一种金银花中木犀草苷的新生产工艺
本发明属于脂溶性化学成分提取纯化分离，尤其涉及金银花中木犀草苷的提取纯化分离方法。
背景技术：
1、金银花又名忍冬，为多年生半常绿或落叶灌木，在我国分布范围较广，主要产地为河南，河北，山东等地。其全株可入药，但以花蕾的功效更佳，具有清热解毒、抗菌消炎和抗氧化等功效，故生产实践中所说的金银花通常指植物忍冬的干燥花蕾或带初开的花。金银花具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒和抗肿瘤等药理作用。迄今为止，从金银花中分离鉴定的化合物主要为黄酮类、有机酸类、环烯醚萜以及三萜皂苷类化合物。现代药理学研究认为，金银花功效成分可能是其黄酮类活性成分。木犀草苷作为金银花中的主要成分，除具有抗菌、抗病毒、抗氧化等药理作用之外，对人体的呼吸系统、心血管系统以及中枢神经系统还具有一定程度的保护作用。相关定量分析结果研究表明：金银花中木犀草苷的含量为0.297％。《中国药典》2020年版收录木犀草苷为金银花中标志性成分，按干燥品计算，含木犀草苷不得少于0.050％。
2、中药提取的传统方法包括浸渍回流煎煮法等。在实际生产中，由于浸渍回流煎煮法需要持续源源不断供热，能耗大幅增高，长时间的高温环境致使木犀草苷的活性受到严重影响，给工业化和产业化带来巨大能耗的困难。在如何提高提取率方面，传统的提取方法采用75％的乙醇作为提取剂，投入成本高，反复多个工序需要涉及浓缩，浓缩量大，浓缩周期长，提供热能能耗又进一步提高，木犀草苷活性有进一步被削弱。因此，将现代萃取技术与绿色溶剂相结合，建立一种操作简单、效率高、能耗低的绿色高效萃取纯化分离完整的新型生产工艺具有重要的研究意义。
技术实现思路
1、针对上述不足，本发明的目的在于提供一种金银花中木犀草苷的可持续提取纯化分离方法。本发明提出一种超高压辅助胶束提取，浊点分层法富集、金属络合法纯化金银花中木犀草苷的新的生产工艺，操作简单，绿色安全，耗能低，可持续且提取效率高。
2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
3、本发明提供了一种金银花中木犀草苷的可持续提取，通过金属络合法纯化的生产工艺，包括以下步骤：
4、(1)将金银花阴干，粉碎，过筛，得到金银花粉末；
5、(2)将步骤(1)得到的金银花粉末与胶束提取溶剂按一定料液比充分混合，得到混合物，将混合物装入聚乙烯袋中，密封；
6、(3)将步骤(2)装有混合物的聚乙烯袋置于超高压设备中，进行超高压提取；
7、(4)提取结束后，倒出步骤(3)处理后的聚乙烯袋中的混合物，分离金银花残渣，得到金银花提取液，测定提取液中木犀草苷的含量；
8、(5)将步骤(4)得到金银花提取液加入氯化钠，加热后分相，将含有木犀草苷的胶束富集在上相。
9、(6)将步骤(5)上相，加入三氯甲烷，离心后得到木犀草苷粗品并计算其纯度。
10、(7)将步骤(6)木犀草苷粗品溶解在含氯化钙的乙醇溶液中，调节ph值，使溶液的ph值为9，于-4℃条件下静置12小时后，使木犀草苷与钙离子形成络合物。
11、(8)将步骤(7)的络合物，加入edta溶液解络合。悬蒸后加入甲醇复溶。离心取上清液挥干，得到木犀草苷纯品并计算其纯度和得率。
12、优选地，所述的步骤(1)的金银花粉末粒度为10～120目。
13、优选地，所述的步骤(2)的胶束提取溶剂为t-60，其浓度为1％～11％(v/v)。
14、优选地，所述的金银花粉末与胶束提取溶剂的用量比为1g∶10～40ml。
15、优选地，所述的步骤(3)中超高压提取时间为1～6min。
16、优选地，所述的步骤(3)中超高压提取压力为25～300mpa。
17、优选地，所述的步骤(3)中超高压提取次数为1～6次。
18、优选地，所述的步骤(4)中超高压提取后的分离步骤为离心，转速为5000～10000rpm/min，时间为5～10min，得到所述金银花提取液。
19、优选地，所述的步骤(5)得到金银花提取液加入5～30％(v/v)的氯化钠分相。
20、优选地，所述的步骤(6)上相加入三氯甲烷，体积比为1:1～1:6。
21、优选地，所述的步骤(6)离心，转速为5000～10000rpm/min，时间为5～10min，得到木犀草苷粗品。
22、优选地，所述的步骤(7)氯化钙的浓度为1％～30％。
23、优选地，所述的步骤(7)与氯化钙络合，ph值为7～11。
24、优选地，所述的步骤(8)中edta与络合物的比例为10～40ml∶1g。
25、本发明提供了一种金银花中木犀草苷的提取纯化分离方法，包括以下步骤：将金银花阴干，粉碎，过筛，得到金银花粉末。将金银花粉末与胶束提取溶剂按一定料液比充分混合，得到混合物，将混合物装入聚乙烯袋中，密封。将装有混合物的聚乙烯袋置于超高压设备中，进行超高压提取。提取结束后，倒出处理后的聚乙烯袋中的混合物，分离金银花残渣，得到金银花提取液，测定提取液中木犀草苷的含量。然后，在木犀草苷提取液中氯化钠溶液，加热后冷却分相。之后，取上相加入三氯甲烷，离心后得到木犀草苷粗品。将木犀草苷粗品溶解在含氯化钙的乙醇溶液中，调节ph值，使溶液的ph值为9，于-4℃条件下静置12小时后置于4℃环境下，形成钙离子与木犀草苷络合物。离心后将络合物加入edta的乙醇溶液中解络合。至络合物完全溶解反应完全后，减压浓缩至干。用甲醇溶解过滤后，将滤液浓缩干燥后得到木犀草苷纯品并计算其纯度和得率。
26、本发明利用超高压辅助胶束提取技术高效提取并采用浊点分层法富集，金属络合法纯化金银花中的木犀草苷。所述胶束为吐温60，即t-60，是一种绿色安全的环保表面活性剂，在常温下对木犀草苷的溶解度较大，当超高压使植物细胞破损或被挤压变形时，t-60与木犀草苷之间产生氢键作用力和静电作用力，木犀草苷被其以胶束形式带出细胞，实现木犀草苷的高效提取。本发明的提取过程效率高，能耗低，不会产生热量，克服了热敏化学物质因在高温下被分解而导致的提取率低的困难。该提取方法操作简单、提取效率高、能耗低、绿色环保、提取过程安全可靠，极具推广应用价值。吐温60作为一种非离子表面活性剂具有浊点特征，即吐温60在水溶液中的溶解度会随温度上升而降低，当温度升至一定值时出现混浊显现(即浊点)，而在提取液中加入无机盐后，离子与离子、离子与偶极子之间的电性作用，使水分子聚集在离子周围，自由水减少，使表面活性剂易于从水中析出，浊点温度降低，再经放置或离心可得到两个液相，从而将提取液中的某些成分集中在其中一相溶液，再经过萃取分离，可以实现木犀草苷的富集，得到木犀草苷粗品。最后采用金属络合法纯化，操作简单省时省力，结合超高压胶束提取构建了一套完整的新型生产工艺。实施例的数据表明，本发明的提取方法的木犀草苷的提取率高达72.9％±0.9％，纯化后纯度为93.71±0.22％。
技术特征：
1.一种金银花中木犀草苷的新生产工艺，具体包括超高压胶束提取、浊点分层法富集、金属络合法纯化分离工序，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，所述的步骤(1)金银花粉末粒度为10～200目。
3.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，所述步骤(4)中超高压提取后的分离步骤为离心，转速为5000～10000rpm/min，时间为5～10min，得到所述木犀草苷提取液。
4.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，所述的步骤(5)得到金银花提取液加入5～30％的氯化钠分相。
5.根据权利要求1所述的生产工艺，所述的步骤(6)上相加入三氯甲烷，体积比为1:1～1:6，离心后得到木犀草苷粗品并计算其纯度。
6.根据权利要求1所述的生产工艺，所述步骤(7)木犀草苷粗品溶解在含氯化钙的乙醇溶液中，调节ph值，使溶液的ph值为7～11，于4℃条件下静置12小时后，使木犀草苷与钙离子形成络合物。
7.根据权利要求1所述的生产工艺，所述的步骤(8)将步骤(7)的络合物，加入edta溶液解络合。悬蒸后加入甲醇复溶。离心的转速为5000～10000rpm/min，时间为5～10min取上清液挥干，得到木犀草苷纯品并计算其纯度和得率。
8.根据权利要求1所述的生产工艺，所述的步骤(8)将步骤(7)的络合物，加入edta溶液解络合，edta与络合物的比例为10～40ml∶1g。悬蒸后加入甲醇复溶。离心取上清液挥干，得到木犀草苷纯品并计算其纯度和得率。
技术总结
本发明属于脂溶性化学成分提取纯化分离领域，具体公开了一种清洁环保提取纯化金银花中木犀草苷方法。本发明以吐温60胶束为提取溶剂，采用超高压胶束提取，利用吐温60的浊点特征将木犀草苷富集后，利用金属络合法实现木犀草苷的纯化。本发明方法简单易操作，绿色环保无废水排放，能耗大幅降低，实现资源循环利用，成本低、周期短，生产效率高，适于工业化应用和市场推广。
技术研发人员：赵修华,朱雯,唐翠曼,王彬
受保护的技术使用者：东北林业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23