条件下静置48小时之后，通过虹吸抽取一次上清；后再将沉淀物用无菌去离子水稀释8倍，并使用0.1NHC1或0.1NNaOH调整pH值至6.0，然后搅拌5分钟，在4°C的条件下静置24小时之后，通过虹吸抽取二次上清；合并两次上清，经活性炭吸附过滤除去内毒素，获得除毒上清液备用；(2.3)将(2.2)步得到的除毒上清液经1000KD滤膜过滤或经10000转/分离心10分钟除去上清中的卵黄微粒等杂质；再将滤过液经30100KD滤膜过滤除去低分子杂质，并将截留物浓縮为稠液，即为抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体；(3)制备多糖(3.1)将板蓝根、生地黄、丹参和甘草按照板蓝根10份、生地黄50份、丹参50份、甘草30份的重量份取料、切碎、洗净后混合，用冷水浸泡2小时至药心充分浸透，再加入原料重量的12倍的水，加热至沸腾后在9(TC的情况下，在热回流浓縮工艺下煎煮180分钟同时浓縮得到浓縮药液。(3.2)将步骤(3.1)制备的浓縮药液通过10000转/分离心20分钟，弃去沉淀物，获得上清液并经负压浓縮，使其形成干物质为25%的浓縮药液；(3.3)将步骤(3.2)得到的浓縮药液加4-8倍体积量95%的乙醇，静置过夜，弃去乙醇上清液，沉淀物除去乙醇，然后加水溶解并通过100KD滤膜过滤，除去杂蛋白、内毒素等大分子杂质，收集滤过液再通过1KD纳滤膜过滤，除去有机小分子和无机分子及离子等杂质，被截留的物质稀释后逆向水流透析24小时；取出浓縮液，加5倍体积量99%乙醇沉淀，搅拌，静置过夜，3000-5000转/分离心20分钟；沉淀物除去乙醇并经过喷雾干燥，即得到本发明所使用的中药多糖。(4)多味中药多糖型鸡新城疫-传染性法氏囊病浓縮冻干卵黄抗体复合制剂的合成将99.5公斤步骤(2)制备的卵黄抗体和0.5公斤步骤(3)制备的多糖混合，溶于无菌去离子水中，使每毫升溶液中鸡新城疫(ND)的卵黄抗体血凝抑制(HI)效价为21:2048，传染性法氏囊病病毒(IBDV)的卵黄抗体琼脂扩散(AGP)效价为21:512，然后分装于西林瓶，置于真空冷冻干燥机中干燥。真空冷冻条件1、预冷至-4(TC;2、在-40"下冷冻干燥2-8小时，而后每小时升温3"左右，经12-18小时的真空干燥至25°C;3、加盖，密封，在25t:环境中保持3-5小时。最后经Co6°照射杀灭微生物，即为成品。3.质量标准性状本品为淡黄色，呈较致密的团块。无菌检验按《中国兽药典》进行，应无菌生长。支原体检验按《中国兽药典》进行，应无支原体生长。外源病毒检验按《中国兽药典》进行，应符合规定。安全检验用14日龄SPF鸡5只，各肌肉注射10羽份，观察14天，应全部健活，注射部位没有炎性反应。效力检验按下列方法行进l.IBDV中和指数测定按瓶签注明羽份，用生理盐水稀释至l羽份/ml，按《中国兽药典》附注中和试验固定抗体稀释病毒法测定抗体效价，中和指数应为105.0。2.对雏鸡保护力测定用21日龄SPF雏鸡30只，其中10只，每只肌肉注射1羽份，另20只做对照，隔离饲养。24小时，取全部被动免疫雏鸡连同对照鸡10只，每只点眼接种IBD强毒TL株(稀释30-60倍)，96小时记录死亡结果，攻毒对照组雏鸡死亡率应在80%以上，被动免疫组雏鸡保护率应在90%以上，健康对照组10只法氏囊无任何变化。3.对感染雏鸡治愈力测定用21日龄SPF雏鸡90只，30只留作阴性对照，其余60只每只点眼接种IBD强毒TL株(稀释30-60倍)，感染12小时后，其中30只，每只肌肉注射本品1羽份进行被动免疫治疗，每日1次，连续3日，另30只做为阳性对照，隔离饲养。治疗后72小时，观察并记录各组死亡结果，攻毒阳性对照组死亡率应在80%以上，被动免疫治疗组治愈力应在90%以上，健康阴性对照组30只法氏囊无任何变化。4.取3-6周龄的健康易感鸡30只，随机分成3组，每组10只。第1组为健康对照组，不注射任何药物，单独隔离饲养。第2、3组每只鸡分别肌肉注射ND北京强毒株105ELD5。。24小时后，第2组每只肌肉注射本品1羽份进行被动免疫治疗；第3组注射生理盐水。观测每组发病、死亡情况至第14日。判定结果第l组试验期间鸡应全部健活。第3组为攻毒对照组，应于攻毒后24-48小时发病，48小时后开始死亡，72小时全部发病，14日内全部死亡。第2组为早期感染治疗组，注射本制剂后24-48小时开始恢复正常，观测结束至少存活9只，判为合格。5.ND-HI和IBDV-AGP测定鸡新城疫(ND)的卵黄抗体血凝抑制(HI)效价应为21:512，传染性法氏囊病病毒(IBDV)的卵黄抗体琼脂扩散(AGP)效价应为21:16。作用和用途用于早期紧急预防和治疗鸡新城疫、传染性法氏囊病。用法和用量1、预防用量25日龄以下的每只l羽份，25-35日龄1.5羽份，35-45日龄2羽份，45日龄以上2.5-4羽份。必要时可重复注射2-3次。2、治疗剂量35日龄以下每只2.0羽份，35日龄以上每只2.5-3.0羽份；病情严重时，可加倍用量，也可1日1次，连用2-3日。注意事项1.用本品被动免疫后，5天内不得进行鸡新城疫弱毒活疫苗和鸡传染性法氏囊病活疫苗的免疫。2.本品切勿高温加热使用，用生理盐水稀释后立即使用。3.本品口服无效。4.本品可与兽用抗生素混合注射。贮存与有效期2-『C或室温保存；有效期36个月。实施例2.三味中药多糖型鸡新城疫-传染性法氏囊病浓縮冻干卵黄抗体复合制剂l.成分抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体65公斤；中药多糖6公斤；蔗糖10公斤；2.制备卵黄抗体和多糖的制备方法同实施例1，只是多糖的提取来源变为以下重量份的中药原料板蓝根10份、生地黄20份、甘草10份；复合制剂的合成过程和方法同实施例1，只是在合成原料变为抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体65公斤、多糖6公斤和蔗糖10公斤。3.质量标准同实施例l。实施例3.两味中药多糖型鸡新城疫-传染性法氏囊病浓縮冻干卵黄抗体复合制剂l.成分抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体40公斤；中药多糖20公斤；白蛋白6公斤；2.制备卵黄抗体和多糖的制备方法同实施例1，只是多糖的提取来源变为以下重量份的中药原料甘草10份、丹参30份；复合制剂的合成过程和方法同实施例1，只是在合成原料变为抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体40公斤、多糖20公斤和白蛋白6公斤。3.质量标准同实施例l。实施例4.单味中药多糖型鸡新城疫-传染性法氏囊病浓縮冻干卵黄抗体复合制剂l.成分抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体10公斤；中药多糖5公斤；白蛋白l公斤；蔗糖l公斤；2.制备卵黄抗体和多糖的制备方法同实施例1，只是多糖的提取来源变为生地黄；复合制剂的合成过程和方法同实施例1，只是在合成原料变为抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体10公斤、多糖5公斤、白蛋白1公斤和蔗糖1公斤。3.质量标准同实施例l。权利要求一种鸡新城疫-传染性法氏囊病浓缩冻干卵黄抗体复合制剂，其特征在于，它含有以下重量份数的组分(1)抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体10.0-99.5；(2)中药多糖0.5-20.0；所述的中药多糖提取自下列重量份的中药中的一种或两种以上的组合物板蓝根10-50、生地黄50-100、丹参50-80、甘草30-50。2.权利要求1所述的复合制剂，其特征在于进一步包含常规蛋白保护剂1.0-10.0重量份。3.权利要求2所述的复合制剂，其特征在于所述的蛋白保护剂，按重量份计，是白蛋白1.0-6.0或蔗糖1.0-3.0中的一种或两种的混合物。4.权利要求1所述的复合制剂，其特征在于，所述的抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体是按照以下方法制得的(1)按照常规方法制取抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒高免鸡蛋；(2)抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体的提纯(2.1)将步骤(1)得到的抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒的高免鸡蛋进行消毒，打碎鸡蛋并分离出卵黄；(2.2)在(2.1)步分离出的卵黄中加入卵黄重量11倍的无菌去离子水，并调整pH值至6.00，然后搅拌5分钟，在4t:的条件下静置48小时之后，通过虹吸抽取一次上清；后再将沉淀物用无菌去离子水稀释8倍，并调整pH值至6.0，然后搅拌5分钟，在fC的条件下静置24小时之后，通过虹吸抽取二次上清；合并两次上清，经吸附过滤除去内毒素，获得除毒上清液备用；(2.3)将(2.2)步得到的除毒上清液除去上清中的卵黄微粒等杂质；再将滤过液除去低分子杂质，并将截留物通过超滤浓縮为稠液，即为抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体。5.权利要求1所述的复合制剂，其特征在于，所述的多糖是按照以下方法提取得到的a.将所述的中药原料切碎、洗净后，用冷水浸泡2小时至药心充分浸透，再加入原料重量12倍的水，加热至沸腾后在9(TC的情况下，通过热回流浓縮工艺煎煮180分钟同时浓縮得到浓縮药液；b.将步骤a制备的浓縮药液通过10000转/分离心20分钟，弃去沉淀物，获得上清液并经负压浓縮，使其形成干物质为25%的浓縮药液；c.将步骤b得到的浓縮药液加4-8倍体积量的95X的乙醇，静置过夜，弃去乙醇上清液，沉淀物除去乙醇，然后加水溶解并通过100KD滤膜过滤，除去杂蛋白、内毒素等大分子杂质，收集滤过液再通过1KD纳滤膜过滤，除去有机小分子和无机分子及离子等杂质，被截留的物质稀释后逆向水流透析24小时；取出浓縮液，加5倍体积的量99%乙醇沉淀，搅拌，静置过夜，3000-5000转/分离心20分钟；沉淀物除去乙醇并经过喷雾干燥，即得到本发明所使用的中药多糖。6.权利要求1所述的复合制剂的制备方法，包括以下步骤1)按照常规方法制取抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒高免鸡蛋；2)将步骤1)得到的抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒的高免鸡蛋进行消毒，打碎鸡蛋并分离出卵黄，然后在其中加入卵黄重量ll倍的无菌去离子水，并调整pH值至6.00，然后搅拌5分钟，在4t:的条件下静置48小时之后，通过虹吸抽取一次上清；后再将沉淀物用无菌去离子水稀释8倍，并调整pH值至6.0，然后搅拌5分钟，在fC的条件下静置24小时之后，通过虹吸抽取二次上清；合并两次上清，经吸附过滤除去内毒素，获得除毒上清液，过滤除去上清中的卵黄微粒等杂质，再将滤过液除去低分子杂质，并将截留物通过超滤浓縮为稠液，获得抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体；3)将步骤2)得到的抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体、提取自所述中药的中药多糖按照所述的重量份比例混合溶于无菌去离子水中，使每毫升溶液中鸡新城疫的卵黄抗体血凝抑制效价21:2048，传染性法氏囊病病毒的卵黄抗体琼脂扩散效价4)将步骤3)得到的溶液分装于西林瓶进行常规冷冻干燥，并通过Co6°照射杀灭微生物，即得到本发明所述的鸡新城疫-传染性法氏囊病浓縮冻干卵黄抗体复合制剂。7.权利要求6所述的制备方法，其特征在于步骤2)所述的pH值的调整使用0.1NHCl或0.1NNaOH完成。8.权利要求6所述的制备方法，其特征在于步骤2)所述的吸附过滤使用活性炭完成。9.权利要求6所述的制备方法，其特征在于步骤2)所述的除去上清中的卵黄微粒等杂质是经1000KD滤膜过滤或经10000转/分离心10分钟完成；所述滤过液除去低分子杂质是经30100KD滤膜过滤完成。10.权利要求6所述的制备方法，其特征在于步骤4)所述的冷冻干燥是将溶液分装于西林瓶后置于真空冷冻干燥机中，预冷至-4(TC，然后在-4(TC下冷冻干燥2-8小时，而后每小时升温3t:左右，经12-18小时的真空干燥升温至25t:，然后加盖、密封，在25t:环境中保持3-5小时。全文摘要本发明提供一种鸡新城疫-传染性法氏囊病浓缩冻干卵黄抗体复合制剂，它含有以下重量份数的组分抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体10.0-99.5、中药多糖0.5-20.0，所述的中药多糖提取自下列重量份的中药中的一种或两种以上的组合物板蓝根10-50、生地黄50-100、丹参50-80、甘草30-50。本发明所述制剂在中医免疫工程学的指导下，将抗鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒卵黄抗体和多糖等成分相结合制成的冻干制剂，供鸡新城疫-传染性法氏囊病的临床使用，它既针对鸡新城疫-传染性法氏囊病病毒感染起到治疗作用，又激发了机体免疫力及抗病功能，同时本制剂中的多糖组分对卵黄抗体起到强有力的保护作用。文档编号A61P37/04GK101690812SQ20091018091公开日2010年4月7日申请日期2009年10月21日优先权日2009年10月21日发明者张勇飞,李尚波,武洁梅,胥桂华,苗玉和,赵冰申请人:辽宁益康生物制品有限公司;张勇飞