治疗角膜病的汉防己甲素的制作方法
专利名称：治疗角膜病的汉防己甲素的制作方法
技术领域：
本发明涉及汉防己甲素在制备治疗角膜病制剂中的应用。本发明所涉及的汉防己甲素的英文名称为Tetrandrine，其分子式为C38H42N206，分子量为622. 77，结构式为 本发明所涉及的治疗角膜病的汉防己甲素制剂为全身用药制剂和局部用药制剂。
本发明所涉及的治疗角膜病的汉防己甲素全身用药制剂包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、混悬剂、注射剂。 本发明所涉及的治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂包括但不限于眼部给药制剂、黏膜给药制剂、贴剂、透皮吸收剂、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中本发明提供了一种治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液及其制备方法，特别是治疗角膜斑翳的汉防己甲素滴眼液及其制备方法。
具体地说，在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液中含有汉防己甲素1 30重量份，优选地为3 25，特别优选地为5、 15 ;含有抗氧增效剂1 10重量份，优选地为1 5重量份，特别优选地为2. 5重量份；含有防腐剂0. 1 5重量份，优选地为0. 3 1重量份，特别优选地为0. 75重量份；含有黏度剂5 50重量份，优选地为15 30重量份，特别优选地为25重量份；含有渗透压调节剂35 55重量份，优选地为40 50重量份，特别优选地为40重量份；含有缓冲剂0 10重量份；还含有助溶稳定剂和PH调节剂。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，可用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液生理上可接受的抗氧增效剂包括但不限于维生素C、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠或其混合物，优选地为亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠或其混合物，特别优选地为乙二胺四乙酸二钠。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，可用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液生理上可接受的防腐剂包括但不限于苯扎氯铵、尼泊金乙酯或其混合物，优选地为苯扎氯铵。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，可用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液生理上可接受的黏度剂包括但不限于羟丙甲纤维素、聚乙烯吡咯烷酮K30或其混合物，优选地为羟丙甲纤维素E50-LV、羟丙甲纤维素60RT50,特别优选地为羟丙甲纤维素60RT50。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，可用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液生理上可接受的渗透压调节剂包括但不限于甘露醇、氯化钠、葡萄糖或其混合物，优选地为氯化钠、甘露醇，特别优选地为氯化钠。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，可用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液生理上可接受的缓冲剂包括但不限于磷酸盐缓冲液、硼酸_硼砂缓冲液、硼酸_醋酸钠缓冲液或其混合物。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，可用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液生理上可接受的助溶稳定剂包括但不限于盐酸、乳酸、酒石酸、枸橼酸或其混合物，优选地为盐酸、乳酸，特别优选地为乳酸(1 — 10)溶液。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，可用于治疗角膜病的汉防己甲素滴
眼液生理上可接受的pH调节剂包括但不限于氢氧化钠，优选30%氢氧化钠溶液。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，汉防己甲素滴眼液的制备方法为
按重量份数配比分别称取汉防己甲素原料药，粉碎，过80目筛，制成原料药粉；取助溶稳定
剂，用注射用水配制成助溶稳定剂溶液；称取黏度剂，缓慢加入热注射用水中，分散均匀后
加入冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用0.8ym水系滤膜过滤二次，制成黏度剂溶液；称
取防腐剂、抗氧增效剂和渗透压调节剂，加入注射用水使溶解，加入缓冲剂，制成混合溶液；
将原料药粉加入到助溶稳定剂溶液中，搅拌均匀后加入到黏度剂溶液中，搅匀，用pH调节
剂调节pH值至6. 0，加入混合溶液，搅匀，用pH调节剂调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过
滤二次，灌装，包装，即得。 本发明有益的效果 1、本发明发现了汉防己甲素治疗角膜病的作用，并在制备治疗角膜病的汉防己甲
6素制剂中应用。 2、在治疗角膜病的汉防己甲素制剂中，本发明提供了一种治疗角膜病的汉防己甲
素滴眼液及其制备方法。 3、汉防己甲素滴眼液质量可控 (1)有关物质检查方法 精密量取汉防己甲素滴眼液2. 5mL于10mL量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1. 0mL，置100mL量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。精密量取对照溶液20 ii L，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使汉防己甲素峰高约为满量程的10 % ，再精密量取上述溶液各20 ii L，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至汉防己甲素主峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，扣除空白辅料溶液的倒峰计算，最大杂质的峰面积应不大于自身对照溶液主峰面积的8倍，其他杂质的峰面积之和不大于自身对照溶液主峰面积的1.5倍。
(2)pH值 取汉防己甲素滴眼液，照pH值测定法(中国药典2005年版二部附VI H)测定，pH值为5. 0 7.0。
(3)可见异物 取汉防己甲素滴眼液，照可见异物检查法(中国药典2005年版二部附IX H)检查，
符合规定。
(4)渗透压 取汉防己甲素滴眼液，照渗透压摩尔浓度测定法(中国药典2005年版二部附IXG)测定，结果表明汉防己甲素滴眼液与泪液等渗，符合规定。
(5)含量测定 照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇_磷酸盐缓冲液_三乙胺(取磷酸二氢铵2. 3g，加水1000mL溶解，加三乙胺，用磷酸调pH至7. 0)(71 : 29 : 0.3)为流动相；检测波长为233nm，流速1. 3mL/min。理论板数按TDR峰计算应不低于2000。 测定法精密量取汉防己甲素滴眼液0. lmL，置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取本发明汉防己甲素对照品约5mg，精密称定，置50mL量瓶中，加流动相适量，超声5min使汉防己甲素溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取lmL置lOmL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别量取上述溶液各20 ii L注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。结果，汉防己甲素滴眼液中含汉防己甲素为标示量的95. 0% 105. 0%。
4、汉防己甲素滴眼液质量稳定 以外观性状、有关物质、pH、渗透压、可见异物、含量为指标，考察汉防己甲素滴眼液的稳定性 (1)影响因素试验取本发明汉防己甲素滴眼液置于高温(6(TC和4(TC )、光照(4500士500LX)环境中试验10天，分别于第0、5、10天取样检测。结果，汉防己甲素滴眼液在4(TC和6(TC条件下放置10天，溶液颜色略有加深，pH值下降0. 3 0. 4，渗透压、有关物
7质、可见异物、含量等无明显变化。 (2)冻融试验取汉防己甲素滴眼液在_10°C -2(TC条件下放置2天，然后加温至4(TC考察2天，如此重复试验3次。结果，汉防己甲素在-2(TC条件下冷冻后，能够复融成澄明溶液，其溶解度不受影响，PH值略有降低，其他各项指标均无明显变化，稳定性良好。
(3)加速试验取汉防己甲素滴眼液置于4(TC、相对湿度20%和30%的条件下试验6个月，分别于第0、1、2、3、6个月取样检测。结果，汉防己甲素滴眼液各项考察指标均无明显变化，质量稳定。 (4)长期试验取汉防己甲素滴眼液置于25t:、相对湿度60%的条件下试验36个月，分别于第0、3、6、9、12、18、24、36个月取样检测。结果，汉防己甲素滴眼液各项考察指标无明显变化，质量稳定。 5、汉防己甲素滴眼液安全性好以新西兰白兔眼为动物模型，对汉防己甲素滴眼液的眼剌激性进行试验。结果，在体法用眼剌激性实验评价眼剌激性，汉防己甲素滴眼液单次给药或重复给药无眼剌激性；离体法用角膜水化值为评价指标，汉防己甲素滴眼液重复多次给药角膜水化值无明显变化，对角膜无剌激性。
6、汉防己甲素滴眼液药效显著 (1)汉防己甲素滴眼液对细菌性角膜炎具有明显作用 用金黄色葡萄球菌及绿脓杆菌标准菌株感染新西兰白兔，制成细菌性角膜炎动物模型，用比浊法测定细菌数，用生理盐水为对照，观察给予汉防己甲素滴眼后兔外眼形态学和角膜上细菌生长情况。结果表明，汉防己甲素滴眼液对接种金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌的兔眼部出现的炎症反应有明显的抑制作用，明显减少感染的细菌数，对角膜有明显的保护作用。
(2)汉防己甲素滴眼液对角膜烟曲菌病有明显治疗作用 角膜划痕后板层内注射致角膜烟曲菌病。将烟曲菌悬液(107ml)0. lml注入新西兰白兔一只眼角膜基层内，至4mm区域水肿混浊为止，另一只眼以同法注入生理盐水作为对照，制成角膜烟曲病动物模型，给予汉防己甲素滴眼液和0. 25%氯霉素滴眼液，每日用裂隙灯观察其角膜、前房、虹膜及晶体等变化，动物接种后分别于1、2、4、6、8U0、15、20、25及30天采用耳静脉注射空气法处死，立即取材制备组织学标本。电镜标本仅限于1、2、4、6及8天者，同时取正常及对照眼角膜检查。取材后，将角膜组织于Carnoy液中固定12小时，石蜡包埋，HE染色，用光镜观察。取材后，立即将角膜置入2. 5%戊二醛液中固定2小时，然后切成4mmX5mm组织块，经梯度乙醇脱水、临界点干燥及真空喷镀金膜后用扫描电镜观察。将角膜组织于2. 5 %戊二醛液中固定2小时，切成2mmX 3mm小块，1 %四氧化锇后固定，梯度乙醇脱水，环氧树脂包埋，半薄切片定位后超薄切片，柠檬酸铅及醋酸铀双重染色后于透射电镜下观察。结果表明，汉防己甲素滴眼液可以有效抑制兔眼角膜烟曲菌感染，阻止角膜瘢痕形成，对角膜基质纤维有明显保护作用。
(3)汉防己甲素滴眼液对痢疾杆菌诱发的角膜炎的作用 将有毒痢疾菌株的新鲜斜面培养物制成一定浓度的盐水菌悬液，滴入豚鼠角膜结合膜囊内，制成痢疾杆菌感染实验动物模型，用生理盐水作为对照，观察汉防己甲素滴眼液对痢疾杆菌诱发角膜炎的作用。结果表明，汉防己甲素滴眼液对痢疾杆菌有明显抑制作用，对疾病杆菌所致角膜炎有明显治疗作用，对角膜具有较好的保护作用。
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(4)汉防己甲素滴眼液对角膜斑翳有显著治疗作用 21名患者，男女均有，年龄25 52岁，经视力检查、角膜内皮细胞形态和密度检查、角膜地形图检查、裂隙灯检查、A超检查确诊为角膜斑翳，均为病毒性角膜溃疡、细菌性角膜溃疡、外伤性角膜溃疡或化学剌激性角膜溃疡愈合后残留角膜斑翳。用汉防己甲素滴眼液每天3 6次，连续30天，用狄奥宁软膏为对照。结果表明，汉防己甲素滴眼液对角膜斑翳有明显治疗作用，患者斑翳退净，视力恢复，角膜清澈透明，角膜中央厚度恢复正常。
7、汉防己甲素滴眼液眼部用药方案设计合理 用微量注射器给新西兰白兔双眼结膜囊内滴入50iU 0.5%汉防己甲素滴眼液，轻轻闭合双睑约lmin，滴眼后分别于O. 167、0. 5、1. 0、1. 25、1. 5、2、2. 5、3. 0、4. 0和12. Oh耳
缘静脉栓塞处死动物，用生理盐水冲洗结膜囊，立即抽取房水，取角膜组织，并用滤纸吸干后称重。所有样品均储存于-2(TC冰箱中备用。
(1)角膜样品的处理 取兔眼角膜，生理盐水冲洗表面，吸干水分，称重，将角膜剪碎，加甲醇0. 8ml，匀浆，漩涡混合3min， 15000r min—1离心20min，取上清液作为检测液。[ooee] (2)房水样品处理取房水200 ii l，加入甲醇200 y l，漩涡混合3min， 15000r min—1离心20min，取上
清液作为检测液。 采用RP-HPLC法检测角膜和房水中的汉防己甲素浓度，用甲醇沉淀蛋白质。结果表明，角膜组织与房水中药物浓度的变化均符合血管外给药一室模型一级动力学过程，汉防己甲素滴眼液渗透吸收迅速，滴药后10min时含量最高为253. 6±36. 8 y g/g，房水中1. 5h时最高为98. 2±10. 4ng/ml，角膜组织中药物浓度半衰期为2. 3h，房水中为1. lh，时滞为0. 3h ;兔眼局部应用本发明汉防己甲素滴眼液滴眼后0. 167h，角膜组织中的药物含量达到最高水平；汉防己甲素滴眼液滴入结膜囊后，O. 167h检测出汉防己甲素浓度在最低限以下，1. 5h达峰值，随后浓度下降。
具体实施例方式
下面以实施例来进一步描述本发明汉防己甲素在制备治疗角膜病制剂中的应用，对于本领域的技术人员而言，应当理解为下列实施例不构成对本发明保护范围的限制，在本发明的教导下，根据现有技术而做出的修改或替换都属于本发明保护的范围内。
实施例1 汉防己甲素 5.0g
羟丙甲纤维素60RT50 25. Og 苯扎氯铵 0. 75g 乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml乳酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素5mg，包装，即得。 实施例2 汉防己甲素 5. Og 羟丙甲纤维素E50-LV 25. Og 尼泊金乙酯 0. 75g 乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素E50-LV缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素E50-LV溶液；按处方量称取尼泊金乙酯、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml乳酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素E50-LV溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素5mg，包装，即得。 实施例3 汉防己甲素 5. Og 羟丙甲纤维素60RT50 25. Og 苯扎氯铵 0. 75g 焦亚硫酸钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8iim水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、焦亚 硫酸钠和氯化钠，加2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到100ml乳酸 (1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅匀，用30%氢 氧化钠溶液调节pH值至6. 0，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml中含汉防己甲
素5mg，包装，即得。 实施例4 _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8iim水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、亚硫 酸钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到100ml乳酸 (1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅匀，用30%氢 氧化钠溶液调节pH值至6. 0，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶液调节pH值 至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml中含汉防己甲 素5mg，包装，即得。
实施例5 汉防己甲素 5.0g
羟丙甲纤维素60RT50 25. Og
苯扎氯铵 0. 75g 亚硫酸钠 2.5g
葡萄糖 50g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、亚硫 酸钠和葡萄糖，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到100ml乳酸 (1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅匀，用30%氢 氧化钠溶液调节pH值至6. 0，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶液调节pH值 至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml中含汉防己甲 素5mg，包装，即得。
实施例6 汉防己甲素 5.0g
羟丙甲纤维素60RT50 25. Og
汉防己甲素 羟丙甲纤维素60RT50
5. Og 25. Og 0. 75g 2. 5g
40g
苯扎氯铵 亚硫酸钠 氯化钠
苯扎氯铵 [cm9] 亚硫酸钠
氯化钠
0. 75g 2. 5g
40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取酒 石酸，用注射用水配制成酒石酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、亚硫 酸钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到100ml酒石酸 (1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅匀，用30%氢 氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶液调节pH值 至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml中含汉防己甲 素5mg，包装，即得。
实施例7 汉防己甲素 5.0g
羟丙甲纤维素60RT50 25. Og
苯扎氯铵 0. 75g 乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取枸 橼酸，用注射用水配制成枸橼酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml枸橼酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素5mg，包装，即得。实施例8汉防己甲素5. Og羟丙甲纤维素60RT5025. Og苯扎氯铵0. 75g亚硫酸钠2. 5g氯化钠40g用注射用水制成5000ml
制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取枸 橼酸，用注射用水配制成枸橼酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 ii m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、亚硫 酸钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到100ml枸橼酸 (1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅匀，用30%氢 氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶液调节pH值 至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml中含汉防己甲 素5mg，包装，即得。
实施例9 汉防己甲素 5.0g
羟丙甲纤维素E50-LV 25. Og
尼泊金乙酯 0. 75g 乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取酒 石酸，用注射用水配制成酒石酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素E50-LV缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 ii m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素E50-LV溶液；按处方量称取尼泊金乙酯、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml酒石酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素E50-LV溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. 0，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素5mg，包装，即得。 实施例10 汉防己甲素 5.0g 羟丙甲纤维素E50-LV 25. Og 尼泊金乙酯 0. 75g 乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取枸 橼酸，用注射用水配制成枸橼酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素E50-LV缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 ii m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素E50-LV溶液；按处方量称取尼泊金乙酯、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到
13100ml枸橼酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素E50-LV溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素5mg，包装，即得。 实施例11 汉防己甲素 10. Og 羟丙甲纤维素60RT50 25. Og 苯扎氯铵 0.75g 乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml乳酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素lOmg，包装，即得。 实施例12 汉防己甲素 15. Og 羟丙甲纤维素60RT50 25. Og 苯扎氯铵 0.75g 乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml乳酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素15mg，包装，即得。
实施例13
汉防己甲素
羟丙甲纤维素60RT50
苯扎氯铵
乙二胺四乙酸二钠
氯化钠
25. Og 25. Og 0. 75g 2. 5g
40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml乳酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素25mg，包装，即得。
实施例14 汉防己甲素 30. Og 羟丙甲纤维素60RT50 25. Og
苯扎氯铵 0.75g
乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml乳酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素30mg，包装，即得。
权利要求
治疗角膜病的汉防己甲素，其特征在于它的英文名称为Tetrandrine，分子式为C38H42N2O6，分子量为622.77，结构式为F2009101868260C00011.tif
2. 汉防己甲素在制备治疗角膜病制剂中的应用，其特征在于这种用于治疗角膜病的汉 防己甲素制剂为全身用药制剂，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、混悬剂、注射剂。
3. 权利要求2所述的汉防己甲素在制备治疗角膜病制剂中的应用，其特征在于这种 用于治疗角膜病的汉防己甲素制剂为局部用药制剂，包括眼部给药制剂、黏膜给药制剂、贴 剂、透皮吸收剂、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂。
4. 权利要求3所述的用于治疗角膜病的汉防己甲素眼部给药制剂，其特征在于它是一 种汉防己甲素滴眼液。
5. 权利要求4所述的用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液，其特征在于它是汉防己甲 素原料药与抗氧增效剂、防腐剂、黏度剂、渗透压调节剂、缓冲剂、助溶稳定剂和pH调节剂 制成的滴眼液；在这种滴眼液中，含有汉防己甲素的重量份数为1 30，含有抗氧增效剂的 重量份数为1 IO，含有防腐剂的重量份数为0. 1 5，含有黏度剂的重量份数为5 50， 含有渗透压调节剂的重量份数为35 55，含有缓冲剂的重量份数为0 10 ;所述的抗氧增 效剂为维生素C、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠或其混合物；所述的防腐剂为 苯扎氯铵、尼泊金乙酯或其混合物；所述的黏度剂为羟丙甲纤维素、聚乙烯吡咯烷酮K30或 其混合物；所述的渗透压调节剂为甘露醇、氯化钠、葡萄糖或其混合物；所述的缓冲剂为磷 酸盐缓冲液、硼酸_硼砂缓冲液、硼酸_醋酸钠缓冲液或其混合物；所述的助溶稳定剂为盐 酸、乳酸、酒石酸、枸橼酸或其混合物；所述的PH调节剂为氢氧化钠。
6. 权利要求5所述的用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液，其特征在于它的制备方法 是按重量份数配比分别称取汉防己甲素原料药，粉碎，过80目筛，制成原料药粉；取助溶稳 定剂，用注射用水配制成助溶稳定剂溶液；称取黏度剂，缓慢加入热注射用水中，分散均匀 后加入冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用0.8ym水系滤膜过滤二次，制成黏度剂溶液； 称取防腐剂、抗氧增效剂和渗透压调节剂，加入注射用水使溶解，加入缓冲剂，制成混合溶 液；将原料药粉加入到助溶稳定剂溶液中，搅拌均匀后加入到黏度剂溶液中，搅匀，用PH调 节剂调节pH值至6. 0，加入混合溶液，搅匀，用pH调节剂调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜 过滤二次，灌装，包装。C38H42N206，分子量为622. 77，结构式为全文摘要
本发明公开了治疗角膜病的汉防己甲素及其在制备治疗角膜病制剂中的应用。这种治疗角膜病的汉防己甲素制剂为全身用药和局部用药制剂。在治疗角膜病的汉防己甲素制剂局部用药制剂中，本发明公开了一种由汉防己甲素与抗氧增效剂、防腐剂、黏度剂、渗透压调节剂、缓冲剂、助溶稳定剂和pH调节剂制成的用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液，这种滴眼液质量稳定可控、安全性好、无眼无刺激性、药效显著，角膜组织与房水中药物浓度的变化均符合血管外给药一室模型一级动力学过程，汉防己甲素滴眼液渗透吸收迅速，眼部给药方案设计合理。
文档编号A61K31/4748GK101744817SQ20091018682
公开日2010年6月23日 申请日期2009年12月28日 优先权日2009年12月28日
发明者刘孝乐, 朱丹 申请人:南昌弘益科技有限公司
技术领域：
本发明涉及汉防己甲素在制备治疗角膜病制剂中的应用。本发明所涉及的汉防己甲素的英文名称为Tetrandrine，其分子式为C38H42N206，分子量为622. 77，结构式为 本发明所涉及的治疗角膜病的汉防己甲素制剂为全身用药制剂和局部用药制剂。
本发明所涉及的治疗角膜病的汉防己甲素全身用药制剂包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、混悬剂、注射剂。 本发明所涉及的治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂包括但不限于眼部给药制剂、黏膜给药制剂、贴剂、透皮吸收剂、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中本发明提供了一种治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液及其制备方法，特别是治疗角膜斑翳的汉防己甲素滴眼液及其制备方法。
具体地说，在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液中含有汉防己甲素1 30重量份，优选地为3 25，特别优选地为5、 15 ;含有抗氧增效剂1 10重量份，优选地为1 5重量份，特别优选地为2. 5重量份；含有防腐剂0. 1 5重量份，优选地为0. 3 1重量份，特别优选地为0. 75重量份；含有黏度剂5 50重量份，优选地为15 30重量份，特别优选地为25重量份；含有渗透压调节剂35 55重量份，优选地为40 50重量份，特别优选地为40重量份；含有缓冲剂0 10重量份；还含有助溶稳定剂和PH调节剂。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，可用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液生理上可接受的抗氧增效剂包括但不限于维生素C、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠或其混合物，优选地为亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠或其混合物，特别优选地为乙二胺四乙酸二钠。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，可用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液生理上可接受的防腐剂包括但不限于苯扎氯铵、尼泊金乙酯或其混合物，优选地为苯扎氯铵。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，可用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液生理上可接受的黏度剂包括但不限于羟丙甲纤维素、聚乙烯吡咯烷酮K30或其混合物，优选地为羟丙甲纤维素E50-LV、羟丙甲纤维素60RT50,特别优选地为羟丙甲纤维素60RT50。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，可用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液生理上可接受的渗透压调节剂包括但不限于甘露醇、氯化钠、葡萄糖或其混合物，优选地为氯化钠、甘露醇，特别优选地为氯化钠。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，可用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液生理上可接受的缓冲剂包括但不限于磷酸盐缓冲液、硼酸_硼砂缓冲液、硼酸_醋酸钠缓冲液或其混合物。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，可用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液生理上可接受的助溶稳定剂包括但不限于盐酸、乳酸、酒石酸、枸橼酸或其混合物，优选地为盐酸、乳酸，特别优选地为乳酸(1 — 10)溶液。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，可用于治疗角膜病的汉防己甲素滴
眼液生理上可接受的pH调节剂包括但不限于氢氧化钠，优选30%氢氧化钠溶液。 在治疗角膜病的汉防己甲素局部用药制剂中，汉防己甲素滴眼液的制备方法为
按重量份数配比分别称取汉防己甲素原料药，粉碎，过80目筛，制成原料药粉；取助溶稳定
剂，用注射用水配制成助溶稳定剂溶液；称取黏度剂，缓慢加入热注射用水中，分散均匀后
加入冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用0.8ym水系滤膜过滤二次，制成黏度剂溶液；称
取防腐剂、抗氧增效剂和渗透压调节剂，加入注射用水使溶解，加入缓冲剂，制成混合溶液；
将原料药粉加入到助溶稳定剂溶液中，搅拌均匀后加入到黏度剂溶液中，搅匀，用pH调节
剂调节pH值至6. 0，加入混合溶液，搅匀，用pH调节剂调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过
滤二次，灌装，包装，即得。 本发明有益的效果 1、本发明发现了汉防己甲素治疗角膜病的作用，并在制备治疗角膜病的汉防己甲
6素制剂中应用。 2、在治疗角膜病的汉防己甲素制剂中，本发明提供了一种治疗角膜病的汉防己甲
素滴眼液及其制备方法。 3、汉防己甲素滴眼液质量可控 (1)有关物质检查方法 精密量取汉防己甲素滴眼液2. 5mL于10mL量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1. 0mL，置100mL量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。精密量取对照溶液20 ii L，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使汉防己甲素峰高约为满量程的10 % ，再精密量取上述溶液各20 ii L，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至汉防己甲素主峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，扣除空白辅料溶液的倒峰计算，最大杂质的峰面积应不大于自身对照溶液主峰面积的8倍，其他杂质的峰面积之和不大于自身对照溶液主峰面积的1.5倍。
(2)pH值 取汉防己甲素滴眼液，照pH值测定法(中国药典2005年版二部附VI H)测定，pH值为5. 0 7.0。
(3)可见异物 取汉防己甲素滴眼液，照可见异物检查法(中国药典2005年版二部附IX H)检查，
符合规定。
(4)渗透压 取汉防己甲素滴眼液，照渗透压摩尔浓度测定法(中国药典2005年版二部附IXG)测定，结果表明汉防己甲素滴眼液与泪液等渗，符合规定。
(5)含量测定 照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇_磷酸盐缓冲液_三乙胺(取磷酸二氢铵2. 3g，加水1000mL溶解，加三乙胺，用磷酸调pH至7. 0)(71 : 29 : 0.3)为流动相；检测波长为233nm，流速1. 3mL/min。理论板数按TDR峰计算应不低于2000。 测定法精密量取汉防己甲素滴眼液0. lmL，置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取本发明汉防己甲素对照品约5mg，精密称定，置50mL量瓶中，加流动相适量，超声5min使汉防己甲素溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取lmL置lOmL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别量取上述溶液各20 ii L注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。结果，汉防己甲素滴眼液中含汉防己甲素为标示量的95. 0% 105. 0%。
4、汉防己甲素滴眼液质量稳定 以外观性状、有关物质、pH、渗透压、可见异物、含量为指标，考察汉防己甲素滴眼液的稳定性 (1)影响因素试验取本发明汉防己甲素滴眼液置于高温(6(TC和4(TC )、光照(4500士500LX)环境中试验10天，分别于第0、5、10天取样检测。结果，汉防己甲素滴眼液在4(TC和6(TC条件下放置10天，溶液颜色略有加深，pH值下降0. 3 0. 4，渗透压、有关物
7质、可见异物、含量等无明显变化。 (2)冻融试验取汉防己甲素滴眼液在_10°C -2(TC条件下放置2天，然后加温至4(TC考察2天，如此重复试验3次。结果，汉防己甲素在-2(TC条件下冷冻后，能够复融成澄明溶液，其溶解度不受影响，PH值略有降低，其他各项指标均无明显变化，稳定性良好。
(3)加速试验取汉防己甲素滴眼液置于4(TC、相对湿度20%和30%的条件下试验6个月，分别于第0、1、2、3、6个月取样检测。结果，汉防己甲素滴眼液各项考察指标均无明显变化，质量稳定。 (4)长期试验取汉防己甲素滴眼液置于25t:、相对湿度60%的条件下试验36个月，分别于第0、3、6、9、12、18、24、36个月取样检测。结果，汉防己甲素滴眼液各项考察指标无明显变化，质量稳定。 5、汉防己甲素滴眼液安全性好以新西兰白兔眼为动物模型，对汉防己甲素滴眼液的眼剌激性进行试验。结果，在体法用眼剌激性实验评价眼剌激性，汉防己甲素滴眼液单次给药或重复给药无眼剌激性；离体法用角膜水化值为评价指标，汉防己甲素滴眼液重复多次给药角膜水化值无明显变化，对角膜无剌激性。
6、汉防己甲素滴眼液药效显著 (1)汉防己甲素滴眼液对细菌性角膜炎具有明显作用 用金黄色葡萄球菌及绿脓杆菌标准菌株感染新西兰白兔，制成细菌性角膜炎动物模型，用比浊法测定细菌数，用生理盐水为对照，观察给予汉防己甲素滴眼后兔外眼形态学和角膜上细菌生长情况。结果表明，汉防己甲素滴眼液对接种金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌的兔眼部出现的炎症反应有明显的抑制作用，明显减少感染的细菌数，对角膜有明显的保护作用。
(2)汉防己甲素滴眼液对角膜烟曲菌病有明显治疗作用 角膜划痕后板层内注射致角膜烟曲菌病。将烟曲菌悬液(107ml)0. lml注入新西兰白兔一只眼角膜基层内，至4mm区域水肿混浊为止，另一只眼以同法注入生理盐水作为对照，制成角膜烟曲病动物模型，给予汉防己甲素滴眼液和0. 25%氯霉素滴眼液，每日用裂隙灯观察其角膜、前房、虹膜及晶体等变化，动物接种后分别于1、2、4、6、8U0、15、20、25及30天采用耳静脉注射空气法处死，立即取材制备组织学标本。电镜标本仅限于1、2、4、6及8天者，同时取正常及对照眼角膜检查。取材后，将角膜组织于Carnoy液中固定12小时，石蜡包埋，HE染色，用光镜观察。取材后，立即将角膜置入2. 5%戊二醛液中固定2小时，然后切成4mmX5mm组织块，经梯度乙醇脱水、临界点干燥及真空喷镀金膜后用扫描电镜观察。将角膜组织于2. 5 %戊二醛液中固定2小时，切成2mmX 3mm小块，1 %四氧化锇后固定，梯度乙醇脱水，环氧树脂包埋，半薄切片定位后超薄切片，柠檬酸铅及醋酸铀双重染色后于透射电镜下观察。结果表明，汉防己甲素滴眼液可以有效抑制兔眼角膜烟曲菌感染，阻止角膜瘢痕形成，对角膜基质纤维有明显保护作用。
(3)汉防己甲素滴眼液对痢疾杆菌诱发的角膜炎的作用 将有毒痢疾菌株的新鲜斜面培养物制成一定浓度的盐水菌悬液，滴入豚鼠角膜结合膜囊内，制成痢疾杆菌感染实验动物模型，用生理盐水作为对照，观察汉防己甲素滴眼液对痢疾杆菌诱发角膜炎的作用。结果表明，汉防己甲素滴眼液对痢疾杆菌有明显抑制作用，对疾病杆菌所致角膜炎有明显治疗作用，对角膜具有较好的保护作用。
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(4)汉防己甲素滴眼液对角膜斑翳有显著治疗作用 21名患者，男女均有，年龄25 52岁，经视力检查、角膜内皮细胞形态和密度检查、角膜地形图检查、裂隙灯检查、A超检查确诊为角膜斑翳，均为病毒性角膜溃疡、细菌性角膜溃疡、外伤性角膜溃疡或化学剌激性角膜溃疡愈合后残留角膜斑翳。用汉防己甲素滴眼液每天3 6次，连续30天，用狄奥宁软膏为对照。结果表明，汉防己甲素滴眼液对角膜斑翳有明显治疗作用，患者斑翳退净，视力恢复，角膜清澈透明，角膜中央厚度恢复正常。
7、汉防己甲素滴眼液眼部用药方案设计合理 用微量注射器给新西兰白兔双眼结膜囊内滴入50iU 0.5%汉防己甲素滴眼液，轻轻闭合双睑约lmin，滴眼后分别于O. 167、0. 5、1. 0、1. 25、1. 5、2、2. 5、3. 0、4. 0和12. Oh耳
缘静脉栓塞处死动物，用生理盐水冲洗结膜囊，立即抽取房水，取角膜组织，并用滤纸吸干后称重。所有样品均储存于-2(TC冰箱中备用。
(1)角膜样品的处理 取兔眼角膜，生理盐水冲洗表面，吸干水分，称重，将角膜剪碎，加甲醇0. 8ml，匀浆，漩涡混合3min， 15000r min—1离心20min，取上清液作为检测液。[ooee] (2)房水样品处理取房水200 ii l，加入甲醇200 y l，漩涡混合3min， 15000r min—1离心20min，取上
清液作为检测液。 采用RP-HPLC法检测角膜和房水中的汉防己甲素浓度，用甲醇沉淀蛋白质。结果表明，角膜组织与房水中药物浓度的变化均符合血管外给药一室模型一级动力学过程，汉防己甲素滴眼液渗透吸收迅速，滴药后10min时含量最高为253. 6±36. 8 y g/g，房水中1. 5h时最高为98. 2±10. 4ng/ml，角膜组织中药物浓度半衰期为2. 3h，房水中为1. lh，时滞为0. 3h ;兔眼局部应用本发明汉防己甲素滴眼液滴眼后0. 167h，角膜组织中的药物含量达到最高水平；汉防己甲素滴眼液滴入结膜囊后，O. 167h检测出汉防己甲素浓度在最低限以下，1. 5h达峰值，随后浓度下降。
具体实施例方式
下面以实施例来进一步描述本发明汉防己甲素在制备治疗角膜病制剂中的应用，对于本领域的技术人员而言，应当理解为下列实施例不构成对本发明保护范围的限制，在本发明的教导下，根据现有技术而做出的修改或替换都属于本发明保护的范围内。
实施例1 汉防己甲素 5.0g
羟丙甲纤维素60RT50 25. Og 苯扎氯铵 0. 75g 乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml乳酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素5mg，包装，即得。 实施例2 汉防己甲素 5. Og 羟丙甲纤维素E50-LV 25. Og 尼泊金乙酯 0. 75g 乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素E50-LV缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素E50-LV溶液；按处方量称取尼泊金乙酯、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml乳酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素E50-LV溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素5mg，包装，即得。 实施例3 汉防己甲素 5. Og 羟丙甲纤维素60RT50 25. Og 苯扎氯铵 0. 75g 焦亚硫酸钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8iim水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、焦亚 硫酸钠和氯化钠，加2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到100ml乳酸 (1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅匀，用30%氢 氧化钠溶液调节pH值至6. 0，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml中含汉防己甲
素5mg，包装，即得。 实施例4 _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8iim水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、亚硫 酸钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到100ml乳酸 (1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅匀，用30%氢 氧化钠溶液调节pH值至6. 0，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶液调节pH值 至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml中含汉防己甲 素5mg，包装，即得。
实施例5 汉防己甲素 5.0g
羟丙甲纤维素60RT50 25. Og
苯扎氯铵 0. 75g 亚硫酸钠 2.5g
葡萄糖 50g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、亚硫 酸钠和葡萄糖，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到100ml乳酸 (1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅匀，用30%氢 氧化钠溶液调节pH值至6. 0，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶液调节pH值 至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml中含汉防己甲 素5mg，包装，即得。
实施例6 汉防己甲素 5.0g
羟丙甲纤维素60RT50 25. Og
汉防己甲素 羟丙甲纤维素60RT50
5. Og 25. Og 0. 75g 2. 5g
40g
苯扎氯铵 亚硫酸钠 氯化钠
苯扎氯铵 [cm9] 亚硫酸钠
氯化钠
0. 75g 2. 5g
40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取酒 石酸，用注射用水配制成酒石酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、亚硫 酸钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到100ml酒石酸 (1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅匀，用30%氢 氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶液调节pH值 至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml中含汉防己甲 素5mg，包装，即得。
实施例7 汉防己甲素 5.0g
羟丙甲纤维素60RT50 25. Og
苯扎氯铵 0. 75g 乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取枸 橼酸，用注射用水配制成枸橼酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml枸橼酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素5mg，包装，即得。实施例8汉防己甲素5. Og羟丙甲纤维素60RT5025. Og苯扎氯铵0. 75g亚硫酸钠2. 5g氯化钠40g用注射用水制成5000ml
制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取枸 橼酸，用注射用水配制成枸橼酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 ii m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、亚硫 酸钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到100ml枸橼酸 (1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅匀，用30%氢 氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶液调节pH值 至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml中含汉防己甲 素5mg，包装，即得。
实施例9 汉防己甲素 5.0g
羟丙甲纤维素E50-LV 25. Og
尼泊金乙酯 0. 75g 乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取酒 石酸，用注射用水配制成酒石酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素E50-LV缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 ii m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素E50-LV溶液；按处方量称取尼泊金乙酯、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml酒石酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素E50-LV溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. 0，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素5mg，包装，即得。 实施例10 汉防己甲素 5.0g 羟丙甲纤维素E50-LV 25. Og 尼泊金乙酯 0. 75g 乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取枸 橼酸，用注射用水配制成枸橼酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素E50-LV缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 ii m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素E50-LV溶液；按处方量称取尼泊金乙酯、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到
13100ml枸橼酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素E50-LV溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素5mg，包装，即得。 实施例11 汉防己甲素 10. Og 羟丙甲纤维素60RT50 25. Og 苯扎氯铵 0.75g 乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml乳酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素lOmg，包装，即得。 实施例12 汉防己甲素 15. Og 羟丙甲纤维素60RT50 25. Og 苯扎氯铵 0.75g 乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml乳酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素15mg，包装，即得。
实施例13
汉防己甲素
羟丙甲纤维素60RT50
苯扎氯铵
乙二胺四乙酸二钠
氯化钠
25. Og 25. Og 0. 75g 2. 5g
40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml乳酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素25mg，包装，即得。
实施例14 汉防己甲素 30. Og 羟丙甲纤维素60RT50 25. Og
苯扎氯铵 0.75g
乙二胺四乙酸二钠 2. 5g 氯化钠 40g _ 用注射用水制成5000ml 制备方法按处方量称取汉防己甲素原料药粉碎过80目筛，制成原料药粉；取 乳酸，用注射用水配制成乳酸(1 — 10)溶液；称取处方量羟丙甲纤维素60RT50缓慢加 入2000ml热注射用水中，分散均匀后加入1000ml冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用 0. 8 m水系滤膜过滤二次，制成羟丙甲纤维素60RT50溶液；按处方量称取苯扎氯铵、乙 二胺四乙酸二钠和氯化钠，加入2400ml注射用水溶解，制成混合溶液，将原料药粉加入到 100ml乳酸(1 — 10)溶液中，搅拌均匀后加入到2500ml羟丙甲纤维素60RT50溶液中，搅 匀，用30X氢氧化钠溶液调节pH值至6. O，加入2400ml混合溶液，搅匀，用30%氢氧化钠溶 液调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜过滤二次，配成5000ml溶液，灌装成1000支，每支5ml 中含汉防己甲素30mg，包装，即得。
权利要求
治疗角膜病的汉防己甲素，其特征在于它的英文名称为Tetrandrine，分子式为C38H42N2O6，分子量为622.77，结构式为F2009101868260C00011.tif
2. 汉防己甲素在制备治疗角膜病制剂中的应用，其特征在于这种用于治疗角膜病的汉 防己甲素制剂为全身用药制剂，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、混悬剂、注射剂。
3. 权利要求2所述的汉防己甲素在制备治疗角膜病制剂中的应用，其特征在于这种 用于治疗角膜病的汉防己甲素制剂为局部用药制剂，包括眼部给药制剂、黏膜给药制剂、贴 剂、透皮吸收剂、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂。
4. 权利要求3所述的用于治疗角膜病的汉防己甲素眼部给药制剂，其特征在于它是一 种汉防己甲素滴眼液。
5. 权利要求4所述的用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液，其特征在于它是汉防己甲 素原料药与抗氧增效剂、防腐剂、黏度剂、渗透压调节剂、缓冲剂、助溶稳定剂和pH调节剂 制成的滴眼液；在这种滴眼液中，含有汉防己甲素的重量份数为1 30，含有抗氧增效剂的 重量份数为1 IO，含有防腐剂的重量份数为0. 1 5，含有黏度剂的重量份数为5 50， 含有渗透压调节剂的重量份数为35 55，含有缓冲剂的重量份数为0 10 ;所述的抗氧增 效剂为维生素C、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠或其混合物；所述的防腐剂为 苯扎氯铵、尼泊金乙酯或其混合物；所述的黏度剂为羟丙甲纤维素、聚乙烯吡咯烷酮K30或 其混合物；所述的渗透压调节剂为甘露醇、氯化钠、葡萄糖或其混合物；所述的缓冲剂为磷 酸盐缓冲液、硼酸_硼砂缓冲液、硼酸_醋酸钠缓冲液或其混合物；所述的助溶稳定剂为盐 酸、乳酸、酒石酸、枸橼酸或其混合物；所述的PH调节剂为氢氧化钠。
6. 权利要求5所述的用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液，其特征在于它的制备方法 是按重量份数配比分别称取汉防己甲素原料药，粉碎，过80目筛，制成原料药粉；取助溶稳 定剂，用注射用水配制成助溶稳定剂溶液；称取黏度剂，缓慢加入热注射用水中，分散均匀 后加入冷注射用水，搅拌均匀，放置溶解后用0.8ym水系滤膜过滤二次，制成黏度剂溶液； 称取防腐剂、抗氧增效剂和渗透压调节剂，加入注射用水使溶解，加入缓冲剂，制成混合溶 液；将原料药粉加入到助溶稳定剂溶液中，搅拌均匀后加入到黏度剂溶液中，搅匀，用PH调 节剂调节pH值至6. 0，加入混合溶液，搅匀，用pH调节剂调节pH值至6. 0，用0. 2 ii m滤膜 过滤二次，灌装，包装。C38H42N206，分子量为622. 77，结构式为全文摘要
本发明公开了治疗角膜病的汉防己甲素及其在制备治疗角膜病制剂中的应用。这种治疗角膜病的汉防己甲素制剂为全身用药和局部用药制剂。在治疗角膜病的汉防己甲素制剂局部用药制剂中，本发明公开了一种由汉防己甲素与抗氧增效剂、防腐剂、黏度剂、渗透压调节剂、缓冲剂、助溶稳定剂和pH调节剂制成的用于治疗角膜病的汉防己甲素滴眼液，这种滴眼液质量稳定可控、安全性好、无眼无刺激性、药效显著，角膜组织与房水中药物浓度的变化均符合血管外给药一室模型一级动力学过程，汉防己甲素滴眼液渗透吸收迅速，眼部给药方案设计合理。
文档编号A61K31/4748GK101744817SQ20091018682
公开日2010年6月23日 申请日期2009年12月28日 优先权日2009年12月28日
发明者刘孝乐, 朱丹 申请人:南昌弘益科技有限公司
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