治疗肌萎缩和强直性肌营养不良的组合物和方法与流程
背景技术：
1、通过rna诱导的基因沉默进行的基因抑制提供了几种控制水平：转录失活、小干扰rna(sirna)诱导的mrna降解和sirna诱导的转录弱化。在一些情况下，rna干扰(rnai)对多细胞分裂提供持久的影响。因此，rnai代表了可用于药物靶标验证、基因功能分析、途径分析和疾病治疗的可行方法。
技术实现思路
1、在某些实施方案中，本文公开了用于调节与肌萎缩相关的基因(或atrogene)的多核酸分子和药物组合物。在一些实施方案中，本文还描述了用本文公开的多核酸分子或多核酸分子缀合物治疗肌萎缩的方法。
2、在某些实施方案中，本文公开了式(i)的分子：a-x1-b-x2-c(式i)其中，a为结合部分；b为与atrogene的靶序列杂交的多核苷酸；c为聚合物；且x1和x2各自独立地选自键或非聚合连接体；其中所述多核苷酸包含至少一个2’修饰的核苷酸、至少一个修饰的核苷酸间连接或至少一个反向脱碱基部分；并且其中a和c不连接至b的同一末端。在一些实施方案中，所述atrogen包括dmpk。在一些实施方案中，b由与atrogene的靶序列杂交的多核苷酸组成。在一些实施方案中，c由聚合物组成。在一些实施方案中，所述至少一个2’修饰的核苷酸包含2’-o-甲基、2’-o-甲氧基乙基(2’-o-moe)、2’-o-氨基丙基、2’-脱氧、2’-脱氧-2’-氟代、2’-o-氨基丙基(2’-o-ap)、2’-o-二甲基氨基乙基(2’-o-dmaoe)、2'-o-二甲基氨基丙基(2’-o-dmap)、2’-o-二甲基氨基乙氧基乙基(2’-o-dmaeoe)或2’-o-n-甲基乙酰胺基(2’-o-nma)修饰的核苷酸。在一些实施方案中，所述至少一个2’修饰的核苷酸包括锁定核酸(lna)或乙烯核酸(ena)。在一些实施方案中，所述至少一个修饰的核苷酸间连接包括硫代磷酸酯连接或二硫代磷酸酯连接。在一些实施方案中，所述至少一个反向脱碱基部分在至少一个末端。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含与atrogene的靶序列杂交的单链。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含第一多核苷酸和与第一多核苷酸杂交的第二多核苷酸，以形成双链多核酸分子，其中第一多核苷酸或第二多核苷酸还与atrogene的靶序列杂交。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含至少一个修饰。在一些实施方案中，第一多核苷酸和第二多核苷酸是rna分子。在一些实施方案中，所述多核苷酸与atrogene的靶序列的至少8个连续碱基杂交。在一些实施方案中，所述多核苷酸的长度为约8个至约50个核苷酸。在一些实施方案中，所述多核苷酸的长度为约10个至约30个核苷酸。在一些实施方案中，第一多核苷酸包含与seq id no:28-189所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含与seq id no:28-189所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，x1和x2独立地为c1-c6烷基。在一些实施方案中，x1和x2独立地为同双官能连接体或异双官能连接体，任选地缀合至c1-c6烷基。在一些实施方案中，a为抗体或其结合片段。在一些实施方案中，a包括人源化抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价fab’、二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单结构域抗体(sdab)或者骆驼科抗体或其结合片段。在一些实施方案中，a为抗运铁蛋白受体抗体或其结合片段。在一些实施方案中，c为聚乙二醇。在一些实施方案中，a-x1缀合至b的5’端，且x2-c缀合至b的3’端。在一些实施方案中，x2-c缀合至b的5’端，且a-x1缀合至b的3’端。在一些实施方案中，a直接缀合至x1。在一些实施方案中，c直接缀合至x2。在一些实施方案中，b直接缀合至x1和x2。在一些实施方案中，该分子进一步包含d。在一些实施方案中，d缀合至c或缀合至a。在一些实施方案中，d为内体溶解聚合物。
3、在某些实施方案中，本文公开了一种多核酸分子缀合物，其包含与多核苷酸缀合的结合部分，所述多核苷酸与atrogene的靶序列杂交；其中所述多核苷酸任选地包含至少一个2’修饰的核苷酸、至少一个修饰的核苷酸间连接或至少一个反向脱碱基部分；并且其中所述多核酸分子缀合物介导针对所述atrogene的rna干扰，从而治疗受试者的肌萎缩。在一些实施方案中，所述atrogene包括dmpk。在一些实施方案中，所述结合部分是抗体或其结合片段。在一些实施方案中，所述结合部分包括人源化抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价fab’、二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单结构域抗体(sdab)或者骆驼科抗体或其结合片段。在一些实施方案中，所述结合部分是抗运铁蛋白受体抗体或其结合片段。在一些实施方案中，所述结合部分是胆固醇。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含与atrogene的靶序列杂交的单链。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含第一多核苷酸和与第一多核苷酸杂交的第二多核苷酸，以形成双链多核酸分子，其中第一多核苷酸或第二多核苷酸还与atrogene的靶序列杂交。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含至少一个修饰。在一些实施方案中，第一多核苷酸和第二多核苷酸是rna分子。在一些实施方案中，所述多核苷酸与atrogene的靶序列的至少8个连续碱基杂交。在一些实施方案中，所述多核苷酸的长度为约8个至约50个核苷酸。在一些实施方案中，所述多核苷酸的长度为约10个至约30个核苷酸。在一些实施方案中，第一多核苷酸包含与seq id no:28-189所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含与seq id no:28-189所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，所述多核酸分子缀合物任选地包含将所述结合部分连接至所述多核苷酸的连接体。在一些实施方案中，所述多核酸分子缀合物进一步包含聚合物，所述聚合物任选地通过另外的连接体间接缀合至所述多核苷酸。在一些实施方案中，所述连接体和所述另外的连接体各自独立地是键或非聚合连接体。在一些实施方案中，所述多核酸分子缀合物包含式(i)的分子：a-x1-b-x2-c(式i)，其中，a为抗体或其结合片段；b为与atrogene的靶序列杂交的多核酸；c为聚合物；且x1和x2各自独立地选自键或非聚合连接体；其中所述多核苷酸包含至少一个2’修饰的核苷酸、至少一个修饰的核苷酸间连接或至少一个反向脱碱基部分；并且其中a和c不连接至b的同一末端。在一些实施方案中，所述至少一个2’修饰的核苷酸包含2’-o-甲基、2’-o-甲氧基乙基(2’-o-moe)、2’-o-氨基丙基、2’-脱氧、2’-脱氧-2’-氟代、2’-o-氨基丙基(2’-o-ap)、2’-o-二甲基氨基乙基(2’-o-dmaoe)、2'-o-二甲基氨基丙基(2’-o-dmap)、2’-o-二甲基氨基乙氧基乙基(2’-o-dmaeoe)或2’-o-n-甲基乙酰胺基(2’-o-nma)修饰的核苷酸。在一些实施方案中，所述至少一个2’修饰的核苷酸包括锁定核酸(lna)或乙烯核酸(ena)。在一些实施方案中，所述至少一个修饰的核苷酸间连接包括硫代磷酸酯连接或二硫代磷酸酯连接。在一些实施方案中，所述至少一个反向脱碱基部分在至少一个末端。在一些实施方案中，所述肌萎缩是糖尿病相关的肌萎缩。在一些实施方案中，所述肌萎缩是癌症恶病质相关的肌萎缩。在一些实施方案中，所述肌萎缩与胰岛素缺乏相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与慢性肾功能衰竭相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与充血性心力衰竭相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与慢性呼吸系统疾病相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与慢性感染相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与禁食相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与去神经支配相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与少肌症、糖皮质激素治疗、中风和/或心脏病发作相关。在一些情况下，1型强直性肌营养不良(dm1)与dmpk基因3’utr中的ctg重复序列的扩展相关。
4、在某些实施方案中，本文公开了一种药物组合物，其包含：以上描述的分子或以上描述的多核酸分子缀合物；和药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制为纳米颗粒制剂。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于肠胃外、口服、鼻内、经颊、直肠或经皮给药。
5、在某些实施方案中，本文公开了一种治疗有需要的受试者的肌萎缩或强直性肌营养不良的方法，其包括：向所述受试者施用治疗有效量的多核酸分子缀合物，其包含与多核苷酸缀合的结合部分，所述多核苷酸与atrogene的靶序列杂交；其中所述多核苷酸任选地包含至少一个2’修饰的核苷酸、至少一个修饰的核苷酸间连接或至少一个反向脱碱基部分；并且其中所述多核酸分子缀合物介导针对所述atrogene的rna干扰，从而治疗所述受试者的肌萎缩或强直性肌营养不良。在一些实施方案中，所述肌萎缩是糖尿病相关的肌萎缩。在一些实施方案中，所述肌萎缩是癌症恶病质相关的肌萎缩。在一些实施方案中，所述肌萎缩与胰岛素缺乏相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与慢性肾功能衰竭相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与充血性心力衰竭相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与慢性呼吸系统疾病相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与慢性感染相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与禁食相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与去神经支配相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与少肌症相关。在一些实施方案中，所述强直性肌营养不良是dm1。在一些实施方案中，所述atrogen包括dmpk。在一些实施方案中，所述多核酸分子缀合物包含式(i)的分子：a-x1-b-x2-c(式i)，其中，a为结合部分；b为与atrogene的靶序列杂交的多核苷酸；c为聚合物；且x1和x2各自独立地选自键或非聚合连接体；其中所述多核苷酸包含至少一个2’修饰的核苷酸、至少一个修饰的核苷酸间连接或至少一个反向脱碱基部分；并且其中a和c不连接至b的同一末端。在一些实施方案中，b由与atrogene的靶序列杂交的多核苷酸组成。在一些实施方案中，c由聚合物组成。在一些实施方案中，所述至少一个2’修饰的核苷酸包含2’-o-甲基、2’-o-甲氧基乙基(2’-o-moe)、2’-o-氨基丙基、2’-脱氧、2’-脱氧-2’-氟代、2’-o-氨基丙基(2’-o-ap)、2’-o-二甲基氨基乙基(2’-o-dmaoe)、2'-o-二甲基氨基丙基(2’-o-dmap)、2’-o-二甲基氨基乙氧基乙基(2’-o-dmaeoe)或2’-o-n-甲基乙酰胺基(2’-o-nma)修饰的核苷酸。在一些实施方案中，所述至少一个2’修饰的核苷酸包括锁定核酸(lna)或乙烯核酸(ena)。在一些实施方案中，所述至少一个修饰的核苷酸间连接包括硫代磷酸酯连接或二硫代磷酸酯连接。在一些实施方案中，所述至少一个反向脱碱基部分在至少一个末端。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含与atrogene的靶序列杂交的单链。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含第一多核苷酸和与第一多核苷酸杂交的第二多核苷酸，以形成双链多核酸分子，其中第一多核苷酸或第二多核苷酸还与atrogene的靶序列杂交。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含至少一个修饰。在一些实施方案中，第一多核苷酸和第二多核苷酸是rna分子。在一些实施方案中，所述多核苷酸与atrogene的靶序列的至少8个连续碱基杂交。在一些实施方案中，所述多核苷酸的长度为约8个至约50个核苷酸。在一些实施方案中，所述多核苷酸的长度为约10个至约30个核苷酸。在一些实施方案中，第一多核苷酸包含与seqid no:28-189所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含与seq id no:28-189所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，x1和x2独立地为c1-c6烷基。在一些实施方案中，x1和x2独立地为同双官能连接体或异双官能连接体，任选地缀合至c1-c6烷基。在一些实施方案中，a为抗体或其结合片段。在一些实施方案中，a包括人源化抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价fab’、二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单结构域抗体(sdab)或者骆驼科抗体或其结合片段。在一些实施方案中，a为抗运铁蛋白受体抗体或其结合片段。在一些实施方案中，c为聚乙二醇。在一些实施方案中，a-x1缀合至b的5’端，且x2-c缀合至b的3’端。在一些实施方案中，x2-c缀合至b的5’端，且a-x1缀合至b的3’端。在一些实施方案中，a直接缀合至x1。在一些实施方案中，c直接缀合至x2。在一些实施方案中，b直接缀合至x1和x2。在一些实施方案中，该方法进一步包含d。在一些实施方案中，d缀合至c或缀合至a。在一些实施方案中，d为内体溶解聚合物。在一些实施方案中，所述多核酸分子缀合物被配制用于肠胃外、口服、鼻内、经颊、直肠或经皮给药。在一些实施方案中，所述受试者是人。
6、在某些实施方案中，本文公开了包含以上描述的分子或以上描述的多核酸分子缀合物的试剂盒。
技术特征：
1.一种小干扰rna(sirna)分子，其包含过客链和指导链，其中所述指导链包含选自seqid no:163、173、172、174、179、176、164、180、127和188的核酸序列；其中所述sirna分子通过与人dmpk mrna的靶序列杂交来介导针对人dmpk mrna的rna干扰。
2.一种小干扰rna(sirna)分子，其包含过客链和指导链，其中所述指导链包含选自seqid no:163和173的核酸序列；其中所述sirna分子通过与所述人dmpk mrna的靶序列杂交来介导针对人dmpk mrna的rna干扰。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的sirna分子，其中所述过客链或所述指导链独立地包含至少一个2’修饰的核苷酸、至少一个修饰的核苷酸间连接或至少一个反向脱碱基部分。
4.根据权利要求3所述的sirna分子，其中所述至少一个2’修饰的核苷酸：包含2’-o-甲基、2’-o-甲氧基乙基(2’-o-moe)、2’-o-氨基丙基、2’-脱氧、2’-脱氧-2’-氟代、2’-o-氨基丙基(2’-o-ap)、2’-o-二甲基氨基乙基(2’-o-dmaoe)、2'-o-二甲基氨基丙基(2’-o-dmap)、2’-o-二甲基氨基乙氧基乙基(2’-o-dmaeoe)或2’-o-n-甲基乙酰胺基(2’-o-nma)修饰的核苷酸；包含锁定核酸(lna)或乙烯核酸(ena)；或包含它们的组合。
5.根据权利要求3所述的sirna分子，其中所述sirna分子包含3个或更多个选自2’-o-甲基修饰的核苷酸和2’-脱氧-2’-氟修饰的核苷酸的2’修饰的核苷酸。
6.根据权利要求3所述的sirna分子，其中所述至少一个修饰的核苷酸间连接包括硫代磷酸酯连接或二硫代磷酸酯连接。
7.一种药物组合物，其包含根据权利要求1或权利要求2所述的sirna分子以及药学上可接受的赋形剂。
8.根据权利要求1-6中任一项所述的sirna分子或根据权利要求7所述的药物组合物在制备用于治疗有需要的受试者的1型强直性肌营养不良(dm1)的药物中的用途。
9.一种小干扰rna(sirna)缀合物，其包含与sirna分子缀合的抗运铁蛋白受体结合部分，所述sirna分子与人dmpk mrna的靶序列杂交并优先地在肌细胞中介导针对所述人dmpkmrna的rna干扰，其中所述人dmpk mrna的所述靶序列包含不包括cug重复序列的所述人dmpk mrna的外显子1-13。
10.根据权利要求9所述的sirna缀合物，其中所述抗运铁蛋白受体结合部分包含抗运铁蛋白受体抗体或其抗原结合片段。
11.根据权利要求9所述的sirna缀合物，其中所述sirna分子与所述人dmpk mrna的来自位置1945至2699的靶序列杂交，其中所述人dmpk mrna是nm_001288766.1。
12.根据权利要求9所述的sirna缀合物，其中所述sirna分子的指导链包含选自seq idno:163、173、172、174、179、176、164、180、127和188的核酸序列。
13.根据权利要求9所述的sirna缀合物，其中所述sirna分子的指导链包含选自seq idno:163和173的核酸序列。
14.根据权利要求9所述的sirna缀合物，其中所述sirna分子包含至少一个2’修饰的核苷酸、至少一个修饰的核苷酸间连接或至少一个反向脱碱基部分。
15.根据权利要求14所述的sirna缀合物，其中所述至少一个2’修饰的核苷酸：包含2’-o-甲基、2’-o-甲氧基乙基(2’-o-moe)、2’-o-氨基丙基、2’-脱氧、2’-脱氧-2’-氟代、2’-o-氨基丙基(2’-o-ap)、2’-o-二甲基氨基乙基(2’-o-dmaoe)、2'-o-二甲基氨基丙基(2’-o-dmap)、2’-o-二甲基氨基乙氧基乙基(2’-o-dmaeoe)或2’-o-n-甲基乙酰胺基(2’-o-nma)修饰的核苷酸；包含锁定核酸(lna)或乙烯核酸(ena)；或包含它们的组合。
16.根据权利要求14所述的sirna缀合物，其中所述sirna分子包含3个或更多个选自2’-o-甲基修饰的核苷酸和2’-脱氧-2’-氟修饰的核苷酸的2’修饰的核苷酸。
17.根据权利要求14所述的sirna缀合物，其中所述至少一个修饰的核苷酸间连接包括硫代磷酸酯连接或二硫代磷酸酯连接。
18.根据权利要求9所述的sirna缀合物，其中所述sirna分子缀合物包含将所述抗运铁蛋白受体结合部分连接至所述sirna分子的连接体。
19.根据权利要求9所述的sirna缀合物，其中所述sirna分子缀合物具有约1至约4的sirna分子与结合部分的比。
20.一种药物组合物，其包含根据权利要求9所述的sirna缀合物以及药学上可接受的赋形剂。
21.根据权利要求9-19中任一项所述的sirna缀合物或根据权利要求20所述的药物组合物在制备用于治疗有需要的受试者的1型强直性肌营养不良(dm1)的药物中的用途。
22.一种与人dmpk mrna的靶序列杂交并介导针对所述人dmpk mrna的rna干扰的寡核苷酸，其中所述靶序列包含不包括cug重复序列的所述人dmpk mrna的外显子1-13。
23.根据权利要求22所述的寡核苷酸，其中所述人dmpk mrna的所述靶序列来自位置1945至2699，其中所述人dmpk mrna是nm_001288766.1。
24.根据权利要求22所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含具有至少16、17或18个选自seq id no:163、173、172、174、179、176、164、180、127和188的连续核苷酸的核酸序列。
25.根据权利要求22所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含具有至少18个选自seqid no:163和173的连续核苷酸的核酸序列。
26.根据权利要求22所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含至少一个2’修饰的核苷酸、至少一个修饰的核苷酸间连接或至少一个反向脱碱基部分。
27.一种寡核苷酸缀合物，其包含与根据权利要求22所述的寡核苷酸缀合的抗运铁蛋白受体结合部分。
28.根据权利要求27所述的寡核苷酸缀合物，其中所述抗运铁蛋白受体结合部分包含抗运铁蛋白受体抗体或其抗原结合片段。
29.根据权利要求27所述的寡核苷酸缀合物，其中所述寡核苷酸缀合物包含将所述抗运铁蛋白受体结合部分连接至所述寡核苷酸的连接体。
30.根据权利要求27所述的寡核苷酸缀合物，其中所述寡核苷酸缀合物具有约1至约4的寡核苷酸与结合部分的比。
31.一种药物组合物，其包含根据权利要求22所述的寡核苷酸或根据权利要求27所述的寡核苷酸缀合物以及药学上可接受的赋形剂。
32.根据权利要求22-26中任一项所述的寡核苷酸、根据权利要求27-30中任一项所述的寡核苷酸缀合物或根据权利要求31所述的药物组合物在制备用于治疗有需要的受试者的1型强直性肌营养不良(dm1)的药物中的用途。
技术总结
本文公开了治疗肌萎缩和强直性肌营养不良的组合物和方法。具体地，本文公开了多核酸分子、药物组合物和用于治疗肌萎缩或强直性肌营养不良的方法。
技术研发人员：安德鲁·约翰·吉尔,文卡塔·拉马纳·多帕拉普迪,大卫·世-豪·朱,迈克尔·卡拉米安·科克伦,迈克尔·胡德,比亚特丽丝·戴安娜·达里蒙特,罗伯·伯克,石云雨,古林·埃尔多安·莫雷柳斯,巴尔博拉·马勒科娃
受保护的技术使用者：艾维迪提生物科学公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23