一种唐古特白刺叶片诱导成苗的快速繁殖方法与流程

本发明涉及组织培养领域，特别是涉及一种唐古特白刺叶片诱导成苗的快速繁殖方法。

背景技术：

1、唐古特白刺(nitraria tangutorum bobr)属蒺藜科白刺属多年生灌木，主要分布于我国陕北、内蒙古中西部、甘肃河西、新疆等地，常生于荒漠和半荒漠的湖盆沙地、河流阶地、山前平原积沙地、有风积沙的粘土地。唐古特白刺对沙漠极端生境具有很强适应性，抗旱、耐盐碱、抗风蚀沙埋、耐高温、耐瘠薄。其果实性甘，味酸，有健脾消食、下乳、安神的功效，可用于治疗脾胃虚弱、消化不良、产后乳少、神经衰弱等病症。一般采用种子播种进行繁殖。

2、目前，国内外对唐古特白刺的研究主要集中在抗旱、耐盐机理及种子育苗技术等方面，关于组织培养的研究有少量报道，比如：cn103250643b一种唐古特白刺无性系离体生根培养方法，该专利中虽然能够成功诱导唐古特白刺生根，但是因其采用常规的组织培养方法：诱导愈伤组织、增殖培养、不定芽培养、生根培养，通过该流程培养之后完成了唐古特白刺的生根培养，但是这种培养方法包括常规的愈伤组织培养环节不仅容易出现褐变、玻璃化、污染等现象，并且培养时间长、操作繁杂等，不易成苗。而如何缩短组织培养的生长周期、提高生根率是快速获取大量唐古特白刺的基础，因此，寻求新的组织培养方法仍为目前唐古特白刺组织培养的重要任务。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种唐古特白刺叶片诱导成苗的快速繁殖方法，以解决上述现有技术存在的问题，该快速繁殖方法从植物组织培养学的角度出发，筛选培养基配方、优化培养条件和组培工艺，通过直接利用唐古特白刺叶片进行生根培养获得外植体、再进行增殖培养及生根培养，不进行愈伤组织培养的环节，避免愈伤组织培养过程中容易出现的褐变、玻璃化等现象，可实现唐古特白刺的快速繁殖。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供一种唐古特白刺叶片诱导成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：

4、以当年生唐古特白刺嫩叶为外植体，消毒之后，接种叶片生根培养基进行生根培养，长出幼株；所述叶片生根培养基的组分为：1/2ms+吲哚丁酸；

5、将所述幼株切成小段后转接增殖培养基继续培养，获取不定芽；所述增殖培养基的组分为：ms+6-苄氨基腺嘌呤+玉米素+吲哚丁酸；

6、将所述不定芽转接生根培养基进行生根培养，生根之后进行常规培养，即得唐古特白刺叶片诱导的成苗；所述生根培养基的组分为：1/3ms+吲哚丁酸。

7、优选的是，所述消毒包括以下步骤：采用75％乙醇浸泡20s，再用0.1％hgc12溶液浸泡3min。

8、优选的是，所述叶片生根培养基的组分为：1/2ms+1.5mg/l吲哚丁酸；对所述嫩叶进行生根培养的条件为：温度23±2℃、光照强度1800-2000lx、光照时间14h/d。

9、优选的是，所述增殖培养基的组分为：ms+2.0mg/l 6-苄氨基腺嘌呤+1.0mg/l玉米素+2.0mg/l吲哚丁酸；对所述幼株进行增殖培养的条件为：温度23±2℃、光照强度1800-2000lx、光照时间12h/d。

10、优选的是，所述生根培养基的组分为：1/3ms+2.0mg/l吲哚丁酸；对所述不定芽进行生根培养的条件为：温度23±2℃、光照强度1800-2000lx、光照时间12h/d。

11、优选的是，所述常规培养包括：温室中，温度23±2℃，自然光照下培养成苗。

12、本发明还提供一种所述的方法在提升唐古特白刺生根率或者成苗率中的应用。

13、本发明公开了以下技术效果：

14、本发明通过采用组织培养的方法，在人工控制条件下，实现了唐古特白刺种苗的快速繁殖，较以往的种子繁殖和扦插繁殖相比，本发明中将原有的当年生白刺嫩叶进行生根培养作为外植体，这种方法和采用种子萌发作为外植体繁殖的方法相比较，主要优点在于保持母体优良性状不出现分离而防止发生变异，同时还省去了将种子作为外植体进行繁殖过程中的前处理步骤。唐古特白刺的果实性状变异极其复杂，采用种子繁殖容易出现性状分离而丧失优良性状；另外，唐古特白刺果实属于浆果，种子采收晾晒后干燥的浆果包裹在种子外围，易造成消毒不彻底，灭菌后污染的几率很大；同时，种子外有一层坚硬的外壳，通常要采用稀释后的硫酸、温水浸泡等方法处理后才能萌发，以上过程耗时较长且操作复杂，且成苗速度慢。较扦插繁殖相比，成活率高。

15、本发明较以往的组织培养方法比较，本发明中省去了愈伤组织培养的环节，一方面可以避免愈伤组织培养环节出现的褐变、玻璃化、污染等现象的发生；另一方面，使唐古特白刺成苗速度大大提前，幼苗质量大大提高。因此，本发明中采用当年生叶片作为外植体繁殖具有成苗速度快、成本低、成活率高等优势，尤其是避免了有性繁殖中出现的植物变异问题，获得了大量试管苗，为该物种在荒漠地区大量推广普及种植提供了技术支持，同时也为其引种驯化、优良品系筛选、种质资源保护及防沙治沙等提供了技术支撑。

技术特征：

1.一种唐古特白刺叶片诱导成苗的快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述消毒包括以下步骤：采用75％乙醇浸泡20s，再用0.1％hgc12溶液浸泡3min。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述叶片生根培养基的组分为：1/2ms+1.5mg/l吲哚丁酸；对所述嫩叶进行生根培养的条件为：温度23±2℃、光照强度1800-2000lx、光照时间14h/d。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述增殖培养基的组分为：ms+2.0mg/l 6-苄氨基腺嘌呤+1.0mg/l玉米素+2.0mg/l吲哚丁酸；对所述幼株进行增殖培养的条件为：温度23±2℃、光照强度1800-2000lx、光照时间12h/d。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生根培养基的组分为：1/3ms+2.0mg/l吲哚丁酸；对所述不定芽进行生根培养的条件为：温度23±2℃、光照强度1800-2000lx、光照时间12h/d。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述常规培养包括：温室中，温度23±2℃，自然光照下培养成苗。

7.一种如权利要求1-6任一项所述的方法在提升唐古特白刺生根率或者成苗率中的应用。

技术总结
本发明公开了一种唐古特白刺叶片诱导成苗的快速繁殖方法，属于组织培养领域。该方法包括：外植体叶片的生根培养，叶片生根培养基为：1/2MS+0.5mg/L吲哚丁酸；增殖培养，增殖培养基为：MS+2.0mg/L 6‑苄氨基腺嘌呤+1.0mg/L玉米素+2.0mg/L吲哚丁酸；生根培养，生根培养基为：1/3MS+2.0mg/L吲哚丁酸。本发明通过采用组织培养的方法，在人工控制的条件下，实现了唐古特白刺的快速繁殖(从外植体培养到幼苗生根仅需35‑45d)，本发明较以往的组织培养方法比较，省去了愈伤组织培养的环节，可以避免愈伤组织培养环节出现的褐变、玻璃化、污染等现象的发生，使唐古特白刺成苗速度大大提前，幼苗质量大大提高。

技术研发人员：王方琳,尉秋实,胡小柯,胡静,姜生秀
受保护的技术使用者：甘肃省治沙研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23