荷丹片在治疗脂肪肝的应用的制作方法

专利名称：：荷丹片在治疗脂肪肝的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及中药方剂，特别是荷丹片在治疗脂肪肝的应用。
背景技术：
：荷丹片，是由南昌济顺制药有限公司生产，处方为荷叶、丹参、山楂、番泻叶、补骨脂(盐炒)。功能主治为化痰降浊，活血化瘀。临床用于高脂血症属挟痰浊瘀证侯者。
发明内容本发明的目的在于提供一种荷丹片在治疗脂肪肝的应用方法。本发明药物荷丹片是由以下组分制成(用量为重量份)荷叶1100丹参1100山楂1100番泻叶1100补骨月旨1100本发明药物荷丹片优选的组分(用量为重量份)如下荷叶60丹参IO山楂30番泻叶3补骨脂IO将上述各组分制成本发明药物的生产方法为将番泻叶洗净，加10倍量900C热水浸泡三次药液，滤过，滤液备用丹参粉碎成粗粉，用乙醇加热回流1.5小时，滤过，滤液回收乙醇，备用，补骨脂盐炒后备用。荷叶、补骨脂、山楂及丹参药渣加10倍量水煎煮二次，每次2小时，药液合并，滤过，滤液备用。将上述药液合并，减压浓縮至相对密度为1.20(600C)，放置，待药液温度降至约400C，加2倍量乙醇，搅匀，静置48小时，取上清液，滤过，回收乙醇，减压浓縮成稠膏，加适量淀粉，混匀，减压干燥(60-700C，6-8小时)，制成颗粒，加入硬脂酸镁适量，压制成1000片，包衣，即得。本发明药物荷丹片，每片重0.73g，含生药14.125g，成人一日3次，每次1_4片，成人一日服用量为3-12片，即42.375—-169.5g生药/日。经病理组织学检查，荷丹片14.12g/kg和47.07g/kg剂量可减轻CC14脂肪肝模型小鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片47.07g/kg剂量可减轻酒精性脂肪肝模型小鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片14.12g/kg和47.07g/kg剂量可减轻乙硫氨酸脂肪肝模型小鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度。荷丹片14.12g/kg剂量可减轻复合因素酒精性和非酒精性脂肪肝模型大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片3.53g/kg剂量可减轻复合因素酒精性脂肪肝模型大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片7.06g/kg剂量可减轻非酒精性脂肪肝模型大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度。具体实施例方式以下结合实施例对本发明进行详细说明。实施例1:本发明药物是由以下组分制成(用量为重量份)荷叶60丹参IO山楂30番泻叶3补骨脂IO将上述各组分制成本发明药物的生产方法为将番泻叶洗净，加10倍量900C热水浸泡三次药液，滤过，滤液备用丹参粉碎成粗粉，用乙醇加热回流1.5小时，滤过，滤液回收乙醇，备用，补骨脂盐炒后备用。荷叶、补骨脂、山楂及丹参药渣加io倍量水煎煮二次，每次2小时，药液合并，滤过，滤液备用。将上述药液合并，减压浓縮至相对密度为1.20(600C)，放置，待药液温度降至约40〃C，加2倍量乙醇，搅匀，静置48小时，取上清液，滤过，回收乙醇，减压浓縮成稠膏，加适量淀粉，混匀，减压干燥(60-700C，6-8小时)，制成颗粒，加入硬脂酸镁适量，压制成1000片，包衣，即得。本发明药物荷丹片，每片重0.73g，含生药14.125g，成人一日3次，每次2片，即成人一日服用量为6片，即84.75g生药/日。我们对荷丹片进行相关药效学试验，现将试验结果报告如下1.试验材料1.1供试品荷丹片，由南昌济顺制药有限公司提供，每片重0.73g，含生药14.125g，批号20080601。20.1.1.1小鼠剂量确定成人一日3次，每次2片，即成人一日服用量为6片，即84.75g生药/日；小鼠中剂量为60kg成人临床剂量的IO倍计算，小鼠中剂量为14.12g生药/kg，取组间剂量比为1:3:10，即小鼠低、中、高剂量分别为4.71、14.12、47.07g生药/kg。20.1.1.2大鼠剂量确定大鼠中剂量为60kg成人临床剂量的5倍计算，大鼠中剂量为7.06g/kg，取组间剂量比为1:2:4，即大鼠低、中、高剂量分别为3.53、7.06、14.12g/kg。.1.2阳性对照药.1.2.1血脂康胶囊，北京北大维信生物科技有限公司，每粒装0.3g，批号20080501。小鼠剂量确定成人一日2次，每次2粒，即成人一日服用量为4粒，即1.2g/日，小鼠剂量为60kg成人临床剂量的10倍计算，即小鼠为0.2g/kg。大鼠剂量确定大鼠剂量为60kg成人临床剂量的5倍计算，即大鼠为0.lg/kg。1.2.2联苯双酯滴丸，浙江医药股份有限公司新昌药厂，规格，1.5mg/粒，批号080102。小鼠剂量确定按参考文献资料[1]，小鼠剂量为0.2g/kg。1.2.3非诺贝特片，上海黄海制药有限责任公司，规格，0.lg/片，批号070301。小鼠剂量确定按参考文献[4]，小鼠剂量为0.lg/kg。大鼠剂量确定按参考文献[4'8]，大鼠剂量为0.05g/kg。1.2.4复方蛋氨酸胆碱片(东宝甘泰)，通化东宝药业股份有限公司，批号070507。小鼠剂量确定成人一日3次，每次3片，即成人一日服用量为9片，即9片/日，小鼠剂量为60kg成人临床剂量的10倍计算，即小鼠为1.5片/kg。1.3试齐U乙硫氨酸(DL-Ethionine)，SigamaChemicalCO.lot:1063551。四氯化碳(CC1》，分析纯，湖北大学化工厂，批号050817。橄榄油(Oliveoil)，化学纯，国药集团化学试剂有限公司，批号F20060404。丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号080871.200804、080891。甘油三脂(TG)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号082291.200804、082611。还原型谷胱甘肽(GSH)试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号20080702、20081127。丙二醛(MDA)测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20080702、20081127。胆固醇(C27H4。0)，上海精析化工科技有限公司，批号080303。胆酸钠(CowSodiumCholate)，北京市海淀区微生物培养基制品厂，批号20080117。1，2-丙二醇(1，2-Propanediol)，上海试剂一厂，批号试2005-05-10。总胆固醇(TCH)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号080691。低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号080231200809。高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号080221.200807。二锅头白酒(56%)，北京红星股份有限公司生产，批号20071011。北京二锅头白酒(56%)，北京双庆和酒业有限责任公司生产，批号20071220。1.4动物1.4.1昆明种小鼠，雄性，清洁级，1820g，购自湖南省长沙市开福区东创实验动物科技服务部，生产许可证号SCXK(湘)2006-001，合格证编号002580。1.4.2Wistar大鼠，雄性，SPF级，140170g，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，生产许可证号SCXK(沪)2008-0016，合格证编号0047636、0047391。1.4.3动物饲养条件參实验动物房室温1926°C，參湿度4070%，參每日照明1Oh(8Am6Pm)熄灯14h，參给予常规的实验室饮食，自由饮水，參全价营养颗粒饲料购自江西省实验动物中心，批号080701、081020。1.5仪器BT-224半自动生化分析仪，意大利产。2试验方法与结果2.1荷丹片对小鼠急性CC14肝损伤脂肪肝模型的影响[2'3]方法将小鼠按体重随机分成7组，每组10只，分别为空白组、模型组、荷丹片低、中、高剂量组、联苯双酯组和血脂康胶囊组。供试品组灌胃给药，l次/天，空白组和模型组5给予等容积蒸馏水，灌胃容积均为0.2ml/10g体重，连续给药10天；第10天，除空白组外，其余动物用0.15%的四氯化碳橄榄油溶液10mL/kg给小鼠腹腔注射，禁食16小时，摘除小鼠眼球取血，室温静置10min，3500rmp离心15min，分离血清，按试剂盒说明分别测血清ALT、TG。脱颈椎处死小鼠，剖腹取肝脏，称其湿重，并取肝脏同部位组织约O.lg，精密称定，剪碎后加入9倍0.9%的氯化钠溶液，冰浴中手动制匀浆，3500rmp离心15min，按试剂盒说明测GSH、MDA和TG含量。另取肝脏左叶，用10%甲醛固定，HE染色，于光学显微镜下观察各组织形态学变化，拍摄照片。试验结果采用t检验和Ridit检验。肝损伤病理组织学分级标准如下。0级正常肝组织，无肝细胞变性、坏死，无炎症细胞浸润。I级肝小叶内肝细胞轻度脂肪变性，偶见肝细胞点状坏死。II级肝小叶内肝细胞中度脂肪变性，可见肝细胞点状坏死，炎症细胞浸润。III级肝小叶内肝细胞重度弥漫性脂肪变性，点状坏死多见或可见大片肝细胞坏死。结果荷丹片47.07g(指生药量，下同)/kg剂量和联苯双酯0.2g/kg剂量能显著增加小鼠肝系数，荷丹片47.07g/kg、血脂康0.2g/kg和联苯双酯0.2g/kg剂量能显著降低血清ALT，荷丹片4.71和14.12g/kg剂量具有显著降低血清TG，荷丹片47.07g/kg、血脂康0.2g/kg和联苯双酯0.2g/kg剂量能显著降低肝组织TG，血脂康0.2g/kg剂量和联苯双酯0.2g/kg剂量能显著降低肝组织MDA和显著增加肝组织GSH与模型组比较，差异有显著性和非常显著性意义(P<0.05和P<0.01)。结果见表1、2、3。病理组织学检查，空白组肝组织结构正常，肝小叶结构清楚，细胞索排列整齐，肝血窦正常；模型组肝细胞肿胀，胞质内出现弥漫性的圆形脂滴，胞浆内出现脂肪空泡，肝小叶界限模糊，小叶内出现多个点状或大片状坏死，汇管区见大量炎症细胞浸润。荷丹片14.12和47.07g/kg组肝细胞肿胀不明显，脂肪变性及炎症细胞浸润均较模型对照组显著减轻，无大片状坏死。荷丹片4.71g/kg组时肝细胞肿胀较模型组减轻，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度改变不明显。联苯双酯0.2g/kg组和血脂康0.2g/kg组肝细胞肿胀，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度均显著降低。结果见表4。表1、荷丹片对小鼠急性CC14肝损伤脂肪肝模型的影响(x士s)组别剂量(g/kg)动物数(只)肝系数空白—100.044±0.011模型—100.049±0.006荷丹片4.71100.050±0.004荷丹片14.12100.046±0.002荷丹片47.07100.055±0.005*血脂康0.2100.047±0.004联苯双酯0.2'100.064±0.020*与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表2、荷丹片对小鼠急性CC14肝损伤脂肪肝模型的影响(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表3、荷丹片对小鼠急性CC14肝损伤脂肪肝模型的影响(x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表4、荷丹片对小鼠急性CC14肝损伤脂肪肝模型的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**P<0.012.2荷丹片对小鼠急性酒精性脂肪肝模型的影响[5]方法将小鼠按体重随机分成7组，每组10只，分别为空白组、模型组、荷丹片低、中、高剂量组、血脂康胶囊组和非诺贝特片组。除空白组外，其余各组均灌胃给予酒精度为35%的二锅头白酒，灌胃容积16ml/kg，每日1次，连续17天，造模第8天灌胃酒精后3小时开始灌胃给药，供试品组灌胃给予相应药物，1次/天，空白组和模型组给予等容积蒸馏水，灌胃容积均为0.2ml/10g体重，连续给药10天。末次给药后禁食12h，摘除小鼠眼球取血，室温静置10min，3500rmp离心15min，分离血清，按试剂盒说明分别测血清ALT、TG。脱颈椎处死小鼠，剖腹取肝脏，称其湿重，并取肝脏同部位组织约0.lg，精密称定，剪碎后加入9倍0.9%的氯化钠溶液，冰浴中手动制匀桨，3500rmp离心15min，按试剂盒说明测TG、GSH和MDA含量。另取肝脏左叶，用10X甲醛固定，HE染色，于光学显微镜下观察各组织形态学变化，拍摄照片。试验结果采用t检验和Ridit检验。肝损伤病理组织学分级标准如下。0级正常肝组织，无肝细胞变性、坏死，无炎症细胞浸润。I级肝小叶内肝细胞轻度脂肪变性，偶见肝细胞点状坏死。II级肝小叶内肝细胞中度脂肪变性，可见肝细胞点状坏死，炎症细胞浸润。III级肝小叶内肝细胞重度弥漫性脂肪变性，点状坏死多见或可见大片肝细胞坏死。结果非诺贝特0.lg/kg剂量能显著增加小鼠肝系数，荷丹片4.71g(指生药，下同)/kg、47.07g/kg、血脂康0.2g/kg和非诺贝特0.lg/kg剂量具有显著降低血清TG，荷丹片4.71g/kg和非诺贝特0.lg/kg剂量能显著降低肝组织TG，荷丹片4.71和47.07g/kg剂量显著增加肝组织GSH，荷丹片4.71、14.12g/kg和非诺贝特0.lg/kg剂量能显著降低肝组织MDA，与模型组比较，差异有显著性和非常显著性意义(P〈0.05和P〈0.01)。结果见表5、6、7。病理组织学检查，空白组肝组织结构正常，肝小叶结构清楚，细胞索排列整齐，肝血窦正常；模型组肝细胞肿胀，胞质内出现弥漫性的圆形脂滴，肝小叶界限模糊，小叶内出现多个点状或大片状坏死，汇管区见大量炎症细胞浸润。荷丹片47.07g/kg组肝细胞肿胀，脂肪变性及炎症细胞浸润均较模型对照组显著减轻，无大片状坏死。荷丹片14.12和4.71g/kg组时肝细胞肿胀较模型组减轻，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度改变不明显。非诺贝特O.lg/kg组和血脂康0.2g/kg组肝细胞肿胀，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度均显著降低。结果见表8。表5、荷丹片对小鼠急性酒精性脂肪模型的影响(x士s)组别剂量(g/kg)动物数(只)肝系数空白—100.042土0.004模型—100.044±0.005荷丹片4.71100.049±0.008荷丹片14.12100.052±0.012荷丹片47.07100.047±0.006血脂康0.2100.049±0.009非诺贝特0.1100.064±0.006**与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表6、荷丹片对小鼠急性酒精性脂肪肝模型的影响(x士s)剂量动物数血淸组别g)(只)ALT(U/L)TG(mmol/L)空白1030.73±9,78*1.764±0.340*模型—1043.05±13.732.399±0.706荷丹片4.711039.63±17.071.568土0.969"11荷丹片14.121033.50±20.421.836±0.652荷丹片47.071041.20±17.711.515±0.727*血脂康0,21031.95±19.181.704±0.693*非诺贝特0.11035.27±18.801.520i0.614"与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表7、荷丹片对小鼠急性酒精性脂肪肝模型的影响(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**<0.01表8、荷丹片对小鼠急性酒精性脂肪肝模型的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**P<0.012.3荷丹片对小鼠急性乙硫氨酸脂肪肝模型的影响方法将小鼠按体重随机分成7组，每组10只，分别为空白组、模型组、荷丹片低、中、高剂量组、复方蛋氨酸胆碱片组和血脂康组。供试品组灌胃给药，l次/天，空白组和模型组给予等容积蒸馏水，灌胃容积均为0.2ml/10g体重，连续给药10天；第10天，除空白组外，其余动物灌胃给予1.25%乙硫氨酸0.25g/kg造模，即刻禁食24h，造模后3小时，正常组和模型组给予蒸馏水，供试品组灌胃给药1次。禁食24h后小鼠眼球取血，室温静置10min，3500rmp离心15min，分离血清，按试剂盒说明分别测血清ALT、TG。脱颈椎处死小鼠，剖腹取肝脏，称其湿重，并取肝脏同部位组织约0.lg，精密称定，剪碎后加入9倍0.9%的氯化钠溶液，冰浴中手动制匀浆，3500rmp离心15min，按试剂盒说明测GSH、MDA和TG含量。另取肝脏左叶，用10%甲醛固定，HE染色，于光学显微镜下观察各组织形态学变化，拍摄照片。试验结果采用t检验和Ridit检验。肝损伤病理组织学分级标准如下。0级正常肝组织，无肝细胞变性、坏死，无炎症细胞浸润。I级肝小叶内肝细胞轻度脂肪变性，偶见肝细胞点状坏死。II级肝小叶内肝细胞中度脂肪变性，可见肝细胞点状坏死，炎症细胞浸润。III级肝小叶内肝细胞重度弥漫性脂肪变性，点状坏死多见或可见大片肝细胞坏死。结果荷丹片4.71、14.12和47.07g(指生药量，下同)/kg剂量能显著降低小鼠肝系数，荷丹片14.12、47.07g/kg、血脂康0.2g/kg和东宝甘泰1.5片/kg剂量具有显著降低血清ALT，东宝甘泰1.5片/kg剂量组具有显著增加血清TG，荷丹片47.07g/kg、血脂康0.2g/kg和东宝甘泰1.5片/kg剂量能显著降低肝组织TG，荷丹片14.12和47.07g/kg剂量显著增加肝组织GSH，与模型组比较，差异有显著性和非常显著性意义(P<0.05和P<0.01)。结果见表9、10、11。病理组织学检查，空白组肝组织结构正常，肝小叶结构清楚，细胞索排列整齐，肝血窦正常；模型组肝细胞肿胀，胞质内出现弥漫性的圆形脂滴，脂肪空泡，肝小叶界限模糊，小叶内出现多个点状或大片状坏死，汇管区见大量炎症细胞浸润。荷丹片14.12和47.07g/kg组肝细胞肿胀，脂肪变性及炎症细胞浸润均较模型对照组显著减轻，无大片状坏死。荷丹片4.71g/kg组时肝细胞肿胀较模型组减轻，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度改变不明显。东宝甘泰1.5片/kg组和血脂康0.2g/kg组肝细胞肿胀消失，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度均显著降低。结果见表12。表9、荷丹片对小鼠急性乙硫氨酸脂肪肝模型的影响(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表10、荷丹片对小鼠急性乙硫氨酸脂肪肝模型的影响(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表11、荷丹片对小鼠急性乙硫氨酸脂肪肝模型的影响(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表12、荷丹片对小鼠急性乙硫氨酸脂肪肝模型的影响组别剂量(g/kg)动物数(只)0级I级II级HI级Ridit值正常对照组—1073000.0001**模型对照组—100046—荷丹片4.711000910.0528荷丹片14.12100210.0247+荷丹片47.071012610.0163*东宝甘泰1.5片/kg1006400.0011**血脂康0.21003520.0440*与模型组比较，*P<0.05，**P<0.012.4荷丹片对大鼠慢性复合因素酒精性脂肪肝模型的影响方法将大鼠按体重随机分成7组，每组10只，分别为空白组、模型组、荷丹片低、中、高剂量组、血脂康胶囊组和非诺贝特片组。除空白组外，其余各组均灌胃给予高脂乳剂和56X白酒，灌胃体积均为5ml/kg，每天l次，连续9周，空白组灌胃给予等容量蒸馏水。连续造模5周后，各组均于每日上午灌胃给予高脂乳剂和56%白酒，下午灌胃给药，给药灌胃容积均为1.0ml/100g体重，1次/天，空白组和模型组给予等容积蒸馏水，连续给药4周。末次给药后禁食12h，大鼠腹主动脉取血，室温静置10min，3500rmp离心15min，分离血清，按试剂盒说明分别测血清ALT、TG、TCH、LDL、HDL。脱颈椎处死大鼠，剖腹取肝脏，称其湿重，并取肝脏同部位组织精密称定0.3g，剪碎后加入9倍0.9%的氯化钠溶液，冰浴中手动制匀桨，2000rmp离心10min，取上清液测GSH和MDA含量，并取肝脏同部位组织精密称定0.2g，剪碎后加入9倍丙酮乙醇(1:1)溶液中匀浆，3500rmp离心15min，取上清液TG、TCH。另取肝脏左叶，用10%甲醛固定，HE染色，于光学显微镜下观察各组织形态学变化，拍摄照片。试验结果采用t检验和Ridit检验。高脂乳剂猪油500g，胆固醇100g，胆酸33g，丙二醇150ml。肝损伤病理组织学分级标准如下。0级正常肝组织，无肝细胞变性、坏死，无炎症细胞浸润。I级肝小叶内肝细胞轻度脂肪变性，偶见肝细胞点状坏死。II级肝小叶内肝细胞中度脂肪变性，可见肝细胞点状坏死，炎症细胞浸润。III级肝小叶内肝细胞重度弥漫性脂肪变性，点状坏死多见或可见大片肝细胞坏死。结果非诺贝特0.2g/kg剂量能显著增加大鼠肝系数，荷丹片3.53、14.02g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清ALT;荷丹片14.12g/kg，血脂康0.lg/kg和非诺贝特0.05g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清TG;荷丹片7.06、14.12g/kg和血脂康0.lg/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清TCH;荷丹片7.06、14.12g/kg和血脂康0.lg/kg剂量能显著增加脂肪肝模型大鼠血清HDL，非诺贝特0.05g/kg剂量组则降低；荷丹片7.06、14.12g/kg和血脂康0.lg/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清LDL;荷丹片14.12g/kg和非诺贝特0.05g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠肝组织MDA;荷丹片14.12g/kg和非诺贝特0.05g/kg剂量能显著增加脂肪肝模型大鼠肝组织GSH;荷丹片7.06、14.12g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠肝组织CHO，而非诺贝特0.05g/kg剂量增加大鼠肝组织CHO;荷丹片7.06、14.12g/kg、血脂康0.lg/kg和非诺贝特0.05g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠肝组织TG;与模型组比较，差异有显著性和非常显著性意义(P<0.05和P<0.01)。结果见表13、14、15、16、17。大体病理检查，空白组肝组织外观红褐色，质软富弹性。模型组大鼠肝脏色泽稍色黄，肝脏肿大，边缘钝厚，质脆。病理组织学检查，空白组肝组织结构正常，肝小叶结构清楚，细胞索排列整齐，肝血窦正常；模型组中央静脉周围的肝细胞肿胀，胞浆内出现脂肪空泡，肝小叶界限模糊，小叶内出现多个点状或大片状坏死，汇管区见大量炎症细胞浸润。荷丹片3.53和14.12g/kg组肝细胞肿胀不明显，脂肪变性及炎症细胞浸润均较模型对照组显著减轻，无大片状坏死。荷丹片7.06g/kg组时肝细胞肿胀较模型组减轻，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度改变不明显。血脂康O.lg/kg组肝细胞肿胀，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度均显著降低。结果见表18。表13、荷丹片对复合因素酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表14、荷丹片对复合因素酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表15、荷丹片对复合因素酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表17、荷丹片对复合因素酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x±s)组别剂量动物数肝组织(g/kg)(只)CHO(腿ol/L)TG(mmol/L)空白—102.177±0.462**1.051±0.347*模型—103.927±1.3302.583±1.825荷丹片3.53103.745±0.7912.466±0.811荷丹片7.06102.437±1.390*1.209±0.598*荷丹片14.12102.557±0.532"1.027土0.665*血脂康0.1102.914±0.8610.774士0.500"非诺贝特0.05106.515±1.052**0.831±0.357**与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表18、荷丹片对大鼠复合因素酒精性脂肪肝模型的影响组别剂量动物数(只)一++++++RIDIT值空白—10100000,0001"模型—100262—荷丹片3.531008200.0132*荷丹片7.061006400.0630荷丹片14.12100了300.0301*血脂康0.1100300.0301*非诺贝特0.051005140.7567与模型组比较，*P<0.05，**P<0.012.5荷丹片对大鼠慢性非酒精性脂肪肝模型的影响方法将大鼠按体重随机分成7组，每组10只，分别为空白组、模型组、荷丹片低、中、高剂量组、血脂康胶囊组和非诺贝特片组。除空白组外，其余各组均灌胃给予高脂乳剂和高糖溶液，灌胃容积均为5ml/kg，每日l次，连续8周。连续造模4周后，各组均于每日上午灌胃给予高糖高脂乳剂，下午灌胃给药，灌胃给药容积均为1.0ml/100g，空白组和模型组给予等容积蒸馏水，1次/天，连续给药4周。末次给药后禁食12h，大鼠腹主动脉取血，室温静置10min，3500rmp离心15min，分离血清，按试剂盒说明分别测血清ALT、TG、TCH、LDL、HDL。脱颈椎处死大鼠，剖腹取肝脏，称其湿重，并取肝脏同部位组织精密称定0.3g，剪碎后加入9倍0.9%的氯化钠溶液，冰浴中手动制匀浆，2000rmp离心10min，取上清液测GSH和MDA含量，并取肝脏同部位组织精密称定0.2g，剪碎后加入9倍丙酮乙醇(1:l)溶液中匀浆，3500rmp离心15min，取上清液TG、TCH。另取肝脏左叶，用10%甲醛固定，HE染色，于光学显微镜下观察各组织形态学变化，拍摄照片。试验结果采用t检验和Ridit检验。高脂乳剂玉米油400g、胆固醇100g、胆酸钠33g、丙二醇300ml。高糖溶液奶粉40g、蔗糖75g、蒸馏水100ml。肝损伤病理组织学分级标准如下。0级正常肝组织，无肝细胞变性、坏死，无炎症细胞浸润。I级肝小叶内肝细胞轻度脂肪变性，偶见肝细胞点状坏死。II级肝小叶内肝细胞中度脂肪变性，可见肝细胞点状坏死，炎症细胞浸润。III级肝小叶内肝细胞重度弥漫性脂肪变性，点状坏死多见或可见大片肝细胞坏死。结果非诺贝特O.2g/kg剂量能显著增加大鼠肝系数，荷丹片3.53、7.06、14.02g/kg和血脂康O.lg/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清ALT;荷丹片7.06、14.12g/kg，血脂康0.lg/kg和非诺贝特0.05g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清TG;荷丹片3.53、7.06、14.12g/kg和血脂康0.lg/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清TCH，而非诺贝特0.05g/kg增加血清TCH;荷丹片3.53、7.06、14.12g/kg能显著增加脂肪肝模型大鼠血清HDL，非诺贝特0.05g/kg剂量则降低血清HDL;荷丹片3.53、7.06、14.12g/kg和血脂康0.lg/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清LDL，而非诺贝特0.05g/kg剂量则增加血清LDL;荷丹片14.12g/kg和血脂康0.lg/kg能显著降低脂肪肝模型大鼠肝组织MDA;非诺贝特0.05g/kg能显著增加脂肪肝模型大鼠肝组织GSH;荷丹片7.06、14.12g/kg和血脂康0.lg/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠肝组织CHO;荷丹片3.53、14.12g/kg、血脂康0.lg/kg和非诺贝特0.05g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠肝组织TG;与模型组比较，差异有显著性和非常显著性意义(P<0.05和P<0.01)。结果见表19、20、21、22、23。大体病理检查，空白组肝组织外观红褐色，质软富弹性。模型组大鼠肝脏色泽稍色黄，肝脏肿大，边缘钝厚，质脆。病理组织学检查，空白组肝组织结构正常，肝小叶结构清楚，细胞索排列整齐，肝血窦正常，核圆，位于细胞中央，胞质均匀；模型组中央静脉周围的肝细胞肿胀，胞浆内出现脂肪空泡，肝小叶界限模糊，小叶内出现多个点状或大片状坏死，汇管区见大量炎症细胞浸润。荷丹片7.06和14.12g/kg组肝细胞肿胀不明显，脂肪变性及炎症细胞浸润均较模型对照组显著减轻，无大片状坏死。荷丹片3.53g/kg组时肝细胞肿胀较模型组减轻，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度改变不明显。血脂康O.lg/kg组肝细胞肿胀，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度均显著降低。结果见表24。表19、荷丹片对非酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表20、荷丹片对非酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x士s)组别剂量动物数(只)血清ALT(U/L)TG(mmol/L)TCH(mmol/L)空白—1029.51±5.85**1.308±0.230**1.413±0.17O**模型—1046.44±12.651.802±0.4582.513±0.584荷丹片3.531030.03±13.37*1.501±0.3191.950±0.350*荷丹片7.061035.09±7.87*1.183±0.263**L997±0.350*荷丹片14.12]035.09±7.05*1.328±0.420*2.075±0.249*血脂康0.1033.34±10.49*1.351±0.326*2.024±0.252*非诺贝特0.051050.63±12.450.7479±0.1892**3.390±0.619**与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表21、荷丹片对非酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x±s),。，剂量动物数血清组别"--~__(g/kg)_(只)HDL(mmol/L)LDL(mmol/L)空白—100.4868±0.0677*0.7202±0細4**模型—100.382htO.1162L3588±0.2978荷丹片3.53100.6359±0.1819**1.0928±0.1642*荷丹片7.06100.4944±0.0915*1.0529±0.1313**荷丹片14.12100.6031±0.2851*1.0845±0.2299*血脂康0.1100.4327±0.12591.1151士0.1995^非诺贝特0.05100.1781±0.0715**1.8465±0.4120**与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表22、荷丹片对非酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x土s)组别剂量动物数肝组织(g/kg)(只)MDA(nmol阔GSH(mg/ml)空白—1014.250±6.706"0.159±0.016**模型—1027.417±12.7800.128±0.013荷丹片3.531018.917±10.0310.141±0.015荷丹片7.061016.250±13.5980.137±0.015荷丹片14.121015.917±5.478**0.137±0扁血脂康0.11015.750±9.183*0.138±0.022非诺贝特0.051022.833±12.0520.158±0.024**与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表23、荷丹片对非酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01表24、荷丹片对大鼠非酒精性脂肪肝模型的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>与模型组比较，*P<0.05，**P<0.013结论综上所述，荷丹片具有降低脂肪肝小鼠模型血清ALT和TG及肝组织TG值；荷丹片能显著降低脂肪肝模型大鼠血清ALT，降低血清TG，TCH和LDL，增加血清HDL，降低肝组织CHO和TG。同时，可减轻脂肪肝模型小鼠、大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度。提示荷丹片对脂肪肝具有一定得疗效。荷丹片47.07g/kg剂量能降低CC14脂肪肝模型小鼠血清ALT和肝组织TG，荷丹片4.71和14.12g/kg剂量组能降低其血清TG。荷丹片4.71g/kg、47.07g/kg剂量能降低酒精性脂肪肝模型小鼠血清TG和增加肝组织GSH，荷丹片4.71g/kg剂量能降低其肝组织TG，荷丹片4.71、14.12g/kg剂量能显著降低肝组织MDA。荷丹片4.71、14.12和47.07g/kg剂量能降低乙硫氨酸脂肪肝模型小鼠肝系数，荷丹片14.12、47.07g/kg剂量能降低血清ALT和增加肝组织GSH，荷丹片47.07g/kg剂量能降低肝组织TG。荷丹片3.53、14.02g/kg剂量能显著降低复合因素酒精性脂肪肝模型大鼠血清ALT，荷丹片14.12g/kg剂量能显著降低其血清TG，荷丹片7.06和14.12g/kg剂量能显著降低其血清TCH和LDL，荷丹片7.06和14.12g/kg能显著增加其血清HDL，荷丹片14.12g/kg能显著降低其肝组织MDA和增加GSH，荷丹片7.06和14.12g/kg剂量能显著降低其肝组织CHO和TG。荷丹片3.53、7.06和14.02g/kg剂量能显著降低非酒精性脂肪肝模型大鼠血清ALT和TCH，荷丹片7.06和14.12g/kg剂量能显著降低其血清TG，荷丹片3.53、7.06和14.12g/kg能显著增加其血清HDL和降低LDL，荷丹片14.12g/kg能显著降低其肝组织MDA，荷丹片7.06和14.12g/kg剂量能显著降低其肝组织TCH;荷丹片3.53和14.12g/kg剂量能显著降低其肝组织TG。病理组织学检查，荷丹片14.12g/kg和47.07g/kg剂量可减轻CClJ旨肪肝模型小鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片47.07g/kg剂量可减轻酒精性脂肪肝模型小鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片14.12g/kg和47.07g/kg剂量可减轻乙硫氨酸脂肪肝模型小鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度。荷丹片14.12g/kg剂量可减轻酒精性和非酒精性脂肪肝模型大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片3.53g/kg剂量可减轻复合因素酒精性脂肪肝模型大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片7.06g/kg剂量可减轻非酒精性脂肪肝模型大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度。实施例2:本发明药物是由以下组分制成(用量为重量份)荷叶50丹参8山楂30番泻叶3补骨脂IO本发明药物荷丹片，每片重0.73g，含生药14.125g，成人一日3次，每次1片，成人一日服用量为3片，即42.375g生药/日。实施例3:本发明药物是由以下组分制成(用量为重量份)荷叶30丹参IO山楂20番泻叶3补骨脂IO本发明药物荷丹片，每片重0.73g，含生药14.125g，成人一日3次，每次3片，成人一日服用量为9片，S卩127.125g生药/日。权利要求荷丹片在治疗脂肪肝的应用，荷丹片是由以下组分制成(用量为重量份)荷叶1～100丹参1～100山楂1～100番泻叶1～100补骨脂1～100每片荷丹片重0.73g，含生药14.125g，成人一日3次，每次1-4片，成人一日服用量为3-12片，即42.375---169.5g生药/日。2.如权利要求1所述荷丹片在治疗脂肪肝的应用，其特征在于荷丹片是由以下组分制成(用量为重量份)荷叶60丹参IO山楂30番泻叶3补骨脂IO。3.如权利要求1或2所述荷丹片在治疗脂肪肝的应用，其特征在于每片荷丹片重0.73g，含生药14.125g，成人一日3次，每次1片，即42.375g生药/日。4.如权利要求1或2所述荷丹片在治疗脂肪肝的应用，其特征在于每片荷丹片重0.73g，含生药14.125g，成人一日3次，每次3片，即127.125g生药/日。全文摘要荷丹片在治疗脂肪肝的应用，荷丹片是由以下组分制成(用量为重量份)荷叶60丹参10山楂30番泻叶3补骨脂10，成人一日服用量为3-12片，即42.375---169.5g生药/日。荷丹片具有降低脂肪肝小鼠模型血清ALT和TG及肝组织TG值；荷丹片能显著降低脂肪肝模型大鼠血清ALT，降低血清TG，TCH和LDL，增加血清HDL，降低肝组织CHO和TG。同时，可减轻脂肪肝模型小鼠、大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度。提示荷丹片对脂肪肝具有一定得疗效。文档编号A61K36/734GK101708236SQ200910186709公开日2010年5月19日申请日期2009年12月14日优先权日2009年12月14日发明者何凯南申请人:南昌济顺制药有限公司