含dds化合物的药用组合物的制作方法
专利名称：含dds化合物的药用组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种含药物递送系统(DDS)化合物的药用组合物的冷冻干燥制剂，其中具有羧基的多糖衍生物通过肽链(间隔区)或不通过任何间隔区介导与喜树碱衍生物相结合。
背景技术：
许多抗肿瘤药物当进行全身给药时，其分布于全身的各种细胞和组织中，对正常的细胞和组织也呈现细胞毒性。由此极高频率地引发腹泻、发热、呕吐或脱发等一系列副作用的问题。为解决这一问题，需要开发出使抗肿瘤剂有效地并且选择性地向肿瘤部位转移的方法。
作为这样的一个方法，有报道采用DDS技术，其中将作为药物载体的多糖衍生物与抗肿瘤剂结合，从而延缓抗肿瘤剂在血中的消失，同时提高对癌组织的选择性(WO 094/19376，WO 094/19376，JP-B-7-84481；此处所用术语“JP-B”指“经审查的日本专利申请”)。
在用多糖衍生物作为药物载体的DDS化合物中，一种DDS化合物具有特别强的肿瘤选择性和抗肿瘤活性，该化合物中采用通过将羧甲基葡聚糖进行多元醇化作用得到的多糖衍生物作为药物载体，并通过肽链与喜树碱衍生物(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并(indolizino)[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮(以下有时称之为化合物A)结合。现正期望将该化合物进行临床试验。
但是，通过将上述DDS化合物冷冻干燥制得的制剂却遇到了保存稳定性极差的问题，原因是在保存过程中，其分子量增加，因而在剂型形成中产生变化并使其再溶解性变差。
本发明提供一种包含药物递送系统(DDS)化合物的药用组合物，其中具有羧基的多糖衍生物通过肽链(间隔区)或不通过任何间隔区介导与喜树碱衍生物相结合，因而保证了该化合物的高度保存稳定性。
因此，本发明涉及一种含药物递送系统(DDS)化合物以及糖或糖醇的药用组合物，在DDS化合物中，具有羧基的多糖衍生物通过肽链(间隔区)或不通过任何间隔区介导与喜树碱衍生物相结合。
更详细地讲，本发明涉及一种药用组合物，该组合物包含下述物质一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合；或者一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合；以及一种或多种选自下列的糖或糖醇麦芽糖、葡萄糖、乳糖、海藻糖、蔗糖(saccharose)、甘露糖醇、肌醇、半乳糖、核糖、木糖、甘露糖、蔗糖(sucrose)、纤维二糖、棉子糖和麦芽三糖。
本发明还涉及上述的药用组合物，该组合物包含下述物质一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合；或者一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合；一种或多种选自麦芽糖、葡萄糖、乳糖、海藻糖、蔗糖、甘露糖醇、肌醇、半乳糖、核糖、木糖、甘露糖、蔗糖、纤维二糖、棉子糖和麦芽三糖的糖或糖醇；以及一种pH调节剂。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中所述具有羧基的多糖衍生物是羧基(C1-4烷基)葡聚糖多元醇。
再者，本发明涉及上述的药用组合物，其中所述具有羧基的多糖衍生物是羧甲基葡聚糖多元醇。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中该羧甲基葡聚糖多元醇的重均分子量范围为50,000-500,000。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中该羧甲基葡聚糖多元醇的羧甲基化度为0.2-0.5。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中所述间隔区由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-(C末端)所表示的氨基酸构成。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮的引入量占下述化合物重量的2-10％重量，在该化合物中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，或者在该化合物中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中所述糖或糖醇为麦芽糖。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中麦芽糖的含量以麦芽糖一水合物重量计，为下述化合物重量的3倍或3倍以上，在该所述化合物中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，或者该所述化合物中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中所述pH-调节物为盐酸或氢氧化钠。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中pH值约为5.5-9.0。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中pH值为6.0-9.0。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中pH值为6.3-7.0。
另外，本发明涉及包含下述化合物和麦芽糖的上述药用组合物，该所述化合物中羧甲基葡聚糖多元醇通过由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-(C末端)所示氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，其中该羧甲基葡聚糖多元醇的分子量范围为50,000-500,000，该羧甲基葡聚糖多元醇具有的羧甲基化度为0.2-0.5，(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮的引入量占所述化合物重量的2-10％重量，麦芽糖的含量以麦芽糖一水合物重量计，为所述化合物重量的3倍或3倍以上，pH值为6.0-9.0。
另外，本发明涉及包含下述化合物、麦芽糖和pH调节物的上述药用组合物，该所述化合物中羧甲基葡聚糖多元醇通过由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-(C末端)所示氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，其中该羧甲基葡聚糖多元醇的分子量范围为50,000-500,000，该羧甲基葡聚糖多元醇具有的羧甲基化度为0.2-0.5，(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮的引入量占所述化合物重量的2-10％重量，麦芽糖的含量以麦芽糖一水合物计，为所述化合物重量的3倍或3倍以上，所述pH-调节物为盐酸或氢氧化钠，pH值为6.0-9.0。
另外，本发明涉及一种包含上述药用组合物的冷冻干燥制剂。
本发明药用组合物的特征在于包含一种化合物，该化合物中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与化合物A结合，或者该化合物中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与化合物A结合。这种多糖衍生物或间隔区与化合物A之间的结合可通过使化合物A中的活性官能团与多糖衍生物或间隔区中的活性官能团反应(例如脱氢缩合)形成。虽然化合物A可通过JP-A-5-59061中说明的方法合成，但本发明并不限于此。
化合物A可与多糖衍生物的羧基、所述间隔区的N-末端氨基或C-末端羧基、构成间隔区的氨基酸中的活性官能团等相结合。作为所述间隔区的优选实例，可摘引WO97/46260中说明的氨基酸间隔区和肽间隔区。特别优选由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-(C末端)所示氨基酸组成的间隔区。
一般可通过在化合物A的氨基或所述间隔区的N-末端氨基与具有羧基的所述多糖衍生物的羧基之间形成酰胺键，使化合物A或所述间隔区与具有羧基的所述多糖衍生物的羧基结合。为形成该酰胺键，优选采用在合成肽链中常用的脱氢缩合剂，例如N，N’-二环己基碳化二亚胺(DDC)或1-乙氧基羰基-2-乙氧基-1，2-二羟基喹啉(EEDQ)。可通过采用常用的缩合剂(如DCC)，将化合物A的氨基与所述间隔区的羧基进行脱氢缩合，从而使化合物A与所述间隔区结合。
构成本发明药用组合物中所含的化合物的具有羧基的多糖衍生物可以是任意的，只要它是多糖或通过化学或生物学改性该多糖得到的衍生物，并且在分子中具有羧基即可。例如，适合使用多糖类如透明质酸、果胶酸、藻酸、软骨素和肝素、由如普鲁兰、葡聚糖、甘露聚糖、壳多糖、菊粉、果聚糖、木聚糖、阿拉伯聚糖、甘露葡聚糖和脱乙酰壳多糖等多聚糖的部分或全部羟基经羧基(C1-4)烷基化得到的多糖衍生物、以及通过多糖的羧基形成酯键得到的多糖衍生物。还可使用通过将上述多糖类多元醇化，然后在其中引入带有羧基的官能团而获得的多糖衍生物。
在这些多糖衍生物中，优选使用羧基(C1-4烷基)葡聚糖多元醇。虽然并不特别限定羧基(C1-4烷基)葡聚糖多元醇的多元醇化程度，但优选构成该羧基(C1-4烷基)葡聚糖多元醇的葡聚糖多元醇是在基本上可进行完全多元醇化的条件下，处理葡聚糖得到的葡聚糖多元醇。例如，优选将该葡聚糖顺次用远远过量的高碘酸钠和远远过量的硼氢化钠进行处理。
并不特别限定用作原料的葡聚糖的类型，也不特别限定该葡聚糖的分子量，但优选使用分子量约500,000的葡聚糖，如葡聚糖T500(Pharmacia制造)。作为构成所述羧基(C1-4烷基)的C1-4烷基，可使用直链或支链的C1-4烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基和仲丁基。优选使用甲基。虽然本发明对羧烷基化未加限定，但可通过如WO97/46261中说明的方法进行所述的羧烷基化反应。
虽然本发明对羧烷基化度未加限定，但所述葡聚糖多元醇中羟基的羧烷基化程度相对于每个构成多糖残基为0.01-2.0，优选0.1-1.0，更优选0.2-0.5。羧烷基化度可通过采用毛细管电泳方法等，测定每单位分子量的电荷进行测定。
当用普鲁兰为标准物，采用凝胶过滤方法测定时，所述羧基(C1-4烷基)葡聚糖多元醇的重均分子量范围约为5,000-1,000,000，优选约50,000-500,000。用作标准物的普鲁兰例如由Shodex提供。重均分子量的测定可通过GPC-RI(凝胶渗透色谱折射率)法(AnalyticalBiochem.，147，(1985)，pp.387-395)、GPC-LALLS(凝胶渗透色谱低角度激光光散射)法(J.Chromatography，506，(1990)，pp.409-416)、粘度测定法等进行测定。
在本发明药用组合物所含化合物中，应通过将药效、毒性等因素考虑在内，来确定被引入到具有羧基的多糖衍生物中的化合物A的量。化合物A的量可为上述化合物重量的0.1-30％重量，优选1-15％重量，更优选2-10％重量。被引入到具有羧基的多糖衍生物中的化合物A的量很容易通过如吸收光谱测定法进行测定。
优选本发明的药用组合物包含糖或糖醇。所述糖或糖醇的实例包括麦芽糖、葡萄糖、乳糖、海藻糖、蔗糖、甘露糖醇、肌醇、半乳糖、核糖、木糖、甘露糖、蔗糖、纤维二糖、棉子糖和麦芽三糖。可使用这些糖或糖醇的任何一种或者其中的两种或两种以上的组合。其中，优选单独使用麦芽糖。虽然未特别限定麦芽糖的含量，但优选麦芽糖的含量以麦芽糖一水合物计，相对于1重量份的本发明药用组合物中所含化合物为3重量份或3重量份以上，优选3.3重量份或3.3重量份以上。虽然未特别限定麦芽糖含量的上限，但优选其浓度不超过麦芽糖的饱和溶解度。
通过加入糖或糖醇，可提高本发明药用组合物的保存稳定性。将在本发明药用组合物中只含有所述化合物而不合任何糖或糖醇的冷冻干燥制剂保存一定时间后，通过GPC-RI法、GPC-LALLS法等测定其分子量，其重均分子量随时间增加。伴随重均分子量的增加，所述冷冻干燥品收缩，并且再溶解性显著降低。当以同样方式，单独保存所述具有羧基的多糖衍生物时，未观测到重均分子量的增加以及与其相伴的制剂性质的变化。因此，推测这些变化是由直接或通过所述间隔区与该具有羧基的多糖衍生物结合的化合物A所引起的。
J.G.Shiah等认为与水溶性多聚物结合的疏水性分子之间的相互作用可引起聚集和缔合(Drug Delivery，5(1998)，pp.119-126)。
据推测所述化合物A分子之间的相互作用可引起分子的聚集和缔合，因此增加了分子量。还推测当加入糖或糖醇时，该糖或糖醇位于化合物A分子之间，因此抑制了化合物A分子之间的所述疏水性相互作用等。要求位于化合物A分子之间的所述物质不与化合物A产生相互作用。例如，认定疏水性化合物的糖或糖醇与化合物A几乎不产生相互作用。因此要求加入这些化合物以保证本发明药用组合物的保存稳定性。
从保存稳定性观点看，优选将本发明药用组合物的pH值保持在6.0-9.0之间。当在pH 5.3保存时，观察到本发明药用组合物中所含的化合物的分子量变化且分散度增加。特别是分散度明显增加。分散度增加表明化合物分子量的波动变大。
另一方面，本发明药用组合物中所含的化合物含有作为其部分结构的喜树碱衍生物即化合物A。由于化合物A中的内酯环在碱性条件下开环，这样使所述药效变差。因此，优选将本发明药用组合物的pH值保持在约5.5-9.0之间，更优选在约6.0-9.0之间，最优选在约6.3-7.0之间。所述药用组合物的该pH值指的是水溶液的pH值。当所述药用组合物为冷冻干燥制剂时，是指该冷冻干燥制剂再溶于水的水溶液的pH值。本说明书所用术语“分散度”指将重均分子量除以数均分子量而得到的值。
为将pH值保持在以上范围内，在某些情况下，本发明药用组合物还包含pH调节物。pH调节物的实例包括酸性物质，如盐酸乙酸、乙酸钠、抗坏血酸、抗坏血酸钠、磷酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、柠檬酸和柠檬酸钠，以及碱性物质如氢氧化钠、三羟甲基氨基甲烷、甘氨酸、氯化铵和三乙醇胺。可使用这些物质中的任何一种或者两种或两种以上的组合。在这些pH调节物中，优选单独使用盐酸或氢氧化钠。
本发明药用组合物可以是混合物形式，其中仅仅将由具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与化合物A结合所构成的化合物，或者由具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与化合物A结合所构成的化合物，与糖或糖醇以及任选的pH调节剂混合即可。另外，该药用组合物也可作为本身已知的剂型，如水性制剂或冷冻干燥制剂。水性制剂的实例为通过将所述药用组合物经过过滤灭菌处理而制得的水性注射剂以及通过将已经过冷冻干燥的药用组合物溶解制成的水性注射剂。对所述冷冻干燥剂的制备方法没有特别限定，可以使用本身已知的方法。
本发明将通过以下实施例更详细地说明，但本发明并不受此限定。这些实施例中所用的术语“DDS化合物A”指一种化合物，其中通过由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-(C末端)所表示的间隔区，使化合物A与羧甲基葡聚糖多元醇结合。
实施发明的最佳方式实施例1含糖的DDS化合物A冷冻干燥制剂中DDS化合物A的分子量变化分别将10mg/ml DDS化合物A的水溶液(A)、10mg/ml含2％重量麦芽糖一水合物的DDS化合物A的水溶液(B)、以及10mg/ml含10％重量麦芽糖一水合物的DDS化合物A的水溶液(C)冷冻干燥，在40℃保存一定时间。然后通过GPC-LALLS方法测定该DDS化合物A的重均分子量。
因此，可清楚得出通过加入糖，可抑制所述DDS化合物A的分子量的变化。
表1DDS化合物A冷冻干燥状态的分子量变化 上段重均分子量下段相对于开始时的比率(％)N.P.未实施实施例2含糖或糖醇的DDS化合物A冷冻干燥制剂中DDS化合物A的分子量变化分别将10mg/ml各自含3％重量麦芽糖一水合物(A)、甘露糖醇(B)和乳糖(C)的DDS化合物A的水溶液冷冻干燥，然后在40℃保存一定时间。然后通过GPC-LALLS方法测定该DDS化合物A的重均分子量。
因此，可清楚得出通过加入糖或糖醇，可抑制所述DDS化合物A的分子量的变化，麦芽糖呈现出最高的抑制作用。
表2DDS化合物A冷冻干燥状态的分子量变化 上段重均分子量下段相对于开始时的比率(％)
实施例3麦芽糖含量对分子量变化抑制效果的影响将分别含有1、3、10和30mg/ml麦芽糖一水合物的10mg/ml的DDS化合物A的水溶液冷冻干燥，然后在40℃保存一定时间。然后通过GPC-LALLS方法测定该DDS化合物A的重均分子量。
因此，可清楚得出通过向每10mg/ml的DDS化合物A中加入30mg/ml或以上的麦芽糖(即该DDS化合物A的3倍或3倍以上的量)，可获得显著的对所述DDS化合物A分子量变化的抑制效果。
表3麦芽糖含量对分子量变化抑制效果的影响 上段重均分子量下段相对于开始时的比率(％)N.P.未实施实施例4麦芽糖含量对冷冻干燥品外观的影响将含有30mg/ml和33mg/ml麦芽糖一水合物的10mg/ml的DDS化合物A的水溶液冷冻干燥，然后观察各冷冻干燥品的外观。
结果发现，在含有浓度为30mg/ml麦芽糖的溶液中，形成了8.4％的具有不同外观(鳞片状)的冷冻干燥品。相比之下，在含有浓度为33mg/ml麦芽糖的溶液中，几乎未产生鳞片状的冷冻干燥品。即，特别优选加入所述DDS化合物A的3.3倍或3.3倍以上重量的麦芽糖一水合物。
表4冷冻干燥品外观检查结果 实施例5 DDS化合物A分子量变化的pH依赖性将麦芽糖一水合物加入到10mg/ml的DDS化合物A的水溶液中，得到的浓度为30mg/ml。然后通过使用盐酸或氢氧化钠，将pH值调节至5.3-8.5。将这些溶液冷冻干燥，然后在40℃保存一定时间。然后通过GPC-LALLS方法测定该DDS化合物A的重均分子量的变化以及分散度的变化。
结果表明，pH6.3和pH7.0的样本在分子量及分散度上呈现最小的变化，即，最稳定。pH7.2和pH8.5的样本各自呈现出分子量增加，但分散度变化小的现象。在pH5.3，分子量和分散度都有很大变化。
因此，优选将水溶液状态的DDS化合物A的pH值调节至5.5或以上，更优选至6.0-9.0，最优选6.3-7.0。
表5对分子量变化的影响 上段重均分子量下段相对于开始时的比率(％)
表6对分散度变化的影响 分散度重均分子量除以数均分子量得到的值产业上的可利用性如上所述，本发明的药用组合物可用作保存稳定性极好的冷冻干燥的抗肿瘤制剂。
权利要求
1.一种药用组合物，该组合物包含一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，或者一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，以及一种或多种选自下列的糖或糖醇麦芽糖、葡萄糖、乳糖、海藻糖、蔗糖(saccharose)、甘露糖醇、肌醇、半乳糖、核糖、木糖、甘露糖、蔗糖(sucrose)、纤维二糖、棉子糖和麦芽三糖。
2.一种药用组合物，该组合物包含一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，或者一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合；一或多种选自麦芽糖、葡萄糖、乳糖、海藻糖、蔗糖、甘露糖醇、肌醇、半乳糖、核糖、木糖、甘露糖、蔗糖、纤维二糖、棉子糖和麦芽三糖的糖或糖醇；以及pH调节剂。
3.权利要求1或2的药用组合物，其中所述具有羧基的多糖衍生物是羧基(C1-4烷基)葡聚糖多元醇。
4.权利要求1或2的药用组合物，其中所述具有羧基的多糖衍生物是羧甲基葡聚糖多元醇。
5.权利要求4的药用组合物，其中所述羧甲基葡聚糖多元醇的重均分子量为50,000-500,000。
6.权利要求4或5的药用组合物，其中所述羧甲基葡聚糖多元醇的羧甲基化度为0.2-0.5。
7.权利要求1-6中任一项的药用组合物，其中所述间隔区由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-G1y-(C末端)所代表的氨基酸构成。
8.权利要求1-7中任一项的药用组合物，其中(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮的引入量占下述化合物重量的2-10％重量该所述化合物中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，或者该所述化合物中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合。
9.权利要求1-8中任一项的药用组合物，其中所述糖或糖醇为麦芽糖。
10.权利要求9的药用组合物，其中麦芽糖的含量以麦芽糖一水合物重量计，为下述化合物重量的3倍或3倍以上，在该所述化合物中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，或者该所述化合物中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合。
11.权利要求2-10中任一项的药用组合物，其中所述pH-调节物为盐酸或氢氧化钠。
12.权利要求1-11中任一项的药用组合物，其中pH值约为5.5-9.0。
13.权利要求1-11中任一项的药用组合物，其中pH值为6.0-9.0。
14.权利要求1-11中任一项的药用组合物，其中pH值为6.3-7.0。
15.一种药用组合物，该组合物包含下述化合物和麦芽糖该所述化合物中羧甲基葡聚糖多元醇通过由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-(C末端)所示氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，其中该羧甲基葡聚糖多元醇的分子量为50,000-500,000，该羧甲基葡聚糖多元醇具有的羧甲基化度为0.2-0.5，(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，1 5H)-二酮的引入量占所述化合物重量的2-10％重量，麦芽糖的含量以麦芽糖一水合物重量计，为所述化合物重量的3倍或3倍以上，pH值为6.0-9.0。
16.一种药用组合物，该组合物包含下述化合物、麦芽糖和pH-调节物该所述化合物中羧甲基葡聚糖多元醇通过由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-(C末端)所示氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，其中该羧甲基葡聚糖多元醇的分子量为50,000-500,000，该羧甲基葡聚糖多元醇具有的羧甲基化度为0.2-0.5，(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮的引入量占所述化合物重量的2-10％重量，麦芽糖的含量以麦芽糖一水合物重量计，为所述化合物重量的3倍或3倍以上，pH-调节物为盐酸或氢氧化钠，pH值为6.0-9.0。
17.一种冷冻干燥制剂，该制剂包含权利要求1-16中任一项的药用组合物。
全文摘要
本发明提供可确保保存稳定性的药用组合物，该组合物包含一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物通过间隔区或不通过任何间隔区介导与喜树碱衍生物相结合，还包含糖或糖醇以及根据需要加入的pH调节物。
文档编号A61K47/36GK1556712SQ01815360
公开日2004年12月22日 申请日期2001年7月11日 优先权日2000年7月13日
发明者高桥雅行, 人, 竹内正人, 一, 杉江修一 申请人:第一制药株式会社
技术领域：
本发明涉及一种含药物递送系统(DDS)化合物的药用组合物的冷冻干燥制剂，其中具有羧基的多糖衍生物通过肽链(间隔区)或不通过任何间隔区介导与喜树碱衍生物相结合。
背景技术：
许多抗肿瘤药物当进行全身给药时，其分布于全身的各种细胞和组织中，对正常的细胞和组织也呈现细胞毒性。由此极高频率地引发腹泻、发热、呕吐或脱发等一系列副作用的问题。为解决这一问题，需要开发出使抗肿瘤剂有效地并且选择性地向肿瘤部位转移的方法。
作为这样的一个方法，有报道采用DDS技术，其中将作为药物载体的多糖衍生物与抗肿瘤剂结合，从而延缓抗肿瘤剂在血中的消失，同时提高对癌组织的选择性(WO 094/19376，WO 094/19376，JP-B-7-84481；此处所用术语“JP-B”指“经审查的日本专利申请”)。
在用多糖衍生物作为药物载体的DDS化合物中，一种DDS化合物具有特别强的肿瘤选择性和抗肿瘤活性，该化合物中采用通过将羧甲基葡聚糖进行多元醇化作用得到的多糖衍生物作为药物载体，并通过肽链与喜树碱衍生物(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并(indolizino)[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮(以下有时称之为化合物A)结合。现正期望将该化合物进行临床试验。
但是，通过将上述DDS化合物冷冻干燥制得的制剂却遇到了保存稳定性极差的问题，原因是在保存过程中，其分子量增加，因而在剂型形成中产生变化并使其再溶解性变差。
本发明提供一种包含药物递送系统(DDS)化合物的药用组合物，其中具有羧基的多糖衍生物通过肽链(间隔区)或不通过任何间隔区介导与喜树碱衍生物相结合，因而保证了该化合物的高度保存稳定性。
因此，本发明涉及一种含药物递送系统(DDS)化合物以及糖或糖醇的药用组合物，在DDS化合物中，具有羧基的多糖衍生物通过肽链(间隔区)或不通过任何间隔区介导与喜树碱衍生物相结合。
更详细地讲，本发明涉及一种药用组合物，该组合物包含下述物质一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合；或者一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合；以及一种或多种选自下列的糖或糖醇麦芽糖、葡萄糖、乳糖、海藻糖、蔗糖(saccharose)、甘露糖醇、肌醇、半乳糖、核糖、木糖、甘露糖、蔗糖(sucrose)、纤维二糖、棉子糖和麦芽三糖。
本发明还涉及上述的药用组合物，该组合物包含下述物质一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合；或者一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合；一种或多种选自麦芽糖、葡萄糖、乳糖、海藻糖、蔗糖、甘露糖醇、肌醇、半乳糖、核糖、木糖、甘露糖、蔗糖、纤维二糖、棉子糖和麦芽三糖的糖或糖醇；以及一种pH调节剂。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中所述具有羧基的多糖衍生物是羧基(C1-4烷基)葡聚糖多元醇。
再者，本发明涉及上述的药用组合物，其中所述具有羧基的多糖衍生物是羧甲基葡聚糖多元醇。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中该羧甲基葡聚糖多元醇的重均分子量范围为50,000-500,000。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中该羧甲基葡聚糖多元醇的羧甲基化度为0.2-0.5。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中所述间隔区由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-(C末端)所表示的氨基酸构成。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮的引入量占下述化合物重量的2-10％重量，在该化合物中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，或者在该化合物中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中所述糖或糖醇为麦芽糖。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中麦芽糖的含量以麦芽糖一水合物重量计，为下述化合物重量的3倍或3倍以上，在该所述化合物中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，或者该所述化合物中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中所述pH-调节物为盐酸或氢氧化钠。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中pH值约为5.5-9.0。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中pH值为6.0-9.0。
另外，本发明涉及上述的药用组合物，其中pH值为6.3-7.0。
另外，本发明涉及包含下述化合物和麦芽糖的上述药用组合物，该所述化合物中羧甲基葡聚糖多元醇通过由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-(C末端)所示氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，其中该羧甲基葡聚糖多元醇的分子量范围为50,000-500,000，该羧甲基葡聚糖多元醇具有的羧甲基化度为0.2-0.5，(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮的引入量占所述化合物重量的2-10％重量，麦芽糖的含量以麦芽糖一水合物重量计，为所述化合物重量的3倍或3倍以上，pH值为6.0-9.0。
另外，本发明涉及包含下述化合物、麦芽糖和pH调节物的上述药用组合物，该所述化合物中羧甲基葡聚糖多元醇通过由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-(C末端)所示氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，其中该羧甲基葡聚糖多元醇的分子量范围为50,000-500,000，该羧甲基葡聚糖多元醇具有的羧甲基化度为0.2-0.5，(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮的引入量占所述化合物重量的2-10％重量，麦芽糖的含量以麦芽糖一水合物计，为所述化合物重量的3倍或3倍以上，所述pH-调节物为盐酸或氢氧化钠，pH值为6.0-9.0。
另外，本发明涉及一种包含上述药用组合物的冷冻干燥制剂。
本发明药用组合物的特征在于包含一种化合物，该化合物中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与化合物A结合，或者该化合物中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与化合物A结合。这种多糖衍生物或间隔区与化合物A之间的结合可通过使化合物A中的活性官能团与多糖衍生物或间隔区中的活性官能团反应(例如脱氢缩合)形成。虽然化合物A可通过JP-A-5-59061中说明的方法合成，但本发明并不限于此。
化合物A可与多糖衍生物的羧基、所述间隔区的N-末端氨基或C-末端羧基、构成间隔区的氨基酸中的活性官能团等相结合。作为所述间隔区的优选实例，可摘引WO97/46260中说明的氨基酸间隔区和肽间隔区。特别优选由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-(C末端)所示氨基酸组成的间隔区。
一般可通过在化合物A的氨基或所述间隔区的N-末端氨基与具有羧基的所述多糖衍生物的羧基之间形成酰胺键，使化合物A或所述间隔区与具有羧基的所述多糖衍生物的羧基结合。为形成该酰胺键，优选采用在合成肽链中常用的脱氢缩合剂，例如N，N’-二环己基碳化二亚胺(DDC)或1-乙氧基羰基-2-乙氧基-1，2-二羟基喹啉(EEDQ)。可通过采用常用的缩合剂(如DCC)，将化合物A的氨基与所述间隔区的羧基进行脱氢缩合，从而使化合物A与所述间隔区结合。
构成本发明药用组合物中所含的化合物的具有羧基的多糖衍生物可以是任意的，只要它是多糖或通过化学或生物学改性该多糖得到的衍生物，并且在分子中具有羧基即可。例如，适合使用多糖类如透明质酸、果胶酸、藻酸、软骨素和肝素、由如普鲁兰、葡聚糖、甘露聚糖、壳多糖、菊粉、果聚糖、木聚糖、阿拉伯聚糖、甘露葡聚糖和脱乙酰壳多糖等多聚糖的部分或全部羟基经羧基(C1-4)烷基化得到的多糖衍生物、以及通过多糖的羧基形成酯键得到的多糖衍生物。还可使用通过将上述多糖类多元醇化，然后在其中引入带有羧基的官能团而获得的多糖衍生物。
在这些多糖衍生物中，优选使用羧基(C1-4烷基)葡聚糖多元醇。虽然并不特别限定羧基(C1-4烷基)葡聚糖多元醇的多元醇化程度，但优选构成该羧基(C1-4烷基)葡聚糖多元醇的葡聚糖多元醇是在基本上可进行完全多元醇化的条件下，处理葡聚糖得到的葡聚糖多元醇。例如，优选将该葡聚糖顺次用远远过量的高碘酸钠和远远过量的硼氢化钠进行处理。
并不特别限定用作原料的葡聚糖的类型，也不特别限定该葡聚糖的分子量，但优选使用分子量约500,000的葡聚糖，如葡聚糖T500(Pharmacia制造)。作为构成所述羧基(C1-4烷基)的C1-4烷基，可使用直链或支链的C1-4烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基和仲丁基。优选使用甲基。虽然本发明对羧烷基化未加限定，但可通过如WO97/46261中说明的方法进行所述的羧烷基化反应。
虽然本发明对羧烷基化度未加限定，但所述葡聚糖多元醇中羟基的羧烷基化程度相对于每个构成多糖残基为0.01-2.0，优选0.1-1.0，更优选0.2-0.5。羧烷基化度可通过采用毛细管电泳方法等，测定每单位分子量的电荷进行测定。
当用普鲁兰为标准物，采用凝胶过滤方法测定时，所述羧基(C1-4烷基)葡聚糖多元醇的重均分子量范围约为5,000-1,000,000，优选约50,000-500,000。用作标准物的普鲁兰例如由Shodex提供。重均分子量的测定可通过GPC-RI(凝胶渗透色谱折射率)法(AnalyticalBiochem.，147，(1985)，pp.387-395)、GPC-LALLS(凝胶渗透色谱低角度激光光散射)法(J.Chromatography，506，(1990)，pp.409-416)、粘度测定法等进行测定。
在本发明药用组合物所含化合物中，应通过将药效、毒性等因素考虑在内，来确定被引入到具有羧基的多糖衍生物中的化合物A的量。化合物A的量可为上述化合物重量的0.1-30％重量，优选1-15％重量，更优选2-10％重量。被引入到具有羧基的多糖衍生物中的化合物A的量很容易通过如吸收光谱测定法进行测定。
优选本发明的药用组合物包含糖或糖醇。所述糖或糖醇的实例包括麦芽糖、葡萄糖、乳糖、海藻糖、蔗糖、甘露糖醇、肌醇、半乳糖、核糖、木糖、甘露糖、蔗糖、纤维二糖、棉子糖和麦芽三糖。可使用这些糖或糖醇的任何一种或者其中的两种或两种以上的组合。其中，优选单独使用麦芽糖。虽然未特别限定麦芽糖的含量，但优选麦芽糖的含量以麦芽糖一水合物计，相对于1重量份的本发明药用组合物中所含化合物为3重量份或3重量份以上，优选3.3重量份或3.3重量份以上。虽然未特别限定麦芽糖含量的上限，但优选其浓度不超过麦芽糖的饱和溶解度。
通过加入糖或糖醇，可提高本发明药用组合物的保存稳定性。将在本发明药用组合物中只含有所述化合物而不合任何糖或糖醇的冷冻干燥制剂保存一定时间后，通过GPC-RI法、GPC-LALLS法等测定其分子量，其重均分子量随时间增加。伴随重均分子量的增加，所述冷冻干燥品收缩，并且再溶解性显著降低。当以同样方式，单独保存所述具有羧基的多糖衍生物时，未观测到重均分子量的增加以及与其相伴的制剂性质的变化。因此，推测这些变化是由直接或通过所述间隔区与该具有羧基的多糖衍生物结合的化合物A所引起的。
J.G.Shiah等认为与水溶性多聚物结合的疏水性分子之间的相互作用可引起聚集和缔合(Drug Delivery，5(1998)，pp.119-126)。
据推测所述化合物A分子之间的相互作用可引起分子的聚集和缔合，因此增加了分子量。还推测当加入糖或糖醇时，该糖或糖醇位于化合物A分子之间，因此抑制了化合物A分子之间的所述疏水性相互作用等。要求位于化合物A分子之间的所述物质不与化合物A产生相互作用。例如，认定疏水性化合物的糖或糖醇与化合物A几乎不产生相互作用。因此要求加入这些化合物以保证本发明药用组合物的保存稳定性。
从保存稳定性观点看，优选将本发明药用组合物的pH值保持在6.0-9.0之间。当在pH 5.3保存时，观察到本发明药用组合物中所含的化合物的分子量变化且分散度增加。特别是分散度明显增加。分散度增加表明化合物分子量的波动变大。
另一方面，本发明药用组合物中所含的化合物含有作为其部分结构的喜树碱衍生物即化合物A。由于化合物A中的内酯环在碱性条件下开环，这样使所述药效变差。因此，优选将本发明药用组合物的pH值保持在约5.5-9.0之间，更优选在约6.0-9.0之间，最优选在约6.3-7.0之间。所述药用组合物的该pH值指的是水溶液的pH值。当所述药用组合物为冷冻干燥制剂时，是指该冷冻干燥制剂再溶于水的水溶液的pH值。本说明书所用术语“分散度”指将重均分子量除以数均分子量而得到的值。
为将pH值保持在以上范围内，在某些情况下，本发明药用组合物还包含pH调节物。pH调节物的实例包括酸性物质，如盐酸乙酸、乙酸钠、抗坏血酸、抗坏血酸钠、磷酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、柠檬酸和柠檬酸钠，以及碱性物质如氢氧化钠、三羟甲基氨基甲烷、甘氨酸、氯化铵和三乙醇胺。可使用这些物质中的任何一种或者两种或两种以上的组合。在这些pH调节物中，优选单独使用盐酸或氢氧化钠。
本发明药用组合物可以是混合物形式，其中仅仅将由具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与化合物A结合所构成的化合物，或者由具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与化合物A结合所构成的化合物，与糖或糖醇以及任选的pH调节剂混合即可。另外，该药用组合物也可作为本身已知的剂型，如水性制剂或冷冻干燥制剂。水性制剂的实例为通过将所述药用组合物经过过滤灭菌处理而制得的水性注射剂以及通过将已经过冷冻干燥的药用组合物溶解制成的水性注射剂。对所述冷冻干燥剂的制备方法没有特别限定，可以使用本身已知的方法。
本发明将通过以下实施例更详细地说明，但本发明并不受此限定。这些实施例中所用的术语“DDS化合物A”指一种化合物，其中通过由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-(C末端)所表示的间隔区，使化合物A与羧甲基葡聚糖多元醇结合。
实施发明的最佳方式实施例1含糖的DDS化合物A冷冻干燥制剂中DDS化合物A的分子量变化分别将10mg/ml DDS化合物A的水溶液(A)、10mg/ml含2％重量麦芽糖一水合物的DDS化合物A的水溶液(B)、以及10mg/ml含10％重量麦芽糖一水合物的DDS化合物A的水溶液(C)冷冻干燥，在40℃保存一定时间。然后通过GPC-LALLS方法测定该DDS化合物A的重均分子量。
因此，可清楚得出通过加入糖，可抑制所述DDS化合物A的分子量的变化。
表1DDS化合物A冷冻干燥状态的分子量变化 上段重均分子量下段相对于开始时的比率(％)N.P.未实施实施例2含糖或糖醇的DDS化合物A冷冻干燥制剂中DDS化合物A的分子量变化分别将10mg/ml各自含3％重量麦芽糖一水合物(A)、甘露糖醇(B)和乳糖(C)的DDS化合物A的水溶液冷冻干燥，然后在40℃保存一定时间。然后通过GPC-LALLS方法测定该DDS化合物A的重均分子量。
因此，可清楚得出通过加入糖或糖醇，可抑制所述DDS化合物A的分子量的变化，麦芽糖呈现出最高的抑制作用。
表2DDS化合物A冷冻干燥状态的分子量变化 上段重均分子量下段相对于开始时的比率(％)
实施例3麦芽糖含量对分子量变化抑制效果的影响将分别含有1、3、10和30mg/ml麦芽糖一水合物的10mg/ml的DDS化合物A的水溶液冷冻干燥，然后在40℃保存一定时间。然后通过GPC-LALLS方法测定该DDS化合物A的重均分子量。
因此，可清楚得出通过向每10mg/ml的DDS化合物A中加入30mg/ml或以上的麦芽糖(即该DDS化合物A的3倍或3倍以上的量)，可获得显著的对所述DDS化合物A分子量变化的抑制效果。
表3麦芽糖含量对分子量变化抑制效果的影响 上段重均分子量下段相对于开始时的比率(％)N.P.未实施实施例4麦芽糖含量对冷冻干燥品外观的影响将含有30mg/ml和33mg/ml麦芽糖一水合物的10mg/ml的DDS化合物A的水溶液冷冻干燥，然后观察各冷冻干燥品的外观。
结果发现，在含有浓度为30mg/ml麦芽糖的溶液中，形成了8.4％的具有不同外观(鳞片状)的冷冻干燥品。相比之下，在含有浓度为33mg/ml麦芽糖的溶液中，几乎未产生鳞片状的冷冻干燥品。即，特别优选加入所述DDS化合物A的3.3倍或3.3倍以上重量的麦芽糖一水合物。
表4冷冻干燥品外观检查结果 实施例5 DDS化合物A分子量变化的pH依赖性将麦芽糖一水合物加入到10mg/ml的DDS化合物A的水溶液中，得到的浓度为30mg/ml。然后通过使用盐酸或氢氧化钠，将pH值调节至5.3-8.5。将这些溶液冷冻干燥，然后在40℃保存一定时间。然后通过GPC-LALLS方法测定该DDS化合物A的重均分子量的变化以及分散度的变化。
结果表明，pH6.3和pH7.0的样本在分子量及分散度上呈现最小的变化，即，最稳定。pH7.2和pH8.5的样本各自呈现出分子量增加，但分散度变化小的现象。在pH5.3，分子量和分散度都有很大变化。
因此，优选将水溶液状态的DDS化合物A的pH值调节至5.5或以上，更优选至6.0-9.0，最优选6.3-7.0。
表5对分子量变化的影响 上段重均分子量下段相对于开始时的比率(％)
表6对分散度变化的影响 分散度重均分子量除以数均分子量得到的值产业上的可利用性如上所述，本发明的药用组合物可用作保存稳定性极好的冷冻干燥的抗肿瘤制剂。
权利要求
1.一种药用组合物，该组合物包含一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，或者一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，以及一种或多种选自下列的糖或糖醇麦芽糖、葡萄糖、乳糖、海藻糖、蔗糖(saccharose)、甘露糖醇、肌醇、半乳糖、核糖、木糖、甘露糖、蔗糖(sucrose)、纤维二糖、棉子糖和麦芽三糖。
2.一种药用组合物，该组合物包含一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，或者一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合；一或多种选自麦芽糖、葡萄糖、乳糖、海藻糖、蔗糖、甘露糖醇、肌醇、半乳糖、核糖、木糖、甘露糖、蔗糖、纤维二糖、棉子糖和麦芽三糖的糖或糖醇；以及pH调节剂。
3.权利要求1或2的药用组合物，其中所述具有羧基的多糖衍生物是羧基(C1-4烷基)葡聚糖多元醇。
4.权利要求1或2的药用组合物，其中所述具有羧基的多糖衍生物是羧甲基葡聚糖多元醇。
5.权利要求4的药用组合物，其中所述羧甲基葡聚糖多元醇的重均分子量为50,000-500,000。
6.权利要求4或5的药用组合物，其中所述羧甲基葡聚糖多元醇的羧甲基化度为0.2-0.5。
7.权利要求1-6中任一项的药用组合物，其中所述间隔区由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-G1y-(C末端)所代表的氨基酸构成。
8.权利要求1-7中任一项的药用组合物，其中(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮的引入量占下述化合物重量的2-10％重量该所述化合物中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，或者该所述化合物中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合。
9.权利要求1-8中任一项的药用组合物，其中所述糖或糖醇为麦芽糖。
10.权利要求9的药用组合物，其中麦芽糖的含量以麦芽糖一水合物重量计，为下述化合物重量的3倍或3倍以上，在该所述化合物中具有羧基的多糖衍生物通过由一个氨基酸组成的间隔区或者通过由彼此经肽键结合的2-8个氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，或者该所述化合物中具有羧基的多糖衍生物不通过任何间隔区介导与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合。
11.权利要求2-10中任一项的药用组合物，其中所述pH-调节物为盐酸或氢氧化钠。
12.权利要求1-11中任一项的药用组合物，其中pH值约为5.5-9.0。
13.权利要求1-11中任一项的药用组合物，其中pH值为6.0-9.0。
14.权利要求1-11中任一项的药用组合物，其中pH值为6.3-7.0。
15.一种药用组合物，该组合物包含下述化合物和麦芽糖该所述化合物中羧甲基葡聚糖多元醇通过由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-(C末端)所示氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，其中该羧甲基葡聚糖多元醇的分子量为50,000-500,000，该羧甲基葡聚糖多元醇具有的羧甲基化度为0.2-0.5，(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，1 5H)-二酮的引入量占所述化合物重量的2-10％重量，麦芽糖的含量以麦芽糖一水合物重量计，为所述化合物重量的3倍或3倍以上，pH值为6.0-9.0。
16.一种药用组合物，该组合物包含下述化合物、麦芽糖和pH-调节物该所述化合物中羧甲基葡聚糖多元醇通过由氨基酸序列(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-(C末端)所示氨基酸组成的间隔区与(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮结合，其中该羧甲基葡聚糖多元醇的分子量为50,000-500,000，该羧甲基葡聚糖多元醇具有的羧甲基化度为0.2-0.5，(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮的引入量占所述化合物重量的2-10％重量，麦芽糖的含量以麦芽糖一水合物重量计，为所述化合物重量的3倍或3倍以上，pH-调节物为盐酸或氢氧化钠，pH值为6.0-9.0。
17.一种冷冻干燥制剂，该制剂包含权利要求1-16中任一项的药用组合物。
全文摘要
本发明提供可确保保存稳定性的药用组合物，该组合物包含一种化合物，其中具有羧基的多糖衍生物通过间隔区或不通过任何间隔区介导与喜树碱衍生物相结合，还包含糖或糖醇以及根据需要加入的pH调节物。
文档编号A61K47/36GK1556712SQ01815360
公开日2004年12月22日 申请日期2001年7月11日 优先权日2000年7月13日
发明者高桥雅行, 人, 竹内正人, 一, 杉江修一 申请人:第一制药株式会社
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