用母牛分枝杆菌治疗慢性病毒感染的制作方法
专利名称：用母牛分枝杆菌治疗慢性病毒感染的制作方法
技术领域：
本发明涉及在病毒感染，特别是慢性病毒感染的治疗中母牛分枝杆菌的用途。
背景技术：
英国专利说明书，NO.2156673(国际专利说明书WO85/03639)叙述了包含杀死的母牛分枝杆菌细胞的免疫治疗试剂。这些试剂可用于分枝杆菌疾病的免疫治疗，特别是结核病和麻风病的免疫治疗。据报道，利用这一免疫治疗试剂能够加速众所周知的单独化学治疗难于除去的导致结核病或麻风病的存留杆菌。
国际专利说明书PCT/GB85/00183(WO85/05034)叙述了用于减轻关节疾病症状和治疗或诊断的组合物，该组合物中含有作为活性成分的完整的母牛分枝杆菌生物体。据报道，母牛分枝杆菌的制剂可用于治疗各种自身免疫疾病，和尤其是关节疾病包括类风湿关节炎，关节强硬性脊椎炎或Reiter综合症。
母牛分枝杆菌的其它用途在下面几个专利中有专门说明WO91/02542，其中提到了含有起源于母牛分枝杆菌，通常用于治疗缺半乳糖的IgG(即，重链上缺乏N连接的寡糖而来的末端半乳糖的IgG)的比例增加的病症的抗原性的和免疫调节性的物质的组合物，WO92/08484，其中提到利用母牛分枝杆菌治疗葡萄膜炎，WO94/06466，其中提供了起源于母牛分枝杆菌的抗原性和/或免疫调节性物质，用于生产治疗AIDS和治疗HIV阳性的无病症病人的药剂，和南非专利申请95/2644，其中涉及有望对中胚层，外胚层，内胚层起源的肿瘤，包括胸和支气管肿瘤的治疗有效的母牛分枝杆菌的免疫治疗。
尽管WO92/08488进一步公开，杀死的母牛分枝杆菌的细胞可以用较为有利的方式刺激和/或修饰抗非母牛分枝杆菌内源的抗原的免疫应答，但为了方便，因此也是优选的，上面提到的治疗试剂含有母牛分枝杆菌的死细胞，最优选地是经过高压灭菌杀死的细胞。
国际申请PCT/GB98/03346中论述已经获得含有冷休克治疗诱导的蛋白质的冷休克母牛分枝杆菌制剂，并且这样的制剂具有各种用途，包括但不限于如Raynaud综合症或体温过低等疾病的治疗。
发明公开我们已经惊奇地发现用母牛分枝杆菌进行慢性病毒感染的治疗对治疗感染是有益的，因为能够稳定感染，或部分地或整个地改进临床治疗过程。
母牛分枝杆菌在人或其它动物中抵抗病毒疾病的作用是惊人的，因为这一细菌抗原的作用对在较远位点感染病毒的细胞诱导应答。
所以，本发明提供了治疗HIV感染以外的慢性病毒感染的方法，该方法包括对需要治疗的人或动物给药有效量的母牛分枝杆菌制剂。但对这些非HIV慢性病毒的作用可能与抗HIV的作用不同，因为HIV直接攻击宿主的免疫系统，而据认为宿主的免疫系统是受母牛分枝杆菌调节的。
本发明进一步提供了母牛分枝杆菌制备物用于生产治疗HIV感染以外的慢性病毒感染的药剂的用途。
发明的详细描述有些病毒可以进入特异的细胞，改变细胞的功能，以生产病毒蛋白质，和表达应急蛋白质，但不杀死细胞。这样，这些病毒慢慢地在感染的宿主细胞内复制，这样的感染会引起慢性病或疾病再发，并且也会产生临床损伤。所以，“慢性病毒感染”是指人或其它动物感染病毒并且在较长的时期，通常几星期，几月甚至几年内在宿主的细胞内繁殖而不危及宿主的生命。
引起慢性感染并且根据本发明可以治疗的病毒有人乳头瘤病毒(HPV)，单纯性疱疹和其它疱疹病毒，乙型和丙型肝炎病毒以及其它肝炎病毒和麻疹病毒，所有这些病毒能够产生严重的临床症状。长期的感染最终会导致例如能致死患者的丙型肝炎病毒引起的肝癌这样的疾病。
在人体内，乳头瘤病毒会引起四种不同的疣散发性疣，通常是在手上；脚上的足底疣；复合性疣，其中有在分散的大面积的皮肤上融合的赘疣，通常也包括与宫颈异常增生相关的阴部(性病疣)在内；和与子宫异常增生相关但通常没有其它损伤的乳头瘤病毒。其中前面两个通常较易治疗，自愈或局部措施就能治疗。后面两个较难治疗，通常不同程度地伴随人生命期。宫颈异常增生已知是恶性病的前兆，并且是进行子宫颈涂片的主要原因。HPV至少有75种可以区别的类型。一种损伤通常与一种类型相关，复合的损伤通常与同时感染几种不同类型的病毒有关，阴部疣和宫颈异常增生通常与16，18或31型病毒相关。根据本发明，这些类型，以及其它HPV亚型，例如HPV2a和HPV21的病毒是可以治疗的。
单纯性疱疹病毒HSV-1引起的已知的症状是“冻疮”，这种病症一年发生几次，在颊或鼻粘膜和周围的皮肤之间的粘膜接合处有小的或溃疡性损伤。当免疫性受急性病毒感染破坏时，通常发生损伤。在小的神经末梢这些病毒会长期存在。HSV-2病毒也可能引起生殖器疱疹，其中在阴茎和包皮之间或围绕女性外阴的粘膜接合处的周围，损伤会扩展。在两种性别中，生殖器疱疹损伤有趋势比冻疮更广泛更严重。虽然一次与一次不一样，但生殖器疱疹比冻疮顽固得多。另外，在小的神经中，病毒溃疡会连续地再感染阴部区域，因此病毒就变得顽固。本发明提供了对HSV-1和HSV-2感染，以及其它疱疹病毒的治疗。
虽然可能不是唯一的原因，但乙型和丙型肝炎病毒通常从人到人的传播媒介是血液产物。两种类型的病毒都会引起急性肝炎，但在一些人中治愈了没有后遗问题，而在另一些人中会变成慢性。慢性肝炎导致肝的慢性硬化，由于会发展成肝衰竭或恶性肝癌，肝硬化可能导致死亡。这些疾病都是不易治疗的。
偶尔，麻疹病毒会在脑中慢慢地固定下来和引起循序性并且致死的称为亚急性硬化全脑炎(SSPE)的病症，这种病症还没有已知的治疗措施。
按照本发明可以治疗的其它慢性病毒感染包括埃伯斯坦一巴病毒(EBV)，以及其它病毒，如可能与肿瘤相关的那些，或在动物的情况中的各种牲畜的病毒疾病，例如家养的宠物或农业上的重要的牲畜的那些病。
可以理解的是，对感染的治疗是缓解，减轻或除去感染的症状，通过除去或减少负载的病毒等等减轻感染的严重性来延迟或阻止启动次级变化如恶性或其它形态的变化。
母牛分枝杆菌制剂可以全部是或包括母牛分枝杆菌的死细胞的材料。尽管高压灭菌是优选的杀死细菌细胞的方法，例如在69kPa，115℃-125℃下处理10分钟，但例如利用辐射，例如在2.5megarads剂量的60Cobalt下，化学地，或其它方法也是可以的。高压灭菌可以比辐射产生更有效的制剂。
在杀死之前，母牛分枝杆菌可能在适当的固体培养基上生长。改良的Sauton液体培养基是优选的(Boyden等人)，用琼脂固化，优选地是1.3％的琼脂。在有氧温育后，通常在32℃下10天，可以收获生物体，然后，称重并悬浮于稀释液中，可备用于给药。如果需要，在使用前，可以在4℃下储存。
除了在固体培养基上生长细胞，也可以利用如在发酵罐中的液体培养基如改良的Sauton培养基(Boyden等人)。
在生长的过程中，为了诱导生产冷或热休克蛋白质，可以用冷休克或热休克处理母牛分枝杆菌。适当的热休克条件包括在升高的温度下，例如37，42或45℃下生长一个时期，从10分钟到几个小时例如3个或更多个小时。冷休克处理可以是在减低的温度下例如10到25℃下处理相同的时期。
稀释液可以是无热原的未缓冲的盐。优选地，稀释液可以是硼酸缓冲的，优选地含有表面活性剂如吐温80。适当的硼酸缓冲液是Na2B4O7.10H2O-3.63克，H3BO3-5.25克，NaCl-6.19克，吐温800.0005％，用蒸馏水加到1升。这些稀释液在药物学上是可接受的。
通过以母牛分枝杆菌如可从英国的联邦药物管理局IND和医药控制部的CTX的几个研究人员用于人的GMP制剂SRL172的给药已经得到上面提到的对人产生的结果。Huntingdon Research已经进行了GLP的急性毒理研究。在美国已经得到了1期和2期的安全数据，并交给了FDA。SRL172在3期试验中用于结核病的免疫治疗。SRL172可以优选地用于本发明。
SRL172是起源于R877R菌株的母牛分枝杆菌的制剂，根据布达佩斯条约，该菌株以登记号NCTC11659，在1984年2月13日，保藏于英国，伦敦NW95HT，Colindale街，国立典型培养物保藏中心(NCTC)，中央公共健康实验室。R877R最初是从中央Uganda的Lango区(Stanford和Paul)的泥沙样品中分离得到的。
也可以利用其它母牛分枝杆菌替代SRL172。通过生化和抗原性的标准可以鉴定属于母牛分枝杆菌的生物体(Bonicke等人)。
以无或基本上无母牛分枝杆菌抗原或免疫调节物质的母牛分枝杆菌物质给药在本发明中是优选的。换句话说，即给药的药剂或组合物可以含有，或基本上包括母牛分枝杆菌的抗原性和/或免疫调节性物质，如死的细胞，提取物或衍生物，和药物学上可接受的稀释剂。
以“治疗有效的量”给药是优选的，因为这样对病人是有利的。这样的给药的益处是至少能够减轻一种症状。实际的给药量，给药速度和时间将根据治疗的病情的特性和严重性而变化。治疗的处方，例如，药量等等，属于普通治疗医生和其它治疗人员的责任范围。
一个剂量(其中以死细胞给药)通常含有107到1010个杀死的母牛分枝杆菌微生物。尽管需要的话，可以多次给药，例如间隔2星期到6个月，但给药病人的一个剂量的药中可以有108到109个杀死的母牛分枝杆菌。
根据治疗的症状，可以同时或按顺序单独使用组合物或结合其它治疗剂使用。
根据本发明和用于本发明的药物组合物，除了活性成分还包括药物学可接受赋形剂，载体，缓冲液，稳定剂或本领域技术人员已知的物质。这样的物质应该是非毒性的并且应该不会干扰活性成分的效力。载体或其它物质的具体特性将根据给药的途径而不同，而这些途径尽管优选的是注射，例如皮，皮下或透皮，但这样的途径应该是本领域技术人员使用的方便途径。
对于注射途径，活性成分的形式将是肠胃可接受的水溶液，其中无热原，pH适当，等渗和稳定。已经在上面讨论过，适当的稀释剂是药物学可接受的，并且是优选的。
也可以口服给药，这时，药物组合物可以是片剂，胶囊，粉末或液体形式。片剂可以含有固体载体如明胶或佐剂。液体药物组合物通常含有液体载体，如水，原油，动物或植物油，矿质油或合成油。还可以包括生理盐溶液，葡聚糖或其它多糖溶液或醇如乙二醇，丙二醇，或聚乙二醇。
利用合适配方，例如包括穿行到气管的合适部分的大小的颗粒将母牛分枝杆菌以气雾剂给药到气管。这种制剂是干粉而不是含水悬浮液。
除了杀死的细胞，也可以利用起源于母牛分枝杆菌的其它物质，特别是具有需要的活性的提取物或合成分子。
在下面的非限制性实施例中本发明得到进一步说明，这些实施例报告了接受一个或多个标准剂量(108-109个细胞)的母牛分枝杆菌的病人的症状的研究。
实施例1接受用杀死的母牛分枝杆菌免疫治疗别的适应症的两个个体在手上有推测是病毒起因的长期的单一类型的疣。在治疗期间，观察到疣完全治愈。
实施例2
由各种HPV亚型引起的扩展性复合疣的三个病人接受了杀死的母牛分枝杆菌的系列注射。
第一位是免疫防御系统因为严重的并发性免疫缺陷而从亲本再构建骨髓才5个月的15岁的男孩。他感染了HPV2a和21，并且在8年前已经发展成难治疗的疣。在过去几年中，他接受了7次母牛分枝杆菌注射，有时，注射后IL-2产量增加，并且产生CD8毒性细胞。但是，这些副反应都不长久。他的临床损伤继续发展，检测其发展。
第二位是29岁的妇女，她在9岁时第一次在手指上出现了疣，在15岁时，手和脚上的疣大量增加，并且在19岁时延伸到阴部。当她20岁时进行了宫颈细胞学检查，仍然显示边缘性的中等核异常，为此她接受了几次局部的透热治疗和冷凝固治疗。她接受了2次3个剂量的母牛分枝杆菌，第一次在1988年的3月和5月之间，第二次将近在2个星期的间隔之后。目前她的临床状况正在好转。
第三位是54岁的妇女，她接受了3个单月剂量的母牛分枝杆菌，现在正在检查对治疗的反应情况。
实施例3一个38岁的妇女在过去的6个月里进行的子宫涂片显示在过去的20年中她有子宫异型增生，在这20年中，她生产了3个小孩，她接受过局部激光治疗。在1995年她接受了一次杀死的母牛分枝杆菌的注射后的两次定期的宫颈检查显示症状正常，而她的第一次检查是在22岁时。随后，她进一步接受了4次每年一次的注射杀死的母牛分枝杆菌和宫颈检查，最后一次在1999年5月19日。自从开始治疗后，所有的涂片都是病毒清除了。
实施例4一个34岁的妇女被检测到有3个月的阴部疱疹的历史，接受了2次月间隔地注射杀死的母牛分枝杆菌，第3次注射是在间隔3个月后。在第一次注射后15个月时，病人作了检查，报告说，在接受治疗后，她已经是并且保持了无症状状态。在这个时期，本来估计即使用抗病毒的化学治疗连续治疗，她也会有2次或3次的重新发作。
实施例5一个有先天性的弓形体历史的9岁的女孩在1年前接种麻疹疫苗后出现了正在恶化的SSPE。在没有任何其它替代治疗的情况下，在1997年11月开始用杀死的母牛分枝杆菌免疫治疗。在开始的15个月的治疗中，她接受了母牛分枝杆菌的重复注射，她的病情进展较小，从整体来说，即症状没有明显的恶化。在接着的12个月中，她接受了间隔1星期的2次注射，观察到了相当明显的好转。病人又能够自己坐下了。还报告说眼睛，头，颈，臂和腿都可以大幅度运动，并且她可以进行有意的体育运动。对脑脊髓液的抗体分析发现了抗体从抗麻疹病毒的多克隆抗体(与正在恶化的SSPE病有关)变化成寡聚克隆的抗麻疹抗体(与从病毒感染恢复有关)。
即使单个出版物或专利说明书都是特定或单独适用于引入作为参考的，本说明书中的引证的所有公开物和专利申请书都可以引入作为参考。
虽然，为了说明和理解，通过叙述和实施例，前面叙述的发明已经在一定程度上得到了详细的陈述，但对于本领域的技术人员，很显然能够理解的是，在不脱离附加的权利要求书的精神或范围的情况下，是可以进行一些改变和修改的。
参考文献Bonicke等人，(1964)Zentr albl.Bakteriol.Parasitenkd.Infection skr.Hyg.Abt.1，Orig.，192133Boyden等人，(1955)免疫学杂志7515.
Stanford和Paul，(1973)Ann.Soc.Belge Med.Trop.53141-389.
权利要求
1.母牛分枝杆菌制剂用于制造用于治疗HIV感染以外的慢性病毒感染的药剂的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述的慢性病毒感染是HPV感染。
3.根据权利要求2所述的用途，其中所述的HPV感染与宫颈异常增生有关。
4.根据权利要求1所述的用途，其中所述的慢性病毒感染是疱疹病毒感染。
5.根据权利要求4所述的用途，其中所述的疱疹病毒感染是单纯性疱疹病毒感染。
6.根据权利要求1所述的用途，其中慢性病毒感染是亚急性硬化全脑炎。
7.根据权利要求1所述的用途，其中所述的慢性病毒感染是肝炎病毒感染。
8.治疗HIV感染以外的慢性病毒感染的方法，该方法包括对需要治疗的人或动物给药治疗有效量的母牛分枝杆菌制剂。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是HPV感染。
10.根据利要求9所述的方法，其中所述的HPV感染与宫颈异常增生有关。
11.根据权利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是疱疹病毒感染。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述的疱疹病毒感染是单纯性疱疹病毒感染。
13.据权利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是亚急性硬化全脑炎。
14.据权利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是肝炎病毒感染。
全文摘要
本发明提供了母牛分枝杆菌制剂用于生产治疗除HIV感染以外的慢性病毒感染的药剂中的用途。慢性病毒感染包括HPV感染,如与宫颈异常增生相关的HPV感染,疱疹病毒感染,亚急性硬化全脑炎和肝炎病毒感染。
文档编号A61P31/20GK1377274SQ0080347
公开日2002年10月30日 申请日期2000年2月16日 优先权日1999年2月16日
发明者J·L·斯坦福, G·A·W·罗克, C·A·斯坦福 申请人:斯坦福卢克有限公司
技术领域：
本发明涉及在病毒感染，特别是慢性病毒感染的治疗中母牛分枝杆菌的用途。
背景技术：
英国专利说明书，NO.2156673(国际专利说明书WO85/03639)叙述了包含杀死的母牛分枝杆菌细胞的免疫治疗试剂。这些试剂可用于分枝杆菌疾病的免疫治疗，特别是结核病和麻风病的免疫治疗。据报道，利用这一免疫治疗试剂能够加速众所周知的单独化学治疗难于除去的导致结核病或麻风病的存留杆菌。
国际专利说明书PCT/GB85/00183(WO85/05034)叙述了用于减轻关节疾病症状和治疗或诊断的组合物，该组合物中含有作为活性成分的完整的母牛分枝杆菌生物体。据报道，母牛分枝杆菌的制剂可用于治疗各种自身免疫疾病，和尤其是关节疾病包括类风湿关节炎，关节强硬性脊椎炎或Reiter综合症。
母牛分枝杆菌的其它用途在下面几个专利中有专门说明WO91/02542，其中提到了含有起源于母牛分枝杆菌，通常用于治疗缺半乳糖的IgG(即，重链上缺乏N连接的寡糖而来的末端半乳糖的IgG)的比例增加的病症的抗原性的和免疫调节性的物质的组合物，WO92/08484，其中提到利用母牛分枝杆菌治疗葡萄膜炎，WO94/06466，其中提供了起源于母牛分枝杆菌的抗原性和/或免疫调节性物质，用于生产治疗AIDS和治疗HIV阳性的无病症病人的药剂，和南非专利申请95/2644，其中涉及有望对中胚层，外胚层，内胚层起源的肿瘤，包括胸和支气管肿瘤的治疗有效的母牛分枝杆菌的免疫治疗。
尽管WO92/08488进一步公开，杀死的母牛分枝杆菌的细胞可以用较为有利的方式刺激和/或修饰抗非母牛分枝杆菌内源的抗原的免疫应答，但为了方便，因此也是优选的，上面提到的治疗试剂含有母牛分枝杆菌的死细胞，最优选地是经过高压灭菌杀死的细胞。
国际申请PCT/GB98/03346中论述已经获得含有冷休克治疗诱导的蛋白质的冷休克母牛分枝杆菌制剂，并且这样的制剂具有各种用途，包括但不限于如Raynaud综合症或体温过低等疾病的治疗。
发明公开我们已经惊奇地发现用母牛分枝杆菌进行慢性病毒感染的治疗对治疗感染是有益的，因为能够稳定感染，或部分地或整个地改进临床治疗过程。
母牛分枝杆菌在人或其它动物中抵抗病毒疾病的作用是惊人的，因为这一细菌抗原的作用对在较远位点感染病毒的细胞诱导应答。
所以，本发明提供了治疗HIV感染以外的慢性病毒感染的方法，该方法包括对需要治疗的人或动物给药有效量的母牛分枝杆菌制剂。但对这些非HIV慢性病毒的作用可能与抗HIV的作用不同，因为HIV直接攻击宿主的免疫系统，而据认为宿主的免疫系统是受母牛分枝杆菌调节的。
本发明进一步提供了母牛分枝杆菌制备物用于生产治疗HIV感染以外的慢性病毒感染的药剂的用途。
发明的详细描述有些病毒可以进入特异的细胞，改变细胞的功能，以生产病毒蛋白质，和表达应急蛋白质，但不杀死细胞。这样，这些病毒慢慢地在感染的宿主细胞内复制，这样的感染会引起慢性病或疾病再发，并且也会产生临床损伤。所以，“慢性病毒感染”是指人或其它动物感染病毒并且在较长的时期，通常几星期，几月甚至几年内在宿主的细胞内繁殖而不危及宿主的生命。
引起慢性感染并且根据本发明可以治疗的病毒有人乳头瘤病毒(HPV)，单纯性疱疹和其它疱疹病毒，乙型和丙型肝炎病毒以及其它肝炎病毒和麻疹病毒，所有这些病毒能够产生严重的临床症状。长期的感染最终会导致例如能致死患者的丙型肝炎病毒引起的肝癌这样的疾病。
在人体内，乳头瘤病毒会引起四种不同的疣散发性疣，通常是在手上；脚上的足底疣；复合性疣，其中有在分散的大面积的皮肤上融合的赘疣，通常也包括与宫颈异常增生相关的阴部(性病疣)在内；和与子宫异常增生相关但通常没有其它损伤的乳头瘤病毒。其中前面两个通常较易治疗，自愈或局部措施就能治疗。后面两个较难治疗，通常不同程度地伴随人生命期。宫颈异常增生已知是恶性病的前兆，并且是进行子宫颈涂片的主要原因。HPV至少有75种可以区别的类型。一种损伤通常与一种类型相关，复合的损伤通常与同时感染几种不同类型的病毒有关，阴部疣和宫颈异常增生通常与16，18或31型病毒相关。根据本发明，这些类型，以及其它HPV亚型，例如HPV2a和HPV21的病毒是可以治疗的。
单纯性疱疹病毒HSV-1引起的已知的症状是“冻疮”，这种病症一年发生几次，在颊或鼻粘膜和周围的皮肤之间的粘膜接合处有小的或溃疡性损伤。当免疫性受急性病毒感染破坏时，通常发生损伤。在小的神经末梢这些病毒会长期存在。HSV-2病毒也可能引起生殖器疱疹，其中在阴茎和包皮之间或围绕女性外阴的粘膜接合处的周围，损伤会扩展。在两种性别中，生殖器疱疹损伤有趋势比冻疮更广泛更严重。虽然一次与一次不一样，但生殖器疱疹比冻疮顽固得多。另外，在小的神经中，病毒溃疡会连续地再感染阴部区域，因此病毒就变得顽固。本发明提供了对HSV-1和HSV-2感染，以及其它疱疹病毒的治疗。
虽然可能不是唯一的原因，但乙型和丙型肝炎病毒通常从人到人的传播媒介是血液产物。两种类型的病毒都会引起急性肝炎，但在一些人中治愈了没有后遗问题，而在另一些人中会变成慢性。慢性肝炎导致肝的慢性硬化，由于会发展成肝衰竭或恶性肝癌，肝硬化可能导致死亡。这些疾病都是不易治疗的。
偶尔，麻疹病毒会在脑中慢慢地固定下来和引起循序性并且致死的称为亚急性硬化全脑炎(SSPE)的病症，这种病症还没有已知的治疗措施。
按照本发明可以治疗的其它慢性病毒感染包括埃伯斯坦一巴病毒(EBV)，以及其它病毒，如可能与肿瘤相关的那些，或在动物的情况中的各种牲畜的病毒疾病，例如家养的宠物或农业上的重要的牲畜的那些病。
可以理解的是，对感染的治疗是缓解，减轻或除去感染的症状，通过除去或减少负载的病毒等等减轻感染的严重性来延迟或阻止启动次级变化如恶性或其它形态的变化。
母牛分枝杆菌制剂可以全部是或包括母牛分枝杆菌的死细胞的材料。尽管高压灭菌是优选的杀死细菌细胞的方法，例如在69kPa，115℃-125℃下处理10分钟，但例如利用辐射，例如在2.5megarads剂量的60Cobalt下，化学地，或其它方法也是可以的。高压灭菌可以比辐射产生更有效的制剂。
在杀死之前，母牛分枝杆菌可能在适当的固体培养基上生长。改良的Sauton液体培养基是优选的(Boyden等人)，用琼脂固化，优选地是1.3％的琼脂。在有氧温育后，通常在32℃下10天，可以收获生物体，然后，称重并悬浮于稀释液中，可备用于给药。如果需要，在使用前，可以在4℃下储存。
除了在固体培养基上生长细胞，也可以利用如在发酵罐中的液体培养基如改良的Sauton培养基(Boyden等人)。
在生长的过程中，为了诱导生产冷或热休克蛋白质，可以用冷休克或热休克处理母牛分枝杆菌。适当的热休克条件包括在升高的温度下，例如37，42或45℃下生长一个时期，从10分钟到几个小时例如3个或更多个小时。冷休克处理可以是在减低的温度下例如10到25℃下处理相同的时期。
稀释液可以是无热原的未缓冲的盐。优选地，稀释液可以是硼酸缓冲的，优选地含有表面活性剂如吐温80。适当的硼酸缓冲液是Na2B4O7.10H2O-3.63克，H3BO3-5.25克，NaCl-6.19克，吐温800.0005％，用蒸馏水加到1升。这些稀释液在药物学上是可接受的。
通过以母牛分枝杆菌如可从英国的联邦药物管理局IND和医药控制部的CTX的几个研究人员用于人的GMP制剂SRL172的给药已经得到上面提到的对人产生的结果。Huntingdon Research已经进行了GLP的急性毒理研究。在美国已经得到了1期和2期的安全数据，并交给了FDA。SRL172在3期试验中用于结核病的免疫治疗。SRL172可以优选地用于本发明。
SRL172是起源于R877R菌株的母牛分枝杆菌的制剂，根据布达佩斯条约，该菌株以登记号NCTC11659，在1984年2月13日，保藏于英国，伦敦NW95HT，Colindale街，国立典型培养物保藏中心(NCTC)，中央公共健康实验室。R877R最初是从中央Uganda的Lango区(Stanford和Paul)的泥沙样品中分离得到的。
也可以利用其它母牛分枝杆菌替代SRL172。通过生化和抗原性的标准可以鉴定属于母牛分枝杆菌的生物体(Bonicke等人)。
以无或基本上无母牛分枝杆菌抗原或免疫调节物质的母牛分枝杆菌物质给药在本发明中是优选的。换句话说，即给药的药剂或组合物可以含有，或基本上包括母牛分枝杆菌的抗原性和/或免疫调节性物质，如死的细胞，提取物或衍生物，和药物学上可接受的稀释剂。
以“治疗有效的量”给药是优选的，因为这样对病人是有利的。这样的给药的益处是至少能够减轻一种症状。实际的给药量，给药速度和时间将根据治疗的病情的特性和严重性而变化。治疗的处方，例如，药量等等，属于普通治疗医生和其它治疗人员的责任范围。
一个剂量(其中以死细胞给药)通常含有107到1010个杀死的母牛分枝杆菌微生物。尽管需要的话，可以多次给药，例如间隔2星期到6个月，但给药病人的一个剂量的药中可以有108到109个杀死的母牛分枝杆菌。
根据治疗的症状，可以同时或按顺序单独使用组合物或结合其它治疗剂使用。
根据本发明和用于本发明的药物组合物，除了活性成分还包括药物学可接受赋形剂，载体，缓冲液，稳定剂或本领域技术人员已知的物质。这样的物质应该是非毒性的并且应该不会干扰活性成分的效力。载体或其它物质的具体特性将根据给药的途径而不同，而这些途径尽管优选的是注射，例如皮，皮下或透皮，但这样的途径应该是本领域技术人员使用的方便途径。
对于注射途径，活性成分的形式将是肠胃可接受的水溶液，其中无热原，pH适当，等渗和稳定。已经在上面讨论过，适当的稀释剂是药物学可接受的，并且是优选的。
也可以口服给药，这时，药物组合物可以是片剂，胶囊，粉末或液体形式。片剂可以含有固体载体如明胶或佐剂。液体药物组合物通常含有液体载体，如水，原油，动物或植物油，矿质油或合成油。还可以包括生理盐溶液，葡聚糖或其它多糖溶液或醇如乙二醇，丙二醇，或聚乙二醇。
利用合适配方，例如包括穿行到气管的合适部分的大小的颗粒将母牛分枝杆菌以气雾剂给药到气管。这种制剂是干粉而不是含水悬浮液。
除了杀死的细胞，也可以利用起源于母牛分枝杆菌的其它物质，特别是具有需要的活性的提取物或合成分子。
在下面的非限制性实施例中本发明得到进一步说明，这些实施例报告了接受一个或多个标准剂量(108-109个细胞)的母牛分枝杆菌的病人的症状的研究。
实施例1接受用杀死的母牛分枝杆菌免疫治疗别的适应症的两个个体在手上有推测是病毒起因的长期的单一类型的疣。在治疗期间，观察到疣完全治愈。
实施例2
由各种HPV亚型引起的扩展性复合疣的三个病人接受了杀死的母牛分枝杆菌的系列注射。
第一位是免疫防御系统因为严重的并发性免疫缺陷而从亲本再构建骨髓才5个月的15岁的男孩。他感染了HPV2a和21，并且在8年前已经发展成难治疗的疣。在过去几年中，他接受了7次母牛分枝杆菌注射，有时，注射后IL-2产量增加，并且产生CD8毒性细胞。但是，这些副反应都不长久。他的临床损伤继续发展，检测其发展。
第二位是29岁的妇女，她在9岁时第一次在手指上出现了疣，在15岁时，手和脚上的疣大量增加，并且在19岁时延伸到阴部。当她20岁时进行了宫颈细胞学检查，仍然显示边缘性的中等核异常，为此她接受了几次局部的透热治疗和冷凝固治疗。她接受了2次3个剂量的母牛分枝杆菌，第一次在1988年的3月和5月之间，第二次将近在2个星期的间隔之后。目前她的临床状况正在好转。
第三位是54岁的妇女，她接受了3个单月剂量的母牛分枝杆菌，现在正在检查对治疗的反应情况。
实施例3一个38岁的妇女在过去的6个月里进行的子宫涂片显示在过去的20年中她有子宫异型增生，在这20年中，她生产了3个小孩，她接受过局部激光治疗。在1995年她接受了一次杀死的母牛分枝杆菌的注射后的两次定期的宫颈检查显示症状正常，而她的第一次检查是在22岁时。随后，她进一步接受了4次每年一次的注射杀死的母牛分枝杆菌和宫颈检查，最后一次在1999年5月19日。自从开始治疗后，所有的涂片都是病毒清除了。
实施例4一个34岁的妇女被检测到有3个月的阴部疱疹的历史，接受了2次月间隔地注射杀死的母牛分枝杆菌，第3次注射是在间隔3个月后。在第一次注射后15个月时，病人作了检查，报告说，在接受治疗后，她已经是并且保持了无症状状态。在这个时期，本来估计即使用抗病毒的化学治疗连续治疗，她也会有2次或3次的重新发作。
实施例5一个有先天性的弓形体历史的9岁的女孩在1年前接种麻疹疫苗后出现了正在恶化的SSPE。在没有任何其它替代治疗的情况下，在1997年11月开始用杀死的母牛分枝杆菌免疫治疗。在开始的15个月的治疗中，她接受了母牛分枝杆菌的重复注射，她的病情进展较小，从整体来说，即症状没有明显的恶化。在接着的12个月中，她接受了间隔1星期的2次注射，观察到了相当明显的好转。病人又能够自己坐下了。还报告说眼睛，头，颈，臂和腿都可以大幅度运动，并且她可以进行有意的体育运动。对脑脊髓液的抗体分析发现了抗体从抗麻疹病毒的多克隆抗体(与正在恶化的SSPE病有关)变化成寡聚克隆的抗麻疹抗体(与从病毒感染恢复有关)。
即使单个出版物或专利说明书都是特定或单独适用于引入作为参考的，本说明书中的引证的所有公开物和专利申请书都可以引入作为参考。
虽然，为了说明和理解，通过叙述和实施例，前面叙述的发明已经在一定程度上得到了详细的陈述，但对于本领域的技术人员，很显然能够理解的是，在不脱离附加的权利要求书的精神或范围的情况下，是可以进行一些改变和修改的。
参考文献Bonicke等人，(1964)Zentr albl.Bakteriol.Parasitenkd.Infection skr.Hyg.Abt.1，Orig.，192133Boyden等人，(1955)免疫学杂志7515.
Stanford和Paul，(1973)Ann.Soc.Belge Med.Trop.53141-389.
权利要求
1.母牛分枝杆菌制剂用于制造用于治疗HIV感染以外的慢性病毒感染的药剂的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述的慢性病毒感染是HPV感染。
3.根据权利要求2所述的用途，其中所述的HPV感染与宫颈异常增生有关。
4.根据权利要求1所述的用途，其中所述的慢性病毒感染是疱疹病毒感染。
5.根据权利要求4所述的用途，其中所述的疱疹病毒感染是单纯性疱疹病毒感染。
6.根据权利要求1所述的用途，其中慢性病毒感染是亚急性硬化全脑炎。
7.根据权利要求1所述的用途，其中所述的慢性病毒感染是肝炎病毒感染。
8.治疗HIV感染以外的慢性病毒感染的方法，该方法包括对需要治疗的人或动物给药治疗有效量的母牛分枝杆菌制剂。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是HPV感染。
10.根据利要求9所述的方法，其中所述的HPV感染与宫颈异常增生有关。
11.根据权利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是疱疹病毒感染。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述的疱疹病毒感染是单纯性疱疹病毒感染。
13.据权利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是亚急性硬化全脑炎。
14.据权利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是肝炎病毒感染。
全文摘要
本发明提供了母牛分枝杆菌制剂用于生产治疗除HIV感染以外的慢性病毒感染的药剂中的用途。慢性病毒感染包括HPV感染,如与宫颈异常增生相关的HPV感染,疱疹病毒感染,亚急性硬化全脑炎和肝炎病毒感染。
文档编号A61P31/20GK1377274SQ0080347
公开日2002年10月30日 申请日期2000年2月16日 优先权日1999年2月16日
发明者J·L·斯坦福, G·A·W·罗克, C·A·斯坦福 申请人:斯坦福卢克有限公司
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