2-(1h)喹啉酮衍生物,其药物组合物及其制备方法和用途的制作方法
专利名称：2-(1h)喹啉酮衍生物,其药物组合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于药物技术领域，具体地说，涉及一种2_(1H)喹啉酮衍生物，其制备方 法，含其的治疗乙型肝炎的药物组合物，以及该类衍生物及其药物组合物在制备抗乙型肝 炎抑制剂药物和抗乙型肝炎药物中的应用。
背景技术：
据世界卫生组织(WHO)统计，全球大约有20亿人感染过或者正在感染乙型肝炎 病毒(h印atitis B virus，HBV)，其中约4亿人为HBV慢性感染者，每年约有100多万人口 死于乙肝引起的慢性肝炎、肝硬化和原发性肝炎。我国属于乙肝感染的高流行区，据卫生 部统计结果测算，我国现有慢性乙肝病原携带者超过1. 2亿人，其中包括慢性乙肝患者约 2800-3000万例。乙型肝炎是乙型肝炎病毒引起的、以肝脏炎性病变为主并引起多器官损害 的一种传染性疾病。乙型肝炎病毒感染是一个严重的公共卫生问题，而且治疗慢性肝炎的 费用是相当昂贵的，估计每年因病毒性肝炎导致直接经济损失300亿 500亿人民币。近 年来HBV疫苗免疫、各种抗病毒药物的应用在控制HBV感染取得了一定的效果，但同时也导 致HBV变异株出现，HBeAg(hepatitis Bvirus e antigens, e抗原)阴性慢性乙型病毒性 肝炎(Chronic HBV,CHBV)增多，停药后HBV易反弹，而且费用高。为了有效地控制HBV，需 要研制不同类型的临床治疗药物。乙型肝炎病毒属DNA嗜肝病毒科，特点为起病较缓，以亚临床型及慢性型较常见， 无黄疸型HBsAg(h印atitis B virus surfaceantigens，HBsAg)续阳性者易慢性化，主要是 通过血液制品、母婴和性接触等途径传播，且易转成慢性肝炎，是引发肝硬化、肝癌的主要 病因之一。乙型肝炎病毒的复制过程涉及5步结合、侵入、转录、翻译、基因复制和包 装。首先病毒颗粒通过受体附着于肝细胞，侵入胞浆后脱去外膜，形成核心颗粒。核心 颗粒移至肝细胞核，HBV DNA核心颗粒脱壳而出，在细胞核内形成CCCDNA(C0Valently closedcircularDNA, cccDNA)。cccDNA是乙型肝炎病毒复制的模板，是肝细胞长期持续受感 染的关键物质。cccDNA有2种功能，其一是合成病毒颗粒的各种构件，如HBsAg (表面抗原， 构成外膜)，HBcAg(h印atitis virus c antigens，核心抗原，构成内膜)，HBeAg(分泌到血 液中)；其二是合成下一代HBV DNA。大部分新合成的HBV DNA用于新病毒颗粒的包装，部 分则重新进入肝细胞核，成为cccDNA的另一个来源。部分新合成的HBV DNA首先与HBcAg 组装成核心颗粒，进而与HBsAg组装成完整的HBV颗粒，向细胞外释放。过剩的HBsAg有时 独自释放入血液，形成小球型颗粒或管型颗粒。目前公认的疗效较好的抗乙肝病毒药物主要为核苷类药物如拉米夫定 (lamivudine)、阿德福韦酯(adefovir dipivoxiil)、恩替卡韦(enticavir)、替比夫定 (tibivudine)。这些药物在体外或体内实验中，对HBV病毒有抑制作用。其作用机制为药 物进入细胞内成为三磷酸化合物，通过底物的竞争，对病毒的聚合酶或反转录酶抑制，最终 抑制病毒DNA的合成、病毒的增殖。核苷类似物抗HBV，具有疗效显著、服用方便、生物利用
3度高、患者耐受性良好等特点，不足之处是疗效欠持久、停药病情易反复，以及病毒发生耐 药性变异。为控制乙型肝炎的蔓延，医学界还研究出有效的乙型肝炎疫苗，对公众进行免疫 注射，主要用于预防，获得了良好效果。但对已感染HBV则无效。另外治疗慢性乙型肝炎采用的药物是a-干扰素(IFN)，兼具有抗病毒和免疫调 节功能。但干扰素治疗慢性乙型肝炎有其制约因素其一，它从未获得真正成功，除非病人 在治疗前已出现对HBV的实质性免疫反应。其二，在干扰素诱导的HBeAg血清转换之前，肝 炎活动的突然一过性加重，表现为ALT (alanine aminotransferase, ALT，丙氨酸氨基转移 酶)升高，可导致肝硬化病人发生肝功能衰竭，偶尔出现死亡。综上所述，抗肝炎药物有非常大的市场需求，但是现在临床应用的抗肝炎药物普 遍存在耐药性的问题，目前国际国内者在致力于成功地开发出能解决药物的耐药性，临床 效率高且毒副作用较小的新一代抗乙型肝炎的药物。迄今，现有技术中没有2_(1H)喹啉酮衍生物的报道，也没有以其作为有效成分的 药物组合物的报道，也没有其在制备或治疗乙型肝炎药物中的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一类2_(1H)喹啉酮衍生物，含其为有效成分及药用载体 组成的药物组合物，该类衍生物及其药物组合物的制备方法，及其在制备抗乙型肝炎抑制 剂药物和在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案结构式⑴所示的2_(1H)喹啉酮衍生物1-11，其中n为2、R为H的2_(1H)喹啉酮衍生物1，其中n为2、R为3-F的2_(1H)喹啉酮衍生物2，其中n为2、R为2-0CH3的2_(1H)喹啉酮衍生物3，其中n为2、R为3-0CHs的2_(1H)喹啉酮衍生物4，其中n为2、R为4-0CH3的2_ (1H)喹啉酮衍生物5，其中n为2、R为3-CFs的2_(1H)喹啉酮衍生物6，其中n为2、R为4_CF3的2_(1H)喹啉酮衍生物7，其中n为2、R为3，4_0CH20的2_ (1H)喹啉酮衍生物8，其中n为2、R为3，4-20CH3的2_(1H)喹啉酮衍生物9，其中n为3、R为3_0CH3的2_ (1H)喹啉酮衍生物10，其中n为1、R为3_0CH3的2_ (1H)喹啉酮衍生物11。
制备权利要求1喹啉酮衍生物的方法，在2_(1H)喹啉酮，桂皮酸或取代的桂皮酸 3-氟桂皮酸或2-甲氧基桂皮酸或3-甲氧基桂皮酸或4-甲氧基桂皮酸或3-氟甲基桂皮酸 或4-氟甲基桂皮酸或3，4- ( 二氧亚甲基)桂皮酸或3，4- 二甲氧基桂皮酸，4- 二甲胺基吡 啶的二氯甲烷溶液中加入N，N-二环己基碳二亚胺，室温搅拌反应12h，过滤除去白色沉淀， 减压回收二氯甲烷，得粗品，经硅胶柱层析，用石油醚/丙酮或氯仿/甲醇洗脱得2_(1H)喹 啉酮衍生物1-11。用于治疗乙型肝炎的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1的2_(1H)喹 啉酮衍生物1-11和药学上可接受的载体。本发明任意一项的2_(1H)喹啉酮衍生物1-11在制备治疗或预防乙型肝炎抑制剂 药物中的应用。本发明任意一项的2_(1H)喹啉酮衍生物1-11在制备治疗或预防乙型肝炎药物中 的应用。本发明药物组合物在制备抗乙型肝炎药物中的应用。本发明化合物2_(1H)喹啉酮衍生物1-11用作药物时，可以直接使用，或者以药物 组合物的形式使用。该药物组合物含有0. 1-99%，优选为0. 5-90%的本发明化合物，其余 为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药 物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经注 射(静注、肌注)和口服两种形式给药。
具体实施例方式为了更好地理解本发明的实质，下面将用本发明的试验例来说明本发明2_(1H) 喹啉酮衍生物(I)的药理作用结果。试验例1 喹啉酮衍生物2_(1H)喹啉酮衍生物1-11对H印G2. 2. 15细胞的药物毒性和对 HBsAg、HBeAg分泌的抑制作用以及对HBV DNA复制的抑制作用。1材料和方法1.1材料喹啉酮衍生物(I)；拉米夫定(lamivudine)(葛兰素史克制药(苏 州)有限公司，国药准字H20030581) ；Hep G2. 2.15细胞(引自广州空军医院)；高糖 DMEM(GIBICO) ；G418 (GIBIC0)；胎牛血清(天津血研所)；L-谷氨酰胺(AMRESC0)；青霉素， 链霉素(石药集团中诺药业(石家庄)有限公司)。1. 2Hep G2. 2. 15细胞，用高糖DMEM液培养，培养液添加10 %胎牛血清，0. 03 % L-谷氨酰胺，100mg/L G418，105IU/L 青酶素，100mg/L 链霉素，5% NaC03 调 pH 至 6. 8-7. 0。1. 3 仪器酶标仪 Bio-RAD 680 (美国)；C02 培养箱 Thermo Forma3310 (美国)；倒 置生物显微镜XD-101型(南京)等。1.4实验过程用胰蛋白酶将H印G2. 2. 15细胞消化，用添加了 0.03% L-谷氨 酰胺，100mg/L G418，100IU青酶素，100IU链霉素的高糖DMEM液制成单细胞悬液，每孔按 3X105X0. lmL-1分种于96孔板，0. lmL/孔，24h后换用含2%的胎牛血清，380 u g/mL的含 药培养液，每种药物设四个药物浓度，每个浓度设三孔，四倍稀释，同时设三孔不加药物的
5细胞对照组及一孔空白细胞组，并以拉米夫定做阳性药物对照；7d后收集上清，用ELISA法 测定HBsAg和HBeAg的分泌情况。同时用MTT法测定药物对细胞的毒性。1. 5药物对细胞半数毒性浓度(CC5(1)的测定根据Mosmarm建立的MTT法检测药 白勺个生(y Nakajima, Y. Saton, M. Katsumata, K. Tsujiyama, Y. Ida, and J. Shoji, Phytochemistry 1994,36,119-127)。具体方法是向吸去上清的细胞孔中加入0. 4mg/ mLMTT，0. lmL/孔，37°C 5% C02培养4h，去上清，每孔加入0. lmL 二甲基亚砜，孵育lOmin, 在酶标仪上测定溶液在490nm下的吸光度值。药物对细胞的破坏百分率ndeste。y= (A 照组-A供试细胞对腕X100，50%毒性浓度(CC5Q)为实验孔存活细胞为对照孔 50%时的药物浓度。CC5Q = Anti lg[(C50- < 50%破坏率的百分数)/( > 50%破坏率的百 分数-< 50%破坏率的百分数)XC+lg B]，A 破坏率大于50%的药物浓度；B 破坏率小于 50%的药物浓度；C = lg A-lg B。1.6药物对细胞半数抑制浓度的测定采用酶联免疫法(ELISA)测定。药物对
HBsAg.HBeAg的_制百分 n inhibitory = (A细胞对照组供试样品组)/A细胞对照组空白组)X 100，50%
抑制浓度(IC5(1)为HBsAg或HBeAg以抑制率为50%时的药物浓度，计算方法同CC5(1。1. 7药物对HBV DNV抑制细胞复制的半数浓度的测定H印G2. 2. 15细胞种于24孔培养基中，每孔细胞浓度5 X 105。每2天换一次培养基，6 天以后把化合物加入培养基中，接下来每天换一次培养基，连续6天。6天后根据TIANamp Gemomic DNA Kit(TIANGEN, China)手册方法分离、收集细胞和DNA。用PCR实时定量检测 HBVDNA，用 SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems)定量 PCR 检测 HBV DNA 载
fio2.结果最终结果以选择指数(SI，为评价药物临床应用前景的参数，SI = CCJ IC50)来评价，其中SI > 2为无毒有效，1 < SI < 2为有毒有效，SI < 1为有毒无效。具体 结果见表1，表2。3、结论实验结果显示，2-(1H)喹啉酮衍生物(I)在体外对H印G2. 2. 15细胞分 泌HBsAg和HBeAg有一定的抑制作用；2_(1H)喹啉酮衍生物2、4、6、8和11对HBV DNA复 制有一定的抑制作用。表1 2_(1H)喹啉酮衍生物1-11对H印G2. 2. 15细胞HBsAg、HBeAg的抑制效果
和细胞毒性作用
6 表2 2- (1H)喹啉酮衍生物对H印G2. 2. 15细胞HBV DNA复制的抑制作用 下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限 制本发明。实施例1 2-(lH)喹啉酮衍生物(1-9)的制备方法氮气保护下向100mL两口加入3. 76mmol (lg)和经无水处理的THF 20mL,搅拌下冷 却至0°C，氮气保护下滴加LiHMDS的THF溶液28. 2mL(lM in THF)，0°C下继续搅拌30分钟， 随后逐滴滴加1，4_ 丁内酯(16. 92mmol)，滴加结束将反应体系控制在0°C下反应30分钟随 后升温至室温反应30分钟，加入水10. 2mL，室温下搅拌24小时。反应结束后将反应液倒 入lOOmL冰水中，乙酸乙酯(100mLX3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减 压蒸除溶剂得到粗产品。粗品与相应取代的桂皮酸(桂皮酸、3-氟桂皮酸、2-甲氧基桂皮 酸、3-甲氧基桂皮酸、4-甲氧基桂皮酸、3-氟甲基桂皮酸、4-氟甲基桂皮酸、3，4-(二氧亚甲 基)桂皮酸、3，4_二甲氧基桂皮酸)(1. 5equiv mmol)、DCC(1. 5equiv mmol)、DMAP(0. 5equivmmol)溶解在10mL 二氯甲烷中，室温搅拌，TCL检测，待反应结束后，将反应液过滤，滤液减 压浓缩，将粗品溶于适量二氯甲烷中，依次用5%盐酸(20mLX3)、5%碳酸氢钠(30mLX3) 和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品；硅胶柱层析纯化(石油醚/ 丙酮，90 10;氯仿/甲醇，70 1;氯仿/甲醇，100 1;氯仿/甲醇，95 5;氯仿/甲 醇，70 1;氯仿/甲醇，70 1;氯仿/甲醇，70 1;氯仿/甲醇，98 2;氯仿/甲醇， 98 2)，得化合物1-9。 质谱(MS)用VG Auto Spec-3000型质谱仪测定；核磁共振谱(屯NMR和13C NMR) 用Bruker AM-500超导核磁共振仪测定，TMS作内标；青岛美高化工厂出品的200-300目硅 胶作为柱层析材料。2-(lH)喹啉酮衍生物1-9的结构数据分子式C26H19N03C12分子量463性状白色无定型粉末谱图数据NMR (CDC13,400MHz) 8 7. 63-7. 26 (12H, m)，6. 86 (1H, d, J = 2. 0Hz)，6. 36 (1H, d, J = 16Hz)，4. 46 (2H, t, J = 6. 4Hz)，3. 04 (1H, m)，2. 77 (1H, m) ；13C 匪R(CDC13，100MHz) 8 166. 7，163. 8，147. 1，144. 7，135. 9，134. 3，134. 1，132. 9，130. 8，130. 5，130. 3，130. 2， 130. 17，129. 1,128. 8(2C)，128. 1，127. 9(2C)，127. 2，125. 5，121. 4,118. 0,117. 6,62. 3， 28. 2 ；FABMS :m/z 464[M+H]+, HRESIMS :calc for C26H19N03Cl2Na[M+Na]+486. 0639，found 486. 0636. 分子式C26H18N03C12F分子量481性状白色无定型粉末
谱图数据NMR(CDC13，500MHz) 8 13. 23 (1H, br. s), 7. 60-7. 44 (6H, m) , 7. 33-7. 03 (5H, m)，6. 86 (1H, s)，6. 50 (1H, d, J = 16. 0Hz)，4. 46 (2H, t, J = 6. 9Hz)，3. 07-3. 02 (1H, m)， 2. 81-2. 76 (1H, m) ；13C NMR(CDC13,125MHz) 8 166. 3，164. 0，162. 0，147. 1，143. 2，136. 6， 136. 0，134. 2，133. 0，130. 7，130. 4，130. 4，130. 2，129. 2，128. 1, 127. 2，125. 5，123. 9， 121. 1,119. 5，117. 6,117. 2，117. 0，114. 2,62. 6,28. 2 ；ESIMS :m/z 504[M+Na].，HRESIMS calc for C26H19N03C12F[M+H]+482. 0726，found 482. 0716.
分子式C27H21N04C12分子量493性状白色无定型粉末谱图数据NMR(CDC13, 400MHz) 8 13. 16 (1H, br. s) , 7. 91 (1H, d, J = 16. 0Hz), 7. 60-7. 26 (8H, m)，6. 94-6. 87 (3H, m)，6. 46 (1H, d, J = 16. 0Hz)，4. 47 (2H, m)，3. 84 (3H, s) ,3. 08-3. 03 (1H, m) ,2. 78-2. 78 (1H, m) ； 13CNMR (CDC13,100MHz) 8 167. 2，163. 9，158. 2， 147. 2，140. 1, 135. 9，134. 2，132. 9，131. 4，130. 8，130. 4，130. 3，130. 1, 129. 2，128. 8， 128. 1,127. 2，125. 4，123. 3，121. 2，120. 6,118. 6，117. 8, 111. 0,62. 2,55. 4,28. 3 ；ESIMS m/z 516 [M+Na]+，HRESIMS :calc for C27H21N04Cl2Na[M+Na]+516. 0745，found 516.0759. 分子式C27H21N04C12分子量493性状白色无定型粉末谱图数据NMR (CDC13，500MHz) 8 7. 60-7. 42 (6H, m)，7. 27 (3H, m)，7. 05 (1H, d, J = 7. 5Hz) ,6. 97 (1H, s) ,6. 90 (1H, dd, J = 7. 5，2. 5Hz)，6. 86 (1H，d, J = 2. 0Hz)，6. 35 (1H， d, J =16. 0Hz)，4. 50 (2H, t, J = 5. 2Hz)，3. 80 (3H, s)，3. 03 (1H, m)，2. 77 (1H, m) ；13CNMR(CDC13，125MHz) 8 166. 6，163. 8，159. 8，147. 2，144. 6，135. 9，135. 7，134. 1,132. 9， 130. 7，130. 5，130. 4，130. 2，129. 8，129. 1, 128. 2，127. 2，125. 5，121. 2，120. 6, 118. 3， 117. 7, 116. 1，112. 8,62. 4,55. 2,28. 2 ；ESIMS :m/z 516[M+Na] +，HRESIMS :calc for C27H22N04Cl2[M+H]+494. 0925，found 494. 0932.
分子式C27H21N04C12分子量493 性状白色无定型粉末谱图数据匪R (CDC13，500MHz) 8 13. 28 (1H, br. s)，7. 60-7. 38 (8H, m)，7. 28 (1H, d, J = 8. 0Hz)，6. 86 (3H, m)，6. 24 (1H, d, J = 16. 0Hz)，4. 45 (2H, m)，3. 81 (3H, s)，3. 08-3. 03 (1H, m)，2. 80-2. 74 (1H, m) ；13C NMR(CDC13,125MHz) 8 167. 1，164. 0，161. 3，147. 0，144. 3，136. 0， 134. 2，132. 9，130. 8，130. 4，130. 3，130. 1，129. 6 (2C)，129. 3，128. 0，127. 2，127. 0，125. 4， 121. 1，117. 7，115. 5，114. 2(2C) ,62. 3,55. 3,28. 2 ；ESIMS :m/z 516[M+Na].，HRESIMS :calc for C27H21N04Cl2Na[M+Na]+516. 0745，found 516. 0754.
分子式:C27H18N03C12F3 分子量531 性状白色无定型粉末 谱图数据 NMR (CDC13,400MHz) 8 13. 19 (1H, br. s)，7. 69-7. 42 (10H, m)，7. 25 (1H, dd, J = 7. 2，1. 6Hz)，6. 86 (1H, d, J = 2. 0Hz)，4. 42 (1H, d, J = 16. 0Hz)，4. 46 (2H, t, J = 6. 8Hz)， 3. 07-3. 00 (1H，m) ,2. 83-2. 76 (1H，m) ；13C NMR(CDC13, 100MHz) 8 166. 2，163. 9，147. 3， 142. 8，136. 0，135. 1, 134. 1, 133. 0，130. 9，130. 7，130. 5，130. 4，130. 2，129. 4，129. 0， 128. 2，127. 3，126. 6，126. 6，125. 5，124. 5，124. 5，121. 1，120. 0,117. 7,62. 6,28. 2 ；ESIMS m/z554[M+Na]+，HRESIMS :calc for C27H19N03C12F3[M+H]+532. 0694，found 532. 0693.
分子式C27H18N03C12F3分子量531性状白色无定型粉末谱图数据 分子式C27H19N05C12分子量507性状白色无定型粉末谱图数据 分子式C28H23N05C12分子量523性状白色无定型粉末谱图数据NMR(CDC13，400MHz) 8 13. 18 (1H，br. s) , 7. 59-6. 80(11H, m) ,6. 24 (1H，d J = 16. 0Hz)，4. 43 (2H, t, J = 6. 8Hz)，3. 88 (3H, s)，3. 86 (3H, s)，3. 05-2. 99 (1H, m) 2. 80-2. 74 (1H, m) ；13C NMR(CDC13,100MHz) 8 166. 9，163. 9，151. 0，149. 1，147. 1，144. 8 144. 6，136. 0，134. 1, 132. 9，130. 7，130. 4，130. 3，130. 2，129. 2，128. 0，127. 2，125. 4 122. 5，121. 1，117. 7，115. 7，115. 4，110. 9,62. 2,55. 9,51. 6,28. 2 ；ESIMS :m/z 546 [M+Na]+ HRESIMS :calc for C28H23N05Cl2Na[M+Na]+ 546. 0850, found 546.0855.实施例2:2-(lH)喹啉酮衍生物(10)的制备氮气保护下向100mL两口加入3. 76mmol(lg)和经无水处理的THF 20mL，搅拌下 冷却至0°C，氮气保护下滴加LiHMDS的THF溶液28. 2mL(lM in THF)，0°C下继续搅拌30分 钟，随后逐滴滴加戊内酯(16. 92mmol)，滴加结束将反应体系控制在0°C下反应30分钟随 后升温至室温反应30分钟，加入水10. 2mL，室温下搅拌24小时。反应结束后将反应液倒 入100mL冰水中，乙酸乙酯(100mLX3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥， 减压蒸除溶剂得到粗产品。粗品与相应3-甲氧基桂皮酸(1. 5equiv mmol)、DCC(1. 5equiv mmol),DMAP (0. 5equiv mmol)溶解在lOmL 二氯甲烷中，室温搅拌，TCL检测，待反应结束后， 将反应液过滤，滤液减压浓缩，将粗品溶于适量二氯甲烷中，依次用5%盐酸(20mLX3)、 5%碳酸氢钠(30mLX3)和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品；硅 胶柱层析纯化(氯仿/甲醇，95 5)，得化合物10。质谱(MS)用VG Auto Spec-3000型质谱仪测定；核磁共振谱(屯NMR和13C NMR) 用Bruker AM-500超导核磁共振仪测定，TMS作内标；青岛美高化工厂出品的200-300目硅 胶作为柱层析材料。 分子式C28H23N04C12分子量507性状黄色无定型粉末谱图数据匪R (CDC13，500MHz) 8 13. 1 (1H, br. s)，7. 56-7. 24 (9H, m)，7. 30-6. 85 (3H, m)， 6. 27 (1H, d, J = 16. 0Hz)，4. 18 (2H, t, J = 6. 0Hz)，3. 83 (3H, s)，2. 69 (1H, m)，2. 51 (1H, m) ,2. 00 (2H, m) ；13C NMR(CDC13,125MHz) 8 166. 7，164. 0，159. 9，145. 6，144. 4，135. 8， 135. 7，134. 5，133. 0，132. 7，130. 5，130. 13，130. 07，129. 9，127. 9，127. 3，125. 3，121. 2， 120. 6，118. 4，117. 5，116. 1，116. 0，113. 0,64. 3,55. 3,27. 3,25. 3 ；ESIMS :m/z 530 [M+Na] HRESIMS :calc for C28H23N04Cl2Na[M+Na]+530. 0901，found 530.0890.实施例3:2- (1H)喹啉酮衍生物11的制备氮气保护下向100mL两口加入3. 76mmol (lg)和经无水处理的THF 20mL，搅拌下 冷却至0°C，氮气保护下滴加LiHMDS的THF溶液28. 2mL(lM in THF)，0°C下继续搅拌30分 钟，随后逐滴滴加丙内酯(16. 92mmol)，滴加结束将反应体系控制在0°C下反应30分钟随后 升温至室温反应30分钟，加入水10. 2mL，室温下搅拌24小时。反应结束后将反应液倒入 100mL冰水中，乙酸乙酯(100mLX3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压 蒸除溶剂得到粗产品。粗品与3-甲氧基桂皮酸(1. 5equiv mmol)、DCC(1. 5equiv mmol)、 DMAP(0. 5equiv mmol)溶解在lOmL 二氯甲烷中，室温搅拌，TCL检测，待反应结束后，将反应 液过滤，滤液减压浓缩，将粗品溶于适量二氯甲烷中，依次用5%盐酸(20mLX3)、5%碳酸 氢钠(30mLX3)和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品；硅胶柱层析 纯化(洗脱条件氯仿甲醇=100 1)，得黄色无定型粉11。质谱(MS)用VG Auto Spec-3000型质谱仪测定；核磁共振谱CH匪R和13C匪R) 用Bruker AM-500超导核磁共振仪测定，TMS作内标；青岛美高化工厂出品的200-300目硅 胶作为柱层析材料。2-(lH)喹啉酮衍生物11的结构数据 分子式C26H19C12N04分子量479性状黄色无定型粉末谱图数据NMR(CDC13，500MHz) 8 13. 09 (1H, br. s) , 7. 58 (2H, m) , 7. 49-7. 38 (4H, m)， 7. 27 (2H, m)，7. 06 (1H, d, J = 7. 5Hz)，6. 98 (1H, s)，6. 94 (2H, m)，6. 34 (1H, d, J = 16. 0Hz)， 5. 25 (1H, d, J = 11. 6Hz) ,4. 97 (1H, d, J = 11. 6Hz)，3. 80 (3H，s) ；13C 匪R(CDC13，125MHz) 8 166. 4，163. 4，159. 8，149. 7，144. 9，136. 8，135. 6，133. 2，132. 9，131. 5，130. 6，130. 4， 130. 1,129. 8，128. 3，127. 2，126. 6，126. 0，122. 5，120. 74，120. 69,117. 9,116. 2,112. 8， 58. 8,55. 2 ；EIMS :m/z 479 [M]+, HRESIMS :calc forC26H20N04Cl2 [M+H] +480. 0769，found 480. 0771.实施例4:按实施例1-3的方法先制得2_(1H)喹啉酮衍生物1-11，分别用少量的DMS0溶解 后，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。实施例5:按实施例1-3的方法先制得2_(1H)喹啉酮衍生物1-11，分别用少量的DMS0溶解 后，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶解，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿 中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。实施例6:按实施例1-3的方法先制得2-(1H)喹啉酮衍生物1-11，分别按其与赋形剂重量比 为9 1的比例加入赋形剂，制成粉剂。实施例7:按实施例1-3的方法先制得2-(1H)喹啉酮衍生物1-11，分别按其与赋形剂重量比 为5 1的比例加入赋形剂，制粒压片。实施例8:按实施例1-3的方法先制得2-(1H)喹啉酮衍生物1-11，分别按常规口服液制法制 成口服液。实施例9:按实施例1-3的方法先制得2-(1H)喹啉酮衍生物1-11，分别按其与赋形剂重量比 为5 1的比例加入赋形剂，制成胶囊。实施例10
14
按实施例1-3的方法先制得2-(1H)喹啉酮衍生物1-11，分别按其与赋形剂重量比 为3 1的比例加入赋形剂，制成胶囊。
权利要求
结构式(I)所示的2-(1H)喹啉酮衍生物1-11，其中n为2、R为H的2-(1H)喹啉酮衍生物1，其中n为2、R为3-F的2-(1H)喹啉酮衍生物2，其中n为2、R为2-OCH3的2-(1H)喹啉酮衍生物3，其中n为2、R为3-OCH3的2-(1H)喹啉酮衍生物4，其中n为2、R为4-OCH3的2-(1H)喹啉酮衍生物5，其中n为2、R为3-CF3的2-(1H)喹啉酮衍生物6，其中n为2、R为4-CF3的2-(1H)喹啉酮衍生物7，其中n为2、R为3，4-OCH2O的2-(1H)喹啉酮衍生物8，其中n为2、R为3，4-20CH3的2-(1H)喹啉酮衍生物9，其中n为3、R为3-OCH3的2-(1H)喹啉酮衍生物10，其中n为1、R为3-OCH3的2-(1H)喹啉酮衍生物11。FSA00000140326600011.tif
2.制备权利要求1喹啉酮衍生物的方法，在2-(1Η)喹啉酮，桂皮酸或取代的桂皮酸 3-氟桂皮酸或2-甲氧基桂皮酸或3-甲氧基桂皮酸或4-甲氧基桂皮酸或3-氟甲基桂皮酸 或4-氟甲基桂皮酸或3，4- ( 二氧亚甲基)桂皮酸或3，4- 二甲氧基桂皮酸，4- 二甲胺基吡 啶的二氯甲烷溶液中加入N，N-二环己基碳二亚胺，室温搅拌反应12h，过滤除去白色沉淀， 减压回收二氯甲烷，得粗品，经硅胶柱层析，用石油醚/丙酮或氯仿/甲醇洗脱得2-(1Η)喹 啉酮衍生物1-11。
3.用于治疗乙型肝炎的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1的2-(1Η)喹啉 酮衍生物1-11和药学上可接受的载体。
4.权利要求1任意一项的化合物在制备治疗或预防乙型肝炎抑制剂药物中的应用。
5.权利要求1任意一项的化合物在制备治疗或预防乙型肝炎药物中的应用。
6.权利要求3药物组合物在制备抗乙型肝炎药物中的应用。
全文摘要
结构式(I)所示的2-(1H)喹啉酮衍生物1-11，其制备方法，含其的治疗乙型肝炎的药物组合物，以及该类衍生物及其药物组合物在制备抗乙型肝炎抑制剂药物和抗乙型肝炎药物中的应用。
文档编号A61P31/20GK101851196SQ20101018603
公开日2010年10月6日 申请日期2010年5月28日 优先权日2010年5月28日
发明者周俊, 张雪梅, 江志勇, 罗杰, 郭锐华, 陈纪军, 马云保 申请人:中国科学院昆明植物研究所
技术领域：
本发明属于药物技术领域，具体地说，涉及一种2_(1H)喹啉酮衍生物，其制备方 法，含其的治疗乙型肝炎的药物组合物，以及该类衍生物及其药物组合物在制备抗乙型肝 炎抑制剂药物和抗乙型肝炎药物中的应用。
背景技术：
据世界卫生组织(WHO)统计，全球大约有20亿人感染过或者正在感染乙型肝炎 病毒(h印atitis B virus，HBV)，其中约4亿人为HBV慢性感染者，每年约有100多万人口 死于乙肝引起的慢性肝炎、肝硬化和原发性肝炎。我国属于乙肝感染的高流行区，据卫生 部统计结果测算，我国现有慢性乙肝病原携带者超过1. 2亿人，其中包括慢性乙肝患者约 2800-3000万例。乙型肝炎是乙型肝炎病毒引起的、以肝脏炎性病变为主并引起多器官损害 的一种传染性疾病。乙型肝炎病毒感染是一个严重的公共卫生问题，而且治疗慢性肝炎的 费用是相当昂贵的，估计每年因病毒性肝炎导致直接经济损失300亿 500亿人民币。近 年来HBV疫苗免疫、各种抗病毒药物的应用在控制HBV感染取得了一定的效果，但同时也导 致HBV变异株出现，HBeAg(hepatitis Bvirus e antigens, e抗原)阴性慢性乙型病毒性 肝炎(Chronic HBV,CHBV)增多，停药后HBV易反弹，而且费用高。为了有效地控制HBV，需 要研制不同类型的临床治疗药物。乙型肝炎病毒属DNA嗜肝病毒科，特点为起病较缓，以亚临床型及慢性型较常见， 无黄疸型HBsAg(h印atitis B virus surfaceantigens，HBsAg)续阳性者易慢性化，主要是 通过血液制品、母婴和性接触等途径传播，且易转成慢性肝炎，是引发肝硬化、肝癌的主要 病因之一。乙型肝炎病毒的复制过程涉及5步结合、侵入、转录、翻译、基因复制和包 装。首先病毒颗粒通过受体附着于肝细胞，侵入胞浆后脱去外膜，形成核心颗粒。核心 颗粒移至肝细胞核，HBV DNA核心颗粒脱壳而出，在细胞核内形成CCCDNA(C0Valently closedcircularDNA, cccDNA)。cccDNA是乙型肝炎病毒复制的模板，是肝细胞长期持续受感 染的关键物质。cccDNA有2种功能，其一是合成病毒颗粒的各种构件，如HBsAg (表面抗原， 构成外膜)，HBcAg(h印atitis virus c antigens，核心抗原，构成内膜)，HBeAg(分泌到血 液中)；其二是合成下一代HBV DNA。大部分新合成的HBV DNA用于新病毒颗粒的包装，部 分则重新进入肝细胞核，成为cccDNA的另一个来源。部分新合成的HBV DNA首先与HBcAg 组装成核心颗粒，进而与HBsAg组装成完整的HBV颗粒，向细胞外释放。过剩的HBsAg有时 独自释放入血液，形成小球型颗粒或管型颗粒。目前公认的疗效较好的抗乙肝病毒药物主要为核苷类药物如拉米夫定 (lamivudine)、阿德福韦酯(adefovir dipivoxiil)、恩替卡韦(enticavir)、替比夫定 (tibivudine)。这些药物在体外或体内实验中，对HBV病毒有抑制作用。其作用机制为药 物进入细胞内成为三磷酸化合物，通过底物的竞争，对病毒的聚合酶或反转录酶抑制，最终 抑制病毒DNA的合成、病毒的增殖。核苷类似物抗HBV，具有疗效显著、服用方便、生物利用
3度高、患者耐受性良好等特点，不足之处是疗效欠持久、停药病情易反复，以及病毒发生耐 药性变异。为控制乙型肝炎的蔓延，医学界还研究出有效的乙型肝炎疫苗，对公众进行免疫 注射，主要用于预防，获得了良好效果。但对已感染HBV则无效。另外治疗慢性乙型肝炎采用的药物是a-干扰素(IFN)，兼具有抗病毒和免疫调 节功能。但干扰素治疗慢性乙型肝炎有其制约因素其一，它从未获得真正成功，除非病人 在治疗前已出现对HBV的实质性免疫反应。其二，在干扰素诱导的HBeAg血清转换之前，肝 炎活动的突然一过性加重，表现为ALT (alanine aminotransferase, ALT，丙氨酸氨基转移 酶)升高，可导致肝硬化病人发生肝功能衰竭，偶尔出现死亡。综上所述，抗肝炎药物有非常大的市场需求，但是现在临床应用的抗肝炎药物普 遍存在耐药性的问题，目前国际国内者在致力于成功地开发出能解决药物的耐药性，临床 效率高且毒副作用较小的新一代抗乙型肝炎的药物。迄今，现有技术中没有2_(1H)喹啉酮衍生物的报道，也没有以其作为有效成分的 药物组合物的报道，也没有其在制备或治疗乙型肝炎药物中的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一类2_(1H)喹啉酮衍生物，含其为有效成分及药用载体 组成的药物组合物，该类衍生物及其药物组合物的制备方法，及其在制备抗乙型肝炎抑制 剂药物和在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案结构式⑴所示的2_(1H)喹啉酮衍生物1-11，其中n为2、R为H的2_(1H)喹啉酮衍生物1，其中n为2、R为3-F的2_(1H)喹啉酮衍生物2，其中n为2、R为2-0CH3的2_(1H)喹啉酮衍生物3，其中n为2、R为3-0CHs的2_(1H)喹啉酮衍生物4，其中n为2、R为4-0CH3的2_ (1H)喹啉酮衍生物5，其中n为2、R为3-CFs的2_(1H)喹啉酮衍生物6，其中n为2、R为4_CF3的2_(1H)喹啉酮衍生物7，其中n为2、R为3，4_0CH20的2_ (1H)喹啉酮衍生物8，其中n为2、R为3，4-20CH3的2_(1H)喹啉酮衍生物9，其中n为3、R为3_0CH3的2_ (1H)喹啉酮衍生物10，其中n为1、R为3_0CH3的2_ (1H)喹啉酮衍生物11。
制备权利要求1喹啉酮衍生物的方法，在2_(1H)喹啉酮，桂皮酸或取代的桂皮酸 3-氟桂皮酸或2-甲氧基桂皮酸或3-甲氧基桂皮酸或4-甲氧基桂皮酸或3-氟甲基桂皮酸 或4-氟甲基桂皮酸或3，4- ( 二氧亚甲基)桂皮酸或3，4- 二甲氧基桂皮酸，4- 二甲胺基吡 啶的二氯甲烷溶液中加入N，N-二环己基碳二亚胺，室温搅拌反应12h，过滤除去白色沉淀， 减压回收二氯甲烷，得粗品，经硅胶柱层析，用石油醚/丙酮或氯仿/甲醇洗脱得2_(1H)喹 啉酮衍生物1-11。用于治疗乙型肝炎的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1的2_(1H)喹 啉酮衍生物1-11和药学上可接受的载体。本发明任意一项的2_(1H)喹啉酮衍生物1-11在制备治疗或预防乙型肝炎抑制剂 药物中的应用。本发明任意一项的2_(1H)喹啉酮衍生物1-11在制备治疗或预防乙型肝炎药物中 的应用。本发明药物组合物在制备抗乙型肝炎药物中的应用。本发明化合物2_(1H)喹啉酮衍生物1-11用作药物时，可以直接使用，或者以药物 组合物的形式使用。该药物组合物含有0. 1-99%，优选为0. 5-90%的本发明化合物，其余 为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药 物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经注 射(静注、肌注)和口服两种形式给药。
具体实施例方式为了更好地理解本发明的实质，下面将用本发明的试验例来说明本发明2_(1H) 喹啉酮衍生物(I)的药理作用结果。试验例1 喹啉酮衍生物2_(1H)喹啉酮衍生物1-11对H印G2. 2. 15细胞的药物毒性和对 HBsAg、HBeAg分泌的抑制作用以及对HBV DNA复制的抑制作用。1材料和方法1.1材料喹啉酮衍生物(I)；拉米夫定(lamivudine)(葛兰素史克制药(苏 州)有限公司，国药准字H20030581) ；Hep G2. 2.15细胞(引自广州空军医院)；高糖 DMEM(GIBICO) ；G418 (GIBIC0)；胎牛血清(天津血研所)；L-谷氨酰胺(AMRESC0)；青霉素， 链霉素(石药集团中诺药业(石家庄)有限公司)。1. 2Hep G2. 2. 15细胞，用高糖DMEM液培养，培养液添加10 %胎牛血清，0. 03 % L-谷氨酰胺，100mg/L G418，105IU/L 青酶素，100mg/L 链霉素，5% NaC03 调 pH 至 6. 8-7. 0。1. 3 仪器酶标仪 Bio-RAD 680 (美国)；C02 培养箱 Thermo Forma3310 (美国)；倒 置生物显微镜XD-101型(南京)等。1.4实验过程用胰蛋白酶将H印G2. 2. 15细胞消化，用添加了 0.03% L-谷氨 酰胺，100mg/L G418，100IU青酶素，100IU链霉素的高糖DMEM液制成单细胞悬液，每孔按 3X105X0. lmL-1分种于96孔板，0. lmL/孔，24h后换用含2%的胎牛血清，380 u g/mL的含 药培养液，每种药物设四个药物浓度，每个浓度设三孔，四倍稀释，同时设三孔不加药物的
5细胞对照组及一孔空白细胞组，并以拉米夫定做阳性药物对照；7d后收集上清，用ELISA法 测定HBsAg和HBeAg的分泌情况。同时用MTT法测定药物对细胞的毒性。1. 5药物对细胞半数毒性浓度(CC5(1)的测定根据Mosmarm建立的MTT法检测药 白勺个生(y Nakajima, Y. Saton, M. Katsumata, K. Tsujiyama, Y. Ida, and J. Shoji, Phytochemistry 1994,36,119-127)。具体方法是向吸去上清的细胞孔中加入0. 4mg/ mLMTT，0. lmL/孔，37°C 5% C02培养4h，去上清，每孔加入0. lmL 二甲基亚砜，孵育lOmin, 在酶标仪上测定溶液在490nm下的吸光度值。药物对细胞的破坏百分率ndeste。y= (A 照组-A供试细胞对腕X100，50%毒性浓度(CC5Q)为实验孔存活细胞为对照孔 50%时的药物浓度。CC5Q = Anti lg[(C50- < 50%破坏率的百分数)/( > 50%破坏率的百 分数-< 50%破坏率的百分数)XC+lg B]，A 破坏率大于50%的药物浓度；B 破坏率小于 50%的药物浓度；C = lg A-lg B。1.6药物对细胞半数抑制浓度的测定采用酶联免疫法(ELISA)测定。药物对
HBsAg.HBeAg的_制百分 n inhibitory = (A细胞对照组供试样品组)/A细胞对照组空白组)X 100，50%
抑制浓度(IC5(1)为HBsAg或HBeAg以抑制率为50%时的药物浓度，计算方法同CC5(1。1. 7药物对HBV DNV抑制细胞复制的半数浓度的测定H印G2. 2. 15细胞种于24孔培养基中，每孔细胞浓度5 X 105。每2天换一次培养基，6 天以后把化合物加入培养基中，接下来每天换一次培养基，连续6天。6天后根据TIANamp Gemomic DNA Kit(TIANGEN, China)手册方法分离、收集细胞和DNA。用PCR实时定量检测 HBVDNA，用 SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems)定量 PCR 检测 HBV DNA 载
fio2.结果最终结果以选择指数(SI，为评价药物临床应用前景的参数，SI = CCJ IC50)来评价，其中SI > 2为无毒有效，1 < SI < 2为有毒有效，SI < 1为有毒无效。具体 结果见表1，表2。3、结论实验结果显示，2-(1H)喹啉酮衍生物(I)在体外对H印G2. 2. 15细胞分 泌HBsAg和HBeAg有一定的抑制作用；2_(1H)喹啉酮衍生物2、4、6、8和11对HBV DNA复 制有一定的抑制作用。表1 2_(1H)喹啉酮衍生物1-11对H印G2. 2. 15细胞HBsAg、HBeAg的抑制效果
和细胞毒性作用
6 表2 2- (1H)喹啉酮衍生物对H印G2. 2. 15细胞HBV DNA复制的抑制作用 下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限 制本发明。实施例1 2-(lH)喹啉酮衍生物(1-9)的制备方法氮气保护下向100mL两口加入3. 76mmol (lg)和经无水处理的THF 20mL,搅拌下冷 却至0°C，氮气保护下滴加LiHMDS的THF溶液28. 2mL(lM in THF)，0°C下继续搅拌30分钟， 随后逐滴滴加1，4_ 丁内酯(16. 92mmol)，滴加结束将反应体系控制在0°C下反应30分钟随 后升温至室温反应30分钟，加入水10. 2mL，室温下搅拌24小时。反应结束后将反应液倒 入lOOmL冰水中，乙酸乙酯(100mLX3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减 压蒸除溶剂得到粗产品。粗品与相应取代的桂皮酸(桂皮酸、3-氟桂皮酸、2-甲氧基桂皮 酸、3-甲氧基桂皮酸、4-甲氧基桂皮酸、3-氟甲基桂皮酸、4-氟甲基桂皮酸、3，4-(二氧亚甲 基)桂皮酸、3，4_二甲氧基桂皮酸)(1. 5equiv mmol)、DCC(1. 5equiv mmol)、DMAP(0. 5equivmmol)溶解在10mL 二氯甲烷中，室温搅拌，TCL检测，待反应结束后，将反应液过滤，滤液减 压浓缩，将粗品溶于适量二氯甲烷中，依次用5%盐酸(20mLX3)、5%碳酸氢钠(30mLX3) 和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品；硅胶柱层析纯化(石油醚/ 丙酮，90 10;氯仿/甲醇，70 1;氯仿/甲醇，100 1;氯仿/甲醇，95 5;氯仿/甲 醇，70 1;氯仿/甲醇，70 1;氯仿/甲醇，70 1;氯仿/甲醇，98 2;氯仿/甲醇， 98 2)，得化合物1-9。 质谱(MS)用VG Auto Spec-3000型质谱仪测定；核磁共振谱(屯NMR和13C NMR) 用Bruker AM-500超导核磁共振仪测定，TMS作内标；青岛美高化工厂出品的200-300目硅 胶作为柱层析材料。2-(lH)喹啉酮衍生物1-9的结构数据分子式C26H19N03C12分子量463性状白色无定型粉末谱图数据NMR (CDC13,400MHz) 8 7. 63-7. 26 (12H, m)，6. 86 (1H, d, J = 2. 0Hz)，6. 36 (1H, d, J = 16Hz)，4. 46 (2H, t, J = 6. 4Hz)，3. 04 (1H, m)，2. 77 (1H, m) ；13C 匪R(CDC13，100MHz) 8 166. 7，163. 8，147. 1，144. 7，135. 9，134. 3，134. 1，132. 9，130. 8，130. 5，130. 3，130. 2， 130. 17，129. 1,128. 8(2C)，128. 1，127. 9(2C)，127. 2，125. 5，121. 4,118. 0,117. 6,62. 3， 28. 2 ；FABMS :m/z 464[M+H]+, HRESIMS :calc for C26H19N03Cl2Na[M+Na]+486. 0639，found 486. 0636. 分子式C26H18N03C12F分子量481性状白色无定型粉末
谱图数据NMR(CDC13，500MHz) 8 13. 23 (1H, br. s), 7. 60-7. 44 (6H, m) , 7. 33-7. 03 (5H, m)，6. 86 (1H, s)，6. 50 (1H, d, J = 16. 0Hz)，4. 46 (2H, t, J = 6. 9Hz)，3. 07-3. 02 (1H, m)， 2. 81-2. 76 (1H, m) ；13C NMR(CDC13,125MHz) 8 166. 3，164. 0，162. 0，147. 1，143. 2，136. 6， 136. 0，134. 2，133. 0，130. 7，130. 4，130. 4，130. 2，129. 2，128. 1, 127. 2，125. 5，123. 9， 121. 1,119. 5，117. 6,117. 2，117. 0，114. 2,62. 6,28. 2 ；ESIMS :m/z 504[M+Na].，HRESIMS calc for C26H19N03C12F[M+H]+482. 0726，found 482. 0716.
分子式C27H21N04C12分子量493性状白色无定型粉末谱图数据NMR(CDC13, 400MHz) 8 13. 16 (1H, br. s) , 7. 91 (1H, d, J = 16. 0Hz), 7. 60-7. 26 (8H, m)，6. 94-6. 87 (3H, m)，6. 46 (1H, d, J = 16. 0Hz)，4. 47 (2H, m)，3. 84 (3H, s) ,3. 08-3. 03 (1H, m) ,2. 78-2. 78 (1H, m) ； 13CNMR (CDC13,100MHz) 8 167. 2，163. 9，158. 2， 147. 2，140. 1, 135. 9，134. 2，132. 9，131. 4，130. 8，130. 4，130. 3，130. 1, 129. 2，128. 8， 128. 1,127. 2，125. 4，123. 3，121. 2，120. 6,118. 6，117. 8, 111. 0,62. 2,55. 4,28. 3 ；ESIMS m/z 516 [M+Na]+，HRESIMS :calc for C27H21N04Cl2Na[M+Na]+516. 0745，found 516.0759. 分子式C27H21N04C12分子量493性状白色无定型粉末谱图数据NMR (CDC13，500MHz) 8 7. 60-7. 42 (6H, m)，7. 27 (3H, m)，7. 05 (1H, d, J = 7. 5Hz) ,6. 97 (1H, s) ,6. 90 (1H, dd, J = 7. 5，2. 5Hz)，6. 86 (1H，d, J = 2. 0Hz)，6. 35 (1H， d, J =16. 0Hz)，4. 50 (2H, t, J = 5. 2Hz)，3. 80 (3H, s)，3. 03 (1H, m)，2. 77 (1H, m) ；13CNMR(CDC13，125MHz) 8 166. 6，163. 8，159. 8，147. 2，144. 6，135. 9，135. 7，134. 1,132. 9， 130. 7，130. 5，130. 4，130. 2，129. 8，129. 1, 128. 2，127. 2，125. 5，121. 2，120. 6, 118. 3， 117. 7, 116. 1，112. 8,62. 4,55. 2,28. 2 ；ESIMS :m/z 516[M+Na] +，HRESIMS :calc for C27H22N04Cl2[M+H]+494. 0925，found 494. 0932.
分子式C27H21N04C12分子量493 性状白色无定型粉末谱图数据匪R (CDC13，500MHz) 8 13. 28 (1H, br. s)，7. 60-7. 38 (8H, m)，7. 28 (1H, d, J = 8. 0Hz)，6. 86 (3H, m)，6. 24 (1H, d, J = 16. 0Hz)，4. 45 (2H, m)，3. 81 (3H, s)，3. 08-3. 03 (1H, m)，2. 80-2. 74 (1H, m) ；13C NMR(CDC13,125MHz) 8 167. 1，164. 0，161. 3，147. 0，144. 3，136. 0， 134. 2，132. 9，130. 8，130. 4，130. 3，130. 1，129. 6 (2C)，129. 3，128. 0，127. 2，127. 0，125. 4， 121. 1，117. 7，115. 5，114. 2(2C) ,62. 3,55. 3,28. 2 ；ESIMS :m/z 516[M+Na].，HRESIMS :calc for C27H21N04Cl2Na[M+Na]+516. 0745，found 516. 0754.
分子式:C27H18N03C12F3 分子量531 性状白色无定型粉末 谱图数据 NMR (CDC13,400MHz) 8 13. 19 (1H, br. s)，7. 69-7. 42 (10H, m)，7. 25 (1H, dd, J = 7. 2，1. 6Hz)，6. 86 (1H, d, J = 2. 0Hz)，4. 42 (1H, d, J = 16. 0Hz)，4. 46 (2H, t, J = 6. 8Hz)， 3. 07-3. 00 (1H，m) ,2. 83-2. 76 (1H，m) ；13C NMR(CDC13, 100MHz) 8 166. 2，163. 9，147. 3， 142. 8，136. 0，135. 1, 134. 1, 133. 0，130. 9，130. 7，130. 5，130. 4，130. 2，129. 4，129. 0， 128. 2，127. 3，126. 6，126. 6，125. 5，124. 5，124. 5，121. 1，120. 0,117. 7,62. 6,28. 2 ；ESIMS m/z554[M+Na]+，HRESIMS :calc for C27H19N03C12F3[M+H]+532. 0694，found 532. 0693.
分子式C27H18N03C12F3分子量531性状白色无定型粉末谱图数据 分子式C27H19N05C12分子量507性状白色无定型粉末谱图数据 分子式C28H23N05C12分子量523性状白色无定型粉末谱图数据NMR(CDC13，400MHz) 8 13. 18 (1H，br. s) , 7. 59-6. 80(11H, m) ,6. 24 (1H，d J = 16. 0Hz)，4. 43 (2H, t, J = 6. 8Hz)，3. 88 (3H, s)，3. 86 (3H, s)，3. 05-2. 99 (1H, m) 2. 80-2. 74 (1H, m) ；13C NMR(CDC13,100MHz) 8 166. 9，163. 9，151. 0，149. 1，147. 1，144. 8 144. 6，136. 0，134. 1, 132. 9，130. 7，130. 4，130. 3，130. 2，129. 2，128. 0，127. 2，125. 4 122. 5，121. 1，117. 7，115. 7，115. 4，110. 9,62. 2,55. 9,51. 6,28. 2 ；ESIMS :m/z 546 [M+Na]+ HRESIMS :calc for C28H23N05Cl2Na[M+Na]+ 546. 0850, found 546.0855.实施例2:2-(lH)喹啉酮衍生物(10)的制备氮气保护下向100mL两口加入3. 76mmol(lg)和经无水处理的THF 20mL，搅拌下 冷却至0°C，氮气保护下滴加LiHMDS的THF溶液28. 2mL(lM in THF)，0°C下继续搅拌30分 钟，随后逐滴滴加戊内酯(16. 92mmol)，滴加结束将反应体系控制在0°C下反应30分钟随 后升温至室温反应30分钟，加入水10. 2mL，室温下搅拌24小时。反应结束后将反应液倒 入100mL冰水中，乙酸乙酯(100mLX3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥， 减压蒸除溶剂得到粗产品。粗品与相应3-甲氧基桂皮酸(1. 5equiv mmol)、DCC(1. 5equiv mmol),DMAP (0. 5equiv mmol)溶解在lOmL 二氯甲烷中，室温搅拌，TCL检测，待反应结束后， 将反应液过滤，滤液减压浓缩，将粗品溶于适量二氯甲烷中，依次用5%盐酸(20mLX3)、 5%碳酸氢钠(30mLX3)和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品；硅 胶柱层析纯化(氯仿/甲醇，95 5)，得化合物10。质谱(MS)用VG Auto Spec-3000型质谱仪测定；核磁共振谱(屯NMR和13C NMR) 用Bruker AM-500超导核磁共振仪测定，TMS作内标；青岛美高化工厂出品的200-300目硅 胶作为柱层析材料。 分子式C28H23N04C12分子量507性状黄色无定型粉末谱图数据匪R (CDC13，500MHz) 8 13. 1 (1H, br. s)，7. 56-7. 24 (9H, m)，7. 30-6. 85 (3H, m)， 6. 27 (1H, d, J = 16. 0Hz)，4. 18 (2H, t, J = 6. 0Hz)，3. 83 (3H, s)，2. 69 (1H, m)，2. 51 (1H, m) ,2. 00 (2H, m) ；13C NMR(CDC13,125MHz) 8 166. 7，164. 0，159. 9，145. 6，144. 4，135. 8， 135. 7，134. 5，133. 0，132. 7，130. 5，130. 13，130. 07，129. 9，127. 9，127. 3，125. 3，121. 2， 120. 6，118. 4，117. 5，116. 1，116. 0，113. 0,64. 3,55. 3,27. 3,25. 3 ；ESIMS :m/z 530 [M+Na] HRESIMS :calc for C28H23N04Cl2Na[M+Na]+530. 0901，found 530.0890.实施例3:2- (1H)喹啉酮衍生物11的制备氮气保护下向100mL两口加入3. 76mmol (lg)和经无水处理的THF 20mL，搅拌下 冷却至0°C，氮气保护下滴加LiHMDS的THF溶液28. 2mL(lM in THF)，0°C下继续搅拌30分 钟，随后逐滴滴加丙内酯(16. 92mmol)，滴加结束将反应体系控制在0°C下反应30分钟随后 升温至室温反应30分钟，加入水10. 2mL，室温下搅拌24小时。反应结束后将反应液倒入 100mL冰水中，乙酸乙酯(100mLX3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压 蒸除溶剂得到粗产品。粗品与3-甲氧基桂皮酸(1. 5equiv mmol)、DCC(1. 5equiv mmol)、 DMAP(0. 5equiv mmol)溶解在lOmL 二氯甲烷中，室温搅拌，TCL检测，待反应结束后，将反应 液过滤，滤液减压浓缩，将粗品溶于适量二氯甲烷中，依次用5%盐酸(20mLX3)、5%碳酸 氢钠(30mLX3)和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品；硅胶柱层析 纯化(洗脱条件氯仿甲醇=100 1)，得黄色无定型粉11。质谱(MS)用VG Auto Spec-3000型质谱仪测定；核磁共振谱CH匪R和13C匪R) 用Bruker AM-500超导核磁共振仪测定，TMS作内标；青岛美高化工厂出品的200-300目硅 胶作为柱层析材料。2-(lH)喹啉酮衍生物11的结构数据 分子式C26H19C12N04分子量479性状黄色无定型粉末谱图数据NMR(CDC13，500MHz) 8 13. 09 (1H, br. s) , 7. 58 (2H, m) , 7. 49-7. 38 (4H, m)， 7. 27 (2H, m)，7. 06 (1H, d, J = 7. 5Hz)，6. 98 (1H, s)，6. 94 (2H, m)，6. 34 (1H, d, J = 16. 0Hz)， 5. 25 (1H, d, J = 11. 6Hz) ,4. 97 (1H, d, J = 11. 6Hz)，3. 80 (3H，s) ；13C 匪R(CDC13，125MHz) 8 166. 4，163. 4，159. 8，149. 7，144. 9，136. 8，135. 6，133. 2，132. 9，131. 5，130. 6，130. 4， 130. 1,129. 8，128. 3，127. 2，126. 6，126. 0，122. 5，120. 74，120. 69,117. 9,116. 2,112. 8， 58. 8,55. 2 ；EIMS :m/z 479 [M]+, HRESIMS :calc forC26H20N04Cl2 [M+H] +480. 0769，found 480. 0771.实施例4:按实施例1-3的方法先制得2_(1H)喹啉酮衍生物1-11，分别用少量的DMS0溶解 后，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。实施例5:按实施例1-3的方法先制得2_(1H)喹啉酮衍生物1-11，分别用少量的DMS0溶解 后，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶解，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿 中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。实施例6:按实施例1-3的方法先制得2-(1H)喹啉酮衍生物1-11，分别按其与赋形剂重量比 为9 1的比例加入赋形剂，制成粉剂。实施例7:按实施例1-3的方法先制得2-(1H)喹啉酮衍生物1-11，分别按其与赋形剂重量比 为5 1的比例加入赋形剂，制粒压片。实施例8:按实施例1-3的方法先制得2-(1H)喹啉酮衍生物1-11，分别按常规口服液制法制 成口服液。实施例9:按实施例1-3的方法先制得2-(1H)喹啉酮衍生物1-11，分别按其与赋形剂重量比 为5 1的比例加入赋形剂，制成胶囊。实施例10
14
按实施例1-3的方法先制得2-(1H)喹啉酮衍生物1-11，分别按其与赋形剂重量比 为3 1的比例加入赋形剂，制成胶囊。
权利要求
结构式(I)所示的2-(1H)喹啉酮衍生物1-11，其中n为2、R为H的2-(1H)喹啉酮衍生物1，其中n为2、R为3-F的2-(1H)喹啉酮衍生物2，其中n为2、R为2-OCH3的2-(1H)喹啉酮衍生物3，其中n为2、R为3-OCH3的2-(1H)喹啉酮衍生物4，其中n为2、R为4-OCH3的2-(1H)喹啉酮衍生物5，其中n为2、R为3-CF3的2-(1H)喹啉酮衍生物6，其中n为2、R为4-CF3的2-(1H)喹啉酮衍生物7，其中n为2、R为3，4-OCH2O的2-(1H)喹啉酮衍生物8，其中n为2、R为3，4-20CH3的2-(1H)喹啉酮衍生物9，其中n为3、R为3-OCH3的2-(1H)喹啉酮衍生物10，其中n为1、R为3-OCH3的2-(1H)喹啉酮衍生物11。FSA00000140326600011.tif
2.制备权利要求1喹啉酮衍生物的方法，在2-(1Η)喹啉酮，桂皮酸或取代的桂皮酸 3-氟桂皮酸或2-甲氧基桂皮酸或3-甲氧基桂皮酸或4-甲氧基桂皮酸或3-氟甲基桂皮酸 或4-氟甲基桂皮酸或3，4- ( 二氧亚甲基)桂皮酸或3，4- 二甲氧基桂皮酸，4- 二甲胺基吡 啶的二氯甲烷溶液中加入N，N-二环己基碳二亚胺，室温搅拌反应12h，过滤除去白色沉淀， 减压回收二氯甲烷，得粗品，经硅胶柱层析，用石油醚/丙酮或氯仿/甲醇洗脱得2-(1Η)喹 啉酮衍生物1-11。
3.用于治疗乙型肝炎的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1的2-(1Η)喹啉 酮衍生物1-11和药学上可接受的载体。
4.权利要求1任意一项的化合物在制备治疗或预防乙型肝炎抑制剂药物中的应用。
5.权利要求1任意一项的化合物在制备治疗或预防乙型肝炎药物中的应用。
6.权利要求3药物组合物在制备抗乙型肝炎药物中的应用。
全文摘要
结构式(I)所示的2-(1H)喹啉酮衍生物1-11，其制备方法，含其的治疗乙型肝炎的药物组合物，以及该类衍生物及其药物组合物在制备抗乙型肝炎抑制剂药物和抗乙型肝炎药物中的应用。
文档编号A61P31/20GK101851196SQ20101018603
公开日2010年10月6日 申请日期2010年5月28日 优先权日2010年5月28日
发明者周俊, 张雪梅, 江志勇, 罗杰, 郭锐华, 陈纪军, 马云保 申请人:中国科学院昆明植物研究所
最新回复(0)